Di r ecci ó n:Di r ecci ó n: Biblioteca Central Dr. Luis F. Leloir, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. Intendente Güiraldes 2160 - C1428EGA - Tel. (++54 +11) 4789-9293

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Tesis de Posgrado

Estudio de la acción inhibitoria deEstudio de la acción inhibitoria delos extractos alergénicos sobre lalos extractos alergénicos sobre laisoaglutinación de glóbulos rojosisoaglutinación de glóbulos rojos

humanoshumanos

Berra, Olinda Clara

1952

Tesis presentada para obtener el grado de Doctor en CienciasQuímicas de la Universidad de Buenos Aires

Este documento forma parte de la colección de tesis doctorales y de maestría de la BibliotecaCentral Dr. Luis Federico Leloir, disponible en digital.bl.fcen.uba.ar. Su utilización debe seracompañada por la cita bibliográfica con reconocimiento de la fuente.

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Cita tipo APA:Berra, Olinda Clara. (1952). Estudio de la acción inhibitoria de los extractos alergénicos sobre laisoaglutinación de glóbulos rojos humanos. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.Universidad de Buenos Aires. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_0715_Berra.pdf

Cita tipo Chicago:Berra, Olinda Clara. "Estudio de la acción inhibitoria de los extractos alergénicos sobre laisoaglutinación de glóbulos rojos humanos". Tesis de Doctor. Facultad de Ciencias Exactas yNaturales. Universidad de Buenos Aires. 1952.http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_0715_Berra.pdf

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Ohiïhh CL¿’ABïïüá 'Eg;¿¿¿'7-É¡

DoQo¡una manes. do ni ¡gn-¡decidan al aunarDirec­tor del Instituto naclannl de Enreruodadoa¿llrgleao.aoetorBenivnaGnrat,por ha!!! thoilitad: el un. del Laboratorio de

dicho Inatitnto,y muyon aopociol al Jet! del ziauo,noetnrElan ¡“Birmania”! haber sugerido el tem y dirigido al pre­

senteninja,­

I .- 13-316 ¡.1!(36'10!-_

La.existencia. rio cuatro grupos sana-¿(neon en .1 ng

tro es Mar; CDDOCÍH'JK,principalmente por su importancia en las

transfusiones.- La oivzaión en autos cuatro grupos dependa do

1; ganancia en los ¡Ilóhuloa de las suntmclas A y B (“lutirïóo

gonna), de estructura no Mon determinada.- bno o abo- de u­

tos aglutinógenos pueden astur present-s en los glóbulos, o te],tar.­

¿dunasal SuCrOcontiene las aglutina“ no naci;nm con las anuncia: no":th en lo: correspondientes ¿16M­101.- instan, por lo tanto, cuqu posibilidad”, comono ind;ca on el cuadra II

o;un I

Cantin- a «anciana con suero do gruposGrupo /

(¡lóbulo- Suero á B ¡J o

¿B «B o 9 o o o

a B a’ 9 - - r

o n a o c O

El]'Iuoro de un 1nd1v1dno del ¡tapa .‘iOs lll-ado te.

Min ¿Inti-¡s porque maradona con lo: aglutinógonos do una pong,

nn del grupo m- Por razones vigilan: 01 suero de un Individuo

dal grupo .3o: llenado anti-B.­

:.1 grupo A (y por lo tante el :Js) puede ser dividi­

do cn sub-grupos (A1 y ¿2)

.2­

..¡lutininao para el grupo0 existan ompoionu‘lnin­

to n humanosy cn c1 lucro de algunos mind-o (1,2);­

¿1 mezclar glóbulos ¿o un grupo banano con moro do

otro puedo haber aglutinaoiñn do los princroo (o) o no (o). ¡D­gfio ¡e ¡nostra en o] cuadro anterior.­

Oooo9’ ¡fi ooo lla-odos tanto isoaglntininu (cn­tondi‘ndoso por imnclutininn todo anticuerpo aglutinanto prom­

cido por material tocado de otro individuo dc lo. cima espacio),el mónno do ¡aglutinución do los glóbulos do un grupo bla-lino

por el sacro do otro. se conce. con ol nombrodo isouglutinádóno

{-21Mindo do intuición de la iooaglutinación o: rr;

cuento-onto “¡picado para. actor-inem la actividad analógica do

las suotmciu mtig‘nicu especifican de los glóbulos (x).- sobag en la propiedad quo titan esta. sustancias do unir-o a ­las iooui;-:1utininoo del suero, anulando de este noejc su podar o­

glut.inanto.­

La flanco Olplaudapara dot-minar lo inhibiciónao la isoaglutinacián comi ¡to on ocular en una serio do tubossolución masónica en cmcontraciunco decroeionuo cm dotar-i­ana cantidad do suero aglutinamte.- "raucurrida una ¡"oraa

“¡partitura hablante, se ¡ome suspensih do ¿lóbulos rojos hu­

(x) ado-ás de esta on los glóbulos, existan sustancias smjm­ios en los tejidos, fluidos y sien-ocioan de los annalu.- T'.‘hián‘ se ha: encontrado, especialmente con eapOCIUCIÚaú n, GI!o­

tros ¡averiale (pipsina, Encinadel “tó-¡ago del como, ctm).­

-a­

¡mas cortarspmdlontoa» La nula u agita. y después de dm ho­ras u obserm 1a-130‘4512t1na316nwEn"to caso u han usado

concentraciones varinhlas de antígeno y cantantes de suero, po­ro puedoproudone a la lavarse y una! concentraciones doen­cientu de moro y constan do anciano.- no se obsnvari ¡glu­tinadón en los n prinroa tubos y sí a partn- del tubo m1 enaduana.- La oxplicaoibu do este homo «must. en quotu losn pri-Oro: tubos 01 antígeno está un cantidad anna-nte para.

mular 01 anticuerpo del ¡norm- Dest 01 tubo m1 en adelanto

la fijación no o: cupleta y queda anticuerpo libro, causando1. aglutinadñn ao lo. glóbulos.­

La titulación del antro n “botón oharvmdo la ¡­glutinmión en una ¡orto de tubos en los que ao mzelun coan­

tracionn acrecienta: de suero con “¡pasión do glóbulos.­nn 01 año 1947, maneta, sun-011 y ¿donan (3)

constatarm a al «norma do polvo do habitación por ellos pro­

puado)cicrtas constan: quinua: con la sustancia n obtenidapor torna (4) 601 “chas-,0 de]. ceram- tallo «116lugar a que se

onaayarala inhibición.- Lu experiencias u chctuam determi­

nando1a anulación de poder aglutinar!" de distintos morosprovocadapor 1a adición de una cantidad fija de ¿lau-no.- Unacomparacióncuantitativa cun lu gastada. específicas #4y o(01 datos o-mü-O habida u inhibido) altamentepende-nasy con la sustancia "pad fica L “nos por!usada mostrósu. 01alarma Caplimlo prosmtm 1,0} y 0,61?aimla actividad de lassustancia. Ay o tospetlvatnte y 26! no la actividad de h opreparación de b capi-nda.­

-4­

La [:I‘OD'G'J'udde inhibir la aglutinación de eritro­

citos ha sido obsernd; en otros extractos alergárzicos prepara­dos :1partir ¿seVariadas "averias :rimafls) .­

II 0’

Si la acción inhibitoriu oo debiera 4 1a sustanciaalerg‘nlca (a) mismao si llegara a ostablocorao un paralelis­

moontr;'1a actividad biológica y la inhibitoriu (afin cuandono

¡o hubiera demostradosu idcntidad) podría llegarse a entabla­

ecr un nótodo "in vitro" para dana: el alergcno contonido en un

extracto.- La importanc‘a do onto estriba.on que hasta 18 fbeha

no 01d¡ton métodos "in vitro" ¿prepiados para tal fin.­

El presento trabado ha sido realizado teniendo conofinos inmediatos encontrar una “mica 86060de para efectua:

la reacción y estudiar el mecanismoy, un lo posible, las rola­ciones cuantitativas do 1a silla.­

(t) Se ¡.1an ¡1020130.311Hut-nus de rm. teaeoifin ¡My-51­68.4»; ¡Im-amoo incluyan alarmas sustancias que no son an­t («nos en al sentido urinario.“ quo el antíganwse definocomo¡no ganancia que tntrofluclda por v1. parenteral provocola ¡"mafia :1. maleza-rama que en un: ¿lereaccion" conlas l'fltiC'JGÏW.

Fundameumhonte se ha empleado extracto de polvo

de habitación.- ollo ha sido motivado por 1a mayor facilidad

para obtener la notoria pri-a, su cesto reducido respecto de gtran y la necumch de pacientes sensibles.- Se piensa. no ­obstante, que los resultados obten‘dos puedenhacerse enani­

vo: o extractos de otros lutoflulOs. ¡in modificaciones trae­«adultos.­

La tecnica de extracción utili zado es, en líneas

generales, lavdeecripta por ütherlend (6,7): el material se

extrae eo solución alcalina debil (m‘ou 5/100; tanbiln poe­den “FIOJSO Hank! N/IOO6 cuan“ sin). durante 24-48 horas.a baja Temperatura..­

La relación peso de material-volumen de eolucifin

uplaada, es 142.- Unavez clarificudo el Hípico de extrae­ción (prensado y filtrado), ee lo agrigu beneoato de audio ­(ID-20 ¡race por litro de solución).­

¿e acidifica con ácido clorhídrico 1:6 hasta preci­

piución total del ¡cido henzoieo (virue del rojo congo; pa apprensado 3,5), con agitación constante" 5.1precipitado «¡elobtenido ¡acerco la. sultdnoio alergdnica de 1a eolución.- Se

deja en reposo 24 hch en 1a heladera, ee decanta la. mayor

parte del sobrenadantey filtre el resto, separando“ al! elprecipitado que se trata con aceituna pura, con lo que se con­

sigue eoluhilizar el ácido benzoico.- El insoluble, que contie­

ne el olergeno, ee separa y lam con acetona y ¿tor llegándoee

-7.

así a obtener un polvo ¡rio-pardo, al que oo denominará en losucesivo ¿52653€ Lian-O.­

Péfl'uposteriores puntuaciones puede emplearse olmétodode precipitacione: on soluciones acuosa] de wanna.­

Bl alan-ganobruto I. solubiliza en agua «saluda.nevado a 510311111414!con neon ¡VIO (reacción alcalina al pá­

pel do tornanol).- Para facilitar ol proceso oo diagroga ol :6­

lido con ayuda do un mortero.- Llomdo al volumendonado, u

Monta ol pl! o 7,5-8 y claririoa por contrirozaoión. deseada.dos. ol inaolublen La solución so 11cm a 26! de acotona a

volnnson.-¿al cabo de 24 horas se descarta el precipitado tony­do y lleva el sobnnadmte a 7551do agotan.- Precipita un ¡S­

lizo que se separa de lu soluciín deswis do 24 horas, lavhdo­

solo con aootona y 6tor.- Elininado el éter, quoda un polvo gris:

11171:.r21:70o “Liu-amm Cir:11.- ïmbiln ésto resulta sor sólo por.

cialmnto soluble en agua.alcalina“­

Cosaoconcentración adecuada oo ho soluciono: do a­

lorgono crudo, se usm diluciones al 1%(¡I-ao do polvo por vo­

lunon do solución), isotónicgm, n ¡ui 7,5-8. por hab-r hallado

en la práctica útil dicta proporción para los ensayos do inhi­bición y catan-reacciones(on esta caso glicerian al 451) .­

21 extracto crudo Os Iusaptlble do ulterior puri­ficación.- n tal fin ao "disuelve parto dol mismoy "procl­pi ta con ¡le-tono 75?". llegando es! a la obtención do un polvo,

-.LL...L3¡:W.Íi“; ¡ln-:1: .ID, cm una peqncña parto insolublo on nadia

acuosa.- Hsto sólido puedo ur disuelto on ol volümer;do lí­

quido deseado, do ¡mora do obtener una solución bastante mi.

concentrada quo lu do noo corriente.­Lacstorilinción so puedeotcotuir, y ui n ha

procedido en el pasante trabajo, sometiendolao soluciono. dc¡largan n baño maría durante treinta o cuwmnta minutos.­

Dela parcial innolnbilidad dc los sólidos cn agua

a pH7,8-8, surgió la masidad dc averiguar si el rusiduo 1n­solublo consnrvaba actividad "in vivo" l "in vitro", o estabadoom-ovinodc ollas.- Lu uporionciu cn ost. Sentido oo hi­cieron scmticnco a baño do agua u. 55-65! C durant. 0 minutos

c1 ¡filiao on solución Dtfinica 75:5.obtcnido a partir del alar­

geno bruto, separando luego c1 precipitado y tratímdolo en 1a

torna habana.- Las pruobao "in vivo" memo con las solucio­nes doi polvo así obtcnido, no ¡ostraron diferencias respectodc las ofoctuadas cm las soluciono: de alcrgono obtenido no­

dientc precipitación con acctma a baja “apuntar-a.- Otro ten­to puedodecirse oo las reacciones de inhibición.- Enconuch

cia,c1 residuo inooluhlo para“ sor alguna impurozainactiva,.¿ucha sufrido un proceso-do dematuraliuciñn, presumiblonn­

to por el ¿grep-adodo donan.­

¡o obvio,qu on cada etapa del trabajo oo constatóla Numancia dc la actividad ncrxinicn mediantepruibal porentirroocción cn sujetos sensiblco.- Sinmltánouonto sc cono­tató 1a presencia de pudor inhi'bitoriOw

¡1 prccodinionto quo se "encienda es oi quo sc dc­tona o continuación.- .r.41 u arribó dospu‘s ce numerosos cn­

sayoo y ¡si moron utilizadas lu experiencias, salvo indicación

un contra.­

su dispone n una ¡rodillas «demandados sol-ios do

tubos que se cargan de la. siguiente zamora: do una suspensiün

1:20 de eritrocitos, extraídos y lavado- cono oo indica más ap

delante, oo coloca una cota en onda ooo do los tubos de uuuserios.­

a: 1a primera do las dos ¡trios do tubos se dotar­

minaol titulo do aglutinaeión, mtondilndoao por tu, la mayordilución do moro que produce aglotinacién do glóbulos.- a ca­

da tubo de esta urio so ¿gra-an cuatro cotos co solución ti­

siolódca» 30 agitm- :2. añaden hugo a Cada tubo cinco gotas

do las diluciones eorrupondiontes oo suero» no ;.€1'&nuevo­

zente para homogeneizan­

La ¡sonda de las dos serios nrvirá para hallar oltítulo do inhibición, ontondiíndost por tal,ol título do aglu­tlnuCi‘I cuando a1 si ¡una so ha Agregado alargan-w.- oo propa­

ra en Iorü málaga a 1a primera, pero mapluzondo una gota. de

solución fisiológica por una gota del alex-ganocuyo poder inhi­hitorio u dlaoa probar.­

En una: serios 01 total de gota- agregada a cada

tubo anclado a diaz» fin 01 caso do agregar más de una gota

de ¿lei-gano m la segunda serio, se disainuyen las de solución

tiaiolñgioa, do manera quo ol wluuon final sea simpre do diezgotta.- Esta modificación ¡610 so ha hecho on eno: espacial“.

Habitual-onto, y salvo indicación en contra, se 22atrabaJadoon 1a rom antes dominado.­

Praparuuas ambasseries u incuban en estufa a 37' C

olo­

uuranto 15 minutos.- ¿Lautil-m de la misma los; tubos y ¡o em­

trirbgm un minutoa lll-lll quinientas rcvoluciones por ¡Inn­to.- :‘c duna en reposo 15 minutos y se lan.­

Para Grammar1a lectura los ¡lóbulos centrífuga!»se rcauspcnden mediun‘o una agitación ¡nómina y an cmtenldo a

"¡nina hugo objetivo do poco aumento do un microscopio (e) .v- P5

ra ollo se coloca una ¡gotade la suspensión sobra un portan}.­ton y a lll-va ¡sto al ¡lomscopio.- 31 aparecer grupos do ¿216­

bnloa cuyonfioro do componentesOs difícil. untar (manos),se din que hay uglntinadón meramente positiva. (n indica4»).- 51 ¡o observa grupos de pocos (lóbulos, se lo. cl taba

colo positivo h).- ¡u último positivo se una cuando¡yacennumerosos¡rpoa da dos y poco; de tros Ruud“.- ¿al tubo a.

la comonegativo (-) si ¡e obacrvan todos los ¿lóbulos sueltos.

ningún grupo de tros y pocos de 403.- En caso: de aglnunaclñn

dudosa, u inclina ol mierosnpio con suavidad de manera que ­

puedanobservarse los glóbulos atravesar el cupo lmtanento y

distinmlr al! s1 lo. Orltrocitoa que ¿Ipanemaaglutina». lo“tán "al-On“.- Eneste cano los granos se desliza: sln dll­¡rosana- Nouf,“ los grano: sonaparentes.­

Unanz llevado cl portubjotos al microscopio, lallctnra debo ur hecha lo más rápidmnto posiblo pues do lo o

contrario la gota nando u SOeal'BOcon el cundgulento monto

en la encontraolün do suero, ratón por la cual pucdduagluti­nar.­

¡insulta choco asquoaauur ol trabaJo en cuadroscon 01 31mlth

-11.

mnum n

m Títulom: Títulodo aglutinadón 4- Inhibiclfin

¡mom 15234567391.»111::j616m19a2(aos.¿.) 1111111111 1 1sacro. A 1:2 m”- 5

m 12m 1:4 5

1.a 5 6

1:16 5 6

1.32 ¿ 5 5

1.64 É s o

11128 e

han o

nICÏ‘OIDI Polvo dlmuueaanzs """1111 1 1Solución nuouuen 4 4 4 4 _4 4 a a aa a 3Aautlnulfin n r r - - o» o to - o

¡>01Cuadro II so desprende que o]. ¡nora empleado u

del grupors, probado cmtra glñbulos 3.- Para 1a pri-ora ser“

so prepararon ¡01! tubos (nunradoa do]. 1 al 6) cuyo contenido

se detalla en las columna correspondientes; en total 10 gotas.d. lu cual” 5 pGrtanecon a solución do moro; de manera quola dilución final (lo suero es doble do la que u ¡gr-¿ón ¡»siel título de aglutinación Os 1:64 pues el tubo fall3 Os 01 fil­

-12b

tino positivo y an 61 se ha (a agreggmosuero 1:32.- Por ra­

da ahoga .1 título do inhibición oo 1:16 yu.Hu. .1 ilusopo;itivo os al tubo H99 al que so había agregan suero 1:8.­

ïouiondo en cnmtn la pmoru serio, a medidaun.las dilucionos do suero cuanta, la cantidad de arlutininudel ¡1m va disminuyendoy ¡si dudo un tubo n en adelanto no

no observará aglutiuacian so considera ql. on ol último tubo

quo aglutina hay una unidad do aglutininu» En los anterior“hau-i 2,4,8 ctc. (n uan diluciones co suero dohloo cada unarespecto do la att-rior) .­

¿xaspoctode los sueros hanna: aglutinun to: a uti­

lizar pueden "Manacor a los grupos A (¡5). B ( 4) 6 0 (4%);se utruon por punción mona, on ayunas y so amtiouon en lo

holaa.” hasta el ¡oculto do su uso.- Lus diluciones n propu­rm colocando on una.grufiilla tantos tubos comoailucionoo udosou tonor.- ¿o coloca en cada tubo una.dotar-inunda cmtidad

ue solución fisiolñgicm- ¡.1 primero so lo añado la ¡ai-a. ou­

tide do suero y so mula nata obtener una solución bono“­noa (suero 1:2); la mitad de dicha solución n paso al “gun­do tubo y o. proceda en igual toi-nu (suero 1:4) .- ¡»si no d­

iu. hasta acabar la ¡Orio (Sum ha, 1316, 1132, 1:64, 11128,Isaac, 1:612, 1:1024).­

Los glóbulos rojos (AB, A 6 B) se ebticntn por pun­

ción cn un dedo o a el lóbulo de lu oreja, protorontantc ­lejos do las comidas, recoi'ióndost una "into gotas en un tu­

bo sobre solución fisiológicaflior cada serio do lecturas u o­roctuaru- 6. lava: con solución fisiológica (tres Veco:con

-13­

cinco ¡mua-"oa cada vez) para eliminar totalmente el suero y

evitar ui erecto: secundariosnn previstOIo- Para descartarel ¡odio de sumenelón, después de cada Jumao ee recurre a. een­

tria‘ugar el tubo entre 3 y 5 minutos a ¡11-1111quinientas remo

luciana: por minuto y a decmtar el sobrenadmtew ¿e aconseja

el empleode soluciones frenan.- mepenslonen de 24 horas dan.

en general, títulos menores para un determinado enero y el 11­site de aglutinación no se observa ca: tanta nitidez celo alu­

do ee trabaje con glóbulos del ¿{un En ningún caso se conee­

Ja ¡su suspensiones de más de 24 horas pues despuh de ese a

tiempo se produce, a menudo,humana.­

La solución fisiológica 8% debe tener m pHune­

tado a 7,2-7,3.- cmviene usar soluciones de preparación recien­te.- ¿on soluciones envejeei'ïas se observan resultados ¡none­lee.­

Por razones de economía es conveniente que los vo­

lúmenes “upload!” sean 1o ¡ás pequeños posiblee- si Men pueden

usarse pipetas graduada: al centisiao, su manipulacih resultaencarna: y el trabaJo 1ento.- La máscómodoy rápido e: near

los volúmenespor gotas, nuumdo tubos “arado: a mododepipetu, que produzca: gotas pequeñas (alrededor de veinte y o­

cho o treinta gotas por ¡11111tro) .- Esto per-ui.“ ¿morro ¡ute­

rial, pues Cadatubo de lujetemlnanión lleva en total dle:gotas que equivalen a 0.33 ¡lu ¡proximidmentelc

l l El l

m el saltado de titulación usado el punto final poo­de estar afectado de un error de más o menos un tubo, o sea ­

-14­

1001.- Una diferencia do un tubo en el título do un no" do u­

na determinación a otra no significa que hqa habido un cablenal.­

Lu doteminmionoa que constan en 01 prosento tra­

bajo han sido efhetuadus por duplicado.­

La reaccióna. aglutinath en la roma emanada,con diluciones do sucro dobles una flspocto de la utorior, no

p.111“ apreciar pequenosCambiosen 1a inhibicihw Ro u ¡cm­

son el empleo dc dilacimos sucesivas con un factor menorquedas, cano oo usó, pues uan-sta el trabajo no legrfndon mjor:

alguen, ya que a. observan mi“ tubo. consecutivos Ou que .1gradode aglutinaeión n práctica-nt. 01 ¡1:00, d- udo que ­subsiste una.1nactnrn1nac16nIon-Jam...­

Para observar les-influencia de 1a cantidad un glfibu­

loz en la inhibición de la isoagluunación so ¡actuaron muu­;os Variunu'ola concentración de los mimas en la suspensión, l

alargar» constante» Previamentese utudió el título aglutina­te de un dot-minado suero frente J cantidad" Varidbhl do 516­

bulos, cmstatándosa «¿nono sufro modificación, cuatro de lo!límites usados (CuadroIII).­

maÜÁ‘OIII

üergs grupo A 50.11)! grupo A

(¡lóbulos grupo B (de bm.) 616m1“: grupo 11(de But.).- Ñ_;,A.__.___._V_ __ _ _ ._ fm W).

22°31‘33"una... w333? m. a.ü a:3737126.:sauna ación 2313:1360 aglutinanfinfinal x) final

1:00 1: 613 1!OO 14la

18200 la 612 1: 200 1| 2“

1: 100 1: 512 1| 100 1: 256

1xao 1' 2a 1aao 1a2“

1a25 5 1. zasJ

(x) an un escala 1:1 entrenando a una emcmtración iguala la de la aunar. actual.­

nn roma análoga si murió 1a encuentre-¡ción do 216­

bulos on las experiencias qne ¡o roman on 01 siguiontO ma­cro (Cuadro 1%..

cun-m Iv

s nom grupo o m 10118

Glóbulou grupo a (do RJ.)conecntrmón relativa a Título do Titulo do

glóbulos an la mapnsión agiuvinacián inhibicianfind (x)

haooo Lama 1.2651:00 1.204s han1a zoo 112048 1x512

1170 12200 13266

1m hace 1:256han 11848 13266

han ú 1.204s 1.266(x) h esta Oncala 1:1 cet-respondoa un. conmutación igual a

1'. de 1a sangre nora]..­

Dolu pruebenmediada. resulta que los titulosd- aglutinueión o inhibición sm inclcpudientos a. la cantidadde glóblog, dentro do las encontrados)" ansayadal (dudokw a 1:2300).­

si 14 cantidad do glóbulos Os cuanta, la lectura

se hace difícil; si n muyClovadu, se hace ¡maz-rosa por 1.oconfusa» Ha resultan óptimo el empleode una suspensián una].

de eritrocitos 13200 (es decir ¿agNgaruna parto do suspensión

do ¡lóbulos 1:20 y llevar a volumenfinal din) .- Para Culo.

en ¿no haya muy clavado número do glóbulos en la suspensión.

se gana un comodidad. sin gue so obsorvñ alteración do títulos.

o17.

si on el amante do vznctuar la lectura se diluye con solución

fisiolóz‘iem- :1 al nónoro en,por 01 contrario, escaso. insacia­taonte anto: de lar puede«matarse la ¿mr parto del ¡ohn­nadmto y agitar lnego para tomarenseguida la gota qu. n no­wa a1 portmbjctoa y obmrvará a1 nicroseqaiow2.- '

En 1.oquo ligne u dmominu'á 13515116»a la Insta­

cia responsable do la inhibicifin (¿ola iaoaglutinación, quo n

oncumtra en el ¡Jonatan do polvo do habitación (y en otros u­

lergonos) (5).­¿o eatudiñ la cantidad do alergeno nocuarin para

inhibir “culminación de una nigga camada: do glóbulosrojos en función de la. encontrach de moro, encontrándoseu­na "lasaña manualmente lima, conou vo cn o] CuadroVa

4-18­

60an V

moro: grupo o ¡a! 1mm á Suero: grupo o lle 12398

Titulo de aglutinadómhsm Título do malnutrición: 138192

Glóboloo rojooazrupo ¿15(“3. Glót-nlon rojos: grupo me. A.lo) D11. final: 1:200 1€.) D11. final: 1:200

manu-«16o r1-‘r1tu1o a. Concentraciónn- rítqu donul relativa 4.1 inhibición nu "han ¿.1 inhibiciúi

¿largo (z) ¡ donne (x)m h 1:10 1.o 3 mo 1:64

1:20 1:16 lam 11128

1:0 1:32 1:40 1:25¡580 1:64 1:80 1: 266

y 1.160 1am 1am uma

L 13320 13256 1.320 DWG “J

men: grupo o IO maso Soares grupo B

Titulo do aglutinacióm 1:512 Título de ag'lutinmfin 1:206

(¡lóbulos rojongrupo nMd» A. (¡lóbulos rojos: grupo ¿do 3.8.)u.) 111. final: 11200 i211. final: 1: 200

magma? fiéztruz: mmfigï 3.33312:alargan (x) decano (a)

1120 1: 16 É— ——i¡_ ll 32

1:0 1.16 1:10 1164

1:00 1.32 5 1.20 nm

II 160 1a64 1: 40 1: 123

1.320 1:64 1|.) 1:251:60 13128 131m 1:512

1: 1280 la 256 1: 320 1: 1024¿J

-19­

(x) Para efectuar esta experiencias ee preparó una.solución

de alergeno de polvo de habitaci Emveinte veces más concen­

trada que las conmuente ORplOudas.obteniéndose u partir de

¡sta diluciones 1:2, 1:4, ha, 1:16, 1:32 con las gue ee tra­bujñw SI entiende por cmeentruoión final relative de alergeno

1:10, una parte de alergeno concentrado en 10 de msponsiñn ti­

ne1.- La cmcentración "latiVu final de alergeno 1.16€.corres­

ponde aproximada-ente a 1. concentración ae alergeno en las e:b

perimiu comunes.­

Bs eahido que el complemento ee una de loe componen­

tee del suero nlativannte termolábil, destruyósdose m pocos

minntoe a «Sd-66'C; guardado el enero en las mejores audicio­

nes dura pocos diu.­Se ha cuprobado que en lu reacciones de inhibición

puede usarse enero despues de un tiempo relativuenu largo (dos

genes). ei se lo mantiene eaten-il, a baja temperaturego quehace presumir que el complementono interesa en dicho fenóemo.

Para comprobarlode une mera directa se calent6

el suero durante una hora a 66 C. condiciones en que ee dee­

truye el coaplelor.to.- Dennis de este tratuniento no se obeer­va modificación en 1a relación entre el “¿alo de aglutinacián

y e] de inhi:.ie16n.- el: algunos casos se encuentra que ambos

están disminuidos‘lo cual se atribuye a una parcial destruc­

ción de las aglutininnn ¿50cmsicnm datos que apoyan lo an­terior en el Cuadrom

(XL-".390 u

{título d- aglutinaciónTitulo de inundada-g:mero lóbulos cisin a

_ea1entar «¡alentado calentar cuenta“ c al.

Mesaï ¡sus cr: 1:512 11256 1.16 1.a az ‘¿(7409 ¿"(de vb 1.512 11128 1:256 1:64 a 2

¡(517 ua. 1:866 1:32 1:32 1M 8

(x)LarolacifinestádadaponWtula do int: bici

4o- u"

Dany“ ohnrvl que enme a una cierta cantidad de

antitorina diMricu o tetímica no añadouna czatidaci aquiwlqte de lu toxina correspondan“ en una ¡ola nz, la mezclaro­sana no tóxica, pero si 1a mismacantidad si made a interna­

loo, 1a ¡nach final ronlta tóxica" ‘ïül ftnómmosu conoce

bajo o]. nombro do Efecto Banyu y to debo a quo, en 01 "¡Club

caso, ¡o forza inicial-onto, al ¡actuan- los prinro- agrego­dos, nn rompiojo em una ¡mr proporción de anti toxina. quo la

nccourin para la nouveau-ción y quono n capaz de reaccio­nal’ con la nnon pordón de toxina añadida 1110130.­

Para estudiar un pesimo ¡tuto Demas, so hieicrununa serie de ensayo: do la siguiente ¡mora u diapnsiorm ­cinco ari" de tub“.- La pri-era sirvió para dotominur 01título de aglutinaciónw Unavu colocada las diluciones dosuero n agregó a las cuatro rostntn cuatro gotas de alarga­no, do 1a siguiente maneras

atrio 23.: Sod‘I‘nyn'u las cuatro gota de una son nz

-21.

serie 3a.: Se agregaron las castro gotas en dos veces: dos

gotas y dos gotas, inoubando los tubos entre el­

bos agregados durante 6 ninotos a 37' C.­

ïerie 4am Se agregaron onoirc gotas en tres veces: una gota,

una gets y dos gotas, observando 18 mismastecnica

que para. la serie tercero.­seris 6o.: Las entre gotas se agregaron en contro veces: una

goto. una gota, una gota y una gota, ea las ¡ionescondicionesde las series tercera y cuarta.­

Finueente se completócon solución fisiológica 1a

serie testigo, se Agregó a cada una de los tubos una. gota de o

suspensión nao de eritrocitos (grupo á), se inoobó quince li­netos e 37- c, se «anima eudo tubo un minuto a n11 quinien­

tai revoluciones por minuto, se deJG reposar quince minutos a

temperatura ambiente y se efectuó 1a observacióo Iieroecópiee

con los siguientes resultado"Serie 1°: Título de aglutinaoióna M256

" 2|: Título de inhibici‘m 1:16" 8| " ' " 1:16" Os " " " 1:16

" Da " " " 1:16

no se observaron diferencias en los títulos de inhi­

bición de las cuatro series, lo queelimina la posibilidad deexistencia de ¡recto una": en las condiciones ensayadas. queson lu utilizadas nonuioente en las experiencias a este res­"OtOe­

«ea-¡5'

Una experiencia. previa. indicó quo la inhl‘zlna no

es adsorbida por los glóbulos, comopodría suponerse por sini­

11tud con otros fenómenos de inhibición (4?) por ejemplo en el

caso de anticuerpos Im.­

La. experiencia fué efectuada. de la. siguiente manera;

se mezclaron quince gotas de suSpensión 1:10 de glóbulos en so­

lución fisiológica y quince de alergcno de polvo de habitacih

1‘31.-Se contrifugó y separó cl sobrenadante (S).- A los glóbu­

los se agregaron treinta gotas de solución fisiológicaw So o­

gitó, eontrlfugó y decantóo- Se procedió en igual forma.hasta

lavar cuatro Veces los glóbulos.- ¡Ospuósdel cuarto lavado,

se suspendieron en quince gotas de suero fisiológico (Guapa:­

sión do glóbulos tratados) y se emctuaron las siguientes expo­rionclas (con la técnica usual):

a.) 2 gotas de suspensión de glóbulos tratados o 8 gotas de sue­roag1utmmto.....wnm.o

b) 2 gotas de suspensión de glóbulos no tratados r 8 gotas dosueroaglutinth(testigobouummw

c) 2 gotas do susñonsión de glóbulos no tratados o 2 gotas del

líquido sobrenade (s) o 2 gotas de suero aglutinanto...“WWWd) 2 gotas de suspensión do glóbulos no tratados o 2 gotas de

solución fisiológica o 2 gotas do suero ag1ut1nanto (beati­«¡chao-Warho­

Se desprende que la inhiblna no fuó absorbida por

-24.

los glóbulos rojos y que, por 01 entrado, quedón 01 loko­nadmth- Esto resultado está de acuarela, por otra parto, con01 hecho do quo 1a cantidad de inhibina ¡“nuria para inhibirun una deux-¡iman “¡cuán no copiado do 1a santidad do glóbu­

los y sí, en cmb10,d0 la omeontraoión de suero.­

so estudió, ontoncOI, con 01 fin de aclara un lo

pum. .1 ¡semen de la acciónannual-1a. la distribuolbdl la inhibir“ en el ¡ist-uu, del siguiente nda:A) En la. zone.de inhibición.­

;) hn la ma donderra! culminación (o: decir inhibina illu­üoionte paramanu»­e.)WW

e prop“ nn tubo conteniendo:

glóbulos A, de Kofi. (1:20) 1 llo

.huro E, Ni 10164 (116,4) 0,8 ¡1.

¿organo de polvo de habitación lfi' 2 ¡1.“alucifinfisiológica -M

1mm i 10,0 .1.manita una dilución do moro 1| 123.­

Por una ¡ml-lucia anterior se conocíanel títulode uglutinanióa (1:256) y el de inhibición (1.32).­

5.oincubó el tubo ¿nt-z detallado quince minutos a

1370C, oo centrtrugó y leyó pasados quince tiramos durante los

cuales u dejó a temperatura amianto.- ¡al cano ¡e suponín por

01 «uan previo no no.ob“ "6 aglutinaciónw Volvió a contri­tugaru 01 tubo y ¡o encantó al aobruudanto (sobrenadanto 1).­

026.

Los ¿lóbulos turca lavadosdos wen cm soltathfisiológica y mapmdidos en un n11111tro no solución fisioló­

¿:1ca; con ellos no (letal-¡1:16e] 2.1maloao aglutith del no.ro Rpltl‘ndon’ e} dato dates hallados 1326i.­

81 CoanfldlltC 1 si encontró a 27/10del von-On

a haranmaría, con lo quo al destruyen la aglutina“ del suo­

ro.- Dlapulsde antrlmgar para eliminar el precipitmo 011.51­nuao duranto el calentamiento, no empleó este ¡amenazante un

una meva Oxporioncia (on lugar (¡o alemana), de 1a amiantomanera (voluuones or. d‘en“: memililitros):

10 50:10 20 301-10 (testigo)

Glñbulos A (1183) 1 1 1 616111109 r‘s(1:20) 1 1 1

mero B 111.6 1 Suero 1:; 131,6 1

1:3.2 1 1:3,2 1

136,4 1 116,4 1

Sobronmmto 1 (x) 8 8 8 ¿lu-sono li 2 2

.qlutinanih 9 o o Salut.. fl 3101' ,riea 6 6

Título 1116 , ..¿—,1nt1nac16n g - ­

L Título 1:16¡n alemana empleadoen 1a soria “¡tigo fué sono­

udo con mtauorldad a igual tra ciento que el aabt-encanta

1 (baño maría). pero sin conceptua­

(n) Ochopartes do este aabt-encantocorresz ados do alo;gano pues 01 tubo inicial conte a dos parte‘s de alarma an ­diaz y m6 concentrado a. ocho d‘una do su velan-n.­

Una vez leído: los tubo. GOla pri-era ¡It-10, no

contri ¡12.16nuevamenteel tercero (negativo), so “paré el ao­

Lrenadantn(sobrenadmto 2), se lo centroer a de su vo­lumen, se lo mou-1qu y empleñpara oficfuar otra serie món

losa, que 616los siguientes letados (velúnms cedidosenrsauna):

1* Sci. 2! ¡3:10 (tdstige .‘o

616m1“ A (1.20)}1 1 1 (¡lóbulos A (1.20) 1 1 1

suero B 131,6 l moro B 1:1,6 1

113.2 1 1:3,2 1

136,4 1 136,4 1

¿»Mandame 2 8 8 8 ¿Jorgeno 2

.410 tinaoiñn o o o 301m . 915101.6«-.1ca 6

Éïíáïí'“ 1.16 ..glut.1nacih r - ­_M Título ll16

na la Soria cauon se usó alemana smotido doo

vacas a Calentamiento, tal comoel somenme 2.­Los datos de la oxporieneia se puedan resumir así:

(Quadro VU):

-27.

(¿Law VII

Títuloaglutinth del suen........uunn-uuunonhs‘BSTítulo de aglutinadón con¿lóbulostrat.adoa............h266título do 1nr.1b1c16n del suero con dor-¿fino do

polvo de habitación 1 iiooooooooooohaz

v 0 n dal suero con sobran-adn“ 1...»..1116

" " ' 601 suero con alerjno 11

¡metidoa calentuicnto..uu...u1316° 9 " del moro cms sohmnudento 2....."1n16

W I ' del suero eur: ¡lorena li so­uotiuo 2 voces a calentmimto.....1316

ya estos datos so cmeluyo que en la gala donde

hay inhibición, la inhi‘:1nd no es adoorhida por los ¿{lóbulos

y quoda en el sobronudarxo de donde s! la rompa'rd por callan­

tmienro a 100i C, siendn 10. recuperación ¡parontmmto com­

plata.­b) ¡m¡i mi. “mas bi! ¡lvlnnnnflh.­

se determinaronlos titulos ue ugktlnacih e inhi­

teicifn de un moro; dogma 0.1 primero 112M; y el segundo 1:32

cm alemana de polvo de hábitaoión 11.- mepreparó luego un

tubo cm tales proporcionen que resultara de .¡glutinución posi­tiva

(¿lóbulos A do 3.3. (1:20) 0,6 ¡1.

Sníro "rc!7510 (1¡1.6) 0,5 nl.

¿10110110de polvo dc habitaclñn 1.! 1,0 Il.

Soluciónfisiológica A“).Total: 5,0 Ilo

-3.

¡asalta nero diluido 111€.­

uespués de 111€an, team rogar, etc. en la forma

acostumbran so leyó al microscopio: hubo aglutinaclfin, tal co­

mooo pnwíu- Volvió a comunicarse para apurar los glóbu­los dol obrenadanto y ¡sto se sepas-6 m dos partos.- C'onuna

de ollas n pnpll'ó lo serio si ¿mientos«¡annuaunm 1 1 1 1 1 1 11am. 1:1.8-)!“i

1.3.2 11 no“ 1

1.12.8 11.25.6 1

1.51.2 1

í 1.102,4 1

É:.yobr;;;lgwlwW-WW a ¿A a a e a sWÉíÉWdHoïïaoá Hgm-má"a 3- a 3 3ïAdutlnadü N l» o o o - ­Título 13253

Se obsorva que el amé-a; de oobronudmto no ha. tgnido efecto sobre la aglutinaclóna­

La otra porción de sohronddunto no calentó a baño

¡aria hasta reducir on volumena 8/10 del inicial y después docontrifugaao se usó para reemplazar la inhibina en una corto dotubos:

ïïííé'jéïííï ¿2 1 13al.” 1! 1

153.2 1

1‘6,‘ 1

1212.8 1

Sobronadmto 2 8 8 8 8

M-lutlúkáíí‘w ' g r o - ­’ W. _‘ .ál

Título 1:82

Se volv16 a ohtonor m título de 1:32, igual al tí­tulo de inhibición obhnido al principio.­

Estas experiencias auguran que on 1a ¡ona donde la

inhibina no es suficiente para inhibir 1a aglutinación, Nsulta«¡nonn está. libre, según lo corrobora los ensayos con 1a pri­

mera porción de oohrenadmte y además que la 1am una puede roo

cuporarse c201Iobronadmto por Calentuicnto, apmntonmto ensu totalidad.­6o­

miiLl'.¡in.­Jo ¡02.216suero aglutina)" y glóbulos carmona­

dientc-s. incnbó a 37' c duran- 18 minutos, enatritngó y 10,6a 1o: 15 ¡1nutoa.- ¡3.1título dc aglutinnión 616 ¡3256.- so .­

grnó inmune y agitó on 01 agitado:- do Kahnpor 15 minutos.­

:3eigual aura so proc-616con la serie testigo, pero agregu­do solucifin fisiológica un lugar do chucho.- Mon una. alcentrlmgarm y layoron u los 15 nantes.­

Ho ¡o oboorvb Variación en 01 título aglutinar)“,

03­

10 que prueba que la inhibina no {Ses-aglutinalos ¡Ibi-alos.­7o­

aipmiondauna interacción entre 0/ o/yfi o “inhi­binaJ como¡o dosprendedo lu omrilnoiu anterior" 1 sabiOn­do que i no u absorbida por los glóbulos, resulta de lntOP‘Iawrignar si la i se i’lJü a los glóbulos aglutinados» Para o.no ¡o preparó un tubo en 1a siguiente roma:

5161211103A (12m) 0,4 Il.

Sacro o, m 10574, 1:6,4 0,2 .1.SoluciñnfisiológicaM

ïotal 4,0 al.¡wc-¡1ta suero: 1.122.­

30 incuhb 15 minutos a 37' C, contrii’ugó y 10,6

transcurridos 15 minutos a temperatura ahi-nte: huho mart.aglutinacih (n).­

Por una expcrionoia previa se cmocída ol titula

dt aglutinaciñn del suero (111024) y el de inhibición (1.1256).­

r.1 tubo preparado, una vez leído n ccntrifhgó; u«paró el ¡»manto y llenaronlos glóbulosdos voces cm lo­lucifin flaiológicm- Unavos lavados se 1.a mcgó 0,8 ¡1. dealex-ganoexplotando el volan a 4 ¡1. eau sala ción {131916­

2163..- So agitó 5 linutos en el agitador de ¡mn o ineubó 16

flautas a 37- c.- 39 contrinagó, nopal-61a mayorparto del .­

bnnadante (cobrenadanw 1) y 10:6 después do 15 minutas» nun­

que hubo ¡areada ¡ne-sólida, se pudieron observa" los glóbulos

aglutinadosoo

¡al sobmnadante 1 se dividió en dos partos: una do

- 31.

ollas IOusb tal cual; 1a otra a nmtiñ a bañomaria.duran10 minutos; cor: una: no propararon las unionth sirio: (I yII):

amm mus u[G16bn103..(1:2C‘-) 1 1 1 Ï msnm ¿(han 1 1 1 11'

537.53“ 1.3.4 1 am. o 1.3“.4 11.12 1 1.12.13 11:25,G 1 1.25.6 1 t

‘ 1:51. 1 un; . 1m¿.35”“ sobnnadantocal.talcual 8a¡amnmunmo-c 8888

Ïé'lntinaei‘n 1» r r o Aglutinadón n o t oïítulo H W“Las título 7 nene

D acuerdo a. los titulos obtenidos todo. la inhibina

quodó apmntmnu en 01 sobrenadannto1, sin que se abs-¡"vara

intoracciñn antro olla y la aglutina-s: no hubofijación do oinhibina a.los 316m1» “manada, nl dación do aglutininaldo Gatosal abundante.­

Losresultados anna-ion: ¡amm initiear que el fo­nómonode inhibición ¡e debo n una interacción entre las agluti­ninas y la Instancia irïhlbiúflrh- tomolu noción inhlhitoria seamantesWWW. ntra­tó de dot-minar si ambasespecificidades son Independientes.­

-32­

Contal nn fueron planeada: una noria do anaran­

cias basadas on que, :1 ¡nba especificidades no son indepen­

chatea, puedepensar“ que un; dun. Cantidaddo inhitlna na­niños" distintn potencia front. a.una ¡im oanudad de aglu­tinina 4 , “¡fin ‘stl se han. sola o on presencia dc agluti­

nlna fi (y mdprooaonto)”Las experiencias II llevaran a cabo (¡caminando

loa títulos do aglutinaoión o inhibicih de ¡neral do ¿Í‘I‘HPOBn

y L, cada un. por separado y luego en lt ¡Ozcla de a!!!” en ­

cantidades cqnivalcnma rnpocto de las aglutininas (x) .­Loc resultados nguru en el muro VIII:

(x) Unamuno so considera que hay una unidad de uglutinlnuon la 61th“ dilución do mero que prosth ugluttnaci .o ¡hasta! experiencias los tubos do cada sel-19 tenían igual cuti­dad do ¿(humana q/ que (lo/J (en Casocentrado se especi­fic o­

-33.

www un

Fhpoflmda manolo; Títul. do'una. de;«¡aunqSuero (al do 01: xN0 B a- B‘ aglnünacih anuncian ra/n1 ¿(12893) 3- _ f 1. 2m 1: 32 a

15(13993) A 1: 512 1a 32 16

¿»2K1) }; n 512 1. 32 16

¡.3 ;. 1. s12 1a32 1a

2 u 1421€) B 1. 512 k 1. 64 a

¡1114116) A 1: aaa Ï n 32 a

MB (2) B 1: 512 1| 64 8

MB A 13512 1: G4 a

a ¿(1418) n 1. 64 1 1. az 2

m 14115) a. 1. ass 1. 32 a

aus (3) h 1: 64 1a32 2

MB A 1: 286 o- ­

4 ¿(13978) B - 1: 512 1. 123 4

m 13903) ¡a 1: ¡024 1: 128 l a

by: (4) n 1. 1024 11256 4

__ ________¿»gt _ “A L 1:512 1:64 8(1) La ¡azul-¿“canino ¿"í-53;:Á0 suero A y dos de B.­(2) La uzcla cantina. una parto de moro B y dos de ¿.­(3) Lo.auch; contiene una parto do suero A y dos de b.­

(4) La mezcla. contiene una parto do ¡nero A y agan-o de 3.- aesta. experiencia las cantidades de moro en 1a mezcla no

son equivalent“.­

-35

Tanto 01 titulo de aglutinución cano el de inhibi­

clñn en el cano do 1a mezcla han nido considerados resposta dal

¡uno aglutina“ presento ¡n la ¡1 sn.- 2.1.: on lo. prison-aexu­periencia.el último tubo positivo frente a glóbulos B contenía

2,5 partos de dilución 13256de suero B y 2,5 partos en dilu­ción 13128do suero a en valuaan final 10.- El título agluti­

nantl do la mezcla ¡aspecto do sl‘hulos B os, por lo tanto,

1:512; y respecto de glñbulos A os 1:612 ya que ol último posi­

tivo contenía 2,5 partos do score.) diluido 1:128, por 10 partosdo volanon final.­

Co-opuede concluirse de esta: experiencias. la 1n­

hibtna aparte. comoposoycndodos especificidancn infilptndill­

tos, ya que los títulos ¿"nla mezcla no ¡e han modificado na­

pocto do los títulos de los “con aislados.­

F51alex-¿eno do poh-o de habitación, obtenido según

la dance «sex-1pm por numerlam, m6 ¡cuando a 1a ¿celudo distintos nativos» ¡sobrelas fracciones ¿»Maid-asu wri­

r1e6 la penmnda o desaparioih do la prnpioúun'inhibitoria»nosconodindoso la naturaleza quinua de la Inka!una, sirvieronde guía m el prison" trabajo varias publicada” anterioressobre parincuoión y truclonuúonto de extractos olor-¡36121605

de orígenes Vau‘laswPuan-ont- a la reacción do 1nh1b1c16n

se hicieron pruotnu in vivo (reacciones cutáneas) para dot-m1­

nar 91 existía correspmdonciaentre ol poder inhumano y lameti F“!d .¿d ¡»10164€ a..­

Auna solución de ¿termo crudo de polvo do bahi­

tación 1%se agrogfiactuan, ¡atacan y ¿51tme hasta unacone-nuth do 75€.- Se calentó en baño o agua a, ¡sn-55! c,mrth nadia hora.- se emuirugó, doscurtóel líquido sobre.nadantey lavó el precipitado dos no" en ¡cuna para y luvgo em 6ta.- üna wz eliminadoel lar, 01 polvo ¡a extrajocon nd)! 3/100. se ¡Justfi 01 pl: u 7,5-3 con cm NIE y no 110­

vGa. solución isotñnica (volumenuqu "al inicial para poder o­

mctuar conspiraciones) (Soluoifin 1).- Una parto de la solución

u! obtenida un dostinb u pruebas 1a vivo; pg“ ono se gnc.­n56 a1 451.- Gonel resto so efecth pruebasin vitro, usa­úo cono testigo alemana de polvo de habitación no nutrido al

'3­

tratahmo doscriptoh Los resultados paid-n Ver" en 01 madreIn

manu-.0 IX

alero Glótmloaflïít.“ aglutinudñn 31-1-30an nde inhibicih“m sin tratar 1:3

Emsa) Mao en) 1.12:301m3.1sin tratar 13266

00.0574) ¿(de OE) 131024 ISolnc. 1 J 13286

1:01mauro al duna qnopor cuenta-¡10m0 del ¡hr­

¿Or-¿oen medio «tinte-o 75.1ra 50-55- C durant. "dia hora, no se

destruye la inhluinan Las ¡ambas in vivo nadan: con el aler­¿‘Lotratado no acusarm anuencia: napaeto del extracto orl­gina.­

mago..."Para analizar los posteriores onsayos so utili 26or

tracto de polvo de hahitaciñn al 41. es! preparados 2 ¡ra-os depolvo crudo obtenidos Indiana el uétoúo Sntherlmd se solubi­

uzarcn cn ¡odio alcalina durant: 24 horas. u ost-gb agua doo­tfludn, GIRAhasta isotmicidad, so ajustó el pH, completóelvolumena a) al. y duró por filtro auth- Unapau-tosc 110­

v6 hasta 45;?de gunz-um y guardó para pruebas por marrone­ción.­

20"

éftme, Hurkavyy books (9) trataron de aislar oa1 monospurificar en lo posible el alex-¡ono do polen ao A.­

-37.

bronia trim“.- Unawz ¿humo d líqulczbao extracción di­recta. sometieron al líquiio de. 11.31131:a la eliminación ¡is­

temS'ica de Varios cazpmentos proteico; mediante 1a acción dc

nantes precipitmws adecuados.- tomoconclusiflmsdesu estudio,arribaron a las sigui-nt“:

Despuésde Gianna- extracto acuosa del polen cita­

do, aproximadamentela mi-‘adde la ¡astucia activa apch Cn01 líquiao de diüini I.­

svmetido parto del liqnicm de diálisis a la ace-1611

'01 calor, no varió su poiancia alergónicu on pruehas cutáneas.

Por acuña do].ácido triclorouc‘tico aparontenntoany pequeñacaridad o alumna ¿o ¡eficacia alarg‘nicn es pra­oipitsda por dicho huido.­

El tratamiento can ácido platica separó pequeña een­Elda! do 3-2-11“.- m aobrcnuaunt- no on'eeió «mua: en nao.

cioan cutáneas respecto del testigo standard.­El ácido rasfotúngstico precipitó el principio ac­

tivo.­Para anti.er 1a influenciadel ácidotricloro-a­

cities sobre 01 extracto de polvo do habith se procedió do1a siguiente ¡meras so tus-¡rm 5 ¡1. do 1a sala ción al 4’.­

Con agitacih eonst mte sc agregaron 2,5 al. do solar-1611de

cua-mon ul ar-u- zurth 24 horas se dejó en la heladera(pn<1,2-nzn1 do una»; importa para comprobarque el ¡Jar­mo no su inactiva en medio árido) .- ¡,uho pequeña cantidad do

precipitado fino, coloración.- Unavos apurado 8st. precipita­

-a­

do por cmtrifugación. ¡o lavó el ¡»andamio con sucesiva

porciones de ¿tor hasta quo su ph alcanzó el valor --'-e7,5 (so­lucih 2).­

¿‘ola solueifin libre de tricaloroadtico se separó

una para y glicerinb al 45€, gust-dándosepara mutaciones in vi­

vo y con el resto de la solución se eflctlH-J‘m reacciones de o

inhibición quediera: los letuflbfi qqu ensima: en el mapdro 1.­

2.1 precipitado separado (¡o mg.) se 1:11'6tres veces

cor: metan y luego con ¿tm-.- miainaáo e] éter se lo solubi­

1116 on 363 N/IOO, su!doJó 3‘14horas u bum teupvratnra, se 110­

v6 a solución iaotñnieu, se ajustó e] pH a 7,5-8 y completó a

7.5 ¡1. (volumeninicial) (solución a).- Se filtrb, separñ una

parto para IIÓVarla a glicerina 45%(tdstnyin vivi); cen 91 res­to si enteraron naciones in vitro cu: loa siguientes resulta­dos (mauro JL}(como testigo sa diluyó 01 antraeto ¿autht‘rland

¿f conalmifin fisiológica hasta 2,6", mantracib igual a1*.de 1a soluciln 2, pues aquí se había partido de e a1. y 110­

Vfioa .10).­

-ÜO

campo x

moro '616bu'1os" á'ít.ag1uc1nmón! :nm blna Iítoinhibicifil

¿(1273) mae on) i 1:32 ‘ suma,“ 1.2

some. 2 142

sona. a n16_ . 7_-,- _V_____%_,_..___,r________

M3379) ' ¿(11003) 1:64 “¡mafias 51:4anne. 2 21.4anime. 3 1n16

Éo<1374>f¿(de os) 1364 sume,“ e1uÉ i Solue. 2 1-1“

anne. a 1:32

su. w g han emma,“ 1264! ' 30h10. z 1:64

1 801cc. a 1.256

Las machado: resumido: cn el cuadro anterior pa­racon indicar que la inmune no es pneipltnda por el ¡dbtricloroaoóticon El poder inhihitorio que no manifiesta un 01prodpitado quizá se cuba a una adsorción o a ona parcial ¡ipo­

raeión de la inhibin-a de la solución debido al ¡E bajo a (¡un

se traba-46 y no ul ácido on si empleado.­

Las pruebas "in vivo"eon el sobronadmto diam po­

sitivas; con 01 precipitado, nogatiwss o dudosa.­

-4)­

2‘.5 ¡1. de soluc16n a. cxtracto do polvo co hahitl­

clio a1 se agregaron 22,5¡21.60 solución saturm’a dc ácido

pícrico.- ¡,0 60.1624 roms en la helado“.- :‘¿ohubo precipita­

co.- ¿'40neutralizñ y meantró a baño :aría a mitad d. “Iman.­

;e volvlñ a ¿214111ch hasta pn 2, se clariflcó por centrífuga­

c16n y dee-axúacifiny ¿xtraJo el soul-anulan“ con sucesivas por­

ciones de éter, hasta que la trucción de ¿ter espuma resultóincolora» ¿aoajustñ el pH n 7.5 y coupletó el rola-on a 5 :1.

cm sonic-16h fisiológica (volumen inicial) (3011213161143.- Par­

te de Esta soluclh se empleó, una voz llevada a 46! de ¿neo­

rflna, para reacciones. cutáneas y el resto sa probó en reaccio­

nos de inhibición, can los 31minutos resultados (con testigose usb la solucián de extracto mtherhnd al 49:

¿Ir-.110 n

EB”"“‘“¿iisáia.’fit: ¡Gr.1una T1t.1nh1b121¿(13978)¡xa-¿"Eu 1:32

Lsalud 1:32iaunar.) máÏiá-oH- 1.1024 una? ¡{ía-“Él ‘ 801.1112.4 1132

(¡(14031)¿(deoáífl A 1.512 ‘Ï‘ámaí 131€801110.4 1116

Tai-éáéiráiááháks) mai j'.n¿.á' “iiií ¿toluca 114

Do los resultados aquí consignados se deduce que la

inhibina no precipita por acciñn ¿el ¿cido pícricoo­Lu outimaccionos sobre pacientes senllbleo no­

sultaron posi ti veu.­

La pncipitacion fui efectuada aerea-andoa 5 ¡1o

..e 1a solución do extracto malaria!!! a1 41, 0,5 .1. do ácido

clorhí ¿rico encontrado y 5 ¡1. de la solución de ácido rosfo­

tfingatieo 156.- ‘a dejó hasta 61 asia siguianto en la heladera

y 30par6 luego e] precipitado del sobrenadmte» ¡»1precipita­

‘o sn lnvñ dos vocoo cm pequoñus porciones ¿o soludón de áci­

do tasfotungstico, trim- ¿Sesolubni 7.6er. medio acuosa y 01­

trQo con sucesivas perdon-a de una nzcla de éter y alcohol

unica, ar, partos amados, y luego con ¿tun- Enel liquid!meso final so probó 1a ausencia de ácido rostotónastico (con

012123.).-Se ¡Justa el pfi a 7,9; novó a isotonicidad y completóol valium hasta Iguala 01 inicial, para poder compararrespu­to del testigo.o :sofiltro para eliminar su ligera turbio“.­1.01filtra-no so separó una parto y llevó a gtieorinn 459i, para

efectuar court-sanciones y con al rento se ¡actuaron pruObul"1n vitro"(rsoluc1&| s) que se «mamen un ol macro nl.­WWW:

5:1líquido do precipnadh y los de lavado se u­

niororw» .e cuanta-¡ron a 1a mitad a baño maría-¡.- sn extrajo­

ron Van-1a:voces con un. angela de alcohol unico y ¡tor (1.1

en volta-on)» Se comprobóen 1-4solnclfin find. 1a ausencia do

rosfotfingaticow ¿tenoutraliaó, llevó a isotonicidad y completó

el voïunen a 5:¡1.- Partc o‘a¡sta solución so destinó a pm.­bu in vivo (¿encarnada 451?)y part. ara comprobar su podar

1n1r1b1t0r10 (‘EOIUClhl6) .- (lomotestigo se mplcó solud‘n de

extracto ‘ntherland 4fl.- Los resultados pueden lacra. en el o

Guam-o A110

(13...,110 111

suero Glóbuloa T1t.aglnL1nan16n Inhibina íïítoinribicifin“13725) su. u) 1:64 aan-“4; _ 1:4

Soheos 1:8

Ïusszs)su.w“ ysm.“ 1:16:soluo.6 1132

r ï 80190.6 1:64

Méaáfiiïááí" ’ ’" ¿{0131"”i;íE“’—i , Solana. ¡ 1'32

¿301123.6 1.64

«12791) mi} aa) 1.512 mua.“ 1.16immms ha

30.1ch 1064

‘O(136Ü)Íü(do 1.256 mtb.“ 113J Solana 1:16

É l 301ch 1116

Los ramitaïlos indica: 1a presencia de podar inhi­bitorio en a1 precipitado.- Tambiénnuestra actividad in vitrola solución obtenida del trata-¡anto cm aabt-anulan“ de la pro.

cipitación y de los anidOs de lan-ado.­Los tonta sinvivo no wsarm diferencias respecto

«a­

do las pruebas in vitro.­

El tratamiento seguido se basó on un trabaJo do

Lions, vcd: o Hiroso (11) Cuyoobjoto m6 aislar el precipitado

promeitb por adición do alambre potásico a un extracto acuosa

do polen do Anuncia trii'ida esinvestigar 9.. actividad bioló­

¿ileso­

h en 1926nanny y colaboradores trataron de pro­

cipitar 1a tovinu «¡nunca con alfian on 195.1determinó, cncolaboración con han, las condiciones necesarias para una ná­ximaprecipitaciónw En 1936rumana upli c6 el trataniento ala Ambrosiotriada.­

81 (804)4xmgñr24 830 m6 usado como reactivo doprecipitación.- Se añadió en solucih acuosa a1 10€, en volu­

aen tal que la solución final resultara de una concentración

on alumbra del 19’.aproximdmntow Sato valor de 1! m6 aloe­

ción arbi tra-aviado los inwstigadorn a1 principio mencionados,pu‘s no afectuamn msm! con concentraciones¡yor-s.­

4,5 nl. de la solución de exrtracto anthorhnd a1

49!oe agregó 0,5 nl. de (i-D¿)4A1212.24nao en solución amenaal 10:” lmtanento, cm agitación constan“.- :sollevó luego 01pHde 1a solución o 7.9.8.0 (rojo final cmo indicador ext-roo)

para que pncipitara ¿Mama y s- dejó 5:4horas en la heladnra.El precipitado rloeulcnto formado, v'ciinontów se sopa-6 do].

sobrenadmto y lavó can solución fisiológica hasta eliminación

do mi". probo su anuencia en el líquido do lavado con 61.2151

en malo elorhidrion); lugo u suspendió en solución Hanalógi­ca.­

Se obtuvo ¡si un precipitado de Hdróxido de alminlo

suspendido, que pmh o no haber nasal-hide 1a inhibina.- Para a»

urinario debieronefectuara “accion” do lnl'ibición; pero pa­ra la. reacciones so neeoai taba toner, no una msponaión sino n­

aa solución, de manu-a que nr- buscó nn ¡odio par; ¡apurar la 1n­

hlbinu (supuesto quo habia sido adaorbidao del mms-6mm de alu­

n1n10.- un 0110 (x) 01 pndpltmo suspendido en solución (f1­slológiea ¡o acidiflcó con CIE(1:2) batas disolución del preci­

pi tudo y se nov!» a nato eithico 75;!» ..ospu&sde 2:4horas do

conservadoal frío, zo "pus el precipita“ fino, ligcrmnucoloreado, por contrirugacih y ¡"canceló-.1 dal sobrenadanto;¡a lavó con actuan y dilalvib, una nz Ollungda ¿sta unán­uolo a 4,6 ¡1. de soluclfin “Mónica do pH7,5-8 (¿andén 7) .­

Unn pau-todo esta solución 3Gdestinó, una vu glicfl‘inuda, a

pruebas in vivo» 2.1Hato zo 09;.106para tendones in vitro.­Conotuugo atanblanco, n ¡unió a trata-10m0 má‘°¿0 desde

(r). una suspensiónde nuca): abunda alcalini zado una solu­ción de ala-bre potásico al 17-“(Mitación e) .­

Loa asaltado: se ven vn el Cuadro XIII:

-45­

(XL-4:20XIII

En cubana ¿funelntindctónlklnhlbina Thank-¡Melón¿{r-(3524). a ! 1.126 ¡ia-¿.4? 1.4! salian? 1:4

5:01ch i 1'128

gouaosl)‘ A ! 1.612 É San.“ 1:16

Í l l (¿alan? 1:32

I_ Ñ-_ ámw {53*.«(de o.:v¡b 1': 1:64 l annual: 1:8

Í salud 1:16tmac-6Í 1'64Cansoluclun ohtonldu

llegó a lo. “guantes asaltada:C'L’Jsllrï) XIII a

de otra exporionclu, II

auna Glóhnlol ïltodglntinuciñn Inhibina :1 t.1nr.1mc16n

¿(lalasïatdo os) 1a512 9mm? 1:4! solncn'ub 1:4

‘ Sonico?" 1: 512

M125113405¿(de on) 1.64 ¿mmm? 1.2

¡ ! F‘olucfl' 1.4

li aolnefl" 1164

DClos result-don cuando. en los Canal-alfil]

(x) ü ha denminado Solucih 7' a la correspondiente a 1a so­lnefln 7 de la pri-on “ponencia y solución7' al "¡annua­to de 1a precipitación de “Roma.­

“¡G­

XIII a,” deduceque la inhi blas es arrastrada por 1a pucipitn­ción ue décima.­

Las pruebas afecte Mafia vivounoacusar!!! alarm­ci a: rñspecto de los teats'lin vitro:­

90 “tant-ari estan-cor en qui tracci ones u pro­clpi tada la inn! bina cuando ¡o trata ll solución do ¿lloronacon sulfato rioamonioa distintas cone-attachmen­

A 7 ¡1. do la saludó; aa alos-ganoc. polvo do hu­

bitacióa al ¡li se asuma-m 7 ¡1. de solnclfin acuosa saturada

de sulfato do «¡mania(76 ¡neu n1.).- . o €1th in lá hem-ra

24 notas, n «nu-iras!) para "para «1 escaso precipitado ob­tenido» Unavez "parado y laudo con ¡corona ¡e disolvió en

solución fisiológica, aan-tb al pk a 7,5-8 y completó a 7 ¡1.­

naí se obtuvo la solución 601 pncipitwflo a nodifla naturinci‘ncon sulfato do amonio(Solucih ¡0.- Unaparte de la ¡una useparó para dot-¡ruina!u ¿navidad dominica­

.-.1aobnnudante de la pnoipitadón a man satura­ción so agregó sulfato de anonio hasta saturacifaw ïubo abun­

dante prodpitaeiónw Rawls do haber ¡anuncian 24 horas en1a heladas se separó al precipl taco tornan.- ¿.1sobrenadmto

se concentró a bario maría, se ajustó al pH a 7,5-8 y 11.16 a 7

¡11.- Conparto de ¡ata solnzión (Solución 10) no oftetndron o

reacciones in vitro; 91 rento u 119% a ¿flicorlna 461 y usópara reacciones in v1”.­

.r.1precipitado antes "pecado ao sólubiuzó, n as­

-0.

instó su pHy contacts su velan-n a 7 ¡1. de solución ¡»tónica(wlnon Inicial) (¿soluciónn).- Parte de esta solución (con

«¡side glicerina.) u «¡tmb a prueba ln vivo y parto para do­teminar su podermanzano.­

¿oszotestigos do las pmeha u “¡aleman una solu­ción saturada ciosulfato de «amic y la de extracto Suthcrland

4.1.- Los ¡“alzado- pueden "no en ol Cuadro XIV:

(IMM JUV

mn 6161312103!rihaglutlnadón mmm“ Iltdnhlbieión«3524)¿(lo03) ""á¡ihÏ¿3“-_2ííi—_w_

301m5? ¡ 13188

Saludo 1:4

Salman 134

¡ y g ¡chula y 13128

EMd. ou) sus BA) 1H‘4 Sata.“ i 1.8I

I

5,01ch ' 1:64Salcedo 1:10Sohedl l 1:15,

Solueol‘é 1:64h———.____4

Dolos resultados obtenidos a las prmbu roun­ndu no dodneo qu. el sulfato do amonioa ¡Odin Intnraoi‘h no

provoca 1a prooipitaelón do inhiblna.- fs saturaciñn completahaypudpitulón incumplan.­

Las prueban cobro pacientOl pasibles dieron lossiguientes resultados: ¡zu-acto 9 encarnado: negativo o dudo­

N

o.­

so; extractos 10 y 11. ¿:Zlieorinados,positivo.­

7..El procedilionto químico «pleno ao banó en los

trabado; de "pies, Couhon, Bornton y shown: (10) para aislar

y caracterizar un campamentoalarg‘nicmcnto activo do la 3-1­

lla do algodínw ¿Dichoproeedinianto ruv'lta ser másdrhtieo

que los comun-Intoseguidos, pu” incluye precipitaciones cal

alcohol, ebullición en solución acuosa y precipitación con a­

cetato de plono.- Agrandes pasos, 1a t‘cnien por en" soni­¿a mi la siguierath a la solución dcrdnua nñadioroaalamolhasta 75h- nouurtarm 11 solución y recogieron el precipita­;m que so nov!) a soluciñn acuosa do etanol 26:5.- .qroguon a­

stuto básico de plano (dal tipo do los “¿dos en análisis deazúcares) al ¡o en solución de etanol 25%"(para un volumen do

almuerzo, mediodo acetato básico)» E1 precipitado do salon do

plomofui separadopor cutimgaciñn y anonimo y las “losque pudieron haber quedado al 0.3th ooloidal no separaron por

ultramtrifugación a 83.000revolucion“ por ¡inuto en centri­fug'i sharpluo- A la soluciñn, ligermnto turbio. se añadióalcohol hasta 70%y ao «.16 a -7. c toda. 1a macho.- ¡31anitb

Intranet!th sv doscartó.- ¿1 sólido se lihorb do alcohol y n­á al vacio en pronuncia de pomóxido de fósforo.­

El procedinisnto seguido para con 1a solucién de

extracto authorlmd al 4! "tuvo sujeto a variaciones, dada himposibilidad do cantar om el tutorial de trabajo con que cm­

tarcn los una" del métododonar-inc.- 220trabad‘ de ¡y ai­

-Q.

¡ciento ¡maru a. usaran 1:.¡1. do la solución de “tracto

Lutherlsnd ¡1 4! y natural a ¡Odio cotbico NFS.- .-aspn‘sd.24 horas se Sipnfó 01 precipitado y concerts lu solución.- El

proelpita o se solabilinó an 6 al. y agregó 1.6 ¡1. dc etanol,de manera quo quedara un ¡odio acuosa con 25€ de alcohol ot!­

11eo.- ¿o ¿Badlñ mitad de volumen(3,3 al.) ¿o soluciín alcohfi­

lica 255 do ¡notato básico do plomo ul 101.- Precipifó una cua­

tmoia nacen. turrón, ql. se “paró 401 ¡obnnadunn por cn:­trifugaaiún, dos horas despu‘s do agregado 01 acetato básico.­

31 cobrenadanto quedó porrbeLu-onto lílpido o 1ncoloro.- El pro­

61:141adc-u trató con 4 al. do somth sal leí do mal-¡g con loque pasó el altrgono a aalnciñn debido al mania ulcalino y pro­

cipitó man. “pal-5116030¡II c1 plomode la soluciüw 1:1ear­

bunato de plomo ¡o olininb por contrifugaclón y docantación; 01

entrena!th so 110i a solución inotánien, p}?7,5-8, conplotin­dos. 01 volumena 8 ¡1.- Parto do esta solución, con glicerina

452, se destinó u.cnt1rroacc10nen.o Con61 resto se ofoetuaron

pruebas de inhibielñn (soluclfin 13) cuyos resultados pueden ver­si on el Cuadro XV:

CUnLfiC' XV

mero 616511193nt.u1aunmííxnm una TitdnhibicibE’áédi'"f"Záïií‘óáï'"mñ“1712€ manu: án4

‘ 5010242.133 íh4

Ezragfim."sg‘ "3.1.7.4; 1.asoluc.13 1:8

no los asaltado. obtenido. n deduce qu. ol un­

tato ¡hiso do pio-o precipita 1. nata-cin quep.800 podar in­hibitorio en 01 extracto do polvo do habitaciñu»

Laspucha efectuadasobrepatient“ “¡una c­casaron reacción poaitiva.­

m-WLa tecnica Olpleada en la obtención del extracto

alerg‘nico en fundamental-entedistinta de las ¡nqu cpe etn­sinter. em

a) W o pulverizacién,eneno necesario.­b) tratamiámtodeW consolventeadecuados(éter, to­

Inol, alenhol, ateo).­c) W en soluciónalcalina (bicarbonatoo buffer de roe­

f.e_tc)con conservador (fenol 0.5.1, deztroaa, glicerina (16)).­d) yor«131181:oprecipitación.­e)W porevaporaciónunfrio.­f)W enrrfowbo“¡una la filtrnoiü,estado

en canbio, contraindicado: el agregadode ¡asturias quini­cu que podrían provocar imitaciones no específicas y 1aeeterili zación por 01 ¡“loro­

Las precaudones emmaejadae en 1.3:.etapas de m­

eantración y enterinzaeién emanan a suponer que el alergenotiene cmstitueih proteica.» ss].ng autores han smetido atenperaturu más elevadas al (termo en ulgmmetapa de an ob­

teneifn (7.9,10).- ¿n el presente tmb-Jo los extractos empleo­dos fueron oancentradoe y esterilizadoa por calentamiento, sin

observar por 0110 p‘rdidu en su actividad biológica ni en npoder inhibitorioo­

Las desventajas principales que presentan las solu­ciones de ¡largeno obtenidas según el canino antes descripto (12)¡Im su relativamente escaso. duración (6-12 nos“) y 1a poca pu­

0%

rsss del extracto final, incluso desn‘s de le purificación pordiálisis que sólo eli-inn parte de las ispnrezqs, pudiendoque­

dsr otras sustancia en solución, responsables, en anchos sesos,de reaccionesirritntim noespecíficas. Manía, la emma-a­eión a Alcanar quedalimitada por la relación peso-an el­plesda en la extracción, que no puede montarse indefinidamen­te. si bien es posible emcenuu por evaporación, esta opus-rción no puede llevarse ¡ía allá de ciertos limites, ya que seconcentra no sólo ls sustancia ¿10:36:11:a, sino tanbien lasispnresssu­

¡ayunas difimltudes han side ys subsmddas. Theár­

lington ChemicalCo, han, eouloislisñ el “todo descripto porbiinbúrflla) mano sn una extracción en solución acuosasinn­

na debil (HO-Li3/20 6 5/83) y pwoipitacibn ¿el alergeno por

uidificuión con ¡nidos chmiurioo e chico. El polw qu.ud llega a obtenerse “tatiana su actividad, no habiéndese ob­servado la pierda son el tiempo].Si Min este “todo nbsanss1 detesto de ls p‘rdidu de atividau, el precipitado logradosanti me muchas impuresas.

Homme:-y oolabwadorosklb obtuvieron un extracto

de poleo de habitación potente y de eleva-.3 pares: mediante un

procesa-into que incluye: extracción en sodio seno», precipi­tsciones conmetan a distintas emosntraeionsflci y 76!) ycm sulfato de amonio(CDS);diálisis y consumación. Pero es­

te procedimiento, quizá factibll ue ser aplicado a otros aler­genos, s1 bien dá manos resultados ez; cumtn a pureza y con­

43­

eentraeión, resulta pocoprbtico por la eerie de etapa queimplica.­

altherlmd ideó un prmediniento ¡ha sencillo queconduce e tan buenos reeultedoa cano el anterior y ee capas de

ser aplicado e otros dergenos ademásdel polvo de habitaeifitu 12)

En rasgos generales eu Genios mi seguida en la obtencióa de

los extractos Olplewlosen e]. pnnente trabajo, llegados eun ¡rulo de pureza qu“ supere.en ancho a los dentada por ¡6­

todos comunes. En erecto: 1000 g. de polvo iniciales se extraenanualmente nos.2680 el. de solución mas; alcalina. ¡n lea n6­

todoa comunas65H; se concentra a 1a quinta parte, een lo queee ¡e 'nco. la 3010915n a unos :=( mL. ¡«cr el “todo atraer]!!!

se antic-ne aproxinacïnmente un ¿amp de alex-¡eno Nata por cada

kilogram de pol“: 1:12!al; ei del alerpnr. bruto obtenido ¡e

hace sanaeoluciñn el 1,9?se ha concentrado lo“; g. de materia

prima en 10.3a). e “a una: 4 veces mis que pu los “todos oo­

mnes. [391alex-gane crudo ee obtiene aproximadamente 0,1 g. por

cada. gramo de alergeno ¡Matt-(pc: cada 100:) g. ria polvo inicial).

Cazael alergeno crudo puede ¡alumna-¡ru en e: value: desee­

dc, sl se 118m pct ejemplo e 1 al. se obtiene una concentración

43a veces mayor que por los métodos comes.

Preeieuzente el haber podido poner de manifiesto re­

cien ¡nara al renónano de inhibición 06 atribuye, en parte, ¡1

luto de ¡largenos de ¡1ta eaneentrmién.m al presente trabajo se observó inhibición por ex­

tracto ¡ingenioso de polvo de habitación preperado según mther­

1mm pero el fenómenose manifiesta independientemente del ne­

054­

todo empleadoon 1a obturación; tablón ¡o realizaron prueba de

Inhibición wn extracto obtenido según ol mundo do 3001104).

La“cnica «picada porfiiningtm, sunnn y ¡m­an tiene comoneonmionte principnl 01 tiemporequerido pa­ra cada dotnminación. La bibliografía consultada sobre Meni­

cas de] elth de inhi bici!“ da aglutinaoión de ¡lóbulos rojos(1,2,4) adolecedel ¡una deheto. Para echan" tal inconv­niente no hicieron nun-rosas prmbns. m las reaccion“ ¡oroló­gieaa deben emsidomrna dns etapas: or Ja primera ocurra la

unión específica entre mtfgenr»y animar-pq Ja gonna. pex-1­te visualizar 1a nación, pudiendoentonces observan prod­pitación, aglutinambn. lisis, etc.- Vientras la primeraOtapaocur'e con enmendar rapidez, 1a sagrada fue???)llegar a sar la:

Innata. Parra¡mráarrïria se ticioror. naa "rie ¿a ensayos varian­

dz:las condiciones físicas rasta Inga: a le. técnica. uploads,que permitió acortar e}. tien-¡o mamario para ends determinación.

Ia bibliografia en 91.911,11aconseja obtener los tu­

bos transcurrió“ 6.o:horas¿e "(ainda la mula, e.tomrrtura-lthifflt'. tal ¡»votación tv! amparada ysr experienciashechas ¿,1noreste, en 1m-ccfln n vw'íaron :1 tinpo y 1ateqernura de incubación.­

ï.a “cnica que 0.:;104la cutrii‘ugaeión on la dotar­“nación del grupo sanguíneo está ampliwon‘mditundidail"). La«tunninuión dal título aglutinante do en.suero n abr-twindl­dianto tal procedimiento. Znal prosonta trabajo no probaron

distintos tianpcs y «Incidentes de canarimgaeión, hasta alop­tar los dofinitivon. D. las experiencias reglas-ias se conclu­

-56­

76 quo, trmaenrridos los 15 cientos de incubación o 37130.,has­ta canina: loc tubos durante 1 ¡innato a 1000-1830revolucio­

nes por ¡into pan podar “actuar la lectura al oiorooeocio

15 nino?“ más tardo. ¡Mante 031.0 lapso los hubo: quedan o tom­

peraturaahbionte (16-20 00.). Contal técnica ol Homo do cado

dowruinaeión se racimo on na. do una.hora y nadia. Si la lectu­

ra so antoni“ deapuéo.de varias horas de ¿mu-1mm!“ los tubos,

cms-HW mmtúnmloa oa. la heladera, bajo riesgo, on caso con­

trario, de casa-rra resultan“ falsos.­¿aespeuto del ordon ue agregado do los componentes,

las pwzmzcianas {unauaeuáüos son: evitar 1a unión de glóbulos,

y suero ..n:.r;s del “rozando di inhi Dina y agregar alergono di­

recímmzsíe sobre los glóbulos, ya :uo esta puede ser cuasi do

rent-lisis. ’¿1:runn am agregado adoptado (glóbulos-solución fi­

siológica-alcryoo-ouaI-w, se eligió por comodidad.Sir. abar­

go aa más al: “¿.1th agregar los glóbulos al final“ mero-¡lor­

¡emm-¿9111215:i'i siolñgieu-¿lóbulos-h El objeto es evitar 1oconcentraciones locúos aleman: ce onorohoneontraoioneo 010­

V3549¿e ¿lábuloo no anota) que pueden producirse cuando ca­

do ect; oc diluciün do Goto a‘NgMa atraviesn la ¡01618 (16­

balooo-soluciónrioiilógiea-nlergouo. Este omar: es particular­

mente eonwnilnte en 01 cano do trabajar con moros poco dilui­dos.

ha los resultados obtenidos m las experiencia. ton­diaiazooo aclarar al ¡comino de la reacción do inhibición do

1a iooaglu ¿mación de glóbulos, se desprende que dicho ¡comio-v

no Xa'ú‘al'eser ¿Lama espacio do marcación entre la inhibina.

c“­

y lu aglutina“ del antro, comolo ¡(un 1a cuprobuflnde quo la. Cantidadda mulas necesaria para "1 tar 1a ¡glau­nación no da-p-cndo de h eonmtruión de ¡lóbulos y al, y on n­

Iuclón “roots, de la de suero; ¡dais no comprobóque los ¡16­bnlos no adscrita inhibinn. Xnha sido donoriptn 1‘ Bagua.quieioa entre 01 Alu-¡uno do polvo do habitación y la sustan­

cia específica A dal grupo annalu“) (a). semejanzaque pare­

ce extenderse tub“: al cupo analógico, con la probable eo­ulstone‘ia de las "¡vecindad-s Ay B on un misao ¡start-1,

puesto que 01 podar inhihiteria ¡o ¡unificada front. a añostip-os do glóbulos. DeIn exporicndu detalladas en al cuadro

VIII y punto agualos titulos de inhibición "m ¡IME misiónen 1a ¡cuela reepqnzo de los titulm ¿o 3o.: suena aislados, so

«aprenda que ariba: especificidades mamaria) finde-endicntnn­to, lo mal ¡avere que quiafi han dos ¡n-ztd'wias (una con cada.

Ospedflddm) on 01 derecho. la CM;€-lïl‘uFree. estar reforza­da por 01 hecho de quo el pode-r tnhi Murio front! a ¿lóbulos

A y B no es 01 mismopura un autoría: daddswro y dononofllo}.

.rospoeto de Inn dciorrinacinfia binlfzgicu «¡actuan-as.no deja constancia de la ¡struts vincular! ¿z anomtrafia antrola pros-neta de actividad biolñgsca y de {cdt-Tinducen-1o, nohallados. emioguldo en ningún caso «para una do otro. Mi lo¡asuman lu dota-lindaa": do aho- tipoa realizadas conlasdistinta fracciones obtenidas durante la extracción del alergonoy durante los distintos tratnicntol quimicosa quo no lo suotió.Estes tratamientos a la vu unieron, respecto de la. sustituciónquimica de 1a inhibina, que no ¡o trata de una proteína típica

pnunoo. “mi pormill delcaloron¡odio“¡o n .­tbuao, ni pct chato do ácidostipico. ¿cadenas-¡tn docantadapub“...­

VII-WI)- (¡odescribe una “¡mica para determinar la. inhibicifm de

8)­

ia inoqintinación do ¡Etnica rojo: banano:por extractosalex-¡inician que significa una mejora "¡gesto e. 11s nt.­fianzch “¡captan un la bibliogmfía.

SB

OC

asu-uf; al ¡anemia-o de la inhibición onoontrindon quetrata ¿a am. interacción entre ha aglutininu del suero

y la inhibinu, (¡accionada poh\la

fl. “Y

¡i

b)

ui sta 3.1.-.relación lia-a1 antro 1a. concentración e. in­

hibiaa y 145disminución del título aglutina“. del suero.1;: ¿lámina no intoniuon on in reacciónni moani:'.'..ibina.

, 1.-.muii; aa .icaaglutina los glóbulos qlutinucoa nise fue: n ellos.5;!acnplenento no influyo.

' n: :w ¿»sarta smato 442.733.

. la iaaihina qucaa 2.1al achnnudntu, tanto On1a una deinhibición comoen ia una“ dond. hay aglutinuión.

la inhibina manifiesta eaweii’iciddu Ay B.

sunt-min inhihina o. comporta en 1a siguiente manera:

a: tormentakloí rf‘iuio 01 edentuionto a 100 gradosen ao ue n acuosacontigraüoayy 4 556c. ox; aoluciün satánica 76}.

no precipita par acción de los kilos trieloroao‘tiw nipi 816.0.

O) precipita por unión del ¡oido fostotúnsaiieo, dal mt.­

to ¡hito de pla-o en solución dcmónea, ¡o IOpll’l.do1a solución saturada con sulfato de mania, pndpuapor adición a. ¡lu-hn potásico.

0- rn todos .Loacasos en que su aprobó pudor inhibitorio, u

conatatñ la. prOIlncil de anti-uuu! oiológlca c1 01 agusto,

no habiamos loa-ado la separación de amb por nina-no de

loscitadosOlplfladoa.- jiji.

VIII-mmm_....____._

1- Boyú.¿?unïamnta la of law;n—.-1-an.“¿-Karl ¡amanteinrrp‘rhg spacihi-r‘lty a? estímagieal mantiene.

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Summit-ion? 2:..1953.

17- 3.:‘=.w1omr.-An.ionrml o! aan-m of cunda-072.11.14(1946).

TITULO

I- ¡“refinaciónIl-üjoto delmata trabajonzwn ornamental

I'­

I-Obtenoién del. ¡Morgana

Mahmlmuifin do La Inhibición do la ¡sangran­

nnclón do cubanos rojo,Error del ¡{todorumano de h "¡Galánl-Bstudlo de 1a Intranet: do la cantidad de 316m¡Mahoma entre santo o InhimeS-Estudlo de la inn-Llama da! mnshnonto

«Estats de un posibl- ofecto Damas-íustrlbnoián de h inhibir“; en el states:­

A-En la zona de inhiblolán

n-E-‘nu som donde hay aglatmción

Matlab ds.»ata posible rentabilidad d» la ¡silu­umcifin por LI ivnhibinl

7-2.! inhibina sr se tu. a los glóbulos!“tintados231.591.421.521entre las ¡gl-¿unha- y La inhibir}:

tación do ¡gúntna físicos y quince! sabre la inhib.l-¿alontamlcnto en min cotvínioa 75*»;

a-Tratanionto con ¿ci-3:; trio, laroaoátic";

a-Trousuenco con ácida pícrico

4-?ratanienta con ¡c154 fosrzatdmgstlco

S-Tratamje2ta con alumbra peticioa

¡ss-Frontvlpiuelón pa"? Sulfato dr: ¡nur/,16

PAGE“

OGG

TITULO

7-Tratanlento con ¡estate b‘oioo de planon-numtónVII-Coneluaionnl

VIII-Bibliografía

mi

PQGIBA

48

alGB

60

Esto trabajo tu! toalla-do en confiacon ol señor annual

¿113t01n,h¡bidnñoao dlvláido on dos:

I)antudio do la ¡Galán inhibitorin de los extractya alergínleno

¡obra 1a isoagIJtinaoiñn da glfibu os rojws han-naa,

Iï)ïatudlo de 1. 00016ninhibttmrla de los extractaa ¡l'rgúnieassobre la isaoglutinneign ¿e glïbglas fajas thanos.rnaib1e fixtu­

dn de "“S¡JG d" 01°?g0148 (tesis a prwaontnr par el ¿1.3.2119tnin).

a ‘os efectos de ajustarse a Lasdispnsicl naa estatutaria: vlgnn­taz en za FJCJItad á. fl 18195¡ract83.ïí“1ens y Hátiril.‘ de laJDIVEPBIüad Ce BJGGJSAisz.