Concentracin inhibitoria mnimaDe Wikipedia, la enciclopedia libreEnmicrobiologa,la concentracin mnima inhibitoria(MIC) es la ms bajaconcentracinde unantimicrobianoque inhibe el visibleel crecimientode unmicroorganismodespus de la incubacin durante toda la noche.Concentraciones inhibitorias mnimas son importantes en los laboratorios de diagnstico para confirmar la resistencia de los microorganismos a un agente antimicrobiano y tambin para controlar la actividad de nuevos agentes antimicrobianos.[1]Un MIC se considera generalmente como la medicin de laboratorio ms bsico de la actividad de un agente antimicrobiano contra un organismo.[2]Contenido[ocultar]1. 1Determinacin2. 2Significado clnico3. 3Vase tambin4. 4Referencias5. 5Enlaces externosDeterminacin[edit]MIC de un antibitico est determinada por usando el siguiente procedimiento:[1]1. Preparacin de la solucin madre de antibiticos2. Preparacin de la serie de diluciones de antibiticos3. Preparacin de placas de dilucin de agar4. Preparacin del inculo5. Inoculacin6. Incubacin7. Lectura e interpretacin de los resultadosPases de ingresos medios se pueden determinar mediante mtodos de dilucin en agar o caldo normalmente siguiendo las directrices de un rgano de referencia, como elCLSI,BSACoEUCAST.Hay varios mtodos comerciales disponibles, incluyendo las tiras de Etest bien establecidos y el mtodo Oxoid MICEvaluator recientemente lanzado.El sistema Etest comprende un gradiente de concentracin predefinida y continuo de diferentes agentes antimicrobianos, que cuando se aplica a las placas de agar inoculadas e incubadas, crear elipses de inhibicin microbiana.[1]El MIC es determinado, donde la elipse de inhibicin se cruza la avenida principal, y es fcilmente leer la escala de lectura MIC en la tira.[2]Significado clnico[editar]Clnicamente, las concentraciones inhibitorias mnimas se utilizan no slo para determinar la cantidad de antibitico que recibir el paciente, sino tambin el tipo de antibitico utilizado, lo que a su vez reduce la oportunidad de quela resistencia microbianaa los antibiticos especficos.La aplicacin de la prueba de CIM para un nmero de cepas bacterianas en la misma especie proporciona una estimacin de la concentracin que inhibe el 50% (MIC50) y 90% (MIC90) de los aislados bacterianos y puede indicar los cambios en la susceptibilidad de las poblaciones de bacterias a los antibiticos.[3]En la actualidad, hay unos cuantos, bases de datos de CIM de libre acceso basados en la web.Vase tambin[editar] Agente bacteriostticoRegla general menor es el nmero (concentracin) que le da una mejor cobertura. MBC(Bactericida Mnima Concentracin)Referencias[editar]1. ^Ir a:unbAndrews, JM (1 de julio de 2001)."La determinacin de las concentraciones inhibitorias mnimas".Journal of Antimicrobial Chemotherapy48(Suppl 1): 5-16.doi:10.1093/jac/48.suppl_1.5.PMID11420333.2. Salta hacia arriba^Turnidge JD, Ferraro MJ, Jorgensen JH (2003) Mtodos de prueba de susceptibilidad: Consideraciones Generales.En PR Murray, EJ Baron, JH Jorgensen, MA Pfaller, RH Yolken.Manual of Clinical Microbiology.Octavo Ed.Washington.American Society of Clinical Microbiology.p 1103ISBN 1-55581-255-43. Salta hacia arriba^Davison, HC; baja, JC; Woolhouse, ME (diciembre de 2000)."Qu es la resistencia a los antibiticos y cmo podemos medirlo?".Tendencias en Microbiologa8(12):. 554-9PMID11115751.Enlaces externos[editar] MIC Base de datos en lneaConceptos enFarmacologa

Farmacocintica ADME:Absorcin Distribucin Metabolismo La excrecin(Liquidacin) La dosis de carga El volumen de distribucin(inicial) Tasa de infusin Compartimiento Bioequivalencia Biodisponibilidad El inicio de accin Vida media biolgica Unin a protenas plasmticas ndice teraputico(LD50/ED50)

Farmacodinamia Toxicidad(Neurotoxicology) Relacin dosis-respuesta(eficacia,potencia) Farmacodinamia antimicrobianos:la concentracin mnima inhibitoria/bacteriosttica Mnima bactericida concentracin/Bactericida

El agonismo yantagonismo Agonista:agonista inverso Agonista Irreversible Agonista parcial Superagonista Agonista fisiolgico Antagonista:antagonista competitivo Antagonista irreversible Antagonista fisiolgico Otros:Encuadernacin Afinidad Selectividad de unin Selectividad funcional

Otro La tolerancia:Taquifilaxia Resistencia a los medicamentos:Resistencia a los antibiticos Resistencia mltiple de drogas

Descubrimiento de frmacosestrategias Farmacologa clsica Farmacologa inversa

Relacionadoscampos / subcampos Farmacogentica Farmacogenmica Neuropsicofarmacologa(Neurofarmacologa,Psicofarmacologa)

Categoras: Trminos Microbiologa

irby-Bauer disco Difusin Protocolo de prueba de susceptibilidad

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Creado: Martes, 08 de diciembre 2009

ltima actualizacin: Lunes, 01 de abril 2013

Autor Ene Hudzicki

InformacinHistoria

La publicacin de la penicilina por Alexander Fleming en 1928 es un hito en la historia de la medicina.Como se descubrieron compuestos ms antimicrobianos, se predijo que las enfermedades infecciosas seran eliminados a travs de la utilizacin de estos antimicrobianos (7).Desafortunadamente, el desarrollo de la resistencia bacteriana a estos antimicrobianos disminuye rpidamente este optimismo y dio lugar a la necesidad de los mdicos para solicitar el laboratorio de microbiologa para probar patgeno de un paciente frente a diversas concentraciones de un antimicrobiano dado para determinar la susceptibilidad o resistencia a ese frmaco.El mtodo original de la determinacin de la susceptibilidad a los antimicrobianos se basa en mtodos de dilucin de caldo (5, 7), que aunque sigue siendo el estndar de oro hoy en da, son mucho tiempo para llevar a cabo.Esto llev al desarrollo de un procedimiento de difusin en disco para la determinacin de la susceptibilidad de las bacterias a los antimicrobianos.

A principios de la dcada de 1950, la mayora de los laboratorios de microbiologa clnica en los Estados Unidos haban adoptado el mtodo de difusin en disco para la determinacin de la susceptibilidad de las bacterias a los antimicrobianos.Cada laboratorio modific el procedimiento para satisfacer sus propias necesidades, que incluan el uso de diferentes tipos de medios de comunicacin, la concentracin del inculo, tiempo de incubacin, la temperatura de incubacin, y la concentracin del compuesto antimicrobiano.Interpretacin de la susceptibilidad y la resistencia se basa slo en la presencia o ausencia de una zona de inhibicin que rodea el disco, y dos o tres concentraciones diferentes de la misma antimicrobiana fueron probados rutinariamente contra el patgeno (1).Muchos investigadores publicaron variaciones para el procedimiento que resulta en mltiples protocolos que dio lugar a una gran confusin (1).En 1956, WMM Kirby y sus colegas en la Universidad de Washington Escuela de Medicina y el Hospital del Condado de King propusieron un mtodo nico disco para las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos (6).

La falta de estandarizacin para la determinacin de la susceptibilidad bacteriana contina siendo un problema en toda a principios de 1960.Kirby y su colega, AW Bauer, ampliamente revisaron la literatura pruebas de sensibilidad.Se consolidan y actualizan todas las descripciones anteriores de la tcnica de difusin en disco y publicaron sus resultados (2).Esta publicacin llev a la Organizacin Mundial de la Salud para formar un comit en 1961 para sentar las bases para el desarrollo de un procedimiento estandarizado para la prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos solo disco (7).El resultado fue un procedimiento estandarizado para la prueba de difusin en disco, en adelante llamada la prueba de difusin en disco de Kirby-Bauer (2).

Actualmente, el Laboratorio Clnico Standards Institute (CLSI) es responsable de la actualizacin y modificacin del procedimiento original de Kirby y Bauer a travs un proceso de consenso global.Esto asegura la uniformidad de la tcnica y la reproducibilidad de los resultados como patgenos desarrollen nuevos mecanismos de resistencia y nuevos antimicrobianos se han desarrollado para luchar contra estos organismos.Directrices interpretativas para los tamaos de la zona se incluyen en sus publicaciones (3).La publicacin CLSI, normas de funcionamiento de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos de disco;. Aprobada la norma novena edicin, representa el estndar para los laboratorios clnicos que realizan pruebas de sensibilidad de hoy

Propsito

El propsito de la prueba de difusin en disco de Kirby-Bauer es determinar la sensibilidad o resistencia de los patgenos aerobios y las bacterias anaerobias facultativas a diversos compuestos antimicrobianos con el fin de ayudar a un mdico en la seleccin de opciones de tratamiento para sus pacientes.El organismo patgeno se cultiva en agar de Mueller-Hinton en presencia de varios discos de papel de filtro impregnado antimicrobianos.La presencia o ausencia de crecimiento alrededor de los discos es una medida indirecta de la capacidad de ese compuesto para inhibir ese organismo.

Teora

Determinacin de la resistencia bacteriana a los antimicrobianos es una parte importante de la gestin de infecciones en los pacientes.El mtodo de difusin en disco de Kirby y Bauer ha sido estandarizada y es una alternativa viable a los mtodos de dilucin de caldo para laboratorios y sin los recursos para utilizar los mtodos automatizados nuevas para la prueba de microdilucin en caldo.

Cuando un disco de papel de filtro de 6 mm impregnado con una concentracin conocida de un compuesto antimicrobiano se coloca sobre una placa de agar de Mueller-Hinton (MH), de inmediato el agua se absorbe en el disco desde el agar.El antimicrobiana comienza a difundirse en el agar circundante.La velocidad de difusin a travs del agar no es tan rpida como la velocidad de extraccin del agente antimicrobiano fuera del disco, por lo tanto, la concentracin de los antimicrobianos es ms alta ms cercana a la del disco y una reduccin logartmica de la concentracin se produce como la distancia desde los aumentos de disco ( 7).La velocidad de difusin del agente antimicrobiano a travs del agar es dependiente de las propiedades de difusin y solubilidad de la droga en agar MH (2) y el peso molecular del compuesto antimicrobiano.Las molculas ms grandes se difundirn a un ritmo ms lento que los compuestos de menor peso molecular.Estos factores, en combinacin, dan como resultado en cada antimicrobiano que tiene un tamao nica zona de punto de interrupcin que indica la susceptibilidad a la que el compuesto antimicrobiano.

Si la placa de agar se ha inoculado con una suspensin del patgeno a ensayar antes de la colocacin de los discos sobre la superficie de agar, crecimiento simultneo de las bacterias y la difusin de los compuestos antimicrobianos se produce.El crecimiento tiene lugar en presencia de un compuesto antimicrobiano cuando las bacterias alcanzan una masa crtica y pueden dominar a los efectos inhibidores del compuesto antimicrobiano.El tiempo estimado de una suspensin bacteriana a alcanzar la masa crtica es de 4 a 10 horas para los patgenos ms comnmente recuperados, pero es caracterstico de cada especie, y la influencia de los medios de comunicacin y la temperatura de incubacin (7).El tamao de la zona de inhibicin del crecimiento se ve influenciada por la profundidad del agar, ya que el antimicrobiano se difunde en tres dimensiones, de este modo una capa superficial de agar producir una zona ms grande de la inhibicin de una capa ms profunda.

El punto en el que la masa crtica que se alcanza es demostrado por un crculo bien delimitada del crecimiento bacteriano alrededor del disco.La concentracin del compuesto antimicrobiano en este margen se llama la concentracin crtica y es aproximadamente igual a la concentracin inhibitoria mnima obtenida en las pruebas de susceptibilidad de dilucin en caldo.

tamao de la zona observada en un ensayo de difusin en disco no tiene ningn significado en s misma (7).La interpretacin de la resistencia y susceptibilidad a los agentes antimicrobianos se determina a travs de pruebas in vivo de sangre y orina para calcular el nivel obtenible de un antimicrobiano dado que resulta en la resolucin de una infeccin.Esta informacin se correlaciona con tamaos de zona resultantes en las normas de interpretacin.Las normas de interpretacin actuales se pueden encontrar en las Normas de Laboratorio Clnico Standards Institute para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos con discos: Aprobado Normas novena edicin (3).

RECETALa solucin salina estril en tubos de 2 ml0.5 estndar McFarlandTarjeta WickerhamPlacas de agar de Mueller-Hinton, 100 mm o 150 mmCalibrador o una reglaDiscos de antibiticosbFrcepsDispensador de disco con antibiticos (opcional)18 - a 24-horas de edad cultivo puro del microorganismo a ensayarunVrticeHisopos estrilesLazo o aguja de inoculacinBact incinerador o mechero BunsenAlmohadillas de alcohol o alcohol isoproplico en un tubo35 C a 37 C incubadora no-CO2

unosorganismos recomendados para fines de control de calidad son Staphylococcus aureus ATCC 25923 (nivel de bioseguridad (BSL) 2), Escherichia coli ATCC 25922 (BSL 1) y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (BSL 2) (www.atcc.org), como la zona Se sabe de la inhibicin de estos organismos.Debido a que los tamaos de la zona son conocidos por estos organismos, que se recomiendan para su uso en el entorno educativo, aunque el uso de incgnitas tambin debe ser incorporado en la experiencia educativa.Para las pruebas de control de calidad, el tamao de la zona para estos tres organismos se pueden encontrar en el prospecto de cualquier disco antimicrobiano que usted compra.

bLa seleccin de los antimicrobianos se basa en el tipo de organismo que se est probando y el origen de la cepa aislada (sangre, orina, heridas , etc).Vea las Tablas de Normas de Interpretacin de antimicrobianos sugeridos para utilizar en este ejercicio.

Notas adicionales

Mueller-Hinton agar

agar MH se considera el mejor medio que se utilizar para las pruebas de sensibilidad de rutina de bacterias no exigentes por las siguientes razones:

Muestra aceptable de lote a lote reproducibilidad de las pruebas de sensibilidad Es baja en la sulfonamida, trimetoprim, y los inhibidores de la tetraciclina Es compatible con un crecimiento satisfactorio de la mayora de los patgenos no exigentes Una gran cantidad de datos y la experiencia que se ha recogido en relacin con las pruebas de sensibilidad realizadas con este medio (6).

Tenga en cuenta que el uso de otros de agar Mueller-Hinton medios puede dar lugar a resultados errneos.Tambin tenga en cuenta que slo las bacterias aerobias o facultativas que crecen bien en agar MH sin suplementos deben ser probados usando este protocolo.Organismos exigentes requieren agar MH suplementado con nutrientes adicionales y requieren que la modificacin de este protocolo se har.Ni los suplementos ni la modificacin de procedimientos se discuten en este protocolo bsico.

agar MH se puede comprar en forma de placas de agar preparados de Remel (Lenexa, KS), BD BBL (Franklin Lakes, NJ), o cualquier otro proveedor de placas de agar preparadas.Siga las recomendaciones del fabricante para el almacenamiento de las placas preparadas.Agar MH tambin se puede preparar a partir de medios deshidratados disponibles de compaas tales como Remel, BD BBL, o cualquier otro proveedor de medios deshidratados.Asegrese de preparar los medios de comunicacin de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Frmula de Mueller-Hinton agar por litro de agua purificada (4)Carne de res, infusin de300,0 g

cido de Casamino, tcnico17,5 g

Almidn1,5 g

Agar17,0 g

Suspender los componentes enumerados anteriormente en 1 litro de agua purificada.Mezclar bien.Calor con agitacin frecuente y hervir durante 1 minuto para disolver completamente los componentes.Autoclave a 121 C durante 15 minutos.Dispense si lo deseas.Dejar solidificar a temperatura ambiente, luego se almacene a 4-8 C.Agar Mueller-Hinton es estable durante aproximadamente 70 das (por los Servicios Tcnicos Remel, 1 de septiembre de 2009) a partir de la fecha de elaboracin.Cada laboratorio debera comprobar la calidad y la funcionalidad de cada lote de medios preparados probando cepas conocidas de organismos en contra de cada compuesto antimicrobiano que se utiliza como fecha de caducidad de 70 das enfoques.

Si usted prepara las placas de agar MH de medios deshidratados, las placas deben se vierte a una profundidad de 4 mm (aproximadamente 25 ml de agar lquido para placas de 100 mm y 60 ml de agar lquido para placas de 150 mm, pero en cualquier caso a una profundidad medida de 4 mm).Las placas que son demasiado superficiales producirn resultados susceptibles falsas como el compuesto antimicrobiano se difundirn ms de lo que debera, la creacin de grandes zonas de inhibicin.Por el contrario, las placas se vierte a una profundidad> 4 mm se traducir en resultados resistentes falsos. pH del agar MH debe estar entre 7,2 y 7,4, a temperatura ambiente despus de la solidificacin y debe ser probada cuando se prepara a los medios primero.Si el pH es 7,4, pueden producirse los resultados opuestos.

timidina o timina excesivo pueden revertir los efectos inhibidores de sulfonamidas y trimetoprim resultante en zonas ms pequeas y menos distintos de la inhibicin, o no hay zonas en todos. La concentracin incorrecta de cationes divalentes (calcio y magnesio) afectarn a los resultados de las pruebas de aminoglicsidos y tetraciclina frente a Pseudomonas aeruginosa.El exceso de concentracin de cationes se traducir en tamaos zona reducida y baja concentracin aumentar tamaos de zona.El exceso de calcio aumentar el tamao de la zona de P. aeruginosa en contra de la daptomicina.El exceso de iones de zinc pueden reducir el tamao de la zona de los carbapenmicos frente a P. aeruginosa.

agar MH debe ser probado con cepas conocidas del organismo por lo menos semanalmente con el fin de verificar que los medios de comunicacin y los discos estn funcionando como se esperaba.

discos de susceptibilidad antibitica

discos antimicrobianos pueden ser comprado a cualquiera de los proveedores de renombre, como Remel o BD BBL.Se envasan en cartuchos de resorte que contienen 25 o 50 discos y se pueden pedir como cartuchos individuales o en paquetes de 10 cartuchos.El almacenamiento adecuado de estos discos es esencial para obtener resultados reproducibles.

cartuchos sellados que contienen discos de papel preparados comercialmente deben ser almacenados en cualquiera de 8 C o congeladas a -14 C en un congelador sin auto-descongelacin.Permitir que los discos lleguen a temperatura ambiente antes de la eliminacin de los envases de plstico protector.Una vez abierto, guardar los cartuchos en un contenedor de almacenamiento que contiene desecante para no ms de 1 semana.

dispensadores de disco semiautomticas estn disponibles de compaas como Remel y BD BBL.S consciente de que los cartuchos de disco de una empresa pueden no caber el dispensador de otra empresa.

estndar McFarland

McFarland normas son suspensiones de sulfato de bario o bien partculas de ltex que permiten la comparacin visual de la densidad bacteriana (Fig. 1).Estndares preparados comercialmente estn disponibles para la compra de empresas como Remel o BD BBL.Estos a menudo incluyen una tarjeta Wickerham, que es una pequea tarjeta que contiene las lneas negras paralelas.Un patrn de McFarland 0,5 es equivalente a una suspensin bacteriana que contiene entre 1 x 108 y 2 x 108 UFC / ml de E. coli.Un patrn 0,5 de McFarland se puede preparar en la casa como se describe a continuacin.1.Aadir una alcuota de 0,5 ml de un 0,048 moles / litro de BaCl2 (1,175% peso / volumen de BaCl2 2H20) a 99,5 ml de 0,18 mol / litro de H2SO4 (1% vol / vol) con agitacin constante para mantener una suspensin.2.Verificar la densidad correcta de la norma de turbidez mediante la medicin de la absorbancia con un espectrofotmetro con un recorrido de 1 cm de la luz y la cubeta emparejado.La absorbancia a 625 nm debe ser 0,08 a 0,13 para el estndar de McFarland 0,5.3.Transferir la suspensin de sulfato de bario en 4 - a alcuotas de 6 ml en tubos con tapa de rosca del mismo tamao que los utilizados en la normalizacin de los inculos bacterianos.4.Sellar hermticamente los tubos y almacenar en la oscuridad a temperatura ambiente.

Uso del estndar de McFarland en el procedimiento de Kirby-Bauer.1.Antes de usar, agitar vigorosamente el estndar de sulfato de bario en un vrtex mecnico e inspeccionar para un aspecto uniformemente turbio.Vuelva a colocar la norma si aparecen partculas grandes.Si el uso de un estndar compuesto por partculas de ltex, se mezcla por inversin suave, no en un mezclador de vrtice.

2.A medida que el estudiante suma colonias de bacterias a la solucin salina en la "preparacin del inculo" paso del procedimiento, l o ella debe comparar la suspensin resultante con el estndar McFarland.Esto se hace mediante la celebracin tanto de la norma y el lado del tubo del inculo a lado y no ms de 1 pulgada de la cara de la tarjeta Wickerham (con luz adecuada est presente) y la comparacin de la apariencia de las lneas a travs de ambas suspensiones.No mantenga los tubos a ras contra la tarjeta.Si la suspensin bacteriana aparece ms claro que el patrn de McFarland 0,5, ms organismos deben ser aadidos al tubo de la placa de cultivo.Si la suspensin aparece ms denso que el patrn de McFarland 0,5, solucin salina adicional debe ser aadido al tubo de inculo con el fin de diluir la suspensin de la densidad apropiada.En algunos casos, puede ser ms fcil para empezar de nuevo en lugar de continuar para diluir una suspensin bacteriana que es demasiado denso para su uso.

La figura.1.Estndares de McFarland (de izquierda a derecha) 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, situados en frente de una tarjeta Wickerham.Estndares McFarland se utilizan para preparar suspensiones bacterianas a una turbidez especificado.En el protocolo de ensayo de susceptibilidad de difusin en disco de Kirby-Bauer, la suspensin bacteriana del organismo a ensayar debe ser equivalente a la estndar de McFarland 0,5.PROTOCOLO

Preparacin de placa de Mueller-Hinton

1.Deje una placa de agar MH (uno por cada organismo para ser probado) a la temperatura ambiente.Es preferible permitir que las placas permanezcan en el manguito de plstico mientras se calientan para minimizar la condensacin.

2.Si la superficie del agar tiene lquido presente visible, ajuste la placa invertida, abierta en la tapa para permitir que el exceso de lquido escurra fuera de la superficie de agar y se evapore.Las placas pueden ser colocados en una incubadora de 35 C o en una campana de flujo laminar a temperatura ambiente hasta seco (normalmente de 10 a 30 minutos).

3.Apropiadamente etiquetar cada placa de agar MH para cada organismo a ensayar.

Preparacin del inculo

1.El uso de un asa de inoculacin estril o aguja, tocar cuatro o cinco colonias aisladas del organismo a ensayar.

2.Suspender el organismo en 2 ml de solucin salina estril.

3.Vortex el tubo de solucin salina para crear una suspensin uniforme.

4.Ajustar la turbidez de esta suspensin a un estndar McFarland 0,5 mediante la adicin de ms organismo si la suspensin es demasiado clara o diluir con solucin salina estril si la suspensin es demasiado pesado.

5.Utilizar dicha suspensin en los 15 minutos de preparacin.

Notas adicionales

inculo preparacin

Organismos a ensayar debe estar en la fase logartmica de crecimiento a fin de que los resultados sean vlidos.Se recomienda que las subculturas de los organismos a ensayar se hizo el da anterior.

Nunca use los extremos de la densidad de inculo.Nunca utilizar cultivos de caldo durante la noche sin diluir o otra inculos no estandarizada para inocular placas.

Si el organismo es difcil de suspender directamente en una suspensin uniforme, se debe utilizar el mtodo de crecimiento de la preparacin de los inculos.Sin embargo, los organismos recomendados que figuran en este procedimiento todos producen suspensiones suaves con poca dificultad.Ver el documento Instituto de Normas de Laboratorio auxiliar clnico (3) para el mtodo de procedimiento de crecimiento para la preparacin de los inculos, si es necesario.

Inoculacin de la placa de MH

1.Sumerja un hisopo estril en el tubo de inculo.

2.Girar la torunda contra el lado del tubo (por encima del nivel de lquido) utilizando una presin firme, para eliminar el exceso de lquido.El hisopo no debe ser empapado (fig. 2).

3.Inocular la superficie seca de una placa de agar MH rayando el hisopo tres veces sobre toda la superficie de agar; girar la placa de aproximadamente 60 grados cada vez para asegurar una distribucin uniforme del inculo (fig. 3).

4.Rim la placa con el hisopo para recoger el exceso de lquido (Fig. 4).

5.Deseche el hisopo en un recipiente adecuado.

6.Se deja la tapa entreabierta, permite la placa para sentarse a temperatura ambiente al menos 3 a 5 minutos, pero no ms de 15 minutos, para la superficie de la placa de agar se seque antes de proceder al siguiente paso.figura.2.Kirby-Bauer protocolo de la prueba de difusin en disco, la inoculacin de la placa de ensayo.Paso 2.Girar la torunda contra el lado del tubo mientras se aplica presin para eliminar el exceso de lquido de la torunda antes de la inoculacin de la placa.

La

B

La figura.3.Kirby-Bauer protocolo de la prueba de difusin en disco, la inoculacin de la placa de agar Mueller-Hinton.Paso 3.(A) Se inocula la placa con el organismo de prueba rayando el hisopo en un movimiento hacia atrs y hacia adelante muy juntos mientras se mueve a travs y hacia abajo la placa.Gire la placa de 60 y repita esta accin.Gire la placa de nuevo y repita la accin rayas.Esto asegura una distribucin uniforme de inculo que se traducir en un csped confluente de crecimiento.(B) Diagrama que ilustra el patrn del hisopo debe seguir, ya que se dibuja a travs de la placa.

La figura.4.Kirby-Bauer protocolo de la prueba de difusin en disco, la inoculacin de la placa de agar Mueller-Hinton.Paso 4.Despus de rayar la placa de agar Mueller-Hinton como se describe en el paso 3, el reborde de la placa con el hisopo ejecutando el hisopo por el borde de la totalidad de la placa para recoger cualquier exceso de inculo que puede haber sido salpicado cerca del borde.La flecha indica la ruta de acceso de la torunda.La colocacin de los discos de antibiticos

1.Coloque los discos antimicrobianos apropiados impregnado en la superficie del agar, utilizando frceps para dispensar cada uno de los discos antimicrobiano a la vez, o un dispensador de multidisco para dispensar varios discos a la vez.(Ver los pasos a. Travs de d. Para el uso del dispensador de discos mltiples o etapas e. Travs g. Para la colocacin disco individual con frceps.

una. Para utilizar un dispensador de multidisco, colocar la placa de agar MH inoculado en una superficie plana y quitar la tapa (fig. 5).

b. Coloque el dispensador sobre la placa de agar y presione firmemente el mbolo una vez para dispensar los discos sobre la superficie de la placa.

c. Levante el dispensador de la placa y el uso de pinzas esterilizadas por cualquiera de limpieza con una gasa con alcohol o llamas con alcohol isoproplico para tocar cada disco en el plato para asegurar un contacto completo con la superficie del agar. Esto se debe hacer antes de reemplazar la tapa de la placa de Petri que la electricidad esttica puede causar que los discos para reubicar a s mismos en el agar superficie o adherirse a la tapa (Fig. 6d).

d. No mueva un disco una vez que se ha puesto en contacto la superficie del agar incluso si el disco no est en la ubicacin adecuada, porque algunos de la droga comienza a difundirse inmediatamente al entrar en contacto con la agar.

correo. Para aadir discos uno a la vez a la placa de agar usando frceps, colocar la placa de MH en la plantilla (Fig.7) proporcionado en este procedimiento (Fig. 6a).Esterilizar los frceps limpindolas con una gasa con alcohol estril y permitir secar al aire o inmersin de las pinzas en alcohol y luego encender.

f.Usando las pinzas retire con cuidado un disco del cartucho (Fig. 6b).

g.Retire parcialmente la tapa de la placa de Petri.Coloque el disco en el plato sobre una de las manchas oscuras en la plantilla y presione suavemente el disco con las pinzas para asegurar el contacto completo con la superficie del agar.Vuelva a colocar la tapa para minimizar la exposicin de la superficie del agar a la habitacin de aire (Fig. 6c, d).

h.Siga colocando un disco a la vez sobre la superficie de agar hasta que todos los discos se han colocado como se indica en los pasos f.y g.anteriormente.

2.Una vez que todos los discos estn en su lugar, vuelva a colocar la tapa, invertir las placas, y colocarlos en una incubadora de aire de 35 C durante 16 a 18 horas.Cuando se prueba contra Staphylococcus oxacilina o vancomicina, o Enterococcus contra la vancomicina, incubar durante 24 horas antes de la lectura.La

B

C

La figura.5.Kirby-Bauer protocolo de la prueba de difusin en disco, la colocacin de discos de antibiticos utilizando un dispensador de discos automatizada.Paso 1, un.a travs d.Un dispensador de disco automtica se puede utilizar para colocar mltiples discos simultneamente en una placa de agar MH.() Selecciona el dispensador sobre la placa.(B) Coloque la palma de su mano en la parte superior del mango.(C) Presione firmemente y por completo para dispensar los discos.El mango cargado por resorte volver a la posicin original cuando se elimina la presin.La

B

C

D

La figura.6.Kirby-Bauer protocolo de la prueba de difusin en disco, la colocacin de discos de antibiticos utilizando frceps para colocar manualmente los discos.Paso 1, e.al h.Discos de antibiticos se pueden colocar manualmente en la placa de agar MH si se desea.(A) Colocar la placa de agar Mueller-Hinton sobre la plantilla en el disco.(B) Retire un disco del cartucho con unas pinzas que han sido esterilizadas.(C) Levante la tapa de la placa y colocar el disco sobre una de las marcas de posicionamiento.(D) Pulse el disco con las pinzas para asegurar el contacto completo con la superficie del agar.Vuelva a colocar la tapa de la placa entre los discos para minimizar la exposicin a los contaminantes transportados por el aire.

adicionales Notasde colocacin de disco

discos no deben colocarse a menos de 24 mm (centro a centro) en la placa de agar MH.Por lo general, no ms de 12 discos deben ser colocados en una placa de 150 mm o ms de 5 discos en una placa de 100 mm.Sin embargo, los dispensadores de disco semiautomticas tienen 16 y 8 discos, respectivamente, y no pueden mantener el centro recomendado 24 mm de separacin central.La plantilla proporcionada en este protocolo (Fig. 7) mantiene el centro recomendado 24 mm de espacio entre el centro y permite la colocacin de hasta 8 discos en el plato.Usted debe evitar la colocacin de discos cerca del borde de la placa como las zonas que no se ser totalmente redonda y puede ser difcil de medir.Cada disco debe ser presionado hacia abajo con pinzas para asegurar el contacto completo con la superficie del agar o formas zona irregular puede ocurrir.Si la superficie del agar se interrumpe de alguna manera (un disco que penetra en la superficie , lneas visibles presentes debido a la presin excesiva de la torunda contra la placa durante la inoculacin, etc) la forma de la zona puede verse afectada.Cuando imprima la plantilla para su uso en el laboratorio de microbiologa, asegrese de que el dimetro del crculo en el plantilla es del mismo tamao que las placas de agar Mueller-Hinton que se utilizan en el laboratorio (100 mm).El "reducir" o "agrandar" funcin en una fotocopiadora se puede utilizar para cambiar el tamao de la plantilla, si es necesario.Usted tambin puede hacer su propia plantilla dibujando un crculo alrededor de una placa de agar MH en una hoja de papel.Aadir las marcas de colocacin basados en el nmero de discos que va a utilizar en su sesin de laboratorio, el mantenimiento de los espacios recomendados como se indica ms arriba.Incubacin de las placas

se requiere un rango de temperatura de 35 C 2 C.

Tenga en cuenta que las temperaturas por encima de 35 C no puede permitir la deteccin de meticilino-resistente Staphylococcus.

No incubar las placas en el CO2, lo que disminuira el pH del agar y dar lugar a errores debido a un pH incorrecto de los medios de comunicacin.

Los resultados se pueden leer despus de 18 horas de incubacin a menos que se est probando contra Staphylococcus oxacilina o vancomicina, o Enterococcus contra la vancomicina.Lea los resultados para los otros discos antimicrobianos luego reincubate la placa para un total de 24 horas antes de la presentacin de informes a la vancomicina o la oxacilina.

La figura.7.Plantilla de colocacin de disco Manual de ocho discos en una placa de 100 mm.Coloque la placa de agar MH en la figura de arriba para que el borde de las lneas de planchas hasta con el crculo exterior.Retire la tapa de la placa y colocar un disco de antibiticos en cada crculo de color gris oscuro.Si se utilizan menos de ocho antibiticos, se pueden hacer ajustes a la separacin de los discos.Consulte la seccin "Informacin adicional" de colocacin de disco para obtener sugerencias para la impresin de esta plantilla.

Medicin de tamao de la zona

1.Despus de la incubacin, medir el tamao de la zona al milmetro ms cercano usando una regla o calibre; incluyen el dimetro del disco en la medicin (fig. 8, 9b).

2.Al medir dimetros de la zona, siempre redondear al milmetro.

3.Todas las mediciones se hacen con el ojo sin ayuda mientras ve la parte posterior de la placa de Petri.Sujete la placa de unos pocos centmetros por encima de un negro, superficie iluminada con la luz reflejada (Fig. 9a) nonreflecting.

4.Ver la placa mediante una lnea directa, vertical de la vista para evitar cualquier paralaje que pueden dar lugar a mala interpretacin.

5.Anote el tamao de la zona en la hoja de registro.

6.Si la colocacin del disco o el tamao de la zona no permite que usted lea el dimetro de la zona, mida desde el centro del disco hasta un punto de la circunferencia de la zona en la que una clara ventaja est presente (el radio) y multiplicar la medicin por 2 para determinar el dimetro (fig. 10).

7.Crecimiento hasta el borde del disco se puede informar como una zona de 0 mm.

8.Organismos como Proteus mirabilis, que enjambre, deber medirse de manera diferente que nonswarming organismos.Ignore el fino velo de enjambre y medir el margen exterior en una zona de otra manera obvia de inhibicin.

9., Colonias discretas distintas dentro de una zona evidente de inhibicin no deben ser considerados enjambre.Estas colonias son o bien organismos mutantes que son ms resistentes a la droga se est probando, o la cultura no era puro y que son un organismo diferente.Si se determina por pruebas repetidas que el fenmeno se repite, el organismo debe considerarse resistentes a ese frmaco.

La figura.8.La medicin de zonas de inhibicin.El sombreado gris representa un csped confluente de crecimiento bacteriano.El crculo blanco representa ausencia de crecimiento del organismo de ensayo.La

B

La figura.9.Kirby-Bauer protocolo de la prueba de difusin en disco, la medicin de tamaos de zona.(A) Con una regla o calibre medir cada zona a simple vista mientras ve la parte posterior de la placa de Petri.Sujete la placa de unos pocos centmetros por encima de un negro, superficie iluminada con la luz reflejada nonreflecting.(B) El tamao de la zona para esta combinacin-organismo antibitico es 26 mm.figura.10.Kirby-Bauer protocolo de difusin en disco de prueba, la medicin de tamaos de zona; un mtodo alternativo para la medicin de zonas.Si las zonas de los discos de antibiticos adyacentes se superponen, el dimetro de la zona se puede determinar midiendo el radio de la zona.Mida desde el centro del disco de antibitico a un punto en la circunferencia de la zona donde una clara ventaja est presente.Multiplicar esta medicin por 2 para determinar el dimetro de la zona de inhibicin.En este ejemplo, el radio de la zona es de 16 mm.Multiplicar esta medicin por 2 para determinar el tamao de la zona de 32 mm para esta combinacin-organismo antibitico.zona de medicin de los tamaosSi la placa se inocul correctamente y todas las dems condiciones eran correctas, las zonas de inhibicin deben ser uniformemente circular y habr un confluente csped de crecimiento.Si colonias individuales son evidentes en toda la placa, el inculo era demasiado ligero y la prueba debe repetirse.El margen de la zona se debe considerar el rea que no muestran un crecimiento obvio y visible que se puede detectar a simple vista.No utilice un dispositivo de aumento para observar zona de los bordes.Cuando la medicin de la zona de inhibicin para los organismos que pululan (por ejemplo, Proteus sp.), ignore el fino velo de un enjambre de crecimiento en una zona de otra manera obvia de inhibicin.Con trimetoprima y las sulfonamidas, antagonistas en el medio pueden permitir un ligero crecimiento, por lo tanto, no tener en cuenta un ligero crecimiento (20% o menos del csped de crecimiento) y medir el margen ms evidente para determinar el dimetro de la zona (3).Interpretacin y comunicacin de los resultados

1.Usando las directrices CLSI publicados, determinar la susceptibilidad o la resistencia del organismo a cada frmaco ensayado (Tablas 1, 2, 3).Tenga en cuenta que hay diferentes cartas en diversos organismos.Grficos abreviados especficos para los organismos propuestos por el autor y los discos de antimicrobianos de uso se proporcionan a continuacin.

2.Para cada medicamento, indique en la hoja de registro si el tamao de la zona es susceptible (S), intermedio (I) o resistentes (R) en base a la tabla de interpretacin.

3.Los resultados de la prueba de susceptibilidad de difusin en disco de Kirby-Bauer Slo se informan como sensible, intermedio, o resistente.Los tamaos de zona no se informa a los mdicos.

Discos de Antimicrobianos recomendados y Zona Interpretativa Tamaos (3)

Esta es una batera sugerido de discos para su uso en el entorno educativo, ya que minimiza los diferentes antimicrobianos que habra que comprar para poner a prueba los tres grupos de organismos .Los educadores pueden elegir otros medicamentos de las listas de xitos del CLSI, segn corresponda a su situacin.

TABLA 1.Normas interpretativas de dimetro Zona de especies de Staphylococcus (3)TABLA 2.Normas interpretativas de dimetro Zona para Pseudomonas aeruginosa y otros bacilos gramnegativos no fermentadores (3)

TABLA 3.Normas interpretativas de dimetro Zona de E. coli y otros bacilos gramnegativos entricos (3)SEGURIDAD

La ASM aboga por que los estudiantes deben demostrar con xito la capacidad de explicar y practicar tcnicas de seguridad en el laboratorio.Para ms informacin, lea la seccin de seguridad en el laboratorio de lasrecomendaciones del plan de estudios de ASM: Curso Introductorio en Microbiologay lasDirectrices para la Seguridad de la Biotecnologa en la enseanza de los Laboratorios.

REFERENCIAS

1.Bauer, AW, DM Perry y WMM Kirby.1959.Un disco de pruebas de sensibilidad a los antibiticos de estafilococos.Arch AMA.Intern.Med.104:208-216.2.Bauer, AW, WMM Kirby, JC Sherris y M. Turck. 1966.Las pruebas de sensibilidad a los antibiticos por un mtodo de un solo disco estandarizado.Am.J. Clin.Pathol.36:493-496.3.Instituto de Normas de Laboratorio Clnico. 2006.Normas de funcionamiento de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos de disco, Aprobado estndar 9th ed.Documento CLSI M2-A9.26:1.Clinical Laboratory Standards Institute, Wayne, PA.4.. Difco 1984.Difco manual, 10a ed.Difco Laboratories, Detroit, MI.5.Kirby, WMM, GM Yoshihara, KS Sundsted y. JH Warren1957.Utilidad clnica de un solo mtodo de disco para las pruebas de sensibilidad a los antibiticos.Los antibiticos Annu.1956-1957:892.6.Winn, Jr., W., et al.2006.Konemann del atlas de color y texto de diagnstico de microbiologa, 6 ed., P.945-1021.Lippencott Williams & Wilkins Publishers, Philadelphia, PA.7. Jorgensen, JH, y JD Turnidge.2007.mtodos de prueba de susceptibilidad: los mtodos de dilucin y de difusin por disco, p.1152-1172.En PR Murray, EJ Baron, JH Jorgensen, ML Landry, y MA Pfaller (ed.), Manual de microbiologa clnica, 9 ed.ASM Press, Washington, DC

REVISORES

Este recurso fue revisado por expertos en la Conferencia de ASM para Pregrado Educadores 2009.revisores participantes:

Farah BennaniFront Range Community College, Westminister, CO

Louise A. BrownFront Range Community College, Westminister, CO

Rebecca BuxtonUniversity de Utah, Salt Lake City, UT

Laura CathcartUniversidad de Maryland, College Park, College Park, MD

Michel J. CloutierSt.Louis Facultad de Farmacia, St. Louis, MO

Karen DaltonCommunity College del condado de Baltimore, Baltimore, MD

Kevin DixonOriental Central College, Union, MO

Cori Fata-Hartleyde la Universidad del Estado de Michigan, East Lansing, MI

Becky GrahamOhio Dominican University, Columbus, OH

Debora V. HarborCollege of Southern Nevada, Las Vegas, NV

Jeffrey HenriksenUniversidad de Bellevue, Bellevue, NE

Carol HurlburtLansing Community College, Lansing, MI

Mara IsazaCounty College de Morris, Dover, NJ

Ian JohnstonBethel University, St. Paul, MN

Jacqueline KruegerOlive Harvey College, Chicago, IL

Dorothy MatthewsThe Sage Colleges, Voorheesville, NY

Carl McAllisterGeorgia Perimeter College, Piedra, GA

Liza MohantyOlive Harvey College, Chicago, IL

Rita MoyesTexas A & M University, College Station, TX

Maria NiswongerYork County Community College, Wells, ME

Juana OrtelladoUniversidad Nacional de Asuncin, Paraguay

Steven C. RoschkeBuen Samaritano Colegio de Enfermera y Ciencias de la Salud, Cincinnati, OH

Elizabeth RozemaCollege East Central Union, MO

Janie SigmonYork Technical College, Roca Hill, SC

Sherry StewartNavarro College, Corsicana, TX

Lori ThrelkeldHenderson Community College, Henderson, KY

Igor ZaitsevBorough of Manhattan Community College, Nueva York, NY