contaminación atmosférica - hongos y bacterias

CURSO: Contaminacin Atmosfrica

PROFESOR: Ph. D. Sergio Pacsi Valdivia

ESPECIALIDAD: Ingeniera Ambiental

ALUMNOS:

Giancarlos Arcayo Palacios

Luis E. Loaiza Guillen

2013

TRABAJO ENCARGADO DE INVESTIGACIN:

CARACTERSTICAS & MONITOREO DE HONGOS &

BACTERIAS EN LA CALIDAD DEL AIRE EN INTERIORES

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS

Caractersticas & Monitoreo de Hongos & Bacterias en la Calidad del Aire en Interiores

1 Contaminacin Atmosfrica Trabajo de Investigacin

NDICE

I. INTRODUCCIN

II. OBJETIVOS

III. DESARROLLO

1. GENERALIDADES

1.1. Atmo-ecsfera

1.2. Aerobiologa & Microbiologa del Aire

1.3. Calidad del Aire& Calidad del Aire Interior

2. CONTAMINACIN MICROBIOLGICA DEL AIRE EN INTERIORES

2.1. Definiciones

2.2. Microbiota del aire

2.3. Fuentes de Contaminacin

3. HONGOS & BACTERIAS DEL AIRE EN INTERIORES

3.1. Hongos frecuentes

3.2. Bacterias frecuentes

3.3. Efectos sobre la Salud

4. MONITOREO DE HONGOS & BACTERIAS: MUESTREO

4.1. Mtodos de muestreo de microorganismos en el aire

4.2. Cultivo de Muestras



5. MONITOREO DE HONGOS & BACTERIAS: DETERMINACIN & CUANTIFICACIN

5.1. Aislamiento & Identificacin de Especies

5.2. Recuento de Colonias

6. ANLISIS DE CASOS

6.1. Estudio de contaminantes biolgicos (hongos y bacterias) en aire interior

de oficinas administrativas de una empresa petroqumica, estado Anzotegui-

Venezuela

6.1.1. Descripcin General

6.1.2. Materiales & Mtodos

6.1.3. Resultados & Discusin

6.2. Calidad Microbiolgica del Aire en Interiores de Habitaciones

Universitarias




6.3. Contaminacin biolgica intradomiciliaria y su relacin con sntomas

respiratorios indicativos de asma bronquial en preescolares de Bucaramanga,

Colombia




IV. CONCLUSIONES

V. REFERENCIAS



I. INTRODUCCIN

La evaluacin de la calidad del aire interior ha sido un tema de creciente preocupacin en

los ltimos aos, ya sea que los microorganismos puedan generar enfermedades que

puedan perjudicar el rendimiento en oficinas, o el bienestar en hogares. Existe una amplia

variedad de partculas de origen biolgico y qumico en el aire interior. Principalmente los

virus, bacterias, hongos y protozoos; adems, el aire interior puede contener restos de

materia orgnica proveniente de los microbios, como granos de polen, detritus animal y

fragmentos de insectos y caros y sus productos de excrecin.

Actualmente se emplea el trmino bioaerosol, para designar a las microorganismos y

estructuras de origen biolgico en suspensin el aire, ya que estos tienden a asociarse a

partculas o restos de materia orgnica presente en el aire. Cabe decir, que la atmsfera

no tiene una microbiota autctona pero es un medio para la dispersin de muchos tipos

de bioaerosoloes (esporas, bacterias, virus y hongos), procedentes de otros ambientes.

La exposicin a agentes biolgicos, particularmente hongos y bacterias en los ambientes

interiores es un problema frecuentemente implicado como uno de los cofactores que

pueden explicar el aumento de enfermedades respiratorias, y alergias, en grupos de

poblacin especialmente vulnerables.

El presente trabajo pretende ofrecer una introduccin terica al problema de la

contaminacin microbiolgica del aire en interiores, con nfasis en las bacterias y hongos

presentes; y a las tcnicas de monitoreo de dichos organismo. Adems de revisar

experiencias reales del monitoreo, y los avances cientficos en la materia

II. OBJETIVOS

General: Analizar las caractersticas y efectos de hongos y bacterias en el aire; as

como las tcnicas de monitoreo de estos, en espacios interiores.

Especficos:

Asociar el efecto de hongos y bacterias sobre la salud humana, y por tanto con

la calidad del aire.

Describir y evaluar tericamente, las diversas tcnicas de muestreo,

incubacin, aislamiento y determinacin de hongos y bacterias en el aire.

Analizar casos de aplicacin del monitoreo de hongos y bacterias; evidenciando

su importancia y complementariedad con otros estudios.



III. DESARROLLO

1. GENERALIDADES

1.1. Atmo-ecsfera

Este concepto busca considerar el aire como un subecosistema, el cual empieza

desde el suelo hasta las diferentes regiones y capas consideradas en la

atmosfera. De acuerdo a la meteorologa, se ha clasificado acorde con la

temperatura, y propiedades fsico-qumico.

En general estos parmetros no son

favorables para el crecimiento idneo de los

microorganismos, ya sea por la baja

concentracin de carbono, o la disminucin

de oxigeno que limita el crecimiento de

organismos aerbicos, y el parmetro

fundamental que es la temperatura. Sin

embargo, la tropsfera, que es la capa

inmediata al suelo, presenta la mayora de

organismos vivos, por ello es de esperar que

los microorganismos presentes en la

hidrosfera o litosfera, pasen a la atmo-

ecosfera.

Se considera la Tropsfera como la regin

ms importante de este ecosistema, debido

principalmente a la influencia directa con el hombre. En el caso de

microorganismos se tiene en consideracin:

Presentan poblaciones microbianas alctonas.

El aire es el medio de transporte o dispersin.

Existe la mezcla rpida del aire, por lo cual es comn encontrar

microorganismos. adheridos a otras partculas orgnicas o inorgnicas.



1.2. Aerobiologa & Microbiologa del Aire

La Aerobiologa es la rama de la biologa que estudia los microorganismos

presentes en el aire, donde se incluyen los procesos de liberacin, retencin,

dispersin, deposicin e incidencia atmosfrica de organismos

aerotransportados y al mismo tiempo sus efectos ambientales. (Meza. 2011).

Dichos microorganismos tienen importancia econmica y biolgica, ya que

producen enfermedades en

plantas, animales y

humanos, adems pueden

causar alteracin de

alimentos y materiales

orgnicos y contribuyen al

deterioro y corrosin de

monumentos y metales.

En el cuadro adjunto, se

muestran los principales

microorganismos segn la

altura.

No se puede asegurar que exista en el aire un aeroplankton, es decir un

microorganismo que viva, se reproduzca y alimente en este medio (M.C. de la

Rosa. 2002). Por ello, como ya se mencion, el aire no contiene

microorganismos autctonos pero es un medio de transporte de estos, el cual

puede ser en forma de bioaerosoles, que pueden formarse por; lluvia,

movimiento del agua en los ros y mar, tratamiento de aguas residuales,

aspersores de riego, aire acondicionado o secreciones respiratorias del hombre

y de los animales. Los microorganismos tambin pueden encontrarse en el aire

sobre partculas de polvo (Atlas y Bartha, 2002).

Tipos de microorganismos:

La atmosfera contiene diversos microorganismos, donde se destaca la

presencia de bacterias y hongos, (...) Cladosporium es el hongo que

predomina en el aire, tanto sobre la tierra como sobre el mar, aunque

tambin es frecuente encontrar otros mohos, como Aspergillus,

Penicillium, Alternaria y Mucor (Takahashi. 1997). Entre las bacterias

tambin son muy frecuentes los bacilos pleomrficos Gram positivos

(Corynebacterium) y los cocos Gram positivos (Micrococcus y



Staphylococcus). Los bacilos Gram negativos (Flavobacterium,

Alcaligenes) se encuentran en menor proporcin y disminuyen con la

altura (Gregory, 1973; Pelczar et al., 1993). (M.C. de la Rosa. 2002)

Los virus tambin pueden encontrarse en el aire y ser transportados por

l. Numerosos virus humanos (Orto y Paramixovirus, Poxvirus,

Picornavirus) se transmiten por va respiratoria. (M.C. de la Rosa. 2002)

El nmero de microorganismos disminuye con la altura, es por ello que en las

capas con contacto directo al suelo presentan mayor cantidad, adems la

proporcin vara de acuerdo a la zona, ya sean centros poblados (se advierte

mayor concentracin), agrcolas, o ambientes naturales.

1.3. Calidad del Aire & Calidad del Aire Interior

Para determinar si el aire es de buena o mala calidad es necesario tomar en

cuenta, su composicin, para as verificar la idoneidad de esta para diversas

aplicaciones, de acuerdo a distintos estndares o leyes. Por ello, la calidad del

aire se expresa mediante la concentracin de contaminantes qumicos y

microbiolgicos.

En el caso de contaminantes biolgicos, conforme a diversos estudios se ha

concluido que no existe normativa legal sobre valores lmite para agentes

biolgicos, segn ACGIH (American Conference of Governmental Industrial

Hygienists) las razones son:

Los bioaerosoles son mezclas complejas de diferentes clases de partculas.

Las respuestas de los seres humanos a los bioaerosoles varan desde

efectos inocuos hasta enfermedades graves, dependiendo del agente

especfico y de los factores de susceptibilidad de cada persona.

Las concentraciones medidas de los bioaerosoles cultivables y contables

dependen del mtodo de toma de muestra y anlisis. No es posible

recoger y evaluar todos los componentes de los bioaerosoles utilizando un

nico mtodo de muestreo.

Sin embargo, algunas organizaciones han clasificado los niveles de

contaminacin por hongos y bacterias, como es el caso de CEC (Commission for

Environmental Cooperation), donde obtuvieron valores para el aire interior de

oficinas de empresas no industriales.



Para las bacterias se obtuvo:

Fuente: CEC. 1993

Para los hongos se obtuvo:

Fuente: CEC.1993



2. CONTAMINACIN MICROBIOLGICA DEL AIRE EN INTERIORES

2.1. Definiciones

Si la contaminacin atmosfrica se puede entender como la presencia en el aire

de materias o formas de energa, cuya cantidad o persistencia pueden afectar a

los ecosistemas; y por tanto, a sus organismos y materiales; deteriorando su

calidad o alterando su estado. Al delimitar dicho concepto, al aire de un espacio

confinado (interiores) y considerando entre las materias, a microorganismos y

estructuras de origen bioqumico; nos estaramos refiriendo a la contaminacin

microbiolgica del aire en interiores.

Este tipo especfico de contaminacin localizada, tiene su origen en el hecho de

que la atmosfera funciona como un hbitat, en lo que se ha denominado Atmo-

ecsfera (Atlas et al. 2002); denominndose contaminacin cuando los

microorganismos presentes alcancen poblaciones numerosas, o se presenten

especies cuyos efectos en la salud sean anmalos.

2.2. Microbiota del aire

El conjunto de microorganismos presentes en el aire (la biocenosis de la Atmo-

ecsfera), constituye su Microbiota. Aqu se incluye a bacterias (Eubacterias),

arqueas (arquebacterias), protozooarios, caros y hongos.

Aunque en microbiota, se consideran a las formas vivientes, propiamente dicho;

la contaminacin microbiolgica, considera tambin a los virus, polen, esporas y

toxinas; que si bien tienen origen biolgico, no estn formalmente vivos. Para

englobar ambos grupos, se suele usar el trmino bioaerosol.

La carga microbiolgica del aire es transitoria y variable, y muy dependiente de

la fuente de contaminacin; por lo que solo tiene sentido la composicin

microbiolgica el aire en trminos de frecuencia y persistencia de los

microorganismos locales.



*Tiempo de supervivencia de algunas especies de bacterias y arqueas, presentes

en el aire. (Atlas et al. 2002)

2.3. Fuentes de Contaminacin

Los bioaerosoles (microorganismos y estructuras de origen biolgico), como

cualquier contaminante pueden provenir de infinidad de fuentes; las que

pueden agruparse (entre otros criterios) en:

Artificiales. Debido a procesos e instituciones humanas, que empleen o

manipulen microorganismos, como las plantas depuradoras de aguas

residuales, laboratorios, centros de manejo de residuos slidos,

composteras, fermentadoras, hospitales y otros.



Naturales. Aqu se incluyen los bioaerosoles que provienen de:

Humanos. Liberados del interior del organismo, como al

estornudar; o clulas prdidas de la piel y cabellos. As como

parsitos y bacterias de la flora intestinal.

Suelo. Los microorganismos del suelo, suspendidos tras

perturbacin mecnica.

Vegetales y Hongos. Las estructuras como el polen y las esporas.

Otros microorganismos. Las endosporas y toxinas, producidas

bioqumicamente.

3. HONGOS & BACTERIAS DEL AIRE EN INTERIORES

3.1. Hongos frecuentes

Los hongos se dividen en dos grupos: el primero, las levaduras y mohos

microscpicos conocidos como microhongos, y el segundo, los hongos del yeso

y de la madera podrida, denominados macrohongos, ya que producen esporas

macroscpicas apreciables a simple vista (Guardino Sol.2009).

*Los bioaerosoles se

originan tanto en procesos

naturales como

antropognicos.



Generalmente se considera que las esporas en suspensin presentes en el aire

interior provienen del exterior, por lo que su concentracin sera similar, si es

que no existe ventilacin. Sin embargo, la Cladosporium tambin es capaz de

crecer y producir esporas sobre superficies hmedas en el interior,

contribuyendo as a la carga biolgica del aire interior. Adems se considera que

las diversas especies de Penicillium se originan generalmente en el interior, al

igual que Aspergillus y Eurotium.

Fuente: (Morales. 2010)

3.2. Bacterias frecuentes

Los tipos grampositivos ms frecuentes se originan en la boca, la nariz, la

nasofaringe y la piel, y son Staphylococcus epidermidis, S. aureus y especies de

Aerococcus, Micrococcus y Streptococcus. Las bacterias gram-negativas no

suelen ser abundantes, pero en ocasiones especies de Actinetobacter,

Aeromonas, Flavobacterium y especialmente Pseudomonas pueden ser

importantes (Morales. 2010).



El agente causal de la enfermedad del legionario, Legionella pneumophila,

puede estar presente en suministros de agua caliente y en humidificadores de

aire acondicionado, as como en, jacuzzis, saunas y duchas (Guardino Sol.2009)



3.3. Efectos sobre la Salud

Segn diversos estudios, se ha demostrado que la presencia de patgenos

micticos es mnima en el aire interior, sin embargo; A. fumigatus, puede

invadir el tejido humano, ya que crece en la tierra de las plantas colocadas en

macetas. Aunque no es probable que las esporas de stos y de otros patgenos

oportunistas, sean peligrosas para la salud, s pueden serlo para personas

inmunodeprimidas (Guardino Sol.2009).



Por otra parte, se ha confirmado distintos procesos alrgicos causados por

microorganismos entre los que se incluyen:

dermatitis alrgica atpica;

rinitis;

asma;

fiebre por humidificadores, y

alveolitis alrgica extrnseca (AAE), tambin conocida como Neumonitis por

hipersensibilidad (NH). (Guardino Sol.2009)

Los hongos presentes en el aire interior son contaminantes ms importantes

que las bacterias, ya que a los hongos se puede atribuir la enfermedad ms

comn de estos ambientes que es la rinitis o asma. El principal causante de esta

enfermedad es la especie Eurotium, sin embargo existen otras especies

causantes de esta enfermedad que se presentan a continuacin:

Fuente: Guardino Sol.2009

En el caso de las bacterias, generalmente no presentan riesgo para la salud, ya

que se esperara la existencia de bacterias gram (+) en el aire interior,

proveniente de la respiracin y piel, por lo cual son bacterias inocuas para el

hombre (Micrococcus y Staphilococcus). Por lo cual niveles altos de estos,

indican una ventilacin inadecuada. Sin embargo, si las bacterias son gram(-),

implicara la presencia de aguas estancadas y/o contaminadas. Estas bacterias

gram (-), en particular las endotoxinas liberadas de su pared, provocan sntomas

de fiebre, alteraciones en el nmero de leucocitos, alteraciones respiratorias,

etc. (Hernndez Calleja. 2005)



4. MONITOREO DE HONGOS & BACTERIAS: MUESTREO

Como se sabe, la primera etapa efectiva del monitoreo es el muestreo. Bsicamente, el

objetivo del muestreo es transferir los microorganismos de una determinada cantidad

de aire del interior a analizar, hacia un medio de cultivo. Esto es un material nutritivo

slido o lquido, elaborado para el crecimiento de microorganismos en el laboratorio

(Moreno et al. 2000).

Entonces, el muestreo incluye la coleccin y el cultivo de muestras; posteriormente,

con la aplicacin de tcnicas de microbiologa experimental, se aslan los hongos de las

bacterias, y si se desea- se aslan especies dentro de esos grupos.

4.1. Mtodos de muestreo de microorganismos del Aire

De acuerdo a la Nota Tcnica de Prevencin 203 del Instituto Nacional de

Seguridad e Higiene en el Trabajo de Espaa (INSHT), sobre evaluacin de

contaminantes biolgicos en ambientes laborales; las tcnicas para la obtencin

de muestras aero-microbianas sobre medios de cultivo, se pueden caracterizar

en 4 grupos:

Sedimentacin. Es el mtodo ms antiguo, comn y econmico; consiste

en exponer placas de Petri, con el medio de cultivo adecuado, en una

ubicacin y perodo determinados, durante el cual los microorganismos

y las partculas del aire se depositan en el medio. Como inconvenientes

se presentan: la no deteccin de los microorganismos menos pesados,

las interferencias por turbulencia y slidos sedimentables. Adems, de

que el resultado, no se puede relacionar a un volumen determinado de

aire. (De La Rosa et al. 2002)



Filtracin. Consiste en hacer pasar un volumen determinado de aire a

travs de un filtro, con la ayuda de una bomba de vaco. El filtro es un

medio poroso, habitualmente se usan membranas de gelatina o agar, en

el cual quedan retenida las partculas portadoras de microorganismos;

posteriormente se realiza la incubacin sobre medios de cultivo

apropiados. Se pueden conseguir porttiles, y determinar una

concentracin media por unidad de volumen.

Recogida en medio acuoso (impinger). Tambin traducido como

borboteo en lquido (De La Rosa et al. 2002), consiste succionar un

volumen determinado de aire (por lo que tambin requiere una bomba)

y hacerlo burbujear a travs de un frasco que contiene el caldo de

cultivo o solucin isotnica, que retiene los microorganismos para su

anlisis posterior. Los muestreadores May o Burkard, se basan en este

principio.



Impactacin: Es el mtodo ms usado (De La Rosa et al. 2002), donde un

determinado volumen de aire succionado atraviesa un medio de

cultivoslido en una placa Petri perforada, aprovechando que por inercia

las partculas y microorganismos se separan de la corriente de aire.

El ms usado es el impactador Andersen, que permite la distribucin por

tamao de los bioaerosoles.



4.3. Cultivo de Muestras

Si bien en todos los mtodos de muestreo se obtienen los microorganismos

sobre un medio de cultivo o un filtro del que se puede hacer una siembra; en

ningn caso se hace la distincin entre muestreo de bacterias u hongos. Para tal

propsito, el muestreador debe contener un medio de cultivo selectivo.

De acuerdo a la Nota Tcnica de Prevencin 299 del INSHT: Mtodo para el

recuento de hongos y bacterias en aire (INSHT. S.f.); el medio de cultivo que

permitir la seleccin de hongos es el Agar Sabouraud , mientras que para las

bacterias se usa el Agar Tripticasa soya (Triptisoy).

Agar Sabouraud.

La receta estndar de este agar:

Peptona de casena............ 5,0 g/l

Peptona de carne............... 5,0 g/l

D (+) Glucosa................... 40,0 g/l

Cloranfenicol...................... 0,5 g/l

Agar - agar...................... 15,0 g/l

De forma que 65.5 gramos de la mezcla de reactivos calidad anlisis, se

completan con agua bidestilada hasta un litro. Esto debe ser disuelto en

caliente y esterilizado en autoclave a 121 por 10 minutos. Adems el pH

final debe ser de 5.6

La selectividad de este medio radica en que los hongos prevalecen a pH

cido; y al agregrsele cloranfenicol, un antibitico, se inhibe el

crecimiento bacteriano. Por lo que al emplear este agar en un

muestreador, e incubarlo a 28 por cinco das; se tendran las

poblaciones fngicas del volumen de aire muestreado.



Agar Tripticasa Soya

La composicin de este agar:

Peptona de casena...............15,0 g/l

Peptona de soja.......................5,0 g/l

Cloruro sdico.........................5,0 g/l

Agar-Agar.............................15,0 g/l

Nuevamente, el litro de mezcla que contiene los 40 gramos de reactivos;

debe esterilizarse a 121, por 15 minutos. El pH de uso del medio debe

ser aproximadamente 7.3.

Ahora, el pH cuasi neutro promueve la proliferacin de bacterias; la

incubacin se sugiere a 37 por dos das.

Se puede observar que la selectividad de los medios, radica en la presencia de

antibiticos, el pH del medio y la temperatura de incubacin.

5. MONITOREO DE HONGOS & BACTERIAS: DETERMINACIN & CUANTIFICACIN

5.1. Aislamiento & Identificacin de Especies

A partir de los medios selectivos que se han obtenido durante el muestreo, y

que contienen los hongos o las bacterias de una muestra de aire; y dado que es

evidente dichos microorganismos no se encuentran aislados, sino en

poblaciones mixtas, es necesario aislar cada especie en particular, para su

correcta identificacin.

El aislamiento requiere la utilizacin de los mismos medios de cultivo selectivo -

que inhiben el crecimiento de los microorganismos no deseados y la aplicacin

de alguna de las siguientes tcnicas:

Extensin en superficie

Se deposita sobre la superficie de una placa con el agar selectivo en

cuestin, una punzada de una colonia en la placa muestreada; y se

extiende con ayuda del cayado, previamente esterilizado. Luego se incuba

la placa, en posicin invertida, a la temperatura deseada segn el tipo de



microorganismo (hongos, 28 y bacterias a 37). La posicin invertida

evitar que el agua de condensacin se deposite sobre la superficie del

medio, dificultando la obtencin de colonias aisladas.

Estra mltiple en superficie

Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra de

la placa del muestreo; y se extiende sobre un rea pequea de la

superficie de la placa con agar nutritivo, en forma de estras muy juntas.

Se flamea el asa, se enfra y despus de rozar la siembra realizada

previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo

nuevas estras. Este proceso se repite sucesivamente, flameando y

enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estra. Se lleva la

placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en posicin invertida.



Diluciones sucesivas

Este mtodo se emplea para el muestreo en medio acuoso, el cual implica una

dilucin seriada (generalmente 6 diluciones) de la muestra en agua, caldo o

solucin salina, para posteriormente inocular las diluciones en medios de cultivo

slido e incubarlo durante 24-48 horas.

De cualquiera de las dos formas de aislamiento, se obtienen colonias separadas;

de una solo especie. La identificacin de estas, se hace tanto de forma

cualitativa como cuantitativa:

Identificacin macroscpica. Consiste en la inspeccin cualitativa de las

colonias, caracterizando su morfologa; esto a partir de su color, textura,

consistencia, tamao, elevacin, forma y otras propiedades.



Identificacin microscpica. Aqu se caracteriza la morfologa celular, con

ayuda de un microscopio, que puede ser ptico o electrnico.

Se evala la forma de las clulas, la presencia de flagelos, hifas y cualquier

otra caracterstica celular que distinga entre especies de hongos y

bacterias.

5.2. Recuento de Colonias

Cuando una clula aislada comienza a crecer sobre un medio slido, el resultado

del crecimiento al cabo de un tiempo determinado es una colonia, por lo cual

dicha clula es denominada unidad formadora de colonia (UFC). Es importante

rescatar que el recuento nicamente se realiza en medio slido, por lo cual si la

muestra proviene de un medio acuoso (mtodo de impregnacin), ser

necesario llevarlo a medio slido a travs de diluciones, descrito anteriormente.

En el caso de que se conozca el volumen de bombeo, como es el caso de los

mtodos de impactacin, filtracin o bombeo en medio acuoso, la

contaminacin de microorganismos se expresa:



Asimismo, es posible expresar la composicin de una determinada especie de

hongos o bacterias respecto al total, esta expresin es tpica del mtodo de la

sedimentacin.

Para efectuar el conteo, se puede realizar el conteo directo; as como usar

contadores electrnicos que calculan las UFC de forma inmediata, como es el

mtodo de Coutler.



6. ANLISIS DE CASOS

6.1. Estudio de contaminantes biolgicos (hongos y bacterias) en aire interior

de oficinas administrativas de una empresa petroqumica, estado Anzotegui-

Venezuela (Parra et al. 2008)


Este caso de estudio se centra en la sede administrativa de la empresa, donde

se tiene antecedentes de malestar diagnosticadas por mdicos, especialmente

estornudos, alergias, gripe, olores extraos entre otros. Adems, la presencia de

moho en los bordes de los techos y paredes, as como la falta de aplicacin de

un sistema de ventilacin. Por otra parte, el nivel de humedad es alto,

aprecindose la condensacin en las ventanas por lo cual se est provocando

ambientes propicios para el crecimiento y contaminacin biolgica. El estudio

tuvo varias fases, donde se analiza la percepcin de los trabajadores por

encuestas y talleres, sin embargo, el presente informe se centrar en el anlisis

microbiolgico.


La estrategia de muestreo fue la siguiente:

Da de muestreo: Se realiz por das consecutivos; lunes 21/07/08 y

martes 22/07/08. En el horario comprendido desde las 7:00am a

12:00pm y en la tarde de 1:00pm a 5:00pm

Tiempo de muestreo: El tiempo para cada muestra se determin en

cinco minutos (5minutos/muestra). Es decir, tomar un punto de

muestreo llev un tiempo de diez minutos. Cinco minutos para hongos y

cinco minutos para bacterias. En segundo piso se realiz el muestreo

bajo la aplicacin de 2 mtodos (Acuosos y de Impactacin) el tiempo de

muestreo se prolong en veinte minutos pues se us diez minutos para

cada mtodo de muestreo.



Mtodos de captacin:

o Biosampler (Medio acuoso): Colecta partculas bioaerosoles que

se encuentran suspendidas en el aire dentro de trampas de

lquido.

o HiAir Sampler System (Medio solido-Impactacin): En este equipo

el volumen de aire es impulsado por una hlice sobre una cinta

de plstico portadora de cultivo slido.

Tcnica de estimacin de la densidad microbiana:

Para estimar las UFC, se utiliz el mtodo directo de recuento en placa,

para ello se tomaron alcuotas de 1ml de las muestras y se colocaron en

9 ml de solucin salina. Seguidamente, se realizaron diluciones seriadas

en solucin salina peptonada (SSP) hasta 1:1000000 para bacterias y

1:10000 para hongos. Cada una de las diluciones se sembraron por

superficie en placas con Agar Tripicasa de Soya (ATS) con fungicida para

el aislamiento de bacterias y en placas de Agar Extracto Malta (AEM)

con antibitico para el aislamiento de hongos.

Luego de la incubacin, 24horas para bacterias y 7 das para hongos, se

procedi al conteo de UFC.


Los promedios de UFC de Bacterias (UFC/m3):

Segn el cuadro anterior se evidencia la mayor concentracin de bacterias

en el piso 2, especficamente en lado este, cabe resaltar que en esa zona se

advirti ms moho en las ventanas, humedad y quejas de los trabajadores

por enfermedades respiratorias. Adems, se verific que las bacterias gram

(+) de tipo cocos son las predominantes.



Los promedios de UFC de Hongos (UFC/m3):

*Promedio de Hongos UFC/m3

Respecto a los hongos se encontr ms en la planta baja a ambos lados del

edificio, pero siendo mayor en el este. Se advierte que se supera el lmite de

referencia exterior, sin embargo, para el caso de hongos, se suele

establecer el lmite de 500 UFC/m3. Pero si analizamos los puntos de

muestreos individualmente se advierte:

Se verifica que para dos casos en la planta baja se supera el valor de 1000

UFC/m3, por lo cual se necesita atencin inmediata.

Por lo tanto se concluye que la concentracin de estos microorganismos

est por encima de los lmites estudiados, causando afecciones

respiratorias.



6.2. Calidad Microbiolgica del Aire en Interiores de Habitaciones

Universitarias (Luksamijarulkul et al. 2012)


Debido a la gran poblacin que recurre a estas zonas, se evalu la calidad

de aire de estos edificios, ya que existieron quejas de una inadecuada

ventilacin vinculndolo con alergias y gripe, es por eso que este trabajo se

centr en la observacin a largo plazo; evaluacin en dos aos, de la calidad

microbiolgica de aire en los edificios Universitarios ubicados en el centro

de Poznan, Polonia.


Mtodo:

Sedimentacin de Koch; Este mtodo se basa en la deposicin

gravitatoria de los microorganismos sobre las placas Petri con medios

nutritivos y expuesto para un periodo de tiempo. El nmero de

microorganismos se estim a travs de la siguiente ecuacin:

Toma de muestra:

Las placas Petri fueron expuestas por 15 minutos, adems todas las

muestras fueron tomadas en septiembre (antes del inicio del ciclo

acadmico) y octubre (en curso), en dos aos de funcionamiento; 2002

y 2003. Adems hubo dos periodos de toma de muestra en la maana

(7:30 a 8:00am) y en la tarde (2:30 a 3:00pm).

Medios de cultivo empleado

o Agar-Extracto de levadura (Merck); para la cuantificacin de

Hongos.

o Medio de Agar Sabouraud con 2% de glucosa (Merck) para la

cuantificacin de hongos.

o Czapek-Doxa Agar (BTL) para la identificacin de hongos

filamentosos.



Diagnstico

Las bacterias se identificaron por tres matrices. La valoracin

macroscpica (Descripcin de Colonia). Segundo; estimacin

microscpica (teido por el mtodo de Gram y Schaeffer-Fulton). La

tercera parte; pruebas bioqumicas segn la clasificacin de bacterias

segn Bergey.

Diagnstico de hongos filamentosos se bas en la estimacin de las

caractersticas morfolgicas de crecimiento en medio de Czapek, as

como en la observacin microscpica segn Gua de estimacin de

hongos filamentosos.


Se obtuvo que en las maanas se mantiene una tendencia donde la

contaminacin fngica y bacteriana es menor que en la tarde, pero hubo

una excepcin, un aula ventilada, para el caso de los hongos; adems en

cuanto al crecimiento anual se determin que el crecimiento ms alto de

contaminacin fngica durante las tardes fue en el laboratorio qumico (en

2003; 5,8 veces mayor en las tardes que en las maanas), as como en la

biblioteca.

*Variacion UFC/m3 de Bacterias para el ao 2002-2003

A (sala ventilada), B(sala no ventilada), C(laboratorio), D(Biblioteca), E(sala

de lectura), F(Oficina decano), G (comedor) H(Baos), I(Corredor)



.

*Variacin de UFC/m3 de hongos para el ao 2002-2003

Por otra parte el crecimiento bacteriano ms intenso ocurri en las tardes

principalmente en el corredor, laboratorio qumico y en el comedor.

Ante la falta de una normativa, si se compara con el ndice de Grny y

Dutkiewicz, 5000UFC/m3, se advierte que no pasa dicho valor, sin embargo, en

Polonia se suele comparar con el lmite propuesto por la Asociacin Americana

Higiene Industrial, el cual nos indica un lmite de 250UFC/m3para Hongos, el

cual se supera en casi todos los casos.

Por otra parte, es importante resaltar el aumento de bacterias y hongos en la

apertura del ao, por lo cual est conectado a una fuente de contaminacin

biolgica, que sera en este caso el hombre, o la muchedumbre, ya que el

cuerpo humano, la ropa es lugar para crecimiento de microorganismos. Este

hecho se acenta con la comprobacin de que el mayor crecimiento de

microorganismos en el da ocurre en el corredor, comedor, biblioteca, los cuales

son lugares llenos de gente constantemente.

Para un mejor anlisis, los autores compararon los niveles de UFC/m3 con los

del aire exterior, con la relacin: concentracin interior/exterior, donde se

concluy, que la relacin es mayor a 1 en casi todos los casos, razn por la cual

respalda que esta zona carece de una adecuada ventilacin de edificios.



6.3. Contaminacin biolgica intradomiciliaria y su relacin con sntomas

respiratorios indicativos de asma bronquial en preescolares de Bucaramanga,

Colombia (Herrera et al. 2011)


Investigacin realizada por Astrid B. Herrera, Laura A. Rodrguez y Jrg

Niederbacher; de la Universidad Industrial de Santander, en Bucaramanga,

Colombia. El objetivo de la investigacin fue evaluar la asociacin entre la

presencia de contaminantes biolgicos intradomiciliarios y sntomas

indicativos de asma, en prescolares de Bucaramanga (Herrera et al. 2011).

El estudio consisti en evaluar la relacin entre la manifestacin de

sintomatologa de asma bronquial de nios con menos de 7 aos de edad

(pre-escolares); con la presencia de hongos y caros en el interior de sus

hogares, prematuridad de nacimiento, antecedentes familiares, etc.

El estudio requiri el monitoreo de hongos y caro, el reconocimiento de

especies, el levantamiento de informacin epidemiolgica y demogrfica;

as como el tratamiento estadstico, para encontrar las relaciones.


El espacio muestral consisti de 678 nios (Edad media: 42 meses).

La informacin sobre el estado nutricional y las variables demogrficas se

obtuvo a travs de encuestas y mediciones en los hogares.

Para la evaluacin de caros (arcnidos), se tomaron muestras de polvo con

una aspiradora, se identificaron las especies al microscopio.

El monitoreo de hongos se realiz exponiendo por 15 minutos, dos placas

Petri con agar rosa de bengala cloranfenicol; que podan ser ubicadas

en la cama y el espacio de juego, o el corral y el coche, dependiendo de la

edad. Ntese que, como se ha explicado en el punto 4. MONITOREO DE

HONGOS & BACTERIAS: MUESTREO, se tratara de un mtodo de

muestreo por sedimentacin (de hongos); y el medio de cultivo, usa

cloranfenicol para inhibir el crecimiento bacteriano.

El trabajo en el laboratorio consisti en incubar las muestras e identificar

las especies fngicas.




El anlisis microbiolgico, result en la identificacin de las especies ms

frecuentes de hongos y caros; asi, los gneros fungales en orden de frecuencia,

son: Cladosporium sp. (98%), Fusarium sp. (82%), Aspergillus sp. (54%),

Penicillium sp. (49%) y Acremonium sp. (7.82 %). Y las especies de caros, en

orden de predominancia: Dermatophagoides sp. (16,4 %), Cheyletus sp. (3,5 %),

Lepidoglyphus destructor (2,5 %) y Blomia tropicales (2,1 %)

Posteriormente, se realiz el anlisis bivariado entre la prevalencia de sntomas

de asma bronquial y todas las variables de estudio (prematuridad, mascotas,

antecedentes, otras enfermedades respiratorias, especies de hongos y caros).

Las variables con mayor relacin a la manifestacin frecuente de sntomas de

asma, se muestran en el siguiente cuadro; donde se caracteriza por el valor del

estadstico p, teniendo en cuenta que a menor valor de p, mayor

significancia.

El trabajo concluye que los principales factores que influyen en que los nios

menores a 7 aos en Bucaramanga, presenten sntomas de asma (p=0); son: la

presencia del hongo Acremonium sp., el hecho de ser prematuros y el padecer

de neumona.

Por tanto, el trabajo encuentra una relacin entre el Acremonium sp. y el

padecimiento de asma.



IV. CONCLUSIONES

La atmsfera, particularmente la zona ms baja, contiene una gran variedad de

microorganismos y estructuras de origen biolgico (bioaerosoles) en suspensin;

de tal forma que es un medio para la dispersin, de dichos contaminantes

biolgicos. A este propsito, se tienen campos relativamente nuevos como la

Aerobiologa, microbiologa del aire y la contaminacin microbiolgica.

El aire en espacios interiores, al estar especialmente cargado de hongos y bacterias

como: Aspergillus, Penicillium, Cladosporium, Staphylococcus, Mycobacterium y

Bacillus; constituye un factor que contribuye a la incidencia de alergias y

enfermedades respiratorias, as como a la disminucin en el rendimiento en

distintos ambientes (oficinas, colegios, hospitales, etc.). De tal forma afecta, la

habitabilidad y sanidad de los espacios interiores; de ah su relacin con la calidad

del aire en interiores.

La primera etapa del monitoreo la constituye el muestreo, las tcnicas que existen

para obtener los hongos y bacterias del aire, se clasifican de acuerdo al principio:

sedimentacin, filtracin, impregnacin en lquidos e Impactacin. La diferencia

radica en el uso de fuentes de energa, el medio de coleccin y el uso de equipos

automatizados.

Dado que al aplicar una tcnica de muestreo microbiolgico en el aire, no se

discrimina el tipo de microorganismos que se colecta; para salvar este

inconveniente los muestreadores incluyen un medio de cultivo que debe ser

modificado a selectivo. De tal forma, se usan el agar Sabouraud y el agar tripticasa

soya; que inhiben el crecimiento bacteriano y fngico, respectivamente. As se

obtienen muestras solo con hongos o solo con bacterias del aire en anlisis.

Para distinguir las distintas especies de hongos y bacterias, se deben aplicar

tcnicas de aislamiento sobre los agares selectivos mencionados, como: extensin

en superficie, diluciones y estras. De tal forma se puede obtener las variedades de

hongos y bacterias en el aire. Adems, los hongos y bacterias de las muestras

pueden cuantificarse como el nmero de unidades formadoras de colonias (UFC)

por volumen de aire muestreado o como la frecuencia porcentual de una

determinada especie, respecto al total.



El anlisis de casos, evidencia que el monitoreo de hongos y bacterias en el aire de

espacios interiores viene siendo empleado como una herramienta que permite

evaluar el grado de contaminacin fngica y bacteriana de dicho ambiente;

sirviendo de apoyo a estudios epidemiolgicos y de salud ocupacional.

De los tres casos de estudio, se concluye que la proliferacin de hongos y bacterias

est ligada a una mala ventilacin de los edificios, adems es comn usar como

referencia la calidad de aire exterior para obtener una nocin del grado de

contaminacin en interiores, ya que no existe una normativa reconocida

globalmente, ya que los efectos nocivos de los hongos y bacterias, vara de

acuerdo a la susceptibilidad de las personas. Tambin, se advierte que los ms

altos grados de contaminacin ocurrieron en zonas concurridas, como son los

colegios, donde los nios que son ms susceptibles a enfermedades respiratorias

corren ms peligro de desarrollar asma.



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contaminación atmosférica - hongos y bacterias

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