biologicas aislamiento de géneros de bacteroidetes de ciencias

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

Aislamiento de géneros de Bacteroidetes de sedimento marino de la reserva Bahía Paracas.

Enero-Julio 2016

Tesis para obtener el Título Profesional de Biólogo - Microbiólogo

AUTOR: Br. LIZBETH NOHELY ARMAS MANTILLA

ASESOR: Dra. ICELA RODRIGUEZ HARO

COASESOR: Mg. MAYAR GANOZA YUPANQUI

TRUJILLO – PERÚ

2016

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.

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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE

TRUJILLO

DR. ORLANDO GONZÁLES NIEVES

RECTOR

DR. RUBÉN VERA VÉLIZ

VICE-RECTOR ACADÉMICO

DR. WEYDER PORTOCARRERO CÁRDENAS

VICE-RECTOR DE INVESTIGACIÓN

DR. ESTEBAN ILICH ZERPA

PROFESOR SECRETARIO GENERAL



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AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

DR. MARCO LEONCIO SALAZAR CASTILLO

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DR. SANTOS ENRIQUE PADILLA SAGASTEGUI

PROFESOR SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

DRA. EVA ELIZABETH VILLANUEVA TARAZONA

DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA



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CERTIFICACIÓN DEL ASESOR

El que suscribe, Dr. Icela Rodriguez Haro, en calidad de profesor asesor de la

tesis: “Aislamiento de géneros de Bacteroidetes de sedimento marino de la reserva

Bahía Paracas. Enero-Julio 2016”

CERTIFICA:

Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con los objetivos

propuestos en su perfil académico y que el informe ha sido revisado y acoge las

observaciones y sugerencias alcanzadas.

Por ello, autorizo a la Br. Armas Mantilla Lizbeth Nohely para continuar con

los procedimientos según sus fines.

Dra. Icela Rodríguez Haro

ASESOR



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PRESENTACIÓN

Señores miembros del jurado dictaminador:

En cumplimiento con las disposiciones reglamentarias vigentes para la

obtención de grados y títulos de las Escuela Académica Profesional de Microbiología

y Parasitología, Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de

Trujillo, someto a vuestra consideración y criterio el presente informe de tesis titulado:

“Aislamiento de géneros de Bacteroidetes de sedimento marino de la reserva

Bahía Paracas. Enero-Julio 2016”, con la cual pretendo cumplir con los requisitos

para optar el título de Biólogo-Microbiólogo.

Trujillo, Agosto del 2016

Br. Lizbeth Nohely Armas Mantilla



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MIEMBROS DEL JURADO

DR. JUAN GUEVARA GONZALES

PRESIDENTE

DR. EDUARDO MUÑOZ GANOZA

SECRETARIO

DRA. ICELA RODRIGUEZ HARO

VOCAL

APROBACIÓN



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vii

Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran

que el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y

fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.

DR. JUAN GUEVARA GONZALES

PRESIDENTE

DR. EDUARDO MUÑOZ GANOZA

SECRETARIO

DRA. ICELA RODRIGUEZ HARO

VOCAL



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DEDICATORIA

A Dios, por haberme permitido llegar hasta este punto

encaminándome por el camino correcto dándome salud para lograr mis

objetivos, y por su infinita bondad y amor.

A mis familiares:

Rosa y Santos mis padres, por ser mi fortaleza, mi apoyo

incondicional en cada paso que he dado y a quienes les debo la vida.

Bryan y kenny, por darme la fuerza y la alegría para seguir adelante.

Mamá Julia, por su apoyo durante todo este tiempo, sabios consejos y

apoyo para conseguir mis objetivos.

Mis queridos tíos y primos quienes me alentaron durante todo el

proceso con buenos consejos.

A mis amigos Yuli, Iris, Rossy, Ivan, Wilson y Gabriel por el día a

día, por su paciencia, sus ocurrencias, sus consejos, su cariño, por

permitirme compartir estos años a su lado, por ser mi familia cercana.



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AGRADECIMIENTO

Al proyecto de investigación básica PIBA-2-P-247-14 “Biodiversidad

mixobacterial marina del Perú: potencial fuente de biomoléculas

antibióticas contra patógenos multidrogo resistentes” financiado por el

Fondo Nacional de Desarrollo Científico, Tecnológico y de Innovación

Tecnológica (FONDECYT) del Consejo Nacional de Ciencia, Tecnología

e Innovación Tecnológica (CONCYTEC) del gobierno Peruano.

Un cordial agradecimiento a mi asesora de tesis Dra. Icela Rodriguez

Haro por brindarme su apoyo de manera incondicional en todo este

tiempo.

Al Dr. Till F. Schäberle y MSc. Luis Linares Otoya del Instituto de

Biología Farmacéutica, Universidad de Bonn (Alemania) por los

conocimientos brindados.

Mg. Mayar Ganoza Yupanqui, Dr. Julio Campos Florián y Ing.

Virginia Linares Otoya de la Universidad Nacional de Trujillo por los

conocimientos y el apoyo.

A los miembros del jurado, quienes aportaron con sus conocimientos

en esta investigación.



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FINANCIAMIENTO

Financiado por el Fondo Nacional de Desarrollo Científico, Tecnológico y de

Innovación Tecnológica (FONDECYT) del Consejo Nacional de Ciencia,

Tecnología e Innovación Tecnológica (CONCYTEC) del Gobierno Peruano, con

convenio de adjudicación Nº 092-2014-FONDECYT- DE.



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RESUMEN

Los Bacteroidetes son bacterias con una amplia distribución en la naturaleza

y algunos géneros son especies marinas siendo algunas patógenas para peces marinos

y de agua dulce, anfibios, y otros animales marinos, o algas marinas e invertebrados.

En el presente trabajo de investigación se aislaron cuatro géneros de Bacteroidetes de

la reserva Bahía Paracas, para lo cual se tomaron muestras de sedimentos de hasta

0,5 cm de profundidad, del área intermareal conteniendo material orgánico y se

depositarón en tubos estériles debidamente codificados. Cada muestra fue colocada

en los 3 parches circulares de E. coli en placas con agar agua de mar artificial (ASW-

WCX agar) incubándose a 30 °C y monitoreando el crecimiento de las colonias con

un estereoscopio. Se seleccionaron las colonias características: pequeñas de 1-2 mm

de diámetro con bordes irregulares, pigmentadas, adheridas al agar. Se realizó una

tinción Gram para verificar la presencia de bacilos gramnegativos. Las colonias que

presentaron las características macroscópicas y microscópicas mencionadas se

subcultivaron en agar VY/4, se incubo por 3-5 días a 30 °C. Se aislaron 10 cepas a

las cuales se le realizó previamente la identificación bioquímica con las pruebas de

oxidasa, catalasa e hidrolisis de caseína, gelatina, almidón, celulosa, tween 20, 40 y

80. Finalmente se realizó la identificación molecular. Se logró aislar e identificar

cuatro géneros de bacterias diferentes de las cuales dos de ellas se identificó la

especie siendo Fulvivirga sp., Tenacibaculum sp. Marivirga sp. y Reichenbachiella

sp.

Palabras claves: Fulvivirga sp., Tenacibaculum sp. Marivirga sp. y Reichenbachiella sp



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CONTENIDO

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ............ii

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ...............iii

CERTIFICACIÓN DEL ASESOR ..........................................................................iv

PRESENTACIÓN ...................................................................................................v

MIEMBROS DEL JURADO ...................................................................................vi

APROBACIÓN .......................................................................................................vii

DEDICATORIA ......................................................................................................viii

AGRADECIMIENTO .............................................................................................ix

FINANCIAMIENTO ...............................................................................................ix

RESUMEN ..............................................................................................................xi

INTRODUCCIÓN ...................................................................................................1

MATERIAL Y MÉTODO .......................................................................................6

RESULTADOS .......................................................................................................9

DISCUSIÓN ............................................................................................................14

CONCLUSIONES ...................................................................................................18

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ....................................................................19

ANEXOS .................................................................................................................23



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1

I. INTRODUCCIÓN

Las bacterias tienen una amplia distribución en la naturaleza siendo una de

ellas los ambientes marinos. Los sedimentos marinos superficiales contienen grandes

cantidades de materia orgánica y allí se encuentran grupos de bacterias

pertenecientes al phylum Bacteroidetes que buscan un lugar para poder crecer

degradando algas y materia orgánica derivadas de aguas y sedimentos marinos, los

que constituyen uno de sus importantes habitas y desde donde han sido aislados en

países como Taiwán, Corea e India1, 2

.

El phylum Bacteroidetes está conformado por un grupo diverso de bacilos

Gram negativos que no forman endosporas, este phylum presenta cuatro clases:

Cytophagia, Flavobacteriia, Bacteroidia y Sphingobacteria1.

Los miembros de la clase Cytophagia, son organismos Gram negativos, no

formadores de esporas, quimiorganotrofos, movilidad por deslizamiento y sus

colonias son generalmente pigmentadas de color anaranjado, amarillo, rosa o rojo

dependiendo de los carotenoides que contengan. Esta clase tiene una amplia

distribución en la naturaleza y algunos géneros son de origen marino necesitando

para su crecimiento in vitro la adición de sales, siendo el medio de aislamiento

comúnmente utilizado el denominado agua de mar artificial1. La clase Cytophagia

incluye numerosos géneros siendo las más importantes: Marivirga,

Reichenbachiella, Fulvivirga, Roseivirga entre otros.

El género Marivirga pertenece a la familia Flammeovirgaceae; son células en

forma de bastón, Gram negativas, movilidad por deslizamiento, no formadora de

endosporas, estrictamente aerobia y quimioorganotrofos. Usualmente producen



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pigmento anaranjado o amarillo no difusibles y bioquímicamente son oxidasa,

catalasa y fosfatasa alcalina positiva3.

El género Reichenbachiella pertenece a la familia Flammeovirgaceae del

phylum Bacteroidetes1. Son células en forma de barra y presentan movimiento por

deslizamiento, son Gram negativas, producen pigmentos del tipo flexirrubin no

difusibles de color anaranjado. Son estrictamente aerobias, quimiorganotróficos;

oxidasa, catalasa y fosfatasa alcalina positivo, hidrolizan agar, gelatina, alginato,

caseína, urea, almidón, ADN y tween 204.

El género Fulvivirga se encuentra también formando parte de la familia

Flammeovirgaceae del phylum Bacteroidetes. Sus células son estrictamente

aeróbicas, Gram negativas, no formadores de endosporas, producen pigmentos no

difusibles y/o difusibles, sus colonias se caracterizan por ser brillantes de color

amarillo-marrón después de 2 días de incubación, son quimiorganotróficos, oxidasa,

catalasa y fosfatasa alcalina positiva 5.

Estudios de los géneros, mencionados anteriormente, pertenecientes a la

familia Flammeovirgaceae son en su mayoría susceptibles a carbenicilina,

doxiciclina, oleandomicina, lincomicina y tetraciclina pero resistentes a ampicilina,

bencilpenicilina, cloranfenicol, kanamicina, lincomicina, eritromicina,

estreptomicina, gentamicina, neomicina y polimixina B , entre otros.1,5,6

La clase Flavobacteriia incluye a los miembros más dominantes de los

Bacteroidetes seguidos de la clase Cytophagia2. La clase Flavobacteriia incluye

organismos Gram negativos, no formadores de esporas, quimiorfanotróficos,

aerobias o anaerobias facultativas, movimiento por deslizamiento y colonias

pigmentadas o no pigmentadas y crecen adheridas o hundidas en el agar1. Se



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encuentran en gran variedad de habitas incluyendo el agua de mar, lagos, sedimentos

marinos, hielo polar y aguas hidrotermales7. Este grupo ha sido reportado como

importante en la degradación de sustancias poliméricas en ambientes acuáticos y

frecuentemente se encuentran asociados a partículas en los océanos formando parte

del fitoplancton8.

Esta clase incluye numerosos géneros que son patógenas para peces marinos

y de agua dulce, anfibios, y otros animales marinos, o algas marinas e invertebrados,

siendo el más importante el género Tenacibaculum1.

El género Tenacibaculum comprende organismos Gram negativos, en forma

de bacilos, no formadores de esporas1, sus colonias son de color amarillo pálido o

amarillo brillante, aeróbicos, quimiorganotrofos; oxidasa, catalasa positivos y

degradan la caseína.8,9

Algunas especies del género Tenacibaculum son patógenos de peces muy

conocidos en todo el mundo y de gran importancia en la acuicultura marina, y se les

consideran como agentes etiológicos de la tenacibaculosis que viene a ser una de las

enfermedades infecciosas más devastadoras en peces marinos cultivados en el

mundo7. La patología de esta enfermedad causada por estos organismos marinos se

caracteriza principalmente por la destrucción de las células epiteliales y del tejido

conectivo, dejando la musculatura expuesta, causando de esta manera lesiones

macroscópicas en la superficie del cuerpo de los peces tales como ulceras, necrosis,

pudrición de la cola, aletas y boca erosionada 10, 11, 12, 13

Los miembros del género Tenacibaculum no solo causan enfermedades en

peces, sino también estudios recientes demuestran que han podido ser aislados de

anémonas, moluscos y algas en Taiwán, Corea y China respectivamente8, 14,15

.



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La reserva nacional de Bahía Paracas es una zona protegida del Perú ubicada

en la provincia de Pisco dentro del departamento de Ica. La reserva es una Bahía con

una gran productividad biológica, que protege y conserva muestras representativas de

la diversidad biológica de los ecosistemas marinos- costera del Perú donde algas,

artrópodos marinos, aves y peces aportan la mayor diversidad específica.

La finalidad es obtener información de los géneros que están siendo de gran

importancia ya que no se han reportado estudios en el Perú y los resultados puedan

favorecer a estudios posteriores. Dado la importancia de los miembros de estos

géneros la presente investigación tuvo como propósito determinar que géneros de

bacterias del phylum Bacteroidetes se encuentran en el sedimento marino de la

reserva Bahía Paracas Enero-Julio 2016.



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OBJETIVO GENERAL

Aislar géneros del phylum Bacteroidetes de muestras de sedimento marino de

la reserva Bahía Paracas.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Identificar la morfología de las colonias típicas, de las formas individuales y

reacción al Gram de géneros bacterianos de Bacteroidetes.

Realizar la identificación bioquímica de géneros de Bacteroidetes.

Realizar la identificación genética de géneros bacterianos de Bacteroidetes.



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II. MATERIAL Y MÉTODOS

1. MATERIAL

1.1. Material de estudio

Sedimento marino de la zona intermareal de la Reserva Bahía

Paracas.

2. PROCEDIMIENTO

2.1 Toma y recolección de muestras

Las muestras fueron tomadas de 25 puntos diferentes de la reserva

Bahía Paracas, obteniéndose una muestra de sedimento marino por

cada punto. La muestra fue tomada del área intermareal17

a 0,5 cm de

profundidad conteniendo material orgánico y se depositaron en tubos

estériles debidamente codificados. Estas fueron transportadas a

temperatura ambiente al Laboratorio de Farmacología, Facultad de

Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.

2.2 Preparación de parches de E. coli

Se sembró E. coli XL1Blue en 250 ml del medio de cultivo Luria

Bertani (LB)19

y se incubó a 37 °C en agitación a 130 rpm durante 48

horas. Después se centrifugó a 4 000 rpm por 5 minutos, se eliminó el

sobrenadante y, se resuspendió las células en 4 ml de agua destilada

estéril. Luego en tres puntos diferentes de la superficie del agar agua



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de mar artificial (ASW-WCX agar)18

se colocaron 40µl de la

suspensión en cada punto (parches-spot)20

.

2.3 Aislamiento de géneros bacterianos de Bacteroidetes

Cada muestra de sedimento marino fue colocada en los tres parches

circulares de E. coli XL1Blue en placas ASW-WCX agar. La

incubación se llevó cabo a 30 °C por 48 horas y las placas fueron

observadas con un estereoscopio para observar el crecimiento de las

colonias características. Inmediatamente se seleccionaron las colonias

que presentaron las características morfológicas, colonias de 1-2 mm

de diámetro con bordes irregulares, pigmentadas, adheridas al agar y

seguidamente se realizó la tinción Gram para verificar la presencia de

bacilos gramnegativos. Las colonias que presentaron las

características mencionadas fueron subcultivadas en agar VY/419

e

incubadas de 3-5 días a 30 °C para obtención de cultivo puro.1,20

(Anexo 1)

2.4 Identificación bioquímica géneros bacterianos de Bacteroidetes

Para la identificación bioquímica se realizaron las pruebas de oxidasa,

catalasa, hidrólisis de caseína, gelatina, almidón, celulosa, tween 20,

40 y 80.1,21



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2.5 Identificación genética de géneros bacterianos de Bacteroidetes por

secuenciamiento de 16S ADNr

La identificación genética se realizó por secuenciamiento de genes

16S ADNr en el laboratorio de la Universidad de Bonn -Alemania.

El ADN genómico se aisló con el kit de purificación de ADN

Promega de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

La amplificación del 16S ADNr se realizó por PCR utilizando los

primers pA (5'AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3') y pH

(5'AAGGAGGTGATCCAGCCCCA3'). (Anexo 2)



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III. RESULTADOS

Los resultados obtenidos en la presente investigación se reportan en las

siguientes tablas:

Se muestra el número total de muestras de sedimento marino trabajados, el

porcentaje de muestras positivas y negativas al aislamiento de géneros de

Bacteroidetes de la reserva Bahía Paracas. Enero-Julio 2016, en esta tabla permite

observar que del 100% de muestras trabajadas (25) el 40% de muestras resultaron ser

positivas al aislamiento de géneros del phylum Bacteroidetes. (Tabla 1)

Se observa el número de cultivos de Bacteroidetes aislados según morfología

de colonias, morfología individual y reacción al Gram en 10 muestras positivas de

sedimento marino de la reserva Bahía Paracas. Enero – Julio 2016, que pone de

manifiesto que los cultivos aisladas presentaron la caracterización típica de la

morfología de las colonias, morfología individual y reacción al Gram de los géneros

en estudio. (Tabla 2)

Se muestra el número de cultivos de Bacteroidetes aislados según pruebas

bioquímicas en 10 muestras positivas de sedimento marino de la reserva Bahía

Paracas. Enero-Julio 2016, donde se puede observar que la identificación bioquímica

de los cultivos en estudio corresponde a los géneros del phylum Bacteroidetes.

(Tabla 3)

Se observó el número de cepas de géneros de Bacteroidetes aislados según

identificación genética (16 ADNr) en 10 muestras positivas de sedimento marino de



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la reserva Bahía Paracas. Enero-Julio 2016, que pone de manifiesto aislamiento de

cuatro géneros del phylum Bacteroidetes.(Tabla 4)

Tabla 1. Número total de muestras de sedimento marino trabajados, porcentaje de

muestras positivas y negativas al aislamiento de géneros de Bacteroidetes de la

reserva Bahía Paracas. Enero-Julio 2016

Muestras Ni de muestra fi (%)

Positivos

Negativos

10

15

40

60

Total 25 100

Ni : cantidad de nuestras analizadas

fi : porcentaje



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Tabla 2. Número de cultivos de Bacteroidetes aislados según morfología de

colonias, morfología individual y reacción al Gram en 10 muestras positivas de

sedimento marino de la reserva Bahía Paracas. Enero – Julio 2016

Numero

cultivos

Aislados

Código

cultivos

Aislados

Cultivos de género de Bacteroidetes

Morfología Morfología

individual

Gram

1 BP-23

Colonias

amarillas, bordes

irregulares Bacilos Negativos

1 BP-17

Colonias amarillo

oscuro, bordes

irregulares,

brillosas Bacilos Negativos

2

BP-1

BP-22

colonias amarillas

claros, bordes

irregulares,

convexas

Bacilos Negativos

2

BP-8

BP-16

Colonias

amarillas, bordes

irregulares,

convexas,

brillantes

Bacilos Negativos

2

BP-9

BP-25

Colonias

anaranjadas,

bordes

irregulares,

deslizantes

Bacilos Negativos

2

BP-12

BP-14

Colonias

anaranjadas,

bordes irregulares Bacilos Negativos

BP-1: Bahía Paracas - cultivo Nº 1(de la muestra Nº1)



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Tabla 3. Número de cultivos de Bacteroidetes aislados según pruebas bioquímicas en 10 muestras positivas de sedimento

marino de la reserva Bahía Paracas. Enero-Julio 2016

Nº de

cultivos

aislados

Código de

cultivos

aislados

PRUEBAS BIOQUIMICAS

Almidón Caseína Celulosa Tween

20

Tween

40

Tween

80

Oxidasa Catalasa Gelatina

3

BP-1

BP-8

BP-16

+ + - - - - + + +

3

BP-9

BP-23

BP-25

+ + - - - - + + +

2 BP-12

BP-14 + - + + + + + + -

1 BP-17 + + - + - - + + +

1 BP-22 + + - + - - + + +

BP-1: Bahía Paracas - cultivo Nº 1(de la muestra Nº1); (+): reacción positiva;(-): reacción negativa



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Tabla 4. Número de cepas de géneros de Bacteroidetes aislados según identificación

genética (16 ADNr) en 10 muestras positivas de sedimento marino de la reserva

Bahía Paracas. Enero-Julio 2016

BP-1: Bahía Paracas - cultivo Nº 1(de la muestra Nº1)

Nº DE CEPAS CÓDIGO DE

CEPAS

IDENTIFICACION GENETICA

(16S ADNr)

1 BP-1 Tenacibaculum sp. KK1.21.3

3

BP-8

BP-16

BP-22

Tenacibaculum sp. sw0106-03(3)

1 BP-12 Reichenbachiella sp.

1 BP-14 Reichenbachiella sp. strain NBRC

16625

1 BP-9 Marivirga sp.

2 BP-23

BP-25

Marivirga sp. DSM 4126

1 BP-17 Fulvivirga sp



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IV. DISCUSIÓN

La distribución de las bacterias del phylum Bacteroidetes es muy extensa en

el suelo pero también podemos encontrarlas en el mar en las zonas templadas,

tropicales o polares siendo estas poco estudiadas. Se realizaron estudios analizando

comunidades microbianas en el sedimento marino encontrando predominio de

Bacteroidetes en un 3,5 a 5% de las muestras tomadas de la superficie del mar del

norte de Alemania, así mismo, en presente trabajo se demuestra que se encontró un

40 % de muestras positivas de 25 muestras tomadas en la superficie del sedimento

marino de la reserva de bahía paracas (Tabla 1), el porcentaje de las muestras

positivas se debe a la biodisponibilidad de la materia orgánica presente en el lugar el

cual desempeña un papel muy importante en la determinación de este phylum. En los

sedimentos marinos superficiales, la materia orgánica es fácilmente degradable

siendo utilizada preferentemente por los Bacteroidetes , ya que la materia orgánica

detrítica sirve como una fuente principal de energía para estos microorganismos que

ahí habitan.1,2

De acuerdo con la tabla 2 las características morfológicas de las colonias

aisladas resultaron ser un paso importante para poder diferenciar de otras

comunidades microbianas presentes en este hábitat. Las colonias amarillas oscuras,

brillosas y con bordes irregulares aisladas, presentaron la morfología típica al género

Fulvivirga que es perteneciente al phylum estudiado, se realizo estudios en las costas

del mar de la India aislando colonias con las mismas características encontradas en

el aislamiento de este trabajo, por otro lado los estudios en sedimento marino de un

criadero de mejillones (ostras) en China, logrando aislar Bacteroidetes del mismo



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género con presencia de colonias amarillas oscuras, brillantes con bordes irregulares,

debiéndose la coloración oscura a el periodo de incubación entre 4 a 7 días.1,5,16

Otras colonias características son las colonias anaranjadas con bordes

irregulares que por sus características estarían relacionadas con el género Marivirga,

al igual que en los estudios realizados en el océano atlántico, se aisló colonias

anaranjadas de agua de mar con la diferencia que presentaban bordes circulares y

eran convexas, también aisló colonias anaranjadas en China y encontró también

variantes con pigmentación blanquecina o amarillenta, las variaciones de

pigmentación blanquecinas no se encontraron en el presente trabajo, sin embargo las

colonias con pigmentación amarillenta si fueron encontradas. Las colonias

anaranjadas con bordes irregulares también es la morfología típica del género

Reichenbachiella según estudios las colonias de Reichenbachiella agariperforans

son colonias anaranjadas con bordes irregulares las cuales fueron aisladas de

sedimento marino en Korea. La diferencia entre las colonias de Marivirga y las de

Reichenbachiella en el medio de cultivo es el poder deslizante que presentaron las

colonias del género Marivirga mientras que las de Reichenbachiella no lo

presentan.4,6,22,23

Las colonias amarillas claras, amarillas con bordes irregulares, convexas y

brillantes aisladas en el trabajo están ligadas a las características morfológicas del

género Tenacibaculum, de acuerdo con estudios realizados en sedimento marino de

las costas del pacifico se aisló colonias con las siguientes características:

amarillentas, amarillo pálido, amarillo brillantes, al igual que las colonias amarillas

pálidas aislada del sedimento marino del mar de Korea. Estudios posteriores también



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indican el aislamiento de este género a partir de criaderos de ostras, lo cual

concuerda con la presente investigación realizada, ya que algunas de las muestras de

trabajadas de sedimento marino contenían restos de ostras las cuales se usaron en la

siembra.12,14

En lo relacionado a la identificación bioquímica, esta basada al sometimiento

de los cultivos a diversas pruebas que después de las lecturas positivas o negativas

permiten una identificación presuntiva de cada género lográndose así una probable

ubicación del cultivo.1

El aislamiento de bacterias del género Tenacibaculum se debe a que estas

bacterias se encuentran circulando en ambientes marinos, en los que pueden

descomponer la materia orgánica y por presentar la capacidad para degradar una

variedad de biopolímeros, tales como diversos derivados de celulosa, xilano, agar, y

quitina presentes en el sedimento marino.1,11

A través de la identificación genética por secuenciamiento del 16S ADNr,

que es muy utilizada por ser rápida y sencilla7, se logró identificar cuatro géneros del

phylum Bacteroidetes entre ellos Fulvivirga sp., Marivirga sp., Reichenbachiella sp.

y Tenacibaculum sp. las cuales cumplieron con las características morfológicas y

bioquímicas en la identificación preliminar.

Algunos géneros del phylum Bacteroidetes como son Fulvivirga sp.,

Marivirga sp. y Reichenbachiella sp. son aisladas e identificadas de sedimento

marino por que presentan resistencia a diferentes medicamentos como a la

gentamicina, ampicilinas, kanamicina, polimixina B, penicilina, estreptomicina y son



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escasos los estudios realizados para demostrar su capacidad patogénica, sin embargo

existen estudios más avanzados en lo que concierne al género Tenacibaculum sp que

tratan de demostrar la patogenicidad de especies de este género en peces y estudios

recientes lo reportan en anemonas , criaderos de ostras y mejillones. 1,24



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V. CONCLUSIÓN

En las condiciones trabajadas se logró aislar 4 géneros siendo estos

Fulvivirga sp., Marivirga sp. Reichenbachiella sp. y tenacibaculum sp.del phylum

Bacteroidetes en muestras de sedimento marino de la zona intermareal de la reserva

Bahía Paracas.



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ANEXOS



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ANEXO 1

FIGURA 1. Crecimiento de las colonias del phylum

Bacteroidetes en agar ASW-WCX



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Figura 2. Crecimiento de las colonias del phylum Bacteroidetes en agar

VY/4



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Figura 3. Coloración Gram de bacterias pertenecientes al phylum

Bacteroidetes



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ANEXO 2

IDENTIFICACION GENETICA DE LAS BACTERIAS AISLADAS

Cepa BP- 1: Tenacibaculum sp. KK1.21.3

taccctaggcngctccttgcggtaaccgacttcaggcacccccagcttccatggcttgacggcggtgtgtac

aaggcccgggaacgtattcaccggatcatggctgatatccgattactagcgattccagcttcacggagtcga

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aaggtatctctacccctatcactctacatttaagccctggtaaggttcctcgcgtatcatcgaattaaaccacatg

ctccaccgcttgtgcgggcccccgtcnaattcctttgagtttcaatcttgcgatcgtactccccaggtgggaca

cttatcactttcgcttagtcactgagacaaatcccaacaactagtgtccatcgtttacggcgtggactaccagg

gtatctaatcctgttcgctccccacgctttcgtccatgagcgtcagtatatacgtagtagactgccttcgcaatc

ggtattctaagtaatatctatgcatttcaccgctacactacttattctatctacttccgtatnactcaagtcaaccag

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cttacagtaccgtcagtactctacacgtagagcagtttcttcctgtataaagcagtttacaacccatagggcagt

cttcctgcacgcggcatggctggttcagagttgcctccattgaccaatattcctcactgctgcctcccgtagga

gtctggtccgtgtctcagtaccagtgtgggggataatcctctcagacccctacctatcgttgccatggtaagcc

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Cepa BP- 9: Marivirga tractuosa DSM 4126,

ccgaattcgtcgacaacagagtttgatcctggctcaggatgaacgctagcggcaggcctaatacatgcaagt

cgaacggtaacatatccgcttgcggatgatgacgagtggcgcacgggtgcgtaacgcgtatgcaacctacc

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ctagagatagaacgttccttcgggacaaggtgcaaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgccgtgaggt

gttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccctattcttagttgccagcacataatggtggggactctaggaa

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ctcagttcggattggggtctgcaactcgaccctatgaagttggaatcgctagtaatcgcgtatcagcaatgac

gcggtgaatacgttcccggaccttgtacacaccgcccgtcaagccatggaagttgggaggacctgaagac

ggttgccgcaaggcgctgtttagggttaaaccagtaactagggctaagtcgtaacaaggtagccgtaccgg

aaggtgtggctggatcacctccttaagcttgatcccgggaattcccgcggccanngcggccgagc

Cepa BP- 12: Reichenbachiella agariperforans strain NBRC 16625

tttgatcctggctcaggatgaacgctagcggcaggcctaatacatgcaagtcgaggggcagcatgagtactt

gtacttgatggcgaccggcgcacgggtgcgtaacgcgtatgcaacctacccattactggaggatagcccgg

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gtaaacgatgctcactcgatgtatgcgatattacagtatgcgtccaagcgaaagcgttaagtgagccacctgg

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cggacgtgaaacaaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgccgtgaggtgttgggttaagtcccgcaac

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agggttataccagtaactagggctaagtcgtaacaaggtagccgtaccggaaggtgcggctggatcacctc

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Cepa BP-17: Fulvivirga sp. MOLA 70

gaggtgatccagccgcaggttcccctagggctaccttgttacgacttcaccccagtcgctgagcctacgtggt

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ggcttatcaccggcagtccccctagagtgcccaactgaatgctggcaactaagggcgagggttgcgctcgtt

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