pract. # 4 inoculacion virus en huevo embrionado

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PRACTICA Nro. …. CULTIVO DE VIRUS EN

HUEVO EMBRIONADO

ANTECEDENTESEn la década del 50, el hospedador estándar paracultivo de muchos virus fue el huevo embrionado degallina.

A pesar que actualmente esta técnica ha sidosustituida por cultivos celulares, continua usándosepara aislamiento y producción de vacunas

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO

MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA II

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AIZLAMIENTO/IDENTIFICACION

DE VIRUS- SISTEMAS VIVOS

Cultivo celular

Huevos embrionadosAnimales

-EFECTOS

Efecto citopatico ECPEnfermedad/muerte

Hemoaglutinacion

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Métodos de propagación

Huevos embrionados

• Este sistema se usa para propagación viral confines diagnósticos y de investigación.

• Para fines diagnósticos la inoculación deanimales es un medio para detectar virus enmuestras clínicas, como el virus de la rabia enratones lactantes. 

• Actualmente el uso de animales experimentalescomo hospederos para propagación viral estálimitado por razones éticas.

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• La membrana coreoalantoidea y el sacoamniotico son sustratos adecuados ysensibles para el crecimiento de muchos

poxvirus, virus de la influenza.

• El alantoides permite obtenerrendimientos elevados del virus de la

influenza y newcastle.

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ALGUNOS EJEMPLOS DE CULTIVO DE VIRUSEN HUEVOS EMBRIONADOS

VIA DE INOCULACION VIRUS SIGNOS DECRECIMIENTO

Saco vitelino Virus de la bronquitis

V. de la encefalomielitis

Enanismo del embrión

Encefalitis

Membranacoreoalantoidea

Ortopoxvirus Pústulas

Amniotica Virus influenza Hemoaglutinación

Alantoidea Virus influenzaV. Del Newcastle

Hemoaglutinación

Intravenosa V. De la lengua azul Muerte del embrión

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OBJETIVOS

Familiarizar al estudiante con las técnicas de inoculación de

agentes virales en huevos embrionados

MATERIALES:• Huevos embrionados de 6 a 11 días

• Jeringa de tuberculina.

• Estufa.

• Incubadora

• Algodón.

• Cera o parafina

• Muestras de virus en dilución

• Mechero bunzen

• Ovoscopio casero

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METODO DE INOCULACION DE LOS VIRUS• Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 días

de incubación (verificar por transluminación)• Ordene los huevos en el soporte, con la cámara de

aire hacia arriba, rotular.• Con algodón embebido de alcohol desinfectar

• Perfore con un punzón al centro de la cámara deaire.

• Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material ainocular de la dilución preparada.

• Con el huevo sobre la lampara, inserte la aguja endirección del objetivo.• Retire la aguja del huevo y selle el orificio con

parafina u otro materia no toxico.•

Incube los huevos inoculados a 33 ºC por tres días. 

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1.-Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 días deincubación (verificar por transluminación) 

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2.- Ordene los huevos en el soporte, con la cámara de airehacia arriba, rotular.

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Virologia (AV):

Inoculación of

huevos

embrionados

Con algodón embebido de alcohol desinfectarPerfore con un punzón al centro de la cámara de aire.

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- Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material ainocular de la dilución preparada.- Con el huevo sobre la lampara, inserte la agujaen dirección del objetivo.

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7.1.- Miraje durante la incubación:1. Ninguna señal de desarrollo = huevo no fértil.2. Fértil con vasos sanguíneos.

3. Mancha roja o negra = muerto precozmente.4. Embrión con anillo rojo = muerto precozmente.5. Embrión vivo con el pico en la cámara de aire = eclosión dentrode 48 horas.6. Evolución normal de la cámara de aire en función de los díasde incubación

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