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UNIVERSIDAD DE COLIMA
PROGRAMA INTERINSTITUCIONAL EN CIENCIAS PECUARIAS
Título de la Tesis
TRANSMISIÓN VERTICAL/HORIZONTAL DE Neospora caninum EN UN HATO INFECTADO NATURALMENTE
Para obtener el grado de
DOCTORADO EN CIENCIAS PECUARIAS
Presenta
MC. LETICIA ESPERANZA MEDINA ESPARZA
Director de Tesis
DR. CARLOS R. CRUZ VÁZQUEZ
Comité tutorial
DR. TEÓDULO QUEZADA TRISTÁN DR. ARTURO VALDIVIA FLORES
DR. ALFONSO PESCADOR RUBIO DR. ISIDORO GUAJARDO HERNÁNDEZ
Tecomán, Col., Enero 2008
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POSGRADO INTERINSTITUCIONAL EN CIENCIAS PECUARIAS
Título de la Tesis
TRANSMISIÓN VERTICAL/HORIZONTAL DE Neospora caninum EN UN HATO INFECTADO NATURALMENTE
Para obtener el grado de
DOCTORA EN CIENCIAS PECUARIAS
Presenta
MC. LETICIA ESPERANZA MEDINA ESPARZA
Director de Tesis
DR. CARLOS R. CRUZ VÁZQUEZ
Comité tutorial
DR. TEÓDULO QUEZADA TRISTÁN DR. ARTURO VALDIVIA FLORES
DR. ALFONSO PESCADOR RUBIO DR. ISIDORO GUAJARDO HERNÁNDEZ
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D e d i c a t o r i a
A Dios:
Por darme la oportunidad de vivir para lograr cada uno de
mis objetivos.
A mi Hijo:
Gilberto Eduardo, por tu apoyo incondicional, haber sido mi
fortaleza y estar conmigo durante todo este proceso, te amo.
A mis padres:
José†y Margarita†, siempre los recordaré.
A mis hermanos:
Socorro, Triny, Chepe, Mary, Mely, por su apoyo y
confianza en mí.
iv
A G R A D E C I M I E N T O S
A la Secretaría de Educación Pública, que a través de la Dirección General de
Educación Superior Tecnológica que permitió la realización de mis estudios de
Doctorado.
A las autoridades del Instituto Tecnológico El Llano Aguascalientes, por las
facilidades necesarias para la realización de mis estudios, así como el uso de sus
instalaciones para el desarrollo de este trabajo.
A mi director de Tesis, Dr. Carlos R. Cruz Vázquez por su confianza y apoyo para
lograr mis objetivos.
A los Doctores Teódulo Quezada Tristán, Arturo Valdivia Flores, Isidro Guajardo
Hernández y Alfonso Pescador Rubio, por todo el apoyo incondicional y orientación
que me brindó durante el desarrollo de este trabajo.
Al MVZ. Daniel Quezada Gallardo propietario del Rancho el Tepetatillo, por su apoyo
decidido y constante durante la planeación y desarrollo del presente trabajo.
A Elda y Yolanda, por su apoyo incondicional y el estimularme a lograr mis
objetivos.
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I N D I C E
Número Contenido Página INDICE DE FIGURAS i INDICE DE CUADROS ii RESUMEN iii ABSTRAC iv
1 INTRODUCCIÓN 1 1.1. JUSTIFICACION 3 1.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 4
2 ANTECEDENTES 5 2.1. GENERALIDADES DE LA ENFERMEDAD 5
2.1.1. Ubicación taxonómica y diferenciación con otras coccidias 6
2.2. CICLO DE VIDA Y RUTAS DE TRANSMISIÓN 8 2.3. SIGNOS CLÍNICOS Y PATOGENESIS 12 2.4. DIAGNÓSTICO DE LA ENFERMEDAD 15 2.5. EPIDEMIOLOGÍA DE LA ENFERMEDA 19
3 HIPOSTESIS 20 4 OBJETIVOS 21 3.1. OBJETIVO GENERAL 21 3.2. Objetivos Particulares 21
5 METODOLOGIA 22 5.1. UBICACIÓN DEL ESTUDIO 22 5.2 . SELECCIÓN DEL ESTABLO 22 5.3. DISEÑO DEL TRABAJO 23 5.3.1. Seguimiento serológico del grupo de cohorte 24 5.3.2. Seguimiento serológico del las crías nacidas 24 5.3.3. Pruebas diagnosticas 24 5.3.4. Diagnostico serológico en perros 26
5.3.5 Parámetros reproductivos y productivos de los animales del grupo de cohorte. 26
5.4. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS 26 6 RESULTADOS 28 6.1 Selección del establo 28
vi
6.2 Evaluaciones serológicas 29 6.3 Evaluaciones serológicas de las crías nacidas 32
6.4 Porcentaje de abortos del grupo de cohorte (n=40) 34
6.4.1 Análisis de riesgos 35 6.5 Resultados del PCR en fetos abortados 36 6.6 Pruebas diferenciales en las hembras abortadas 39 6.7 Prueba serológica en perros de la zona 39 6.8 Comportamiento reproductivo 39 6.8.1 Número de días abiertos 38 6.8.2 Servicios por concepción 40 6.8.3 Intervalo entre parto-estro 41 6.8.4 Intervalo parto parto 42 6.9 Comportamiento productivo 43
7 DISCUSIÓN 46 8 CONCLUSIONES 54 9 REFERENCIAS 55
vii
ÍNDICE DE FIGURAS
Número Nombre Página
2.2.1. Propuesta de la transmisión de la Neosporosis (Dubey, Buxton y Wouda, 2006) 9
2.4.2 Diagrama para el diagnostico de abortos asociados a N. caninum (Dubey y Schares 2006) 16
5.1.1. Ubicación geográfica del establo en estudio 22
6.2.1. Incidencia mensual a N. caninum durante los 7 períodos de seguimiento 31
6.3.1. Prevalencia a N caninum en becerras del grupo de animales seronegativos durante la primera gestación 33
6.3.2. Prevalencia a N caninum en becerras del grupo de vacas seronegativas durante la segunda gestación 33
6.3.3. Prevalencia a N. caninum en crías nacidas dentro de los grupos seropositivos y seronegativos 34
6.5.1. Fotografía del gel de agarosa al 2.5%, que muestra las bandas a 146 pares de bases, de los casos positivos a la N. caninum
37
6.5.2.
Fotografía de tejido nervioso (cerebro) de un feto abortado a los 5 meses de edad, con lesiones típicas asociadas a la infección con N. caninum, la flecha muestra la necrosis focal e infiltración de células mononucleares. (tinción H-E 10X)
37
6.5.3.
Fotografía de tejido nervioso (cerebro) de un feto abortado a los 5 meses de edad, con lesiones típicas asociadas a la infección con N. caninum, la flecha muestra la necrosis focal e infiltración de células mononucleares. (tinción H-E 40X)
38
6.8.1.1. Promedios de los días abiertos de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a la N. caninum 40
6.8.2.1. Servicios por concepción en los grupos de animales seronegativos y seropositivos a la N. caninum 41
6.8.3.1. Días intervalo parto-estro de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum (Media ± DE) 42
6.8.4.1. Intervalo parto-parto de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum (Media ± DE) 43
6.9.1. Producción media individual de leche ajustada a 305 días de los grupos seronegativos y seropositivos a N. caninum 44
6.9.2. Producción media de leche total de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum 44
6.9.3 Producción de leche total de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum 45
viii
ÍNDICE DE CUADROS
No. Nombre Página
6.2.1. Incidencia mensual a N. caninum al cohorte (n=40) bajo estudio durante un periodo de 32 meses 29
6.3.1. Prevalencia a N. caninum en becerras nacidas en la cohorte (n=40) bajo estudio durante un periodo de 32 meses
32
6.4.1. Frecuencia de abortos de los animales seronegativos y seropositivos durante los 32 meses de observación 34
6.5.1. Resultados de las técnicas de histopatología y PCR a los cerebros recuperados de los animales abortados 37
ix
RESUMEN
Transmisión Vertical/Horizontal de Neospora caninum en un Hato Infectado Naturalmente.
Medina Esparza Leticia Esperaza, Cruz Vázquez Carlos Ricardo, Quezada Tristán Teódulo, Valdivia Flores Arturo, Pescador Rubio Alfonso, Guajardo Hernández Isidoro. Neospora caninum es un protozoario perteneciente al phylum Apicomplexa, dicho parásito produce comunmente una infección natural en perros y ganado, actualmente es considerado como la principal causa de aborto en el mundo. El objetivo del estudio fue determinar la transmisión vertical y horizontal de la infección por Neospora caninum en ganado lechero infectado naturalmente en una zona endémica, así como su influencia en la producción de leche y en los parámetros reproductivos, Es un estudio de cohorte longitudinal, se llevó a cabo en un hato productor de leche en la región lechera de Aguascalientes, Mex., para su realización se eligieron 20 animales seronegativos y 20 seropositivos a N. caninum, realizando muestreos mensuales durante dos gestaciones, para observar si existió algún cambio en su seroestatus hasta la ocurrencia del parto o el aborto. Las crías nacidas de las hembras se muestrearon mensualmente. En caso de la ocurrencia del aborto, se recuperó el cerebro del feto abortado para practicarles pruebas de histopatología, PCR y en las hembras abortadas se realizaron pruebas serológicas diferenciales con otras enfermedades reproductivas, como, brucelosis, diarrea viral bovina, rinotraqueitis viral bovina y leptospirosis. A las hembras paridas se registro la producción de leche mensualmente, así como su comportamiento en los parámetros reproductivos. Los resultados obtenidos en el grupo de animales seronegativos a N. caninum presentó cambios en su seroestatus observando una incidencia durante el periodo de estudio fue del 31.25%. La prevalencia observada en las becerras durante los periodos de estudio que fue desde el 6.6% hasta el 80%. En los 19 abortos recuperados el 73.6% de las muestras fueron positivas a N. caninum mediante la prueba de PCR debido a la presencia de ADN mediante la banda característica a 146pb, y con la técnica de histopatología el 36.8% de las muestras presentaron las lesiones características a N. caninum. Los factores de riesgos analizados, con respecto a la asociación del seroestatus positivo y la ocurrencia del aborto el riesgo relativo obtenido fue de 2.2 y el odds ratio fue de 3.7. Los resultados de días abiertos la media obtenida fue de 118.5 días la diferencia entre los dos grupos, servicios por concepción hasta de 4.1 en el grupo seropositivo, intervalos entre parto-estro el promedio fue de 57.4 días, con respecto a la producción de leche se observó una diferencia de 14072 kg entre ambos grupos. Se concluyó que la transmisión vertical o endógena y la transmisión horizontal o exógena contribuyen de manera similar en la permanencia de N. caninum en el hato en estudio. Concluyendo que debido al estado endémico y la alta prevalencia en el hato se explica por la contribución tanto de la transmisión vertical o endógena como de la horizontal o exógena, ambos de similar valor epidemiológico. Aborto, neosporosis bovina, rutas de transmisión.
x
ABSTRACT
Vertical and horizontal transmission of Neospora caninum infection present on natural infected cattle. Medina Esparza Leticia Esperaza, Cruz Vázquez Carlos Ricardo, Quezada Tristán Teódulo, Valdivia Flores Arturo, Pescador Rubio Alfonso, Guajardo Hernández Isidoro. The protozoan Neospora caninum, (Phylum Apicomplexa) which causes abortion on cattle around the world, is found naturally on dogs and other animal species, mainly in cattle. Since this disease is endemic on Aguascalientes State, the goal of this study was to detect both the vertical and the horizontal transmission of Neospora caninum on milking cows naturally infected, as well as its influence on milk production and reproductive parameters. To accomplish this goal, the first study was done on 20 serologically N. caninum-positives and 20 serologically negatives. Sampling was done monthly during two periods of gestation, checking for the changes on serological status until birth or abortion. Newborns were checked monthly. On abortive cases, brains from the fetuses were collected in order to make both histopathological and PCR tests. Abortive cows were also tested for Brucella abortus, Viral bovine diarrhea, Infectious bovine rhinotracheitis and Leptospyra. Cows with newborns were tested for milk production, and reproductive behavior indicators such as: non-copulating period, intercourse times, birth-to-heat period and birth-to-birth period. Originally serological negatives showed a decrease since 31.2% got the infection. Prevalence of this disease on newborns ranged from 6.6 up to 80%. Additionally, from a sample of 19 abortions, 73.6% were N. caninum-positive according to the PCR test checking for a 146 bp DNA band, while histopathological tests showed only a 36.8% from the same total. Relative risk associated to positive serological status was 2.20 and the rate of mummy appearance was 3.7. The non-copulating mean period was 118.5 days, but there was a difference of 4.1 days between the positive and negative groups. The difference between these groups was of 57.4 days for the birth-to-heat period. Milk production differed by 14,072 kg between both groups. The overall conclusion was that both vertical as well horizontal transmission of N. caninum play similar epidemiologic role due to the endemic nature of the disease and the high prevalence on cattle herds from Aguascalientes State. Abortion, bovine neosporosis, transmission pathways
xi
1
1. INTRODUCCIÓN
A pesar de los esfuerzos realizados por los gobiernos federal, estatal y municipal en
asociación con los productores del sector lechero para invertir recursos económicos
destinados al desarrollo y fortalecimiento de la ganadería bovina lechera en México,
se sigue presentando un déficit importante en las necesidades de leche. Lo anterior,
aunado a la gran diversidad que existe en los sistemas de producción lechera,
además de la presencia de una serie de trastornos en la salud animal que provocan
una disminución importante en la producción de leche, entre las cuales se
encuentran enfermedades digestivas, metabólicas, respiratorias, endocrinas y
reproductivas (SAGARPA, 2005).
Las enfermedades reproductivas, ya sean de origen viral, bacteriano, micótico y
parasitario, representan gran importancia económica en las unidades de producción
lechera, por las severas pérdidas que estas ocasionan, así como por sus efectos
sobre el tracto reproductivo de las hembras, lo que ocasiona la interrupción de la
gestación, disminución de la producción de leche y el aumento en el número de
desechos de los animales afectados. Entre las enfermedades infecciosas de los
bovinos, que se manifiestan clínicamente con el aborto, se encuentran la brucelosis,
tuberculosis, leptospirosis, diarrea viral bovina y rinotraqueitis viral bovina (Vitela,
1999). Dentro de las enfermedades con etiología parasitaria actualmente la de
mayor importancia en los hatos lecheros es la neosporosis.
La neosporosis bovina es una enfermedad reproductiva producida por el protozoario
Neospora caninum, donde el perro y el coyote se consideran hospedadores
definitivos, que a la vez estos juegan un papel muy importante en la epidemiología
de la infección. Así mismo, se han considerado como hospedadores intermediarios a
otros caninos domésticos y salvajes, felinos, bovinos, ovinos, caprinos, búfalos,
ciervos y equinos (Dubey, 1999).
La neosporosis actualmente es considerada como cosmopolita, ya que se puede
encontrar presente en grandes extensiones ganaderas alrededor del mundo. Los
abortos endémicos debido a N. caninum presentan tasas de abortos superiores
2
al 20% a lo largo de varios años, mientras que, los abortos epidémicos, pueden
llegar a ocurrir desde el 20% al 30% en dos semanas. La prevalencia por la
neosporosis ha sido reportada desde 1% al 58% e inclusive mayores a estos valores
(Dubey, 2003).
La neosporosis es más frecuente en ganado lechero estabulado, con tendencia
estacional hacia el invierno, en vacas de todas las edades, con abortos repetitivos,
asociado a la presencia de perros en los establos, como una enfermedad que puede
volverse recurrente.
Se ha considerado que la existencia de reacciones serológicas positivas a la
presencia de anticuerpos a N. caninum significan la existencia del contacto con el
parásito. Las vías de infección juegan un papel determinante en la epidemiología; se
reporta que la N. caninum puede ser trasmitido al feto a través de la placenta
causando una infección congénita en el mismo o bien, después del nacimiento el
recién nacido puede adquirir la infección con N. caninum (MacAllister et al., 1998).
En México, se han realizado pocos estudios que hagan referencia a la prevalencia
de los casos de neosporosis bovina en el ganado lechero en los diferentes sistemas
de producción. Estudios epizootiológicos realizados en México en tejidos fetales
abortados, reportan una prevalencia del 35%, mientras que la frecuencia de
anticuerpos anti-N. caninum alcanza valores del 51.8% en perros de establo,
infiriéndose que los perros en los establos están íntimamente ligados a un riesgo alto
a la exposición al parásito. Otros estudios realizados sobre la seroprevalencia a N.
caninum en hatos lecheros de Aguascalientes han reportado valores mayores o
iguales al 50% (Medina et al., 2006).
Por lo anterior, en el presente estudio se planteo como objetivo la determinación de
la transmisión vertical y horizontal de la infección por Neospora caninum en ganado
lechero infectado naturalmente en una zona endémica, así como su influencia en la
producción de leche y en los parámetros reproductivos.
3
1.1. JUSTIFICACIÓN
La neosporosis bovina es una enfermedad que tiene actualmente un impacto
económico importante dentro de la ganadería lechera del país especialmente por los
abortos a diferentes edades de gestación, efectos sobre parámetros reproductivos,
los programas de reemplazos y de la producción de leche. A pesar de que la
enfermedad ha sido reportada desde 1997, a la fecha, se cuenta con poca
información del estado epidemiológico en México en los hatos lecheros del país.
El estado de Aguascalientes, ocupa el octavo lugar en la producción a nivel nacional
de leche de bovino, con un volumen de 1.14 millones de litros diarios producto de
71501 cabezas de ganado bovino lechero, donde el sistema de producción intensiva
(tecnificado) aporta el 76.4% de la producción total.
Algunos estudios realizados a la fecha nos indican que la es endémica presencia de
esta enfermedad en la cuenca lechera de Aguascalientes, por lo que se considera
de gran importancia realizar de estudios orientados a incrementar la información
para conocer más sobre los mecanismos de la transmisión vertical y horizontal de la
neosporosis; así como, el estudio de algunos de los factores de riesgo que participan
en la epidemiología de la neosporosis en los hatos lecheros y el efecto de éstos en
la producción de leche y la reproducción de las vacas lecheras afectadas. De igual
manera, dado a que uno de los elementos indispensables para el diseño de las
estrategias de control, se considera al conocimiento de los mecanismos de
transmisión de las enfermedades; para el caso de la neosporosis bovina, no se
conoce suficientemente su cadena epidemiológica esto es debido a que aun existen
aspectos importantes que aun no han sido debidamente identificados con respecto a
este problema. El ampliar el conocimiento de algunos de estos mecanismos de
transmisión propuestos, el conocer cual o cuales de éstos factores pudieran
presentar un mayor impacto sobre de forma directa e indirecta en la manifestación
del problema en las explotaciones de ganado lechero, permitirá establecer
estrategias y acciones orientadas a la prevención, control y, de ser posible, a la
erradicación del problema, que beneficien de manera integral la producción en las
explotaciones de ganado lechero mediante la mejora de sus parámetros
productivos.
4
1.2 . PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Los estudios realizados actualmente sobre la Neosporosis bovina en México y
especialmente en Aguascalientes, han mostrado una alta prevalencia de la
presencia del parásito en los hatos lecheros, con la consecuencia de una elevada
manifestación de abortos. Sin embargo, en nuestro conocimiento, no se han
conducido estudios que se hayan orientado a determinar y evaluar la importancia de
las rutas de transmisión tanto vertical como horizontal, así como la influencia que
éstas pudieran presentar sobre el comportamiento reproductivo y productivo del
ganado lechero que hayan abortado por esta causa. Considerando que, el estado de
Aguascalientes es reconocido como una cuenca lechera de importancia en el país, y
que se han reportado tasas de prevalencia elevada del problema, además que esta
enfermedad provoca grandes pérdidas económicas en la ganadería lechera como
consecuencia de los abortos, disminución de la producción de leche e incremento
del porcentaje de desechos por esta causa, se tomó la decisión de llevar acabo un
estudio para evaluar las rutas de transmisión, con la finalidad de aportar información
útil para generar estrategias y acciones viables y económicamente sostenibles en el
control de la neosporosis.
5
2. ANTECEDENTES
2.1. GENERALIDADES DE LA ENFERMEDAD La neosporosis es una enfermedad parasitaria causada por Neospora spp; este
parásito se ha encontrado afectando en forma natural a diferentes especies
domésticas como la; canina, bovinas, ovina, caprina y equina. El parásito fue
identificado por primera vez en perros en Noruega en 1984, aunque estudios
retrospectivos demostraron que el parásito ha sido endémico en el lugar por lo
menos desde 1957 (Dubey, et al., 2002). Mientras que en el año 1988 el parásito fue
identificado en perros de los Estados Unidos de América (EUA), mediante su
aislamiento en cultivos de tejidos, dándole la denominación de Neospora caninum
(Dubey, 1988). Posteriormente, se confirmó que el perro doméstico (Canis
familiaris), es el huésped definitivo del parásito (Lindsay et al., 1999).
El primer reporte que se dio al aborto por un protozoario parecido a N. caninum en el
ganado lechero se realizó en Nuevo México, EUA, en 1987. Mientras que en
California (EUA), la neosporosis, ha sido considerada como la principal causa de
aborto en el ganado lechero (Niefteld et al., 1992), la frecuencia del aborto
provocada por la neosporosis en este estado fue estimada en un 42.5% (Anderson
et al., 1995). De igual manera, la neosporosis bovina ha sido reconocida como la
causa de aborto en varios países del mundo, como Holanda, Nueva Zelanda, Israel,
Canadá, Gran Bretaña, Suecia, Irlanda, Estados Unidos, Costa Rica, Argentina y
México, en rango que va desde un 16% al 40% o más en algunos otros casos
(Dubey, 2003). La seroprevalencia observada en Portugal fue del 46% en las vacas
lecheras y del 36% en fetos abortados (Canada et al., 2004).
La Neospora caninum ha sido descrita y asociada como una importante causa de
abortos epidémicos en el ganado bovino lechero; no obstante, fue hasta el año de
1989 cuando se le dio el reconocimiento a esta enfermedad en la especie bovina,
así como de diseminación mundial (Dubey, 2003). La enfermedad de neosporosis
bovina se ha caracterizado por ser típicamente asintomática y de transmisión
congénita o transplacentaria, por lo que las hembras infectadas son consideradas
como responsables de la perpetuación del parasitismo de generación en generación
6
en las explotaciones de ganado. En las situaciones donde se han presentado los
casos con sintomatología clínica la principal manifestación es el aborto, con las
consecuentes pérdidas económicas provocadas por la reducción en la producción de
leche, la muerte de los neonatos y el incremento del desecho de los animales
adultos (Barr et al., 1995; Lindsay, Dubey y Blagburd, 1996).
EL ciclo de vida de este parásito, incluye al perro como hospedero definitivo, ya que,
en las heces de esta especie animal se han encontrado los ooquistes (McAllister et
al., 1998). Sin embargo, el perro también puede ser hospedero intermediario, al igual
que, otras especies animales domésticas, entre las que se mencionan a la bovina,
equina, ovina, caprina y animales silvestres entre los que se encuentran los coyotes,
ciervos, zorros, búfalos y camellos. Por otra parte, experimentalmente se puede
llegar a infectar a otros animales como los felinos, ratas, ratones, cerdos y monos
(Dubey, 1999). En todos estos animales la infección natural de la neosporosis ocurre
por el consumo de ooquistes esporulados, procedentes de heces que contaminan
los alimentos y el agua de consumo, generando a nivel intracelular las otras dos
formas del parásito (taquizoitos y bradizoitos) en el hospedero intermediario que los
consume. En cuanto a su distribución tisular, los conocimientos que se tienen hasta
la fecha, indican que el protozoario tiene una predilección por los tejidos del sistema
nervioso central (SNC), así como a la retina de los animales afectados (Dubey y
Lindsay, 1996; Dubey, 1999; Dubey, 2003).
2.1.1. Ubicación taxonómica y diferenciación con otras coccidias
Neospora caninum es un protozoario perteneciente al phylum apicomplexa de la
familia Sarcocystidae, morfológicamente es muy similar a Toxoplasma gondii y
relacionado con otros parásitos que forman quistes como Hammondia o Besnoitia
(Moore, Odeón y Campero, 2001). Hasta hace algunos años a Neospora caninum se
le consideraba una especie única, recientemente también se ha descrito a Neospora
hughesi como causante de una meningoencefalitis en equinos (Marsh et al., 1996).
Dada la similitud con los parásitos mencionado anteriormente, hubo una discusión
referente a que sí Neospora caninum era una especie más del género Hammondia o
Isospora, esto basado a su similitud entre los oocistos de ellos (Melhorn y Heydorn,
7
2000). En el año 2002, Dubey et al., realizaron una redescripción en base a algunos
aspectos moleculares, morfológicos y antigénicos de los parásitos; recurriendo a los
especimenes encontrados por Dubey et al., (1988) al identificar el parásito, así como
a los resultados reportados por Bjerkas encontrados en 1984, observando
principalmente las siguientes diferencias:
a) Molecularmente, Neospora caninum es un género y especie distinta de
Hammondia e Isospora. Basado en los espaciadores transcritos internos (ITS
por sus siglas en inglés), los cuales son secuencias nucleotídicas que se
conservan en cada una de las especies.
b) Morfológicamente, encontraron diferencias estructurales entre Neospora
caninum y Toxoplasma gondii, como la estructura de los oocistos, los de este
último presentaron un menor grosor en la pared del quiste, además de que su
hospedero definitivo es el gato y la causa principal de los abortos en las
ovejas, mientras que Neospora caninum es un huésped definitivo de los
caninos y su hospedero alternativo es generalmente el ganado bovino.
c) El ciclo de vida correspondiente a los oocistos de Neospora caninum y de
Isospora bigemia no pueden ser comparados, pues en ciclo de primera
especie no se han demostrado los esquizontes ni los gametos.
d) El ciclo de vida de la Neospora caninum es diferente al de la Hammondia
heydorni, pues este último requiere de dos hospederos para cerrar el ciclo.
Por otra parte, Neospora caninum para reproducirse puede permanecer
indefinidamente en cultivo, roedores o el ganado.
e) Antigénicamente Neospora caninum y Toxoplasma gondii son distintos y no
se ha observado una reacción cruzada en ensayos inmunológicos. Los
aminoglúcosidos de membrana son distintos en cada uno y sus anticuerpos son
específicos (monoclonales).
8
2.2. CICLO DE VIDA Y RUTAS DE TRANSMISIÓN El ciclo de vida completo de este parásito no se conoce por completo. Sin embargo,
como todas las coccidias, debe tener un ciclo de vida heterogéneo con dos
hospederos; se ha postulado y confirmado experimentalmente que los perros son
hospederos definitivos e intermediarios, mientras que los herbívoros son los
hospederos intermediarios (MacAllister et al., 1998; Linsday y Dubey, 1990; Lindsay,
Dubey y Duncan, 1999; Bartels et al., 1999; Lindsay, Ritter y Brake, 2001; Basso et
al., 2001, Dubey et al., 2002; Dubey, 2003). Aunque el hombre no ha sido
involucrado dentro del ciclo de Neospora caninum, se ha logrado infectar
experimentalmente primates no humanos por lo que podría ser una zoonosis
potencial (MacAllister et al., 1998; Lindsay, Dubey y Blagburd, 1996).
En el ciclo de vida de Neospora caninum se han identificado tres estados
infecciosos, los taquizoitos, los quistes tisulares que contienen a los bradizoitos y los
ooquistes del parásito (Dubey et al., 2002). Los estados patógenos corresponden a
los taquizoitos que se replican por endodiogenia con estadios intracelulares en
diferentes tejidos, igual a lo que sucede con Toxoplasma gondii (Lindsay, Dubey y
Blagburd, 1996). En la figura No. 2.2.1, se muestra el ciclo de vida de Neospora
caninum propuesto por Dubey (2006).
Figura No. 2.2.1. Propuesta de la transmisión de la Neosporosis (Dubey, Buxton y Wouda, 2006)
9
La etapa de reproducción sexual se realiza en el huésped definitivo (perro). El
parásito ingresa al hospedero por vía oral como oocisto esporulado, excretado en las
heces por otro perro infectado, los esporozoitos se liberan en el tubo digestivo y se
estable en el epitelio intestinal, donde desarrollan al menos una esquizogonia, antes
de generar la gametogonia para la producción de una nueva generación y excretarse
al medio ambiente como oocistos. El perro puede también infectarse al ingerir tejidos
infectados por quistes de bradizoitos o taquizoitos, que liberan esporozoitos en el
intestino (MacAllister et al., 1998; Linsday, Linsday y Dubey, 1990; Lindsay, Dubey y
Duncan, 1999; Dijkstra et al., 2001; Schares et al., 2001; Gondim, Gao y McAllister,
2002; Dubey et al., 2002). Para completarse el ciclo, el hospedero definitivo elimina
los ooquistes del protozoario en sus heces contaminando el agua y el alimento de
los hospederos intermediarios. Actualmente, se desconoce el tiempo de
supervivencia de los oocistos en el medio ambiente y si otros cánidos son
hospederos definitivos para N. caninum (Dubey, 2003).
Se conoce poco sobre el modo de diseminación y distribución de tejido contaminado
con N. caninum; usando las rutas de transmisión natural, el parásito puede ser
transmitido de forma transplacentaria en algunos hospederos, pero la ruta
transmisión vertical (de la madre al feto) es el mecanismo de transmisión mayor en
los bovinos, ovinos, caprinos, ratones, perros, gatos, monos y cerdos (Dubey, 1999;
Dubey 2003).
El mecanismo de transmisión horizontal es la causa por la cual se adquiere la
parasitosis en los animales susceptibles por en cualquier momento de su vida. Sin
embargo, no ha sido determinado si esta ruta de transmisión puede establecer una
infección crónica (McAllister et al., 1998; Hemphill, 1999; Sánchez et al., 2002; Trees
et al., 2002). Por otro lado, se ha demostrado que las vacas crónicamente infectadas
transmiten el parásito a sus fetos en varias generaciones y pueden sufrir uno o más
abortos a lo largo de su vida (Anderson et al., 1995). Sin embargo, la transmisión de
vaca a vaca no ha sido comprobada. Anderson et al., (1997) realizaron un estudio
para evaluar en la descendencia en vacas seronegativas y seropositivas al momento
de su nacimiento, los resultados obtenidos fueron que dentro del grupo de animales
10
seronegativos los recién nacidos no adquirieron la infección por N. caninum.
Mientras que, en el grupo de animales seropositivos los becerros nacieron
clínicamente normales pero congénitamente infectados.
Los estudios realizados por Davison, Otter y Trees (1999), establecieron que la
transmisión vertical es muy alta, pues el 95.2% de las vacas seropositivas dan
origen a crías seropositivas previo al consumo de calostro; además, encontraron que
el riesgo de que ocurra el aborto en los animales infectados es de tres a siete veces
mayor que en animales no infectados. Igualmente, las crías que no fueron abortadas
pueden nacer con la infección, aunque estos animales pueden no desarrollar la
infección crónica y abortar una vez que alcanzan la madurez reproductiva. El
mecanismo de transmisión vertical resulta ser muy eficiente y sin duda se le ha
implicado como el principal responsable de la infección crónica a nivel de los
animales que conforman un hato, ésto se ha inferido debido a que los animales
permanecen infectados de por vida y muestran la capacidad de poder transmitir la
infección a su descendencia, abuela-madre-hija (Cebrián, Barberán y Ferrer, 2000;
Anderson, Andrianarivo, Conrad, 2000; Bergeron et al., 2000). Sin embargo, la
seroconversión es un evento relativamente raro, menos de un 4% de casos en
vaquillas y un número no determinado en vacas adultas que sufren desafíos nuevos,
lo cual, dificulta comprender la presencia de infecciones post-natales en establos sin
la presencia de perros y el eventual aborto; muchos de estos vacíos de conocimiento
deben de ser enfrentados para comprender mejor los mecanismos de transmisión y
perpetuación de la infección crónica a nivel de hato (Dijkstra et al., 2002).
Por otra parte, la transmisión horizontal de la neosporosis ha sido estudiada por
Bergeron et al., (2000) basado en la genealogía de las vaquillas y pruebas
serológicas, demostraron que madres que resultaron seronegativas y las crías que
mostraron ser seropositivas, infieren que la infección ocurrió por el mecanismo de
transmisión horizontal. Entre los factores de riesgo asociados para que se lleve a
cabo la transmisión horizontal en una explotación lechera se encuentran la presencia
de perros, la población total de animales en el hato, la estación del año, el agua y los
alimentos contaminados con heces de perros infectados, los fetos y las placentas
que no son retirados del establo.
11
Por lo que la epidemiología de la enfermedad resulta ser muy compleja (López-
Gatius, Pabón y Almería, 2004; Schares et al., 2003; 2004).
El estudio realizado por López-Gatius, Pabón y Almería (2004), evaluaron a través
de pruebas serológicas, la relación de la infección de N. caninum antes de la
gestación y el subsiguiente aborto, observando que el porcentaje de los abortos
ocurridos durante el primer trimestre de la gestación fue del 6.6%, que después de
los 90 días fue del 5.3% y en el tercer trimestre de un 20%. Mientras que de los 105
animales seropositivos, las variables estudiadas como estación del año, parto y
manejo de los animales en relación al aborto provocado por la N. caninum no fueron
significativos.
Estudios de seroprevalencia obtenidos por Guimaräes et al., (2004), fueron del
15.1% en un muestreo de 558 vacas lecheras, del 7.7% en animales de razas
especializadas en la producción de carne. Mientras que la seroprevalencia que
obtuvieron en un total de 134 perros muestreados fue del 21.6%, concluyendo con
estos resultados que la presencia de perros en los establos esta directamente
asociada con la presencia de N. caninum en el ganado.
Por otro lado, el estudio realizado por Hall, Reichel y Ellis (2005), mostraron un alto
grado de asociación entre la infección por N. caninum y la presencia de abortos,
estableciendo con estos resultados que el principal mecanismo de transmisión es el
vertical. Generando una propuesta como medida de control de la infección a través
de la eliminación de los animales seropositivos, considerando que esta medida es
suficiente para reducir el nivel de la infección y por consecuencia el número de
abortos.
Por otra parte, los estudios realizados por Baillargeon et al., (2001) y Landamann et
al., (2002), demostraron que la ocurrencia de la neosporosis por el mecanismos de
la transmisión venérea o por la transferencia de embriones en bovinos es
improbable, proponiéndolo este resultado como un método de prevención y control
de la transmisión vertical.
12
2.3. PATOGENESIS Y SIGNOS CLÍNICOS
Recientemente se han realizado estudios de la patogénesis de la neosporosis en
vacas que han sido inoculadas con taquizoitos de Neospora caninum a los 70 días
(gestación temprana) y a los 140 días de gestación (gestación media). En ambos
estudios se lograron encontrar lesiones y parásitos en el útero, la placenta y en los
fetos, en cuales el cerebro fue el órgano más afectado. Estos estudios demuestran
el papel central que juega la placenta en la patogénesis y epidemiología de la
infección. (Maley et al., 2003; Macaldowie et al., 2004). Sin embargo, todavía se
desconoce el mecanismo mediante el cual los taquizoitos penetran y se multiplican
en las células de los órganos afectados in vivo, no obstante, en estudios realizados
in vitro utilizando células endoteliales de aorta de bovino (BAE), se ha observado por
medio del microscopio electrónico que la interacción física entre los taquizoitos de
Neospora caninum y estas células es similar a la llevada a cabo en otros parásitos
del grupo apicomplexa. El proceso de invasión celular se puede dividir en tres pasos
sucesivos, llamados reconocimiento de la membrana celular y adhesión del
taquizoito a los receptores de la célula huésped, invasión activa de la célula y
desarrollo intracelular del parásito. Antes de la invasión celular, los micronemas
liberan por exocitosis moléculas involucradas en el reconocimiento y unión con la
célula huésped sobre la superficie del parásito. Una vez adheridos, los taquizoitos
extruyen el conoide modificando la forma de la célula con la aparente secreción del
contenido de las roptrías desde el inicio de la invasión. Tanto la adhesión como la
invasión, se llevan a cabo en cinco minutos aproximadamente. Después de 45 a 60
minutos, gran número de taquizoitos han invadido las células, aunque algunos no lo
pueden hacer. Durante la internalización, las membranas de los parásitos se
fusionan con las de las células y una vez dentro, los parásitos se alojan en la
Vacuola Parasitófora (VP) y se mueven hacia el interior de las células principalmente
hacia el núcleo, rodeándose rápidamente de las mitocondrias de las células.
Posteriormente se lleva a cabo una secreción masiva dentro de la VP, indicando que
el parásito modifica la vacuola y su membrana de acuerdo a sus necesidades. La
endodiogenia ocurre alrededor de las seis horas post-infección y culmina hasta que
un pseudoquiste se ha desarrollado entre 72 y 80 horas el cual contiene múltiples
nuevos taquizoitos, finalmente ocurre la lisis celular y la liberación de los taquizoitos
13
que infectan a células vecinas, (Buxton et al., 2002; Hemphill et al., 1996; Hemphill,
1999).
Se sabe que Neospora caninum es uno de los parásitos que se transmiten más
eficientemente a través de la placenta, lo que ha generado controversia acerca de
que si es patógeno primario capaz de provocar por si solo el aborto o lo provoca en
asociación con otros agentes, especialmente los virus. Las evidencias parecen
indicar que sí es un patógeno primario, ya que en la mayoría de los tejidos de los
fetos abortados por neosporosis se encuentran lesiones características y con
parásitos en el interior de las lesiones, especialmente en el cerebro. Estas lesiones
se manifiestan principalmente como focos de necrosis rodeados por células
inflamatorias y gliales localizados especialmente en la corteza cerebral.
Dependiendo de la edad del feto, se puede detectar encefalitis y meningitis
linfoplasmocitaria. Otras lesiones características son miocarditis linfoplasmocitaria
con tendencia a ser difusa y hepatitis linfoplasmocitaria con tendencia periportal. En
ocasiones raras se encuentran lesiones que pudieran asociarse a virus o bacterias
que se encuentran en los mismos tejidos. (Dubey 2003a; Dubey 2003b).
El único signo clínico de neosporosis observado en la vaca adulta de cualquier edad
es el aborto, ya sea esporádico, endémico o epidémico, pudiendo presentarse desde
los tres meses de gestación hasta su término. Sin embargo, los estudios de
Anderson et al., 1994 y Dubey, 1999 reportan que estos ocurren mayormente
alrededor de los 5 a 6 meses de gestación. Con respecto a los fetos, éstos pueden
morir dentro del útero, ser reabsorbidos, momificados, autolizados, nacer muertos,
nacer vivos y morir inmediatamente, o nacer clínicamente normales, pero de forma
invariable se encuentran infectados crónicamente (Anderson et al., 1994; Otter et al.,
1995; Barr et al., 1997; Dubey, 1999; Dubey 2003b). Algunos estudios
epidemiológicos han indicado que el aborto puede suceder en cualquier época del
año, ya que en California, E.E.U.U., la mayoría de los abortos se han detectado en el
invierno mientras que en Holanda, la mayoría de éstos se han informado en verano y
otoño (Thurmond et al., 1995; Moen et al., 1998). Muchos abortos pueden ocurrir en
un período relativamente corto y las hembras que han abortado por causa de
14
Neospora caninum pueden tener la capacidad de gestar un ternero infectado de
forma congénita en el siguiente parto o realizar el aborto nuevamente (Dubey, 1999;
2003a). Igualmente se ha demostrado que generalmente la edad de las vacas, el
número de lactaciones y la historia de sus abortos no afectan el porcentaje de
infecciones congénitas, por lo que permite mantener la eficiencia de la transmisión
vertical tanto en las vacas jóvenes como en las adultas (Dubey, 2003b; Zabala et
al., 2004).
Histopatológicamente, en el feto abortado se puede observar encéfalomielitis
multifocal, que puede estar ubicada en la materia gris del cordón espinal; encefalitis
focal caracterizada por necrosis e inflamación no supurativa; una miocarditis no
supurativa y hepatitis, esta última se observa más comúnmente en los abortos
epidémicos que en los esporádicos (Anderson et al., 1994; Dubey, 1999).
En los terneros nacidos vivos e infectados, los signos clínicos frecuentemente
encontrados son: peso bajo, signos neurológicos de ataxia, disminución del reflejo
patelar y pérdida de la propiocepción hasta parálisis completa, también puede
observarse una exoftalmia y asimetría de los ojos (Bryan et al., 1994; Lindsay,
Dubey y Blagburd, 1996; Otter et al., 1997; Dubey, 1999).
2.4. DIAGNÓSTICO DE LA ENFERMEDAD
En base a los estudios realizados sobre la relación causa-efecto entre N. caninum y
el aborto, se a considerado que N. caninum es la primer causa de aborto en el
ganado productor de leche en el estado de California en Estados Unidos de América
(Dubey 2003a; Dubey y Schares, 2006). Las lesiones asociadas a N. caninum en el
cerebro y corazón de los fetos abortados pueden ser tan severas como para causar
su muerte. Además, existe una evidencia reciente de que una infección de N.
caninum acciona una respuesta inflamatoria en base a la producción de citoquinias y
una respuesta inmune Tipo Th1 lo cual puede afectar la gestación (Innes et al.,
2005). Debido a que la seroprevalencia de N. caninum en los hatos lecheros es alta
hasta el 100% en ciertos hatos y considerando que el parásito se transmite muy
eficientemente de la vaca infectada al feto, estos hechos hacen difícil establecer
que la causa de aborto sea por N. caninum pues la ocurrencia del aborto es mucho
menor. Para establecer una relación causa-efecto es importante utilizar métodos
15
serológicos, inmunohistoquímicos y PCR (Dubey y Schares 2006); para alcanzar
este objetivo, es importante demostrar que el taquizoito de N. caninum en lesiones y
excluir otras causas de aborto (Anderson et al., 1991; Wouda et al., 1997).
El diagnóstico de la neosporosis bovina es difícil debido a la inexistencia de
manifestaciones clínicas en los animales infectados crónicamente y al escaso
número de parásitos en los fetos abortados (Jenkins et al., 2002). Por ello, la
confirmación de la infección requiere la asistencia de un laboratorio de diagnóstico
veterinario. El diagnóstico de la neosporosis bovina se basa en la detección de
anticuerpos específicos frente al parásito en los bovinos adultos (Björkman et al.,
2005) y la observación de lesiones compatibles en el cerebro, corazón e hígado de
fetos abortados, combinado con el examen inmunohistoquímico (Barr et al., 1990;
Anderson et al., 1991; Morales et al., 2001) y la detección de ADN de Neospora
caninum mediante la reacción en cadena de la polimerasa (Gottstein et al., 1998;
Baszler et et al., 1999; Sager et al., 2001; Pitel et al., 2002; Pereira-Bueno et al.,
2003, Medina et al., 2006) en tejidos fetales; y la serología fetal (Barr et al., 1995;
Buxton et al., 1997; Wouda et al., 1997).
No existe un método estándar de diagnóstico ante mortem para la infección en
bovinos adultos. Se han ensayado una serie de técnicas, fundamentalmente
dirigidas a revelar la presencia de anticuerpos séricos en vacas lecheras que han
abortado. Entre estas pruebas inmunodiagnósticas que se han estudiado y que
pueden encontrarse disponibles de manera comercial son: ELISA,
inmunofluorescencia indirecta y aglutinación directa, (Obbendorf et al., 1995; Dubey
et al., 1996; Dubey 2003b). Aunque la presencia de los anticuerpos sólo indica que
los animales fueron expuestos a N. caninum ya que para obtener un diagnóstico
definitivo se requiere aislar el protozoario. Por otra parte, el diagnóstico del aborto de
manera congénita se lleva a cabo con histopatología de tejidos fetales, la
identificación y confirmación de la presencia del parásito, empleando pruebas de
laboratorio como la inmunohistoquímica (Barr, et al., 1995; MacAllister et al., 1998).
Por otro lado, para poder realizar el diagnostico de los fetos abortados se debe de
enviar al laboratorio el feto abortado completo, cerebro, corazón, hígado y placenta,
los que deben ser examinados mediante histopatología. También se recomienda
tomar muestras de fluidos corporales y suero sanguíneo para su evaluación
serológica (Barr, et al., 1995; MacAllister et al., 1998; Dubey 2003b), de no ser
16
posible es conveniente enviar solamente la cabeza. Es importante recordar, que la
presencia de anticuerpos anti-N. caninum en el suero fetal e incluso el suero
precalostral del ternero, indicarán infección, en tanto que la ausencia de ellos no
necesariamente indicaría que el animal no esta infectado, ya que la síntesis de
anticuerpos en el feto y el ternero recién nacido, dependerá del estado de gestación
(madurez del sistema inmune), del nivel de exposición y el tiempo transcurrido entre
la infección y el aborto. Lamentablemente el aislamiento de N. caninum no siempre
es posible hacerlo, debido al estado de autolisis que presentan los fetos abortados
(Otter et al., 1997). Otra de las pruebas utilizadas para el diagnóstico de la
Neosporosis bovina es la de inmunofluorescencia indirecta que se ha considerado
como de amplio valor diagnóstico, aunque un resultado positivo no es indicativo de
la presencia del parásito en el animal, sino que el animal tuvo un contacto con el
parásito en algún momento de su vida (Barr et al., 1995; Dubey 2003b). La Figura
2.4.2, muestra la secuencia para llevar a cabo el diagnostico en base a sueros
maternos, de fluidos corporales fetales o de tejidos finos fetales, los cuales se
utilizan para establecer un diagnostico positivo a N. caninum serología y PCR, es
importante eliminar otras posibles causas de aborto en base al historial de abortos y
fecundación de las hembras (Dubey y Schares 2006).
Por otro lado, el parásito puede ser aislado inoculando extractos de tejidos en cultivo
celular o en animales de laboratorio. Sin embargo estos métodos son costosos,
debido al tiempo prolongado que se requiere para su aislamiento (Lindsay, Dubey y
Blagburd, 1996).
17
Figura 2.4.2. Diagrama para el diagnostico de abortos asociados a N. caninum (Dubey y Schares 2006)
Se han sintetizado tres proteínas recombinantes de N. caninum que han sido usadas
en el diagnóstico de la neosporosis bovina, también se han elaborado anticuerpos
monoclonales contra taquizoitos de N. caninum para ser usados en
inmunohistoquímica (Cole et al., 1994). Así mismo, se han establecido varios
métodos para el diagnóstico mediante la Técnica de Reacción en Cadena de la
Polimerasa (PCR) (Payne y Ellis, 1996; Pichard, 1997; Ellis y McMillan y Ryce,
1999).
Bovinos con problemas de aborto
Envío de suero de vacas abortadas
al laboratorio
Envío de fetos abortados y placentas
al laboratorio
Recolección de datos de abortos y fecundidad
en el hato
Suero Positivo (Ac.)?
NO
SI
NO PCR +?
Lesiones microscópicas características?
Ac. en fluido fetal
Serie de abortos
iniciados entre las 8 y 10 semanas
SI
Otras causas
de aborto
Paso 1 Diagnóstico: Identificación
de las posibles causas
de aborto (N. caninum u otras causas).
Problema de aborto endémico
Problema de aborto epidémico
Las lesiones de N. caninum son
compatibles o no con la vida
Paso II Diagnóstico:
Alta probabilidad de que
N. caninum sea la
causa de aborto
SI NO
SI NO
Definir vacas en riesgo: Envío de los sueros de vacas
colectados para el examen serológico
NO
Asociación estadística significativa a N. caninum entre la
respuesta positiva a Ac. y el aborto?
Otras causas
de aborto?
SI
18
2.5. EPIDEMIOLOGIA DE LA ENFERMEDAD La forma de infección de los perros en la naturaleza se desconoce, se ha
considerado que es debido a la caza y consumo de pequeños animales que no han
sido identificados como huéspedes naturales de N. caninum. El consumo de
membranas placentarias y fetos bovinos abortados, parece ser una fuente
importante de infección en perros y poco se conoce sobre la frecuencia de
eliminación y la resistencia de los ooquistes por caninos en la naturaleza. (Dijkstra et
al., 2001; Bergeron, et al., 2001a; Dijkstra et al., 2002). Sin embargo Gondim et al.,
2002 realizaron un experimento donde 9 perros fueron alimentados con tejidos de
terneras infectadas con Neospora y la producción de ooquistes fue de 160,700 en
promedio mientras que 6 perros que fueron alimentados con cuerpos de ratones
también positivos, produjeron 5,400 ooquistes. Varios estudios sugieren que la
cohabitación de perros y vacas es un factor de riesgo para la infección de N.
caninum (Cabassi et al., 2001ab; Sánchez et al., 2002; Dubey, 2003). Para
establecer la importancia de los posibles factores de riesgo es necesario conocer la
incidencia de la enfermedad asociada con el factor de riesgo en estudio, así como, la
razón de probabilidades de que ocurra la infección a N. caninum a que no ocurra,
indicando el número de veces más de que pueda adquirir la infección a N. caninum
en un grupo de animales expuestos en relación a los no expuestos a el parásito. Al
conocer la diferencia entre la incidencia de la infección a N. caninum en la población
total y la incidencia de la infección en el grupo no expuesto, cuya proporción
indicaría la cantidad de infección en la población total atribuible al factor de riesgo,
así como, el comportamiento de la infección al aumentar el factor de riesgo
(Thrusfield 1995; Hird et al., 2001).
19
3. HIPÓTESIS
La perpetuación de la neosporosis a través de generaciones sucesivas depende
principalmente de la transmisión vertical, repercutiendo en el nivel productivo y
reproductivo de los animales.
20
4. OBJETIVOS
4.1. OBJETIVO GENERAL
• Demostrar y comprobar la transmisión vertical y transmisión horizontal de la
infección por Neospora caninum en ganado lechero infectado naturalmente en
una zona endémica, así como su influencia en la producción de leche y en los
parámetros reproductivos.
4.2. OBJETIVOS PARTICULARES
• Determinar la transmisión vertical y horizontal de la infección por Neospora
caninum en ganado bovino lechero infectado naturalmente en una zona
endémica.
• Estimar la eficiencia y el riesgo de transmisión vertical de N. caninum a las
crías en vacas infectadas naturalmente.
• Estimar el riesgo de la transmisión horizontal en vacas, becerras y
vaquillas, evidenciado por la seroconversión y el aborto.
• Estimar el efecto sobre la producción de leche, días abiertos y servicios
por concepción en vacas infectadas con por N. caninum, así como del
grupo de animales que abortaron a consecuencia de la infección.
21
5. METODOLOGÍA
5.1. UBICACIÓN DEL ESTUDIO
El presente trabajo de investigación se desarrolló en un establo ubicado en la región
lechera del estado de Aguascalientes, localizado en la región Centro-Norte de la
República Mexicana, a una altitud de 2,217 msnm, con una temperatura promedio
de 16.9°C y una precipitación pluvial promedio de 475 mm al año, la cual, fue
estacional presentándose únicamente en el verano. El clima de acuerdo a la
clasificación de Koeppen modificada por García, 1973, es BsKw (w) (e) (Figura
5.1.1). Los análisis instrumentales se realizaron en el Laboratorio de Sanidad
Fitopecuaria del Instituto Tecnológico El Llano Aguascalientes, localizado en el Km.
18 de la carretera Ags.-SLP.
Figura 5.1. 1. Ubicación geográfica del establo en estudio
22
5.2. SELECCIÓN DEL ESTABLO La selección del establo se realizó por el método de conveniencia (Thrusfield, 1995),
en base a los siguientes criterios de inclusión: a) Que se ubicara en la región lechera de Aguascalientes.
b) Que se mantuviera al ganado alojado en el sistema de estabulación libre,
característica de la zona.
c) Que se brindaran las facilidades necesarias para seguir a los animales
durante dos y medio años.
d) Que el propietario se comprometiera no vender o desechar a los animales
incluidos en el estudio.
e) Que el establo contara con historia clínica previa, y con antecedentes de
animales seropositivos a N. caninum.
Se aplicó una encuesta al propietario del establo, para conocer las características
generales y manejo del ganado, en relación al tipo de explotación, parámetros
reproductivos y productivos, principales enfermedades, tipo de alimentación, sanidad
e higiene, así como la presencia de perros o no en el rancho.
5.3. DISEÑO DEL TRABAJO Se realizó un estudio de cohorte longitudinal prospectivo por dos generaciones en un
grupo de terneras.
En base al total de animales de reemplazo existentes en el establo seleccionado, se
eligieron de manera aleatoria 75 terneras de 13 a 14 meses de edad, se les tomaron
muestras de sangre y se recolectó el suero de las mismas. Las muestras de sueros
obtenidas fueron sometidas a la prueba de aglutinación en tarjeta con el antígeno de
Rosa de Bengala al 2% (NOM – 041- ZOO-1995), y a la prueba de ELISA utilizando
el paquete comercial Herd Check anti-N. caninum IgG (IDDEX Laboratories, Inc.
Westbrook, Maine, USA) utilizando una sola dilución (1:100) para detectar positivos
a un punto de corte de 0.50, para determinar su seroestatus a Brucelosis y a
Neosporosis bovina, respectivamente.
Con los resultados del estatus serológico de los animales muestreados se realizó un
diagnóstico preliminar, seleccionando 40 animales seronegativos a la enfermedad de
Brucelosis, los cuales fueron divididos en dos grupos de 20 animales cada uno, el
primer grupo de terneras seropositivas y el segundo de seronegativas a N .caninum.
23
5.3.1. Seguimiento serológico del grupo de cohorte
Se realizó el seguimiento serológico mensualmente mediante la prueba de ELISA al
grupo positivo a N. caninum y al grupo negativo a N. caninum hasta su
correspondiente inseminación, diagnóstico de gestación y su primer parto, las
hembras permanecieron alojadas durante este tiempo en el área de recría. El tipo de
alimentación y cuidados de ambos grupos fueron similares. Posteriormente, se
continúo con el seguimiento mensual desde el desarrollo de su segunda gestación
hasta el parto.
En caso de la presentación del aborto se llevó a cabo un diagnosticó integral para
determinar la posible causa mediante el uso de pruebas serológicas en la madre,
mientras que en los fetos abortados se llevaron a cabo un diagnóstico para N.
caninum mediante histopatología (HP) y pruebas de Reacción en Cadena de la
Polimerasa (por sus siglas en Inglés, PCR).
5.3.2. Seguimiento serológico de las crías nacidas
A todas las crías hembras y machos nacidas de las dos primeras gestaciones, se les
aplicó la técnica serológica de ELISA, para verificar su seroestatus a N. caninum, el
primer muestreo se realizó antes de suministrar calostro los beceros.
Posteriormente, a las becerras que permanecieron en el establo se les dio
seguimiento serológico mensual, tanto a las del primer parto (por 18 a 20 meses),
como a las del segundo parto (por 6 meses).
5.3.3. Pruebas diagnósticas
Se realizó un seguimiento serológico mensual mediante la técnica de ELISA
utilizando el paquete comercial Herd Check para la identificación de anticuerpos IgG
específicos anti-N. caninum (IDDEX Laboratories, Inc. Westbrook, Maine, USA), con
sensibilidad de 98.6% y especificidad de 98.8% de acuerdo al fabricante, siguiendo
el procedimiento recomendado por el mismo. La prueba se realizó en una sola
dilución (1:100) para detectar positivos y negativos; los sueros se procesaron
24
pareados y el punto de corte fue de 0.50, dándose como positivos a los que tuvieran
lecturas medias > 0.50
En caso de la presentación del aborto, se siguió la siguiente metodología: Se asistió
a la mayor brevedad, en un tiempo promedio de 3 horas, posible al establo para
realizar la extracción de los cerebros de los fetos abortados. Se elaboraron hojas
clínicas de cada uno de los eventos; se identificaron los fetos abortados; se
obtuvieron muestras de los cerebros, las cuales fueron colocadas en frascos
conteniendo formalina neutra bufferada al 10% para su conservación y fijación de los
tejidos. Posteriormente fueron llevadas al laboratorio, para ser procesadas a la
técnica convencional de HP. Las muestras fueron embebidas en parafina, se les
realizaron cinco cortes en diferentes regiones del cerebro y se tiñeron con la técnica
hematoxilina y eosina (HE) para la identificación de las lesiones provocadas por la N.
caninum (Medina, et al., 2006).
Las muestras de cerebros de los fetos, se sometieron a la prueba de PCR anidado
en un solo tubo para identificar la presencia de ADN de N. caninum, de acuerdo a la
técnica descrita por Ellis, McMillan y Ryce (1999) modificada por Medina et al.,
(2006), las secuencias utilizadas fueron: NF1 (5’-GCGTGATATACTACTCCCTGT);
NS2 (5’-CATGTGGATATTTTGCA); NR1 (5’-AAATCCTGGAAGTTAAAG) y SR1 (5’-
AAATAACGGTGTGGGAAAA).
Las vacas que presentaron abortos fueron identificadas, para posteriormente realizar
un análisis serológico a los 10 días después de la presentación del evento. Se
obtuvieron los sueros de las muestras de sangre para que posteriormente fueran
sometidas a la pruebas serológicas para descartar las enfermedades siguientes:
Brucelosis, Leptospirosis, Rinotraquitis Infecciosa Bovina y Diarrea Viral Bovina
(diagnóstico serológico realizado por el Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico
en Salud Animal del Centro Nacional de Sanidad Animal, localizado en Tecamac,
Edo. México), así como las pruebas de ELISA para el diagnóstico de la neosporosis
bovina (esta prueba realizada en nuestro laboratorio). Los resultados de estas
25
pruebas permitieron hacer un diagnóstico diferencial entre las cuatro principales
enfermedades que se mencionaron anteriormente, igualmente nos permitió conocer
cual era el seroestatus para la enfermedad de la neosporosis bovina.
5.3.4. Diagnóstico serológico en perros Se tomaron muestras de sangre a los 26 perros que habitan normalmente en el
rancho, se obtuvieron los sueros y se sometieron a la prueba de ELISA para
determinar el seroestatus a N. caninum; en este caso se utilizó el mismo paquete
que en los bovinos sustituyendo únicamente el proceso el segundo anticuerpo
marcado con peroxidasa por una IgG de perro.
5.3.5. Parámetros reproductivos y productivos de los animales del grupo de cohorte Se llevo a cabo el registro de los eventos reproductivos de cada uno de los animales
de ambos grupos después de haber ocurrido el parto, consultando la base de datos
que al respecto se mantiene en el establo, datos tales como: fecha de parto o la
ocurrencia de aborto, servicios por concepción, días abiertos, intervalo parto-estro e
intervalo parto-parto. Igualmente se registró mensualmente la producción de leche
durante la primera lactación en ambos grupos bajo estudio.
5.4. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS Se estimó el riesgo de sufrir aborto con relación al seroestatus a N. caninum en la
cohorte bajo estudio, para este fin los datos epidemiológicos se organizaron en una
tabla de contingencia 2X2 y fueron analizados con el apoyo del paquete estadístico
Epiinfo (2000) y la metodología propuesta al respecto por Thrusfield (1995) y por
Hird et al., (2001). Se calculó el Riesgo Relativo (RR), la razón de probabilidades o
razón de momios (OR), el Riesgo Atribuible (RA), la Fracción Atribuible (FA), el
Riesgo Atribuible Poblacional (RAP), el Factor Atribuible Poblacional (FAP) y la
Razón de Probabilidades de Prevalencia (ORP), todos los análisis fueron realizados
con un intervalo de confianza (IC) del 95% de Cornfield.
Para poder determinar el efecto provocado sobre el comportamiento reproductivo y
productivo en los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum,
fueron evaluadas las siguientes variables respuesta; días abiertos, servicios por
concepción, intervalo del parto al estro, intervalo parto a parto y la producción de
26
leche. Los datos obtenidos fueron ordenados y sistematizados para posteriormente
ser sometidos a un análisis estadístico con el Modelo General Lineal (GLM) y prueba
de comparación de medias de Tukey (p<0.05). De igual manera, los datos fueron
analizados con el modelo estadístico no paramétrico de Kruskal-Wallis (p<0.05),
utilizando el paquete SAS versión 8 (1999).
27
6. RESULTADOS
6.1. SELECCIÓN DEL ESTABLO Como resultado del cuestionario aplicado al propietario del establo, se obtuvo la
siguiente información:
• Sistema de explotación: Tecnificada.
• Tipo de producción: Intensiva con recría.
• Raza animal: Holstein-Frisian.
• Población total: 1452 animales de los cuales son: 557 vacas y vaquillas en
producción, 363 de reemplazos en diferentes edades y estados reproductivos,
350 becerras de menos de 6 meses de edad y 182 machos en engorda.
• Forma de reproducción: Inseminación artificial.
• Edad al primer servicio 14 meses.
• Edad al parto: 23 meses.
• Intervalo entre partos: 13.6 meses.
• Servicios por concepción: 3.2.
• Promedio de días abiertos: 116 días.
• Porcentaje de desechos: 25% anualmente.
• Porcentaje de abortos: 10% considerándose: reabsorciones, momificaciones y
enfermedades reproductivas.
• Vida productiva: 4.5 partos en promedio.
• Diagnóstico de gestación: Se realiza a los 49 días de haber sido inseminada
y su reconfirma a los 150 días.
• Las principales enfermedades identificadas en el hato fueron: Mastitis, Diarrea
Viral Bovina, Leptospirosis y Clostridiosis. El establo cuenta con un 80% de
seroprevalencia a N. caninum, según, el estudio realizado por García et al.,
(2002).
• Calendario de vacunación: Los animales son vacunados contra la Brucelosis
a los 4, 5 y 12 meses de edad; contra la Leptospirosis cada 4 meses a las no
gestantes y a los 49 y 150 días de gestación, una vez que son diagnosticadas
y reconfirmadas en su gestación; la vacunación contra la Rinotraqueitis Viral
Bovina y Diarrea Viral Bovina, se realiza a los 6 y 8 meses de gestación.
28
• Alimentación general: está basada en una ración integral, en el caso de los
animales recién nacidos su alimentación es mediante la utilización de biberón
durante tres días, utilizando leche entera solamente, quedando como
observación que los animales que nacen en la noche se amamantan de la
madre hasta que son retirados.
• Sanidad del establo: el estiércol es retirado de los corrales al menos una vez
al mes, las placentas y los abortos que llegan a presentarse en el establo son
retirados de manera permanente, depositándolos en las pilas de estiércol.
Posteriormente el estiércol es incorporado como materia orgánica a los
terrenos, que se utilizan para el cultivo de los forrajes, como, la alfalfa y el
maíz que son usados en la alimentación de los animales.
• El establo cuenta con instalaciones como, sala de ordeño, divisiones
adecuadas para cada edad y etapa de producción, además de un área
clínica.
• El establo se encuentra bardeado en un 80%, sin embargo la puerta
permanece abierta todo el día.
La presencia de perros en el establo es permanente, contando la existencia de
cuatro perros propios, además de los 22 perros de los vecinos.
6.2. EVALUACIÓN SEROLÓGICA Los resultados obtenidos del seguimiento serológico a N. caninum durante las dos
gestaciones y el parto o el aborto en su caso, durante los 32 meses de duración del
estudio, se clasificaron en siete periodos, con un tiempo promedio de 4.5 meses
cada uno, cada periodo contempla el desarrollo en el que se encontraban las
hembras seleccionadas para el estudio como se presentan en el cuadro 6.2.1, donde
se muestra el comportamiento serológico a N. caninum de los dos grupos formados
al comienzo del estudio, el grupo de animales seronegativo y el grupo de animales
seropositivo a N. caninum respectivamente.
29
Cuadro 6.2.1. Incidencia mensual a N. caninum en vacas (n=40) de la cohorte bajo estudio durante un periodo de 32 meses
Períodos
Grupos Situación 1 a 2 b 3 c 4 d 5 e 6 f 7 g
Negativo
Negativo (No.)
Positivo (No.)
20
0
20
0
19
1
17
2
15
2
11
4
10
1
Incidencia Mensual
20 20 1/19 2/17 2/15 4/11 1/10
Positivo
Negativo (No.)
Positivo (No.)
0
20
0
20
0
21
0
23
0
25
0
29
0
30
Tasa de Incidencia 10/32 meses = 0.3125*100=31.25%
a Número de hembras seleccionadas de 13 a 14 meses de edad. b Número de hembras después de la inseminación a la edad promedio de 15 meses. c Muestreos durante el periodo de gestación hasta antes del parto. d Muestreos 15 días después del parto e inicio de la producción láctea. e Muestreos durante el periodo como altas productoras de leche. f Muestreos al final de su producción y secado. g Muestreos 15 días después del 2do parto.
Por otra parte, el grupo de animales seronegativos a N. caninum presentaron
cambios en su seroestatus a partir del tercer periodo, obteniéndose en estos una
incidencia mensual del 5.3% hasta un 36.4% (figura 6.2.1). Con respecto al grupo de
animales seropositivos, el comportamiento fue diferente ya que no se observaron
ningún cambio en su seroestatus a N. caninum durante los siete periodos del
estudio. Mientras que, la tasa de incidencia obtenida durante el periodo de estudio
fue del 31.2%.
30
1 2 3 4 5 6 70
5
10
15
20
25
30
35
40
0 0
5.3
11.813.3
36.3
10
Periodos (No.)
Inci
denc
ia m
ensu
al(%
)
Figura 6.2.1. Porcentaje de la incidencia mensual a N. caninum en las vacas observadas durante siete períodos de seguimiento mensual
Durante las observaciones realizadas en el periodo del estudio en el grupo
seronegativo a N. caninum se observó una conversión a un estado seropositivo de
las vaquillas, principalmente después del parto, alcanzándose una tasa del 50%
(10/20). Por lo cual, la prevalencia aumentó hasta el 75% (30/40) del total de la
población. Es importante destacar que los cambios de seroestatus se observaron
durante la primera gestación con una incidencia del 5%; mientras que en la segunda
gestación, la incidencia se elevó hasta el 47.4% en el grupo de vacas seronegativas.
6.3. EVALUACIÓN SEROLÓGICA DE LAS CRÍAS NACIDAS El número de crías nacidas y registradas en la primera gestación fue de 33, las
cuales fueron evaluadas inicialmente antes de administrar el calostro e
independientemente de su genero. Posteriormente a este muestreo inicial solamente
se evaluaron las becerras que permanecieron en el hato y a las cuales se les dio
seguimiento de su estatus serológico a N. caninum hasta la edad de los 20 meses en
promedio. Durante este tiempo los grupos de becerras estudiadas sufrieron pérdidas
debido a diferentes causas como: muerte, venta y movilización a otros centros de
producción. En el cuadro 6.3.1, se muestra la prevalencia observada en las becerras
durante tres periodos de estudio que fue en un rango del 6.6% al 80% (figura 6.3.1).
En la segunda gestación de los animales (cuadro 6.3.1), se siguió el mismo
procedimiento y se pudo contar con siete becerras hasta los seis meses de edad
para darles seguimiento serológico; donde la prevalencia observada fue del 55.6%
31
durante los primeros cuatro meses correspondiendo al primer periodo de
observación (figura 6.3.2).
Cuadro 6.3.1. Prevalencia a N. caninum en becerras nacidas en la cohorte (n=40) bajo estudio durante un periodo de 20 meses
Crías nacidas Primer parto Segundo parto Periodo
Grupo hembras Crías 1a 2b 3c 1d 2e
Negativo
Negativo (No.)
Positivo (No.)
15
1
5 4
4 1
9 5
7 0
Positivo
Negativo (No.)
Positivo (No.)
0
17
0 5
0 5
0 5
0 5
Total de Crías 18/33 9/14 6/10 10/19 5/12 a Crías nacidas y muestreadas de tres a seis meses de edad del 1er. parto. b Becerras muestreadas de seis a 12 meses de edad. c Becerras muestreadas de 13 a 15 meses de edad y después de su inseminación a los 20 meses. d Crías recién nacidas muestreadas del segundo parto. f Becerras muestreadas de los tres a seis meses de edad de la segunda gestación.
32
1 2 30
10
20
30
40
50
60
70
80
6.6
80
25
Periodos (No.)
Prev
alen
cia
(%)
Figura 6.3.1. Prevalencia a N caninum en becerras del grupo de animales seronegativos durante la primera gestación
1 20
10
20
30
40
50
60 55.6
0
Periodos (No.)
Prev
alen
cia
(%)
Figura 6.3.2. Prevalencia a N. caninum en becerras del grupo de vacas seronegativas durante la segunda gestación
La Prevalencia total de esta población tuvo un rango de variación del 41.6% hasta el
64.2% (figura 6.3.3) según el periodo y parto, obteniendo una prevalencia general del
45.8%.
33
1 2 3 4 50
10
20
30
40
50
60
70
54.5
64.260
52.6
41.6
Periodos (No.)
Prev
alen
cia
(%)
Figura 6.3.3. Prevalencia a N. caninum en crías nacidas dentro de los grupos seropositivos y seronegativos 6.4. PORCENTAJE DE ABORTOS DEL GRUPO DE COHORTE (N=40) Durante la primera gestación, la pérdida de los productos fue al término de su
gestación, debido a que nacieron muertos, tanto en el grupo de animales
seronegativos como de los seropositivos a N. caninum. En el cuadro 6.4.1, se
muestra el número de fetos recuperados durante el periodo del estudio, donde el 66.
7% correspondió al total de los fetos abortados, de los cuales el 44.4% correspondió
al grupo de animales seronegativos a N. caninum y mientras que el 55.6%
correspondió al grupo de animales seropositivos a N. caninum. Por otra parte, en la
segunda gestación se observó que el 31.2% de los abortos correspondieron a los
animales seronegativos a N. caninum, mientras que el 68.7% correspondió al grupo
de animales seropositivos a N. caninum. El porcentaje total de los abortos
recuperados en esta segunda gestación fue del 81.25%, presentando los abortos
una edad promedio de seis a ocho meses de gestación.
34
Cuadro 6.4.1. Frecuencia de abortos en vacas de los grupos seronegativos y seropositivos durante los 32 meses de observación
Primera gestación (Tercio)
Segunda Gestación (Tercio) Grupo
1 2 3 M N* 1 2 3 Negativo Positivo
0 2
0 1
1
0
3
2
0
3
1
6
4
2 Subtotal
2
1
1
5
3
7
6
Recuperación
6
13
* Muerte Neonatal
Sólo se observo que una vaquilla abortada cambio su seroestatus de negativo a
positivo a N. caninum coincidiendo con el resultado positivo a N. caninum del
diagnóstico realizado al feto tanto por la técnica de HP como por la técnica de PCR.
Durante la segunda gestación dos de los animales sufrieron un cambio de su
seroestasus de negativo a positivo, dando resultados similares a las pruebas
realizadas en los fetos abortados.
6.4.1. Análisis de riesgo
Con los resultado del análisis epidemiológico de riesgo realizado a los datos
obtenidos de la primera gestación se determinó que el grupo de animales con el
seroestatus positivo, el riesgo relativo (RR) obtenido fue de 1.25 número de veces
más de probabilidad de que se presente el aborto a causa de N. caninum, debido a
que este riesgo indica una asociación positiva entre el seroestatus positivo a N.
caninum y el aborto. Por otra parte, la razón de momios o probabilidades (OR) fue
de 1.3 veces más la probabilidad de que ocurra el aborto a causa de N. caninum a la
probabilidad de que no ocurra el aborto. El resultado obtenido de riesgo atribuible
(RA) fue de 0.5 el cual indica que esta extensión del seroestatus positivo a N.
caninum pudiera ser reducida si se controla el factor de riesgo o la presencia del
parásito. Por otro lado, el factor atribuible (FA) fue del 0.2 esto nos indica la
proporción del aborto en los animales con relación a su seroestatus positivo a N.
caninum. Igualmente, el riesgo atribuible poblacionales (RAP) fue de 1.25 veces,
indicando la cantidad de aborto atribuible a la N. caninum. El factor atribuible
poblacional (FAP) obtenido fue del 2.14 veces la proporción de la incidencia a N.
caninum en la población se reduciría si los animales seropositivos fueran eliminados.
35
Mientras que la razón de probabilidades de prevalencia (ORP) fue de 1.33 veces
determinando que el seroestatus a N. caninum aumenta el riesgo de la ocurrencia
del aborto a causa de este parásito.
Por otra parte, los resultados obtenidos en la segunda gestación de los animales en
estudio, fueron sometidos a los mismos análisis. La información obtenida con
respecto a la importancia del seroestatus positivo y negativo a la N. caninum en el
comportamiento del hato fue el siguiente: se determinó que en el seroestatus
positivo, el RR fue de 2.20 veces más que se presente el aborto debido a N.
caninum, indicando esto una asociación positiva entre el seroestatus positivo a N.
caninum y el aborto. El OR fue de 3.67 veces más, indicando la probabilidad de que
ocurra el aborto por N. caninum a la probabilidad de que no ocurra. El resultado de
RA fue de 0.3 esta extensión del seroestatus positivo a N. caninum pudiera ser
reducida si se controla el factor de riesgo o la presencia del parásito en el hato. El
FA fue de 0.01 que indica la proporción del aborto en los animales con seroestatus
positivo a N. caninum. El RAP fue del 1.6, indicando la cantidad de aborto atribuible
a N. caninum. El FAP fue del 2.99 proporción de incidencia en la población que se
reduciría si los animales seropositivos a N. caninum fueran eliminados. ORP fue del
3.69 determinando que el seroestatus aumenta el riesgo de la ocurrencia de la
enfermedad o sea el aborto.
6.5. RESULTADOS DE LA TÉCNICA DE PCR EN FETOS ABORTADOS Los resultados obtenidos por la aplicación de la técnica de PCR a los 19 abortos
recuperados durante las dos gestaciones mostraron que el 73.6% de las muestras
fueron positivas a N. caninum, ya que se lograron observar las bandas
características a los 146pb (figura 6.5.1). Mientras que, con la aplicación de la
técnica de HP se determino que el 36.8% de las muestras de tejidos del cerebro
presentaron las lesiones características provocadas por la N. caninum, como los son
glisosis y la necrosis (figuras 6.5.2 y 6.5.3).
36
Figura 6.5.1. Fotografía del gel de agarosa al 2.5%, que muestra las bandas a 146 pares de bases, de los casos positivos a la N. caninum (CN=Control; P=Positivo; N=Negativo)
Figura 6.5.2. Microfotografía de tejido nervioso (cerebro) de un feto abortado a los 5 meses de edad, con lesiones típicas asociadas a la infección con N. caninum, la flecha muestra la necrosis focal e infiltración de células mononucleares (tinción H-E 10X). Observadas con un microscopio compuesto y apoyado con un programa analizador de imágenes (Imagen Plus, Leíca)
150µm
Gliosis
M P 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
1700pb 1000pb 700pb 146pb
CN CP N N N P P P N N P P P
37
Figura 6.5.3. Microfotografía de tejido nervioso (cerebro) de un feto abortado a los 5 meses de edad, con lesiones típicas asociadas a la infección con N. caninum, la flecha muestra la necrosis focal e infiltración de células mononucleares (tinción H-E 40X). Observadas con un microscopio compuesto y apoyado con un programa analizador de imágenes (Imagen Plus, Leíca)
En el cuadro 6.5.1. Se muestran los resultados obtenidos de los cerebros
recuperados de los animales abortados de ambos grupos del estudio de cohorte,
mediante la aplicación de las técnicas del PCR y HP.
Cuadro 6.5.1. Resultados de las técnicas de histopatología y PCR a los cerebros recuperados de los fetos bovinos abortados
Primer Gestación
Segunda Gestación Grupo Resultados
HP PCR HP PCR
Negativo Positivo
Negativo
1 3
1 3
1 4
3 2
Positivo
Positivo
Negativo
2 0
2 0
3 5
8 0
Total 6 6 13 13
Positivos (%) 50 50 30.8 84.6
150µm Gliosis
38
6.6. PRUEBAS DIFERENCIALES EN LAS HEMBRAS ABORTADAS De las 25 muestras de sueros de los animales que presentaron el aborto durante la
duración del estudio, para apoyar el diagnóstico diferencial de las enfermedades
más comunes del ganado lechero en el área como Brucelosis, Diarrea Viral Bovina,
Leptospirosis y Rinotraqueitis Infecciosa Bovina, fueron enviadas al Centro Nacional
de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal del Centro Nacional de Sanidad
Animal, en Tecamac, Edo. México lo que arrojó como resultados que el 100% de las
muestras fueron negativas a las enfermedades abortivas mencionadas.
6.7. PRUEBA SEROLÓGICA EN PERROS DE LA ZONA Como resultado de las pruebas serológicas obtenidas de las 26 muestras de sangre
(incluyen a los cuatro perros que habitan en el establo), tomadas a igual número de
perros que se encontraban regularmente en las áreas circunscritas al establo bajo
estudio, se obtuvo que el 26.9 % (7/26) de los perros muestreados fueron positivos.
Mientras que el resultado obtenido de las muestras de los cuatro perros que existen
permanentemente en el establo, solo uno de ellos resulto ser positivo, representando
un 25% (1/4) del total de los perros muestreados.
6.8. COMPORTAMIENTO REPRODUCTIVO
6.8.1. Días abiertos Los días abiertos obtenidos en los animales bajo este estudio (figura 6.8.1.1)
mostraron diferencia estadísticamente significativa entre los grupos de animales
seropositivos y seronegativos (P<0.05). El grupo de animales seronegativos a N.
caninum presentó un rango de 34 a 382 días abiertos, con una media de 118 días
abiertos; mientras que para el grupo de animales seropositivos a N. caninum el
rango observado fue de 49 a 538 días abiertos, con una media de 208 días abiertos.
39
Negativas Positivas0
50
100
150
200
250
b
a
Grupo
Día
s A
bier
tos
(No.
)
Figura 6.8.11. Promedios de los días abiertos de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum
6.8.2. Servicios por concepción En la figura 6.8.2.1 se presentan los resultados obtenidos en los grupos de animales
seronegativos y seropositivos a N. caninum, mostrándose una diferencia estadística
significativa entre ambos grupos (P<0.05). El promedio de servicios por concepción
en los animales del grupo seronegativos a N. caninum fue de 2.7 servicios por
concepción. Mientras que, el promedio en los animales del grupo seropositivos a N.
caninum fue de 4.1 servicios por concepción.
40
Negativo Positivo0
1
2
3
4
5
b
a
G rupo
Serv
icio
s po
r con
cepc
ión
(No.
)
Figura 6.8.2.1. Servicios por concepción en los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum
6.8.3. Intervalo entre parto-estro Los promedios de los días entre parto-estro de los grupos de animales
seronegativos y seropositivos a N. caninum se muestran en la figura 6.8.3.1. Estos
resultados observados no mostraron una diferencia estadística significativa entre los
dos grupos (P>0.05). El promedio de días entre parto-estro observado para el grupo
de animales seronegativos a N. caninum fue de 57.4 días entre parto-estro, con un
rango de 34 a 184 días. Mientras que el promedio de días entre parto-estro obtenido
para el grupo de animales seropositivos a N. caninum fue de 45 días, con un rango
de 21 a 95 días.
41
Negativo Positivo0
10
20
30
40
50
60
70 a
a
Grupo
Inte
rval
o Pa
rto-
Estro
(Día
s)
Figura 6.8.3.1. Días intervalo parto-estro de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum (Media ± DE)
6.8.4. Intervalo parto-parto Este parámetro no presentó una diferencia estadística significativa entre los dos
grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum (figura 6.8.4.1).
(P>0.05). Sin embargo, se debe de considerar que en el grupo de animales
seronegativos a N. caninum se presentaron cinco abortos y una de las vaquillas sólo
tenía 149 días de gestación al cierre de la investigación. Mientras que el grupo de
animales seropositivos a N. caninum mostraron un comportamiento más irregular
debido a que se presentaron cinco partos en la segunda gestación, 11 animales han
mostrado abortos, tres de las vacas están en gestación y dos animales fueron
inducidas al celo y a la producción de leche.
42
Negativo Positivo100
150
200
250
300
350
400a
a
G ru p o
Inte
rval
o Pa
rto-
Parto
(Día
s)
Figura 6.8.4.1. Intervalo parto-parto de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum (Media ± DE)
6.9. COMPORTAMIENTO PRODUCTIVO Los resultados de producción de leche, ajustada a 305 días, de los grupos de
animales seropositivos y seronegativos a la N. caninum se presentan en la figura
6.9.1. No se encontraron diferencias estadísticas significativas (P>0.05) al aplicar el
análisis de los datos mediante un Modelo Lineal General (MLG). Igualmente, los
resultados del análisis de los datos con el estadístico no paramétrico Kruskal-Wallis
no mostraron diferencias estadísticas significativas entre los grupos seropositivos y
seronegativos a la N. caninum (P>0.05). La producción media individual ajustada a
305 días para el grupo de animales seronegativos fue de 29.5 kg/día, con un error
estándar (EE) de la media de 1.3, mientras que el grupo de animales seropositivos
fue de 27.3 kg/día con un EE de 1.7. En la figura 6.9.2. muestra la produccion
promedio de leche a 305 días de los grupos de animales seropositivos y
seronegativos con 9022 kg y 8351 kg de leche, respectivamente, con un EE de la
media de 395 kg para el grupo de animales seronegativos y un EE de la media de
520.4 kg para el grupo de animales seropositivos. Mientras que la producción de
leche total a los 305 días para el grupo de animales seronegativos fue de 179,651 kg
y para el grupo de animales seropositivos fue de 165,780 kg. Estos datos permiten
estimar una diferencia de 14071.5 kg entre ambos grupos (figura 6.9.3).
43
Negativo Positivo05
101520253035 a a
Grupo
Prod
ucci
ón (k
g)
Figura 6.9.1. Producción media individual de leche ajustada a 305 días de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum
Negativo Positivo
2000
4000
6000
8000
10000 a a
Grupo
Prod
ucci
ón (k
g)
Figura 6.9.2. Producción media de leche total de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum
Aunque estadísticamente no se obtuvieron diferencias significativas en los
parámetros de producción, la relación existente entre el comportamiento
reproductivo y productivo es muy importante. Siendo el grupo de animales
seronegativos el que presentó los mejores resultados durante el seguimiento del
estudio.
44
Figura 6.9.3. Producción de leche total de los grupos de animales seronegativos y seropositivos a N. caninum
Seropositivo Seronegativo150000
160000
170000
180000
190000
165,780
179,851
Grupo
Prod
ucci
ón (k
g)
45
7. DISCUSIÓN
Se ha documentado que la transmisión vertical de Neospora caninum es muy
eficiente por lo cual se le ha implicado como la ruta principal de la infección crónica a
nivel de hato, debido a que los animales permanecen infectados de por vida y
pueden transmitir la infección a su descendencia, abuela-madre-hija (Cebrián,
Barberán y Ferrer, 2000; Anderson, Andrianarivo, Conrad, 2000; Dubey y Schares,
2006). El presente estudio, confirma que el grupo de animales positivos a N.
caninum fueron infectados por transmisión vertical manteniéndose el 100% de la
prevalencia en este grupo, ya que se registró el mismo seroestatus hasta el último
de los muestreos realizados y todas las crías nacidas de ellos conservaron también
seroestatus positivo a N. caninum (cuadro 6.2.1 y 6.3.1). Por otra parte estudios
realizados por Bergeron et al., (2000) demostraron una tasa menor de transmisión
vertical del 44.4%. Sin embargo los estudios realizados por Paré, Thurmond e
Hietala (1996) y Schares et al., (2002) reportaron en hatos de vacas productoras de
leche una prevalencia en la transmisión vertical del 85%, siendo esta también menor
a la observada en el presente estudio. Otros estudios llevados a cabo por Stenlund
et al., (2003) y Peregrine et al., (2004) encontraron resultados similares en cuanto al
índice referido, así como, una tendencia al incremento progresivo a través de los
años en hatos con un elevado número de vacas seropositivas. Estas diferencias
pueden ser debidas a dos razones; primera a que el grupo de animales estudiados
de los anteriores investigadores no se les dio un seguimiento permanente como el
realizado en esté estudio y la segunda a que el tamaño del hato pudo haber sido un
factor importante en los resultados obtenidos dado a que es más fácil dar
seguimiento a un hato pequeño que a un hato grande.
En el grupo de animales seronegativos a N. caninum presentó cambios en su
seroestatus en el tercer periodo de muestreo (después de su primer parto), atribuible
a una transmisión horizontal, registrándose una incidencia del 5.3% habiendo un
incremento posterior a este periodo hasta del 36.4%, es decir, que los casos de
seroconversión (casos nuevos) se incrementaron con el paso del tiempo; donde la
tasa de incidencia acumulada observada en el estudio fue del 31.2% (cuadro 6.2.1).
Por otro lado, en el grupo de animales seronegativos, la seroconversión observada
46
durante la primera gestación fue del 5.0% y en la segunda gestación del 47.4%. De
igual manera, la seroconversión observada para la totalidad de la cohorte fue del
50%, el cambio del seroestatus de este grupo incidió en el aumento de la
prevalencia de la población en estudio ubicándola en un 75%. Existen pocos
estudios que expliquen ampliamente esta forma de transmisión horizontal por lo
difícil de poder identificar los factores riesgo o fuentes de la infección. Dijkstra et al.,
(2002) observaron una seroconversión del 70% en 95 animales seronegativos que
tenían una edad de ocho meses a dos años y medio, los cuales experimentaron
seroconversión en un periodo de seis meses, situación similar al del presente
estudio. Otro estudio, realizado por Thurmond e Hietala (1997b) reportaron que
becerras seronegativas se seroconvirtieron a partir de los seis meses de edad,
cuando los animales comenzaron a consumir raciones mezcladas. Igualmente, los
estudios de Häsler et al., (2006) demostraron cambios de seroestatus durante la
gestación realizando de tres a cinco muestreos, donde el 26.5% (30/113) iniciaron
como seropositivas y el 73.5% (83/113) iniciaron como seronegativas, de las 83
seronegativas soló una mostró seroconversión a positiva durante la gestación, por lo
que consideraron que la transmisión horizontal fue responsable de la seroconversión
aunque su importancia fue baja. En el presente estudio la seroconversión tendió al
crecimiento y fue posterior al momento en que los animales fueron trasladados de la
unidad de recría al establo de producción, tres días post parto, lo cual puede sugerir
que la transmisión horizontal estuvo relacionada con la ingestión de oocistos
presentes en el ambiente de su nuevo alojamiento, depositados y/o diseminados por
la presencia de los perros tanto los propios como los que llegan de paso, de coyotes
o de algún otro animal silvestre, hipotéticamente implicado en el ciclo biológico, que
de alguna forma contaminan el agua, los alimentos, los forrajes o el ensilaje. Por otra
parte, la seroconversión de las crías nacidas de hembras seronegativas sucedió
también posterior al cambio de los animales a las instalaciones de producción,
caracterizándose por presentar una seroprevalencia general del 45.8%.
Los trabajos realizados por Romero et al., (2003) encontraron que en un total de
3002 hembras la seroprevalencia de N. caninum fue de 39.7% y que la
seroprevalencia aparente en hijas y madres fue del 33.3% y 38.2%,
respectivamente. La asociación entre el seroestatus de las hijas y las madres en 747
pruebas realizadas mostraron que el riesgo de ser seropositivas fue de 2.8 cuando la
madre era seropositiva, mientras que la probabilidad de la transmisión horizontal fue
47
de 0.22. En crías seropositivas nacidas de madres seropositivas, el 63.7%
correspondió a la probabilidad de que las descendientes fueran seropositivas. Por
otra parte, la probabilidad del incremento de la transmisión horizontal aumenta a 3.4
cuando la transmisión vertical disminuye.
La mayoría de los estudios realizados con respecto a la transmisión vertical
coinciden en atribuir una gran importancia que tiene dentro de los hatos. Sin
embargo, en nuestro estudio se observó que la transmisión horizontal tuvo un papel
muy importante, debido al alto porcentaje de seroconversión que tuvo el grupo
seronegativo durante el periodo analizado. Es claro que existe la necesidad de
comprender de manera integral la relación entre la dinámica de la transmisión
vertical y la transmisión horizontal, por lo tanto deben de realizarse estudios
enfocados a conocer los factores que predisponen a los animales seronegativo a N.
caninum para contraer esta parasitosis bajo diferentes condiciones geográficas y de
manejo de las explotaciones de ganado lechero en el estado de Aguascalientes.
Al analizar la asociación entre el seroestatus y la presentación de abortos en el
grupo de animales seropositivos a N. caninum se observó que el RR fue de 1.25 y el
OR de 1.3 para la primera gestación (P<0.05), en tanto que para la segunda
gestación estos resultados fueron más elevados (2.20 y 3.67 respectivamente)
(P<0.05). El ORP fue de 1.33 para la primera gestación y de 3.69 para la segunda.
Estudios realizados en el estado de Aguascalientes, el OR estimado para la
asociación que se tuvo entre la seropositividad y los antecedentes del aborto, fue de
1.4 (García et al., 2002; Gutiérrez et al., 2007). Por otro lado, los estudios realizados
por otros autores (Hernández et al., 2002; Kashiwazaki et al., 2004; Romero et al.,
2005), igualmente observaron una asociación significativa entre N. caninum y el
aborto durante la primera y segunda gestación en animales infectados con N.
caninum, con valores del OR de 1.6 y 3.8, siendo estos más altos al que obtenido en
nuestro estudio. Por otra parte, los estudios de realizados por Dubey (2003b) y
Stenlnud et al., (2003), estimaron que el 9% de las gestaciones de vacas lecheras
confirmadas en su diagnóstico positivo a N. caninum finalizaron con aborto. Mientras
que el promedio de la edad del aborto fue de seis meses y que las vacas
seropositivas con títulos de 1:3200 en IFAT tuvieron un riesgo elevado de abortar
(P<0.05). así mismo, el estudio realizado por López-Gatius et al., (2005),
48
identificaron que el 4.2% de las vacas seronegativas abortaron, mientras que en el
grupo de animales seropositivo fue del 30.1%. Como resultado del presente estudio
nos sugiere que la seropositividad efectivamente es un riesgo importante para que
se presenten los abortos y de que al incrementar la edad y el número de
gestaciones se eleva el riesgo de la seroconversión, así como la probabilidad de que
los abortos sean causados por N. caninum. Así mismo, la distribución de la infección
por edad de los animales sugiere que la misma enfermedad se extiende después del
nacimiento probablemente debido a una transmisión horizontal.
Los resultados obtenidos por la técnica de PCR en los 19 abortos recuperados
durante las dos gestaciones de duración del estudio mostraron que el 73.6% de las
muestras fueron positivas a N. caninum. Mientras que con la técnica de HP el 36.8%
de las muestras presentaron las lesiones características provocadas por la infección
con N. caninum. Diversos trabajos han comprobado la alta sensibilidad y la
especificidad de la PCR como herramienta de diagnóstico y las ventajas de su uso
Dubey y Schares (2006). En un estudio realizado anteriormente, se observó que la
técnica de diagnóstico por PCR anidado fue altamente confiable, en este mismo
estudio se determinó una prevalencia a N. caninum en los fetos abortados del
79.5%, mientras que las mismas muestras procesadas por la técnica diagnóstica con
HP fue del 45% (Medina et al., 2006), estos valores fueron similares a los que fueron
observados en el presente estudio. Estos resultados sugieren la confiabilidad en la
sensibilidad y la especificidad de la prueba utilizada (PCR) para el diagnóstico a N.
caninum y por consiguiente la confirmación de que el aborto es provocado por este
parásito.
De manera paralela las 25 muestras de sueros que correspondieron a los animales
que presentaron el aborto resultaron el 100% negativas a las principales
enfermedades abortivas que afectan al ganado lechero como son: Brucelosis,
Leptospirosis, IBR y DVB. Los trabajos realizados por Rivera y Zúñiga (2003),
mencionan que los abortos no necesariamente son de origen infeccioso. Por otro
lado, estudios realizados por Pfeiffer et al., (2002) y Hall, Reichel y Ellis (2005),
demostraron la asociación que tienen las infecciones por DVBV y N. caninum en las
vacas para incrementar el riesgo de aborto hasta en un 37%, comparado con el 25%
del riesgo de abortar cuando sólo existe la infección con N. caninum y del 1.2%
cuando la enfermedad de la DVB se encuentra sola. En nuestro estudio el estado
49
seronegativo puede ser explicado en parte a que esta explotación tiene un manejo
preventivo eficiente. También se debe de considerar que el hato bajo estudio cuenta
con su certificado de ser libre de brucelosis, por lo que nos da mayor seguridad de
que la presencia de anticuerpos de N. caninum en los sueros de las hembras que
abortaron es debido a que estas hembras en algún momento fueron expuestas al
contacto con N. caninum. Los resultados de positividad a la N. caninum obtenidos de
los fetos abortados en este trabajo nos sugieren que la N. caninum es la causa del
aborto. Hay que mencionar que existieron cinco fetos en los que no fue posible
determinar la presencia de N. caninum y de los cuales no se logró obtener un
diagnóstico definitivo. En este estudio no fue posible encontrar una asociación entre
las enfermedades abortivas y N. canimun, lo que permite determinar que la principal
causa del aborto fue debida a este parásito.
De los 26 perros muestreados en la zona de estudio, el 26.9 % fueron positivos a N.
caninum, de los cuales sólo el 3.8 % correspondió a los existentes en el rancho.
Estudio realizado por Stenlund et al., (2003), donde observaron el acceso libre de los
perros al hato, muestrearon a los perros al inicio y al final del la duración del estudio,
donde los resultados fueron negativos a la presencia de anticuerpos a N. caninum.
Por otra parte, en el estudio realizado por Guimarães et al., (2004), encontraron que
el 21.6% de los perros que vivían en establos lecheros (n=23) fueron positivos a N.
caninum, considerando con esto la asociación de la existencia de perros y la
presencia de anticuerpos a N. caninum en explotaciones bovinas. Otranto et al.,
(2003), también encontraron la relación entre la existencia de perros y la presencia
de la enfermedad al realizar un estudio en ganado bovino productor de carne y de
leche. En nuestro estudio la baja seroprevalencia observada en perros pudo haber
sido a que no se puede controlar la entrada y salida de otros perros en el establo,
que por consecuencia no fueron muestreados. También, se debe de considerar la
presencia de coyotes en el área, que pudieron haber tenido acceso al establo, para
consumir placentas o fetos abortados, existiendo la posibilidad de infectarse y
posteriormente excretar oocistos y contaminar agua y alimentos.
50
Las medias de los días abiertos mostraron una diferencia estadística significativa
entre los grupos de animales seropositivos y seronegativos a N. caninum (P<0.05).
El grupo seronegativo a N. caninum presentó un rango de 34 a 382 días, con una
media de 118 días. Mientras que el grupo seropositivo a N. caninum el rango fue de
49 a 538 días, con una media de 208 días. Existen algunos estudios similares
realizados, entre ellos se encuentra el de Hall, Reichel y Ellis (2005) quienes no
encontraron diferencias significativas con respecto al tiempo de concepción o días
abiertos aunque presentan un promedio de 22.5 días más las vacas seropositivas
con respecto a las negativas. En otro estudio realizado por Romero et al., (2005)
observaron que el número de días abiertos en vacas seropositivas fue de 88.1 y de
65.6 en vacas seronegativas, de la misma forma no encontraron diferencias
significativas del nacimiento a la concepción. Se puede establecer en el este estudio,
que se encontró un efecto negativo sobre los días abiertos en el grupo de animales
seropositivos a N. caninum, mostrando una diferencia entre medias de 89.5 días
abiertos, con respecto al grupo de animales seronegativos, por lo que se ha
considerado que el seroestatus positivo tiene influencia en este parámetro.
El promedio de servicios por concepción en los animales del grupo de animales
seronegativos a N. caninum fue de 2.7, mientras que en el grupo de animales
seropositivos fue de 4.1, mostrando diferencia estadística significativa entre ambos
grupos (P<0.05). Estos resultados concuerdan con los reportados por Hall, Reichel
y Ellis, (2005), quienes reportaron que el número de servicios por concepción del
grupo de animales seropositivos fueron estadísticamente significativos, ya que
tuvieron un promedio de 3.7 más servicios por concepción. Sin embargo, difieren
con los reportados por Stenlund et al., (2003) y Romero et al., (2005), quienes no
observaron una asociación entre el seroestatus y el número de servicios por
concepción. Establecer una comparación con este factor es difícil debido a la
influencia de muchos factores (genéticos, manejo, aborto, inseminación artificial
efectiva, alimentación y la presencia de otras enfermedades abortivas).
51
Los promedios de los días con respecto al intervalo entre parto-estro de los grupos
de animales seronegativos fue de 57.4 días y los seropositivos a N. caninum fue de
45 días. Los resultados no mostraron una diferencia estadística significativa entre los
grupos (P>0.05). Sin embargo, se debe de considerar que en el grupo de los
animales seronegativos se presentaron un total de cinco abortos y una de las
vaquillas presentaba 149 días de gestación al cierre de la investigación. Mientras
que el grupo de animales seropositivos mostraron un comportamiento más irregular
debido a que se presentaron un total de cinco partos en la segunda gestación,
presentaron 11 abortos, tres de las vacas están gestantes y dos de los animales
tuvieron que ser inducidos al celo y a la producción de leche. No se encontraron
estudios que permitan relacionar estos parámetros como se han abordado en este
trabajo de investigación.
Al analizar la producción ajustada a 305 días en leche, en los grupos de animales
seropositivos y seronegativos a N. caninum, no se pudo encontrar diferencias
estadísticas significativas (P>0.05). La producción media individual ajustada del
grupo de animales seronegativos fue de 29.5 kg/vaca/día, mientras que en el grupo
de animales seropositivos fue de 27.3 kg/vaca/día y se observó 1.15 kg/vaca/día de
diferencia entre el grupo de animales seropositivos a N. caninum con respecto al
grupo de animales seronegativos. En concordancia, los estudios realizados por
Thurmond e Hietela (1997a) y Pfeiffer et al., (2002), demostraron la disminución de
la producción de leche en vacas seropositivas comparada con vacas seronegativas.
Mientras que los estudios de Kashiwazaki et al., (2004), sólo observaron este efecto
negativo de la infección por N. caninum en la producción de leche durante la primera
lactación en las vacas seropositivas más no en las subsecuentes lactancias. Por otra
parte, los estudios realizados por Thurmond e Hietala (1997a), Hobson et al., (2002),
Hall, Reichel y Ellis (2005), Peregrine et al., (2004) y Romero et al., (2005), no
lograron demostrar diferencias significativas en la producción de leche entre
animales seropositivos y seronegativos. Aunque en este estudio no se obtuvieron
diferencias estadísticas significativas en los parámetros de producción, si se logró
observar diferencias estadísticas significativas en algunos de los parámetros
reproductivos evaluados. Por lo que, la relación existente entre el comportamiento
reproductivo y productivo parece ser muy importante, dado que en este trabajo el
grupo de animales seronegativos presentó los mejores resultados durante el
52
seguimiento del trabajo con respecto a los resultados observados en el grupo de
animales seropositivos.
53
8. CONCLUSIONES
1. La transmisión vertical es un mecanismo primordial para mantener de forma
endémica la neosporosis bovina.
2. La transmisión horizontal propicia una seroconversión considerable que impacta
sobre la incidencia y la prevalencia.
3. La transmisión vertical y la horizontal determinan la elevada prevalencia de la
neosporosis en el hato, ambas con un valor epidemiológico similar.
4. La seropositividad a N. caninum se asocia con la incidencia de abortos, con la
disminución de parámetros reproductivos y productivos repercutiendo esto en altas
tasas de desecho de vacas.
54
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