UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE ZOOTECNIA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE NUTRICIÓN

ENFERMEDADES PARASITARIAS

Presencia de Neospora caninum en bovinos de leche del establo

“Renato Zepilli Ferraza” en la UNALM

Lima-Perú

2015 - I

INTEGRANTES:

I. RESUMEN

Neospora caninum es un protozoario con una amplia gama de hospederos, incluyendo en su

ciclo biológico a el ganado bovino como hospedero intermediario y a los perros como

hospederos definitivos, este parásito pertenece al grupo de las coccidias y es muy próximo al

Toxoplasma. La enfermedad que causa es llamada neosporosis y esta se ha convertido en una

enfermedad de importancia internacional ya que es una de las principales causas de aborto en

los bovinos, y por lo tanto es de gran importancia económica en la ganadería lechera. Se han

desarrollado una serie de técnicas diagnósticas, siendo las más utilizadas las serológicas que

incluyen ELISA e IFAT. El diagnóstico de aborto es complejo, ya que la serología positiva sólo

es indicativa de exposición a Neospora. En la actualidad no hay tratamiento efectivo y como

tampoco se ha desarrollado una vacuna eficiente para su control. El objetivo de este estudio fue

determinar la presencia N. caninum en la granja de producción de leche de la Universidad

Nacional Agraria La Molina, tomando como base el análisis anual que esta realiza, de este se

escogió aleatoriamente una vaca de 5to parto y se procedió a la toma de muestra de sangre para

su próximo análisis serológico en el laboratorio de SENASA siendo...

II. REVISIÓN DE LITERATURA

a) Definición de la Enfermedad:

La Neosporosis Bovina es una enfermedad protozoaria cuyo problema económico radica en los

abortos que provoca en las vacas. En las terneras recién nacidas presentan signos clínicos de

ataxia neuromuscular y contractura articular y en las hembras gestantes, muerte fetal

acompañada de retención placentaria y/o aborto. (Guamán., 2011)

El patógeno causante es Neospora caninum y la enfermedad se denomina Neorporosis Bovina,

aunque también es conocida por otros nombres, como Neosporosis Abortiva bovina y

Neosporosis fetal bovina.

“El Neospora caninum tiene poca o ninguna especificidad por la célula huésped y es capaz de

invadir un amplio rango de células nucleadas en diferentes especies de animales de sangre

caliente como: caninos, bovinos, ciervos, caprinos, ovinos equinos y otros.” (Aguirre, 2008)

Esta enfermedad es comúnmente asintomática, pero en los casos diagnosticados presentan

abortos con consecuencias de producción de leche y pérdidas de neonatos. El aborto se puede

darse entre los 3 meses de gestación hasta su término. Sin embargo, la mayoría ocurre alrededor

de los 5 a 6 meses de gestación. (Guamán., 2011)

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b) Ciclo Biológico:

La vida del parasito se compromete a un hospedero definitivo: El perro, sin embargo puede

presentarse en coyotes, lobos (Cánidos salvajes) y varios hospederos intermediaron como:

bovinos, equinos, ovinos, ciervos, bufados, etc.

Sin embargo por un tema netamente Zootecnista, nos centraremos en el Ganado Vacuno.

Comprende 3 estadios: taquizoitos, quistes tisulares y ooquistes.

- Los taquizoitos se localizan en el hospedador intermediario. Se caracterizan por tener

una forma ovoide semilunar o globular dependiendo de la etapa de división en la que se

encuentren. Miden aproximadamente 6 x 2um y se los puede encontrar en células

nerviosas, fibroblastos, hepatocitos, endotelio vascular, células de los túbulos renales,

en donde normalrnente se dividen. (Aguirre, 2008)

- Los quistes tisulares tienen forma ovalada. Miden aproximadamente 107 um y se

encuentran en el hospedador intermediario, en el sistema nervioso central y la retina, en

el interior de los quistes tisulares se encuentran unas estructuras denominadas,

bradizoitos, que miden 7-8 x 2 um, los quistes en su interior pueden contener hasta 200

bradizoitos y pueden reactivarse cuando se deteriora la inmunidad celular (Dubey,

2003b). Los quistes tisulares pueden permanecer dentro del hospedador infectado por

varios años sin presentar ninguna manifestación clínica. (Hemphill A, 2001)

- Los oocystos tienen forma subesférica con un diámetro aproximadamente de 10-11 um.

Se encuentran en el intestino del hospedador definitivo y son excretados por las heces.

Son morfológicamente similares a oocystos de T.Gondii y Hammondi, por lo que

existen varios diagnósticos equívocos. (Hemphill A, 2001)

c) Diagnostico

Existen diferentes técnicas de análisis de presencia de N. caninum, siendo las pruebas

serológicas más efectivas y confiables, además que es más utilizada en análisis

epidemiológicos. La presencia de anticuerpos a N. caninum en un animal es indicativo de

exposición al protozoo. Las técnicas serológicas que han sido utilizadas para indicar anticuerpos

en suero o fluidos corporales de fetos son inmunofliorescencia indirecta (IFI) y el de enzima

inmuno ensayo (ELISA). Los diagnósticos presuntivos de N. caninum en fetos bovinos pueden

realizarse mediante le estudio histopatológico. En nuestro caso se tomó una muestra se sangre

de la vaca N° 871 de 7 años del corral número 6 de la granja UNALM para determinar la

presencia de N. caninum en este establo.

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d) En el Perú

En el Perú entre los agentes infecciosos abortígenos de mayor importancia en ganado lechero de

crianza intensiva o semi intensiva. La neosporosis, enfermedad producida por Neospora

caninum, es causa de abortos en vacas en todos los continentes y por lo tanto genera pérdidas

económicas directas como también costos indirectos asociados al diagnóstico veterinario,

repetición de la inseminación, aumento tiempo de lactancia, pérdidas de producción láctea y los

costos de reemplazo en los casos de eliminación de las vacas (Barr et al., 1997).

En el país se han encontrado prevalencias de anticuerpo contra N. caninum en bovinos lecheros;

57% en Arequipa (Anderson, 1999); 42.9% en Cajamarca (Cabrera et al., 2000); 29.6% en el

Valle de Lima (Silva et al., 2002); 40.4% en Amazonas (Quevedo et al., 2003) y 18.1% en Puno

(Atocsa, 2005). Sin embargo, a pesar de estos resultados, se hace necesario continuar aportando

mayor información epidemiológica relacionada a la neosporosis en nuestro país.

La neosporosis es una infección emergente en muchos países y no se puede descartar su acción

y repercusión en camélidos Sudamericanos del Perú. Considerando la ausencia de datos que se

tiene sobre la neosporosis como agente causal de abortos en camélidos sudamericanos, se han

reportado seroprevalencias para esta enfermedad en las comunidades de la Sierra Central del

Perú y en llamas de la Provincia de Melgar Puno donde no confirman que este parasito sea

causa de problemas reproductivos. (E. Frank, 2008)

III. MATERIALES Y METODOS

Para este estudio se investigó la presencia del parasito en los registros de la granja de bovinos de

leche de la Universidad Nacional Agraria La Molina, una vez obtenido el registro del análisis

anual que esta casa de estudios realiza a sus 125 vacas de producción, se separó y conto a las

infectadas y no infectadas para así obtener las estadísticas de infección, obteniendo 25.6%

infectadas y 74.4% no infectadas, 32 y 93 vacas respectivamente. Del número de vacas

infectadas, se escogió aleatoriamente a una de ellas para proceder a realizar el análisis modelo

en laboratorio, como este debe ser en un laboratorio especializado, la muestra de 8ml de sangre

procedente del hospedero intermediario, vaca N° 871 de 7 años y de descarte, se mandó a

analizar al laboratorio de SENASA. Siendo el tipo de análisis realizado a la muestra el de

ELISA de competencia, el cual describiremos.

a) Técnicas y procedimiento:

i. REGISTRO:

Procedente del establo “Renato Zepilli Ferraza” ubicado en la Universidad

Nacional Agraria La Molina. Los resultados de este fueron obtenidos el 6 de

Enero del 2014 procedente del muestreo de 125 vacas analizadas en el

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laboratorio de parasitología y microbiología de la facultad de medicina

veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. El registro exacto

esta anexado.

ii. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE:

Se seleccionó aleatoriamente una vaca del conjunto de animales infectados

según el registro anterior, para realizar la toma de muestra de sangre y así

determinar si aún hay presencia de Neospora caninum en el hato por medio del

análisis de ELISA por competencia.

Procedimiento:

1. Selección del animal

2. Observación del animal

3. Inmovilización del animal

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N° 871EDAD 7 años PESO 680kg

PARTO 5toESTADO Descarte

VACA DE PRODUCCIÓN

Vaca N° 871

Sangrado Ubre descolgada - Mastitis

4. Toma de muestra

iii. ANALISIS EN SENASA:

El ELISA se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una

enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto

inmunológica como enzimática. Al estar uno de los componentes (antígeno o

anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte

(inmunoadsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y,

por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato

especifico que al actuar la enzima producirá un color observable a simple vista

o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro

(Cultek, 2006). Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a

continuación:

- Anticuerpos marcados: ELISA Directo, ELISA Indirecto, ELISA sándwich

Doble (DAS), Heterólogo (HADAS)

- Antígeno marcado: ELISA competitivo

ELISA POR COMPETENCIA: Consta de las siguientes etapas:

Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente

patógeno a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados

deficientemente o no fijados.

Adición en concentración conocida de una mezcla de antígenos del

anticuerpo utilizado en el paso anterior, marcados con una enzima y

antígenos desconocidos objeto de estudio. Paralelamente, añadir

únicamente antígenos del anticuerpo usado en el paso anterior,

marcados con una enzima. Lavar para eliminar los antígenos que no

hayan reaccionado.

Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima

marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.

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Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado de ambas

pruebas y comparar los resultados. Si las lecturas de ambas pruebas son

análogas, el antígeno a estudio no tienen nada que ver con los

anticuerpos empleados para tapizar el soporte. Si hay diferencia en las

lecturas de ambos pocillos, el antígeno objeto de estudio, está

relacionado serológicamente con el anticuerpo empleado para tapizar el

soporte y la diferencia de densidad óptica, es proporcional a la

concentración del antígeno problema en la muestra.

OBSERVACIÓN (SENASA):

- Muestras de suero con porcentaje de Inhibición (%I) mayores o iguales

a 30% se clasifican como POSITIVAS.

- Muestras de suero con porcentajes de Inhibición (%I) menores a 30%

se clasifican como NEGATIVAS.

b) Control y prevención

Acciones sobres las vacas:

i. Eliminación de las seroreactoras

Comenzar con vacas que hayan abortado anteriormente

Las seropositivas que no pueden ser eliminadas deberías ser inseminadas

con razas de aptitud cárnica.

Diagnosticar correctamente los abortos, pues se pueden tener crianzas con

alta seroprevalencia y alto número de abortos en los que Neospora coexiste

con otros patógenos causantes de abortos: Diarrea viral bovina. Herpes

bovino Tipo I, Brucella abortus y Leptospira.

ii. Control de la transmisión vertical

Controlar serologicamente a las hembras para la reposición, tanto las

nacidas en el hato, como las adquiridas en otros ganaderos.

Dejar para reposición sólo terneras nacidas de vacas seronegativas.

Si se utiliza transplante de embriones, comprobar que las receptoras sean

seronegativas.

Acciones sobre los Perro o Control de la transmisión horizontal:

Evitar al acceso de perros y otros cánidos a los recintos ganaderos,

especialmente a los almacenes de alimentos, para evitar la contaminación

fecal.

Rápida eliminación de placentas, fetos abortados y animales muertos para

evitar su ingestión por carnívoros.

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Aparentemente esta acción parece muy fácil y sencilla; sin embargo, es la acción más

difícil y de extrema importancia, puesto que su inacción (por desidia o por

irresponsabilidad), posibilitará, por si sola, el parasitismo.

c) Tratamientos

IV. RESULTADOS

i. REGISTRO: En este se analizó un total de 125 vacas, de las cuales 32 estaban

infectadas y 93 no infectadas.

ii. ANALISIS VACA N° 871:

Luego de la obtener la muestra, procesarla para obtener el suero y así analizarla

mediante el método de ELISA por competencia por el laboratorio

especializado. El resultado de la prueba fue POSITIVO y esto muestra que aún

hay presencia del parásito Neospora caninum en el hato. Este puede seguir con

su ciclo gracias al poco énfasis que se le da a la prevención y control de la

transmisión de la enfermedad, y ello por la asintomatología de esta. La vaca

analizada no ha tenido abortos ni mortinatos, pero no quiere decir que en su

próximo parto no vaya a suceder alguna complicación por la constancia de la

parasitosis sin tratamiento o por el contrario la inmunización por la constante

exposición a este. Además la enfermedad puede expandirse, infectando vacas

seronegativas de menor edad produciendo la merma en la producción de leche y

performance en general.

V. CONCLUSIONES

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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Aguirre, S. C. (2008). Evaluacion del efecto del uso de la vacuna (Bovilis Neoguard) en

la Reduccion de la Tasa de Abortos en Cuatro Haciendas de la Sierra Ecuatoriana. 43p.

E. Frank, M. A. (2008). South American Camelids research (Vol. 2). Germany:

Wageningen Academic. Recuperado el 29 de Junio de 2015

Guamán., S. M. (2011). NEOSPOROSIS BOVINA. 91p.

Hemphill A, F. N. (2001). The antigenic composition of Neospora caninum and milk

production in dairy cows. Journal American Veterinary Association, 219; 632-635.

Baker DG. Flynn’s parasites of laboratory animals. 2007 813 p.

Barr BC, Anderson ML, Sverlow KW, Conrad PA. 1995. Diagnosis of bovine fetal

Neospora infection with an indirect fluorescent antibody test. Vet Rec 137: 611-613.

Rivera H, Nelson D, Tabacchi L. Neospora caninum y otros agentes en fetos abortados

de bovinos lecheros del valle de Lima. Rev Int Vet Perú 2000;11: 1-7.

Lapage G. 1983. Parasitología Veterinaria. 8a ed. México: Continental. 790 p.

Quevedo J, Chávez A, Rivera H, Casas E, Serrano E. 2003. Neosporosis en bovinos

lecheros en dos distritos de la provincia de Chachapoyas. Rev Inv Vet Perú 14: 33-37.

Borchet A. 1981. Parasitología Veterinaria. 3a ed. España: Acribia. 745 p.

Silva P, Chávez A, Rivera H, Casas E. 2002. Seroprevalencia de Neospora caninum en

bovinos lecheros del Valle de Lima. Rev Inv Vet Perú 13:51-55.

Soulsby E. 1988. Parasitología y Enfermedades Parasitarias en los Animales

Domésticos. México: Interamericana. 823 p.

Tizard I. 2000. Inmunología Veterinaria. 6ta ed. México: Mc Graw-Hill Interamericana.

517 p.

Andresen, H. 1999. Neosporosis en el Perú y el mundo. Rev. Cienc. Vet. 15: 11-16.

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VII. ANEXO

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA

Laboratorio de Microbiologia y Parasitologia - Sección Parasitologia

N° REGISTRO: 1457

EXAMEN: Parasitológico

ESPECIE: Bovino

PROCEDENCIA: UNALM - Ing. Mixan

EXAMEN SOLICITADO: Descarte de Neospora caninum por

ELISA de Competencia.

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N° NOMBRE %I RESULTADO N° NOMBRE %I RESULTADO N° NOMBRE %I RESULTADO1 331 57.11 Positivo 43 1015 63.69 Positivo 85 1151 71.74 Positivo2 385 -9.61 Negativo 44 1017 6.38 Negativo 86 1153 -2.51 Negativo3 397 72.91 Positivo 45 1019 43.67 Positivo 87 1155 -4.22 Negativo4 551 -10.5 Negativo 46 1021 10.26 Negativo 88 1161 -31.6 Negativo5 575 3.03 Negativo 47 1023 -5.89 Negativo 89 1165 10.54 Negativo6 693 67.03 Positivo 48 1027 -7.56 Negativo 90 1167 3.47 Negativo7 705 13.97 Negativo 49 1029 -12.17 Negativo 91 1169 13.22 Negativo8 761 44.57 Positivo 50 1033 8.43 Negativo 92 1171 2.13 Negativo9 775 -0.59 Negativo 51 1035 67.81 Positivo 93 1173 62.24 Positivo10 811 37.39 Positivo 52 1041 72.23 Positivo 94 1175 6.5 Negativo11 815 -6.01 Negativo 53 1043 6.58 Negativo 95 1177 8.72 Negativo12 845 4.51 Negativo 54 1045 81.75 Positivo 96 1181 -25.81 Negativo13 857 71.93 Positivo 55 1049 74.43 Positivo 97 1183 -2.65 Negativo14 859 -2.22 Negativo 56 1051 5.4 Negativo 98 1185 8.06 Negativo15 867 -11.29 Negativo 57 1053 13.45 Negativo 99 1187 5.82 Negativo16 871 36.02 Positivo 58 1057 -0.83 Negativo 100 1209 13.35 Negativo17 873 -14.52 Negativo 59 1059 -17.47 Negativo 101 1211 9.15 Negativo18 877 -26.3 Negativo 60 1063 75.47 Positivo 102 1215 72.06 Positivo19 881 -20.8 Negativo 61 1069 -12.86 Negativo 103 1217 18.85 Negativo20 885 62.61 Positivo 62 1071 -11.65 Negativo 104 1237 -5.64 Negativo21 905 0.67 Negativo 63 1075 -4.91 Negativo 105 1239 67.22 Positivo22 909 -3.97 Negativo 64 1079 13.35 Negativo 106 1241 -14.04 Negativo23 919 -20.22 Negativo 65 1081 -2.22 Negativo 107 1249 7.54 Negativo24 923 -11.65 Negativo 66 1083 5.82 Negativo 108 1255 1.94 Negativo25 927 -29.74 Negativo 67 1085 -9.24 Negativo 109 1263 -15.21 Negativo26 931 -14.62 Negativo 68 1093 -7.16 Negativo 110 1273 -23.26 Negativo27 933 59.65 Positivo 69 1111 -1.92 Negativo 111 4115 70.56 Positivo28 939 47.45 Positivo 70 1117 -0.28 Negativo 112 8101 65.65 Positivo29 953 -6.77 Negativo 71 1119 -26.89 Negativo 113 8105 77.38 Positivo30 969 -25.12 Negativo 72 1121 64.08 Positivo 114 8107 10.2 Negativo31 977 -26.59 Negativo 73 1123 -9.52 Negativo 115 10101 75.68 Positivo32 981 0.96 Negativo 74 1125 66.74 Positivo 116 10103 -20.51 Negativo33 983 -34.15 Negativo 75 1127 -6.48 Negativo 117 10105 60.35 Positivo34 985 -7.16 Negativo 76 1129 -13.22 Negativo 118 1118/8111 9.24 Negativo35 989 70.58 Positivo 77 1131 76.35 Positivo 119 189/681 2.88 Negativo36 993 -7.83 Negativo 78 1135 0 Negativo 120 3109/8109 48.63 Positivo37 997 13.35 Negativo 79 1137 7.98 Negativo 121 D5N979 -4.14 Negativo38 1001 3.77 Negativo 80 1139 78.86 Positivo 122 ML655 13.77 Negativo39 1007 2.07 Negativo 81 1141 -15.6 Negativo 123 PLP-1003 -2.14 Negativo40 1009 -21.79 Negativo 82 1145 74.43 Positivo 124 PP929 -21.98 Negativo41 1011 5.79 Negativo 83 1147 -7.95 Negativo 125 WGT845 3.99 Negativo42 1013 65.75 Positivo 84 1149 3.84 Negativo

11

12

Hospedero Definitivo:

Perro

Hospedero Definitivo:

Perro