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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
EFECTO ANTIMICROBIANO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE
PROPÓLEO ECUATORIANO FRENTE A CEPAS DE Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis
Proyecto de investigación presentado como requisito previo a la obtención del título de
Odontóloga
Autor: Reyes Cedeño María José
Tutor: Juan Pablo Jaramillo Burneo
Quito, Octubre 2018
ii
DERECHOS DE AUTOR
Yo, María José Reyes Cedeño en calidad de autor del trabajo de investigación “EFECTO
INHIBITORIO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE PROPÓLEO
ECUATORIANO FRENTE A CEPAS DE Aggregatibacter actinomycetemcomitans
y Porphyromonas Gingivalis”, autorizo a la Universidad Central del Ecuador a hacer uso
de todos los contenidos que me pertenecen o parte de los que contiene esta obra, con fines
estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente
autorización, seguirán vigentes a mi/nuestro favor, de conformidad con lo establecido en
los artículos 5, 6, 8; 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad intelectual y su
Reglamento.
También autorizo a la Universidad Central del Ecuador a realizar la digitación y
publicación de este trabajo de inve4stigacion en el repositorio virtual, de conformidad a
lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.
………………………………
María José Reyes Cedeño
1721521589
iii
APROBACIÓN DEL TUTOR/A DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
Yo, Juan Pablo Jaramillo Burneo, en mi calidad de tutor del trabajo de titulación,
modalidad Proyecto de investigación elaborado por María José Reyes Cedeño; cuyo título
es ““EFECTO INHIBITORIO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE PROPÓLEO
ECUATORIANO FRENTE A CEPAS DE Aggregatibacter actinomycetemcomitans
y Porphyromonas Gingivalis””, PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL GRADO DE
ODONTÓLOGO considero que el mismo reúne los requisitos y méritos necesarios en el
campo metodológico y epidemiológico para ser sometido a la evaluación por parte del
tribunal examinador que se designe, por lo que APRUEBO, a fin de que el trabajo sea
habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por la Universidad
Central del Ecuador.
En la ciudad de Quito a los 15 días del mes de agosto del 2018.
……………………………….
Juan Pablo Jaramillo Burneo
DOCENTE-TUTOR
C.I. 17013048310
iv
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL
El Tribunal constituido por:
Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del
título de Odontólogo presentado por la señorita MARÍA JOSÉ REYES CEDEÑO.
Con el título:
“EFECTO ANTIMICROBIANO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE
PROPÓLEO ECUATORIANO FRENTE A CEPAS DE Aggregatibacter
actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis”
Emite el siguiente veredicto:
Fecha:
Para constancia de lo actuado firman:
Nombre Apellido Calificación Firma
Presidente: Dra. Marina Dona …………… ……………………………
Vocal 1: Dra. Mariela Balseca …………… ……………………………
v
DEDICATORIA
A Dios y a la Virgen que me han concedido vida, salud, fortaleza en los momentos de
debilidad, sabiduría para tomar las mejores decisiones y han guiado cada uno de mis
pasos a lo largo de mi vida y carrera y han puesto en mi camino a excelentes profesores,
amigos y compañeros.
A mis familiares a quienes amo con todo mi corazón, Marlón, Gladys, Lisseth, Daniela,
Alicia, Pedro y Nancy.
A mi padre Marlon, de quién he aprendido que con esfuerzo y dedicación se logran
grandes cosas, quien ha trabajado duro por verme cumplir una de mis metas, quien me
ha apoyado en los peores momentos y a quien le debo el haber terminado mi carrera.
A mi madre y mejor amiga Gladys, de quien he aprendido los mejores valores tanto al
inculcármelos como al observarla, quien ha estado conmigo en cada paso de mi vida,
quien ha sido mi impulso y motor para mirar siempre adelante, quien ha velado siempre
por mí y me ha cuidado desde sus oraciones, a quien no le ha importado cuantas veces
he caído, porque sabía que al levantarme estaba aprendiendo algo positivo, a quien le
debo la vida y el estar en donde estoy.
A mi ñaña Lisseth, quien desde pequeñas ha cuidado de mí y ha velado por mi bienestar,
quien con su rectitud siempre me ha dado el mejor de los ejemplos a seguir, quien se ha
convertido en la persona que tenga que ser por sacar lo mejor de mí.
A mi sobrina Daniela por ser la luz que llego a mi vida, la alegría y felicidad de mi hogar,
quien con sus abracitos me ha colmado de la fuerza suficiente para lograr cada cosa que
me proponga.
A mi abuelita Alicia y a mi tío Pedro, por sus sabios consejos, ternura, confianza, apoyo
y comprensión, por estar siempre pendiente de mí y apoyarme en cada decisión que tomo,
e impulsarme siempre a buscar lo que me hace feliz, pero sobre todo por su inmenso
amor.
A mi madrina Nancy, a quien me faltaría la vida para agradecerle por todo lo que ha
hecho por mí y mi familia, quien ha sido como mi segunda madre a lo largo de mi vida,
quien con su corazón generoso, siempre me ha brindado todo tipo de apoyo, de quien he
aprendido que darlo todo nunca es suficiente.
A mi novio y mejor amigo Patricio quien ha sido la persona que siempre afianza la
seguridad en mi misma, quien me ha dado siempre la fortaleza para pelear mis batallas
y quien con amor me ha dado aliento cuando más lo he necesitado.
vi
AGRADECIMIENTOS
A la Dra Blanca Real quien como decana ha sabido guiar de la mejor manera a nuestra
facultad.
A mis profesores por haber forjado mi carrera transmitiéndome sus sabios
conocimientos.
A mi tutor Juan Pablo Jaramillo por su apertura, y dedicación.
A mis compañeros y amigos con quienes tuve el honor de compartir cada día y quienes
hicieron de la Facultad mi segundo hogar.
A todo el personal que forma parte de la Facultad
A mi bella familia por su amor, paciencia y sacrificio, en especial a mi tía Cecita por
brindarme su apoyo y estar al pendiente de mi familia y a mi madrina Alicia porque es
el ser más amoroso y lleno de luz, quien con un abrazo me ha hecho sentir viva y recobrar
energías para continuar.
A mis primos Aury, Oswaldo, Karlita y Bolo por creer en mí, por su amor y sus cuidados,
por los hermosos e irrepetibles momentos que he compartido con cada uno de ellos desde
pequeña y que siempre llevare en mi corazón, pero sobre todo por siempre ponerme las
alas con cada una de sus palabras impulsándome a llegar cada vez más lejos.
A mis mejores amigos, Patty, Kari, Eri, Jorge, Kevin, Raisa, Caro, Adry, Alicia, Joha y
Octavio a quienes conocí de formas aleatorias dentro de mi vida y carrera, con quienes
he compartido momentos únicos y hoy junto con tres de ellos tengo la dicha de culminar
esta bella etapa, gracias a estas diez personas quienes han sido más que amigos para mí,
la familia que escogí, brindándome siempre lo mejor de cada uno, siendo siempre
incondicionales conmigo.
Finalmente a la Dra Rachide Acosta y Geo del laboratorio de la Facultad de Ciencias
Quimicas quienes me dieron siempre apertura y me transmitieron sus conocimientos para
llevar a cabo este trabajo.
vii
TABLA DE CONTENIDO
DERECHOS DE AUTOR ................................................................................................ ii
APROBACIÓN DEL TUTOR/A DEL TRABAJO DE TITULACIÓN ......................... iii
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL .................................. iv
DEDICATORIA ............................................................................................................... v
AGRADECIMIENTOS ................................................................................................... vi
TABLA DE CONTENIDO ............................................................................................ vii
LISTA DE TABLAS ...................................................................................................... xii
LISTA DE FIGURAS .................................................................................................... xii
LISTA DE GRÁFICOS ................................................................................................. xiii
LISTA DE ANEXOS ..................................................................................................... xv
RESUMEN .................................................................................................................. xvi
ABSTRACT ................................................................................................................. xvii
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 1
MARCO TEÓRICO ......................................................................................................... 2
1 PLACA DENTAL ....................................................................................... 2
1.1 Definición .................................................................................................... 2
1.2 Formación de la placa dental ....................................................................... 2
2 ENFERMEDAD PERIODONTAL ............................................................. 4
2.1 Definición .................................................................................................... 4
2.2 Clasificación ................................................................................................ 4
2.2.1 Gingivitis ..................................................................................................... 6
2.2.1.1 Generalidades .............................................................................................. 6
2.2.2 Periodontitis ................................................................................................ 7
2.2.2.1 Definición .................................................................................................... 7
viii
2.2.2.2 Etiología ...................................................................................................... 7
2.2.2.2.1 Factores de Riesgo ...................................................................................... 7
2.2.2.2.1.1 Factores de riesgo modificables (Bacterias Patógenas Específicas) ........... 8
2.2.2.3 Clasificación ................................................................................................ 8
2.2.2.3.1 Periodontitis Agresiva ................................................................................. 9
2.2.2.3.1.1 Definición .................................................................................................... 9
2.2.2.3.1.2 Características Primarias y Secundarias ...................................................... 9
2.2.2.3.1.3 Clasificación .............................................................................................. 10
2.2.2.3.1.3.1 Periodontitis agresiva localizada ............................................................... 10
2.2.2.3.1.3.2 Periodontitis agresiva generalizada ........................................................... 10
2.2.2.3.1.4 Microbiología ............................................................................................ 10
2.2.2.3.2 Periodontitis Crónica ................................................................................. 11
2.2.2.3.2.1 Definición .................................................................................................. 11
2.2.2.3.2.2 Características ........................................................................................... 11
2.2.2.3.2.3 Clasificación .............................................................................................. 11
2.2.2.4 PRINCIPALES PERIODONTO PATÓGENOS ASOCIADOS A
PERIODONTITIS ..................................................................................... 12
2.2.2.4.1 Porphyromonas Gingivalis ........................................................................ 12
2.2.2.4.1.1 Morfología y Estructura ............................................................................ 12
2.2.2.4.1.2 Fisiopatología ............................................................................................ 12
2.2.2.4.1.3 Factores de Virulencia ............................................................................... 13
2.2.2.4.2 Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ................................................ 15
2.2.2.4.2.1 Taxonomía ................................................................................................. 15
2.2.2.4.2.2 Morfología y Estructura ............................................................................ 16
2.2.2.4.2.3 Factores de Virulencia ............................................................................... 16
2.2.2.4.2.4 Fisiopatología ............................................................................................ 17
2.2.2.5 Tratamiento ............................................................................................... 18
ix
3 ANTISÉPTICOS UTILIZADOS EN PERIODONCIA ............................ 19
3.1 Clorhexidina .............................................................................................. 19
3.1.1 Mecanismo de Acción ............................................................................... 20
3.1.2 Sustantividad ............................................................................................. 20
3.1.3 Efectos Secundarios .................................................................................. 21
4 APITERAPIA ............................................................................................ 22
4.1 PROPÓLEO .............................................................................................. 22
4.1.1 Historia y Fuentes de obtención ................................................................ 22
4.1.2 Composición Química ............................................................................... 24
4.1.3 Propiedades biológicas y Terapéuticas ..................................................... 26
4.1.3.1 Antibacteriano ........................................................................................... 26
4.1.3.2 Anticariogénico ......................................................................................... 26
4.1.3.3 Cicatrizante y Antiinflamatorio ................................................................. 27
4.1.3.4 Fungicida ................................................................................................... 28
4.1.3.5 Inmunoestimulante .................................................................................... 28
4.1.3.6 Antiviral .................................................................................................... 29
4.1.3.7 Anestésico ................................................................................................. 29
4.1.3.8 Capacidad Antioxidante ............................................................................ 30
4.1.3.9 Antitumoral ............................................................................................... 30
4.1.3.10 Antialérgico ............................................................................................... 31
4.1.4 Utilización del propóleo en Periodoncia ................................................... 31
4.1.5 Comercialización ....................................................................................... 32
4.1.6 Dosis Recomendadas ................................................................................. 32
4.1.7 Efectos Adversos ....................................................................................... 33
4.2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.................................................. 34
4.3 OBJETIVOS .............................................................................................. 35
4.3.1 Objetivo General ....................................................................................... 35
x
4.3.1.1 Objetivos Específicos ................................................................................ 35
5 HIPÓTESIS ............................................................................................... 36
5.1 Hipótesis de Investigación (H1) ................................................................ 36
5.2 Hipótesis nula (H0) ................................................................................... 36
5.3 CONCEPTUALIZACIÓN DE LAS VARIABLES .................................. 36
5.3.1 Variable Independiente ............................................................................. 36
5.3.1.1 Propóleo .................................................................................................... 36
5.3.2 Variables dependientes .............................................................................. 37
5.3.3 Variables de Control .................................................................................. 37
5.3.3.1 Clorhexidina al 12% .................................................................................. 37
5.3.4 Suero Fisiológico ....................................................................................... 37
6 JUSTIFICACIÓN ...................................................................................... 38
7 MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................. 39
7.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN.................................................................... 39
7.1.1 Experimental in Vitro ................................................................................ 39
7.1.2 Comparativo .............................................................................................. 39
7.2 POBLACIÓN, TAMAÑO DE MUESTRA .............................................. 39
7.2.1 Población ................................................................................................... 39
7.2.2 Selección y tamaño de la muestra ............................................................. 39
7.3 CRITERIOS DE INCLUSIÓN Y EXCLUSIÓN ...................................... 40
7.3.1 Criterios de Inclusión ................................................................................ 40
7.3.2 Criterios de Exclusión ............................................................................... 40
7.4 DEFINICIÓN OPERACIONAL DE LAS VARIABLES ........................ 41
7.5 ESTANDARIZACIÓN ............................................................................. 42
7.6 MANEJO Y MÉTODOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS .................. 42
7.6.1 Solicitud de aceptación de tutoría ............................................................. 42
7.6.2 8.6.2 Solicitud de Aprobación de tema de tesis ........................................ 42
xi
7.6.3 Solicitud a Coordinación de biblioteca ..................................................... 42
7.6.4 Solicitud a Decana de Facultad de Ciencias Quimicas ............................. 42
7.6.5 Obtención del Extracto Etanólico de Propóleo ......................................... 42
7.6.6 Procedimiento para obtener las concentraciones de Propóleo deseadas ... 43
7.6.7 Obtención y almacenamiento de las cepas ................................................ 44
7.6.8 Activación de las cepas ............................................................................. 45
7.6.9 Siembra de las Cepas ................................................................................. 47
7.6.10 Medición de los Halos de Inhibición ......................................................... 50
7.6.11 MANEJO DE DESECHOS ....................................................................... 52
7.7 ANÁLISIS ESTADÍSTICO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS ..
................................................................................................................... 52
7.7.1 PRUEBAS NO PARAMÉTRICAS DE KRUSKAL WALLIS:
COMPARACIÓN ENTRE SUSTANCIAS .............................................. 54
8 DISCUSIÓN .............................................................................................. 63
9 CONCLUSIONES .................................................................................... 66
10 RECOMENDACIONES ........................................................................... 67
BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................ 68
ANEXOS ................................................................................................................... 73
xii
LISTA DE TABLAS
TABLA 1: Clasificación de las Enfermedades Periodontales .......................................... 5
TABLA 2: Clasificación Factores de Virulencia de Porphyromonas Gingivalis .......... 13
Tabla 3. Composición del Propóleo ............................................................................... 24
Tabla 4. Resultados de los halos de inhibición en Porphyromonas Gingivalis ............. 53
Tabla 5. Valores de sensibilidad en el aromatograma (Duraffourd) .............................. 53
Tabla 6. Prueba de normalidad: Porphyromonas Gingivalis ......................................... 54
Tabla 7. Prueba no paramétrica de Kruskal Wallis Porphyromonas Gingivalis ............ 55
Tabla 7. Prueba dos a dos Porphyromonas Gingivalis ................................................. 57
Tabla 8. Resultados de halos de inhibición Aggregatibacter Actinomycetemcomitans 58
Tabla 9. Pruebas no paramétricas de Kruskal Wallis Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans .................................................................................. 59
Tabla 10. Prueba dos a dos Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ....................... 61
xiii
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Tintura de Propóleo- PROPOLIS, ................................................................. 43
Figura 2. Cepa de Porphyromonas Gingivalis del Laboratorio MEDIBAC ................. 45
Figura 3. Cepa de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans del Laboratorio MEDIBAC
................................................................................................................... 45
Figura 4. Activación de la cepa de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ATCC®
29522™ ..................................................................................................... 46
Figura 5. Activación de la cepa de Porphyromonas Gingivalis ATCC® 33277™ ...... 46
Figura 6. Dilución de bacterias para sembrado, basándose en escala Mc Farland ........ 47
Figura 7. Siembra de Porphyromonas Gingivalis ATCC® 33277™ .......................... 48
Figura 8. Siembra de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ATCC® 29522™ .. 48
Figura 9. Discos de papel embebidos con 0.20ul de Extracto Etanólico de Propóleo a
diferentes concentraciones ........................................................................ 49
Figura 10. Colocación de discos impregnados de las diferentes soluciones en las cajas
Petri donde se sembraron anteriormente las bacterias .............................. 49
Figura 11. Colocación de las cajas Petri en una jarra de CO2 y llevadas a la incubadora
a una temperatura de 37+-°C ..................................................................... 50
Figura 12. Halos de inhibición en Porphyromonas Gingivalis ..................................... 51
Figura 13. Medición de los halos de inhibición en Porphyromonas Gingivalis ........... 51
Figura 14. Halos de inhibición en Aggregatibacter Actinomycetemcomitans .............. 52
xiv
LISTA DE GRÁFICOS
Gráfico 1. Comparación entre sustancias Porphyromonas Gingivalis .......................... 55
Gráfico 2. Prueba de Kruskal Wallis para muestras independientes .............................. 56
Gráfico 3. Comparación entre sustancias Aggregatibacter Actinomycetemcomitans .... 59
Gráfico 4. Prueba de Kruskal Wallis para muestras independientes .............................. 60
xv
LISTA DE ANEXOS
ANEXO 1: Aceptación de Tutoría ................................................................................. 73
ANEXO 2: Solicitud de Aceptación de tema ................................................................. 74
ANEXO 3 : Solicitud a Coordinación de Biblioteca ...................................................... 75
ANEXO 4: Solicitud a la Decana de la Facultad de Ciencias Quimicas ........................ 76
ANEXO 5: Factura de Cepa Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ....................... 77
ANEXO 6 ................................................................................................................... 78
ANEXO 7: Factura de cepa Porphyromonas Gingivalis ................................................ 79
ANEXO 8 ................................................................................................................... 80
ANEXO 9: Certificado de Instrumental Esterilizado ..................................................... 81
ANEXO 10: Especificaciones para activación de cepa por MEDIBAC ........................ 82
ANEXO 11: Método de Activación de la bacteria pura ................................................. 83
ANEXO 12: Certificado de haber realizado el estudio en la Facultad de Ciencias
Químicas .................................................................................................... 84
ANEXO 13: Protocolo de Manejo de Desechos Infeccioso ........................................... 85
ANEXO 14: Autorización de Uso de Instalaciones ....................................................... 86
ANEXO 15: Certificado de Aprobación del SEISH-UCE ............................................. 87
ANEXO 16: Certificado de Resultados Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ...... 88
ANEXO 17: Certificado de Resultados Porphyromonas Gingivalis .............................. 89
ANEXO 18: Carta de Renuncia del Trabajo Estadístico ................................................ 90
ANEXO 19: Certificado de Traducción- Abstract ......................................................... 91
ANEXO 20: Certificado Antiplagio- Urkund ................................................................ 92
xvi
TEMA: “EFECTO ANTIMICROBIANO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL
PROPÓLEO ECUATORIANO FRENTE A CEPAS DE AGGREGATIBACTER
ACTINOMYCETEMCOMITANS Y PORPHYROMONAS GINGIVALIS”
AUTORA: María José Reyes Cedeño
TUTOR: Dr. Juan Pablo Jaramillo
RESUMEN
El Propóleo es un material lipofílico resinoso, recogido de plantas vivas, procesado y
utilizado por las abejas, para múltiples usos dentro de la colmena (1), rico en propiedades,
entre ellas antimicrobiano, antiinflamatorio, cicatrizante, regenerador de tejidos,
fortalecedor del sistema inmune, no produce resistencia bacteriana, ni efectos adversos
como ciertos productos sintéticos, lo cual lo coloca como un buen candidato a estudiarse,
para tratar enfermedades de origen bacteriano como lo son las periodontitis, cuyos
principales periodonto-patógenos son Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y
Porphyromonas gingivalis. (2) La composición del propóleo varía según el origen y la
flora local de la región donde es recolectado (3) razón por la cual el presente estudio tiene
como Objetivo: determinar la capacidad antimicrobiana del extracto etanólico de
propóleo Ecuatoriano, frente a cepas de Aa y Pg. Materiales y Métodos: Se utilizaron
60 cajas Petri, 30 con agar sangre para la posterior siembra de Porphyromonas Gingivalis
ATCC® 33277™, y 30 con agar chocolate para la posterior siembra de Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans ATCC® 29522™, una vez sembradas las cepas se utilizaron 6
discos embebidos con 20ul de cada solución, 4 de ellos impregnados con extracto
etanólico de propóleo (obtenido en una casa naturista) a diferentes concentraciones (10%,
20%, 30% y 100%), los dos últimos discos impregnados con clorhexidina al 0,12% como
control positivo y suero fisiológico como control negativo. En un tiempo transcurrido de
24 a 48 horas, se midieron los halos de inhibición. Resultados: Los resultados de los
halos de inhibición obtenidos fueron procesados, utilizando pruebas no paramétricas de
Kruskal Wallis, la cuál reflejó que el propóleo en concentraciones de 10%,20% y 30%
no tuvo efecto inhibitorio en ninguna de las dos cepas, mientras que a concentraciones de
100% si tuvo efecto inhibitorio para ambas cepas, pero la diferencia con la clorhexidina
al 0,12% fue significativa siendo su efecto inhibitorio mucho mayor.
PALABRAS CLAVES: PROPÓLEO ECUATORIANO/ CAPACIDAD
ANTIMICROBIANA / AGGREGATIBACTER ACTINOMYCETEMCOMITANS/
PORPHYROMONAS GINGIVALIS/ PRODUCTOS SINTÉTICOS
xvii
TOPIC: “ANTIMICROBIAL EFFECT OF THE ETHANOL EXTRACT OF
ECUADORIAN PROPOLIS AGAINST STRAINS OF AGGREGATIBACTER
ACTINOMYCETEMCOMITANS AND PORPHYROMONAS GINGIVALIS”
Author: María José Reyes Cedeño
Tutor: Dr. Juan Pablo Jaramillo
ABSTRACT
The propolis is a resin lipophilic material, gathered from live plants, processed and used
by bees for multiple purposes inside the hives(1). It has several properties; it is
antimicrobial, anti-inflammatory, healer, regenerator of tissues, strengthens the immune
system and it doesn’t produce bacterial resistance or adverse effects like certain synthetic
products. All these properties make it a great candidate to be studied to treat bacterial
diseases, such as periodontitis, which main pathogens are the Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans and the Porphyromonas gingivalis. (2) The composition of
propolis varies depending on the origin and the local flora of the region where it is
collected (3). Objective: to determine the antimicrobial capacity of the ethanol extract of
Ecuadorian propolis against Aa and Pg. Materials and methods: there were used 60 Petri
dishes, 30 with blood agar for the Porphyromonas Gingivalis ATCC® 33277™, and 30
with chocolate agar for the Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ATCC® 29522™.
Once the strains were placed, 6 disks soaked with 20ul of each solution were used; 4 of
them had ethanol extract of propolis (obtained from a naturist store) at 10%, 20%, 30%
and 100%. The last two disks were soaked with chlorhexidine at 0.12% as a positive
control and saline solution as negative control. Within 24 and 48 hours the inhibition
halos were measured. Results: the results of the inhibition halos obtained were processed
by means of non-parametric tests Kruskal Wallis. These showed that the propolis at 10%,
20% and 30% did not have inhibitory effect on any of the strains, while the concertation
at 100% had an inhibitory effect on both strains. However, the difference with the
chlorhexidine at 0.12% was big, as its inhibitory effect is far bigger.
KEY WORDS: ECUADORIAN PROPOLIS/ ANTIMICROBIAL CAPACITY/
AGGREGATIBACTER ACTINOMYCETEMCOMITANS/ PORPHYROMONAS
GINGIVALIS/ SYNTHETIC PRODUCTS
1
INTRODUCCIÓN
En la actualidad las Periodontitis son las enfermedades que más afectan a la población,
siendo Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis los
principales periodonto patógenos responsables del inicio y progresión de las mismas,
llegando a provocar la pérdida de piezas dentales. Como aliado al tratamiento periodontal
se encuentra la Clorhexidina que hasta ahora es considerada como Gold Estándar, la
misma que tiene varios efectos adversos, que al ser conocidos por los pacientes, provoca
un rango de desconfianza su uso.
El propóleo es un producto natural, fabricado por las abejas que ha sido estudiado por
años, aunque ha ganado aceptación en la medicina tradicional durante miles de años, ha
sido redescubierto recientemente por investigadores por sus múltiples propiedades entre
ellas antimicrobianas. Su composición química varía según los cambios regionales,
estacionales y fuentes vegetales de donde es recolectado por las abejas. La aplicación de
propóleos contra un amplio espectro de bacterias orales puede ser beneficiosa para
mejorar la salud oral.
Además, la opinión actual es que el uso de preparaciones estandarizadas de propóleo es
seguro y menos tóxico que muchas otras drogas sintéticas. Los resultados de algunos
estudios han revelado que los flavonoides fueron los principales componentes
biológicamente activos de los extractos de propóleos que les brindan su capacidad
antimicrobiana, pero el porcentaje de estos en la composición del propóleo varia en
cuanto a su zona de recolección es por eso que este estudio tiene la finalidad de demostrar
la capacidad antibacteriana del extracto etanólico de Propóleo Ecuatoriano frente a cepas
de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis con el fin de
colocar al Propóleo como una terapéutica natural en las enfermedades periodontales.
2
MARCO TEÓRICO
1 PLACA DENTAL
1.1 Definición
Se denomina Placa dental a una acumulación heterogénea de una comunidad microbiana
variada, aerobia y anaerobia, rodeada por una matriz intercelular de polímeros de origen
salival y microbiano. Estos microorganismos pueden adherirse o depositarse sobre las
paredes de las piezas dentarias. Su presencia puede estar asociada a la salud, pero si los
microorganismos consiguen los sustratos necesarios para sobrevivir, y persisten mucho
tiempo sobre la superficie dental, pueden organizarse y causar caries, gingivitis, o
enfermedad periodontal. (4)
1.2 Formación de la placa dental
La formación de la placa dental es el resultado de una serie de procesos complejos que
involucran una variedad de bacterias y de componentes de la cavidad bucal. Estos
procesos comprenden en primer lugar, la formación de la película adquirida sobre la
superficie del diente; seguida de la colonización primaria por microorganismos
específicos y finalmente la colonización secundaria y maduración. (5)
Unas horas después de formada la biopelícula, se agregan bacterias a la misma, siendo
el primer colonizador el Streptococos Sanguis, el cuál inicia la formación de placa dental
supra gingival e inmediatamente se adhiere Actinomyces viscosus . Después de 7 días de
formación de la placa, los Streptococos son el grupo predominante. A continuación, la
biomasa madura mediante la proliferación de especies adheridas, y se produce, además la
colonización y el crecimiento de otras, con la coagregación se siguen formando capas y
más capas, conforme aumentan las capas se darán una serie de cambios:
- Cambios cuantitativos: se reproducen y aumentan en población los microorganismos
previamente adheridos o por coagregación de la misma o nuevas especies.
- Cambios Cualitativos: conforme se van agregando las capas, la placa se va volviendo
más gruesa, por lo tanto el ambiente o ecosistema de las capas más profundas cambiará
3
radicalmente, es decir pasará de un ambiente aerobio a uno anaerobio, esto entonces
producirá un cambio de la especie predominante en dichas áreas de la placa. (4) (5)
Estos cambios microbianos que se van produciendo van ligado a diversas causas, tales
como: Antagonismo por competencia de sustrato; producción de H²O² y especialmente
por el consumo de oxígeno en el ambiente; como consecuencia de estas interacciones
metabólicas ocurre una sustitución de especies bacterianas Gram (+) Facultativas por
especies bacterianas anaerobias Facultativas y estrictas Gram (-) como Porphyromonas
Gingivalis y Aggregatibacter Actinomycetemcomitans, proceso llamado Sucesión
Autogénica en el cual los microrganismos residentes modifican el ambiente, de tal forma,
que ellos mismos pueden ser sustituidos por otros más adaptados al hábitat modificado.
(5) (6)
Entre los colonizadores secundarios es decir aquellos que no colonizan desde un principio
las superficies dentales limpias sino que se adhieren a las células de bacterias ya presentes
en la masa de la biopelícula., se encuentra Porphyromonas Gingivalis, que junto con
Aggregatibacter Actinomycetemcomitans forman parte de la placa subgingival donde
tienen acceso directo a un hábitat ideal, al encontrar un sitio muy pobre en oxígeno, con
grandes nutrientes y excelente humedad y temperatura, propicio para su supervivencia ,
crecimiento y desarrollo, teniendo una relevancia especial en el inicio y la progresión de
la enfermedad periodontal. (6)
4
2 ENFERMEDAD PERIODONTAL
2.1 Definición
La Asociación Americana de Periodoncia, define la(s) enfermedad(es) periodontal(es)
(EP) como una inflamación de los tejidos de soporte del diente. Usualmente un cambio
destructivo progresivo que lleva a la pérdida de hueso y ligamento periodontal. Una
extensión de la inflamación de la encía al hueso y ligamento adyacentes. Ello es así
porque el periodonto (aparato de soporte del diente compuesto por la encía propiamente
dicha, el ligamento que une el diente al hueso, el propio hueso alveolar y el cemento
radicular) puede verse afectado en distintas formas e intensidades en el marco común de
un proceso inflamatorio. (7)
2.2 Clasificación
La clasificación propuesta por Armitage (Tabla 1), resume la complejidad de la
Enfermedad Periodontal. De esta clasificación se deduce también que la afectación
periodontal no siempre constituye un desorden con implicaciones exclusivas en la
cavidad oral, sino que en ocasiones está relacionada con un problema sistémico, a cuyo
diagnóstico temprano puede contribuir con la ayuda de una adecuada historia clínica. (7)
5
TABLA 1: Clasificación de las Enfermedades Periodontales FUENTE: M.C. López Silva, P. Díaz-Iglesias J.M. Seoane-Romero, V. Quintas, F. Méndez-Brea, P.
Varela-Centelles. Revista Elsevier, Vol. 43, Núm. 2, Marzo 2017
A pesar de la compleja clasificación que se muestra (Tabla 1), el término Enfermedad
Periodontal, suele restringirse a las enfermedades inflamatorias más comunes causadas
por placa bacteriana: gingivitis y periodontitis. (4)
6
2.2.1 Gingivitis
2.2.1.1 Generalidades
La gingivitis es la forma más leve de afectación periodontal, y se caracteriza por estar
circunscrita al tejido blando que rodea el diente como encía,
epitelio de unión y membrana de Nasmyth, se inicia por la activación del sistema de
defensa inmunológico periodontal local e invasión microbiana, dentro de
la patogenia de esta enfermedad intervienen factores de riesgo como placa dento-
bacteriana, microbiota subgingival, las condiciones del sistema inmune del paciente,
estrés, estilo de vida etc; es reversible mediante medidas de higiene oral adecuadas, sin
embargo si esta persiste y se hace crónica puede progresar a periodontitis. (7) (8)
El factor causal de la gingivitis es la presencia de placa. Sin embargo, esta no
necesariamente generará la destrucción de los tejidos de soporte periodontal. Es necesaria
una serie de otras condiciones involucradas en la modificación de la respuesta inmune-
inflamatoria del hospedero para que esta progrese a periodontitis, condiciones que pueden
corresponder a factores locales, sistémicos y/o medioambientales comunes a una serie de
otras morbilidades. (8)
Todas las gingivitis se caracterizan por:
1. Presentar placa bacteriana que inicia o exacerba la severidad de la lesión.
2. Ser reversibles si se eliminan los factores causales.
3. Por tener un posible papel como precursor en la pérdida de inserción alrededor de
los dientes.
Clínicamente se aprecia una encía inflamada, con un contorno gingival alargado debido
a la existencia de edema o fibrosis, una coloración roja o azulada, una temperatura
surcular elevada, sangrado al sondaje y un incremento del sangrado gingival. Para su
detección es necesaria la sonda periodontal, que ayuda a estimular el sangrado, además,
con la sonda descartaremos la existencia de pérdida de inserción, lo cual nos confirma el
diagnóstico de alteración gingival. (9)
7
2.2.2 Periodontitis
2.2.2.1 Definición
Las periodontitis son un conjunto de patologías de naturaleza inflamatoria y etiología
infecciosa producidas por el biofilm subgingival que coloniza el surco gingivodentario.
Se caracterizan por la destrucción del soporte periodontal, que está conformado por el
ligamento periodontal, el cemento radicular y el hueso alveolar, y eventualmente
provocan la pérdida de los dientes. En términos generales, son una de las patologías de
mayor prevalencia en seres humanos y, además del daño local que inducen, son un factor
modificante de la salud general del individuo. (10)
2.2.2.2 Etiología
La etiología de las periodontitis es multifactorial. En ellas intervienen los
microorganismos y un hospedero susceptible. Los microorganismos actúan como factores
etiológicos esenciales e iniciadores del proceso infeccioso; ellos son los productores de
los factores de virulencia que modulan la respuesta inmune; la susceptibilidad del huésped
a las EP es afectada por los factores de riesgo de tipo ambiental, sistémico, genético, entre
otros. (11)
2.2.2.2.1 Factores de Riesgo
Según la Academia Americana de Periodoncia, un factor de riesgo se define como
cualquier característica del individuo, aspecto de comportamiento o exposición
ambiental, confirmado por medio de estudios longitudinales bien controlados, que cuando
están presentes, incrementan la probabilidad de que ocurran las EP, y si están ausentes,
removidos o controlados reducen la probabilidad de que se conviertan en un elemento
más de la cadena causal. (11)
La interacción de dos o más factores de riesgo en un individuo puede afectar su sistema
inmune, responsable en gran parte del proceso destructivo que ocurre en la patogénesis
8
de las periodontitis debido a que no regula en forma adecuada y oportuna el proceso
inflamatorio. Los factores de riesgo para las periodontitis pueden ser: de comportamiento
o estilos de vida, sistémicos, microbianos, psicológicos-psicosociales, genéticos,
familiares y sociodemográficos. Los factores de riesgo pueden ser modificables e
inmodificables. Los modificables pueden ser intervenidos o controlados para reducir el
riesgo de iniciación o progresión de las enfermedades periodontales. Por ejemplo: los
factores de comportamiento o estilo de vida como el tabaquismo, o los niveles de bacterias
patógenas específicas. Los no modificables o determinantes son generalmente intrínsecos
al individuo por lo que no son controlables. Por ejemplo: las características genéticas, la
agregación familiar, entre otras. (11)
2.2.2.2.1.1 Factores de riesgo modificables (Bacterias Patógenas Específicas)
Dentro de la microflora detectable en este tipo de enfermedad periodontal, las bacterias
anaerobias gram negativas más importantes y prevalentes son: Aggregatibacter
actinomycetemcomitans (Aa) y Porphyromonas gingivalis (Pg). Estas bacterias
desempeñan un papel importante en el inicio, progresión y severidad de las enfermedades
periodontales , siendo la primera ampliamente asociada a la periodontitis agresiva y la
segunda a la periodontitis tanto crónica como agresiva, y se ha reconocido en ellas tres
características importantes, como la capacidad para colonizar, la habilidad para evadir
los mecanismos de defensa del huésped y la producción de sustancias que inician la
destrucción tisular, siendo partícipes directas de la infección de la bolsa periodontal,
destrucción del tejido conectivo y reabsorción del hueso alveolar a través de mecanismos
directos e indirectos. Los factores de virulencia que expresan estimulan a las células del
huésped para que liberen mediadores inflamatorios, esta relación entre las bacterias y los
mecanismos de respuesta inmune del hospedador es la base del mecanismo
inmunopatológico del daño tisular. (12) (13) (14)
2.2.2.3 Clasificación
De acuerdo con las observaciones clínicas e investigaciones científicas recopiladas por
Carranza (1997), Marsh y Martin (2000) y Liebana (2002), la periodontitis se ha
clasificado según la extensión de las lesiones en localizada o generalizada, según la
9
evolución de la enfermedad en lenta, rápida y crónica, y según la edad de inicio en los
individuos afectados en distintas formas clínicas: Periodontitis Prepuberal, Periodontitis
Juvenil, Periodontitis Rápidamente Progresiva, Periodontitis Pos juvenil y Periodontitis
del Adulto. Posteriormente en el International Workshop for a Classification of
Periodontal Diseases and Conditions, se discutió que muchas veces las periodontitis de
comienzo precoz muestran una evolución lenta, mientras que otras de inicio más lento
evolucionan de forma rápida. Es por ello que, los términos Periodontitis Prepuberal,
Periodontitis Juvenil y Periodontitis Rápidamente Progresiva, fueron reemplazados por
el de Periodontitis Agresiva, e igualmente él termino Periodontitis del Adulto por el de
Periodontitis Crónica. (15)
2.2.2.3.1 Periodontitis Agresiva
2.2.2.3.1.1 Definición
Actualmente, de acuerdo con la Academia Americana de Periodoncia, se reconoce que la
periodontitis agresiva es una enfermedad rápidamente progresiva que se caracteriza por
producir rápida pérdida de inserción y hueso alveolar, se presenta en pacientes
sistémicamente sanos, principalmente jóvenes, otros miembros de la familia pueden
presentar dicha enfermedad. (16) (17) (18)
2.2.2.3.1.2 Características Primarias y Secundarias
Entre las características primarias y secundarias de la periodontitis agresiva tenemos:
Las siguientes características primarias están presentes:
1. Aparte de la destrucción periodontal, los pacientes son sistémicamente sanos.
2. Rápida y severa pérdida ósea y de inserción.
3. Agregación familiar.
Algunas características secundarias que generalmente pero no universalmente están
presentes:
1. Depósitos microbianos inconsistentes con la destrucción periodontal.
2. Anormalidades fagocíticas.
10
3. Elevados niveles de Aggregatibacter actinomycetemcomitans y Porphyromonas
gingivalis.
4. Elevados niveles de citoquinas inflamatorias (IL-1b, PGE2).
5. Hiper-respuesta de macrófagos con alta producción de IL-1b.
6. La progresión de la pérdida de inserción y ósea puede detenerse por si sola. (10)
2.2.2.3.1.3 Clasificación
2.2.2.3.1.3.1 Periodontitis agresiva localizada
Se inicia en la etapa circumpuberal. Se localiza principalmente en primeros molares-
incisivos, con pérdida de inserción interproximal en al menos dos dientes permanentes,
uno de los cuales suele ser un primer molar, y que afecta a no más de otros dos dientes,
aparte de los primeros molares e incisivos. Puede presentar también patrones atípicos,
como la afección de otras piezas dentarias, en lugar de las mencionadas. (17)
2.2.2.3.1.3.2 Periodontitis agresiva generalizada
Generalmente afecta a sujetos por debajo de los 30 años, pero pueden ser mayores. Hay
pérdida de inserción interproximal generalizada, que afecta como mínimo a tres dientes
permanentes adicionales a los primeros molares e incisivos. La pérdida de los tejidos
periodontales de inserción se presenta en forma episódica. (17)
2.2.2.3.1.4 Microbiología
Algunos reportes sustentan la existencia de una microbiota subgingival resistente a las
drogas antibióticas de elección, lo que podría explicar eventuales fracasos en la
terapéutica. La periodontitis agresiva localizada se asocia principalmente a la
bacteria Aggregatibacter actinomycetemcomitans; mientras que la periodontitis agresiva
generalizada se asocia fuertemente con bacterias específicas como la Porphyromonas
gingivalis, Tannerella forsythia y el Aggregatibacter
actinomycetemcomitans, cocobacilo gramnegativo, capnófilo, microaerófilo. Los
microorganismos producen varios factores de virulencia, que podrían estar involucrados
11
en la destrucción de los tejidos periodontales, entre estos factores el más importante
parece ser la actividad leucotóxica. Las cepas bacterianas altamente leucotóxicas del Aa
(cepa JP2), pueden producir 10 a 20 veces más toxinas, que otras cepas, dotándolas del
potencial para interferir con las defensas inmunológicas innatas del huésped. Algunos
estudios, han mostrado que las cepas altamente leucotóxicas pertenecen exclusivamente
a sujetos o familias con historia de periodontitis agresiva. (17)
2.2.2.3.2 Periodontitis Crónica
2.2.2.3.2.1 Definición
Es la forma de enfermedad periodontal más frecuente, grave, se presenta en adultos y en
adultos mayores sanos, caracterizada clínicamente por la pérdida de inserción y
destrucción ósea lenta, esta forma de periodontitis tiene una predisposición, el acúmulo
de placa dental y lenta progresión . (19)
2.2.2.3.2.2 Características
- Pacientes clínicamente Sanos
- Pérdida de inserción
- Progresión lenta
- No hay antecedentes familiares
- Elevada proporción de Porphyromonas Gingivalis y en menor cantidad de
Aggregatibacter Actinomycetemcomitans. (19)
2.2.2.3.2.3 Clasificación
- La periodontitis crónica ocurre en dos formas, localizada y generalizada. Ambas
formas de periodontitis crónica presentan las siguientes características:
- Sangrado al cepillado
- Tumefacción Gingival
- Escozor
- Hipermovilidad Dentaria
- Exudado
- Dificultad masticatoria
12
- La forma localizada compromete menos del 30% de las piezas dentarias, mientras
que la generalizada compromete a más del 30% de las piezas dentarias. (19)
2.2.2.4 PRINCIPALES PERIODONTO PATÓGENOS ASOCIADOS A
PERIODONTITIS
Entre los principales periodonto patógenos asociados a las periodontitis se encuentran
Porphyromonas Gingivalis y Aggregatibacter Actinomycetemcomitans.
2.2.2.4.1 Porphyromonas Gingivalis
Porphyromonas gingivalis (P. g) es una bacteria Gram-negativa anaeróbica estricta
pigmentada de negro, miembro fundamental de la microbiota patógena en varias
enfermedades periodontales caracterizadas por la pérdida de hueso alveolar. Se ha
demostrado que este microorganismo posee la capacidad de adherirse a una diversidad de
tejidos, entre ellos los tejidos periodontales, invadir las células anfitrionas y multiplicarse.
Para lograr esto utiliza diferentes componentes bacterianos como son: fimbrias, proteasas,
hemaglutininas y lipopolisacáridos (LPS). (20)
2.2.2.4.1.1 Morfología y Estructura
P. gingivalis es un bacilo corto o cocobacilo, que mide de 0.5 - 0.8 um x 1 - 3.5 um. Su
pared celular presenta a nivel de la membrana externa las endotoxinas, son capsulados,
no esporulados, sin flagelos y abundantes fimbrias de diferentes tipos. A nivel superficial
presenta vesículas que contienen una variedad de enzimas que juegan un rol importante
en su virulencia. Así también produce múltiples enzimas con capacidad de degradar
compuestos proteicos. (21)
2.2.2.4.1.2 Fisiopatología
P. gingivalis es considerado un colonizador secundario, comensal del surco gingival, que
llega por contagio o transmisión por individuos infectados, por medio de la saliva
principalmente. Su capacidad de adherirse principalmente por sus fimbrias perítricas tipo
13
Ib, II así como por sus vesículas de membrana, hemaglutininas, cápsula, le permiten dar
el primer paso en la colonización del surco, poder adaptarse e invadir las células
epiteliales en un periodo aproximado de 20 minutos, pudiendo replicarse dentro de ellas
y diseminarse a las células de alrededor. Esta característica de invadir la célula, le da la
capacidad de evadir las defensas del huésped. Así también su capacidad de degradar
diversas proteínas, componentes del surco gingival, ligamento periodontal y hueso
alveolar, además de alterar la respuesta innata y específica del anfitrión. A todo esto se
suma un factor huésped, que ante la presencia de esta bacteria, activa una diversidad de
respuestas que pueden incrementar el proceso inflamatorio, presente en el surco, haciendo
crónico el proceso de destrucción del periodonto. (21)
2.2.2.4.1.3 Factores de Virulencia
Son mecanismos por los cuales un microorganismo puede colonizar un nicho u
hospedador, superar sus defensas e iniciar un proceso infectivo, por lo tanto los
microorganismos con mayor número de factores de virulencia son los más patógenos
Entre las estructuras o moléculas que ayudan al establecimiento y mantenimiento de la
especie bacteriana dentro de los tejidos del huésped se encuentran:
TABLA 2: Clasificación Factores de Virulencia de Porphyromonas Gingivalis
FUENTE: Dra. Sandra Moreno; Dr. Adolfo Contreras, Artículos Originales, Núm. 37, Abril 2013
14
Fimbrias: Considerada como el primer factor de virulencia de este microorganismo
puesto que, le confiere la capacidad de invadir y adherirse a los tejidos, lo que caracteriza
su alta patogenicidad periodontal. Además las fimbrias mayores inducen en macrófagos
y neutrófilos periféricos la sobreproducción de citoquinas las cuales actúan como
intermediarios en los tejidos periodontales de tal forma que contribuyen con la formación
de la lesión inflamatoria, la cual puede conllevar a la activación de la destrucción del
tejido óseo y de los tejidos periodontales. (22)
Proteínas de Membrana Externa: La proteína 40 kDa se ha estudiado como un
importante receptor de membrana externa para la coagregación de Porphyromonas
gingivalis con Actinomyces viscosus la cual es clave para los procesos iniciales de
formación de la biopelícula subgingival. (22)
Cápsula: Esta juega un papel importante en evadir el sistema inmune, eludiendo la
fagocitosis, opsonización, y accionar el complemento. (21)
Endotoxina (LPS): Participa en la interrupción de la homeóstasis inmunológica del
huésped y ocasiona inflamación gingival, asociada con la destrucción del tejido conectivo
y la reabsorción del hueso alveolar por la activación de los osteoclastos y causa liberación
de prostaglandina E, así como el incremento de IL8. (21)
Proteasas de Cisteína (Lisina y Arginina) Gingipainas: Las gingipainas están
implicadas en la patogénesis de la periodontitis, pues tienen la capacidad de degradar
proteínas (fibronectina, fibrinógeno etc.) del huésped para ser usadas como nutrientes
por la bacteria para su crecimiento y metabolismo, alterando la integridad celular y la
función, actuando directamente en la destrucción del tejido. (22) (21)
Proteasas de Inmunoglobulinas: Estas proteasas tienen la capacidad de degradar IgG e
IgA en pequeños fragmentos, lo cual estimula el crecimiento de la bacteria in vitro, puesto
que inhibe anticuerpos no específicos y específicos. (22)
15
Ácidos grasos de cadena corta: Son importantes en la infección por P. gingivalis pues
ayudan a la destrucción de tejidos, potenciando la acción pro-inflamatoria del
lipopolisacáridos, estimulando la producción de IL-1α y TNF-α (22)
Hemolisinas: Porphyromonas Gingivalis necesita moléculas de hierro para su
crecimiento, la Hemolisina es una proteína que capta el hierro y es capaz de generar
lisis de glóbulos rojos, tiene la gran capacidad de partir moléculas grandes (transferrina y
hemoglobina) y de esta manera asegurar su hierro. (22)
Hemaglutininas: Proteínas ubicadas en la membrana externa que inducen aglutinación
de eritrocitos, debido a que la bacteria requiere el hemo para utilizarlo para su crecimiento
dentro del huésped.
P. gingivalis es el patógeno predominante en la periodontitis crónica, siendo la gingipaina
y las fimbrias sus mayores factores de virulencia. A su vez es un factor de riesgo para
patologías tan mortales como el infarto de miocardio. Su aislamiento es posible en
diferentes medios de cultivo, con muestras de biofilm subgingival y su control se basa en
la terapia mecánica apoyada con el uso de antimicrobiano local o sistémica. (21)
2.2.2.4.2 Aggregatibacter Actinomycetemcomitans
2.2.2.4.2.1 Taxonomía
Topley y Wilson en 1929 denominan a este microorganismo con el nombre más conocido:
Actinobacillus actinomycetemcomitans. Para el 2006 Neils y Mogens, según estudios de
ADN, encuentran gran similitud en cuatro bacterias: Actinobacillus
actinomycetemcomitans, Haemophilus aphrophilus, Haemophilus paraphrophilus y
Haemophilus segnis, conformando estas un nuevo género llamado Aggregatibacter,
perteneciente a la familia Pasteurellace. (23)
16
2.2.2.4.2.2 Morfología y Estructura
Este es el miembro más importante del género Actinobacillus que forma parte de la
microbiota bucal. Existen hasta ahora 5 serotipos de esta especie en base a diferencias en
su pared bacteriana (a, b, c, d y e, siendo el más patógeno, el tipo b), y es un bacilo corto
(cocobacilo), gramnegativo, inmóvil (carece de flagelos), sacarolítico (fermenta
carbohidratos), anaeróbico facultativo, capnófilo (requiere CO2 para su desarrollo), crece
muy bien en medios que contengan sangre o suero, (agar TSBV), y se aísla
ocasionalmente de mucosa yugal, lingual y en placa supragingival en escaso número en
personas gingivalmente sanas, pero están muy aumentados en pacientes con periodontitis
agresivas y algunas formas crónicas. La manera de transmitirse de una persona a otra es
de manera directa o a través de objetos como utensilios de cocina, esto debido a que es
resistente a los factores externos adversos. (24)
2.2.2.4.2.3 Factores de Virulencia
Aggregatibacter actinomycetemcomitans exhibe numerosos factores de virulencia, entre
los cuales se encuentran:
- Fimbrias: Le permiten adherirse a células, bacterias, a componentes de la matriz
extracelular y a la saliva. (26)
- Adhesinas: permite tanto la auto agregación, como la unión a hidroxiapatita y a
diferentes proteínas salivales. (27)
- Gingipaínas: Constituyen las enzimas proteolíticas mayoritarias las cuales se
comportan como hemaglutininas facilitando la adhesión, condición indispensable
para la colonización. (28)
- Leucotoxina: Participa en la evasión de la respuesta inmune y la invasión tisular,
además tiene actividad citoletal en polimorfo-nucleares, leucocitos, macrófagos,
penetrando y formando poros transmembranosos que producen pérdida de potasio
intracelular, con un resultado fatal para la célula. Es así también un participante
de la reabsorción ósea, también produce la liberación del contenido de lisosomas
induciendo la inflamación. (23) (14) (27)
- Toxina de distensión Citoletal (CDT): Inhibe la proliferación de linfocitos,
impidiendo una respuesta adecuada del sistema inmune, además, tiene la
17
capacidad de detener el crecimiento de las células, alterar su morfología y
eventualmente producir su muerte. (23) (14)
- Endotoxina: Es una toxina sumamente activa, causando reabsorción ósea,
activando macrófagos para que estimulados produzcan interleuquina IL1-B y
factor de necrosis tumoral alfa, mediadores de la inflamación y reabsorción ósea.
(23)
- Proteínas unidas a los receptores Fc: La región Fc de la inmunoglobulina se une
a proteínas de superficie de la bacteria, haciendo que el complemento no cumpla
su función citoletal ni se lleve una adecuada opsonización para la fagocitosis. (23)
- Proteína similar a GROE1 (64 Kda.): Es una proteína con acción osteolítica
identificada en la mayoría de pacientes con periodontitis agresiva localizada. (23)
- Colagenasa: enzima con alta capacidad de deteriorar el tejido conectivo del
periodonto. (23)
- Citotoxinas: inhiben la proliferación de fibroblastos; por lo tanto, la capacidad
del huésped de sintetizar colágeno para la recuperación de los tejidos dañados está
disminuida. (23)
- Epiteliotoxinas: Destruye hemidesmosomas de la unión intercelular, siendo un
mecanismo de invasión y profundización de la infección. (23)
Otros factores que podrían aumentar su virulencia son la producción de bacteriocinas,
alteración en la quimiotaxis de neutrófilos, producción intraleucocitaria de catalasa y
superóxido dismutasa inhibiendo la destrucción intracelular y presentando plásmidos y
bacteriófagos. (23)
2.2.2.4.2.4 Fisiopatología
Su agresividad se debe a que presenta muchos factores de virulencia, que actuando en un
huésped con algún grado de susceptibilidad, activa su mecanismo de proliferación y
destrucción, causando un gran daño al periodonto; pero no todas las A.a son sumamente
dañinas, sino las que presentan ciertas características, como una mayor activación de su
leucotoxina, que tiene 2 funciones bien marcadas: daño en las células de defensa y
reabsorción ósea. El daño producido por esta bacteria es rápido, más aún si se acompaña
de un abundante biofilm alrededor del diente, llegando a deteriorar el periodonto con
18
formación de bolsas periodontales, pérdida de inserción, amplia movilidad del diente y
con el tiempo pérdida de este, típico caso de una PAL. (23)
El A.a, aparte de ser un patógeno importante en el periodonto y ser un patógeno
oportunista, es también aislado de pacientes con actinomicosis, endocarditis infecciosa,
osteomielitis, glomerulonefritis, endoftalmitis, neumonía, absceso cerebral y hepático,
siendo en algunos casos causante predominante en estas patologías. Así también, la
asociación como factor etiológico, conjuntamente con otras bacterias periodontales en el
desarrollo de enfermedades cardiovasculares, está tomando mayor fuerza en la
comunidad científica. (23)
2.2.2.5 Tratamiento
Considerando que la etiología de la enfermedad es principalmente infecciosa (placa
bacteriana), la eliminación o disminución adecuada de las bacterias periodonto patógenas
en la microbiota subgingival es esencial para la curación periodontal, por lo tanto el
tratamiento se enfoca fundamentalmente en la instrumentación mecánica para
desorganizar la biopelícula y para eliminar el gran volumen de depósitos microbianos.
Sin embargo, el desbridamiento mecánico subgingival convencional no suele erradicar
todas las bacterias periodonto- patógenas del ecosistema subgingival, ya que es difícil
para el instrumental periodontal acceder a todos los sitios donde se alojan las bacterias
periodonto patógenas como son; bolsas periodontales profundas, surcos, furca,
concavidades, a más de que se ha demostrado que Aa y Pg son capaces de invadir células
gingivales epiteliales, tejido conectivo subgingival y túbulos dentinarios, a más de
encontrarse periodonto patógenos en lengua, mucosas, y encia. Por lo tanto es necesaria
también una terapia antimicrobiana para el control de la infección y reducción de la
inflamación. (25) (6) (8)
19
3 ANTISÉPTICOS UTILIZADOS EN PERIODONCIA
Aunque en periodoncia se han utilizado una gran variedad de antisépticos, muy pocos
tienen evidencia científica y son aprobados por el Council on Dental Therapeutics de la
ADA. Ente ellos se encuentra la clorhexidina.
3.1 Clorhexidina
Es un antiséptico derivado de la bisguanida, considerado hasta la actualidad como la
mejor alternativa o Gold estándar, por ser el antibacteriano más eficaz. Su utilización es
amplia y es el agente más efectivo para tratamientos periodontales (Bascones 2001). La
clorhexidina fue desarrollada en la década de los 40 por Imperial Chemical Industries en
Inglaterra por científicos que realizaban un estudio sobre la malaria. En ese momento los
investigadores fueron capaces de desarrollar un grupo de compuestos denominados
polibiguanidas, que demostraron tener un amplio espectro antibacteriano y salió al
mercado en 1954, como antiséptico para heridas de la piel. Posteriormente comenzó a
usarse en medicina y cirugía tanto para el paciente como para el cirujano. En odontología
se utilizó inicialmente para desinfección de la boca y endodoncia.
El estudio definitivo que introdujo la clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue el
realizado por Löe y Schiott en 1970, donde se demostró que un enjuague de 60 segundos
dos veces al día con una solución de gluconato de clorhexidina al 0,2% en ausencia de
cepillado normal, inhibía la formación de placa y consecuentemente el desarrollo de
gingivitis.
Si bien hay diversas sales de clorhexidina, la más usada en la práctica clínica es el
gluconato de clorhexidina, por sus características de solubilidad, que permiten la
combinación con alcohol, incrementando su actividad. Es estable a temperatura ambiente
y necesita ser protegido de la luz. En presencia de pH alcalino y jabones/detergentes
aniónicos ve disminuida su actividad. No debe mezclarse con otros antisépticos no
alcohólicos, ya que podría precipitar. (29) (30)
20
3.1.1 Mecanismo de Acción
Desestabiliza y penetra las membranas de las células bacterianas, inhibiendo el consumo
de oxígeno, lo que ocasiona una disminución de niveles de ATP y muerte celular. Actúa
con un efecto máximo en 20 s y un posterior efecto residual, previniendo el crecimiento
microbiano durante unas 29 h. Evita la formación de nueva película adquirida, reduciendo
la adsorción de glucoproteínas salivares en la superficie dental, mediante el bloqueo de
los grupos ácidos libres, tales como sulfatos, carboxilos y fosfatos. Impide que las
bacterias se unan a la película adquirida ya existente, mediante los grupos negativos de la
superficie celular bacteriana (ejemplo ácidos teicoicos). Desorganiza la estructura de la
placa bacteriana existente. La CHX desplaza el calcio de los grupos sulfato de la placa y
así desorganiza su estructura, impidiendo que las bacterias se unan a la película adquirida
Es bactericida sobre bacterias grampositivas, gramnegativas, algunas cepas de Proteus
spp, Pseudomonas spp, levaduras y mohos. Respecto a su acción antiviral incluye VIH,
herpes simple, citomegalovirus e influenza. No actúa sobre micobacterias y esporas
(frente a estas últimas sí ejerce un mecanismo bacteriostático). (29) (31) (32)
3.1.2 Sustantividad
La CHX adsorbida se libera gradualmente en 8-12 horas de forma activa. Tras 24 horas,
aún pueden recuperarse concentraciones bajas de CHX, lo que evita la colonización de
bacterias durante ese tiempo.
Su alta sustantividad es debida a que se adsorbe rápidamente por la superficie bacteriana,
gracias a su pH neutro y ligeramente alcalino. Se une a las bacterias de la placa, al esmalte
dental, a la película adquirida que cubre el diente y lentamente va liberándose,
produciendo efectos negativos en el citoplasma bacteriano e imposibilitando la
supervivencia de los patógenos.
La molécula de CHX se fija en la mucosa, mediante la unión a los grupos carboxilos
presentes en la capa de mucina que rodea la mucosa. Posteriormente, y debido a la
segregación de iones calcio por las glándulas salivares, las moléculas de CHX son
liberadas lentamente. (32)
21
3.1.3 Efectos Secundarios
Su efecto adverso más común es la pigmentación marrón en dientes, algunos materiales
de restauración y en las mucosas, principalmente en el dorso de la lengua, esta
pigmentación puede observarse a partir de la primera semana del tratamiento. Después de
seis meses de tratamiento regular con clorhexidina, aproximadamente el 50% de los
pacientes muestran una apreciable coloración de la superficie de los dientes, siendo esta
más pronunciadas en los pacientes con mayor cantidad de placa. Las pigmentaciones o
discoloraciones pueden estar originadas por la interacción entre las sales de CHX en la
boca y los taninos presentes en algunos alimentos (café, té, vino, etc…) aunque tampoco
puede descartarse la concentración y la dosis. Aún así, la coloración parece no penetrar
más allá de la superficie, por lo que puede eliminarse fácilmente efectuando una profilaxis
profesional. Aunque la coloración de los empastes puede ser permanente y en algunos
casos estos deberán ser sustituidos. La presencia de discoloraciones dentales puede ser
un buen indicador del cumplimiento del tratamiento por parte del paciente.
Otro efecto secundario que se describe frecuentemente es la alteración del gusto, que
podría reducirse evitando enjuagarse con agua después de la aplicación del enjuague con
CHX. Este efecto desaparece una vez que se finaliza el tratamiento.
También se ha citado un aumento de depósito de cálculos supragingivales en algunos
individuos. Estos cálculos parecen tener distinta composición respecto los habituales y
son fácilmente eliminables.
Otros posibles efectos adversos poco reportados son la aparición de descamaciones e
irritaciones en la mucosa, sobre todo a elevadas concentraciones de CHX, que
desaparecen al cesar el tratamiento. Se ha comunicado parotiditis (inflamación de las
glándulas salivares con obstrucción del conducto parótido) sobre todo en niños de diez a
dieciocho años tratados con enjuagues orales de clorhexidina. También se han descrito
casos de irritación de la lengua.
Hasta el momento no hay evidencia de toxicidad por absorción, aunque sí se ha descrito
toxicidad en el sistema nervioso central, meninges y oído medio. (32) (29) (33)
22
4 APITERAPIA
En la actualidad numerosos investigadores, buscan en las terapias naturales, como las
basadas en ¨el uso del propóleo¨ como una alternativa a los tratamientos tradicionales.
Las mismas que están demostrando que pueden ser igual de afectivas o incluso más que
los métodos tradicionales, y por lo tanto deberían ser tomadas en cuenta por los
profesionales en el tratamiento de patologías sobre las cuales hay evidencia científica que
avala sus efectos beneficiosos. De este modo nace la Apiterapia que se define como ¨la
disciplina médica que emplea los productos de la colmena para el tratamiento y
prevención de enfermedades. (34)
4.1 PROPÓLEO
4.1.1 Historia y Fuentes de obtención
La aparición de las abejas en la tierra tuvo lugar hace unos setenta millones de años,
durante lo que se conoce como era terciaria. Su utilización por parte del hombre, donde
se empleaban la miel y el propóleo con fines medicinales, se remotan al periodo neolítico.
Este hecho pone en evidencia que desde la antigüedad el hombre ha sabido beneficiarse
de los productos que las abejas le ofrecía, sin ninguna evidencia científica. Con el
transcurso de los años y gracias al avance de la ciencia, se llegaron a conocer más a fondo
los beneficios del propóleo, lo que puso de manifiesto sus propiedades farmacológicas. A
partir de ese momento, proliferan una gran cantidad de estudios científicos que analizan
las propiedades del propóleo en el tratamiento de diferentes patologías del ser humano.
(34)
El propóleos es una mezcla compleja de resinas, ceras, aceites esenciales, polen y
microelementos, de consistencia viscosa y de color verde, pardo, castaño, rojizo e incluso
puede ser casi negro, dependiendo de su origen botánico. Esta sustancia, era utilizada por
los sacerdotes egipcios y más tarde, los griegos, quienes lo denominaron "propóleos",
pro: que significa delante de y polis: que quiere decir ciudad. (35)
23
El propóleo, o própolis, designa algunas sustancias gomosas y resinosas que, segregadas
por la corteza y yemas de algunas plantas, son procesadas con secreciones glandulares de
las abejas, hasta conseguir el producto final, conocido como propóleo. La recolección
responde a un patrón especifico de forrajeo, las pecoreadoras extraen el propóleos de las
yemas valiéndose de sus mandíbulas y con ayuda del primer par de patas, la secreción de
las glándulas mandibulares (ácido 10- hidroxidecenoico) permite el ablandamiento para
triturarlo y transportarlo a las cestillas. Al entrar a la colmena, se dirigen inmediatamente
al lugar donde éste es requerido y permanecen quietas, permitiendo que las abejas
propolizadoras, tomen algunas partículas de la sustancia, las compriman y las mezclen
con la enzima beta- glicosidasa presente en la saliva de las abejas y les agreguen cera para
proceder al propolizado. Las abejas utilizan el propóleos para barnizar el interior de la
colmena, con fines desinfectantes, cerrar grietas, reducir vías de accesos y consolidar los
componentes estructurales. También es utilizado para recubrir los cadáveres de intrusos
que entran en la colmena (escarabajos, roedores, lagartijas, etc.), que quedan
embalsamados evitando su descomposición. Esta propiedad del propóleos ya era
conocida por los egipcios y los sacerdotes quienes lo utilizaban para momificar a los
muertos. (35) (36).
Por lo tanto, el propóleo no solo actúa como un compuesto estructural, sino que es
principalmente responsable como un agente químico para la seguridad de panales,
especialmente contra microorganismos. (1)
Si el propóleo ejerce una acción antimicrobiana y es capaz de impedir cualquier infección,
que puedan provocar bacterias, virus y hongos, manteniendo de esta forma la colmena
perfectamente aséptica, no es de extrañar que esta misma acción la pueda ejercer sobre
las personas. Ya Aristóteles se refiere a esta sustancia como "remedio para las infecciones
de la piel, llagas y supuraciones". En el siglo XI, se empleó para desinfectar las heridas
por punta de flecha. Incluso en la Edad Media, los maestros constructores de violines,
como Stradivarius, lo mezclan junto con lacas y barnices para evitar su deterioro. (37)
Una colmena puede producir entre 150 y 300 gramos de propóleo por año, cifras que
pueden variar según condiciones tales como el clima, temperatura ambiente, cantidad de
24
ejemplares en la colmena, disponibilidad de brotes y oscilar entre 30 y 450grs por año.
(34)
4.1.2 Composición Química
La composición química del propóleo es bastante compleja y no se conoce totalmente
porque depende de la flora de la región donde es recolectado; esto influye en la forma en
que es utilizado dentro de la colmena ya que puede servir como sustancia embalsamadora
o de recubrimiento de la colmena. Esto significa que en las distintas partes de la colmena
varia en cuanto a su composición, por lo que será muy difícil encontrar dos colmenas que
produzcan propóleos idénticos aún cuando estén ubicadas en la misma zona geográfica,
ya que lo elaboran de acuerdo a sus necesidades y fuentes de materia prima disponibles.
Tabla 3. Composición del Propóleo
Fuente: http://tesis.uson.mx/digital/tesis/docs/22211/Capitulo2.pdf.
Estudios anteriores realizados por varios investigadores señalan que se han encontrado
mayor porcentaje de compuesto fenólicos en el propóleo que recubre los panales que en
el destinado a reducir el ingreso de agentes extraños a la colmena. Se han identificado en
el propóleo más de 160 compuestos, 50% de ellos fenólicos. (38)
- Sustancias Orgánicas y Minerales
30-40
25
Entre los compuestos orgánicos y minerales se encuentran, más de 40 flavonoides, que
son un diverso grupo de sustancias fotoquímicas producidas por un grupo diverso de
plantas en grandes cantidades. Como ser ácido cafeico, quercitin, baicalina,
pinocembrina, naringuina, galanguina y crysina. Son responsables de la acción
antimicrobiana, antioxidante y antiinflamatoria del propóleo. (Dias et al 2012) en un
estudio de propóleos en Portugal encontraron que los porcentajes de fenoles contenidos
en el propóleo variaba entre 11,1% y 28,2% y el de flavonoides variaba entre 3, 10 y 12%.
Estas concentraciones dependían de la región donde era colectado el propóleo. En este
grupo también se encuentran, vitaminas (vitamina A y vitaminas del grupo B),
aminoácidos (arginina y prolina), compuestos fenólicos, aldehídos aromáticos, alifáticos,
compuestos terpénicos, ácidos grasos y oligoelementos (cobalto, cobre, magnesio,
manganeso, zinc, hierro, selenio), todos estos con propiedades farmacológicas. (39) (34)
- Ceras
Las ceras presentes, no tienen actividad terapéutica probada, la presencia de las mismas
le restan pureza al propóleo, por lo tanto se considera que un propóleo es de calidad
cuando estas no sobrepasan el 25%. (34)
- Resinas y Bálsamos
El propóleo es básicamente una resina, el contenido de este parámetro se debe encontrar
entre el 50 y 60%, cuanta más alto sea este porcentaje, mayor será la calidad del propóleo.
(34)
Las diferencias en la composición del Propóleo están determinadas principalmente por la
flora del área ecológica, los ciclos evolutivos de las plantas proveedoras de resinas que
condicionan cambios en las concentraciones de las mismas, microorganismos presentes
en el entorno geográfico, factores climatológicos, influyendo también las características
macroscópicas y organolépticas del propóleo y la técnica de obtención; sin embargo,
presenta cualitativamente numerosas sustancias que se encuentran en el propóleo de
modo constante y relativamente estable. (38)
26
4.1.3 Propiedades biológicas y Terapéuticas
4.1.3.1 Antibacteriano
Fue una de las primeras propiedades constatadas. Múltiples estudios bacteriológicos in
vivo e in vitro confirmaron su acción bacteriostática y bactericida. Los principales
responsables de esta propiedad son los flavonoides galangina y pinocembrina y derivados
de los ácidos benzoico, ferúlico y cafeico.
Itoh y col., del Instituto de Investigación Zenyaku Kogyo Co, evaluó la capacidad
antimicrobiana de diferentes propóleos ante el Helicobacter pylori. Existe un cúmulo de
evidencias que atribuye a esta bacteria la génesis de la gastritis, úlcera gastroduodenal e
incluso el cáncer gástrico. Una muestra de origen argentino demostró poseer la mayor
capacidad ante esta bacteria, siendo los principales responsables los flavonoides:
pinocembrina en primer lugar y luego la galangina y la crisina. Los tratamientos actuales
consisten en la utilización de uno o más antibióticos, costosos, de eficacia dudosa y no
exenta de efectos secundarios. Un estudio realizado en el Departamento de Bioquímica
de la Universidad de Oxford, publicado en Microbiologie Research, informa que el ácido
cinámico y algunos flavonoides desactivan la energía de la membrana citoplasmática,
inhibiendo la motilidad bacteriana, haciéndolas más vulnerables al ataque del sistema
inmunológico y potenciando los antibióticos. (35) (34)
4.1.3.2 Anticariogénico
El potencial anticariogénico del propóleo ha sido demostrado a través de varios estudios
los cuales han revelado la reducción de la incidencia de caries y acumulación de placa
dental in vitro e in vivo; sugiriendo que existen dos mecanismos asociados con las
propiedades anticariogénicas/ antiplaca del propóleo como son la actividad
antimicrobiana contra bacterias cariogénicas y la inhibición de la enzima
glucosiltransferasa.
La composición química del propóleo revela que los componentes farmacológicos
activos más importantes son los flavonoides y varios compuestos fenólicos, terpenoides
27
y aromáticos. Entre estos la apigenina (flavonoides) y el tt-farnesol (terpenoides) han
demostrado tener las mayores propiedades antimicrobianas contra Streptococcus mutans,
basados sobre todo en su capacidad de inhibir las glucosiltransferasas y en su efecto
bactericida; además, impiden la síntesis de glucanos y pueden influenciar en la
composición química y microbiana de la placa dental. Recientemente estudios realizados
en el CIO (Centro de Investigaciones Odontológicas) de la Universidad de los Andes de
Venezuela han llevado a cabo trabajos "in vitro" con el propósito de observar el efecto
que tiene ciertas sustancias naturales como el tanino y el propóleo sobre el crecimiento
de Streptococcus mutans para determinar si existe un efecto de inhibición; encontrándose
que estas dos sustancias ejercen inhibición sobre el crecimiento de este microorganismo
cuyos resultados concuerdan con los obtenidos por Koo y col, lo cual evidencia la
actividad antimicrobiana del propóleo. (38)
4.1.3.3 Cicatrizante y Antiinflamatorio
La capacidad de acelerar positivamente la epitelización, la división celular en la curación
de heridas y la prevención y detección del desarrollo de procesos inflamatorios, son
algunas de las características de los preparados a base de propóleo. (34)
Premoli, G; et al, 2010, afirma que el propóleo actúa directamente en la cicatrización al
estimular la actividad fibroblástica. De la misma manera, Asís M, 2007, y Lopes R; et al,
2012, manifiestan que actúa como excelente hemostático. (36)
El propóleos ganó espacios importantes en el tratamiento de heridas, por su capacidad
antibacteriana y por su notable capacidad cicatrizante y antiinflamatoria. Comparándose
con antiinflamatorios de síntesis como el diclofenaco. Se señaló al ácido cafeico como
responsable de inhibir la dihidrofolato reductasa, reduciendo la producción de
interleuquinas y prostaglandinas. En 1996 fue publicado un trabajo elaborado en el
Departamento de Bioquímica de la Universidad de Oxford, los autores atribuyen esta
acción del propóleos a un éster del ácido cafeico (CAPE), al ácido cafeico y a la
quercetina. Quienes actúan a nivel de los macrófagos, suprimiendo la producción de
prostaglandinas y leucotrienos. Empleando modelos "in vivo" e "in vitro" constataron que
el propóleos suprime la vía de la lipooxigenasa del ácido araquidónico. (35)
28
El propóleos puede tener actividad antiinflamatoria muy fuerte en muchas áreas del
cuerpo. La inflamación es responsable de enfermedades como artritis, enfermedades del
corazón, Alzheimer y muchas más. Gran parte de la investigación reciente indica que uno
de los principales beneficios para la salud del propóleos es su efecto antiinflamatorio. Lo
más probable es que las personas que consumen propóleos de forma regular tengan menos
inflamación en sus cuerpos y, en última instancia, menos enfermedades. (40)
4.1.3.4 Fungicida
El propóleo ha demostrado efectos fungicidas al descomponer varias cepas de los hongos,
como la Cándida. Su efecto fungicida se asoció con la presencia de flavonoides. El
propóleo es el producto de las abejas con la mayor actividad antifúngica según pruebas
realizadas con 40 cepas de levaduras de Cándidas donde se inhibió su crecimiento. La
cepa más sensible fue la Rhodotoruba spp y la más resistente Cándida Albicans. (34)
4.1.3.5 Inmunoestimulante
El propóleo posee propiedades activadoras y moduladoras del sistema inmunológico, a
través de diferentes mecanismos. Entre ellos, actúa regulando el funcionamiento de las
células inmunitarias. Diversos trabajos demuestran que el propóleos estimula la
inmunidad inespecífica y la específica, tanto inmunidad celular (linfocitos T) como la
humoral (linfocitos B). En ratones infectados con el virus influenza tipo A y tratados con
propóleos, se constató un aumento de los linfocitos T, un mayor nivel de fagocitosis y
una menor mortalidad, en comparación con animales testigo no tratados. Los autores
determinaron que se estimula la liberación del factor inhibidor de la migración de los
leucocitos. (35) (37)
En el 1er Congreso Internacional sobre Apiterapéuticos realizado en la Habana en 1991,
se mostraron resultados positivos el empleo del propóleos en pacientes con
inmunodeficiencia. Un grupo de investigadores cubanos evalúo su respuesta en niños con
síndrome respiratorio alto o bajo recidivante y con inmunodepresión celular o mixta,
lográndose una mejoría clínica. Se ha comprobado que el propóleo estimula la actividad
29
de los macrófagos a casi el doble y aumenta el número de linfocitos incrementándose la
respuesta inmune. (34)
4.1.3.6 Antiviral
El propóleo también posee una acción antiviral, que se atribuye a algunos de sus activos,
como por ejemplo los compuestos fenólicos y bioflavonoides (luteolina y quercitina).
Asimismo, parece ser que su acción antioxidante también está implicada en la acción
antiviral. Recientemente, un estudio ha demostrado su acción antigripal y su eficacia in
Vitro contra la infección por el virus de la gripe en ratones. En Francia los Dres. Amoros
y Sauvager de la Facultad de Medicina de Rennes, confirmaron la acción antiviral frente
al herpes tipo 1 y 2, pero también ante poliovirus. Establecieron que reduce la síntesis del
ADN viral y que los responsables son flavonoides, que actúan en sinergismo con un éster
del ácido cafeico y el ácido ferúlico. Otro tipo de patología viral que responde
favorablemente al propóleos es el Herpes Zoster «culebrilla», patología con expresión
cutánea, dolorosa de pobre respuesta a los tratamientos convencionales. Tratado
precozmente en el período eruptivo, la remisión se acorta y se evita la neuralgia
postherpética. Otro virus como el VIH también ha llamado la atención. Un grupo de
investigadores del Albert Einstein College of Medicine de Nueva York, publicaron en
1997 un trabajo donde determinaron la capacidad del propóleos de suprimir la replicación
del VIH-1 y su efecto inmunoestimulante. (35) (37)
4.1.3.7 Anestésico
Otra de las propiedades del propóleo es su acción anestésica, varios estudios han
demostrado que el extracto acuoso de propóleo es un buen anestésico local, actuando
periféricamente en la membrana ocular más intensa y de mayor duración que la cocaína,
y una acción infiltradora similar al de la procaína. En un estudio realizado en conejos se
observó que un 4% de extracto de propóleo diluido en agua, a una concentración de
0,25%, producía anestesia total de la córnea durante una hora. Este efecto es tres veces
superior al de la cocaína y 52 veces mayor que el de la procaína. En base a esto, podríamos
decir que el propóleo podría ser utilizado como sustancia anestésica, y podrá ser utilizado
para problemas de la boca y enfermedades derivadas. Existen estudios que avalan esta
30
propiedad, como los realizados en 1979 por investigadores alemanes. Estos encontraron
en el extracto alcohólico del propóleo y en especial en algunos flavonoides como la
pinocembrina, pinostrobina y ésteres del ácido cafeico, que cada uno de ellos produce
efectos anestésicos locales. Se observó que la actividad anestésica local de la
pinocembrina y de los esteres del ácido cafeico mezclados presentan una acción 10 veces
más alta que la lidocaína. En contraposición investigadores búlgaros observaron que una
solución hidro- alcohólica con un 30% de extracto de propóleo mostraba cierta acción
anestésica, pero que el efecto era menor y más débil que el de una solución de procaína
al 5%. (34)
4.1.3.8 Capacidad Antioxidante
En los últimos años ha tomado relevancia el consumo de antioxidantes, en especial los de
origen natural, para la prevención de enfermedades de gran trascendencia como la
arterosclerosis, reuma e incluso el cáncer. Los antioxidantes, como la vitamina E (alfa
tocoferol), impiden la oxidación lipídica (transformación del colesterol LDL en colesterol
HDL), reduciendo el riesgo de enfermedades cardiovasculares, y además, neutralizan los
radicales libres, que son los responsables del envejecimiento celular. El propóleos posee
una capacidad antioxidante potente, que le permite adquirir insospechables perspectivas
de desarrollo. (35)
4.1.3.9 Antitumoral
Según Orsolic la actividad antitumoral del propóleo probada en animales (ratones) y en
cultivos celulares, sugiere que los flavonoides juegan un papel protector frente a la
toxicidad de los agentes quimioterapéuticos o de radiación En un estudio reciente
elaborado por Yasser y colaboradores en el 2017 revelaron que la propiedad antitumoral
del propóleo se debe a la acción de triterpenoides, con una concentración relativa de
74.0%; esteroides, con una concentración relativa de 9.8%; y diterpenoides, con una
concentración relativa de 7.9%. La actividad biológica se caracterizó usando diferentes
enfoques y ensayos basados en células. Se descubrió que el propóleo inhibe la
proliferación de las células cancerosas de una manera dependiente de la concentración a
través de la apoptosis. (41)
31
4.1.3.10 Antialérgico
Un beneficio increíble para la salud del propóleos es su capacidad para calmar los
síntomas de las alergias. Los científicos dieron propóleos a las ratas durante dos semanas
y descubrieron que inhibía significativamente la liberación de histamina de los mastocitos
de las ratas. La histamina es el compuesto que lo hace estornudar, le da ojos llorosos y
secreción nasal, lo que generalmente hace su vida más difícil. Los antihistamínicos son
los principales medicamentos para la alergia que se venden sin receta médica. Sus
resultados demostraron claramente que el propóleos puede ser eficaz en el alivio de los
síntomas de la rinitis alérgica a través de la inhibición de la liberación de histamina. (40)
4.1.4 Utilización del propóleo en Periodoncia
El efecto que ha tenido el propóleo sobre el periodonto ha sido de gran satisfacción puesto
que ha demostrado tener actividad antiinflamatoria, antimicrobiana, anestésica y
cicatrizante, en casos de gingivitis crónicas y úlceras bucales recurrentes e inespecíficas;
siendo de ayuda para mejorar el tratamiento periodontal, más aún si tenemos en cuenta
que la consecuencia fundamental a largo plazo es la pérdida de todos los dientes. Otras
investigaciones han reportado que las soluciones de propóleo tienen efecto sobre los
gérmenes Gram positivos de la placa supragingival conllevando a una recuperación más
rápida, incrementando también la respuesta inmune local. Como agente antiinflamatorio,
el propóleo inhibe la síntesis de prostaglandinas, y ayuda al sistema inmune promoviendo
la actividad fagocitaria y estimulando la inmunidad celular. Algunos autores han creado
parches bucales para lograr la liberación de propóleo lentamente, logrando buenos
resultados (Khalid Almas et al 2001). Bruschi encontró un gel mucoadhesivo que
conteniendo propóleo y aplicado en bolsas periodontales, podía ser usado con éxito en el
tratamiento de la enfermedad periodontal, Coutinho encontró también que el propóleo en
solución usado como irrigante previo al tratamiento periodontal obtenía muy buenos
resultados. (39)
Es importante mencionar que en un estudio clínico se determinó el efecto del propóleo en
la reducción de placa dental, el cual se realizó durante 3 días, encontrándose que el índice
de placa se redujo en un 44,7% aproximadamente después del tratamiento, comparado
32
con el placebo. Además, el colutorio redujo la concentración de polisacáridos insolubles
en la placa en un 61,7% comparado con el placebo; lo cual sugiere que presentó un efecto
sobre la microflora bucal. Estudios similares realizados en microorganismos Gram
negativos anaerobios tales como Prevotella intermedia, Prevotella
nigrescens y Porphyromonas gingivalis asociados con enfermedades periodontales han
confirmado la actividad antibacteriana de este compuesto. (38)
4.1.5 Comercialización
Actualmente existen en el mercado gran variedad de productos con base de propóleo que
se comercializan en farmacias o centros naturistas. Su accesible disponibilidad hace que
usar propóleo sea más fácil. Las medicinas preparadas con compuestos de propóleo
presentan aplicaciones muy diversas que van desde los simples caramelos hasta
soluciones inyectables por vía intravenosa. Se lo puede encontrar en las diferentes
presentaciones: (34)
- Propóleo en cápsulas
- Propóleo en líquido
- Jarabe de propóleo
- Propóleo en pastillas
- Goma de mascar de propóleo
- Propóleo en spray y aerosoles
- Propóleo en ungüentos
- Propóleo en cremas
4.1.6 Dosis Recomendadas
El Dr. Russian con muchos años de experiencia en el uso del propóleo, prescribe
alrededor de 9gr de propóleo al día, sin que se observe ningún tipo de efecto secundario,
y a aquellas personas que tengan el sistema inmune comprometido pueden aumentar su
ingesta hasta los 12gr al día. En los preparados que usted puede encontrar en las tiendas
especializadas, siga las instrucciones de consumo y no sobrepase las dosis recomendadas.
Que suelen ser 5 gotitas en un bocado de agua 3 veces al día, y si se está utilizando como
33
tratamiento se puede tomar la misma dosis todo el día cada 2 horas, aun así, se debe tomar
en cuenta las instrucciones del fabricante. (34) (41)
4.1.7 Efectos Adversos
Las personas que han hecho uso del propóleo como medicina natural durante los últimos
300 años, no han reportado en la literatura efectos adversos o tóxicos. Sin embargo uno
de los problemas que ha sido asociado al propóleo y se hace referencia en la literatura
científica, es el hecho de que una de cada mil personas es alérgica al propóleo, la causa
es aún desconocida. Mucha gente asocia a los productos de las abejas con alergias,
principalmente por la reputación del polen y la miel. Sin embargo el propóleo
especialmente cuando esta refinado, se compone casi de resina pura recolectada de los
árboles que no debería contener polen o miel y si algún preparado lo tiene, debería
anunciarlo en su etiquetado. Las respuestas alérgicas son menores cuando el propóleo se
ingiere internamente que cuando se usa de manera externa. (34)
Teniendo esto en consideración, es necesario aplicarles a los pacientes pruebas de alergia,
antes de comenzar cualquier tratamiento con propóleo. O, comenzar ingiriendo pequeñas
cantidades para cerciorarse que no presentan síntomas alérgicos, después pueden ir
aumentando las dosis progresivamente.
Las reacciones alérgicas al propóleo, surgen por lo general, en personas que son alérgicas
a las picaduras de abejas, así como en personas que ya padecen algún tipo de problema
alérgico (asma bronquial, eccema, diabetes, urticaria, etc.).
Las personas que tienen antecedentes alérgicos, deben utilizar con mucha precaución los
inhaladores o aerosoles, especialmente las presentaciones con alto contenido en propóleo.
En general, el propóleos no presenta efectos secundarios, salvo en raras excepciones que
puede causar: sequedad en la boca, somnolencia, mareos y reacciones alérgicas. (41)
También se puede dar el caso, de reacciones alérgicas dependiendo del tipo de planta de
donde las abejas han recogido el propóleo, siendo ésta una reacción alérgica, más por la
planta original que debida al propio producto.
34
4.2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Las periodontitis son una de las patologías orales de mayor prevalencia en seres humanos,
son de naturaleza inflamatoria y etiología infecciosa producidas por el biofilm patogénico
subgingival. Aunque su microbiota es compleja, Porphyromonas gingivalis y
Aggregatibacter actinomycetemcomitans han sido ampliamente asociadas al inicio,
progresión y severidad de la enfermedad, causando daño directo a las estructuras
periodontales a través de los diversos factores de virulencia que expresan. (5)
Debido a la inaccesibilidad de los instrumentos a ciertas áreas anatómicas, el uso de
antimicrobianos sintéticos, se convierte en una rutina en el tratamiento de las
enfermedades periodontales. Si consideramos que el uso indiscriminado de estos ha
generado resistencia bacteriana y en varios casos efectos adversos, (3) el empleo de
nuevas alternativas preventivas y terapéuticas naturales como el propóleo, que a más de
poseer una amplia gama de propiedades, no causa efectos adversos ni resistencia alguna,
lo colocan como un buen candidato para prevenir o tratar enfermedades infecciosas. (2)
El propóleo es un producto natural fabricado por las abejas, a partir de plantas vivas, en
él se reconocen propiedades biológicas que lo hacen excelente antimicrobiano,
antimicótico, antiviral, antileucémico, antiinflamatorio, analgésico, antioxidante,
regenerador de tejidos, fortalecedor del sistema inmune, cicatrizante, promovedor de la
actividad fagocítica, estimulador de la inmunidad celular, etc. (5)
Estudios realizados en diferentes Países con diferentes tipos de propóleo, han tenido
resultados inhibitorios espectaculares con las mismas bacterias en estudio, como otros
que han presentado poco o nulo resultado. De qué depende?, Diferentes artículos han
revelado que la inconsistencia entre resultados de un estudio y otro, están ligados a la
composición del propóleo, el cuál varía según el origen, la flora local de la región, la
estación, entre otras (2). Al ser el Ecuador un País de diversidad tanto climática como en
flora, nos lleva a hacernos la siguiente pregunta:
¿El extracto Etanólico de Propóleo Ecuatoriano tendrá efecto inhibitorio sobre cepas de
Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis?
35
4.3 OBJETIVOS
4.3.1 Objetivo General
Determinar el efecto inhibitorio del extracto Etanólico de Propóleo Ecuatoriano, frente a
cepas de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis
4.3.1.1 Objetivos Específicos
Determinar el grado de inhibición del extracto Etanólico de Propóleo Ecuatoriano
a una concentración del 10% frente a cepas de Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis, transcurrido el tiempo de
24 horas
Determinar el grado de inhibición del extracto Etanólico de Propóleo Ecuatoriano
a una concentración del 20% frente a cepas de Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis, transcurrido el tiempo de
24 horas
Determinar el grado de inhibición del extracto Etanólico de Propóleo Ecuatoriano
a una concentración del 30 % frente a cepas de Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis, transcurrido el tiempo de
24 horas
Determinar el grado de inhibición del extracto Etanólico de Propóleo Ecuatoriano
a una concentración del 100 % frente a cepas de Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis, transcurrido el tiempo de
24 horas.
Comparar los halos de inhibición de extracto Etanólico de propóleo Ecuatoriano
a las diferentes concentraciones frente a los de la Clorhexidina 0,12%,
transcurrido el tiempo de 24 horas.
36
5 HIPÓTESIS
5.1 Hipótesis de Investigación (H1)
El extracto Etanólico de propóleo Ecuatoriano a diferentes concentraciones tendrá efecto
inhibitorio sobre cepas de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y Porphyromonas
Gingivalis, comparado con el de la clorhexidina al 0,12%
5.2 Hipótesis nula (H0)
El extracto Etanólico de propóleo Ecuatoriano a diferentes concentraciones no tendrá
efecto inhibitorio sobre cepas de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y
Porphyromonas Gingivalis, comparado con el de la clorhexidina al 0,12%
5.3 CONCEPTUALIZACIÓN DE LAS VARIABLES
5.3.1 Variable Independiente
5.3.1.1 Propóleo
La palabra propóleo se deriva de las palabras griegas "pro" que significa "en defensa de"
y "polis" que significa "ciudad", que se refiere a la defensa de la ciudad o la colmena, es
un material lipofílico y resinoso recogido de plantas vivas, que se mezcla con la enzima
beta-glicosidasa presente en la saliva de las abejas, parcialmente digerida y añadida a la
cera de abeja para formar el producto final, en él se reconocen propiedades biológicas
que lo hacen excelente antimicrobiano, antimicótico, antiviral, antitumoral,
antileucémico, antiinflamatorio, analgésico, antioxidante, regenerador de tejidos,
fortalecedor del sistema inmune, cicatrizante, promovedor de la actividad fagocítica,
estimulador de la inmunidad celular, etc. En cuanto a su composición contiene 50-55%
de resinas, 30-40% de ceras, 5-10% de aceites esenciales, 5% de polen y 5% de sustancias
orgánicas y minerales, dentro de estos últimos se encuentran más de 40 flavonoides que
son los que han demostrado brindarle la capacidad antimicrobiana y la calidad al
producto. (5)
37
5.3.2 Variables dependientes
Inhibición de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis
Microorganismos periodonto-patógenos, anaerobios, gram negativos.
5.3.3 Variables de Control
5.3.3.1 Clorhexidina al 12%
El gluconato de clorhexidina es un agente antimicrobiano que desestabiliza y penetra las
membranas de las células bacterianas, es una de las sales de clorhexidina más usada en la
práctica clínica por sus características de solubilidad, estable a temperatura ambiente,
necesita ser protegido de la luz, en presencia de ph alcalino, jabones, detergentes
aniónicos se ve reducida su actividad. A bajas concentraciones es bacteriostático,
mientras que a concentraciones altas es bactericida, posee una actividad microbiana de
amplio espectro y capacidad antimicrobiana a largo plazo. (6)
5.3.4 Suero Fisiológico
El suero fisiológico es una disolución acuosa de sustancias biocompatibles. Se trata de
una solución estéril de cloruro de sodio al 0,9% en agua y también es conocido
como solución salina normal. (7)
38
6 JUSTIFICACIÓN
Las periodontitis son una de las enfermedades orales más prevalentes en seres humanos.
Porphyromonas Gingivalis y Aggregatibacter Actinomycetemcomitans son bacterias
periodonto-patógenas asociadas al inicio, progresión y severidad de la enfermedad a
través de los diversos factores de virulencia que expresan. (5)
En la mayoría de los casos el tratamiento periodontal es acompañado por antimicrobianos
sintéticos, los cuales a más de controlar la formación de placa, compensan la
inaccesibilidad a ciertas áreas anatómicas donde han penetrado las bacterias y es difícil
llegar con el instrumental. Si consideramos que el uso indiscriminado de productos
sintéticos ha generado resistencia bacteriana y en varios casos efectos adversos, el empleo
de nuevas alternativas y terapéuticas naturales como el propóleo que a más de brindar
infinidad de propiedades, aptas para una excelente y rápida recuperación, ha demostrado
no causar efectos adversos en cuanto a su consumo ni se ha descrito resistencia alguna.
(2)
El propóleo es un producto natural fabricado por las abejas a partir de las resinas, en él se
reconocen propiedades biológicas que lo hacen antimicrobiano, antimicótico, antiviral,
antioxidante, regenerador de tejidos, inmunomodulador, cicatrizante, analgésico, etc (5)
Razón por la cuál el presente estudio tiene como fin, demostrar la capacidad
antimicrobiana del extracto Etanólico del propóleo Ecuatoriano que junto con su infinita
variedad de propiedades, nos brindará un tratamiento óptimo, que no ocasione resistencia
bacteriana, ni efectos adversos
39
7 MATERIALES Y MÉTODOS
7.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN
7.1.1 Experimental in Vitro
El presente estudio implicó la manipulación rigurosa de las variables, para de esta
manera medir el efecto de la variable independiente (propóleo Ecuatoriano) frente a
variables dependientes (cepas de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y
Porphyromona Gingivalis) a más de requerir criterios de inclusión y exclusión por parte
del investigador.
7.1.2 Comparativo
Se comparó el efecto inhibitorio del extracto etanólico de propóleo Ecuatoriano a
diferentes concentraciones, frente a grupos de controles positivos como son la
clorhexidina al 0,12% frente a cepas de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y
Porphyromona Gingivalis, midiendo los halos de inhibición en cada caso
7.2 POBLACIÓN, TAMAÑO DE MUESTRA
7.2.1 Población
Cepas de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ATCC® 29522™ y Porphyromonas
Gingivalis ATCC® 33277™, ambas importadas de EEUU, por la empresa Medibac,
ubicada en la Av. República del Salvador e Irlanda en Quito
7.2.2 Selección y tamaño de la muestra
Con asesoría de un estadístico se concluyó que el tamaño de la muestra que se utilizará
en este estudio será de 15 unidades experimentales para cada cepa, es decir 15 cajas Petri
de agar chocolate donde se inoculará la cepa de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans
y 15 cajas Petri con agar sangre donde se inoculará la cepa de Porphyromona Gingivalis,
40
para de esta manera obtener 15 repeticiones para cada concentración disminuyendo así el
margen de error estadístico.
7.3 CRITERIOS DE INCLUSIÓN Y EXCLUSIÓN
7.3.1 Criterios de Inclusión
- Cajas Petri con agar chocolate inoculadas con la cepa Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans ATCC® 29522™
- Cajas Petri con agar sangre inoculadas con la cepa Porphyromona Gingivalis
ATCC® 33277™
- Solución de clorhexidina al 0,12% como control positivo
- Suero fisiológico como control negativo
- Extracto etanólico de propóleo Ecuatoriano al 10%, 20%, 30% y 100%
7.3.2 Criterios de Exclusión
- Cajas Petri inoculadas con cepas de bacterias que sufran contaminación durante
el proceso
- Cajas Petri que se rompan durante el proceso
- Cepas de bacterias que no correspondan a la misma codificación
- Soluciones de propóleo caducados o que sufran exposiciones que intervengan en
el cambio o alteración de su composición.
41
7.4 DEFINICIÓN OPERACIONAL DE LAS VARIABLES
VARIABLE
DEFINICIÓN OPERACIONAL
TIPO
CLASIFICACIÓN
INDICADOR CATEGÓRICO
ESCALAS DE
MEDICIÓN
Efecto antimicrobiano frente a
cepas de Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans
Medición del halo de inhibición que se forma
alrededor del disco impregnado con el agente
activo en base al Gold estándar
Dependiente Cuantitativa
Continua
Nula < 8mm
Sensible 9mm -14mm
M. Sensible 15-19mm
S. Sensible ≥ 20m
NOMINAL
Efecto antimicrobiano frente a
cepas de Porphyromona
Gingivalis
Medición del halo de inhibición que se forma
alrededor del disco impregnado con el agente
activo en base al Gold estándar
Dependiente Cuantitativa
Continua
Nula < 8mm
Sensible 9mm -14mm
M. Sensible 15-19mm
S. Sensible ≥ 20m
NOMINAL
Extracto Etanólico de propóleo Extracto de propóleo al 70% en etanol, de la casa
comercial, el cuál se obtuvo ya elaborado en tienda
naturista
Independiente Cuantitativa
Continua
Extracto etanólico de propóleo al 10%
Extracto etanólico de propóleo al 20%
Extracto etanólico de propóleo al 30%
ORDINAL
Clorhexidina Sustancia antibacteriana al 0,12% utilizada como
Gold estándar, impregnada en un disco de papel,
para control positivo
Independiente Cuantitativa
Continua
Clorhexidina al 0,12%
Halo de inhibición al 0.12% Nula <
8mm Sensible 9mm -14mm M.
Sensible 15-19mm S. Sensible ≥
20mm
ORDINAL
Suero Fisiológico Solución estéril que se utilizará impregnada en un
disco como control negativo
Independiente Cuantitativa
Continua
Suero fisiológico
Halo de inhibición al 0.12% Nula <
8mm Sensible 9mm -14mm M.
Sensible 15-19mm S. Sensible ≥
20mm
ORDINAL
42
7.5 ESTANDARIZACIÓN
El presente estudio no requirió estandarización puesto que se realizó en el laboratorio de
la Facultad de Ciencias Quimicas de la Universidad Central del Ecuador, por la Dra
Rachide Acosta jefa del laboratorio y experta en estudios in vitro.
7.6 MANEJO Y MÉTODOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS
7.6.1 Solicitud de aceptación de tutoría
Para el inicio y desarrollo del presente estudio se inició presentando una solicitud de
aceptación de tutoría al Dr. Juan Pablo Jaramillo, Periodoncista y experto en temas in
vitro. (ANEXO 1)
7.6.2 8.6.2 Solicitud de Aprobación de tema de tesis
Se solicitó la aprobación del tema de tesis por parte del Comité de Investigación de la
Facultad De Odontología De La Universidad Central Del Ecuador. (ANEXO 2)
7.6.3 Solicitud a Coordinación de biblioteca
Se solicitó a Coordinación de Biblioteca verificar que no se refleje coincidencias en tipo
de estudio con los trabajos realizados desde 1996 hasta la presente fecha (ANEXO 3)
7.6.4 Solicitud a Decana de Facultad de Ciencias Quimicas
Se envió una solicitud a la Decana de la Facultad de Ciencias Químicas, para el
asesoramiento y utilización del laboratorio Microbiológico (ANEXO 4)
7.6.5 Obtención del Extracto Etanólico de Propóleo
El extracto etanólico del Propóleo que se empleó en este estudio Tintura Propóleo
“PROPOLIS” fue adquirido en una tienda naturista ubicada frente al mercado Santa
43
Clara en la ciudad de Quito, este producto es elaborado por Industria Naturista S.C.C en
Quito- Ecuador, con registro sanitario (0165-MNN-10-05) y fecha de caducidad de 2
años, siendo responsable la Química Farmacéutica Andrea Balseca. Cada mililitro de
solución contiene 0,2g de propóleo y 2,3% de etanol.
Se utilizó para este estudio la marca Própolis ya que en la prueba piloto realizada en
conjunto con 5 propóleos diferentes, fue la que reflejó un halo de inhibición mayor, frente
a las cepas Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis.
Figura 1. Tintura de Propóleo- PROPOLIS,
Elaborado por Industria Naturista S.C.C
Fuente: María José Reyes
7.6.6 Procedimiento para obtener las concentraciones de Propóleo deseadas
Para obtener las concentraciones de 10%, 20% y 30% la Dra. Rachide Acosta jefa y
encargada del laboratorio clínico de la Facultad de Ciencias Quimicas, utilizó la fórmula
de solución de reserva V1.C1=V2.C2 que quiere decir Concentración 1 por Volumen 1
(concentración inicial) es igual a Concentración 2 por Volumen 2 (concentración que
deseo obtener), despejando de la fórmula a volumen 2 quedando de la siguiente manera
V2 = C1V1/C2, obtuvo la cantidad de disolvente que se debía añadir a la solución actual
para obtener las concentraciones deseadas. En las indicaciones del fabricante rotuladas
en el propóleo que se utilizó para el estudio, indica que en cada mililitro contiene 0,2gr
de propóleo los cuales fueron transformados a miligramos De la siguiente manera:
44
1gr 1000mg 0,2gr 1ml
0,2gr X = 200mg 200gr 1ml 100%
V1C1=V2C2
V1.100% = 2ml.10%
V= 2ml x 10% = 0,2ml 2ml 10%
100%
V= 2ml x 20% = 0,4ml 2ml 20%
100%
V= 2ml x 30% = 0,6ml 2ml 30%
100%
Mientras que se tomó como concentración al 100% a la solución etanólica de propóleo
tal cual como la adquirimos en la tienda naturista, sin ser mezclada con ninguna otra
sustancia.
7.6.7 Obtención y almacenamiento de las cepas
Se utilizó la cepa Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ATCC® 29522™ (ANEXO
5) (ANEXO 6) y Porphyromonas Gingivalis ATCC® 33277™ (American Type Culture
Collection) (ANEXO 7) (ANEXO 8) ; que fueron importadas desde Estados Unidos
mediante la empresa Medibac, en estado liofilizado y almacenado a bajas temperaturas
en el Laboratorio Clínico y Bacteriológico de la Universidad Central del Ecuador.
45
Figura 2. Cepa de Porphyromonas Gingivalis del Laboratorio MEDIBAC
Fuente: María José Reyes
Figura 3. Cepa de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans del Laboratorio
MEDIBAC Fuente: Lizeth Yerovi
7.6.8 Activación de las cepas
Previo a cualquier procedimiento se verificó que todo el instrumental a utilizar este
previamente esterilizado, para evitar cualquier tipo de contaminación. (ANEXO 9). Para
la activación de la cepa Aggregatibacter Actinomycetemcomitans primero se eligió un
medio de aislamiento primario (Agar chocolate). Se empleó el tubo que contiene la cepa
tomando las especificaciones entregadas por MEDIBAC (ANEXO 10 ) para evitar la
contaminación de la misma. Se llevó al agar chocolate y se la colocó en una jarra de
anaerobiosis a 35°C ± 2°C con una concentración de CO2 de 5% a 7% manteniéndola en
46
la incubadora de 24 a 48 horas. Se utilizó la guía de selección de requerimientos de
crecimiento proporcionado por MEDIBAC, utilizando el METODO 3. (ANEXO 11)
Figura 4. Activación de la cepa de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ATCC®
29522™ Fuente: Lizeth Yerovi
Para la activación de la cepa Porphyromonas Gingivalis primero se eligió el medio de
aislamiento primario (Agar sangre), luego se siguió los pasos que indica el fabricante en
su página (ANEXO 11). Se realizó el cultivo en un tubo de ensayo con tripticasa de soya
(caldo nutriente), y se colocó en una jarra de anaerobiosis para llevarla a la incubadora
durante 7 días a una temperatura de entre 34 a 38°C, en una caja de CO2, en la cuál se
introdujo una vela encendida y se cerró herméticamente la caja hasta que la vela se
apague, de esta manera en el interior de la caja se mantuvo el CO2.
Figura 5. Activación de la cepa de Porphyromonas Gingivalis ATCC® 33277™
Fuente: María José Reyes
47
7.6.9 Siembra de las Cepas
Para sembrar las cepas se tomó como referencia la escala de concentración Mc Farland
la cual contiene 0,5 mcf, que es una turbidez estándar. Se tomó con una pipeta 1ml de
suero fisiológico y se lo llevo a un tubo de ensayo estéril, a continuación tomamos de la
caja Petri que sacamos de la incubadora, la bacteria que habíamos sembrado con 7 días
de anticipación, la misma que ya había crecido y tomamos de 2 a 3 colonias con un asa
de platino de extremo redondo, previamente esterilizada a fuego directo y lo introdujimos
en la pipeta que contenía el suero fisiológico. Guiándonos con el tubo de ensayo Mc
Farland, debíamos llegar a la turbidez de la misma, lo cual logramos añadiendo más suero
fisiológico en caso de estar muy turbio, y más colonias en caso de estar muy claro.
Figura 6. Dilución de bacterias para sembrado, basándose en escala Mc Farland
Fuente: María José Reyes
Posteriormente introdujimos un Hisopo en el tubo de ensayo que contenía la
concentración de 0,5mcf de la bacteria, eliminando los excesos en las paredes del tubo de
ensayo y con una técnica de hisopado sembramos la bacteria Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans en 15 cajas Petri con agar chocolate, utilizando la misma
técnica sembramos la Porphyromona Gingivalis en 15 cajas Petri con agar sangre,
haciéndolo en varias direcciones, de tal manera que no quede lugar en las cajas sin
siembra de las bacterias.
48
Figura 7. Siembra de Porphyromonas Gingivalis ATCC® 33277™
Fuente: María José Reyes
Figura 8. Siembra de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ATCC® 29522™
Fuente: María José Reyes
Después de sembrar las bacterias en las 30 cajas Petri, tomamos los discos de papel los
cuales se adquirieron en MEDIBAC y las concentraciones obtenidas anteriormente del
Propóleo seleccionado para el estudio, rotulando en la parte posterior de las cajas Petri
del 1 al 15 según el número de repeticiones para cada bacteria, y rotulando el lugar donde
iba a ir cada disco con cada solución, se tomaron los discos con una pinza algodonera
estéril y se los colocaron en una caja Petri estéril, en donde cada uno fue impregnado con
0,20ul de cada solución, cuatro de ellos con propóleo a diferentes concentraciones, 10%,
20%, 30% y 100% , un disco de prueba el cual fue impregnado con propóleo al 100%
diluido en miel, el cuál al final no fue tomado en cuenta por no potencializar las
propiedades del propóleo, un disco impregnado con suero fisiológico y otro con
clorhexidina al 0,12%. Fueron ubicados cada uno de ellos en las cajas Petri que contenían
las bacterias sembradas y según su rotulación.
49
Figura 9. Discos de papel embebidos con 0.20ul de Extracto Etanólico de Propóleo a
diferentes concentraciones Fuente: María José Reyes
Figura 10. Colocación de discos impregnados de las diferentes soluciones en las cajas
Petri donde se sembraron anteriormente las bacterias Fuente: María José Reyes
Por último se llevó las cajas Petri a una jarra de CO2, y se las conserva a una
temperatura de 37+-°C por un periodo de 24 a 48 horas
50
Figura 11. Colocación de las cajas Petri en una jarra de CO2 y llevadas a la incubadora
a una temperatura de 37+-°C Fuente: María José Reyes
7.6.10 Medición de los Halos de Inhibición
Se midieron los halos de inhibición a las 24 horas luego de su incubación, utilizando una
regla milimetrada Merck Sharp & Dohme. Los resultados obtenidos para ambas bacterias
se detallan más adelante, el promedio obtenido por el análisis estadístico fue comparado
con el aromatograma según Duraffourd, que nos indica los valores de sensibilidad o
resistencia de las bacterias. Después de detallar los halos de inhibición se certifica que el
presente estudio ha sido realizado bajo las Instalaciones del Laboratorio de la Facultad de
Química de la UCE. (ANEXO 12).
51
1. Propóleo al 10%
2. Propóleo al 20%
3. Propóleo al 30%
4. Propóleo al 100%
5. Propóleo con miel
6. Suero Fisiológico
7. Clorhexidina al 0,12%
Figura 12. Halos de inhibición en Porphyromonas Gingivalis Fuente: María José Reyes
Figura 13. Medición de los halos de inhibición en Porphyromonas Gingivalis
Fuente: María José Reyes
1
2
3
4
5
6
7
52
Figura 14. Halos de inhibición en Aggregatibacter Actinomycetemcomitans
Fuente: María José Reyes
7.6.11 MANEJO DE DESECHOS
Se manejaron los desechos de acuerdo a la normativa establecida en el Laboratorio de
Microbiología de la Facultad de Ciencias Químicas. (ANEXO 13)
7.7 ANÁLISIS ESTADÍSTICO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Los resultados fueron leídos, codificados y archivados en un archivo de Excel.
Posteriormente se analizó mediante estadística descriptiva para reportar el halo de
inhibición según porcentaje de propóleo y tiempo. El análisis estadístico se llevó a cabo
una vez que se obtuvieron los datos respectivos de cada repetición elaborada en el
laboratorio clínico de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del
Ecuador, por el Ingeniero en Estadística, Jaime Molina.
53
Tabla 4. Resultados de los halos de inhibición en Porphyromonas Gingivalis Fuente: Dra. Rachide Acosta
Tabla 5. Valores de sensibilidad en el aromatograma (Duraffourd)
Fuente: Dra. Rachide Acosta
Para el análisis estadístico se verificó en primera instancia que las muestras tomadas
hayan provenido de una población con distribución Normal, esto se realiza con las
pruebas de Kolmogorov - Smirnov o con la prueba de Shapiro - Wilk (menor a 20 datos).
Si las muestras provienen de poblaciones con distribución normal entonces se
realizan pruebas paramétricas (media, desviación estándar): T student, ANOVA.
Si las muestras No provienen de poblaciones con distribución normal entonces se
realizan pruebas no paramétricas (orden, signos): Mann Whitney, Kruskal Wallis,
Wilcoxon
Para cada prueba de Hipótesis, se compara el valor de significación (Sig) con el valor
0,05 (95% de confiabilidad)
54
Si el nivel de significación es superior a 0,05 se acepta Ho (hipótesis inicial)
Si el nivel de significación en inferior a 0,05 se acepta Ha (hipótesis alterna).
Prueba de Normalidad (para ver si se realizan pruebas paramétricas o no
paramétricas)
Ho: Las muestras provienen de poblaciones con distribución Normal
Ha: Las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal
Pruebas de normalidad: PHORPHYROMONAS GINGIVALIS
Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk
Estadístico gl Sig. Estadístico
gl Sig.
PROPOLEO ECUATORIANO al 100%
0,271 15 0,004 0,815 15 0,006
CLORHEXIDINA 0,12% 0,205 15 0,091 0,882 15 0,052
Tabla 6. Prueba de normalidad: Porphyromonas Gingivalis Fuente: Ing. Jaime Molina
En la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk los valores del nivel de significación (Sig)
son inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), por tanto se acepta Ha, esto es las muestras
NO provienen de poblaciones con distribución Normal, entonces para la comparación de
grupos se utiliza pruebas no paramétricas: Kruskal Wallis (tres o más muestras).
7.7.1 PRUEBAS NO PARAMÉTRICAS DE KRUSKAL WALLIS:
COMPARACIÓN ENTRE SUSTANCIAS
Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de
probabilidad (Medias, medianas similares)
Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las
poblaciones.
55
Descriptivos
MEDIDAS N Media Desviació
n estándar
Error estándar
Mínimo Máximo
PROPOLEO ECUATORIANO 10%
15 6,0000
0,00000 0,00000 6,00 6,00
PROPOLEO ECUATORIANO 20%
15 6,0000
0,00000 0,00000 6,00 6,00
PROPOLEO ECUATORIANO 30%
15 6,0000
0,00000 0,00000 6,00 6,00
PROPOLEO ECUATORIANO 100%
15 7,0667
0,70373 0,18170 6,00 8,00
CLORHEXIDINA 0,12% 15 15,3333
1,04654 0,27021 14,00 17,00
SUERO FISIOLÓGICO 15 6,0000
0,00000 0,00000 6,00 6,00
Total 90 7,7333
3,47641 0,36645 6,00 17,00
Tabla 7. Prueba no paramétrica de Kruskal Wallis Porphyromonas Gingivalis Fuente: Ing. Jaime Molina
Gráfico 1. Comparación entre sustancias Porphyromonas Gingivalis
Fuente: Ing. Jaime Molina
En la gráfica se observa que las medias de PROPOLEO ECUATORIANO 10%,
PROPOLEO ECUATORIANO 20%, PROPOLEO ECUATORIANO 30% y SUERO
FISIOLÓGICO tienen un valor de 6 mm, los mayores valores tiene la CLORHEXIDINA
0,12% con un valor de 15,33 mm y en el intermedio está el PROPOLEO
ECUATORIANO 100% con un valor de 7,07 mm. Para determinar si se tienen una
diferencia significativa se realiza la prueba de Kruskal Wallis.
6,00 6,00 6,007,07
15,33
6,00
PR
OP
OLE
O
ECU
ATO
RIA
NO
1
0%
PR
OP
OLE
O
ECU
ATO
RIA
NO
2
0%
PR
OP
OLE
O
ECU
ATO
RIA
NO
3
0%
PR
OP
OLE
O
ECU
ATO
RIA
NO
1
00
%
CLO
RH
EXID
INA
0
,12
%
SUER
O
FISI
OLÓ
GIC
O
Comparación entre sustanciasPHORPHYROMONAS GINGIVALIS
56
Gráfico 2. Prueba de Kruskal Wallis para muestras independientes
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la Prueba de Kruskal-Wallis, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba
bilateral) = 0,000) es inferior a 0,05 (95% de confiabilidad), luego se acepta Ha, esto es,
existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las medias
de las muestras son similares.Para determinar cuáles son similares o diferentes se hace la
prueba dos a dos:
57
Tabla 7. Prueba dos a dos Porphyromonas Gingivalis
Fuente: Ing. Jaime Molina
58
De la prueba dos a dos son similares entre: PROPOLEO ECUATORIANO 10% con el
PROPOLEO ECUATORIANO 20%, con el PROPOLEO ECUATORIANO 30% y con
el SUERO FISIOLÓGICO.
No son similares entre la CLORHEXIDINA 0,12% y todas las diversas concentraciones
del PROPOLEO ECUATORIANO.
No son similares entre el PROPOLEO ECUATORIANO 100% y las otras diversas
concentraciones del PROPOLEO ECUATORIANO.
RESULTADOS AGGREGATIBACTER ACTINOMYCETEMCOMITANS
Tabla 8. Resultados de halos de inhibición Aggregatibacter Actinomycetemcomitans
Fuente: Ing. Jaime Molina
59
PRUEBAS NO PARAMÉTRICAS DE KRUSKAL WALLIS: COMPARACIÓN
ENTRE SUSTANCIAS
Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de
probabilidad (Medias, medianas similares)
Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las
poblaciones.
Descriptivos
MEDIDAS
N Media
Desviación
estándar
Error
estándar Mínimo Máximo
PROPOLEO ECUATORIANO 10% 15 6,0000 0,00000 0,00000 6,00 6,00
PROPOLEO ECUATORIANO 20% 15 6,0000 0,00000 0,00000 6,00 6,00
PROPOLEO ECUATORIANO 30% 15 6,0000 0,00000 0,00000 6,00 6,00
PROPOLEO ECUATORIANO 100% 15 6,7333 0,70373 0,18170 6,00 8,00
CLORHEXIDINA 0,12% 15 13,266 0,96115 0,24817 12,00 15,00
SUERO FISIOLÓGICO 15 6,0000 0,00000 0,00000 6,00 6,00
Total 90 7,3333 2,72318 0,28705 6,00 15,00
Tabla 9. Pruebas no paramétricas de Kruskal Wallis Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans Fuente: Ing. Jaime Molina
Gráfico 3. Comparación entre sustancias Aggregatibacter Actinomycetemcomitans Fuente: Ing. Jaime Molina
6,00 6,00 6,00 6,73
13,27
6,00
PR
OP
OLE
O
ECU
ATO
RIA
NO
1
0%
PR
OP
OLE
O
ECU
ATO
RIA
NO
2
0%
PR
OP
OLE
O
ECU
ATO
RIA
NO
3
0%
PR
OP
OLE
O
ECU
ATO
RIA
NO
1
00
%
CLO
RH
EXID
INA
0
,12
%
SUER
O
FISI
OLÓ
GIC
O
Comparación entre sustanciasAGGREGATIBACTER
ACTINOMYCETEMCOMITANS
60
En la gráfica se observa que las medias de PROPOLEO ECUATORIANO 10%,
PROPOLEO ECUATORIANO 20%, PROPOLEO ECUATORIANO 30% y SUERO
FISIOLÓGICO tienen un valor de 6 mm, los mayores valores tiene la CLORHEXIDINA
0,12% con un valor de 13,27 mm y en el intermedio está el PROPOLEO
ECUATORIANO 100% con un valor de 6,73 mm. Para determinar si se tienen una
diferencia significativa se realiza la prueba de Kruskal Wallis.
Gráfico 4. Prueba de Kruskal Wallis para muestras independientes
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la Prueba de Kruskal-Wallis, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba
bilateral) = 0,000) es inferior a 0,05 (95% de confiabilidad), luego se acepta Ha, esto es,
existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las medias
de las muestras son similares.
61
Para determinar cuáles son similares o diferentes se hace la prueba dos a dos:
Tabla 10. Prueba dos a dos Aggregatibacter Actinomycetemcomitans
Fuente: Ing. Jaime Molina
62
De la prueba dos a dos son similares entre: PROPOLEO ECUATORIANO 10%
con el PROPOLEO ECUATORIANO 20%, con el PROPOLEO ECUATORIANO
30% y con el SUERO FISIOLÓGICO.
No son similares entre la CLORHEXIDINA 0,12% y todas las diversas
concentraciones del PROPOLEO ECUATORIANO.
No son similares entre el PROPOLEO ECUATORIANO 100% y las otras diversas
concentraciones del PROPOLEO ECUATORIANO.
63
8 DISCUSIÓN
El propóleo ha sido estudiado por años, y en la actualidad nuevas investigaciones han
salido a flote, debido a que se trata de un producto natural, fabricado por abejas, rico en
propiedades curativas, que nos vendrían bien en el momento de tratar pacientes con
enfermedad periodontal, estudios hechos anteriormente han demostrado su eficacia como
antimicrobiano de amplio espectro tanto con bacterias gram positivas como con bacterias
gram negativas, la composición química de este, depende mucho de varios factores como
lo es el clima, la flora local de la región donde es recogido, entre otras, es por eso que la
composición química del propóleo entre un País y otro varia.
Motivo por el cuál el presente estudio tuvo como finalidad estudiar el efecto inhibitorio
del extracto etanólico de propóleo Ecuatoriano a diferentes concentraciones frente a
cepas de Aggregatibacter Actinomycetemcomitans y Porphyromona Gingivalis,
comparándolo con la clorhexidina al 0,12% que hasta el momento se mantiene como
Gold Estándar, con el objetivo de que el propóleo pueda ser utilizado como una alternativa
terapéutica natural. Los resultados del presente estudio reflejaron que la solución
etanólica de propóleo Ecuatoriano, tal cual como la obtuvimos en la tienda naturista, cual
preparado contiene 0,2mg de propóleo en 30ml de alcohol, que consideramos para este
estudio como concentración al 100%, inhibió a ambas bacterias en una media de 7mm, la
cual se considera como sensibilidad nula, según el aromatograma de Duraffourd, siendo
totalmente nulas en concentraciones menores, mientras que la clorhexidina al 0,12%
sigue causando alta sensibilidad en ambas bacterias.
Garima, Gayathri y Dhoom 2012 (2) evaluaron por medio de un estudio in vitro, la
composición química y la eficacia del extracto etanólico de propóleo Chino en
Porphyromonas gingivalis y Aggregatibacter Actinomycetemcomitans, obteniendo halos
de inhibición de 18 a 25mm para Pg y de 12 a 14mm para Aa, resultados que demuestran
la sensibilidad de ambas bacterias ante este producto, a diferencia del presente estudio en
el cuál los halos de inhibición fueron menores para ambas bacterias, dicho resultado
podría tener explicación ya que, en el estudio realizado por Garima y colaboradores,
obtuvieron propóleo en polvo de; selvas Ecuatorianas Amazónicas, New Jersey, USA,
predominando en las dos primeras un clima húmedo- tropical, si consideramos que la
64
composición química del propóleo varía según la flora local de la región, época de
recolección etc, al ser recogido de Países diferentes, podría haber influenciado en el
resultado, ya que en estudios elaborados por Seidel y Colaboradores 2008 (44), el cuál
llevaron a cabo recolectando propóleos de una amplia gama de Países dentro de las zonas
tropicales, subtropicales y templadas, demostrando en sus resultados que los propóleos
obtenidos de lugares caracterizados por un clima húmedo- tropical son los que tienen un
alto potencial antimicrobiano, esto se debe a que en estos lugares predomina una
vegetación rica en flavonoides (ácido cafeico, Luteonina, quercetina etc) que son los que
le dan la propiedad antimicrobiana al propóleo según estudios realizados por Mc
Marcucci 1995 (46), Ortega y Colaboradores 2011 (45), a diferencia de nuestro propóleo
que fue recolectado en un lugar de clima templado, por otro lado, en cuanto a la parte
experimental, Garima y colaboradores utilizaron cajas Petri con agar para inocular las
bacterias, coincidiendo en esta forma con nuestro estudio, pero distinguiéndose en la
forma en la cual se aplicó el extracto etanólico de propóleo, siendo colocados 100ul de
solución etanólica de propóleo en pocillos de 8mm en agar solidificado en el estudio de
Garima y colaboradores, y 0,20ul de solución etanólica de propóleo Ecuatoriano
impregnados en discos de papel para el presente estudio.
Sonmez y Colaboradores 2005 (46), investigaron las propiedades antimicrobianas de seis
polvos de propóleo de Países diferentes utilizando alcohol como disolvente, frente a
patógenos orales como Porphyromonas Gingivalis, Prevotella Intermedia,
Campylobacter Rectus y Fusobacterium Nucleatum, dos de ellas pertenecientes al
complejo naranja de periodonto patógenos, se cree que este complejo es el puente entre
los colonizadores iniciales y las especies del complejo rojo al cual pertenece
Porphyromonas Gingivalis que dominan en etapas tardías, teniendo un gran efecto
inhibitorio para bacterias periodonto patógenas el propóleo de USA, pero siendo
citotóxico para fibroblastos por la alta concentración; de igual manera Bruschi y
colaboradores 2006 (47) determinaron el efecto antimicrobiano de Propóleo, utilizando
como método de preparación macropartículas de gelatina que contenían propulsión
etanólica de propóleo, mediante una técnica de secado por pulverización frente a
diferentes microorganismos de importancia oral, mostrando una mayor actividad contra
cepas de E. salivarius, S. sanguinis, S. mitis y C. albicans, siendo algunos de ellos los que
están presentes en el complejo amarillo de periodonto patógenos que colonizan la
65
superficie dentaria y proliferan en estadios tempranos, a pesar de utilizar métodos
totalmente distintos al de nuestro estudio, coincidimos en el objetivo de demostrar el
efecto antimicrobiano frente a bacterias patógenas orales, tal y como ha sido reportado
anteriormente en estudios in vitro elaborados años atrás como son Ghisalberti, 1979;
Vanhaelen y Vanhaelen 1979; Pepeljnjak y otros,1981, 1982; Pápay y otros, 1985b;
Kawai y Konishi,1987; Toth y Papay, 1987; Okonenko, 1988; Petri y otros, 1988;
Rosenthal y otros,1989; Brumfitt y otros, 1990; Cuéllar y otros,1990; Soboleva y otros,
1990; Dimov et al,1991; Dobrowolski y otros, 1991; Kujumgiev y col., 1993; Ventura
Coll y otros, 1993; Langoni y col., 1994; Woisky y otros, 1994) mencionados en el
artículo publicado por Mc Marcucci en 1995 (46) y como se sigue demostrando hasta la
actualidad, obteniendo buenos resultados, pero por otro lado coincidiendo en el hecho de
que se deben realizar más investigaciones para determinar la concentración exacta de
solución de propóleo que se debería utilizar como fin terapéutico.
66
9 CONCLUSIONES
Al culminar el presente estudio se concluye que
La concentración de extracto etanólico de propóleo Ecuatoriano al 10%, no
presento efecto inhibitorio frente a las cepas Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis, demostrándolo al no
formar halos de inhibición en ninguna de las repeticiones.
La concentración de extracto etanólico de propóleo Ecuatoriano al 20%, no
presento efecto inhibitorio frente a las cepas Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis, demostrándolo al no
formar halos de inhibición en ninguna de las repeticiones.
La concentración de extracto etanólico de propóleo Ecuatoriano al 30%, no
presento efecto inhibitorio frente a las cepas Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivalis, demostrándolo al no
formar halos de inhibición en ninguna de las repeticiones
La concentración de extracto etanólico de propóleo Ecuatoriano al 100% frente a
Porphyromonas Gingivalis tuvo un ligero efecto inhibitorio con un promedio de
7,07 y de 6,73 para Aggregatibacter Actinomycetemcomitans, que guiándonos
con el aromatograma de Duraffourd se considera sensibilidad nula para ambas
bacterias.
Al comparar el efecto inhibitorio del extracto etanólico de propóleo Ecuatoriano
en cualquiera de las concentraciones estudiadas, frente a clorhexidina al 0,12,
ante esta última los microorganismos presentaron mayor sensibilidad.
67
10 RECOMENDACIONES
Gracias a los resultados obtenidos en el estudio se recomienda lo siguiente
Se recomienda hacer uso de este estudio para investigaciones futuras
Ya que la composición del propóleo nunca es igual, por factores como; la flora
local de la región donde es recolectado. Se recomienda para investigaciones
futuras utilizar propóleo Ecuatoriano que provenga de provincias con clima
subtropical, ya que varios estudios han revelado que la calidad del propóleo es
mucho mejor si es recolectado en lugares con dicho clima.
Se recomienda utilizar el extracto etanólico de propóleo Ecuatoriano frente a otras
bacterias periodonto patógenas.
Aprovechando que se trata de un producto natural, sin efectos adversos. Se
recomienda hacer estudios “in vivo” utilizando el extracto etanólico de propóleo
Ecuatoriano, en tratamientos periodontales, para de esta manera poder comprobar,
los beneficios que elogian en la literatura a este producto, y observar los cambios
que produce en los tejidos que conforman el periodonto de personas
periodontalmente enfermas.
Se recomienda para estudios futuros utilizar el propóleo en sus otras
presentaciones como cápsulas, pastillas, jarabe, etc.
68
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73
ANEXOS
ANEXO 1: Aceptación de Tutoría
74
ANEXO 2: Solicitud de Aceptación de tema
75
ANEXO 3 : Solicitud a Coordinación de Biblioteca
76
ANEXO 4: Solicitud a la Decana de la Facultad de Ciencias Quimicas
77
ANEXO 5: Factura de Cepa Aggregatibacter Actinomycetemcomitans
78
ANEXO 6
79
ANEXO 7: Factura de cepa Porphyromonas Gingivalis
80
ANEXO 8
81
ANEXO 9: Certificado de Instrumental Esterilizado
82
ANEXO 10: Especificaciones para activación de cepa por MEDIBAC
83
ANEXO 11: Método de Activación de la bacteria pura
84
ANEXO 12: Certificado de haber realizado el estudio en la Facultad de
Ciencias Químicas
85
ANEXO 13: Protocolo de Manejo de Desechos Infeccioso
86
ANEXO 14: Autorización de Uso de Instalaciones
87
ANEXO 15: Certificado de Aprobación del SEISH-UCE
88
ANEXO 16: Certificado de Resultados Aggregatibacter
Actinomycetemcomitans
89
ANEXO 17: Certificado de Resultados Porphyromonas Gingivalis
90
ANEXO 18: Carta de Renuncia del Trabajo Estadístico
91
ANEXO 19: Certificado de Traducción- Abstract
92
ANEXO 20: Certificado Antiplagio- Urkund
93
94