universidad central del ecuador facultad de … · 2018. 10. 11. · i universidad central del...

i

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE ODONTOLOGIA

CARRERA DE ODONTOLOGIA

"Estudio comparativo del Efecto Antibacteriano del peróxido de hidrógeno al 3.18%,

hipoclorito de sodio al 1.85% y ácido hipocloroso en concentraciones de 125ppm y

500ppm contra cepas de Staphylococcus aureus y Streptococcus mutans, estudio in-vitro."

Trabajo teórico de titulación previo a la obtención del título de Odontólogo General

Autor: Paredes Vinueza Erick Mauricio

Tutor: Dr. Marcio Alejandro Farfán Chacha

Quito, Octubre 2018

ii

DERECHOS DE AUTOR

Yo ERICK MAURICIO PAREDES VINUEZA en calidad de autor del trabajo de

investigación “ESTUDIO COMPARATIVO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DEL

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO AL 3.18%, HIPOCLORITO DE SODIO AL 1.85% Y

ACIDO HIPOCLOROSO EN CONCENTRACIONES DE 125PPM Y 500PPM

CONTRA CEPAS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS Y STREPTOCOCCUS

MUTANS, ESTUDIO IN-VITRO.”, autorizo a la Universidad Central del Ecuador a hacer el

uso del contenido total o parcial que me pertenece, con fines estrictamente académicos o de

investigación.

Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente autorización,

seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido con los artículos 5, 6, 8, 19 y

demás pertenecientes a la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.

También, autorizo a la Universidad Central del Ecuador realizar la digitalización y publicación

de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad a lo dispuesto en el

Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.

.....................................................

ERICK MAURICIO PAREDES VINUEZA

1003502778

iii

APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN

Yo, Dr. Marcio Alejandro Farfán Chacha, en mi calidad de tutor del trabajo de titulación,

modalidad Proyecto de Investigación, elaborado por ERICK MAURICIO PAREDES

VINUEZA , cuyo título es: “ESTUDIO COMPARATIVO DEL EFECTO

ANTIBACTERIANO DEL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO AL 3.18%, HIPOCLORITO

DE SODIO AL 1.85% Y ÁCIDO HIPOCLOROSO EN CONCENTRACIONES DE

125PPM Y 500PPM CONTRA CEPAS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS Y

STREPTOCOCCUS MUTANS, ESTUDIO IN-VITRO”, previo a la obtención de grado de

Odontólogo, considero que el mismo reúne los requisitos y méritos necesarios en el campo

metodológico y epistemológico, para ser sometido a la evaluación por parte del tribunal

examinador que se designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo investigativo sea

habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por la Universidad Central

del Ecuador.

En la ciudad de Quito, 04 de Marzo del 2018.

DR. ALEJANDRO FARFÁN

DOCENTE-TUTOR

17005354224

iv

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL

El Tribunal constituido por la Dra. Alicia Freire y la Dra. María Fernanda Caicedo. Luego de

receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del título de

Odontólogo presentado por el señor ERICK MAURICIO PAREDES VINUEZA.

Con el título: “ESTUDIO COMPARATIVO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DEL

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO AL 3.18%, HIPOCLORITO DE SODIO AL 1.85% Y

ACIDO HIPOCLOROSO EN CONCENTRACIONES DE 125PPM Y 500PPM

CONTRA CEPAS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS Y STREPTOCOCCUS

MUTANS, ESTUDIO IN-VITRO”

Emite el siguiente veredicto:

Fecha:

Para constancia de lo actuado firman

Nombre Apellido Calificación Firma

Presidente. Dra. Alicia Freire ............................................……………. …………….

Vocal. Dra. Fernanda Caicedo ……………. …………….......................................

v

Dedicatoria

Tu amor, tu cariño y tu ternura son y serán siempre lo más preciado que Dios pudo darme en

mi vida, tenerte conmigo es la mayor felicidad y es la fuerza que necesito para seguir adelante,

dedico mi trabajo de tesis a mi amada hija Ericka Valentina quien es y será siempre mi fuente

de inspiración y a mi hermosa novia y futura esposa por haber estado siempre apoyándome y

enseñándome que la vida es hermosa cuando estas con las personas que amas.

A mis padres Mauricio y Sandra quienes siempre han sido mi apoyo, mi ejemplo a seguir a lo

largo de mi carrera universitaria y quienes serán siempre mis seres más amados, los que con su

paciencia y su generosidad siempre me han enseñado a ser una persona de bien y por quienes

en este momento estoy culminando mi etapa universitaria.

A mis hermanos con los cuales he compartido mi vida entera y agradezco todos los momentos

felices y tristes que he compartido con ellos los cuales me apoyaron y ayudaron a lo largo de

mi etapa de estudio.

Gracias a toda mi familia mis abuelos, tías, tíos, primos por estar al pendiente de mi cuando lo

necesitaba.

El objetivo logrado también es parte de toda mi familia amigos, compañeros los cuales han

estado siempre pendientes de mi sin recibir nada a cambio.

Gracias a todos.

vi

AGRADECIMIENTOS

Dios, siempre pendiente de mi y de mi familia dándome salud, bondad y generosidad, siempre

ayudándome a seguir adelante y enseñándome cada día más lo hermosa que es la vida.

Muchas gracias a mi tutor Dr. Alejandro farfán por ser mi maestro, gran amigo y un grandioso

ser humano, ayudándome y guiándome para poder obtener conocimiento y por la paciencia en

esta etapa universitaria.

Agradezco a la Universidad Central del Ecuador, Facultad de Odontología por abrirme las

puertas a esta prestigiosa institución y ayudarme en mi profesión

Muchas gracias a mis maestros, compañeros y amigos por guiarme durante toda mi vida

universitaria .

Realmente gracias a todos y cada uno que con un granito de arena aparecieron en mi vida para

ayudarme con un consejo o simplemente por darme una palabra de aliento en los momentos de

flaqueza.

vii

INDICE

DERECHOS DE AUTOR ......................................................................................................... ii

APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN ...................................... iii

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL ............................................. iv

Dedicatoria .................................................................................................................................. v

AGRADECIMIENTOS ............................................................................................................. vi

LISTA DE TABLAS .................................................................................................................. xi

GRAFICOS .............................................................................................................................. xii

RESUMEN ............................................................................................................................... xiv

1. CAPITULO 1 .................................................................................................................. 1

1.1 Introducción .......................................................................................................................... 1

1.2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................................ 2

1.2.1 FORMULACION DEL PROBLEMA .............................................................................. 2

1.3 JUSTIFICACIÓN ................................................................................................................ 3

1.4 OBJETIVOS ......................................................................................................................... 4

1.4.1 General ........................................................................................................................... 4

1.4.2 Específicos. ..................................................................................................................... 4

1.5 HIPOTESIS .......................................................................................................................... 5

1.5.1 Hipótesis de investigación( H1) .................................................................................... 5

1.5.2 Hipótesis Nula (H0) ....................................................................................................... 5

2. CAPITULO 2 .......................................................................................................................... 6

MARCO TEORICO .................................................................................................................... 6

2.1 MICROBIOLOGÍA ......................................................................................................... 6

2.1.1 MICROBIOLOGÍA ORAL ......................................................................................... 6

viii

2.1.2 FLORA MICROBIANA ORAL .................................................................................. 7

2.2 MEDIOS DE CULTIVO ................................................................................................. 7

2.3 GENERO STREPTOCOCCUS ............................................................................................ 8

2.3.1 Clasificación según manifestaciones clínicas en general ........................................... 8

2.3.2Streptococcus mutans ......................................................................................................... 9

2.3.3 Transmisión, colonización y estabilidad de Streptococcus mutans en cavidad oral ....... 9

2.4 STAPHYLOCOCCUS ........................................................................................................ 10

2.4.1 Género Staphylococcus ................................................................................................... 10

2.4.2 Metabolismo ..................................................................................................................... 11

2.4.3 Staphylococcus aureus .................................................................................................... 11

2.4.4 Staphylococcus aureus en cavidad oral .......................................................................... 12

2.4.5 Factores predisponentes del huésped .............................................................................. 13

2.5 ANTISEPTICOS: ............................................................................................................... 14

2.5.1 PERÓXIDO DE HIDRÓGENO ..................................................................................... 15

2.5.1.1 Mecanismo de acción ............................................................................................... 15

2.5.2 HIPOCLORITO DE SODIO ........................................................................................... 15

2.5.2.1 MECANISMO ANTIBACTERIANO DEL NaOCl ..................................................... 16

2.5.3 ACIDO HIPOCLOROSO ................................................................................................ 16

2.5.3.1 Obtención. ................................................................................................................. 17

2.5.3.2 Efecto Antimicrobiano ............................................................................................ 18

2.5.3.3 Usos en odontología ................................................................................................. 18

3. CAPITULO 3 ........................................................................................................................ 19

3.1 METODOLOGÍA: .............................................................................................................. 19

3.1.1 TIPO DE ESTUDIO ................................................................................................... 19

ix

3.1.2 POBLACION Y MUESTRA ........................................................................................... 19

3.1.3 MUESTREO .................................................................................................................... 19

3.1.4 CRITERIOS DE INCLUSIÓN .................................................................................. 20

3.1.5 CRITERIOS DE EXCLUSIÓN ................................................................................. 20

3.1.6 CONCEPTUALIZACION DE LAS VARIABLES ......................................................... 21

3.1.6.1 VARIABLE DEPENDIENTE: ............................................................................... 21

3.1.6.2 VARIABLES INDEPENDIENTES: ...................................................................... 21

3.1.7 OPERACIONALIZACION DE LAS VARIABLES ....................................................... 21

3.1.8 ASPECTOS BIOETICOS ............................................................................................... 25

3.1.8.1 Beneficencia .............................................................................................................. 25

3.1.8.2 Beneficios potenciales del estudio directo. ............................................................. 25

3.1.8.3 Riesgo potencial del estudio. ................................................................................... 25

3.1.8.4 Declaración de conflicto de intereses...................................................................... 26

3.1.8.5 Confidencialidad ...................................................................................................... 26

3.1.9 METODO DE RECOLECCION DE LA INFORMACION: ......................................... 27

PROTOCOLO ..................................................................................................................... 27

3.1.10 ANALISIS ESTADISTICO. .......................................................................................... 38

4. CAPITULO 4 ........................................................................................................................ 39

4.1 RESULTADOS ................................................................................................................... 39

Prueba de Normalidad .............................................................................................................. 39

Streptococcus mutans ............................................................................................................... 39

Staphylococcus aureus ............................................................................................................. 40

Streptococcus mutans: Comparación entre sustancias (24 Horas y 48 Horas) ..................... 41

24 HORAS ................................................................................................................................. 44

x

48 HORAS ................................................................................................................................. 47

Staphylococcus aureus: Comparación entre sustancias (24 Horas y 48 Horas) ................... 49

24 HORAS ................................................................................................................................. 52

48 HORAS ................................................................................................................................. 55

5. CAPITULO 5 ................................................................................................................... 58

5.1 Discusión. ........................................................................................................................ 58

6. CAPITULO 6 ........................................................................................................................ 60

6.1 CONCLUSIONES .............................................................................................................. 60

6.2 RECOMENDACIONES. .................................................................................................... 61

7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ................................................................................ 62

8. ORGANIZACION Y PLANIFICACION DE LA INVESTIGACION ............................... 67

8.1 Presupuesto ......................................................................................................................... 67

8.2 Cronograma ........................................................................................................................ 68

9. ANEXOS ............................................................................................................................... 69

xi

LISTA DE TABLAS

Tabla 1 Pruebas de Normalidad Streptococcus mutans..................................................39 y 40

Tabla 2 Pruebas de normalidad Staphylococcus aureus..................................................40 y 41

Tabla 3 Comparacion entre sustancias Streptococcus mutans.........................................42 y 43

Tabla 3 Prueba Kruskall Wallis 24horas Streptococcus mutans......................................44

Tabla 5 Comparación de sustancias por pareja..................................................................45

Tabla 6 Kruskall Wallis 48 horas Streptococcus mutans..................................................47

Tabla 7 Comparación de sustancias por pareja...................................................................48

Tabla 8 Comparación entre sustancias 24 y 48 horas Staphylococcus aureus.................49 y 51

Tabla 9 Kruskall Wallis 24 horas Staphylococcus aureus..................................................52

Tabla 10 Comparación entre sustancias..............................................................................53

Tabla 11 Kruskall Wallis 48 horas Staphylococcus aureus...............................................55

Tabla 12 Comparación entre sustancias.............................................................................57

xii

GRAFICOS

IMAGEN 1 Y 2 Materiales organizados en la cámara de flujo laminar y microorganismos

listos para la siembra.................................................................................................................27

IMAGEN 3 Y 4 Cajas petri con agar sangre listas para el cultivo ...........................................28

IMAGEN 5,6 Y 7 Siembra de microorganismos en tubo de ensayo con la prueba de turbidez

Mc Farland e inoculación de microorganismos........................................................................29

IMAGEN 8 Y 9 Siembra con técnica de hisopado...................................................................30

IMAGEN 10 Y 11Preparación de los discos para colocación en cajas petri...........................31

IMAGEN 12 Y 13 Materiales listos para la colocación de discos empapados con las sustancias

a investigar.................................................................................................................................32

IMAGEN 14,15,16,17 Y 18 Colocación de sustancias en los discos de inhibición..................33

IMAGEN 19 Y 20 Colocación de los discos en cajas petri.......................................................34

IMAGEN 21 Discos de inhibición colocados en las cajas

petri............................................................................................................................................35

IMAGEN 22,23 Y 24 Colocación de cajas en la jarra de anaerobiosis, incubación de los

cultivos con los discos de inhibición colocados a 38°c.......................................................36- 37

IMAGEN 25,26 Y 27Medicion de los halos de inhibición..................................................38-39

IMAGEN 28 Observación de los halos con utilización de luz..................................................40

xiii

LISTA DE ANEXOS.

ANEXO 1 Solicitud dirigida al Coordinador de Titulación de la Facultad de Odontología de la

Universidad Central del Ecuador.........................................................................................................69

ANEXO 2 Solicitud de aceptación de tutoría de tesis dirigida al Dr. Alejandro Farfán.........................70

ANEXO 3 Solicitud de aceptación del tema de tesis............................................................................71

ANEXO 4Declaracion de conflictos de interés.................................................................................72-73

ANEXO 5 Declaración de derecho de autor...........................................................................................74

ANEXO 6 Carta de confidencialidad.......................................................................................................75

ANEXO 7 Solicitud dirigida a la decana de la Facultad de Ciencias Químicas para uso de

laboratorios............................................................................................................................................76

ANEXO 8 Certificado de uso de laboratorio y pruebas bacteriológicas en la Facultad de Ciencias

Químicas.................................................................................................................................................77

ANEXO 9 Certificado de Uso de materiales utilizados en el laboratorio................................................78

ANEXO 10 Autorización de uso de instalaciones de deposito de materiales infecciosos......................79

ANEXO 11 Certificado de Protocolo de desechos infecciosos utilizados en el trabajo de

investigación...........................................................................................................................................80

ANEXO 12 Resultados obtenidos en la investigación in vitro.................................................................81

ANEXO 13 Certificado y Factura de compra de cepas bacterianas Streptococcus Mutans(ATCC25175) y

Staphylococcus aureus (ATCC6538P).....................................................................................................82

ANEXO 16. Abstract-traduccion de

resumen.................................................................................................................................................83

ANEXO 17 Repositorio

Digital................................................................................................................................................84-85

xiv

TEMA: "ESTUDIO COMPARATIVO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DEL PERÓXIDO

DE HIDROGENO AL 3.18%, HIPOCLORITO DE SODIO AL 1.85% Y ACIDO

HIPOCLOROSO EN CONCENTRACIONES DE 125PPM Y 500PPM CONTRA CEPAS DE

STAPHYLOCOCCUS AUREUS Y STREPTOCOCCUS MUTANS, ESTUDIO IN-VITRO."

Autor: Erick Mauricio Paredes Vinueza

Tutor: Marcio Alejandro Farfán Chacha

RESUMEN

La presente investigación in- vitro tuvo como objetivos el análisis comparativo entre 3

sustancias antisépticas como son: ácido hipocloroso en concentraciones de 125ppm y

500pppm, hipoclorito de sodio al 1,85% y peróxido de hidrógeno al 3,18% frente a

microorganismos Streptococcus mutans y Staphylococcus aureus. Método: Estudio

experimental in vitro, se procedió con la activación de las cepas microbianas las cuales se

encontraron en un medio apropiado de refrigeración a 5ºc, posteriormente en una cámara de

flujo laminar se realizó cultivos de agar sangre mediante la técnica de hisopado formando

estrías perpendicularmente, se realizaron 10 cajas petri 5 cultivos de Streptococcus mutans y 5

cultivos de Staphylococcus aureus y se colocaron las sustancias antisépticas con micropipeta

en los discos de inhibición y colocaron en cada cultivo, para la incubación se introdujo las

placas en la jarra de anaerobiosis junto a una vela, se incubaron de 35 a 37ºC por 24, 48 y 72

horas, con ayuda de una regla se procedió a la medición de los halos de inhibición y los datos

obtenidos del análisis microbiológico se organizaron en una hoja de registro. Resultados: Se

utilizó la prueba de Kolmogórov- Smirnov para comprobar si las muestras son paramétricas,

posteriormente se realizó Kruskal Wallis. dando como resultado dos grupos, uno con valores

bajos como son el peróxido de hidrógeno al 3,18%, agua destilada y ácido hipocloroso en

concentración de 125ppm y uno con valores realmente altos como hipoclorito de sodio al

1,85% y ácido hipocloroso en concentración de 500ppm. Conclusión: El ácido hipocloroso en

concentración de 500ppm es la sustancia con mayor capacidad antiséptica frente a todas las

sustancias analizadas peróxido de hidrógeno al 3,18%, ácido hipocloroso en concentración de

125ppm e incluso mayor al hipoclorito de Sodio al 1,85%.Palabras clave:

Antisépticas/Bacterias/Staphylococcus/Streptococcus/Halos de inhibición/Cultivos/Efecto

antibacteriano/Anaerobiosis

xv

TOPIC: "COMPARATIVE STUDY OF THE ANTIBACTERIAL EFFECT OF

HYDROGEN PEROXIDE AT 3.18%, SODIUM HYPOCHLORITE AT 1.85% AND

HIPOCLOROUS ACID IN CONCENTRATIONS OF 125PPM AND 500PPM

AGAINST STAPYLOCOCCUS AUREUS AND STREPTOCOCCUS MUTANS,

STUDIES IN-VITRO."

Author: Erick Mauricio Paredes Vinueza

Supervising Professor: Marcio Alejandro Farfán Chacha

ABSTRACT

The present in vitro research has as objectives the comparative analysis between 3 antiseptic

substances such as: Hypochlorous acid in concentrations of 125ppm and 500pppm, Sodium

hypochlorite at 1.85% and Hydrogen peroxide at 3.18% against microorganisms Streptococcus

mutans and Staphylococcus aureus. Method: Experimental study in vitro, proceeding with the

activation of microbial strains which were found in an appropriate refrigeration medium at 5ºc,

then blood agar cultures were performed using the Hysstop technique, forming striations

perpendicularly, 10 petri dishes were made 5 cultures of Streptococcus Mutans and 5 cultures

of Staphylococcus Aureus and the antiseptic substances are placed with micro pipette in the

inhibition discs and placed in each culture, for the incubation the plates are introduced in the

jar for anaerobiosis next to a candle, they are incubated from 35 to 37ºC for 24, 48 and 72

hours, with the help of a rule, the inhibition zones were measured and the data obtained from

the microbiological analysis were organized in a record sheet. Results: The Kolmogórov-

Smirnov test was used to check if the samples are for metrics, then Kruskal Wallis was

performed. resulting in two groups, one with low values such as 3.18% Hydrogen Peroxide,

Distilled Water and Hypochlorous Acid in concentration of 125 ppm and one with really high

values such as 1.85% Sodium Hypochlorite and Hypochlorous Acid in 500ppm concentration.

Conclusion:Hypochlorous acid in a concentration of 500 ppm is the substance with the

highest antiseptic capacity compared to all the substances analyzed. 3.18% Hydrogen

Peroxide, Hypochlorous Acid at a concentration of 125 ppm and even higher than 1.85%

Sodium Hypochlorite.

Key words: Antiseptics / Bacteria / Sthaphylococcus / Streptococcus / Inhibition Halos / Crops

/ Antibacterial effect / Anaerobiosis

1

1. CAPITULO 1

1.1 Introducción

Según Palmer(1) la cavidad oral provee un microambiente ideal para el crecimiento de

múltiples especies bacterianas. Dentro de la flora oral se pueden encontrar especies residentes

que componen la flora normal así como bacterias transeúntes y otras asociadas a enfermedad.

La placa dental es uno de los tipos de biofilm o biopelícula más estudiados y es la forma de

crecimiento más frecuente de las bacterias de la cavidad oral.

Para mejorar su reducción y de la inflamación gingival según Slots(2) se han desarrollado

múltiples sustancias anti placa. Teniendo en cuenta que la flora normal mantiene en equilibrio

el ecosistema oral y reduce la posibilidad de infecciones por patógenos exógenos, se puede

decir que estos tratamientos deben apuntar a controlar más que a erradicar la placa dental .

Según Wang et al(9) en algunas circunstancias clínicas en odontología, se hace necesaria la

utilización de sustancias antimicrobianas de alta potencia. Los pacientes con enfermedades

periodontales severas y pacientes con alto riesgo de caries dental pueden requerir protocolos

de desinfección de cavidad oral.

La caries dental y la enfermedad periodontal constituyen las enfermedades orales de mayor

impacto poblacional en muchos países industrializados y en la mayoría de los países en

desarrollo y son consideradas enfermedades prevenibles mediante un correcto control de la

placa dental(2)

Según Laufarie et al (10)buscando una reducción más efectiva del biofilm dental, se han

desarrollado múltiples sustancias antimicrobianas para inhibir la formación de placa sobre las

superficies dentales. Sin embargo, los antisépticos a diferencia de los antibióticos, son

potencialmente tóxicos para agentes infecciosos y células del huésped, por lo tanto, su

aplicación en los seres humanos se limita a heridas infectadas, la piel y mucosas.

Evaluando las propiedades del ácido hipocloroso, este agente podría ser utilizado como

sustancia antimicrobiana en cavidad oral. (2)

2

1.2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Dentro de las enfermedades crónicas según Graciano(5)., las bucales son las más usuales; la

importancia de éstas en la Salud Pública se debe a la prevalencia, impacto individual y social;

y los costos para su tratamiento una vez establecido el problema. La etiología multifactorial de

esta enfermedad ha sido tema de diversas investigaciones que plantean que el desarrollo de

caries dental se debe, entre otras causas, a la presencia de microorganismos cariogénicos en la

cavidad bucal.

Mariani(3) expresa que a través de los años se han realizado investigaciones en cuanto a la

prevención de los males que afectan a la cavidad bucal, entre dichos males se menciona a la

caries dental puesto que se considera la enfermedad más frecuente en el hombre y a la vez un

proceso patológico que destruye las estructuras que conforman el diente, constituyendo un

problema de Salud Pública.

Aunque la importancia de los Staphylococcus como patógeno médico se ha reconocido por

muchos años Smith(4)expresa que la presencia de especies de Staphylococcus como un

componente de la flora oral es sorprendente, algunas infecciones en la región oral son

causadas, al menos en parte, por S. aureus

1.2.1 FORMULACION DEL PROBLEMA

Por tanto, ¿Es influyente en la prevención contra la actividad microbiana de Streptococcus

mutans y Staphylococcus aureus el uso de sustancias como: peróxido de hidrógeno,

hipoclorito de sodio y ácido Hipocloroso?

3

1.3 JUSTIFICACIÓN

A lo largo de los años se han buscado alternativas para prevenir las enfermedades que han

afectado a la cavidad bucal y de manera especial la caries dental, las mismas que no han

logrado reducir la caries en la población, puesto que una posible explicación se debe a la falta

de colaboración del paciente.

Según Bascones et al(6) debido al amplio problema de microorganismos patógenos en cavidad

oral, un estudio de los diferentes tipos de antisépticos de uso común en odontología los cuales

son utilizados para diferentes tratamientos, alterando su concentración podrían ser utilizados

como inhibidores de bacterias patógenas, el objetivo de esta investigación es analizar las

sustancias para poder tener idea de la capacidad inhibitoria de cada una de ellas y así entender

el uso que se podría dar en la actividad clínica y en la prevención de enfermedades buco-

dentales.

La resistencia a múltiples sustancias según Cabrera(7) hoy día es un problema de Salud Pública

que se viene observando a nivel mundial después de la aparición de los antibióticos, el uso

indiscriminado de los antibióticos y la presión selectiva ambiental realizada por antisépticos y

desinfectantes ha generado una respuesta de supervivencia en los microorganismos, que los

capacita para evadir con eficacia la acción bactericida de algunos de estos agentes químicos.

4

1.4 OBJETIVOS

1.4.1 General

Evaluar el efecto antimicrobiano de tres principios activos: peróxido de hidrógeno ,hipoclorito

de sodio y ácido hipocloroso utilizados como soluciones antisépticas sobre microorganismos

cepas atenuadas de Staphylococcus aureus y Streptococcus mutans

1.4.2 Específicos.

Analizar la capacidad de inhibición microbiana del Hipoclorito de sodio al 1.85%

contra cepas de Staphylococcus aureus ATCC6538 y Streptococcus mutans

ATCC25175 cultivados in Vitro.

Determinar el efecto antimicrobiano del peróxido de hidrógeno al 3,18%contra

microorganismos Staphylococcus aureus y Streptococcus mutans

Evaluar el efecto antimicrobiano del ácido hipocloroso en concentraciones de 125ppm

y 500ppm contra microorganismos Staphylococcus aureus y Streptococcus mutans

Comparar el efecto antimicrobiano de peróxido de hidrógeno, hipoclorito de sodio y

ácido hipocloroso como antisépticos de uso común en odontología.

5

1.5 HIPOTESIS

1.5.1 Hipótesis de investigación( H1)

Los principios activos de sustancias de uso común en Odontología: Peróxido de hidrógeno

,hipoclorito de sodio y Ácido Hipocloroso tienen efecto antimicrobiano y antiséptico ante

Staphylococcus aureus (ATCC6538) y Streptococcus mutans (ATCC25175)

1.5.2 Hipótesis Nula (H0)

Los principios activos de sustancias de uso común en Odontología: Peróxido de hidrógeno

,hipoclorito de sodio y Ácido Hipocloroso no tienen efecto antimicrobiano y antiséptico ante

Staphylococcus aureus (ATCC6538) y Streptococcus mutans (ATCC25175)

6

2. CAPITULO 2

MARCO TEORICO

2.1 MICROBIOLOGÍA

Según Sevillano(8)el objeto de estudio de la Microbiología está constituido por un gran y

diverso grupo de organismos microscópicos, que incluye tanto formas pluricelulares sin

diferenciación, como unicelulares e incluso formas a celulares. Todos ellos comparten una

organización biológica sencilla sin especialización tisular y un tamaño pequeño, que obliga el

uso del microscopio para su observación.

Liebana(26)enfatiza los métodos de aislamiento que se crearon en principio para trabajar con

bacterias y, posteriormente, han sido adaptados al estudio de otros microorganismos. La

necesidad de utilizar la técnica metodológica de los cultivos puros es una de las características

que mejor han definido a la Microbiología durante muchos años.

En la actualidad no siempre se utilizan cultivos puros para el estudio de los microorganismos,

bien porque el cultivo de algunos de ellos ha sido imposible de conseguir en condiciones de

laboratorio, bien porque su crecimiento es dependiente de una célula hospedadora. (26)

2.1.1 MICROBIOLOGÍA ORAL

El origen de la microbiología oral coincide con el descubrimiento de las bacterias, ya que

Leeuwenhoek observó en su saliva y en el material depositado en los dientes, que denominó

materia alba, los citados animáliculos. En lo que se refiere a los grandes procesos microbianos

de la cavidad bucal, los que afectan al periodonto, como la gingivitis y la periodontitis, en

1745 Pierre Fauchard relacionó lo que hoy se conoce como placa y el sarro o tártaro con la

aparición de estas afecciones. (8)

7

2.1.2 FLORA MICROBIANA ORAL

La micro flora oral según Ojeda et al(14) es un complejo ecosistema que contiene una amplia

variedad de especies microbianas. De no tomarse medidas de higiene oral, las superficies de

los dientes acumulan grandes masas microbianas, mientras que la descamación de células

epiteliales no permite la acumulación en las superficies de la mucosa oral.

Graciano(5) enfatiza que los estreptococos conforman el mayor número del total de la

población bacteriana en la placa dental. Muchos de los estreptococos pueden ser identificados

como una de las siguientes especies: S. mutans, S. sanguis, S. mitior, S. salivarius, y S. milleri.

Las especies más importantes en el humano son Streptococcus mutans y Streptococcus

sobrinus.

Los sitios anatómicos más estudiados para a investigación de Staphylococcus aureus según

Pinto(11.), son la mucosa nasal y piel, sin embargo la cavidad bucal es un potente reservorio de

dicha bacteria en distintas investigaciones se ha concluido que la colonización de S.aureus en

cavidad oral es común en los trabajadores de la salud y se puede tener riesgo de infecciones en

tratamientos como exodoncias y raspado y alisado radicular.

2.2 MEDIOS DE CULTIVO

El cultivo en agar sangre es considerado como el Gold estándar ya que permite realizar

recuentos bacterianos para establecer proporciones relativas, mediante métodos cuantitativos

en medios no selectivos. (27)

Actualmente hay 5 medios de cultivo diferentes para el aislamiento de Streptococcus mutans Y

Staphylococcus aureus. Según Ojeda et al(14). Estos son:

Agar Mitissalivarius con bacitracina (MSB),

Agar MitisSalivarius con bacitracina y kanamicina (MSKB)

Agar glucosa-sacarosa-teluritobacitracina (GSTB)

8

Agar Tripticasa de soya con sacarosa y bacitracina (TYS20B)

Agar triptona extracto de levadura cisteína con sacarosa y bacitracina (TYCSB).

El agar sangre es el medio más ampliamente usado para aislar S. mutans y otras especies

orales de estreptococos y Staphylococcus siendo de gran utilidad para identificar la población

de alto riesgo de caries dentales y su aplicación permitiría desarrollar programas de

prevención en salud oral en poblaciones específicas y vulnerables evitar procedimientos

extensos en el paciente(14).

2.3 GENERO STREPTOCOCCUS

Son Cocos gram positivos en cadenas o pares, son capnófilos (microorganismos cuyo

desarrollo se ve favorecido por la presencia de anhídrido carbónico "CO2")no tienen mayores

requerimientos nutricionales, no producen catalasa a diferencia de los Staphylococcus, algunos

poseen cápsula, la cual los permite serotipificar(5)

2.3.1 Clasificación según manifestaciones clínicas en general

Según Amaro J. (12).

• Streptococcus pyogenes: causante de Impétigo no buloso, amigdalitis, fiebre escarlata o

escarlatina.

• Streptococcus agalactiae: causante de infecciones urogenitales, aborto séptico, meningitis

neonatal.

• Streptococcus pneumoniae: principal agente causal de la neumonía adquirida en la

comunidad. Además es agente de otitis media y meningitis.

• Streptococcus grupo viridans: saprófito oportunista, causante de endocarditis y abscesos

dentales.

• Streptococcus mutans: frecuente causa de caries dentales

9

• Enterococcus faecalis: causante de infecciones urinarias, infecciones de heridas operatorias,

infecciones en diabéticos. (12)

2.3.2Streptococcus mutans

Se caracteriza por ser Gram positivo, anaerobio facultativo que forman parte de la placa

bacteriana, también se caracteriza por ser acidófilo, acidogénico y acidúrico, además tiene la

capacidad de generar polisacáridos extracelulares y por ende favorecer la adhesión del mismo

a las piezas dentales. (5)

Generalmente es conocido como patógeno dental e igualmente se considera que causa

bacteriemia y endocarditis infecciosa. En cuanto a la virulencia en sangre, estas cepas

sobreviven en la sangre por mayor tiempo debido a su baja antigenicidad. Otros estudios

revelan la participación de este serotipo en la patogénesis de enfermedades cardiovasculares,

en la cuales se ha detectado su alta frecuencia.(12)

Shafer(13) reconoció al Streptococcus mutans como la principal cepa altamente acidógena y

cariogénica dentro del grupo de los estreptococos, teniendo la capacidad de metabolizar

sacarosa dietética y de sintetizar glucano, por medio de la glucosiltransferasa superficial y

extracelular, de tal manera que esta enzima otorga al S. mutans su establecimiento en la placa

dental, el glucano se lo reconoce como un gel insoluble, viscoso que permite que la bacteria se

adhiera fuertemente en la superficie dental otorgando también protección contra la difusión de

amortiguadores salivales.

2.3.3 Transmisión, colonización y estabilidad de Streptococcus mutans en cavidad oral

La caries dental es una enfermedad dental transmisible en la cual los estreptococos del grupo

Streptococcus mutans juegan un papel principal. Como en muchas enfermedades infecciosas,

se requiere la colonización de un patógeno antes de que ocurra la infección. Hay un rango de

10

factores de virulencia importante para el establecimiento de Streptococcus mutans en la

compleja comunidad microbiana de la biopelícula dental. (3)

Una característica importante de Streptococcus mutans es la persistencia de sus genotipos en

la cavidad oral de adultos, adolescentes y niños mayores de cinco años. Este fenómeno es

conocido como persistencia y revela la relativa estabilidad que estos alcanzan en un

hospedador y la relación con la expresión de características fenotípicas que les pueden dar

ventajas para la supervivencia, como la capacidad de formar biopelícula, de adherirse y

soportar fluctuaciones del pH. (12)

Se ha considerado comúnmente que la colonización de la cavidad oral de los niños por S.

mutans ocurre al producirse la erupción del primer diente, es decir, alrededor de los seis meses

de edad, (14)

Se reconoce la diversidad genotípica de S..mutans en cuatro sitios de muestreo (saliva, dorso

de la lengua, mucosa alveolar y biopelícula dental), sin embargo, la biopelícula dental es un

lugar muy importante dado el gran número de genotipos de Streptococcus mutans y las cepas

aisladas. (12)

2.4 STAPHYLOCOCCUS

2.4.1 Género Staphylococcus

El nombre del género Staphylococcus se refiere a que las células de estos cocos se desarrollan

en un patrón que recuerda a un racimo uvas, sin embargo, los microorganismos presentes en

muestras clínicas aparecen como células aisladas, en pares o en cadenas cortas. Son

anaerobios facultativos. Estas bacterias están presentes en la piel y las mucosas del ser

humano. (4)

Los estafilococos conforman un importante grupo de patógenos en el ser humano y originan

un amplio espectro de enfermedades sistémicas que pueden poner en peligro la vida,

infecciones de la piel, los tejidos blandos, los huesos y el aparato genitourinario e infecciones

oportunistas en mucosa oral. (27)

11

En la comunidad, las infecciones por Staphylococcus aureus son a menudo agudas, piogénicas

y superficiales, aunque también puede producir, con menor frecuencia, infecciones profundas

como osteomielitis, neumonía y endocarditis aguda. (3)

2.4.2 Metabolismo

La forma de obtener energía es tanto a través de la fermentación como de la respiración

anaerobia. En cuanto a los requerimientos de cultivo, no son demasiado exigentes desde el

punto de vista nutricional, creciendo en medios pobres y simples. En su relación con el

oxígeno son aerobios-anaerobios facultativos.(12)

Es muy resistente a las condiciones ambientales normales. Es capaz de sobrevivir hasta tres

meses en un cultivo a temperatura ambiente. Muere expuesto a temperaturas mayores de 60 °C

por una hora. En cuanto a los agentes químicos, es sensible a la mayoría de los desinfectantes

y antisépticos, que lo matan en pocos minutos. (4)

2.4.3 Staphylococcus aureus

En los últimos años, la incidencia de bacteremia por Staphylococcus ha aumentado

significativamente, ya que una especie de esta familia bacteriana ha aumentado su frecuencia

de aparición; se trata de la especie Staphylococcus aureus, que se ha convertido en la principal

causa de infecciones en el torrente circulatorio (BSI) e intoxicaciones ocasionadas por

alimentos. (11)

Establece que la patogenicidad de las infecciones por Staphylococcus aureus se relaciona con

diversos componentes de la superficie bacteriana de manera general, los componentes del

microbio son peptidoglicanos y ácidos teicoicos, además de la proteína A. Así pues, la

patogenia provocada por este microorganismo surge cuando se produce la combinación de los

factores de virulencia con la disminución de las defensas del huésped .(8)

12

Estas condiciones según Socorro et al(43)propician que Staphylococcus aureus posea

características de virulencia y daño bastante particulares aunado a esto, la situación se ve

agravada debido a que el patógeno ha ido desarrollando múltiple resistencia contra los

antibióticos, propiciando que cada vez sea mucho más difícil el tratamiento y la curación de

las enfermedades ocasionadas por esta bacteria.

Sin embargo Bascones(6)enfatiza que el Staphylococcus aureus es importante no solo porque

ocasiona infecciones en diversas partes del organismo humano, sino porque es una de las

principales bacterias implicadas en enfermedades transmitidas por alimentos (ETA). Tales

enfermedades son causadas por diversas acciones, incluyendo la capacidad del patógeno de

producir toxinas, siendo esto relativamente común en determinados sectores de la población y

en algunas regiones geográficas desfavorecidas por la falta de sistemas de salud y de control

de infecciones adecuados.

2.4.4 Staphylococcus aureus en cavidad oral

Según Nicolosi(30) existe en traumas directos en los que pueda existir infección, se hallan

aquellos procesos odontológicos invasivos como las extracciones dentales, cirugías gingivales,

obturación de conductos, limpiezas dentales acompañadas de sangrado y cualquier otro tipo de

procedimientos dentales o quirúrgicos que impliquen ruptura de tejido y mucosas con paso de

microorganismos a sangre circulante y sin profilaxis previa al tratamiento.

Los sitios anatómicos más estudiados para a investigación de Staphylococcus aureus, son la

mucosa nasal y piel, sin embargo la cavidad bucal es un potente reservorio de dicha bacteria

en distintas investigaciones se ha concluido que la colonización en cavidad oral es común en

los trabajadores de la salud y se puede tener riesgo de infecciones en tratamientos como

exodoncias y raspado y alisado radicular. (11.)

Según Guidol(28)estudios realizados por diferentes entidades de salud, la infección por

Staphylococcus aureus se ha diseminado de forma epidémica en más de un 25% en cavidad

oral lo que dificulta su tratamiento.

13

La mortalidad actual relacionada con infecciones graves causadas por Staphylococcus aureus

junto al incremento en la incidencia de endocarditis que en general está en relación con el uso

creciente de catéteres y la realización de manipulaciones vasculares así como de procesos

dentales invasivos, se añade el hecho de que hasta hace poco no disponíamos de alternativas

terapéuticas a los antibióticos glucopéptidos, que han sido los fármacos de referencia para el

tratamiento de estas infecciones según Rea(29).

Es uno de los microorganismos que se aísla con mayor frecuencia en las infecciones

nosocomiales y odontológicas, presenta una patogenicidad variable que le permite causar

desde infecciones superficiales hasta infecciones con compromiso vital (endocarditis,

septicemias, meningitis). El Staphylococcus Aureus es la causa más común de endocarditis

infecciosa en zonas más desarrolladas y pueden formar biofilm sin necesidad de daño

endotelial es decir sin realizar intervención quirúrgica y causar heridas en mucosa oral.(29)

2.4.5 Factores predisponentes del huésped

Las infecciones causadas por Staphylococcus aureus, no solo dependen de los factores de

agresión que este microorganismo posee, sino también de alteraciones en los mecanismos de

defensa del huésped. (31)

Dentro de los factores pre disponentes del huésped tenemos según Rea(29):

• Defectos de quimiotaxis leucocitaria congénitos o adquiridos (diabetes mellitus, artritis

reumatoide).

• Defectos de opsonización por anticuerpos (hipogamaglobulinemia).

• Defectos en la muerte intracelular luego de la fagocitosis (enfermedad gránulo matosa

crónica). Heridas de piel (quemaduras, incisiones quirúrgicas, eczema).

• Presencia de cuerpos extraños (suturas, vías venosas, prótesis).

• Infecciones por otros agentes, particularmente virus (influenza).

14

• Enfermedades crónicas como alcoholismo, falla renal crónica, enfermedades malignas, etc.

(29)

2.4.6 Patogenia

S. aureus produce infecciones de dos maneras: En forma directa, por invasión y posterior

destrucción tisular local (proceso supurado), o luego de haberse diseminado por vía

sanguínea.(30)

Las Infecciones por acción de toxinas como infecciones causadas por la liberación al medio de

sustancias tóxicas, que pueden ejercer su acción a cierta distancia del foco infeccioso.(31)

2.5 ANTISEPTICOS:

El uso de antisépticos en Odontología tiene por objetivo según Romero(16):

• Eliminar la posibilidad de infección (cuando se usan para realizar los campos operatorios),

• Tratar infecciones (candidiasis, gingivitis ulceronecrotizante aguda)

• Contribuir a resolver posibles infecciones en heridas de forma más eficaz y segura posible

(utilizados para lavado de seno maxilar, cavidades quísticas, lechos quirúrgicos,

coadyuvantes en tratamiento de enfermedad periodontal).

Un antiséptico debe poseer algunas propiedades específicas para cumplir con su objetivo:

• Debe actuar rápidamente aún en presencia de exudados,

• Ser de eficacia prolongada,

• Tener tensión superficial baja,

• No ocasionar irritación ni dolor en el sitio de aplicación, no ser alergénico, A la vez, es

deseable que sea inodoro, que no manche o tiña las superficies donde se aplica y que tenga

sabor agradable (16)

15

2.5.1 PERÓXIDO DE HIDRÓGENO

Según Martínez l (15)actúa como antiséptico y desinfectante de uso externo de corta duración y

amplio espectro de acción, incluyendo gérmenes anaerobios. Se utiliza en solución acuosa del

3%-4% sobre piel, heridas y sobre la mucosa bucal como un agente de desbridamiento y

eliminando tejido muerto. (El desbridamiento se utiliza para limpiar el material muerto o

contaminado de una herida y auxiliar en la sanación)

En contacto con diversos catalizadores inorgánicos u orgánicos, tales como la enzima catalasa,

presente en todos los tejidos, se descompone oxígeno y producir efervescencia, por lo que su

mayor utilidad es para el desbridamiento de heridas.

Debido a la formación rápida de burbujas de oxígeno, el peróxido de hidrógeno produce

efectos mecánicos de limpieza de restos de tejidos y para despegar las curas y gasas de las

heridas. Sin embargo, en cavidades cerradas, existe peligro de provocar lesiones tisulares y de

producir embolia gaseosa. La acción del peróxido de hidrógeno se puede ver disminuida en

presencia de materia orgánica (proteínas, sangre, pus). Su acción es bastante corta por lo que

no se aconseja el empleo único del peróxido de hidrógeno como antiséptico.(15)

2.5.1.1 Mecanismo de acción

Reheimer(17) indicó que su acción bactericida se debe a dos motivos: a la producción de iones

hidroxilo y radicales libres, que actúan oxidando componentes esenciales del microorganismo

(lípidos, proteínas y DNA). Liberación de O2 por las catalasas tisulares, que actúa impidiendo

la germinación de esporas de anaerobios como Clostridium tetani. Además, el O2 liberado en

su descomposición en forma de burbujas favorece la eliminación de detritus celulares,

bacterias y tejidos desvitalizados. En el interior de la bacteria, por acción de la

mieloperoxidasa sobre los cloruros y sobre el peróxido de hidrógeno, se forma hipoclorito

(presenta poder oxidante y germicida).

2.5.2 HIPOCLORITO DE SODIO

16

Compuesto químico que se origina por la mezcla de un cloro, hidróxido de sodio y agua, fue

desarrollado en 1787 por el francés Berthollet como un blanqueador de telas. Es hasta el siglo

XIX donde Luis Pasteur comprueba su poder se desinfección, incorporando su uso como

agente de defensa contra gérmenes y bacterias. En 1870, Labarraque, obtiene el hipoclorito de

sodio del 1% al 2% como cloro activo y usa esta solución como desinfectante de heridas. (17).

Según Canalda et al(18) el hipoclorito un desinfectante universal, siendo definido como un

líquido claro, pálido, verde amarillento, alcalino, el cual presenta una acción disolvente sobre

tejidos necróticos y residuos orgánicos, además es un potente agente antimicrobiano.

Considerado bactericida y fungicida.

El hipoclorito de sodio según De Nardo(21) ha sido utilizado en algunos estudios de inhibición

de microorganismos su gingivales en bolsas periodontales . Concentraciones de hipoclorito de

sodio al 0,05% también ha sido utilizado en enjuague bucal para la reducción de la gingivitis

en un período de 21 días. Sin embargo, el hipoclorito de sodio presenta algunos efectos

colaterales que incluyen irritación de las membranas mucosas cuando se usa a altas

concentraciones, efectos decolorantes y efectos corrosivos no es aconsejable utilizar en

mucosas orales se utilizan en endodoncia.

2.5.2.1 MECANISMO ANTIBACTERIANO DEL NaOCl

Para Vega(20) utilizada comúnmente en odontología como antiséptico, fungicida y

desinfectante, gracias a su actividad microbiana, tiene una gran compatibilidad biológica en

diferentes concentraciones. Al liberar oxigeno y cloro destruye al microorganismo, esta fase,

aun no se ha establecido de forma exacta como se realiza pero, se cree que el mecanismo de

desinfección por cloro se va a realizar por inhibición de algunas reacciones enzimáticas claves

dentro de la célula, destruyendo las proteínas e inactivando al acido nucleíco.

2.5.3 ACIDO HIPOCLOROSO

El HOCl biológicamente, se clasifica dentro de un grupo de pequeñas moléculas conocidas

como especies reactivas del oxígeno (ROS) sintetizadas por células del sistema inmune

17

(neutrófilos y macrófagos) en un proceso inmunológico conocido como "estallido

respiratorio", durante la fagocitosis de antígenos según Weiss (21). Cuando un patógeno invade

los tejidos, los polimorfo nucleares neutrófilos y macrófagos son activados y la fagocitosis de

los antígenos es el resultante del ensamblaje e inicio del estallido respiratorio. (20).

Debido a que la concentración de cloro en el plasma es mil veces mayor que la de otros

compuestos halogenados Según Kekstrom et al(24),el sistema H2 O2 – mieloperoxidasa utiliza

el cloro formando HOCl que es altamente reactivo en contra de componentes esenciales de la

célula microbiana.

Sam(22) indica que el HOCl, resultante del estallido respiratorio, se libera entonces a nivel

extracelular reaccionando con la taurina formando cloramina de taurina un oxidante de larga

duración que también tiene propiedades antibacteriana y antiinflamatoria.

2.5.3.1 Obtención.

Para Weiss(23)el HOCl es un ión no disociado del cloro dependiente del oxígeno, altamente

inestable y altamente reactivo. Por ser uno de los ácidos hipo halogenados más fuertes, es

también uno de los más poderosos oxidantes entre los oxácidos clorados y es el responsable

directo de la acción bactericida de los compuestos derivados del cloro.

Riveros(33) expresa que en Colombia en 1993, a través de la implementación de un protocolo

modificado de acidificación más procesos secundarios de súper oxidación del agua, se

desarrolla una técnica para la estabilización de HOCl para su uso en medicina(Superoxidacion

del Agua). Este desarrollo dio inicio a procesos investigativos dirigidos a la optimización y

refinamiento de los métodos de obtención de la molécula hasta desarrollar una solución

antimicrobiana a base de HOCl con potenciales aplicaciones profilácticas y terapéuticas en

medicina humana, aprobada por el instituto de vigilancia en alimentos y medicamentos de

Colombia (INVIMA).

En 2006 según Garcia(31), la FDA (Food and DrugAdministration) en los EE.UU aprobó una

solución cuyo componente activo es el ácido hipocloroso; el Aquatine

(SteriloxDental'sAquatineEndodonticCleanser, Aquatine EC, Sterilox, Puricore, Malvern, PA,

18

USA) fue aprobado para ser usado como irrigante en endodoncia siendo otro producto

patentado para uso en odontología.

2.5.3.2 Efecto Antimicrobiano

El ácido hipocloroso según Galvan(33)es el componente activo del hipoclorito de sodio sin sus

efectos adversos, de esta manera, se podría considerar como un potente anti placa para uso en

cavidad oral ya que se ha demostrado un alto efecto antimicrobiano (33). Calderón(34) describe

que los procesos de obtención y optimización de la molécula continuaron y en el año 2009

Lafaurie et al(10)evaluaron la eficacia In Vitro del HOCl contra microorganismos

potencialmente patógenos de cavidad oral. El ácido hipocloroso logró inhibición bacteriana

del 99.9% a una concentración de 0.05% (500ppm).

Esta actividad microbicida, a pesar de ser más efectiva para formas bacterianas que para

esporas, abarca microorganismos clínicamente relevantes como lo son bacterias Gram

negativas, Gram positivas, parásitos y hongos (8.).

2.5.3.3 Usos en odontología

Recientemente según Mainnemare et al(25), se desarrollaron soluciones de HOCl a 125 y 500

ppm a un pH de 5,8 para ser utilizado en investigación para uso odontológico. Actualmente, se

están realizando pruebas microbiológicas de citotoxicidad sobre células de la mucosa oral,

efectos del pH sobre la capacidad buffer de la saliva, efecto erosivo sobre el esmalte dental, su

efecto sobre la oxidación de proteínas y estudios de sustantividad y efecto anti placa que

sustenten su uso en cavidad oral como agente antimicrobiano y en cicatrización de heridas.

Uno de los intereses del estudio del HOCl radica en que este es la parte activa de hipoclorito

de sodio con menos efectos adversos. El hipoclorito de sodio ha sido utilizado en algunos

estudios de inhibición de microorganismos subgingivales en bolsas periodontales(34)

19

3. CAPITULO 3

3.1 METODOLOGÍA:

3.1.1 TIPO DE ESTUDIO

Estudio de tipo Experimental IN-VITRO debido que se llevó a cabo ensayos en laboratorio en

el cual las variables llevaron una manipulación en condiciones controladas, y posteriormente

se describió las causas por las que se producen los resultados de manera que quedó en

evidencia la inhibición de Streptococcus mutans y Staphylococcus aureus utilizando sustancias

químicas antimicrobianas como peróxido de hidrógeno , hipoclorito de sodio y ácido

hipocloroso.

Comparativo debido que se evaluó si existe diferencia significativa entre los agentes

antimicrobianos peróxido de hidrógeno ,hipoclorito de sodio y ácido hipocloroso sobre

microorganismos cepas atenuadas de Staphylococcus aureus y Streptococcus mutans.

3.1.2 POBLACION Y MUESTRA

Para determinar la muestra se tomaron en cuenta cepas de microorganismos liofilizados de

Staphylococcus aureus (ATCC6538) y Streptococcus mutans (ATCC25175) adquiridas de la

empresa importadora MEDIBAC, que es un distribuidor autorizado de la empresa

“Microbiologics Inc.” en Minnesota, USA para Ecuador, dichas muestras fueron tratadas y

manejadas bajo medidas y parámetros de un laboratorio microbiológico capacitado y

controlado por personal especializado en el Laboratorio de la Facultad de Química de la

Universidad Central del Ecuador

3.1.3 MUESTREO

De tipo no probabilístico por conveniencia debido que se van a utilizar cepas liofilizadas de

Staphylococcus aureus (ATCC6538) y Streptococcus mutans (ATCC25175) para el estudio

sin necesidad de otros microorganismos o muestra.

20

3.1.4 CRITERIOS DE INCLUSIÓN

Cepas puras de Staphylococcus aureus.

Cepas puras de Streptococcus mutans.

Solución de peróxido de hidrógeno al 3,18%

Solución de hipoclorito de sodio al 1.85%.

Solución de ácido hipocloroso a 125ppm y 500ppm

3.1.5 CRITERIOS DE EXCLUSIÓN

Cepas de Streptococcus que no pertenezcan al grupo viridans

Cepas de Staphylococcus que no pertenezcan al grupo Beta hemolítico A

Solución de peróxido de hidrógeno que difiera del 3,18%

Solución de hipoclorito de sodio que difiera del 1.85%.

Solución de ácido hipocloroso que no corresponda a 125ppm y 500ppm.

21

3.1.6 CONCEPTUALIZACION DE LAS VARIABLES

3.1.6.1 VARIABLE DEPENDIENTE:

Sustancias antisépticas las cuales va a tener una acción inhibitoria contra microorganismos

impidiendo su crecimiento o en su caso causando su muerte.

3.1.6.2 VARIABLES INDEPENDIENTES:

Streptococcus mutans: Es una bacteria Gram positiva, anaerobia facultativa que se encuentra

normalmente en la cavidad bucal humana, formando parte de la placa dental o biofilm dental.

Se asocia al inicio y desarrollo de la caries dental.

Staphylococcus aureus: Conocido comúnmente como estafilococo dorado, es una bacteria

anaerobia grampositiva productora de coagulasa y catalasa. Es el patógeno humano más

importante que coloniza la piel de la mayoría de los seres humanos.

3.1.7 OPERACIONALIZACION DE LAS VARIABLES

VARIABLES

DEPENDIENT

ES

CONCEPTUALIZ

ACION

DETERMINANTE

S

INDICA

DOR

ESCALA

ANTISEPTICO

S

PEROXIDO DE

HIDRÓGENO

Antiséptico de

acción oxidante a

nivel de

membrana, se

incrementa en la

fase gaseosa actúa

a través de

radicales libres.

Concentración: 3%

Cantidad:20UI

(micro litros)

Tiempo: 6-12-

18horas

Temperatura del

Halo de

inhibici

ón

Milímetro

s

22

ambiente: 35ºc

HIPOCLORITO

DE SODIO

Antiséptico y

desinfectante,

utilizado

comúnmente en

endodoncia, posee

una gran

capacidad

oxidante y actúa

desnaturalizando

las proteínas.

Concentración:

1.8%

Cantidad:20UI(micr

o litros)

Tiempo: 6-12-

18horas

Temperatura del

ambiente: 35ºc

Halo de

Inhibici

ón

Milímetro

s

23

VARIABLES

INDEPENDIENT

ES

CONCEP

TUALIZA

CION

DETERMI

NANTES

INDICADO

R

ESCA

LA

MICROOR

GANISMOS

Streptococcus

mutans

Es una bacteria

Gram positiva,

anaerobia

facultativa que

se encuentra

normalmente en

(ATCC25175)

Crecimiento en

cajas petri

Cuantitativ

a

ACIDO

HIPOCLOROS

O

Sustancia

antimicrobiana,

biológicamente

sintetizada por

neutrófilos y

macrófagos

durante un proceso

inmunológico

conocido como

estallido

respiratorio,

actividad

microbicida

efectiva contra

formas bacterianas

como esporas y

hongos, sin causar

daños a tejidos

Concentración:

125ppm y 500ppm.

Cantidad:20UI(micr

o litros)

Tiempo: 6-12-

18horas

Temperatura del

ambiente: 35ºc

Halo de

inhibici

ón

Milímetro

s.

24

la cavidad bucal

humana,

formando parte

de la placa

dental o biofilm

dental. Se

asocia al inicio

y desarrollo de

la caries dental.

Staphylococcu

s aureus

Conocido

comúnmente

como

estafilococo

dorado, es una

bacteria

anaerobia

grampositiva

productora de

coagulasa y

catalasa. Es el

patógeno

humano más

importante que

coloniza la piel

de la mayoría

de los seres

humanos.

(ATCC6538) Crecimiento en

cajas petri

Cuantitativ

a

25

3.1.8 ASPECTOS BIOETICOS

Por la manera de obtención de la muestra biológica y al ser un estudio in vitro, el presente

proyecto no requiere ser sometido al Comité de Ética de la Universidad Central del Ecuador.

3.1.8.1 Beneficencia

Se aportó a la comunidad Odontológica las propiedades antibacterianas y antioxidantes de los

diferentes antisépticos utilizados en esta investigación ante potenciales microorganismos de

cavidad oral, además exponer los diferentes beneficios de los antisépticos. A pesar de que este

estudio no se realizó en seres humanos tiene un alto beneficio en la sociedad debido que uno

de los compuesto utilizados en esta investigación como es el ácido hipocloroso en diferentes

países ya se utiliza como un potencial antiséptico oral y en mucosas.

3.1.8.2 Beneficios potenciales del estudio directo.

El profesional odontólogo podrá conocer el potencial y el efecto inhibidor de diversos

antisépticos sobre las bacterias Streptococcus mutans y Staphylococcus aureus las cuales son

comunes en cavidad oral con la finalidad de conocer la sustancia antiséptica con mayor

potencial inhibitorio de las sustancias utilizadas en este estudio

3.1.8.3 Riesgo potencial del estudio.

El estudio fue in vitro no tuvo ningún riesgo potencial sin embargo los microorganismos y

sustancias utilizadas serán desechadas siguiendo el protocolo de manejo de desechos de la

Facultad de Odontología de la Universidad Central del Ecuador

Idoneidad ética y experiencia del investigador Para este trabajo realizado por mi persona y

tutorado por el Dr. Alejandro Farfán quien tiene estudios y experiencia en el campo de

Odontología y Laboratorios.

26

3.1.8.4 Declaración de conflicto de intereses

Al realizar este trabajo no se obtuvo ningún beneficio personal ni económico.

3.1.8.5 Confidencialidad

Los datos obtenidos forman parte de la investigación y fueron utilizados únicamente en el

presente trabajo de investigación. No se utilizaron muestras de seres humanos y todas las

sustancias a utilizar serán manejadas por personal capacitado y con experiencia, siguiendo una

metodología establecida y una recolección de datos únicamente para el uso de la investigación.

27

3.1.9 METODO DE RECOLECCION DE LA INFORMACION:

Realizados los procesos administrativos en la Facultad de Odontología de la Universidad

Central del Ecuador(anexos 1,2 ,3), y acorde a la solicitud enviada a la Facultad de Ciencias

Químicas se llevó a cabo la investigación in-vitro.

Posterior a la aprobación del Comité de bioética de la Facultad de Odontología de la

Universidad Central del Ecuador. Se procede a evaluar 4 antisépticos los cuales son ácido

hipocloroso 500ppm-0.05%, ácido hipocloroso 125ppm-0,025%, hipoclorito de sodio al

1,85% y peróxido de hidrogeno al 3,18%. Utilizando como muestra negativa el agua destilada.

Contra cepas liofilizadas de microorganismos los cuales son Streptococcus mutans y

Staphylococcus aureus.

PROTOCOLO

1. Siembras de microorganismos:

Realizamos siembras o inoculaciones microbiológicas en una cámara de flujo laminar para no

permitir ningún tipo de contaminación y con todas las normas de Bioseguridad.

Activación de las cepas microbianas las cuales se encontraron en un medio totalmente estéril

y en refrigeración a 5ºC.

IMAGEN1y 2

28

Realizada y tomada por Erick Paredes

2. Preparación de las cajas petri con agar sangre previo a la colocación del cultivo de

microorganismos.

IMAGEN 3 Y 4


29

Primeramente verificamos la sustancia con los microorganismos a investigar y se observó que

tan turbia se encuentra con ayuda de la prueba de turbidez 0,5 McFarland con suspensión

bacteriana, esta debe estar exactamente igual a la sustancia base. El objetivo fue determinar la

cantidad de bacterias que se encuentran por ml de fluido y posteriormente se procede a

sembrar los microorganismos en agar sangre.

IMAGEN 5,6 Y 7


30

3. Siembra: con la técnica de siembra con hisopos se procedió a cargar con

microorganismos en el hisopo realizando frotes longitudinales alrededor del medio de

cultivo y posterior mente nuevas estrías perpendiculares a las anteriores y se repite el

procedimiento hasta agotar la muestra.

IMAGEN 8 Y 9


31

4. La siembra se realizó en 5 cajas con Streptococcus mutans ATCC 25175 y 5 cajas con

Staphylococcus aureus ATCC 6538 , en las cuales se procedió a depositar los discos

conforme la técnica de difusión en agar con disco según SANTAMBROSIO.

IMAGEN 10 Y 11


32

5. Colocación de los discos empapados con las sustancias a investigar, ácido hipocloroso

elaborado en la Facultad de Ingeniería Química de la Universidad Central del Ecuador

en concentraciones de 500ppm-0,05% y 125ppm-0,025%, hipoclorito de sodio al

1,85% y peróxido de hidrógeno al 3,18%. y en la parte central agua destilada como

prueba negativa.

IMAGEN 12 Y 13

33


IMAGEN 14,15,16,17,18

34


Colocación de los discos de inhibición con las sustancias a analizar.

IMAGEN 19 Y 20


35

IMAGEN 21


6. Incubación: Para la incubación se procedió a introducir las cajas en la jarra para

anaerobiosis junto con una vela la cual va a permitir eliminar el oxígeno dentro de la

jarra permitiendo una anaerobiosis adecuada de las bacterias. Inmediatamente se

incubaron a una temperatura de 31 a 37ºc por 24, 48 y 72 horas, para que se

produzcan los halos de inhibición.

36

IMAGEN 22,23 Y 24


7. Medición de los halos.

Los halos de inhibición de crecimiento de las bacterias alrededor de cada disco fueron

registrados en mm .

37

IMAGEN 25,26 Y 27


IMAGEN 28


38

8. Procesamiento de datos:

Los datos obtenidos del análisis microbiológico se organizó en una hoja de registro en

Excel(ANEXO12), conos resultados se elaboró una base de datos gracias al cual se estimo la

medida del halo de inhibición con el fin de desarrollar la prueba estadística Kruskall Wallis.

3.1.10 ANALISIS ESTADISTICO.

Con los resultados obtenidos se elaboró una base de datos, gracias a este análisis se obtiene la

media del halo de inhibición, con el fin de desarrollar la prueba estadística Kruskal Wallis con

la prueba de normalidad Shapiro-Wilk

39

4. CAPITULO 4

4.1 RESULTADOS

Prueba de Normalidad

Ho: Las muestras provienen de poblaciones con distribución Normal

Ha: Las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal

En la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk la mayoría de los valores del nivel de

significación (Sig.) son inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), por tanto se acepta Ha, esto

es las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal, entonces para la

comparación de grupos se utiliza pruebas no para métricas: Kruskal Wallis.

Streptococcus mutans

Advertencias

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025%, 24 horas, es constante.

AGUA DESTILADA, 24 horas, es constante.


Pruebas de normalidad

Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk

Estadístic

o gl Sig.

Estadístic

o gl Sig.

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 500PPM-0,05%, 24

horas 0,231 5 0,200 0,881 5 0,314

HIPOCLORITO DE SODIO 1.85%, 24 horas 0,231 5 0,200 0,881 5 0,314

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3%, 24 horas 0,473 5 0,001 0,552 5 0,000

40


horas 0,473 5 0,001 0,552 5 0,000


horas 0,243 5 0,200 0,894 5 0,377



Staphylococcus aureus

Advertencias

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025%, 24 horas, es

constante.

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3%, 24 horas, es

constante.



Pruebas de normalidad

Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk

Estadístic

o gl Sig.

Estadístic

o gl Sig.

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 500PPM-0,05%,

24 horas 0,231 5 0,200 0,881 5 0,314



48 horas 0,367 5 0,026 0,684 5 0,006

41


48 horas 0,254 5 0,200 0,914 5 0,492



En la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk la mayoría de los valores del nivel de

significación (Sig.) son inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), por tanto se acepta Ha, esto

es las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal, entonces para la

comparación de grupos se utiliza pruebas no para métricas: Kruskal Wallis.

Streptococcus mutans: Comparación entre sustancias (24 Horas y 48 Horas)

Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de

probabilidad (Medias, medianas similares)

Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las

poblaciones.

Descriptivos

N Media

Desviació

n estándar

Error

estándar

Mínim

o Máximo

Est

repto

cocc

usm

uta

ns2

4H

ora

s ÁCIDO HIPOCLOROSO,

125PPM-0,025% 5 6,000 0,000 0,000 6 6

ÁCIDO HIPOCLOROSO,

500PPM-0,05% 5 8,200 0,837 0,374 7 9

HIPOCLORITO DE SODIO

1.85% 5 6,800 0,837 0,374 6 8

42

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO

3% 5 7,200 0,447 0,200 7 8

AGUA DESTILADA 5 6,000 0,000 0,000 6 6

Total 25 6,840 0,987 0,197 6 9

Est

repto

cocc

usm

uta

ns4

8H

ora

s

ÁCIDO HIPOCLOROSO,

125PPM-0,025% 5 6,200 0,447 0,200 6 7

ÁCIDO HIPOCLOROSO,

500PPM-0,05% 5 16,200 1,789 0,800 14 18


1.85% 5 12,600 0,548 0,245 12 13


3% 5 6,400 0,548 0,245 6 7

AGUA DESTILADA 5 6,000 0,000 0,000 6 6

Total 25 9,480 4,341 0,868 6 18

43

En la grafica se observa dos comportamientos diferentes a las 24 horas y 48 horas, a las 24

horas existen pequeñas diferencias entre las sustancias, a las 48 horas el ÁCIDO

HIPOCLOROSO, 500PPM-0,05% aumenta notablemente de valor con una media de 16,2mm,

también crece en valor el HIPOCLORITO DE SODIO 1.85% con una media de 12,6 mm.

Para determinar si estas diferencias son significativas se realiza la prueba No para métrica de

Kruskal Wallis:

6,08,2

6,8 7,26,0 6,2

16,2

12,6

6,4 6,0

ÁC

IDO

HIP

OC

LOR

OSO

,1

25P

PM

-0,0

25

%

ÁC

IDO

HIP

OC

LOR

OSO

,5

00P

PM

-0,0

5%

HIP

OC

LOR

ITO

DE

SOD

IO1

.85

%

PER

ÓX

IDO

DE

HID

RÓ

GEN

O3

%

AG

UA

DES

TILA

DA

ÁC

IDO

HIP

OC

LOR

OSO

,1

25P

PM

-0,0

25

%

ÁC

IDO

HIP

OC

LOR

OSO

,5

00P

PM

-0,0

5%

HIP

OC

LOR

ITO

DE

SOD

IO1

.85

%

PER

ÓX

IDO

DE

HID

RÓ

GEN

O3

%

AG

UA

DES

TILA

DA

Estreptococcus mutans 24 Horas Estreptococcus mutans 48 Horas

RELACION DE MEDIAS ENTRE SUSTANCIAS

44

24 HORAS

De la Prueba de Kruskal-Wallis, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba

bilateral) = 0,001) es inferior a 0,05 (95% de confiabilidad), luego se acepta Ha, esto es,

existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las medias de

las muestras son similares.

Para determinar cuáles son similares o diferentes se hace la prueba dos a dos:

46

De la prueba dos a dos

Son similares (Sig. mayores a 0,05)

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025% es similar a AGUA DESTILADA

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025% es similar a HIPOCLORITO DE SODIO

1.85%

AGUA DESTILADA es similar a HIPOCLORITO DE SODIO 1.85%

HIPOCLORITO DE SODIO 1.85% es similar a PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3%

HIPOCLORITO DE SODIO 1.85% es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO, 500PPM-

0,05%

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3% es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO, 500PPM-

0,05%

No son similares (Sig. menores a 0,05)

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025% no es similar a PERÓXIDO DE

HIDRÓGENO 3%

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025% no es similar a ÁCIDO

HIPOCLOROSO, 500PPM-0,05%

AGUA DESTILADA no es similar a PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3%

AGUA DESTILADA no es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO, 500PPM-0,05%

47

48 HORAS






49



AGUA DESTILADA es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025%

AGUA DESTILADA es similar a PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3%

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025% es similar a PERÓXIDO DE

HIDRÓGENO 3%

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3% es similar a HIPOCLORITO DE SODIO 1.85%

HIPOCLORITO DE SODIO 1.85% es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO,

500PPM-0,05%


AGUA DESTILADA no es similar a HIPOCLORITO DE SODIO 1.85%


ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025% no es similar a HIPOCLORITO DE

SODIO 1.85%



PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3%no es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO,

500PPM-0,05%

Staphylococcus aureus: Comparación entre sustancias (24 Horas y 48

Horas)

Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de

probabilidad (Medias, medianas similares)

Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las

poblaciones.

Descriptivos

50

N Media

Desviació

n estándar

Error

estándar

Mínim

o Máximo

Sta

phylo

cocc

us

aure

us

24 H

ora

s

ÁCIDO HIPOCLOROSO,

125PPM-0,025% 5 6,00 0,00 0,00 6 6

ÁCIDO HIPOCLOROSO,

500PPM-0,05% 5 8,80 0,84 0,37 8 10


1.85% 5 7,40 0,55 0,25 7 8


3% 5 6,00 0,00 0,00 6 6

AGUA DESTILADA 5 6,00 0,00 0,00 6 6

Total 25 6,84 1,21 0,24 6 10

Sta

phylo

cocc

us

aure

us

48 H

ora

s

ÁCIDO HIPOCLOROSO,

125PPM-0,025% 5 6,40 0,55 0,25 6 7

ÁCIDO HIPOCLOROSO,

500PPM-0,05% 5 17,60 1,52 0,68 16 20


1.85% 5 14,40 0,89 0,40 13 15


3% 5 6,80 0,45 0,20 6 7

AGUA DESTILADA 5 6,00 0,00 0,00 6 6

Total 25 10,24 4,98 1,00 6 20

51

Similar que en cepa anterior, en la gráfica se observa dos comportamientos diferentes a las 24

horas y 48 horas

A las 24 horas existen pequeñas diferencias entre las sustancias, a las 48 horas el ÁCIDO

HIPOCLOROSO, 500PPM-0,05% aumenta notablemente de valor con una media de 17,6mm,

también crece en valor el HIPOCLORITO DE SODIO 1.85% con una media de 14,4 mm.

Para determinar si estas diferencias son significativas se realiza la prueba No para métrica de

Kruskal Wallis:

6,0

8,87,4

6,0 6,0 6,4

17,6

14,4

6,8 6,0

ÁC

IDO

HIP

OC

LOR

OSO

, 12

5P

PM

-0

,02

5%

ÁC

IDO

HIP

OC

LOR

OSO

, 50

0P

PM

-0

,05

%

HIP

OC

LOR

ITO

DE

SOD

IO 1

.85

%

PER

ÓX

IDO

DE

HID

RÓ

GEN

O 3

%

AG

UA

DES

TILA

DA

ÁC

IDO

HIP

OC

LOR

OSO

, 12

5P

PM

-0

,02

5%

ÁC

IDO

HIP

OC

LOR

OSO

, 50

0P

PM

-0

,05

%

HIP

OC

LOR

ITO

DE

SOD

IO 1

.85

%

PER

ÓX

IDO

DE

HID

RÓ

GEN

O 3

%

AG

UA

DES

TILA

DA

Staphylococcus aureus 24 Horas Staphylococcus aureus 48 Horas

RELACION DE MEDIAS ENTRE SUSTANCIAS

52

24 HORAS





53



54



HIDRÓGENO 3%

ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025% es similar agua DESTILADA

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3% es similar a AGUA DESTILADA

HIPOCLORITO DE SODIO 1.85%es similar acido HIPOCLOROSO, 500PPM-0,05%



SODIO 1.85%



PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3%no es similar a HIPOCLORITO DE SODIO 1.85%

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3% no es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO,

500PPM-0,05%


AGUA DESTILADA no es similar acido HIPOCLOROSO, 500PPM-0,05%

55

48 HORAS





56


57



AGUA DESTILADA es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO, 125PPM-0,025%

AGUA DESTILADA es similar a PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3%


HIDRÓGENO 3%

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3% es similar a HIPOCLORITO DE SODIO 1.85%

HIPOCLORITO DE SODIO 1.85% es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO,

500PPM-0,05%





SODIO 1.85%



PERÓXIDO DE HIDRÓGENO 3%no es similar a ÁCIDO HIPOCLOROSO,

500PPM-0,05%.

58

5. CAPITULO 5

5.1 Discusión.

De la capacidad de inhibición microbiana de las sustancias antisépticas Acido hipocloroso,

hipoclorito de sodio y peróxido de hidrógeno segúneste estudio in-vitro se concluye que es el

acido hipocloroso el mejor antibacteriano analizado en esta investigación, evaluando las

propiedades del ácido hipocloroso y según estudios realizados por Escobedo(38), Gray(36) y

Calderón(33), este agente podría ser utilizado como sustancia antimicrobiana en cavidad oral

debido a su capacidad inhibitoria superior al hipoclorito de sodio al 1,85% tal cual lo

menciona Calderón(37) en su investigación del ácido hipocloroso concuerda con este estudio

que tiene una capacidad inhibitoria sumamente potencial contra microorganismos.

Calderón(33) explica que durante la Práctica Odontológica tanto en el sector Salud Pública y en

consulta privada, se están utilizando diversos antisépticos., sin embargo a pesar de que existe

información sobre estos, ésta no ha sido clara ni explícita sobre la concentración a la cual

surten el mejor efecto antibacteriano. Por lo que la efectividad de éstos debe ser más estudiada

y de manera periódica ya que hoy por hoy las bacterias se están volviendo tolerantes y/o

resistentes a diversas sustancias químicas a las que antes eran susceptibles.(36). Esta

investigación reciente de sustancias antibacterianas y acorde a los resultados obtenidos en esta

investigación debemos tomar en cuenta que los antibacterianos como Hipoclorito de sodio y

Ácido Hipocloroso son sumamente eficientes contra bacterias comunes en cavidad oral.

Recientemente, se desarrollaron soluciones de HOCl a 250 y 500 ppm a un pH de 5,8 para ser

utilizado en investigación para uso odontológico. Actualmente, se están realizando pruebas

microbiológicas del efecto antiplaca que sustenten su uso en cavidad oral como agente

antimicrobiano y en cicatrización de heridas lo que concuerda con esta investigación que

posee un alto potencial antimicrobiano y gran capacidad de inhibición del Ácido hipocloroso

en concentraciones de 500ppm

59

Sánchez (41)describe que el peróxido de hidrógeno debe alternarse con otro antiséptico para

tener efectos satisfactorios, pero también se menciona que la acción solvente del agua

oxigenada en tejidos orgánicos es mucho menor que el hipoclorito de sodio lo que concuerda

con el presente estudio ya que no se obtuvo ningún resultado antimicrobiano del peróxido de

hidrógeno pero si una gran capacidad de inhibición del hipoclorito de sodio.

Gray(36)enfatiza que el ácido hipocloroso es el componente activo del hipoclorito de sodio sin

sus efectos adversos, de esta manera, se podría considerar como un potente antiplaca para uso

en cavidad oral ya que se ha demostrado un alto efecto antimicrobiano. Podemos decir que el

ácido hipocloroso si tiene una potencial capacidad inhibitoria de microorganismos por tanto

se puede establecer como el mejor antibacteriano analizado en el presente estudio.

60

6. CAPITULO 6

6.1 CONCLUSIONES

El hipoclorito de sodio al 1,85% presenta potente efecto antimicrobiano contra cepas

de Staphylococcus aureus ATCC6538 y Streptococcus mutans ATCC25175 en un

tiempo de 48 horas.

El peróxido de hidrógeno al 3,18 % no presenta un efecto inhibitorio contra cepas de

microorganismos como Staphylococcus aureus y Streptococcus mutans

El Antiséptico ácido hipocloroso en concentraciones de 125ppm no mostro efecto

inhibitorio contra cepas de microorganismos como Staphylococcus aureus y

Streptococcus mutans.

El antimicrobiano ácido hipocloroso en concentración de 500ppm posee un efecto

potencialmente alto de inhibición contra cepas de microorganismos como

Staphylococcus aureus y Streptococcus mutans en un tiempo de 48 horas.

Se puede determinar que el antimicrobiano ácido hipocloroso posee la más alta

capacidad inhibitoria ante los microorganismos Staphylococcus aureus y Streptococcus

mutans frente a hipoclorito de sodio y peróxido de hidrógeno.

61

6.2 RECOMENDACIONES.

El ácido hipocloroso pierde su estabilidad con el paso del tiempo, se lo debe utilizar

máximo 3 semanas antes de cualquier estudio en estado puro a 500ppm sin mezclar

con ninguna otra solución.

Cada cultivo, incubación y colocación de discos de inhibición debe ser con normas de

bioseguridad y en un ambiente de esterilidad para no causar cambios en los

microorganismos ni en los resultados.

Al realizar el estudio con microorganismos liofilizados tener en cuenta la fecha de

elaboración y de caducidad de cada uno.

Efectuar mas investigaciones sobre el ácido hipocloroso y sus diferentes usos en Salud.

62

7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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67

8. ORGANIZACION Y PLANIFICACION DE LA INVESTIGACION

8.1 Presupuesto

RUBRO CONCEPTO VALOR

TRANSPORTE Movilización a distintos lugares de Quito y

a la ciudad de Pasto(Colombia) para la

Obtención de las cepas microbiológicas y

sustancias a utilizar en la investigación.

$50

EDICIÓN, IMPRESIÓN,

REPRODUCCIÓN Y

PUBLICACIONES

Impresión de proyecto de titulación,

edición y análisis estadístico.

$70

INVESTIGACIONES

PROFESIONALES Y

EXÁMENES DE

LABORATORIO

Estudio microbiológico de muestras de

microorganismos y la preparación de las

sustancias a utilizar

$200

MEDICINAS Y

PRODUCTOS

FARMACEÚ- TICOS

Hipoclorito de sodio, peróxido de

hidrogeno y Acido hipocloroso

$20

MAQUINARIAS Y

EQUIPOS

Utilización de laboratorio de microbiología

de la facultad de Odontología UCE

$0

BIENES BIOLOGICOS Cepas de Staphylococcus aureus y

Streptococcus mutans.

$300

TOTAL $840

68

8.2 Cronograma

CRONOGRAMA

HITO/ACTIVIDAD

DESCRIPCION

RESPONSABLE

OC

TU

BR

E

NO

VIE

MB

RE

DIC

IEM

BR

E

EN

ER

O

FE

BR

ER

O

MA

RZ

O

Aprobación del tema Ingreso del tema a

titulación

Sra.Andrea Badillo X

Revision de la

fundamentaciónteórica

Ingreso a comité de

titulación

Comité de Ética. X

Elaboración del

anteproyecto

Realización de

anteproyecto con guías

establecidas

Erick paredes

Dr.Alejandro Farfán

X

Redacción del marco

teórico

Fundamentación en

libros, revistas y

artículoscientíficos

Erick paredes

Dr. Alejandro

Farfán

X

Aplicación y recopilación

de datos investigados

Aplicación del

experimento in vitro

Erick paredes

Dra.Rachide Acosta

X

Presentación y análisis de

resultados

Análisis de resultados

obtenidos del experimento

Estadístico Ing.

Jaime Reinaldo

Molina

X

Informe final,

conclusiones y

recomendaciones

Presentación de informe

final

Erick paredes

Dr. Alejandro Farfán

X

69

9. ANEXOS

ANEXO 1

Solicitud dirigida al Coordinador de Titulación de la Facultad de Odontología de la Universidad Central

del Ecuador

70

ANEXO 2

Solicitud de aceptación de tutoría de tesis dirigida al Dr. Alejandro Farfan

71

ANEXO 3

Solicitud de aceptación del tema de tesis

73

ANEXO 4

Declaracion de conflictos de interes

74

ANEXO 5

Declaracion de derecho de autor

75

ANEXO 6

Carta de confidencialidad

76

ANEXO 7

Solicitud dirigida a la decana de la Facultad de Ciencias Químicas para uso de laboratorios

77

ANEXO 8

Certificado de uso de laboratorio y pruebas bacteriológicas en la Facultad de Ciencias Químicas

78

ANEXO 9

Certificado de Uso de materiales utilizados en el laboratorio

79

ANEXO 10

Autorización de uso de instalaciones de deposito de materiales infecciosos

80

ANEXO 11

Certificado de Protocolo de desechos infecciosos utilizados en el trabajo de investigación.

81

ANEXO 12

Resultados obtenidos en la investigación in-vitro.

ANEXO 13

82

Certificado y Factura de compra de cepas bacterianas Streptococcus Mutans(ATCC25175) y

SthaphylococcusAureus(ATCC6538P)

83

ANEXO 14

ABSTRACT-TRADUCCION

84

ANEXO 15

REPOSITORIO DIGITAL

universidad central del ecuador facultad de … · 2018. 10. 11. · i universidad central del...

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