seminario de bilirrubina y bilirrubina delta
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Integrantes:Chrystiam Sorondo
Lusiana RangelYenireth Martinez
Universidad Central de Venezuela
Facultad de MedicinaEscuela de Bioanálisis
Cátedra de Bioquímica “C”
Estudio del funcionalismo Hepático en el Laboratorio
Clínico
Bilirrubina.Producto del catabolismo del grupo heme.
250-300 mg por día. 80% Hemoglobina.20% enzimas, proteínas, mioglobina y citocromos.
Síntesis de bilirrubina (reacciones enzimnticas).
HemeOxigenasa.
Biliverdina
Bilirrubina.
Reductasa.
Trasformación de Biliverdina a Bilirrubina
Biliverdina
Bilurrubina
Bilirrubina.
Conjugada ó Directa
No Conjugada ó Indirecta
95 % Unida a Albúmina.
Bilirrubina Conjugada.Ácido
glucurónico
Bilirrubina diglucurónida
Transferasa de UDP-
glucuronilo
Bilirrubina Sérica.
Producción.
Descomposición.
Depuración.
Van den Bergh y Snapper. 1913.Modificación de Jendrassik y Grof.
Recomendada por NCCLS.La bilirrubina conjugada (directa) se
copula con el ácido sulfanílico diazotizado (nitrito de sodio) en ácido clorhídrico para formar un complejo coloreado que es medido a 540nm.
Medición de Bilirrubina.
Para determinar Bilirrubina no conjugada, ésta debe hacerse soluble en agua, mediante el uso de un acelerador.
Reacción química que usa al óxido nitroso (N2O) para formar un complejo de color (Azobilirrubina)
Bilirrubina No conjugada =Bil (t) – Bil (conj).
Método de Jendrassik y Grof.
Procedimiento:
Bilirrubina Total
Blanco Calibrador (10
mg/dL) Muestra
Reactivo "Total" (ml) 1.0 1.0 1.0
Oxidante (gotas) 1 1 1
Agua (ml) 0.05 - -
Calibrador (ml) - 0.05 -
Muestra (ml) - - 0.05
Método de Jendrassik y Grof.
Incubar a T.A por 5 min MÍNIMO.Leer a 540 nm antes de 30 min.
Método de Jendrassik y Grof.
Bilirrubina Directa
Blanc
o
Calibrador (10 mg/dL) Blanco
Mx.Muestr
a
Reactivo “Directa" (ml) 1.0 1.0 1.0 1.0
Oxidante (gotas) 1 1 - 1
Agua (ml) 0.1 - - -
Calibrador (ml) - 0.1 - -
Muestra (ml) - - 0.1 0.1
Incubar a T.A por 3 min EXACTOS.Leer a 540 nm rápidamente. (puede haber sobreestimación por bilirrubina indirecta.)
Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC).
Cromatografía en capa fina.
Otros Métodos.
Pre-analíticas.
Analíticas: Hemólisis, lipemia, luz, conservación, temperatura, tiempos de reacción.
Post-Analíticas.
Variables.
Bilirrubina Delta
Bilirrubina que se une covalentemente con la albúmina, que no se disocia y no aparece en la bilis.
Tiene una vida media de 15 a 20 días.
Se encuentra
Bilirrubina DeltaDelta Biliproteína
NO ES HIDROSOLUBLE
ComplejoAlbúmina-Bilirrubina
Unido covalentemente
Metabolismo de la Bilirrubina Delta
Análisis de Bilirrubina Delta
Actualmente la determinación de Bilirrubina en muchos laboratorios de rutina se hace mediante las reacciones con la prueba Diazo:
Bilirrubina de reacción directa Conjugada
Bilirrubina de reacción indirecta NoConjugada
Determinación de fracciones de Bilirrubina por HPLC
Lauff, en 1982 separó las fracciones de Bilirrubina mediante esta técnica.◦Alfa No conjugada◦Beta Monoconjugada◦Gamma Diconjugada◦Delta Biliproteína
Determinación de fracciones de Bilirrubina
por Tecnología de Slide Seco o Microslides
Bilirrubina Delta = Bilirrubina Total – (B conjugada + B no conjugada)
Utilidad Clínica
Se evalúa su relación con respecto a la bilirrubina directa en procesos colestásicos y hepatobiliares.
Responsable
Normalizado la función hepática
Caso clínico.