Sistemas de Secuenciacióndel ADN: Método enzimático de Sanger y Automático

INTEGRANTESKaren Ramos Díaz Orlando Vargas

¿Qué es secuenciación?Secuenciación enzimáticaMétodo Sanger

Secuenciación automática

Reactivos y aparatos en la secuenciación

•Puntos a tratar

•¿Que es la secuenciación?•Significado •La determinación de la secuencia de

nucleótidos de una molécula especifica.

•Es fundamental para hacer predicciones sobre su función. Facilitando su manipulación. •Existen dos métodos:

QUIMICO ENZIMÁTICO

•TERMINACIÓN DE CADENA

•Diseñado por Sanger, 1980

•FundamentoReplicación del ADNComplementariedad de bases

Síntesis de una nueva hebra de ADN, inicia en el sitio de un primer y finaliza con la incorporación de un nucleótido terminador.

SE NECESITAN LOS SIGUIENTES COMPUESTOS:El ADN molde o segmento de ADN que se desea secuenciar

Una enzima que replique el ADN, normalmente la ADN Polimerasa

Un cebador o "primer“

Los cuatro nucleótidos trifosfato (dATP, dCTP, dGTP y dTTP)

Por último, se necesitan nucleótidos didesoxi (ddATP, ddTTP, ddCTP y ddGTP)

1° Paso

2°Paso

3° Paso

4° Paso

5° Paso 6° Paso

7° Paso 8° Paso

Secuenciación: Separación de fragmentos

Los productos de las 4reacciones, cada una conteniendo una pequeñacantidad de uno de los cuatrodidesoxinucleótidos, soncargadas en el gel y sometidasa electroforesis

Como la polimerización es soloen dirección 5’ a 3’, los fragmentos mas cortos estarán en 5’ y los más largos que seencontrarán en la dirección 3’

Autorradiografia resultante

- La principal diferencia entre método enzimático de terminación de cadena y el método automático de secuenciación radica, en primer lugar en el tipo de marcaje.

- La segunda diferencia radica en el sistema de detección de los fragmentos de ADN.

Secuencia obtenida por el método automático de secuenciación.

UTILIDAD E IMPORTANCIA EN LA MEDICINA1) LA PRODUCCIÓN DE SUSTANCIAS CON EFECTOS

TERAPÉUTICOS.

Somatostatina (SS) que, segregada por el hipotálamo, inhibe la síntesis de somatotropina (GH) u hormona del crecimiento.

Insulina que, segregada por el páncreas, regula la concentración de glucosa en sangre.

Somatotropina (GH) que, segregada por la adenohipófisis controla y regula el normal crecimiento (evitando enanismo).

Interferones, que son proteínas elaboradas por células animales en respuesta a una infección vírica.

Factor VIII antihemofílico (AHF), es una globulina que estimula a las plaquetas (para la coagulación sanguínea).

Renina, es una enzima que cuaja la leche, necesaria para la elaboración de quesos (o para algunos fármacos).

2. El diagnóstico de enfermedades hereditarias.

3. La identificación de genes humanos específicos.

4. La terapia génica.

UTILIDAD