salmonella spp. características...

Salmonella Salmonella spp. spp.

Carrera de Especialización en Bacteriología Clínica UNNE. Junio 12-13

Salmonella Salmonella spp. spp.

Características microbiológicasCaracterísticas microbiológicas

María Rosa Viñas

Enterobacterias

INEI-ANLIS “C.G.Malbrán”

Familia Enterobacteriaceae

Escherichia

Shigella

Salmonella

Edwarsiella

Citrobacter

� Nomenclatura y Taxonomía, ordenamiento en conjuntos y subconjuntos

que resultan del estudio de caracteres morfológicos, bioquímicos, antigénicos y

genéticos comparados con las propiedades de la cepa tipo

14 Géneros

( de relevancia)

Citrobacter

Klebsiella

Enterobacter

Serratia

Hafnia

Proteus

Morganella

Providencia

Yersinia

Erwinia

Familia Familia EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae

GENERO: Salmonella

�� La salmonelosis es La salmonelosis es considerada enfermedad considerada enfermedad zoonóticazoonótica, ,

en el ciclo de infección interviene tanto el hombre como animales en el ciclo de infección interviene tanto el hombre como animales domésticos y salvajes.domésticos y salvajes.

�� Salmonella con variaciones en Salmonella con variaciones en serovariedadesserovariedades influenciada por influenciada por factores: clima, densidad poblacional, prácticas factores: clima, densidad poblacional, prácticas agroganaderasagroganaderas, técnicas , técnicas de elaboración de los alimentos y hábitos de consumo. de elaboración de los alimentos y hábitos de consumo.

�� La tasa de incidencia de la infección es mayor en los lactantes y niños La tasa de incidencia de la infección es mayor en los lactantes y niños de corta edad . de corta edad .

�� EpidemiológimenteEpidemiológimente el 60 % el 60 % -- 80% de los casos son esporádicos , y 80% de los casos son esporádicos , y asociados a grandes brotes comunitarios asociados a grandes brotes comunitarios por consumo de alimentos por consumo de alimentos principalmente principalmente de origen animal. de origen animal.

�� Las infecciones hospitalarias (IH) son causa frecuente de Las infecciones hospitalarias (IH) son causa frecuente de morbimortalidadmorbimortalidad entre pacientes hospitalizadosentre pacientes hospitalizados. .

�� Como parte de la Como parte de la vigilancia desde el laboratoriovigilancia desde el laboratorio, se analiza los datos , se analiza los datos del LRN en cuanto la prevalencia de Salmonella spp. que es importante del LRN en cuanto la prevalencia de Salmonella spp. que es importante para para el monitoreo de la zoonosisel monitoreo de la zoonosis

*Red Nacional de Diarreas y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria:

48 referentes jurisdiccionales de diarreas y 17 de alimentos.

Se remiten para caracterización un porcentaje de aisl. humanos de Shigella spp. (20%), Campylobacter spp. , Salmonella spp. (20%) y todos los aislamientos de brotes.

En la Vigilancia basada en Laboratorio,

las Redes vinculadas a diarreas y ETA son:

*Red para la Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos (WHONET- ARG):90 laboratorios distribuidos por todo el país, realizan pruebas de sensibilidad antimicrobiana a bacterias de origen clínico.

- Campylobacter spp. se realiza vigilancia activa por el método de dilución en agar de los 5 primeros aislamientos de cada mes que los laboratorios envían al LRN.

- Salmonella sp. y Shigella spp. con fenotipos poco habituales que se estudian para establecer los mecanismos de resistencia.

SS. ser. Enteritidis, . ser. Enteritidis, SS. ser. . ser. TyphimuriumTyphimurium, , SS. ser. Newport . ser. Newport

y y SS. ser. . ser. InfantisInfantis en Argentinaen Argentina (1986(1986--20201212) LRN) LRN

300

400

500

600

Nº d

e a

isla

mie

nto

s

* En el período 07-12 S. Typhimurium fue la serovariedad que se aisló

con mayor frecuencia en humanos, duplicando a S. Enteritidis.

0

100

200

Nº d

e a

isla

mie

nto

s

Años

S.Enteritidis S. Typhimurium S. Infantis S. Newport

TAXONOMIA DEL GENERO TAXONOMIA DEL GENERO

SalmonellaSalmonella

Salmonella enterica que se divide en 6 subespecies:

Salmonella enterica subespecie enterica (I)

Salmonella enterica subespecie salamae (II)

El Género Salmonella comprende 2 especies:

Salmonella enterica subespecie salamae (II)

Salmonella enterica subespecie arizonae (IIIa)

Salmonella enterica subespecie diarizonae (IIIb)

Salmonella enterica subespecie houtenae (IV)

Salmonella enterica subespecie indica (VI)

Salmonella bongori (V)

� Las subespecies de Salmonella enterica y especie de S. bongori se

subdividen en más de 2400 serovariedades:

asociaciones de factores antigénicos somáticos O y flagelares H.

� Las serovariedades de Salmonella enterica subespecie enterica

(99,5%) se designan con un nombre, relacionado con el lugar

geográfico donde se aisló la 1ra cepa de la nueva serovariedad

(se escribe con letras romanas, no en itálica y la primer letra con(se escribe con letras romanas, no en itálica y la primer letra con

mayúscula. Ej. Salmonella ser. Typhimurium ó Salmonella

Typhimurium; Salmonella ser. Orán).

� Las serovariedades de las otras subespecies de:

Salmonella enterica y las de Salmonella bongori (muy escasas en

patología humana y veterinaria) se designan con su fórmula antigénica.

Ej. Salmonella IV 50 : b : - ;Salmonella IV 44 : a : -.

� Los miembros del género Salmonella se pueden clasificar en

tres grupos:

� Los que no tienen preferencia por algún huésped, por lo que

infectan tanto al hombre como los animales. Ej: mayoría de las

serovariedades asociadas a salmonelosis.

� Los que infectan sólo al hombre, ej: Salmonella Typhi,

Salmonella Paratyphi A y Salmonella Paratyphi C.

� Los que están adaptados a un huésped animal.

Ej: Salmonella Gallinarum, a las aves ( tifus aviar); Salmonella

Abortusovis a los ovinos, S. Abortusequi a los equinos, etc

Salmonelosis: Manifestaciones ClínicasSalmonelosis: Manifestaciones Clínicas

La enfermedad en el hombreLa enfermedad en el hombre

GastroenteritisGastroenteritis

Septicemia, localizaciones Septicemia, localizaciones extraintestinalesextraintestinales (orina, bilis, (orina, bilis, abcesosabcesos) y fiebre ) y fiebre

entérica ( sangre), en pacientes entérica ( sangre), en pacientes inmunocomprometidosinmunocomprometidos..

Dosis infectiva: a partir de Dosis infectiva: a partir de 10103 3 microorganismosmicroorganismos

Período de incubación: Período de incubación: 6 a 72 hs6 a 72 hs, la gastroenteritis persiste de 24 a 72 hs., la gastroenteritis persiste de 24 a 72 hs.

La enfermedad en los animalesLa enfermedad en los animales

Puede manifestarse clínicamente ó noPuede manifestarse clínicamente ó no

Forma Forma subclínicasubclínica: el animal puede tener una infección latente: patógeno : el animal puede tener una infección latente: patógeno en sus ganglios ó ser portador y eliminar en forma transitoria, intermitente en sus ganglios ó ser portador y eliminar en forma transitoria, intermitente o persistenteo persistenteEntidades clínicas en animales domésticos: debidas a Entidades clínicas en animales domésticos: debidas a serovserov. adaptadas a . adaptadas a especies, por ej. : especies, por ej. : SalmonellaSalmonella GallinarumGallinarum, , SalmonellaSalmonella AbortusequiAbortusequi

ESQUEMA DEL MECANISMO DE PATOGENESISESQUEMA DEL MECANISMO DE PATOGENESIS

� La capacidad de Salmonella de( “ruffling “ membrana, reorganización del citoesqueleto,

interferencia de señales de transducción, replicación intracelular ,apoptosis del macrófago,

respuesta inflamatoria y secreción de fluídos) a través de proteínas que forman parte del

sistema de secreción tipo III codificadas en una isla patogenicidad SPI-1e interaccionar y

entrar a la celula huésped

Factores de virulencia deFactores de virulencia de SalmonellaSalmonella

Sistema de Secreción de tipo IIISistema de Secreción de tipo III

-- El gen El gen invinv A se encuentra dentro de la isla de A se encuentra dentro de la isla de patogenicidadpatogenicidad 1 (SPI1 (SPI--1), 1),

segmento de 40 segmento de 40 kbkb presente en el cromosoma de Salmonella presente en el cromosoma de Salmonella sppspp., y ., y codifica para un factor de codifica para un factor de invasividadinvasividad ((SsIIISsIII))

Marlovits T.C., Kubori, T., Tejero, M.-L., Thomas, D .,

Unger V.M., and Galan, J.E. (2006). Assembly of the

inner Rod determines Needle Length in the Type III

Secretion Injectisome. Nature 441, 637-640.

ALIMENTOS p/ANIMALESCONTAMINADOS

Recontaminación

MamíferosAvesPeces

ANIMALES INFECTADOS

HOMBRE

HOMBREAGUA CONTAMINADA

Salmonella: Vías de transmisión

Recontaminación de constituyentesAlimenticios (harina de hueso)

Desechoscontaminados

Mataderoscontaminados

PecesReptilesInsectos

INFECTADOS AGUA CONTAMINADA

(RIO, RIEGO, ETC.)

VEGETALES

ALIMENTOS DE ORIGEN

ANIMAL Y VEGETAL

ALIMENTOS

MANUFACTURADOS

HOMBREHOMBRE

ANIMALES

� Epidemiológicamente las infecciones por Salmonella asociados a

brotes en hospitales, jardines maternales, geriátricos, restaurantes

principalmente de origen alimentario, puede ocurrir transmisión

persona a persona.

� El estudio epidemiológico de los brotes señalan que los alimentos

más frecuentemente involucrados son: más frecuentemente involucrados son:

carne y sus derivados, huevos y alimentos lácteos.

� Entre otros alimentos asociados a infección por Salmonella :

ensaladas crudas, frutas, mayonesa, fiambres, confituras (chocolate,

tortas), hierbas y especias, harina de hueso como alimento para

animales, aguas contaminadas,entre otras.

SalmonellaSalmonella spp. spp.

� Salmonella spp. es un patógeno de transmisión alimentaria

(PTA) ampliamente reconocido.

Incorporado su búsqueda, en el área Clínica como en

Bromatología y Veterinaria, el aislamiento e identificación.

� Es necesario fortalecer la vigilancia integrada de este PTA

desde el Laboratorio en las distintas áreas, en conjunto con los

componentes de Clínica y Epidemiología

“Reglas de Oro" de la OMS para la preparación higiénica “Reglas de Oro" de la OMS para la preparación higiénica

de los alimentosde los alimentos. .

* * La OMS estima que las enfermedades causadas por alimentos La OMS estima que las enfermedades causadas por alimentos

contaminados constituyen uno de los problemas sanitarios más contaminados constituyen uno de los problemas sanitarios más

difundidos en el mundo de hoy. difundidos en el mundo de hoy.

�� 11. Elegir los alimentos tratados con fines higiénicos. Elegir los alimentos tratados con fines higiénicos

�� 2. Cocinar bien los alimentos2. Cocinar bien los alimentos

�� 3. Consumir inmediatamente los alimentos cocinados3. Consumir inmediatamente los alimentos cocinados�� 3. Consumir inmediatamente los alimentos cocinados3. Consumir inmediatamente los alimentos cocinados

�� 4. Guardar cuidadosamente los alimentos cocinados4. Guardar cuidadosamente los alimentos cocinados

�� 5. Recalentar bien los alimentos cocinados5. Recalentar bien los alimentos cocinados

�� 6. 6. Evitar el contacto entre los alimentos crudos y los cocinadosEvitar el contacto entre los alimentos crudos y los cocinados

�� 7. Lavarse las manos a menudo7. Lavarse las manos a menudo

�� 8. Mantener escrupulosamente limpias todas las superficies de la cocina8. Mantener escrupulosamente limpias todas las superficies de la cocina

�� 9. Mantener los alimentos fuera del alcance de insectos, roedores y otros animales9. Mantener los alimentos fuera del alcance de insectos, roedores y otros animales

�� 10. 10. Utilizar agua pura.Utilizar agua pura.

AplicándoAplicándo reglas sencillas, reducirá considerablemente el riesgo de las enfermedades de reglas sencillas, reducirá considerablemente el riesgo de las enfermedades de

origen alimentario.origen alimentario.

Diagnóstico y caracterización de Diagnóstico y caracterización de

enteropatógenosenteropatógenos bacterianos desde el LRNbacterianos desde el LRN

Muestra (origen humano, alimento, animal) Tamizaje o “Screening”

Aislamiento

� Identificación

Diagnóstico preliminar

ServicioEnterobacterias

Vigilancia de Enteropatógenos asociados a ETAPrevención y control de brotes

� Tipificación fenotípica y genotípica(serotipificación, R a ATB,factores de virulencia)

� Subtipificación fenotípica y genotípica

Análisis y comunicación de resultados

Diagnóstico confirmado

Monitoreo,investigación de brotes

MATERIA FECAL (HISOPO)

Suspensión en solución fisiológica

Caldo de enriquecimiento (1) Aislamiento en medios selectivos y diferenciales (2)

18-24 hs, 37ºC

Aislamiento en medios selectivos y diferenciales (2)

Colonias típicas (3)

TSI LIA Estría

18-24 hs, 37ºC

1er. día

2do. día

3er. día

FIGURA 1.- FLUJOGRAMA DE AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE

SALMONELLA spp. A PARTIR HECES

Camino II Camino I

Lectura (4)Colonias típicas (3)

TSI LIA Estría

P. bioq. (5)

Serotip. O (6)

CaldoFlagelar

Lectura (4)

P. bioq. (5)

Serotip. O (6)

18-24 hs, 37ºC

Lectura Serotip. H

3er. día

4to. día

•1- Caldo selenito

•2- Agar MacConkey y agar SS, o agar Hektoen, o agar xilosa lisina desoxicolato, o agar verde brillante. .3- Se seleccionan de 2 a 3 colonias.

•4- Si TSI y LIA dan resultados compatibles con Salmonella, se siembran Pruebas bioquímicas complementarias (P.bioq.) y se realiza la serotipificación O (Serotip. O)•5- Pruebas bioquímicas complementarias: RM-VP, decarboxilasas, dulcita, malonato.

•6- Serotipificación. Si la serotipificación somática O de las colonias, la serotipificación flagelar H debe hacerse en una sola de ellas.

PCR Múltiple para Ag somáticos y flagelares

Características bioquímicas de Salmonella spp. para la

identificación

� Bacilos Gram negativos, no fermentadores de lactosa.

� Son móviles por medio de flagelos perítricos con excepción

de Salmonella Pullorum y Salmonella Gallinarum.

� Fermentan glucosa con producción de ácido y gas � Fermentan glucosa con producción de ácido y gas

(exc . S. Typhi). También fermentan L-arabinosa, maltosa, D-manitol,

D-manosa, L-ramnosa, D-sorbitol, trehalosa, D-xilosa y D-dulcita.

� Son oxidasa negativo, catalasa positivo, indol y Voges-

Proskauer (VP) negativo y Lisina decarboxilasa, Rojo de Metilo

(RM), citrato de Simmons positivo, urea negativo y producen SH2.

ONPG -Producción de SH2 +Fermentación de glucosa *** +/con gasFermentación de dulcita *** +

Pruebas bioquímicas de Pruebas bioquímicas de Salmonella Salmonella entericaenterica

subespsubesp. . entericaenterica (I)(I) (a partir de Medios selectivos y diferenciales : (a partir de Medios selectivos y diferenciales :

agar XLD, agar SS, colonias típicas en TSA, agar XLD, agar SS, colonias típicas en TSA, TSI :K/A c /SHTSI :K/A c /SH22 e LIA: K/K)e LIA: K/K)

Pruebas bioquímicas Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Fermentación de lactosa *** -

Fermentación de dulcita *** +Fermentación de adonita *** -Decarboxilación de lisina ** +Decarboxilación de ornitina ** +Hidrólisis de arginina ** +Hidrólisis de urea ** -Producción de indol -Hidrólisis de gelatina **** -Reacción de rojo de metilo * +Reacción de Voges Proskauer * -Citrato de Simmons ** +Utilización de malonato * -*Lectura a los 2 días; ** Lectura hasta los 4 días; *** Lectura hasta los 7 días; **** Lectura hasta los30 días

Pruebas

bioquímicas

S.

enterica

subesp.

Enterica

(I)

S.

enterica

subesp.

salamae

(II)

S.

enterica

subesp.

arizonae

(IIIa)

S. enterica

subesp.

diarizonae

(IIIb)

S.

enterica

subesp.

houtenae

(IV)

S.

enterica

subesp.

indica

(VI)

S.

bongori

(V)

Dulcita + + - - - d +

ONPG - - + + - d +

Malonato - + + + - - -

Propiedades bioquímicas diferenciales de Propiedades bioquímicas diferenciales de las subespecies de las subespecies de Salmonella Salmonella sppspp..

Malonato - + + + - - -

Gelatina - + + + + + -

Sorbita + + + + + - +

KCN - - - - + - +

L(+) tartrato + - - - - - -

Mucato + + + - (70%) - + +

Salicina - - - - + - -

Lactosa - - - (75%) + (75%) - d -

Habitat de

las cepas

Animales

de sangre

caliente

Animales de sangre fría y medio ambiente

+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos; d: diferentes

reacciones

Caracteres bioquímicos diferenciales entre

S. Typhi, S. Paratyphi A y Salmonella spp.

P. bioquimicas S. Typhi S. ParatyphiA

Salmonellaspp.

SH2 (TSI) Trazas - +

Lisina decarboxilasa + - +Lisina decarboxilasa + - +

Ornitinadecarboxilasa

- + +

Arginina dehidrolasa - - +

Gas de glucosa - + +

Citrato Simmons - - +

+ 90% ó más de los resultados positivos;- 90% ó más de los resultados negativos


Salmonella enterica subesp. enterica (I) y

Proteus mirabilis (TSI: K/A con SH2; LIA:desaminado)

Pruebas bioquímicas Salmonella enterica subesp.enterica (I)

Proteus mirabilis

SH (TSI) + +SH2 (TSI) + +Hidrolisis de urea - +Fenilalanina deaminasa - +Lisina decarboxilasa + -Ornitina decarboxilasa + +Lactosa - -Dulcita + -ONPG - -+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos


Salmonella enterica subesp. enterica (I) y

Citrobacter freundii (TSI: A/A con SH2; LIA: K/A)


Citrobacter freundii

SH2 (TSI) + +

Hidrólisis de urea - D



SH2 (TSI) + +

Hidrólisis de urea - DHidrólisis de urea - DLisina decarboxilasa + -Ornitina decarboxilasa + dLactosa - dSacarosa - dDulcita + dMalonato - dONPG - ++ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos; d: diferentesreacciones

Hidrólisis de urea - DLisina decarboxilasa + -Ornitina decarboxilasa + dLactosa - dSacarosa - dDulcita + dMalonato - dONPG - ++ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos; d: diferentesreacciones


Salmonella enterica subesp. IIIa y IIIb y

Citrobacter freundii (TSI c/SH2 y ONPG +)

Pruebas bioquímicas Salmonella subesp. entericaIIIa y IIIb


Lisina decarboxilasa + -Ornitina decarboxilasa + - (con excepciones)Ornitina decarboxilasa + - (con excepciones)Glicerol - +Malonato + -Hidrólisis de gelatina + (lenta) -+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos


Salmonella enterica subesp. enterica (I),

Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

P. bioquímicas S. enterica subesp.enterica (I)

E. tarda E. coli SH2 +

Indol - + +Citrato Simmons + - -Citrato Simmons + - -Lisina decarbox. + + +Arginina dehidrol. + - -/+Manita + - +Dulcita + - +/-Ramnosa + - +Xilosa + - +ONPG - - +

+ 90% ó más de los resultados positivos; - 90% ó más de los resultados negativos

ANTIGENOS DEL GENERO ANTIGENOS DEL GENERO SalmonellaSalmonella� El estudio de la estructura antigénica del género Salmonella

permite tipificar las bacterias que lo componen en serovariedades

� Desde epidemiología permite determinar la prevalencia de

una serovariedad en distintas zonas geográficas.

Es de utilidad en el estudio de brotes

* La serotipificación completa se basa en la determinación de los

antígenos somáticos O, los antígenos flagelares H y el antígeno

capsular Vi (si está presente).

“Esquema de Kauffmann-White – Le Minor ” (Popoff, M.Y., 8ª Ed, WHO

Centre for Referente and Research on Salmonella, Instituto Pasteur, París, Francia, 2001).

Localización de los antígenos de Localización de los antígenos de Salmonella Salmonella sppspp..

PilusPilus

CitoplasmaCitoplasma

CápsulaCápsulaAg ViAg Vi

Pared celularPared celularMembrana Membrana plasmáticaplasmática

ADNADNRibosomasRibosomas

Flagelo Flagelo bacterianobacterianoAg Ag flagelarflagelar HH

Ag Ag somáticosomático OO

1 - Antisueros polivalentes somáticos: OS-A y OS-B

2.-Para revertir una cepa de la forma rugosa a lisa, se realizan subcultivos en agar sangre o Mueller Hinton.

3.- Ver Consideraciones a tener en cuenta en "Serotipificación somática"

4.-Antisueros polivalentes

Flujograma de Serotipificacion de SSalmonella spp.Aislamiento con identificación bioquímicas de Salmonella spp.

Serotipificación somática Estría en TSA Serotipificación flagelar(aglutinación en lámina) (aglutinación en tubo)

Aglutinación con solución fisiológica Caldo flagelar

Negativa Positiva Aglutinación c/ antisuerospoliv. flagelares H (4)

4.-Antisueros polivalentes flagelares: HS-1; HS-A; HS-B; HS-C

5.-Ver Consideraciones a tener en cuenta en "Serotipificación flagelar”.

6. Si la serovariedad de Salmonella es difásica y sólo expresa una fase, realizar "Método de inversión de fases"

Aglutinación c/ Cepa Rugosa (2)antisueros poliv. Negativa (5) Positiva

somáticos (1)

Aglutinación c/ antisueros Negativa (3) Positiva de fases H / factores H (6)

Aglutinación c/ antisueros Formula antigénica H

de grupo O

Positiva

Aglutinación c/ antisuerosde factores O

Formula antigénica O

Inversión de Fase (Si es necesario)

Formula Antigénica

Esquema de White-Kauffmann-Le MinorRESULTADO FINAL

I.I.-- Antígeno somático OAntígeno somático OEXPRESIÓN DEL ANTIGENO OEXPRESIÓN DEL ANTIGENO O

La estructura somática se denomina con la letra O seguida La estructura somática se denomina con la letra O seguida de de : : “dos puntos” y luego de números arábigos separados “dos puntos” y luego de números arábigos separados por comaspor comasPor ejemplo:Por ejemplo:

S. S. TyphimuriumTyphimurium O:O:11,4,[5],12,4,[5],12S. S. EnteritidisEnteritidis O:O:11,9,12,9,12S. S. EnteritidisEnteritidis O:O:11,9,12,9,12

Los Los símbolos para los factores somáticos determinados por conversión símbolos para los factores somáticos determinados por conversión fágicafágicaestán subrayados (por ej. están subrayados (por ej. 11,9,12),9,12)[ ] = los factores O entre corchetes, no subrayados, pueden estar presentes o [ ] = los factores O entre corchetes, no subrayados, pueden estar presentes o ausentes sin relación con la conversión ausentes sin relación con la conversión fágicafágica. Por ej. factor [5] del grupo O:4 . Por ej. factor [5] del grupo O:4 (B).(B).

Estructura antigénica O + Estructura antigénica HEstructura antigénica O + Estructura antigénica H

Fórmula antigénica Fórmula antigénica (Esquema de (Esquema de KauffmannKauffmann--White) White)

Unas pocas serovariedades de Salmonella spp. poseen una sola fase

flagelar, esos aislamientos se denominan monofásicosEjemplo: Salmonella Enteritidis ( 9,12:g,m:- )

Salmonella Typhi ( 9,12 [Vi]:d:- )

II.II.-- ANTÍGENO FLAGELAR HANTÍGENO FLAGELAR HEXPRESIÓN DEL ANTÍGENO H EXPRESIÓN DEL ANTÍGENO H

La gran mayoría de las serovariedades tienen dos especificidades o dos fases en su antígeno flagelar o sea son aislamientos difásicos. En el Esquema de White- Kauffmann – Le Minor , ambas fases separadas por :

“dos puntos”Ejemplo: Salmonella Typhimurium ( 4,5,12:i:1, 2)

Estructura antigénica O + Estructura antigénica H

Fórmula antigénica (Esquema de Kauffmann-White)

Ejemplo: Salmonella Typhimurium ( 4,5,12:i:1, 2) Salmonella Newport ( 6,8:e,h:1,2 )

1.- La fase 1 (identificada en los ej. por las fases: i ó e,h se denominan con letras separadas por comas) 2.- La fase 2 (identificada en los ej. por las fases: 1,2 se denominan con números arábigos o letras separados por comas ).

[ ] = Cuando los factores H están entre corchetes se encuentran excepcionalmente en cepas salvajes.

VARIACION DE FASEVARIACION DE FASE

Es la variación reversible de los antígenos H.

Ocurre en el género Salmonella (Fase 1 y Fase 2)

VARIACIONES FLAGELARESVARIACIONES FLAGELARES

Ocurre en el género Salmonella (Fase 1 y Fase 2)

La gran mayoría de las serovariedades son difásicas:

pueden expresar alternativamente antígenos

flagelares de dos especificidades.

FlujogramaFlujograma de Inversión de Fasede Inversión de FaseSerotipificaciónSerotipificación somática O (O: 4,5,12)somática O (O: 4,5,12)

Si la población expresa flagelos de fase 1 (H:i)

Si la población está balanceada Fase 1 (H:i) y Fase 2 (H:1,2)

Serotipificación flagelar H

Si la población expresa flagelos de fase 2 (H:1,2)

Fórmula antigénica: O:4,5,12 H:i:1,2 (Esquema de Kauffmann-White- Le Minor )

Salmonella Typhimurium

Inversión de fase con antisuero H:i

Se inmoviliza la Fase 1 y se expresa fase 2

Inversión de fase con antisuero H:1,2

Se inmoviliza la Fase 2 y se expresa fase 1

Método de Inversión en Placa de Método de Inversión en Placa de AgarAgar Movilidad (Movilidad (SwarmSwarm AgarAgar))

Siembra del inóculo

Recolección del desarrollo

Agar movilidad (Swarm Agar) + 2 gotas de Antisuero para Inversión de Fase

Método de Inversión en Método de Inversión en Tubo Tubo de de CraigieCraigie

Siembra del Inóculo

Recolección del desarrollo

Agar movilidad Craigie + 2 gotas de Antisuero

para Inversión de Fase

Antisueros Antisueros para el diagnóstico de Enterobacterias para el diagnóstico de Enterobacterias distribuídosdistribuídos por la ANLIS a las Redes de Diarreas por la ANLIS a las Redes de Diarreas

BacterianasBacterianas

Salmonella

Antisueros Somáticos Antisueros Flagelares

Polivalentes Factores Polivalentes Factores Inversión de fase

OSA-OSB O4,5-O9-O7 HSA-HSB-HSC-HS1 Hm-Hi-Hr-H2-H5 Hi-Hr-H1

� Carga de los aislamientos de Salmonella en Red Whonet a nivel� Carga de los aislamientos de Salmonella en Red Whonet a nivelde grupo según el esquema de KAUFFMANN-WHITE-LE MINOR (códigos asignados ) y serotipificación completa:

grb: Salmonella Grupo B (O:4). Ej: S. Typhimurium (sam)

gc1: Salmonella Grupo C1 (O:7). Ej: S. Infantis (inf)

gc3: Salmonella Grupo C3 (O:8). Ej: S. Newport (sne)

gd1: Salmonella Grupo D1 (O:9) Ej: S. Enteritidis (sen)

Polivalente Factor Inversión de fase (si corresponde)

(-)

(-)

OSA (+) O4,5 (+) Compatible con S. Typhimurium,

evaluar antígenos flagelares Grupo O4

O9 (+) Compatible con S. Enteritidis,


OSB (+) O7 (+) Compatible con S. Infantis,


(-)

O8 (+) Compatible con S. Newport,


FLUJOGRAMA DE ANTISUEROS

Aglutinación antígenos somáticos

Aglutinación antígenos flagelaresAntisueros polivalentes = HSA, HSB, HSC, HS1.

Antisueros factores = H:i, H:h, H:m, H:r, H:2, H:5

PCR m: B�� O:4C1�� O:7C2�� O:8D�� O:9E�� O:3,10

HSA (+) H:i (+) repetir esquema ag.

flagelares inversión de fase con

antisueros de inversión H:i

HSB (+) H:h (+) repetir esquema ag.


antisueros de inversión

H:e,h

H:m (+)

HSC (+) H:r (+) repetir esquema ag.


antisueros de inversión H:r

repetir esquema ag.


antisueros de inversión H:1

repetir esquema ag.


antisueros de inversión H:1 H:2 (+) HS1 (+)

H:5 (+)

Antisueros factores = H:i, H:h, H:m, H:r, H:2, H:5

Antisueros para Inversión de fase: H:i, H:e,h, H:r , H:1

PCR m flagelares : H:iH:rH:l,vH:e,hH:z10H:bComplejo G:

PrimeraPrimera parte: parte: ImplementaciónImplementación

PCR PCR grupogrupo “O“O”” ( CDC( CDC-- InstInst Salud Carlos III )Salud Carlos III )

**TesteoTesteo de los de los gruposgrupos: : dirigidadirigida a los genes a los genes wzxwzx encontradaencontrada

en en todostodos los genes O de los genes O de laslas SalmonellasSalmonellas testeadastesteadas, ,

se se diferenciandiferencian entre entre ellasellas porpor algunosalgunos pares de pares de nucleótidosnucleótidos

�� BB�� O:4O:4 (F(F--wzxBwzxB, R, R--wzxBwzxB))

�� C1C1�� O:7O:7 (F(F--wzxC1, RwzxC1, R--wzxC1)wzxC1)

�� C2C2�� O:8O:8 (F(F--wzxC2, RwzxC2, R--wzxC2)wzxC2)

�� DD�� O:9O:9 (F(F--tyvDtyvD, R, R--tyvDtyvD))

�� EE�� O:3,10O:3,10 (F(F--wzxE1, RwzxE1, R--wzxE1)wzxE1)

Primer parte: PCR Primer parte: PCR parapara

antígenosantígenos somáticossomáticos�� Se divide en dos:Se divide en dos:

1.1. PCR “Multiplex” PCR “Multiplex”

gruposgrupos: O:4; O:9; O:8 : O:4; O:9; O:8 Paso 1 94ºC 2min

Paso 2 95ºC 1min

Ciclado de la reacción

gruposgrupos: O:4; O:9; O:8 : O:4; O:9; O:8

y O:3,10y O:3,10

2.2. ““SingleplexSingleplex” ” grupogrupo

O:7O:7

Paso 2 95ºC 1minPaso 3 58ºC 1min 30 ciclosPaso 4 72ºC 2minPaso 5 72ºC 7min

Paso 6 4ºC ---

CT(-)

SelecciónSelección de de controlescontroles

�� SeSe seleccionaronseleccionaron dede cadacada grupogrupo 33 aa 44 controlescontroles positivospositivos yy

22 controlescontroles negativosnegativos,, pertenecientespertenecientes alal EQASEQAS yy dede lala coleccióncolección dedecultivocultivo deldel ServicioServicio dede ETBETB..

CONTROLES PCR Salmonella 1er parte:

Rótulo Aislamiento

GRUPO (B) O:4

CT3 STM

S. Typhimurium EQAS 2014

CT9 SDER S. Derby 3.2 EQAS 2002

CT1SAGN S.Agona 291/14

CT13SSAN

GRUPO €O:3,10

CT20 SANA S. Anatum 332/14

CT19 SWEST S. Westhampton 521/14

CT21 SGIV S. Give Who 5.1 EQAS 2004

CT10 SE S. Enteritidis EQAS 2014CT13SSAN

D S. Sandiego 1261/14

GRUPO (C1) O:7

CT15 SINF S. Infantis EQAS 2001

CT16 SMBAN

S. Mbandaka Who 5,7 EQAS 2004

CT7 SBRAND

S. Braenderup CDC H9812

CT5 SOHI S. Ohio EQAS 2014

GRUPO (C2) O:8

CT12 SNEW S. Newport EQAS 2001

CT4 SHAD S. Hadar EQAS 2014

CT6 SKEN S. Kentucky EQAS 2014

CT17 SCOR

S. Corvalis Who 5.6 EQAS 2004

Grupo (D) 0:9

CT11 SPAN S. Panama EQAS 2003

CT14 SDUB S.Dublin EQAS 2001

CT2 SGALL S. Gallinarum 421/14

CT -

CT18 SCER S. Cerro Who4.5 EQAS 2003

CT8 SWORT S. Worthington 867/14

SegundaSegunda Parte: Parte: ImplementaciónImplementación PCR PCR

fasefase flagelarflagelar II

DirigidosDirigidos a los genes a los genes flifliCC queque codificancodifican laslas flagelinasflagelinasde la de la fasefase I. I.

�� Primers ReversePrimers Reverse: r, I, : r, I, lvlv, G, z10, , G, z10, SdfSdf, eh, b y d., eh, b y d.

�� Primers ForwardPrimers Forward: P60, G, : P60, G, SdfSdf y d.y d.

�� Primers Primers SdfSdf: : específicosespecíficos de de SS. . EnteritidisEnteritidis

�� H:iH:i�� H:iH:i

�� H:rH:r

�� H:l,vH:l,v

�� H:e,hH:e,h

�� H:z10H:z10

�� H:bH:b

�� ComplejoComplejo GG: f, g, m, p, s, t, q, u, m, t (no g), z51, z62, : f, g, m, p, s, t, q, u, m, t (no g), z51, z62, z63 y z85.z63 y z85.

Ensayos de PCR estandarizados para Salmonella spp. aplicado en muestras

Nombre de la

TécnicaBlanco Método Tipo de muestra Requerimientos.

Tiempo de

procesamiento

Especificidad/

Sensibilidad

PCR

invA ( factor de

invasividad a nivel

cromosomal).

PCR simple

Prueba de tamizaje

con CIA para aplicar

en muestras de

alimentos

Muestras de

alimento y

aislamiento?

Detección en

muestras de

alimentos, previo

enriquecimiento en

APT, luego de 18 h de

incubación a 37°C

E: 100%

Recientemente se

observó que

algunas cepas de

la serovariedad

Saintpaul no

poseen el gen Salmonella spp. cromosomal).

(Malorny et al,2003)

poseen el gen

invA) (Malorny y

col., 2004)

S: 1 UFC / 25 g,

103 UFC en tubo

de reacción

PCR Real Time

para Salmonella

spp.ttr (metabolismo

respiratorio)

( Malorny et al, 2004)

PCR Real Time

Prueba de tamizaje

Muestras de

alimento

Detección en

muestras de

alimentos, previo

enriquecimiento en

APT, luego de 18 h de

incubación a 37°C

E: 100%

� PCR permite un diagnóstico presuntivo rápido, específico y confiable ,compatible con las necesidades diagnósticas, a confirmar con el aislamiento del microorganismo .

� Ensayo de PCR que incluye un IAC para detectar fallas en amplificación.( Malorny, 2003) . Trabajo colaborativo de

Aplicación de PCR “screening “ o tamizaje en muestras

amplificación.( Malorny, 2003) . Trabajo colaborativo de Enterobacterias- INEI “C.G.Malbrán”- Dirección de Higiene y Seguridad Alimentaria del Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires

� Herramienta alternativa útil para descarte de las muestras negativas a nivel de la industria alimentaria y monitoreo de muestras .

� En desarrollo� Implementación de una PCR para serotipificación de Salmonella (Herrera L; JCM 2004,Research M, 2007, Inst Salud Carlos III );

incluyendo las serovariedades más frecuentes: * PCR para antígenos somáticos (O) y flagelares (1ra y 2da fase):

STM, SE, SN, SINF, STM, SE, SN, SINF, STM, SE, SN, SINF, STM, SE, SN, SINF, SSSS. . . . AgonaAgonaAgonaAgona, , , , S S S S Mbandaka, Mbandaka, Mbandaka, Mbandaka, SSSS Montevideo, Montevideo, Montevideo, Montevideo, SSSS AnatumAnatumAnatumAnatum, , , , SSSS Derby, Derby, Derby, Derby, S S S S OranienburgOranienburgOranienburgOranienburg y otrasy otrasy otrasy otras

� Se utilizará como técnica alternativa, y validada como

“screening” de serotipificación en LRN y a transferir a

laboratorios de la RND

� Desde LRN , secuenciación genómica , en aislamientos

de brotes y/ó cepas emergentes con nuevas características

de virulencia y/ó resistencia.

Figura - Diarreas bacterianas, agentes identificados

por semana epidemiológica 2014. N=6200. Argentina.

VigilanciaVigilancia enen ArgentinaArgentina

Fuente: SIVILA.

Figura 6 a.- Casos positivos para distintos

géneros bacterianos según serotipos y serogrupos,

notificados en el agrupado. Total país. SE 1 a 53 de 2014.

SIVILA

Se notificaron al LRN 2009 al 2014:

* Aislamientos esporádicos de casos humanos, de alimento, alimento paraanimales, animal y ambiental.

• Brotes: 16 de Salmonella Typhimurium (STM)

9 de Salmonella Enteritidis (SE)

2 de Salmonella Chester

1 de Salmonella Heidelberg (intrahosp)

1 de Salmonella Typhimurium (intrahosp)

� De los brotes estudiados, se aisló Salmonella spp. de los

pacientes y del alimento elaborados: pacientes y del alimento elaborados: salame, canelones de verdura y carne,

milanesa de pollo, pernil de vaca y en domicilios familiares tiramisú, torta, vitel

toné, ensalada rusa, mouse.

� 2011 Estudio prospectivo para detección temprana de brotes en

colaboración con la Univ Harvard, USA en 6 provincias de la región

centro-sur con el software SaTScan- plataforma WHONET.

Se registró un aumento en el n de brotes

microorganismo derivado (RND)

Total (n)

Shigella 60 15S. flexneri 1 (2), S. flexneri 2 (2), S. flexneri 3 (4), S. flexneri AA479 (3). 23 S. flexneri 2 19 (1 E. coli ), 3 no viables

Serotipificación obtenida (n) No Serotipificado / Incorrecta serotipificación

Tabla. Análisis de los aislamientos recibidos en el LRN en 2014 del LCSP de Chaco

Análisis de la vigilancia desde el LRN de los aislamientos de Salmonella y Shigella del LCSP del Chaco en el marco de la RND

S. flexneri 3 (4), S. flexneri AA479 (3). S. sonnei (4)

Salmonella 22 12 S. Typhimurium (1), S. Enteritidis (8), S. Newport (3)

8 Salmonella spp.1 1 (S . Braenderup), 1 no viable

Salmonella spp.1: S. Javiana, S. Derby, S. Newport, S. Panama, S. Ohio, S. Arechavaleta.

S. flexneri2 : S. flexneri AA479 (15); S. flexneri Y (3), S. flexneri X (1), S. flexneri 1 (3), S. flexneri 3 (1).

Ejemplos de aplicación de Ejemplos de aplicación de

Epidemiología MolecularEpidemiología Molecular

en vigilancia de ETAen vigilancia de ETAen vigilancia de ETAen vigilancia de ETA

Aplicación de PFGE en el marco Aplicación de PFGE en el marco

de la Red de la Red PulseNetPulseNet Internacional Internacional St St St

St: cepa estándard

BROTES de BROTES de Salmonella Salmonella EnteritidisEnteritidis en en Argentina Argentina

Número de Provincia Localidad Sitio de Origen Patrón Fagotipo

Aislamiento Aislamiento Nacional

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1 .5%) (H>0 .0% S>0 .0%) [0.0%-100.0%]PFGE-Xba I

100

95

90

PFGE-XbaI

SE645/05

SE767/04

SE1702/04

SE1703/04

SE1704/04

SE1705/04

SE1706/04

SE1707/04

SE1850/04

SE1851/04

SE1852/04

SE1853/04

Mendoza

Buenos Aires

Tierra del Fue.

Tierra del Fue.

Tierra del Fue.

Tierra del Fue.

Tierra del Fue.

Tierra del Fue.

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Mendoza

La Plata

Ushuaia

Ushuaia

Ushuaia

Ushuaia

Ushuaia

Ushuaia

San Miguel de Tucu.

San Miguel de Tucu.

San Miguel de Tucu.

San Miguel de Tucu.

Stool

Sandwich

Pasta

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Mayonnaise

Mayonnaise

Stool

Stool

Human

Food

Food

Human

Human

Human

Human

Human

Food

Food

Human

Human

ARJEGX01.0013

ARJEGX01.0010

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

SE type 21

SE type 21

SE type 21

SE type 21

SE type 21

SE type 21

SE type 4

SE type 4

SE type 4

SE type 4

Brote 1

Brote 2

SE1853/04

SE1876/04

SE1877/04

SE1878/04

SE1881/04

SE532/05

SE617/06

SE1224/05

SE1225/05

SE762/04

SE1075/06

SE1874/04

SE1875/04

SE144/73

SEAlbis/72

SE168/04

SE2092/07

SE1064/07

SE1023/90

Tucumán

Buenos Aires

Mendoza

Mendoza

Mendoza

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Cordoba

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Neuquen

Cordoba

Buenos Aires

San Miguel de Tucu.

Buenos Aires

Mendoza

Mendoza

Mendoza

Bahía Blanca

Capital Federal

San Justo

San Justo

Balcarce

Cordoba

Buenos Aires

Buenos Aires

Capital Federal

Capital Federal

Neuquen

Cordoba

Capital Federal

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Blood

Blood

Egg

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Human

Human

Human

Human

Food

Human

Human

Human

Human

Food

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0001

ARJEGX01.0014

ARJEGX01.0014

ARJEGX01.0005

ARJEGX01.0005

ARJEGX01.0012

ARJEGX01.0011

ARJEGX01.0011

ARJEGX01.0011

ARJEGX01.0003

ARJEGX01.0003

ARJEGX01.0009

ARJEGX01.0023

ARJEGX01.0024

ARJEGX01.0002

SE type 4

SE type 4

SE type 4

SE type 4

SE type 4

SE type 4

SE type 4

Brote 3

Brote 4

BROTES Salmonella Typhimurium

Brote A

10

0

95

9085

80

STM1205/05

STM1865/05

STM1676/05

STM1734/05

STM1735/05

STM1736/05

STM1737/05

STM1738/05

STM1739/05

STM1740/05

STM1741/05

STM121/06

STM3069/98

STM2216/98

Rio Negro

Tucumán

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

Buenos Aires

Buenos Aires

Mendoza

Viedma

San Miguel de Tucum.

25 de Mayo

25 de Mayo

25 de Mayo

Santa Isabel

Santa Isabel

Santa Isabel

Santa Isabel

Santa Isabel

25 de Mayo

Gran Buenos Aires

La Plata

Mendoza

Materia Fecal

Materia Fecal

Queso de cerdo

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Queso de cerdo

Queso de cerdo

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Humano

Humano

Alimento

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Alimento

Alimento

Humano

Humano

Humano

Nº de Aislamiento

Provincia Localidad Sitio de Aislamiento

Origen

Brote A

10

0

95

9085

80

STM1205/05

STM1865/05

STM1676/05

STM1734/05

STM1735/05

STM1736/05

STM1737/05

STM1738/05

STM1739/05

STM1740/05

STM1741/05

STM121/06

STM3069/98

STM2216/98

Rio Negro

Tucumán

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

Buenos Aires

Buenos Aires

Mendoza

Viedma


25 de Mayo

25 de Mayo

25 de Mayo

Santa Isabel

Santa Isabel

Santa Isabel

Santa Isabel

Santa Isabel

25 de Mayo

Gran Buenos Aires

La Plata

Mendoza

Materia Fecal

Materia Fecal

Queso de cerdo

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Queso de cerdo

Queso de cerdo

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Humano

Humano

Alimento

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Alimento

Alimento

Humano

Humano

Humano

Nº de Aislamiento


Origen

10

0

95

9085

80

STM1205/05

STM1865/05

STM1676/05

STM1734/05

STM1735/05

STM1736/05

STM1737/05

STM1738/05

STM1739/05

STM1740/05

STM1741/05

STM121/06

STM3069/98

STM2216/98

Rio Negro

Tucumán

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

La Pampa

Buenos Aires

Buenos Aires

Mendoza

Viedma


25 de Mayo

25 de Mayo

25 de Mayo

Santa Isabel

Santa Isabel

Santa Isabel

Santa Isabel

Santa Isabel

25 de Mayo

Gran Buenos Aires

La Plata

Mendoza

Materia Fecal

Materia Fecal

Queso de cerdo

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Queso de cerdo

Queso de cerdo

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Humano

Humano

Alimento

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Alimento

Alimento

Humano

Humano

Humano

Nº de Aislamiento


Origen

Brote en la

comunidad

STM2216/98

STM1018/05

STM10/06

STM149/06

STM1256/05

STM1592/05

STM1354/05

STM1612/05

STM278/02

STM1080/05

STM1319/04

STM607/06

STM608/06

STM609/06

STM610/06

STM611/06

STM612/06

STM613/06

Mendoza

Buenos Aires

Buenos Aires

La Pampa

Santa Fe

Corrientes

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Mendoza

Gran Buenos Aires

Azul

Santa Rosa

Rafaela

Corrientes

Azul

Azul

La Plata

Capital Federal

Azul

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Humano

Ambiental

Animal

Humano

Humano

Humano

Animal

Animal

Humano

Humano

Animal

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Brote B

STM2216/98

STM1018/05

STM10/06

STM149/06

STM1256/05

STM1592/05

STM1354/05

STM1612/05

STM278/02

STM1080/05

STM1319/04

STM607/06

STM608/06

STM609/06

STM610/06

STM611/06

STM612/06

STM613/06

Mendoza

Buenos Aires

Buenos Aires

La Pampa

Santa Fe

Corrientes

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Mendoza

Gran Buenos Aires

Azul

Santa Rosa

Rafaela

Corrientes

Azul

Azul

La Plata

Capital Federal

Azul

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Humano

Ambiental

Animal

Humano

Humano

Humano

Animal

Animal

Humano

Humano

Animal

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

STM2216/98

STM1018/05

STM10/06

STM149/06

STM1256/05

STM1592/05

STM1354/05

STM1612/05

STM278/02

STM1080/05

STM1319/04

STM607/06

STM608/06

STM609/06

STM610/06

STM611/06

STM612/06

STM613/06

Mendoza

Buenos Aires

Buenos Aires

La Pampa

Santa Fe

Corrientes

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Tucumán

Mendoza

Gran Buenos Aires

Azul

Santa Rosa

Rafaela

Corrientes

Azul

Azul

La Plata

Capital Federal

Azul

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Faimallá

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Materia Fecal

Humano

Ambiental

Animal

Humano

Humano

Humano

Animal

Animal

Humano

Humano

Animal

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Humano

Brote B

Brote

familiar

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1 .5%-1 .5 %) (H>0 .0% S>0.0% ) [0 .0%-100 .0 %]

PFGE-XbaI

100

PFGE -XbaI

STM1399/14

STM1409/14

STM1410/14

STM1411/14

STM1412/14

Rosario

Rosario

Rosario

Rosario

Rosario

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Human

Human

Human

Human

Human

2014-07 -19

2014-09 -21

2014-09 -26

2014-09 -26

2014-09 -29

A RJPXX01.0344

A RJPXX01.0344

A RJPXX01.0344

A RJPXX01.0344

A RJPXX01.0344

NºAislamiento Ciudad Origen F. aislamiento Patrón XbaI

Salmonella enterica ser. Typhimurium con el mismo perfil de resistencia, sospecha de brote intrahospitalariojulio- setiembre- octubre 2014

100% de similitud

STM1413/14

STM1414/14

STM1415/14

STM1416/14

Rosario

Rosario

Rosario

Rosario

Stool

Stool

Stool

Stool

Human

Human

Human

Human

2014-09 -29

2014-10 -06

2014-10 -06

2014-09 -26

A RJPXX01.0344

A RJPXX01.0344

A RJPXX01.0344

A RJPXX01.0344

� En el análisis con la enzima primaria XbaI se observó un único perfil genético y nuevo en la Base de Datos Nacional (BDN) de Salmonella spp

Figura 1. Dendograma de relación genética con la enzima primaria XbaI analizado con el coeficiente Dice de los 9 aislamientos S. Typhimuriumasociados a la sospecha de brote intrahospitalario de la ciudad de Rosario.

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-BlnI

100

PFGE-BlnI

STM1411/14

STM1412/14

STM1409/14

STM1410/14

STM1399/14

2014-09-26

2014-09-29

2014-09-21

2014-09-26

2014-07-19

ARJPXX01.0344

ARJPXX01.0344

ARJPXX01.0344

ARJPXX01.0344

ARJPXX01.0344

ARJPXA26.0020

ARJPXA26.0020

ARJPXA26.0021

ARJPXA26.0021

ARJPXA26.0022

Figura 2. Dendograma de relación genética con la enzima secundaria BlnI analizado con el coeficiente Dice de 5 de los 9 aislamientosS. Typhimurium asociados a la sospecha de brote intrahospitalario de la ciudad de Rosario.

93% de similitud

�� Las IH prolongan la estadía del paciente en el hospital, Las IH prolongan la estadía del paciente en el hospital, contribuyen al incremento de costos y a la contribuyen al incremento de costos y a la emergencia y emergencia y diseminación a la comunidad de resistencia a los diseminación a la comunidad de resistencia a los antimicrobianosantimicrobianos..

�� El hallazgo de El hallazgo de SalmonellaSalmonella spp. spp. si si persiste persiste indica indica la la importancia de sostener importancia de sostener las medidas de prevención y las medidas de prevención y importancia de sostener importancia de sostener las medidas de prevención y las medidas de prevención y control en el hospitalcontrol en el hospital..

�� PFGE PFGE permitió la confirmación de estos brotespermitió la confirmación de estos brotes, , evaluar evaluar la persistencia de subtipos genéticos la persistencia de subtipos genéticos para para tomar medidas de prevención y evaluar la diseminación tomar medidas de prevención y evaluar la diseminación de estas cepas en la de estas cepas en la comunidad.comunidad.

Estudio epidemiológico de la provincia de Estudio epidemiológico de la provincia de

Neuquén Neuquén Brote de Brote de S.S. Typhimurium Typhimurium

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-XbaI10

0PFGE-XbaI

STM293/13

STM294/13

STM295/13

STM296/13

STM297/13

STM298/13

STM299/13

STM300/13

STM301/13

Hosp Castro Rendon

Hosp Castro Rendon

Hosp Castro Rendon

Hosp Castro Rendon

Hosp Castro Rendon

Hosp Castro Rendon

Hosp Castro Rendon

Hosp Castro Rendon

Hosp Castro Rendon

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

2013-03-15

2013-03-15

2013-03-15

2013-03-15

2013-03-15

2013-03-15

2013-03-15

2013-03-15

2013-03-15

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

Nº Aislamiento Procedencia Ciudad Origen Fecha Patrón PFGE XbaI

Brote de S. Typhimurium en Neuquén.Evento festivo en Marzo 2013 con Estudio de Epidemiología y alimento por Bromatología

STM301/13

STM302/13

STM411/13

STM412/13

STM431/13

STM432/13

STM46/13

STM320/13

STM321/13

STM322/13

Hosp Castro Rendon

Hosp Castro Rendon

Hospital Heller

Hospital Heller

Hospital Junín de los And.

Hospital Junín de los And.

Hospital Heller

Hospital Área Cipolletti

Hospital Zatti

Hospital Zatti

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Neuquén

Junin de los A.

Junin de los A.

Neuquén

Cipolletti

Viedma

Viedma

Human

Human

Food

Food

Human

Human

Human

Human

Human

Human

2013-03-15

2013-03-15

2013-03-22

2013-03-22

2013-03-25

2013-03-25

2013-01-11

2013-03-19

2013-03-19

2013-03-19

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

ARJPXX01.0065

Figura 1. Dendograma de relación genética analizado con el coeficiente de Dice y la enzima XbaI de aislamientos de Salmonella Typhimurium aisladas de un brote de la ciudad de Neuquén y otras esporádicas de la zona que presentaron igual perfil de resistencia. Patrón electroforético con una frecuencia del 9,5% en la BDN desde 2005, asociado a brotes en la Región (2007, 2009, 2010, 2011)

Aislamientos de S. Typhimurium procedentes del brote de Neuquén.� resistencia a cefalosporinas de tercera generación debida a la producción de AMPc

plasmídico.

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]PFGE-XbaI

100

95908580

PFGE-XbaI

ST1026/02

ST250/03

ST 1617/04

ST 805/02

Salta

Salta

Buenos Aires

Buenos Aires

Salmonella Typhi (Cluster 2004)

� Entre el 31 de julio y el 6 de agosto de 2004, 3 aisl. de S. Typhi de hemocultivos de

3 pacientes procedentes de la prov. de Buenos Aires.

ST 805/02

ST 1389/04

ST 1390/04

ST1388/04

ST1713/04

ST 1309/04

ST659/01

ST 472/01

ST425/03

ST 1134/01

ST256/02

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Buenos Aires

Rio Negro

Misiones

Rio Negro

Jujuy

Cluster 2004

�La recepción en el LRN en un período tan breve de tiempo y procedentes de una misma zona resultó de interés y se estudió por PFGE

100

959085

8075

ST M1009/05

ST M2187/05

ST M141

ST M1256/05

ST M1778/05

ST M1779/05

ST M1780/05

ST M1781/05

ST M1782/05

ST M1783/05

ST M1784/05

ST M1785/05

.

.

.

.

Argentina

Argentina

Colombia

Argentina

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

2005

2005

1999

2005

2004

2004

2004

2004

2004

2004

2004

BDR(Pulsenet -América Latina y El Caribe)* Aplicación de PFGE en la identificación y monitoreo de diseminación de un clon patogénico * Aplicación de PFGE en la identificación y monitoreo de diseminación de un clon patogénico SS. . TyphimuriumTyphimurium multiresistentesmultiresistentes DT104 con el mismo perfil de resistencia AMP, C, TE, S and SXT de Costa Rica (2004-2005), Argentina (2005) y Colombia (1998-1999) de origen humano y animal

ST M1786/05

ST M1787/05

ST M1788/05

ST M1789/05

ST M1790/05

ST M1791/05

ST M121

ST M24

ST M271

ST M200

ST M1676/05

ST M1080/05

ST M1319/04

ST M1114/04

.

.

.

.

.

.

.

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

Costa Rica

Colombia

Colombia

Colombia

Colombia

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

.

.

.

.

.

.

.

.

2005

2005

2005

2005

2005

2005

1999

1998

2005

2003

2005

2005

2004

2004

�PFGE - XbaI determinó un mismo patrón entre los aislamientos de S. Typhimurium de Costa Rica y Argentina con el mismo patrón de resistencia, y 93% de similaridad con los aislamientos de Colombia con un perfil de resistencia a Amp,Te,SXT

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-XbaI

100

95

90

85

PFGE-XbaI

ARG__SE1225/05

ARG__SE1915/98

ARG__1251/07

ARG__1255/07

ARG__1256/07

ARG__1259/07

ARG__1262/07

ARG__1267/07

ARG__1280/07

ARG__1302/07

ARG__SE1222/05

ARG__SE1673/04

ARG__SE1674/04

ARG__SE1770/05

ARG__SE1852/04

ARG__SE1853/04

Argentina

Argentina

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Paraguay

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

San Justo

Buenos Aires

Itaugua

Itaugua

Itaugua

Itaugua

Itaugua

Itaugua

Itaugua

Itaugua

Paraná

San Miguel de T.

San Miguel de T.

Santa Fe

San Miguel de T.

San Miguel de T.

Blood

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

2007-10-07

2007-10-07

2007-10-08

2007-10-08

2007-10-08

2007-10-07

2007-10-08

2007-10-07

2005-02-17

.

ALJEGX01.0008

ALJEGX01.0008

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

Dendograma de aislamientos de S. Enteritidis asociadosa un brote alimentario en Paraguay en 2007.

Brote Paraguay

Aislamiento Pais Ciudad Serov. Origen Fecha aisl. Nº patrón AL

ARG__SE1853/04

ARG__SE1876/04

ARG__SE194/04

ARG__SE428/98

ARG__SE467/08

ARG__SE661/05

ARG__1304/07

ARG__SE645/05

ARG__SE672/06

ARG__SE1075/06

ARG__SE1874/04

ARG__SE1875/04

ARG__SE1981/05

ARG__SE217/05

ARG__SE1307/05

ARG__SE94/05

ARG__SE144/73

ARG__SEAlbis/72

ARG__SE168/04

ARG__SE2092/07

ARG__SE1385/88

ARG__SE1922/90

ARG__SE994/90

ARG__SE115/91

ARG__SE634/91

ARG__SE1638/90

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Paraguay

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

Argentina

San Miguel de T.

Buenos Aires

Buenos Aires

Capital Federal

Santa Fe

Santa Rosa

Itaugua

Mendoza

Junín

Cordoba

Buenos Aires

Buenos Aires

Córdoba

Mendoza

Gran Buenos Air.

Capital Federal

Capital Federal

Capital Federal

Neuquen

La Plata

Capital Federal

La Plata

Santa Fe

Capital Federal

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Stool

Blood

Stool

Stool

Stool

Stool

Human

Human

Human

Human

Food

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

Human

2008-03-12

2005-03-02

2007-10-07

2005-01-29

2005-04-04

2005-01-06

2007-11-20

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0001

ALJEGX01.0017

ALJEGX01.0003

ALJEGX01.0005

ALJEGX01.0004

ALJEGX01.0004

ALJEGX01.0004

ALJEGX01.0004

ALJEGX01.0004

ALJEGX01.0007

ALJEGX01.0006

ALJEGX01.0015

ALJEGX01.0015

ALJEGX01.0009

ALJEGX01.0010

ALJEGX01.0011

ALJEGX01.0011

ALJEGX01.0012

ALJEGX01.0013

ALJEGX01.0014

ALJEGX01.0016

Diapositiva 59

m2 Al comparar en la BDR , el patrón encontrado en Paraguay coincide con el patrón más frecuente de Argentinamrvinas, 13/02/2009

% de NS en Salmonella spp. Red WHONET-Arg Años 2010-11 (N=1.104)

60

80

100

%

2010

2011

Resistencia a antimicrobianos Resistencia a antimicrobianos –– Red WHONETRed WHONET--ARG ARG

(2010(2010--2011)2011)

0

20

40

AMP SXT NAL CIP CHL FOS CTX ESBL

Antibiótico

2011

Salmonella spp. (N=1104): se mantuvo sensible a la mayoría de los antimicrobianos, se observó un aumento en la R a ác. nalidíxico (NAL) respecto al período 2007-2008 (10.6% vs 3.8%) sin resistencia a CIP, lo que correspondería a un fenotipo de sensibilidad disminuida a fluorquinolonas.

* Fenotipos inusuales determinados en el LNR: 7 aislamientos de Salmonellaspp. con AmpC plasmídico tipo CIT y 1 Salmonella spp. con fenotipo debetalactamasa de espectro extendido CTX-M y PER.

• En caso de infecciones sistémicas se prueban las mismas drogas que • En caso de infecciones sistémicas se prueban las mismas drogas que un BGN de infección intrahospitalaria.

• Sólo se informa el antibiograma en aislamientos de Salmonella Typhi ó Paratyphi.• En los casos de infecciones causadas por Salmonella no Typhi sólo se informa si provienen de: Localizaciones Extraintestinales o Materia fecal (niños menores de 6 meses, gerontes, inmuno comprometidos y pacientes con prótesis).

- CEFPODOXIMA: marcador de R a cefalosporinas de 3era generación (C3G). Si da R se

deben probar discos de C3G, AMC y cefoxitina para confirmar BLEE ó AmpC plasmídica.Servicio ANTIMICROBIANOS

INEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran

� La vigilancia a través de RND y PTA ( H y A) y Red para la Vigilancia

de la Resistencia a los Antimicrobianos (WHONET- ARG) integrados a un

sistema multidisciplinario, a los fines de un diagnóstico microbiológico

confiable, oportuno y reproducible para:

� el mejoramiento de la atención del paciente:

en la prevención de brotes e implementación de estrategias eficientes en la prevención de brotes e implementación de estrategias eficientes

de control.

� monitorear la emergencia de nuevas cepas con potencial patogénico y

epidémico, y resistentes; sumado a

*La incorporación de técnicas moleculares de diagnóstico y

subtipificación aportan sensibilidad y especificidad para la Vigilancia

de este patógeno

¡Muchas gracias!¡Muchas gracias!¡Muchas gracias!¡Muchas gracias!

salmonella spp. características...

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