Determinacin de Salmonella spp. En alimentosFacultad de Qumica, UNAM Microbiologa de Alimentos Laboratorio, 03 Equipo 10:Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

ObjetivosA.

B.

Aplicar adecuadamente la tcnica descrita en la NOM para la deteccin del gnero Salmonella. Explicar el fundamento de todas las etapas del mtodo de deteccin de Salmonella en alimentos.

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GeneralidadesSalmonella ssp.: Bacilo Gram-negativo Anaerobio facultativo familia Enterobacteriaceae Mvil Lactosa (-) Metabolismo de va fermentativa y aerobio Produccin de cido y gas Oxidasa (-) 5/19/12 Catalasa (-)

Definicin contempornea

Salmonella tpica: Produce cido y gas a partir de la glucosa en el agar TSI No es capaz de utilizar lactosa y Clasificacin sacarosa en este medio o en medios slidos selectivos. a) Los que no tienen preferencia por algn husped en especial. b) Los que infectan slo al hombre. c) Los que estn adaptados a un husped animal. 5/19/12

Excepciones

Por variabilidad gentica: Mutaciones Intercambio intra e intergenrico de plsmidos

Se han encontrado biotipos: 5/19/12 lactosa (+) y/o sacarosa (+)

Distribucin de Salmonella spp.

Inherente a prcticas agrcolas en Industria crnica, Industria pesquera, Industria lctea. El sector avcola es la principal fuente de Salmonella spp.

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Infeccin

Alto riesgo de invasin intestinal en: Recin nacidos 3a Edad Dsis infectiva en humanos: 1 a 10 clulas. Alimentos con alto contenido de grasa: Las clulas de Salmonella se engloban en micelas lipdicas y sobreviven al cido gstrico.5/19/12

Fiebre entrica

Incubacin: 7 a 28 das. Sintomatologa: Diarrea, Fiebre, Dolor abdominal, Dolor de cabeza, Debilitamiento. Diagnstico: Etapas tempranas en sangre o en heces. Tratamiento: Uso de croramfenicol, ampicilina, trimetropim.5/19/12

Enterocolitis

Incubacin: 8 a 72 horas. Sintomatologa: Heces tpicas diarreicas no sanguinolientas, Dolor abdominal. Tratamiento: Reempalzo de fluidos y electrolitos. NO ANTIBITICOS.

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Protocolo de aislamientoNorma Oficial Mexicana NOM-114-SSA1-1994 Bacteriology Analytical Manual - FDA1.

Pre-enriquecimiento. Enriquecimiento selectivo.

1.

1.

Aislamiento en medios de cultivos selectivos y diferenciales, identificacin bioqumica y confirmacin serolgica. 5/19/12

Metodologa clsica para la determinacin de Salmonella spp. en alimentos

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

25 g de muestra en condiciones de asepsia

Homogeneizar: 225 mL de solucin diluyente (caldo lactosado) segn el tipo de muestra

Incubar 18-24h a 37C

Aislamiento en medios selectivos y diferenciales*

XLD, SS, Hecktoen, VB, Sulfito bismuto Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Incub ar 1824h a 37CSiembra con asa bacteriolgica en caldo Tetrationato y C. Selenito Cistina

Caractersticas Color antes de la Medio selectivo coloniales de inoculacin Salmonella spp.Agar verde brillante Oscuro color Marrn Rosas o rojas, pueden ser transparentes rodeadas de medio enrojecido. Las bacterias fermentadoras de lactosa pueden ser amarillas

Caractersticas Color antes de la Medio selectivo coloniales de inoculacin Salmonella spp. Agar sulfito bismuto Opaco, verde plido Caf, grises o negras; con o sin brillo metlico. Algunas veces presencia de halo caf o negro

Medio selectivo Color antes de la Caractersticas inoculacin coloniales de Salmonella spp. Agar Xilosa Lisina Desoxicolato Claro, rojo brillante Rosas o rojas pueden ser transparentes con o sin centro negro. En algunos casos completamente negras

Caractersticas Color antes de la Medio selectivo coloniales de inoculacin Salmonella spp. Agar para Salmonella y Shigella Claro, color rosaTraslcidas en ocasiones opacas. Algunas con centro negro. Las colonias fermentadoras de lactosa son rojas

Color antes de la Medio selectivo inoculacin Agar entrico Hekten Oscuro, color verde

Caractersticas coloniales de Salmonella spp.

Verdes o azul verdes con o sin centro negro. En algunas ocasiones completamente negras

Incubar 18-24h a 37C Bsqueda de colonias tpicas.

Siembra de bioqumicas complementarias: malonato, citrato, RM-VP, UREA, SIM, manitol

Realizar bioqumicas presuntivas Kligler y LIA Incuba r 1824h a 37CResultados caractersticos

Incubar 18-24h a 37C

Resultados positivos para Salmonella

Confirmacin Serolgica

Pruebas bioqumicas:

Identificacin de Salmonella spp.

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Pruebas Preliminares

Agar TSIAmarillo pH8.2

Indicador: Rojo de fenol:

Produccin de H2S:

Citrato de hierro (III) Tiosulfato de amonio

Fermentacin de : 5/19/12 Glucosa

Se espera: Superficie alcalina Fondo cido Precipitado negro

Lisina-Hierro

35 a 37C 24h Enzimas:

Descarboxilasa (cadaverina) Desaminasa Citrato de hierro (III) y amonio Tiosulfato de sodio

H2S:

Prpura de bromocresol: 5/19/12 Amarillo:

pH