prof. laura carmona salazar semestre:...

FACULTAD DE QUÍMICADEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

CURSO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA(CLAVE 1807)

Licenciatura de QFB

Prof. Laura Carmona SalazarSemestre: 13-II

Este material es exclusivamente para uso educativo y no de lucro

ANATOMÍA HEPÁTICA

• Es un órgano complejo de gran tamaño localizado en el cuadrantesuperior derecho del organismo

• Aproximadamente el 2.5% del peso del cuerpo de un adultocorresponde al hígado, pesa entre 1200 a 1600 g

• Esta dividido en forma desigual en dos lóbulos por el ligamentofalciforme; el lóbulo derecho es casi seis veces más grande que elizquierdoizquierdo

• Es un órgano muy vascularizado, lo atraviesan alrededor de 1.5Lt/min

• Recibe un doble suministro de sangre:

� la vena porta (rica en nutrientes y otras sustancias absorbidas delconducto digestivo) que representa el 80% de la sangresuministrada, del cual solo le aporta un 40% de oxígeno

� La arteria hepática es la que le aporta mayores cantidades deoxígeno

EL LÓBULO HEPÁTICO ES LA UNIDAD ANATÓMICA DONDE SE REALIZANTODAS LAS FUNCIONES METABÓLICAS Y EXCRETORIAS DE DICHOÓRGANO

COMPOSICIÓN YORGANIZACIÓN:�Tiene una formahexagonal�La cual posee entre4-6 triadas�Numerosas�Numerosascolumnas celulares�Sistema continuode sinusoides quellevan sangre�Vena central

TIPOS CELULARES PRESENTES EN EL LÓBULO HEPÁTICO

CÉLULAS EPITELIALES y macrófagos (CÉLULAS DE KUPFFER) que recubren los sinusoidessinusoides

HEPATOCITOS que están dispuestos en columna (80%)

ORGANELO FUNCIONALIDAD EN EL HEPATOCITO

Retículo endoplasmático �Síntesis de albúmina, factores de coagulación, de colesterol y ácidos biliares, ácidos grasos, fosfolípidosy triglicéridos�Depósito de calcio�Conjugación de bilirrubina�Metabolismo de fármacos y esteroides

LOS COMPONENTES SUBCELULARES DEL HEPATOCITO REALIZAN LAS FUNCIONES FUNDAMENTALES DEL HÍGADO

�Metabolismo de fármacos y esteroides�Gluconeogénesis

Aparato de Golgi �Empaca y dirige el transporte de lipoproteínas y glucoproteínas�Secreta albúmina y bilirrubina

Mitocondrias Ciclo de Krebs, Fosforilación oxidativa y b-oxidación

Lisosomas Contiene enzimas hidrolíticas y metaboliza metales

Citosol Glucolisis, gluconeogénesis, metabolismo de glucógeno

FUNCIONAMIENTO HEPÁTICO�Desempeña más de 500 actividades�Si deja de funcionar aprox. a las 10 hrs se produce

la muerte�Produce y distribuye �Almacén�Almacén�Participa en la detoxificación�Tiene propiedades regeneradoras, su capacidad

de reserva le permite funcionar dentro de límites normales hasta que 80% de los hepatocitos se han destruido

FUNCIONAMIENTO HEPÁTICO

METABÓLICA CarbohidratosLípidosProteínas, aminoácidosBilirrubinaHormonas

EXCRETORA Ácidos biliaresColesterolBilirrubina

HEMATOLÓGICA Producción de factores de coagulaciónProducción de eritrocitos en el fetoProducción de eritrocitos en el feto

DESINTOXIFICACIÓN BilirrubinaAmoníacoAlcoholFármacos

ALMACENAMIENTO Glucógeno, lípidos, aminoácidos, proteínasHierro, cobreVitaminas

INMUNOLÓGICA FagocitosisSecreción de IgADefensas humorales

METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

GLUCOSA

�SINTETIZA�CATABOLIZA�ALMACENA

Gluconeogénesis

Glucólisis, Pentosas fosfato

Metabolismo de glucógeno

REGULACIÓN HORMONAL

METABOLISMO DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

AMINOÁCIDOS

�SINTETIZA PROTEÍNAS Y OTRAS MOLÉCULAS QUE CONTIENEN NITRÓGENO�CATABOLIZA PARA �CATABOLIZA PARA OBTENCIÓN DE ENERGÍA

PROTEÍNAS PLASMÁTICASEl hígado es el principal sitio en el que se efectúa la síntesis de lamayoría de las proteínas plasmáticas como:Albúmina (A) (120 a 200 mg/Kg de peso por día)Globulinas (G)Factores de coagulación I, II, V, VII, IX y XTransferrinaTransferrina

METABOLISMO DE LÍPIDOS

LÍPIDOS

�SINTETIZA�CATABOLIZA�ALMACENA

Ácidos grasos, triglicéridos, colesterol

Acetil CoA

Metabolismo de bilirrubina

ERITROCITOS80%

GRUPO HEMO

HIERROPROTEICA

PROTEÍNAS QUE PRESENTAN GRUPO HEMO

BILIVERDINA

Oxigenasa de hemo

BILIVERDINA

Reductasa de bilirrubina

BILIRRUBINA

BILIRRUBINA NO CONJUGADA O INDIRECTA 95%

ALBÚMINA

Insoluble en agua

Soluble en agua

DEBE SER RÁPIDAMENTE DEPURADA POR EL HÍGADO

EN EL HÍGADO: SE CONJUGA CON ÁCIDO GLUCURÓNICOFORMANDO BILIRRUBINA CONJUGADA O DIRECTA

Soluble en agua

EXCRETA


BILIRRUBINA CONJUGADA O DIRECTA

SE COMBINA CON LAS SECRECIONES DE LA VESÍCULA BILIAR

EN EL DUODENO POR ACCIÓN BACTERIANA SE REDUCE A UN

EL UROBILINÓGENOCROMÓGENO INCOLORO QUE ES EL UROBILINÓGENOEL 80% SE ELIMINA EN LAS HECES FECALES

20% SE EXCRETA EN LA ORINA


1) Degradación de los eritrocitos 2) Formación de bilirrubina

NO CONJUGADANO CONJUGADAINDIRECTA(insoluble)

3) Unión con albúmina para transportarse al hígado, donde se conjuga con el ácido glucurónico

FUNCIONES DE DESINTOXICACIÓN

� Entre sus funciones de desintoxicación se incluyen reacciones de hidrólisis, hidroxilación, oxidación-reducción, carboxilación y desmetilación. El objetivo es transformar las sustancias en menos tóxicas o favorecer su solubilidad y por tanto, su excreción.

� El sistema citocromo P450 durante la metabolización de fármacos mediante su conjugación con glicina, glutatión, acetato o ácido mediante su conjugación con glicina, glutatión, acetato o ácido glucurónico.

� Depuración de la bilirrubina al conjugarse con ácido glucurónico

� El amoníaco es transformado en urea

� Metabolización del etanol (90-98% llega directamente al hígado) a través de tres sistemas: el de la deshidrogenasa alcohólica, la oxidación del etanol y la catalasa. El etanol se transforma en acetaldehído y posteriormente en acetato.

FUNCIONES DE EXCRECIÓN

• Son funciones asociadas a las de desintoxicación

• Composición de la bilis: ácidos biliares, fosfolípidos, colesterol, pigmentos biliares, hormonas, proteínas, agua y electrólitos. Su formación es similar al de la orina en el riñón, es formación es similar al de la orina en el riñón, es decir, se va transformando.

• La bilirrubina conjugada se excreta casi exclusivamente por la bilis al igual que el colesterol, aunque este último se excreta en forma de ácidos biliares, glicolato y taurocolato

SALES BILIARES.- Son los principales constituyentes de la bilis, se encargan desolubilizar los lípidos de la dieta, SON DETERGENTES

GLICOLATO TAUROCOLATO

FUNCIONES DE ALMACENAMIENTO

• Glucógeno

• Hierro

• Vitaminas A, D, E, K y B12

• Cobre• Cobre

• Bilirrubina

• Ácidos grasos en forma de triglicéridos

PRUEBAS DE FUNCIÓN HEPÁTICA (PFH)

• Albúmina• Proteínas totales• Relación A/G (albúmina/globulinas)• Fosfatasa alcalina (FA)• Alanina transaminasa (ALT)• Aspartato aminotransferasa (AST)• Aspartato aminotransferasa (AST)• Gamma-glutamil transpeptidasa (GGT)• Bilirrubina en suero• Bilirrubina en orina• Tiempo de protrombina• Amonio• Colesterol• Factores de coagulación

AGRUPACIÓN DE LAS PRUEBAS DE FUNCIÓN HEPÁTICA

FUNCIÓN SINTÉTICAAlbúminaProteínas totalesColesterol

FUNCIÓN EXCRETORA Y DESINTOXIFICACIÓNBilirrubinaAmonio

Factores de coagulación

ENZIMÁTICANecrosis: ALT, AST, LDHColestasis: GGT, 5´-nucleotidasa

PRUEBAS DE FUNCIÓN HEPÁTICA (PFH)

La mayoría de los perfiles hepáticos incluyen varias pruebas funcionales.

La síntesis de proteínas es la principal función metabólica del hígado, aún cuando produce la metabólica del hígado, aún cuando produce la mayoría de las proteínas sólo la determinación de albúmina, proteínas totales y el tiempo de protrombina son las más utilizadas como evidencia para valorar la síntesis y liberación hepática.

DETERMINACIONES DE PFH INDICADORES DEL FUNCIONAMIENTO METABÓLICO

LA DISMINUCIÓN EN SUS VALORES EVIDENCIA UN PROBLEMA HEPÁTICOFactores críticos:DietaHormonasFunción renal

VALORACIÓN ELECTROFORÉTICA DE LA RELACIÓN A/G

UTILIDAD DE LA RELACIÓN A/G EN EL DIAGNÓSTICO DE PATOLOGÍAS


DETERMINACIÓN DEL PERFIL DE LÍPIDOS

EL HÍGADO CONTRIBUYE AL METABOLISMO DE LOS LÍPIDOS A TRAVÉS DE:

�LA LECITIN-COLESTEROL ACILTRASNFERASA (LCAT)�LIPASA HEPÁTICA

SINTETIZA VLDL Y HDLEN AFECCIONES HEPÁTICAS SE ENCUENTRAN DISMINUIDAS


DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA



BILIRRUBINA = BILIRRUBINA CONJUGADA (DIRECTA) + BILIRRUBINA NO-TOTAL CONJUGADA (INDIRECTA)

PRINCIPIO: Se basa en la reacción con compuestos diazoicos y la formación de azodipirroles coloreados.BILIRRUBINA CONJUGADA, que es soluble reacciona típicamente con ácido sulfanílicosulfanílico

BILIRRUBINA NO-CONJUGADA es insoluble, se requiere de un solvente

Por tanto:1) Se realiza la determinación con y sin solvente.2) La muestra con solvente, corresponde a la bilirrubina total3) La muestra sin solvente es la bilirrubina conjugada


SIGNIFICANCIA CLÍNICA DE LA DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA

INCREMENTO DE BILIRRUBINA TOTAL:

�2.5 mg/dL Ictericia � Síndrome de Crigler-Najjar, deficiencia de glucuronil transferasa hepática, no se puede conjugar�Enfermedad de Gilbert, tampoco se puede procesar apropiadamente la bilirrubina�Anemia hemolítica�Hepatitis�Hepatitis

INCREMENTO DE BILIRRUBINA CONJUGADA:

� Obstrucción del conducto biliar (colestasis)�Cirrosis


DETERMINACIÓN DE AMONÍACO ProteínaIntracelular

Proteínade la dieta Amino-

ácidosEsqueletoscarbonados

DESTINOS METABÓLICOS DEL GRUPO AMINO

DE LA DIETAIntracelular

AMINOÁCIDOS

DEPENDIENDO DELORGANISMO:

COMO ION AMONIOAMONOTÉLICOS(Vertebrados acuáticos)

ESQUELETOSCARBONADOS

AMONÍACO

REUTILIZACIÓNEN OTRAS

RUTAS METABÓLICAS

EXCRETADOCOMO UREAUREOTÉLICOS(Vertebrados terrestres)

COMO ÁCIDO ÚRICOURICOTÉLICOS(Aves y reptiles)

LA UREA ES SINTETIZADA EN EL HÍGADO A TRAVÉS DE LASENZIMAS DEL CICLO DE LA UREA

CITOSOLMATRIZ

MITOCONDRIAL


DETERMINACIÓN DE AMONÍACO

Se determina enzimáticamente:

α-CETOGLUTARATO + AMONÍACO + NADPH GLUTAMATO + NADP+ + H2O

GLUTAMATO DESHIDROGENASA

VALORES DE REFERENCIA:

15 a 45 µg/dL

A) TRANSAMINACIÓN.- Es la transferencia de un grupo amino a un α-cetoácido para producir el α-cetoácido del aminoácido original y un nuevo aminoácido (GLUTAMATO).

aminoácido + α-cetoglutarato α-cetoácido + glutamato

AMINOTRANSFERASAS

DESAMINACIÓN.- Consta de dos etapas con objeto de eliminar el grupo amino de los aminoácidos y convertir los esqueletos carbonados en intermediarios comunes

AMINOTRANSFERASAS“TRANSAMINASAS”

B) DESAMINACIÓN OXIDATIVA.- Proceso mediante el cual se elimina el grupoamino del glutamato y SE LIBERA COMO AMONÍACO

GLUTAMATO DESHIDROGENASA

Glutamato + NAD(P)+ + H2O α-cetoglutarato + NH3 + NADP(H)

DETERMINACIONES ENZIMÁTICAS

Son de gran utilidad para el diagnóstico, pronóstico y valoración de las afecciones hepáticas.Las más importantes son:Las aminotransferasas: ALT y ASTTransferasa de gammaglutamilo (GGT)Transferasa de gammaglutamilo (GGT)Fosfatasa alcalina (ALP)5´-nucleotidasa (5´-NT)Lactato deshidrogenasa (LDH)

AMINOTRANSFERASAS

ALT�Se encuentra predominantemente en hígado�Es citosólica

Se elevan debido a fugas en células necrosadasAumentos tempranos en las afecciones hepáticas durante dos a seis semanas

�Su concentración es mayor que la AST

AST�Se encuentra además en corazón y músculo�Mitocondria y citosol

�Cuando excede los niveles de ALT el pronóstico es malo e indica necrosis celular masiva

FOSFATASA ALCALINA

• Son un grupo de isoenzimas sintetizadas en hígado, huesos, placenta, riñón e intestino.

• Se incrementa más por un aumento en su síntesis que por ser liberadas de células necrosadas. Generalmente se encuentra aumentada en afecciones metastáticasdel hígadodel hígado

• Aumenta en las afecciones hepáticas y aquellas que sean obstructivas, cuando el aumento es más de tres veces su valor, indica una enfermedad obstructiva

• Se puede correlacionar con los niveles de GGT, aminopeptidasa de leucina (LAP) y la 5´-nucleotidasa

TRANSFERASA DE GAMMAGLUTAMILO (GGT)

• Se incrementa en muchas afecciones del páncreas, sistema hepatobiliar y riñón

• Aumenta en enfermedades hepatobiliares

• Se correlaciona con un aumento de ALP• Se correlaciona con un aumento de ALP

• Se induce por fármacos y el alcohol

DETERMINACIÓN DEL PATRÓN ISOENZIMÁTICO DE LACTATO DESHIDROGENASA (LDH)

DISTRIBUCIÓN TISULAR DE LAS ISOFORMAS DE LDH

PATRÓN ISOENZIMÁTICO DE LDH EN DIFERENTES PATOLOGÍAS

prof. laura carmona salazar semestre:...

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