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PRODUCCION PRIMARIA Aflatoxinas y Seguridad Alimentaria Pablo Manrique Vergara Farmacéutico [email protected] www.prehonbac.com IV Jornadas Seguridad Alimentaria ANALIZA CALIDAD 20 de Noviembre de 2014 Sevilla

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Page 1: PRODUCCION PRIMARIA Aflatoxinas y Seguridad Alimentaria Pablo Manrique Vergara Farmacéutico pmanrique@miproma.es  IV Jornadas Seguridad

PRODUCCION PRIMARIA

Aflatoxinas y Seguridad AlimentariaPablo Manrique Vergara

Farmacé[email protected]

IV Jornadas Seguridad Alimentaria

ANALIZA CALIDAD20 de Noviembre de 2014

Sevilla

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ANTECEDENTES

Alerta Andalucía 2013: positivos aflatoxina M1 en leche (<50 ppt)

Investigación en piensos: positivos aflatoxina B1 en maíz (<20 ppb) y altos niveles en algodones (<5 ppb).

Plan Integral Andaluz de Vigilancia y Control Aflatoxinas, abarca toda la cadena: agricultor, cerealista, fabricante de piensos y explotación ganadera lechera.

Destrucción de leche

Inmovilización maízInvierno suave y húmedo Invierno suave y húmedo

““cambio climático, EFSA 2012”cambio climático, EFSA 2012”

Intensificación controlesIntensificación controles

““alerta Balcanes”alerta Balcanes”

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MICOTOXINAS

Los alimentos pueden contener organismos o sustancias peligrosas, unos pueden ser introducidos de forma no intencionada (dioxinas y metales pesados), o por residuos procedente de adición intencionada, durante su procesamiento como el caso de agentes químicos de riesgo (medicamentos, plaguicidas), otras sustancias tóxicas son naturales de los alimentos, como Gosipol y micotoxinas.

La Organización para la Agricultura y la Alimentación (FAO) estima que las micotoxinas afectan a una cuarta parte de los cultivos a nivel mundial, afectando a los alimentos y piensos.

Según los datos publicados por el Sistema de Alerta Rápida (RASFF), las micotoxinas son las sustancias contaminantes que mayor número de notificaciones presentan.

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MICOTOXINAS

Las micotoxinas son metabolitos secundarios de hongos (Aspergillus, Penicillinium y Fusarium). Se producen en condiciones de elevada actividad de agua y temperatura, afectando principalmente a los cereales.

Micotoxina Origen Piensos IARC

Aflatoxinas Aspergillus Si 1

Ocratoxinas Aspergillus Si 2B

Zearelonona Fusarium Si 3

Tricotecenos (DON, T2 y TH2) Fusarium Si 3

Fumonisinas Fusarium Si 2B

Patulina Penicilium No 3

Desde los piensos pasan al consumidor final como residuos en carne, huevo y leche.

Las micotoxinas pueden causar efectos adversos: hepatotoxicidad, nefrotoxicidad, neurotoxicidad, enfermedades gastrointestinales, cáncer e inmunosupresión. (A. Gimeno, 2003)

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MICOTOXINAS

Resultados del sector años 2012, 2013 y 2014:

•Vomitoxina (DON) la más presente en cereales de cosecha, indica que pueden existir otras toxinas de Fusarium.

•Maíz y sus subproductos (germen, DDG, y gluten) los más contaminados.

Diferentes fuentes privadas y públicas.

Cambio climático EFSA, 2012: en la última década se ha producido un aumento de la presencia de micotoxinas en los alimentos y piensos pasando Aflatoxina en Europa de ser un problema de cereales importados a comenzar su prevalencia en la cosechas.

Humedad: cantidad de agua que presenta el sustrato.

HR: humedad relativa ambiental, vapor de agua existente en el ambiente.

Actividad de agua: agua libre presente en el sustrato. AW=HRE/100.

La mayoría de hongos necesitan 0,7-0,85 para multiplicarse y 0,8-1 para producir micotoxinas.

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LEGISLACION:

►Plan Vigilancia y Control de Aflatoxinas de Andalucía 2014. Consultar base legal.

►Directiva 2002/32: sustancias indeseables (AFB1). 20 ppb materia prima.

►Reglamento 574/2011: límites Aflatoxina B1. 5 ppb pienso lechero.

►Reglamento 165/2010: límites Aflatoxina M1. 50 ppt leche cruda.

►Recomendación 2006/576: límites Ocratoxina A, Deoxinivalenol, Zearalenona y Fuminosinas B1-B2, originados sobre investigaciones EFSA de transferencia a los alimentos.

►NTP 351 guía de buenas prácticas sobre Micotoxinas (aflatoxinas y tricotecenos) en ambientes laborales.

ALARA (As Low As Reasonable Achievable): “el nivel máximo debe ser tan bajo como sea razonablemente posible”, teniendo en cuenta las preocupaciones en salud pública, la UE sigue manteniendo el nivel de 50 ppt en leche y 25 ppt en alimentos para lactantes. Al contrario de otros países que defienden el nivel de 500 ppt (EEUU, Australia, Mercosur).

Justificación: JECFA 2001, CCFAC 2002, Codex 2002, WHO 2002.

Asegurar la inocuidad de los productos es responsabilidad de los operadores que intervienen en la cadena de producción. En lo que respecta a la producción primaria son los agricultores, ganaderos y productores de pienso.

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Aflatoxina B1 (AFB1 ), es metabolizada a Aflatoxina M1 (AFM1).

Aflatoxina B2 (AFB2).

 Aflatoxina G1 (AFG1).

 Aflatoxina G2 (AFG2).

AFLATOXINAS: CLASIFICACION

Aflatoxina B1 es producida por cepas toxicogénicas del moho Aspergillus (A.flavus y A.parasiticus).

AFB1 es la más común de las cuatro y presenta mayor toxicidad, seguida de AFM1.

Grado de toxicidad: B1>M1>G1>B2>G2

Fluorescencia bajo luz ultravioleta:

•B>Blue

•G>Green

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ALMACEN

COSECHACULTIVO

ASPERGILLUS Y FORMACION AFLATOXINAS

Aspergillus parasiticus: AFB y AFG

Aspergillus flavus: AFB

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ASPERGILLUS Y AFLATOXINAS

El crecimiento de este hongo se ve afectado por la termohigrotropía, es decir, que

responde al estímulo de la temperatura y la humedad relativa de la atmósfera y del

sustrato. Así, los factores que aumentan la posibilidad de contaminación son:

Altas temperaturas: puede crecer 4-45ºC, óptimo 22ºC.

Humedad relativa ambiental alta: 70-90%, óptimo mayor 80%.

Humedad del sustrato. 10-20%, óptimo mayor de 15%.

Sequías extremas (stress e inmunodepresión planta).

Daños físicos: ataque de plagas (pájaros, insectos y roedores) y manejo.

Pero, aún en ausencia de estas condiciones, si ya han germinado

algunas esporas en el sustrato, se pueden formar “nichos

ecológicos” que favorecen el desarrollo de micelios generadores de

aflatoxinas, al crecer produce agua por respiración aumentando así la

humedad de algunas semillas o granos.

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ASPERGILLUS Y AFLATOXINAS

Es un hongo aeróbico que utiliza el almidón como sustrato produciendo humedad y exacerbando el problema:

Hidrato de Carbono + O2 = CO2 + H2O

Materias primas en las que se encuentra:

Importadas: extracto de copra, tortas de girasol y cacahuete, gluten y germen de maíz, semilla de algodón y palma, soja y fibra de arroz.

De la UE: cereales y ensilados de maíz.

Nichos ecológicos:

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ASPERGILLUS Y AFLATOXINAS: CULTIVO

La vía de infección, durante el cultivo, más frecuente son los estigmas durante la floración y las zonas dañadas por plagas (gorgojos), pájaros, estrés hídrico y heladas tempranas.

Las condiciones más favorables para producir la toxina son sequía y altas temperaturas ambientales durante la polinización y fase de llenado del grano. Noches calidas por encima de 21ºC también son positivas para la producción de aflatoxinas.

Los gorgojos por su propio metabolismo generan más humedad además de propagar la infección.

Cambio climático: la contaminación en cosechas Europeas se desestimo durante muchos años, considerándose un contaminante exclusivamente de almacenamiento…..

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ASPERGILLUS Y AFLATOXINAS: POSTCOSECHA

Aspergillus durante el almacenamiento puede producir contaminación y de una forma óptima AFB1 si el grano se mantiene con demasiada humedad. La producción más óptima ocurre a 22ºC con una actividad de agua (aw) de 0,83-0,95, este crecimiento se detiene cuando la humedad baja por debajo del 15%.

Si el grano ya esta infectado por Aspergillus desde el cultivo la humedad favorece el crecimiento debiendo cosecharse por debajo de un 15% de humedad y almacenarlo por debajo de un 12% con una actividad de agua menor a 0,700. Se puede realizar el secado en un plazo no superior a 24 horas.

Los productos más peligrosos de ser almacenados son: maíz, semilla de algodón, ensilados y piensos.

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ASPERGILLUS Y AFLATOXINA: SILOS

Silos y almacenes: se producen condensaciones y migraciones de humedad que originan zonas de microflora de alta actividad.

Los piensos (a base de mezclas de cereales molidos) son higroscópicos, absorben la humedad ambiental cuando esta por encima 80-85% y más de 13ºC de temperatura.

ENSILADO

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ASPERGILLUS Y AFLATOXINA: SUCIEDAD

Los residuos en la preparación y distribución de piensos persisten en la maquinaria, utensilios, circuitos de transporte y depósitos. Estos residuos reciben el nombre de suciedad.

Los composición de la suciedad varia mucho de acuerdo con las materias primas empleadas. En el caso del pienso se trata mayoritariamente de cereales y oleaginosas molidos (vegetales crudos).

Los componentes físico-químicos de esta suciedad son variados, pero destacan por su riqueza los almidones, sustratos idóneos para Aspergillus.

G. Devegowda et al, 1998

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AFLATOXINA B1: BIOTRANSFORMACION

AFB1 es hidroxilada en el hígado a 4-hidroxi, formándose AFM1 y es excretada en la leche de las hembras de mamíferos (Henry et al, 2001). Junto con la AFM1 se pueden encontrar también residuos de AFB1 que no se han hidroxilado.

En rumiantes, parte de la AFB1 es degradada en el rumen y se forma Aflatoxicol (18 veces menos tóxico que la AFB1), pero es reversible y puede volver a transformarse en AFB1.

Los datos sobre residuos en carne y huevos son de pruebas experimentales publicadas donde la concentración en el alimento compuesto era muy elevada. Ello llevo a pensar que estos residuos no serían muy relevantes (Gimeno, 2003).

AFB1 es hidrosoluble.

Absorción gastro-intestinal

Torrente circulatorio

HígadoAFM1

Bilis: 50%

Orina: 15-25%

Leche: I.T.

AFB1-epoxi Toxicidad

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AFLATOXINA M1: BIOTRANSFORMACION

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AFLATOXINA B1 y M1: INDICE DE TRANSFERENCIA

El nivel de residuos de AFM1 podría ser el 2,2% de la ingesta diaria de AFB1 (coeficiente de variación entre 42 y 59%). (A. Gimeno, 2003)

Se ha reportado que del 1 – 3 % de la AFB1 ingerida por el organismo, se elimina en la leche materna en forma de AFM1. (Sánchez et al., 2002).

La tasa de transferencia de Aflatoxina B1 a leche como M1 se ha estimado entre un 1-6%, en función de diversos factores relacionados con la dieta y el estado fisiológico del animal. (Plan de Vigilancia Andalucía, 2013)

La cantidad de AFB1 ingerida diariamente que va a parar a la leche es del orden de 0,17 a 3,3%. (CODEX, 1997)

Peterson, 1998

Modelo predictivo

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AFLATOXINA B1 y M1: INDICE DE TRANSFERENCIA

La transformación se produce 6-24 horas tras la ingestión, el nivel de residuos

varia según:

En vacas lecheras, el paso de AFB1 a la leche en forma de AFM1 está

relacionado de manera lineal con la producción de leche (Veldman et al., 1992).

Capacidad individual de biotransformación.

Régimen alimenticio.

Estado de salud.• Una vaca de producción industrial de 40 litros/día puede llegar a un índice de transferencia del 6,2%. (EFSA, 2004)

• Vacas de 10-20 litros/día tasas de 0,5-0,6%. (Harvey et al., 1990) y Galvano et al., 1996)

Un ganadero no puede confiar en que con pienso por debajo de los límites no existan animales individuales que superen el límite legal de 50 ppt AFM1 en leche.

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AFLATOXINA M1: DISTRIBUCION EN LOS ALIMENTOS

Porcentaje estimado de transferencia a Alimentos elaborados con leche de AFB1

Quesos 40-60%

Nata 10%

Mantequilla <2%

Visto que la aflatoxina es soluble se considera que la asociación a la caseína cuando esta precipita es la explicación de que no quede la mayor parte en suero. (Yousef & Marth, 1989)

Cuando los animales de producción lactea se alimentan con pienso contaminado, si se sobrepasan los límites, existen incidencia en salud pública.

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AFLATOXINA B1 y M1: TOXICIDAD

En animales de producción la mayor preocupación es su efecto hepatotóxico e inmunosupresivo, que puede ser desastroso para el rendimiento industrial.

Peligro en humanos: Tanto la AFB1 como la AFM1 son compuestos hepatotóxicos y

carcinogénicos y sus efectos sobre la salud pública constituyen una preocupación

(Chu, 1991). Inhiben la fagocitosis y la síntesis proteica, interrumpiendo la formación

de ADN, ARN y proteínas en el ribosoma. La infección con Hepatitis B durante la

exposición a la AF incrementa el riesgo de carcinoma hepatocelular. (Williams, 2004)

Agencia internacional de investigación contra el cáncer (IARC):

AFB1: grupo 1 “cancerígenos para el hombre”.

AFM1: grupo 2B “ posiblemente cancerígeno para el hombre”.

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AFLATOXINA M1: DESCONTAMINACIÓN Y DETOXIFICACIÓN

Métodos físicos:

La AFM1 resiste temperaturas de 120ºC a presión normal. Intentar por medios térmicos reducir o eliminar las contaminaciones, no será efectivo, ni práctico, ni viable ni económico a nivel industrial.

También se han probado adsorción con Bentonita y radiación ultravioleta. (Henry et al., 2001)

AFM1 es en general estable en quesos, yogures, leche pasteurizada, leche desnatada o entera y helados, resiste muchos procesos de esterilización, pasteurización y calentamiento directo. Sin embargo, en otros procesos de esterilización, pasteurización, secado Roller y Spray, dependiendo de la tecnología del próprio proceso (en especial de la temperatura y tiempo de permanencia de la leche a esa temperatura), pueden conseguirse reducciones de AFM1 del orden de 12 a 86%. En quesos a 90ºC durante 30 minutos se ha conseguido una reducción del 9%. AFM1 resiste los procesos de liofilización (de + 4 a - 20ºC durante 0, 6, 12 y 18 meses).

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AFLATOXINA M1: DESCONTAMINACIÓN Y DETOXIFICACIÓN

Métodos químicos:

Se han probado compuestos químicos autorizados como conservantes con capacidad oxidante: peróxido, sulfitos y bisulfitos (Henry et al., 2001). Las dosis utilizadas no fueron del todo eficaces o en el mejor de los casos habría que elevarlas por encima de límites legales.

Métodos biológicos:

Aún están en estudio, parecen ser prometedores, destaca el uso de enzimas y microorganismos degradadores. Pero hay que mantener cierta precaución ya que en algunos casos el resultado fue compuestos de mayor toxicidad o reversibles.

Por su elevado coste, falta de efectividad, resistencia a temperatura, limitaciones legales o residuos perjudiciales la gran mayoría no se pueden implantar.

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AFLATOXINA M1: DESCONTAMINACIÓN Y DETOXIFICACIÓN

Ya que la aflatoxina M1 no se puede eliminar ni destruir de la leche solamente puede ser excluida eliminando la aflatoxina B1 de la dieta de los animales.

Una vez presente en el pienso solo puede reducirse su ingestión a base de aditivos adsorbentes, los cuales tienen ciertas limitaciones de manejo, dosis y eficacia….

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AFLATOXINA B1: PREVENCION

1) Conservación de la materia prima:

- Control humedad <12% y actividad de agua <0,700.

- Control temperatura <20-22ºC.

- Tratamiento conservantes fungicidas/táticos: “formaldehído”/ ácidos orgánicos y sus sales (propiónico, fórmico, acético, sórbico).

- Secado: Aireación con aire frío y seco.

- Aireación con anhídrido carbónico.

2) LDDD:

- Limpieza y desinfección de circuitos y almacenes.

- Control de plagas.

- Separación de polvo y rotos.

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AFLATOXINA B1: PREVENCION

3) Utilización de adsorbentes:

- Se utilizan arcillas en el alimento para los animales, el fenómeno de quimi-adsorción se realiza en el tracto digestivo produciéndose la eliminación con las heces. Destacan los aluminosilicatos (HSCAS), tierras de diatomeas y bentonitas, estas úlimas únicas autorizadas como 1m558.

4) Biotransformación:

- Se incorporan al alimento para transformar la micotoxina en compuestos derivados, resultan prometedores pero aún están en estudio…

Enzimas

Microorganismos

Capacidad intercambio catiónico 60 meq/100 gr.

No hinchable.

Amplio espectro pH.

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AFLATOXINA B1: CONTROL

AGRICULTOR

Guía BP

PRODUCCION PIENSOS

TrazabilidadAPPCCPlan de retiradaControl proveedores

GANADERO

Guía BPControl proveedores

Ámbito actuación Plan de Vigilancia Aflatoxinas Andalucía:Vigencia 2014, pudiéndose prorrogar.

Por parte de agricultores de maíz durante el

cultivo, cosecha y almacenamiento.

Por parte almacenistas de

cereales, transportistas y fabricantes de

piensos.

Por parte de explotaciones

lecheras de vacuno, ovino y caprino.

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AFLATOXINA B1: Guía BP AGRICOLAS

Elección variedad: resistencia al estrés ambiental y los insectos.

Evitar malas hierbas y alta densidad de siembra.

Conservar humedad en suelo y evitar estrés hídrico.

Evitar que la recolección se prolongue hasta la época de lluvia.

Evitar estrés por falta de nutrientes.

Prevención contra plagas.

Muestrear zonas sospechosas de infestación (mazorca verde aceituna).

Comprobar humedad del grano antes de recolectar: ideal 12%, en ningún caso mayor de 15% o con grano mojado por lluvia.

La cosechadora no debe romper el grano.

Limpieza y desinfección de las instalaciones, utensilios y depósitos.

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AFLATOXINA B1: PROVEEDORES/CEREALISTAS

Registro oficial SILUM-Registro Nacional Público, todos los operadores deben estar registrados según Real Decreto 821/2008:

ohttp://aplicaciones.magrama.es/silum/index.jspohttp://ec.europa.eu/food/index_es.htm

Muestreo obligatorio con resultado negativo a Aflatoxina B1, estos autocontroles deben ser puestos a disposición de los sucesivos operadores.

Homologación proveedor:

Rechazo de maíz con humedad superior al 15% y piensos con humedad superior al 12%.

Control hongos y plagas.

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AFLATOXINA B1: MUESTREO M.P./PIENSOS

Error análisis: 80% al muestreo

Muestras obligatorias: 1 cada 500 toneladas de maíz, ensilado de maíz y piensos destinados, o que puedan serlo, a la producción láctea.

La toma de muestra individual no es representativa ya que de un lote contaminado aproximadamente solo un 3% de semillas contiene Aflatoxina.

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AFLATOXINA B1: ANALISIS

Métodos validados para la determinación en laboratorio de aflatoxinas:

Extracción en fase sólida (SPE) y cromatografía líquida con detección por florescencia.

Inmunoafinidad (IA) y cromatografía líquida con detección por florescencia.

Inmunoenzimático competitivo (ELISA): existen kits comerciales, rápidos y fiables, que permiten el control in situ. Los hay cuantificables y otros que solo marcan el nivel respecto a un rango.

Cabe destacar que el metabolismo de algunas plantas y el procesado de los alimentos pueden dar lugar a compuestos conjugados conocidos como micotoxinas enmascaradas no siendo detectados en los análisis de rutina. Estas formas se pueden hidrolizar a sus precursores en el tracto digestivo de los animales.

Fundamentalmente ocurre en tricotecenos, fumonisinas y zearealenona.

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AFLATOXINA B1: APPCC

Almacenamiento:

Separación de maíz en lotes por debajo de 5 ppb para piensos lecheros y el resto para especies de menos riesgo.

Comprobar semanalmente humedad y temperatura, tomar como límite de aumento 0,5% y 0,5ºC.

Recomendación del uso de conservantes en los piensos.

Recomendación del uso de aditivos reductores de la contaminación por aflatoxina (grupo funcional 1m558) y sus combinaciones.

Establecimiento de un Plan General de Higiene como base del APPCC que contemple el peligro de Aspergillus, con especial atención a la limpieza, desinfección, control de plagas y el mantenimiento que garantice la estanqueidad, aislamiento de la humedad y evitar condensaciones.

Pienso: control de los niveles de Hongos, actividad de agua y Aflatoxina.

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AFLATOXINA B1: Guía BP GANADERO

Limpieza y plan DDD.

Zonas de almacenamiento control de humedad y temperatura, permitir la ventilación.

Limitar el uso en las raciones de maíz, ensilado y semilla de algodón.

Control organoléptico de la materia prima.

Usar aditivos de ensilaje (conservantes).

Ensilados mal compactados o mal cubiertos.

Utilizar aditivos reductores de la contaminación por aflatoxina (grupo funcional 1m558) y sus combinaciones.

Leche: muestreo mínimo mensual para determinar AFM1.

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CONCLUSION:

No se ha pretendido con esta presentación provocar una situación de alarma al respecto, simplemente comunicar la situación más actualizada posible sobre el tema.

Es necesario e indispensable, la Aplicación del sistema de Análisis de Peligros y de Puntos Críticos de Control (APPCC) en la prevención y control de las micotoxinas.

El problema es, que por lo general, si las Materias Primas ya vienen contaminadas…. Debería aplicarse las normas APPCC a toda el sector primario?, es factible técnica y económicamente?.....

Y el resto de sustancias indeseables inherentes a las materias primas…..

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CONCLUSION:

Grupo Peligro concreto Legislación aplicable o recomendaciones

Origen

Sustancias indeseables

Metales pesados (Ar, Cd, F, Hg, Pb)

Directiva 2002/32/CE y R 574/2011

Materia prima

Elementos traza Zn, Cu, Se, Fe etc. Reglamento 1334/2003 Homogeneidad y Contaminación cruzada

Sustancias indeseables

Pesticidas Directiva 2002/32/CE y R 574/2011

Materia prima

Microorganismos Salmonella Reglamento 2160/2003 y Plan nacional

Materia prima e instalaciones de fabricación

Microorganismos E.coli, Clostridium y Hongos

Derogado: Orden 15 de Febrero de 1998

Materia prima e instalaciones de fabricación

Sustancias indeseables

Aflatoxina B1 Directiva 2002/32/CE y R 574/2011

Materia prima y almacenamiento

Sustancias indeseables

Cornezuelo de centeno Directiva 2002/32/CE y R 574/2011

Materia prima

No se ha pretendido con esta presentación provocar una situación de alarma al respecto, simplemente comunicar la situación más actualizada posible sobre el tema.

Peligro controlado APPCC fabricante de piensos

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CONCLUSION:

Grupo Peligro concreto Legislación aplicable o recomendaciones

Origen

Micotoxinas Deoxilivalenol, Fumonisinas, Ocratoxina A, Toxina T-2 y HT-2, Zearalenona

Recomendación CE 2006 Materia prima y almacenamiento

Sustancias indeseables

Fitotóxicos (Gosipol, Ácido cianhídrico, Teobromina, Vinil tioxazolidona)

Directiva 2002/32/CE y R 574/2011

Materia prima

Sustancias indeseables

Dioxinas y PCBs Directiva 2002/32/CE y R 574/2011

Materia prima

Sustancias indeseables

Impureza botánicas (Ambrosia, Crotalaria, Datura)

Directiva 2002/32/CE y R 574/2011

Materia prima

Sustancias indeseables

Compuestos nitrogenadas (Melamina, Nitritos)

Directiva 2002/32/CE y R 574/2011

Materia prima

Sustancias indeseables

Aditivos coccidiostatos Directiva 2002/32/CE y R 574/2011

Homogeneidad y Contaminación cruzada

Antibióticos Premezclas medicamentosas Real Decreto 1409/2009 y Decisión de la CN 03/2014.

Homogeneidad y Contaminación cruzada

No se ha pretendido con esta presentación provocar una situación de alarma al respecto, simplemente comunicar la situación más actualizada posible sobre el tema.

Peligro controlado APPCC fabricante de piensos

Page 37: PRODUCCION PRIMARIA Aflatoxinas y Seguridad Alimentaria Pablo Manrique Vergara Farmacéutico pmanrique@miproma.es  IV Jornadas Seguridad

BIBLIOGRAFIA:

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