UNIVERSIDAD DE COLIMAFacultad de ciencias qumicas

QFBFarmacologa I

5BMaestra: Maribel Martnez Casas

Prctica 1

Estudiante: Juan Manuel Herrera Zamora

23 de noviembre de 2015

Resumen El uso de los animales en la investigacin ha permitido obtener grandes avances en en campos como la medicina y en especial la farmacutica, en la cual se utilizan a menudo este tipo de experimentos para probar nuevos frmacos. Sin embardo, utilizar seres capaces de sentir el dolor, implica una responsabilidad un tanto moral para el investigador o estudiante. El trabajar con animales requiere la utilizacin de normas y lineamientos ticos que aseguren de mnimo sufrimiento y al mismo tiempo el bienestar de los animales.

Introduccin Desde la antigedad se han utilizado a los animales como fuente de conocimiento, sobre todo desde la observacin y la diseccin anatmica. Mdicos y filsofos importantes como Hipcrates, Galeno, Aristteles, etc. utilizaban la disecacin de los animales para conocer los organismos, pero no es hasta el siglo XVII cuando se desarrolla la viviseccin de forma habitual, muchas veces por problemas de creencias, otras veces por problemas tcnicos. No obstante, la preocupacin por el sufrimiento animal surge un poco ms tarde, ya en el siglo XVII debido a un cambio de pensamiento y es Bentham, con la corriente filosfica del emotivismo, el que denuncia la existencia de los sentimientos en los animales y la imposibilidad de su uso indiscriminado (1).Hasta entonces, la cultura occidental estaba guiada por dos corrientes de pensamientos principales: la filosofa griega y la religin hebrea. El animal no era una fuente de para ninguna de estas corrientes de pensamiento. Ya que para Aristteles, slo el hombre dispona de un alma humana y para el cristianismo el hombre tena el poder sobre todas las criaturas, por tanto, podramos decir que se utilizaban animales sin ningn tipo de preocupacin por su bienestar o su control sobre las condiciones de alojamiento, a no ser las mnimas necesarias para el experimento en s mismo (1).Es importante destacar que la experimentacin animal ha sido fundamental en el desarrollo de la medicina moderna, as como tambin en otras reas. Inicialmente como medio para conocer el funcionamiento de los organismos vivos, estos conocimientos posteriormente permitieron el desarrollo de numerosas tcnicas mdicas y el de frmacos que han cambiado nuestra forma de ver las enfermedades. No podemos olvidarnos del desarrollo de la mayora de los frmacos existentes hoy en da en el mercado: un caso especial es el de las sulfamidas, cuyo principio activo se activa en el organismo vivo y que no se hubiera descubierto sin el uso de animales de experimentacin (1).Marco terico

NormatividadTras el planteamiento del problema del uso de los animales en experimentacin surgen numerosas normas y guas que abordan el tema. Desde el siglos XIX contamos con guas ms o menos elaboradas que nos indican los aspectos a tener en cuenta a la hora de trabajar con animales de laboratorio. Y, llegando an ms lejos, en algunos casos contamos con una legislacin para el correcto alojamiento y manejo del animal de laboratorio, como puede ser en el caso europeo y su transposicin a los pases miembros. Una de ellas, que sigue vigente hoy en da, se remonta a 1831: Marshal Hall desarroll una de las primeras listas de actuacin (3):

1. La experimentacin no debe realizarse si la observacin puede sustituirla (3).2. Ningn experimento debe ser realizado sin un objetivo claro (3).3. Los cientficos deben de estar bien informados acerca de los experimentos de sus colegas para evitar repeticiones innecesarias (3).4. Los experimentos justificados deben llevarse a cabo con el menor dolor posible (3).5. Cada experimento debe realizarse bajo circunstancias que den lugar a los resultados ms claros y eviten la repeticin de experimentos (3).

Cuadro 1. Primeras leyes para el uso de animales en laboratorios (2).

-Europea

La creciente importancia que ha tenido el tema de la experimentacin animal en los pases desarrollados ha hecho necesaria la elaboracin de una serie de normativas. A nivel europeo son las siguientes (2): Convenio Europeo sobre Proteccin de los animales vertebrados utilizados con fines experimentales y otros fines cientficos (Estrasburgo, 18 de Marzo de 1986) (2).El objetivo es la unin de los Estados Miembros para la cooperacin con otros Estados en la proteccin de los Animales (2). Reconoce que el hombre tiene la obligacin de respetar a todos los animales, aceptando, sin embargo, que en su bsqueda del conocimiento, la salud y la seguridad, tiene necesidad de utilizar animales. Adems tiene que tratar de encontrar mtodos alternativos y fomentar la aplicacin de estos. Se especifica el mbito en el que es aplicado y se definen todos los trminos que estn implicados (que se entiende por animal destinado a ser utilizado o procedimiento) (2). Se exponen todos los casos en los que ser permitida la experimentacin animal. Se detalla el alojamiento al que tiene derecho el animal destinado a ser utilizado. Eleccin detallada de la especie que se va utilizar. Se le debe aplicar cualquier mtodo destinado a eliminar, en la medida de lo posible, el dolor. Al final de un procedimiento se decidir si dejar con vida al animal o sacrificarla por un mtodo humanitario (2). Los experimentos solo podrn ser ejecutados por personas autorizadas. Tendr que haber un registro en la explotacin con el nmero de animales y la especie, que deber de conservarse hasta tres aos despus de finalizado el experimento. Tendr que haber el nmero de animales mnimo necesario y provocarles el mnimo dolor. En los experimentos no se podrn utilizar animales vagabundos de especies domesticadas (2). 24 de noviembre de 1986, el Consejo de Europa ha publicado una Directiva relativa a la aproximacin de las disposiciones legales, reglamentarias y administrativas de los Estados Miembros respecto a la proteccin de los animales utilizados para experimentacin y otros fines cientficos (2).

El objetivo de esta Directiva es la armonizacin de las disposiciones legales, reglamentarias y administrativas de los estados miembros relativas a la proteccin de dichos animales. Esta es la primera legislacin global del Consejo de Europa, que se complementa con la Resolucin 86/C331/02, de la misma fecha (2).

-MxicoLalegislacinvigente regula el uso de animales de laboratorio en la industria cientfica y en la educacin, as como el tratamiento, el mantenimiento y la crianza de animales y la utilizacin de otras alternativas para la experimentacin, mantenimiento adecuado y una manipulacin correcta del equipamiento e instalaciones modernas. Realizar el diseo del experimento y el manejo de los animales para lo cual es importante conocer la biologa y etiologa de la especie en cuestin (4). Hoy en la mayora de los pases del mundo se ha puesto un alto a la investigacin indiscriminada con animales, en virtud de que las tendencias medio ambientalistas nos sitan al lado de cualquier especie animal o vegetal y nos muestran un camino de respeto y conservacin de toda especie (4).En Mxico, a pesar de que existen una serie de normas que reglamentan la experimentacin con animales, as como los cdigos ticos a que nuestro pas se ha adherido en diversos momentos, hay un claro y ofensivo manejo en contra de los animales de laboratorio y los utilizados en experimentacin clnica (4).

NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio.

Esta norma tiene por objeto establecer y uniformar las especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio que deben cumplir las personas fsicas o morales relacionadas en todos los campos con este tipo de animales (5).Esta Norma es aplicable a los bioterios y/o establecimientos que manejen los siguientes animales; roedores: rata, ratn, cobayo, hmster y jerbo; lagomorfos: conejo; carnvoros: perro y gato; primates: primates no humanos; porcinos (5).

-Otras normas mexicanas relacionadas con el uso de animales NOM-003-ZOO-1994, Criterios para la operacin de laboratorios de pruebas aprobados en materia zoosanitaria (5). NOM-029-ZOO-1995, Caractersticas y especificaciones para las instalaciones y equipo de laboratorios de pruebas y/o anlisis en materia zoosanitaria (5). NOM-033-ZOO-1995, Sacrificio humanitario de los animales domsticos y silvestres (5). NOM-046-ZOO-1995, Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiolgica (5). NOM-051-ZOO-1995, Trato humanitario en la movilizacin de animales (5). NOM-087-ECOL-1995, Que establece los requisitos para la separacin, envasado, almacenamiento, recoleccin, transporte, tratamiento y disposicin final de los residuos peligrosos biolgico-infecciosos que se generan en establecimientos que presten atencin mdica (5). NOM-008-SCFI-1993, Norma Oficial Mexicana. Sistema General de Unidades de Medida (5). NOM-018-STPS-1993, Relativa a los requerimientos y caractersticas de los servicios de regaderas, vestidores y casilleros en los centros de trabajo (5). NOM-028-STPS-1994, Seguridad-Cdigo de colores para la identificacin de fluidos conducidos en tuberas (5).

-Los principales cdigos bioticos vigentes para este objetivo:

Gua del consejo internacional de organizaciones de Ciencias Mdicas para la investigacin biomdica que involucre animales (6). Guas para el cuidado y uso de los animales de laboratorio, de los Institutos Nacionales de Salud de Estados Unidos de Norteamrica (6). Reglamento en materia de investigacin para la salu, contenido de la Ley General de Salud de los Estados Unidos Mexicanos, Ttulo sptimo, artculos 121 al 126 (6). Gua para el cuidado y uso de los animales de laboratorio (6). Declaracin Mexicana y principios bsicos de la experimentacin en animales (Comisin Nacional de Biotica) (6).

Postura de la comunidad cientfica hacia la experimentacin animal

En un principio la presin social antes comentada, fue recibida con indiferencia por gran parte de la comunidad cientfica. No obstante, en 1959 la publicacin del libro de los investigadores Russell y Burch signific un gran avance ya que des de la misma comunidad cientfica se propugnaba una profunda reflexin sobre el estado de la cuestin y se proponan tres vas posibles para reducir la investigacin con animales al mnimo y realizarla de la forma ms respetuosa posible para estos (2). Las tres propuestas formuladas por estos autores se conocen como el principio de las 3R: remplazar, reducir y refinar (2).

-Remplazar: Esta regla pretende sustituir los animales de laboratorio por equivalentes no animales. Esta es, la que seguramente ha sido ms activa en estos ltimos aos a causa del aumento del nmero de activistas moderados y radicales, y del aumento de la negativa cientfica al de animales. Hace falta remarcar que tambin ha sido muy determinante el crecimiento de alumnado para ciencias y medicina, con la cual cosa se ha optado por disminuir el nmero de animales utilizados y buscar nuevas alternativas (2).

-Reducir El concepto de reducir no es ms que reducir el nmero de animales utilizados. Para ello es necesaria la presencia de estudios estadsticos, ya que en muchsimas ocasiones se escoge un nmero de forma totalmente arbitraria sin saber justificar el porqu. Los estudios estadsticos realizan un clculo inverso, es decir, teniendo en cuenta la mortalidad que implica un determinado procedimiento por nuestra experiencia anterior, podemos averiguar el nmero de animales de los que hemos de partir. Para estos estudios existen multitud de paquetes de software especializados, como por ejemplo el Nquery Advisor con firma irlandesa (2).

-Refinar La tercera R se refiere a refinar, termino en el que se engloban todos aquellos procedimientos que pretendan minimizar el sufrimiento o la ansiedad de los animales utilizados (2). Como hemos dicho anteriormente, la causa principal del respeto a los animales radica en el respeto a la dignidad humana del experimentador. Hace falta reflexionar en que todo animal tiene sensibilidad y vive para seguir viviendo y sentir. Por lo tanto, lo peor que le pude ocurrir a cualquier animal es el sufrimiento fsico y psicolgico (2).

Animales de experimentacin

Cuadro 2. Identificacin (5).

Cuadro 3. RANGOS DE TEMPERATURA (C) Y HUMEDAD RELATIVA (%) (5).

Tcnicas experimentales

-Analgesia y anestesia. Cualquier procedimiento que cause mayor dolor o molestia en los animales, que la producida por inyeccin o marcaje en orejas, requerir el uso de tranquilizantes, analgsicos o anestsicos. Si es necesario efectuar un procedimiento doloroso sin el uso de anestesia, analgsico o tranquilizante, porque su uso afectara los resultados o propsitos del experimento, ste debe ser aprobado por el Comit (5). La eleccin del frmaco a utilizar debe ser responsabilidad del investigador, quien puede consultar con el Mdico Veterinario. Los signos que deben ser evaluados en la medida de lo posible en los animales anestesiados se sealan en el Apndice C Informativo (5). No se permitir la utilizacin de relajantes musculares o drogas paralizantes del tipo de la succinilcolina, guayacolato de glicerol o curariformes ya que no son anestsicos. Slo se podrn utilizar estas sustancias en combinacin con analgsicos de efecto conocido en proyectos aprobados por el Comit (5). La dosificacin seleccionada depender primero de los efectos, ya sea por sedacin, analgesia o anestesia y despus con base en la ruta de administracin (I.V., I.M., I.P., S.C., oral). La seleccin de la dosis depender de la especie, cepa o raza, edad, porcentaje de grasa en el cuerpo y condicin del animal (5). El animal debe de ser manejado siempre con cuidado pero con firmeza, procurando la seguridad del personal que lo manipula. Se debe evitar la lucha y el estrs en todo momento, ya que la excitacin prolongada puede alterar la circulacin y el estado metablico del individuo e inducir un estado de choque. Previo a la anestesia los animales deben someterse a un periodo de ayuno suficiente para vaciar estmago, con el fin de prevenir la regurgitacin o aspiracin del contenido gstrico. Adems de las consideraciones mencionadas en la eleccin del anestsico o analgsico, se deben contemplar las siguientes (5): Sustancias como la ketamina pueden utilizarse en combinacin con agentes relajantes musculares que potencialicen su accin y optimicen su efecto como los tranquilizantes que producen analgesia y sedacin (5).

Sustancias como el droperidol no son recomendables para su administracin intramuscular en cobayos, debido a que existe evidencia que indica que ste induce un efecto irritativo y de necrosis (5).

No se permite en ninguna especie de laboratorio el uso de cloroformo, debido a su bajo margen de seguridad y a la grave toxicidad potencial que sugiere su uso, tanto para los humanos como para los animales (5).

No se recomienda el uso del dietilter por su alto grado explosivo. Se deben implantar medidas de seguridad que garanticen su manejo apropiado. Debido a la fuerte irritacin que produce y propensin a producir bronco espasmos no se recomienda utilizar esta sustancia en conejos y roedores de laboratorio que padezcan problemas respiratorios clnicos y subclnicos, particularmente no se debe usar en cobayos y conejos de ms de dos kilos de peso corporal por el estrs que produce (5).

-Preanestsicos. Se recomienda el uso, siempre que el procedimiento experimental lo permita de tranquilizantes, analgsicos y anticolinrgicos antes de suministrar el anestsico. Los preanestsicos, tranquilizantes y analgsicos ayudan a inducir la anestesia ms suavemente, dado que reducen o eliminan la etapa de excitacin. Los tranquilizantes reducen la aprensin del animal, lo cual facilita su inmovilizacin para la inyeccin intravenosa (5). Los narcticos y tranquilizantes que se administran como preanestsicos tambin reducen la cantidad general de la dosis de anestesia que se requiere y por lo tanto incrementan el margen de seguridad. La nica desventaja del uso de estas drogas es que enmascaran las etapas y planos de la anestesia. Los colinrgicos, como la atropina, reducen las secreciones e inhiben el efecto de la estimulacin vagal (5).

-Administracin de fluidos y sustancias. La administracin parenteral de fluidos y sustancias deber hacerse conforme a las prcticas clnicas y cientficas generalmente aceptadas en el animal sujeto o inmvil. Si la tcnica causa estrs o dolor, se usarn sedantes, analgsicos o anestsicos, a menos que est contraindicado en el protocolo experimental, en cuyo caso deber contar con la aprobacin del Comit (5).

Cuadro 4. VIAS DE ADMINISTRACION DE FLUIDOS Y SUSTANCIAS (5).

Cuadro 5. VIAS DE OBTENCION DE SANGRE (5).

Cuadro 5. VIAS DE OBTENCION DE SANGRE (5).

Objetivos Determinar la forma adecuada de manejar un animal de laboratorio (ratones) Adquirir habilidad para el manejo de animales de laboratorio Conocer la normatividad sobre el uso de especies animales en experimentacin ya sea acadmica o con fines cientficos.

Material 1 ratn blanco 3 jeringas p/insulina 1 estuche de diseccin 1 papel estraza 1 par de guantes de latex 1matraz aforado 1franela

Reactivos Azul de metileno (0.5%) Agua destilada

Metodologa 1.- Se prepar el azul de metileno al 0.5 % Se coloc en un matraz aforado de 100 mL, 5 mL de azul de metileno y se afor con agua destilada. Se recolect 0.25 mL del azul de metileno al 0.5% en 3 jeringas.

2.- Manipulacin del ratn Se sac el ratn de la jaula tomndolo por la zona media de la cola y se le apoyo (sin soltarlo) sobre una superficie rugosa para que pudiera ejercer resistencia. Se posicion la base de la cola del ratn entre los dedos anular y meique, dejando libres los dedos pulgar e ndice. Se sujet con rapidez con el dedo pulgar e ndice la parte superior de cuello y hombros, teniendo especial cuidado con los ratones agresivos ya que pueden darse vuelta y morder. Se levant al animal.

3.- Administracin

Bibliografa

(1) Aranda, A.. (2001). TICA EN EXPERIMENTACIN CON ANIMALES DE LABORATORIO. En Manual de biotica (pp.311-313). Espaa: Editorial Ariel.

(2) Boada, M., Colom, A., & Castell, N.. (2011). La experimentacin animal. Noviembre 17, 2015, de Facultad de Veterinaria. Universidad Autnoma de Barcelona.

(3) Aranda, A.. (2001). tica en experimentacin con animales de laboratorio. En Manual de biotica(pp.313-314). Espaa: Editorial Ariel.

(4) Garca, G. (2014). Biotica y experimentacin con animales. Noviembre 17, 2015, de Asociacin de biotica y derechos humanos.

(5) NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio.

(6) Vanda-Cantn, B. (2003). La experimentacin biomdica en animales en los cdigos bioticos. Noviembre 17, 2015, de Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. UNAM.

ApndicesApndice C (Informativo)Indicadores que deben ser evaluados en animales bajo el efecto de anestsicosI. Patrn respiratorio: Incluye no nicamente al nmero de respiraciones por minuto, sino tambin su profundidad y las caractersticas de la respiracin del animal.II. Color de las mucosas: Si un animal est recibiendo suficiente oxgeno durante la anestesia sus membranas mucosas permanecen rosadas. Esto puede evaluarse en la mayor parte de los animales observando las mucosas bucal, rectal o vulvar. III. Tiempo de llenado capilar: Este es despus de su liberacin de una presin fsica que los mantuvo vacos. Un llenado capilar para la mayor parte de los mamferos es de menos de dos segundos.IV. Pulso: El pulso debe tomarse para evaluar la fuerza y las caractersticas del mismo, como un medio para valorar la respuesta del animal a su actividad cardiovascular. V. Presin sangunea: La valoracin de la continuidad de la presin sangunea puede ser monitoreada o valorada por medio de detectores de flujo ultrasnico Doppler.VI. Temperatura corporal: La anestesia quirrgica paraliza los centros regulatorios de calor del cerebro, lo que resulta en una cada de la temperatura del paciente. Entre ms baje la temperatura es ms baja la capacidad del paciente para metabolizar las drogas. VII. Ojos: Los ojos de un animal anestesiado proporcionan una ventana del estado de anestesia.VIII. Reflejos: Los reflejos que ms frecuentemente se evalan son el podal y el anal. Estos dos reflejos estn presentes durante los planos quirrgicos tres y cuatro, respectivamente, pero desaparecen cuando se alcanza la etapa cuatro de anestesia.