UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD

CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA.

Profesor: Dr.- Carlos García MSc.Alumno: Oswaldo Luis Silva Oyola.Curso: 5to Bioq. Farm. Paralelo: “B“ Grupo: # 7 Fecha de Elaboración de la Práctica: Martes 23 de Junio del 2015. Fecha de Presentación de la Práctica: Martes 30 de Junio del 2015.

PRÁCTICA N° 4

Título de la Práctica: INTOXICACIÓN POR CLOROFORMO.Animal de Experimentación: Rata wistar de color: blanco.Vía de Administración: Vía Parenteral. (INTRAPERITONIAL.)Volumen Administrado: 10 mL.

TIEMPOS:

Inicio de la práctica: 7:45 am Dosis adminstrada: 10 mL Animal de experimentacion: Rata wistar de color: blanco. Hora de administración del toxico a la rata wistar : 7:45 am Muerte del animal: Fue en 30 minutos. Hora de diseccion: 8:00 am - 8:20 am Inicio de la destilación: 8:30 am Finalización de la destilación: 9:20 am Final de la práctica: 10:30 am

SÍNTOMATOLOGIA DE LA RATA WISTAR.

Vomito. Cefalia. Vertigo. Muerte.

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:

Observar la reacción que presenta la rata wistar ante una Intoxicación.

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Distinguir la sintomatología de la intoxicación por cloroformo con relación a otras sustancias toxicas.

Identificar la presencia de cloroformo en sangre mediante pruebas de reconocimiento.

MATERIALES. SUSTANCIAS.

Bata de laboratorio Equipo de destilación Mechero Guantes de látex Gorro Campana Zapatones Espátula Mascarilla Pipetas Erlenmeyer Tubos de ensayo Vasos de precipitación Jeringuilla de 10 cc Instrumentos de disección.

PROCEDIMIENTO:

Para la realización de ésta práctica se efectúan los siguientes pasos:

1.- Primeramente Bioseguridad: Es decir colocarse la mascarilla, bata de laboratorio, gorro, zapatones y los guantes de látex

2.- A continuación se deben tener todos los materiales listos en la mesa de trabajo

3.- Con la jeringuilla tomamos 10 ml de etanol e inyectamos al cobayo (vía parenteral)

4.- Colocamos el cobayo en la campana

5.- Observar la sintomatología del toxico en el animal de experimentación.

6.- Esperamos el tiempo de defunción.

7.- Una vez muerto el cobayo se procede a amarrarlo en la tabla de disección.

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Acido tartárico Alcohol de 95 grados. Nitrato de plata Potasa alcohólica percloruro de hierro beta naftol Timol resorsinol Piridina cristal de yodo clorhidrato de piperacina reactivo de Benedict

EQUIPOS.

Balanza analítica Cocineta

8.- Tomamos el bisturí # 11 y lo colocamos en el soporte de bisturí y procedemos a rasurar al cobayo.9.- Con mucho cuidado cortar la piel, ejerciendo presión sobre las costillas y con una jeringa aspirar la sangre.

10- Retirar los órganos sin excepción de uno y los colocamos en un vaso de precipitación.

11.- Luego procedemos a trocear muy fino los órganos con unas tijeras.

12.- Transvasamos a un balón y colocamos las perlas de vidrio, agregar además una pequeña cantidad de ácido tartárico y unos 3ml de agua destilada.

13.- Preparar 20 ml de NaOH al 20%, colocarlo en un erlenmeyer.

14.- Armar el equipo de destilación y poner las vísceras a destilar durante 30 minutos y con la ayuda de lámparas de alcohol calentar con movimientos circulares.

15. Finalmente una vez obtenido el destilado se realizan las reacciones de identificación:

Reacción con alcohol y nitrato de plata. Reacción de dunas Reacción de Lustgarten Reacción de fujiwara Reacción de roseboom Reacción de Benedict

REACCIONES DE RECONOCIMIENTO:

El cloroformo es el triclorometano (CHCl3). Inicialmente se empleó como agente anestésico, peropoco después se abandonó este uso por s gran toxicidad hepática y renal.es un líquido incoloro y no inflamable, de olor y sabor dulzón, extremadamente volátil y muy liposoluble. La intoxicación aguda y crónica puede ocurrir por exposición a sus vapores.

El material de la investigación se somete a destilación con arrastre de vapor en medio acido tartárico, y en el destilado se realiza las reacciones de identificación.

En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras tantas de alcohol de 95 grados que contiene un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se observa que esta arde con un llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata.

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1. Reacción de Dumas.- Al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio.

CHCl3 + 4 KOH ClK + HCO2K + H 2 OSe neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frio o un precipitado en caliente. A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoniaco diluido.

2. Reacción de Lustgarten.- Al calentar la muestra con unos miligramos de beta naftol y una solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul. Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo as o menos oscuro; con resorsinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo.

3. Reacción de fujiwara.-En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de lejía de sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo; se agitan, podemos por unos instantes en baño de María y se deja en reposo; se convierte en una materia coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina .

Esta reacción sensible para unos pocos microgramos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica.

4. Reacción de roseboom.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina ; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el alcaloide.

5. Reacción de Benedict.- si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de Benedict, y de acuerdo a la concentración del toxico puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo.

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GRÁFICOS DE LA PRACTICA:

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Animal de experimentación:

“ Rata wistar “.

Inyectar 20 ml el toxico (metanol) en el animal de experimentacion.

Observar los síntomas de la rata luego de la administración del toxico hasta la muerte.

Colocar a la rata en la tablay realizamos la disección.

Colocación de las vísceras (picadas lo más finas posibles) en el vaso.

Se arma el equipo de destilación y comienza la destilacion.

Se recoge el destilado, para las reacciones de identificación.

Aqui esta la solucion madre, para que los grupos hagan las reacciones de reconocimiento.

REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS.

SOLUCION ALCOHOLICA A LA LLAMA:

Reacción Positivo característico Hubo coloracion Verde. Azulada.

REACCION DE DUMAS.Reacción Positivo caracteristico Si-hay coloración rojo en frio. En caliente se le agrego solución de nitrato de plata dando un precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoniaco diluido. Dando positivo caracteristico .

REACCION CON LA LUSGARTEN.Reacción Positivo No caracteristico No hay Coloración rojo grosella.

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Antes (color transparente) En frio y caliente.

Despues (Positivo No caracteristico )

Antes (color transparente)

Despues (Positivo caracteristico )

Antes (color transparente) Despues (Positivo caracteristico )

Positivo no característico (b naftol) No hay color Amarillo.

REACCIÓN Positivo característico (timol)

Si hay color Amarillo.

Positivo característico (piperidina)

Hay color Rojo.

REACCIÓN DE FUJIWARA.

Reacción Positivo No caracteristico No hay coloracion color rosa al rojo vivo.

REACCIÓN DE ROSEBOOM.

Reacción Positivo No caracteristico No hay coloración roja.

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Antes (color transparente) Despues (Positivo No caracteristico )

Antes (color transparente) Despues (Positivo No caracteristico )

REACCIÓN DE BENEDICT.

Reacción Positivo caracteristico Si hay coloración verde, ( tambien puede formarse una gama de colores como amarillo, naranja o rojo ladrillo. )

AQUÍ ESTA EL GRUPO # 7

TRABAJANDO Y MOSTRANDO LA REACCION DE BENEDICT.

OBSERVACIONES.

En la realización de ésta práctica al haber administrado los 10 ml de cloroformo por vía peritoneal en la rata se pudo observar el deceso del animal después de 30 minutos, durante su agonía presentó vomitos, cefalias,vertigo,nauseas y seguidamente la muerte por la intoxicación con cloroformo.

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Antes (color transparente) Despues (Positivo No caracteristico )

Es importante mencionar que a través de la aplicación de las reacciones de identificación en medios biológicos, observamos la coloración de las reacciones lo cual corroboro para determinar la presencia del cloroformo en el animal de experimentacion.

CONCLUSIONES.

En la realización de esta práctica se aprendió a reconocer los efectos o síntomas provocados por la administración del toxico al organismo del animal de experimentación, así como también hemos identificado la presencia de cloroformo en la sangre del animal mediante pruebas específicas para el reconocimiento de este compuesto que puede originar a su vez coma o hasta incluso la muerte como se ha demostrado en esta práctica.

Es importante mencionar que al realizar las reacciones de reconocimiento de este toxico entre ellas: la reacción con alcohol y nitrato de plata, reacción de dunas, reacción de Lustgarten, , reacción de Roseboom, reacción de Benedict. La mayoría dieron resultados positivos característicos lo que nos indica que si hubo presencia de cloroformo en la muestra.

RECOMENDACIONES.

Asegurarse que el equipo esté correctamente sellado, ya que de esta forma logramos impedir el escape de los vapores en el proceso de la destilación, evitando así una intoxicación.

Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, gorro, zapatones, guantes, mascarilla.

Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio. Utilizar pipetas específicas para cada reactivo. Preparar correctamente las sustancias a la concentración requerida Acatar las sugerencias y guías expuestas por el ayudante, para de esta

manera obtener muy buenos resultados en la realización de la práctica.

CUESTIONARIO.

¿CUÁLES SON LAS PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DEL CLOROFORMO?

El cloroformo es un líquido incoloro, volátil y no inflamable con un característico olor dulzón.

Factor de conversión (20 o C, 101 kPa): 4,97 mg/m3 = 1ppm Peso molecular: 119,38 Fórmula molecular: CHCl3 Solubilidad: ligeramente soluble en agua, miscible con alcohol, éter,

benceno, sulfuro de carbono y tetracloruro de carbono. Punto de fusión: –63 oC Punto de ebullición: 62 oC

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Presión de vapor: 21 kPa a 20 oC Densidad: 4,1 veces la del aire Límite de explosividad: – Umbral de olor: 20 ppm (100 mg/m3)

¿CUALES SON LOS USOS MAS COMUNES DEL CLOROFORMO?

Fue utilizado como un anestésico temprano en cirugía y odontología y por esta

razón las personas que trabajan con el material deben evitar la inhalación de sus

vapores. Hoy en día el cloroformo tiene un importante número de usos tales como:

En química se utiliza en la separación orgánica.

En la fabricación de plásticos que se utiliza en el proceso de unión.

Se utiliza en síntesis orgánica.

Se utiliza como un precursor en la fabricación de teflón (antiadherente).

En la Primera Guerra Mundial el cloroformo fue usado como arma química.

¿CUADRO CLINICO DEL CLOROFORMO?

La severidad de los síntomas por exposición aguda, vía respiratoria, digestivo, dérmica, está en relación directa con la dosis absorbida. El cloroformo, cuando se inhala, produce todos los niveles de anestesia, teniendo un margen de seguridad muy estrecho, debido a que causa fallo cardiaco y respiratorio de forma casi simultánea. No puede detectarse por el olfato hasta que su concentración excede de 400 ppm.

Una exposición durante 10 minutos a concentraciones de 1000 ppm produce síntomas generales como nauseas, vómitos, vértigo cefaleas .exposiciones a una concentración de 1000 a 4000 ppm origina desorientación y concentraciones de 10000 a 20000 ppm dan lugar a pérdida de conciencia, pudiendo originar la muerte.

Dependiendo de la dosis absorbida va a producir alteraciones más o menos importantes de la función hepática, renal y cardiaca.El cloroformo, por su acusado poder como disolvente de grasas, en contacto con la piel da lugar a dermatitis local, y en los ojos produce irritación corneal.

¿DESCRIBA EL PROCESO DE METABOLIZACION DEL CLOROFORMO?

El cloroformo es metabolizado por vías oxidativas y reductoras. Encondiciones normales, el metabolismo oxidativo es la vía principal, y el metabolismo reductivo no juega un papel significativo. El cloroformo también se conjuga con ácido glucurónico (conjugación mercaptúrica). El metabolismo del cloroformo es más rápido en ratones que en ratas, mientras que en los tejidos humanos (hígado y riñón), porque tienen un déficit en la actividad del isoenzima CYP2E1, que es la responsable del metabolismo del cloroformo.

¿INDIQUE EL TRATATMIENTO PARA CLOROFORMO?

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En vista de que el cloroformo sufre conjugación mercaptúrica en su paso por el organismo, algunos autores proponen a la N-acetilcisteína como un posible tratamiento de las intoxicaciones con cloroformo. La N-acetilcisteína, por su capacidad de inhibir la formación de radicales libres generados por el cloroformo y sus metabolitos, ha presentado efectividad en algunos casos en el tratamiento de intoxicaciones por cloroformo, incluso combinado con otros antioxidantes naturales, como la vitamina E.

GLOSARIO.

CLOROFORMO.Triclorometano. También llamado cloroformo o tricloruro de metilo, es un compuesto químico de fórmula química CHCl3. Puede obtenerse por cloración como derivado del metano o del alcohol etílico o, más habitualmente en la industria farmacéutica, utilizando hierro y ácido sobre tetracloruro de carbono. A temperatura ambiente, es un líquido volátil, no inflamable, incoloro, de olor dulzón.

BETA NAFTOL. 2-Naftol, o β-naftol, es un sólido cristalino incoloro de fórmula C10H7OH, es un isómero de 1-naftol, que difieren según la ubicación el hidroxilo de naftaleno. Los naftoles son los homólogos del naftaleno de fenol, con el grupo hidroxilo más reactivo que en los fenoles. Ambos isómeros son solubles en alcohol, éter y cloroformo. Se pueden utilizar en la producción de tinta s en la síntesis orgánica. Por ejemplo, 2-naftol se hace reaccionar para formar 1,1'-Binaftaleno-2,2'-diol.

TIMOL. El timol (2-isopropil-5-metilfenol) es una sustancia cristalina incolora con un olor característico que está presente en la naturaleza en los aceites esenciales del tomillo o del orégano, que se encuentra a la vez el cimeno y el timeno.El timol se caracteriza por su poder desinfectante y fungicida. Por su sabor agradable está presente en la formulación de diversos enjuagues bucales, pastas de dientes etc. Una disolución de 5 % timol en etanol se utiliza para la desinfección dermal y contra infecciones con hongos.

REACCION BENEDICT. La reacción benedict o prueba de benedict identifica azucares reductores como lactosa, glucosa, maltosa. Se utiliza el reactivo de benedict el mismo que consta de sulfato cúprico, citrato e sodio, carbonato anhidro de sodio.

PIRIDINA. Es un líquido incoloro de olor característico desagradable. Pertenece a la familia de los compuestos aromáticos heterocíclicos, y está estructuralmente relacionada al benceno, siendo la única diferencia entre ellos el reemplazo de un grupo CH del anillo bencénico por un átomo de nitrógeno

BIBLIOGRAFÍA

Toxicología Médica Dr. Phil, Dr. Med. H. Funher. Editorial Científico-Médico. Madrid. España. 2010.

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LORÍA J .BERMEO A. RAMÍREZ A. FERNÁNDEZ D. Archivos de Medicina de Urgencia de México. Intoxicación por cloroformo, reporte de un caso. Mexico 2009 Vol. (Consultado el 19 deJunio del 2014). Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/urgencia/aur-2009/aur092f.pdf

BIBLIOGRAPHYJulian, I. (2003). Quimica. En I. Julian, Diccionario de Quimica. Madrid: Editorial Complutense.

Torres, L. M. (2002). Metanol. En L. M. Torres, Cuidados Criticos y Emergencias. Madrid: Aran Ediciones.

WEBGRAFÍA http://www.quimica.unam.mx/IMG/pdf/7cloroformo.pdf http://www.dorwil.com.ar/msds/Cloroformo.pdf

https://www.murciasalud.es/recursos/ficheros/137913- Cloroformo.pdf

AUTORIA.

Dr.- Carlos García MSc.

FIRMA DEL RESPONSABLE.

Oswaldo Luis Silva Oyola

ANEXOS:

REACTIVOS QUE USAMOS EL GRUPO # 7 PARA PREPARAR EL REACTIVO DE BENEDICT EN LA IDENTIFICACION DE CLOROFORMO.

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ANEXOS:

DATOS OBTENIDOS DE LA PRACTICA DE INTOXICACION, MEDIANTE LA SINTOMATOLOGIA DE LA RATA WISTAR Y LAS REACCIONES DE RECONOCIMIENTO POR CLOROFORMO.

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