practica 2 uso de micropipetas

8/9/2019 Practica 2 USO de Micropipetas

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MANEJO DE MICROPIPETAS

INTRODUCCION.

La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir

pequeos volmenes de lquidos y permitir su manejo en las distintas tcnicascientficas.Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos lquidos sin

tener que lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plstico,

que habitualmente son estriles. Existen varios tipos de puntas para los diferentes

volmenes de pipeteo.

Identifique las Caracteristicas:

1. Botn pulsador2.Tornillo del botn pulsador3.Rueda dentada de graduacin del volumen.4.Cono de la pipeta.5.Expulsor de punta.6.Puntas o tips descartables7. rack para tips


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1. Graduacin del volumen

Para graduar el volumen de la micropipeta identifique la rueda, control y/o tornillo degraduacin .

Seleccione la micropipeta y las puntas que va a utilizar teniendo en cuenta elvolumen de solucin a pipetear:

Tipo de Micropipeta Volumen Tipo de puntaP10 0,5 l - 10 l Amarillas o blancasP20 0,5 l - 20 l Amarillas o blancasP100 10 l -100 l AmarillasP200 20 l -200 l AmarillasP1000 100 l -1000 l Azules o blancas

Seleccione el volumen por medio de la rueda y/o tornillo de graduacin, deforma firme pero suavemente de vuelta al tornillo mientras observa el cambiode la numeracin del display. Teniendo cuidado de exceder los lmites de lamicropipeta.

Ponga la punta correspondiente, presione la punta firmemente usando unmovimiento de torsin ligero y tres golpes sobre el rack.

2. Operacin del Equipo:

Aspiracin ydispensacin

Figura

a. Presione el botnsuperior hasta el primertope positivo,


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b. Sostenga la pipetaverticalmente, sumerjala punta en el lquido.La profundidad a la que

la punta se sumerge enla muestra depende delmodelo; en generalmenos de 6 mm

c. Suelte el botndespacio y fcilmentepara aspirar, .Espereunos segundos yentonces retire la puntadel lquido.

d. Ubique la punta de lapipeta en la paredinterior del vaso en unngulo de 10 a 40

grados. Presione elbotn suavementehasta el primer tope..Espere unos segundo.


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e. Presione el botnhasta el segundo topepara expeler cualquierremanente de lquido.

Mantenga el botnpresionado hasta elfinal, remueva la pipetapor arrastre sobre lasuperficie del vaso.

f. Libere el botn

g. Expulse la puntapresionando el botn deeyeccin


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Es necesario el cambio de la punta si el lquido es diferente al ya muestreado o si elvolumen establecido es cambiado.Cuando se pipetean lquidos que tienen una viscosidad y densidad diferentes a la

del agua, por ejemplo solventes orgnicos, una pelcula de lquido se forma sobre

las paredes internas de la punta. Esta pelcula puede crear error. Desde que la

pelcula remanentes sea constante en sucesivas pipeteadas con la misma punta,

este error puede ser evitado mediante la formacin de la pelcula antes de transferir

la primera muestra; esto es hacer una aspiracin de la muestra y dispensarla en el

mismo vaso, cuando la pelcula es formada ya todas las muestras siguientes

tendrn mejor exactitud y repetibilidad.

Esta operacin de pre-enjuague deber ser repetida cuando el volumen a seraspirado cambia o cuando se usa una nueva punta.

3. Recomendaciones:

No pipetear volmenes que sobrepasen la capacidad de la micropipeta.

Durante el uso y manejo las micropipetas deben permanecer en formavertical.

Ubicar las pipetas en soportes adecuados o en el embalaje original sinpuntas.

Mantener limpias las micropipetas.

Si sus micropipetas son autoclavables y son sometidas a este proceso, estasdebern ser verificadas antes de su uso.

Evite autoclavar las micropipetas si esta caracterstica no se encuentra dentrode las especificaciones.

Una vez terminado el uso de la micropipeta debe limpiarse el rea deacoplamiento con una servilleta para evitar contaminacin.

Posiciones de la micropipeta a la hora de medir un volumenespecfico.

A: Botn pulsador en el primer tope,

B: la punta de la micropipeta es sumergida entre 1 mm y 3 mm en la muestra paraluego liberar el botn pulsador suavemente hasta su posicin original,C: Forma correcta de dispensar el lquido medido en el recipiente correspondiente,D: Posicin de la micropipeta al apretar el botn pulsador hasta el segundo tope,E: Vuelta a la posicin inicial,F: Expulsin de la punta, la cual debe ser descartada en un recipiente apropiado.


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CALCULO DE LA EXACTITUD (E%) Y DEL COEFICIENTE DE VARIACIN(CV%)Clculo del volumen medioLos valores de las pesadas del control gravimtrico son slo la masa del volumen

dosificado. Para obtener el volumen real se debe efectuar un clculo corrector. El

clculo corrector se realiza por multiplicacin del valor medio de los valores de laspesadas (x) con el factor Z (mL/g que es lo mismo que l/mg), que toma enconsideracin la densidad del agua, la temperatura de control y la presinatmosfrica.Z es igual a 1,0032 l/mg, referido a 21,5 C, 1013 mbar (hPa) y a la utilizacin deagua destilada o z es igual a 1,0029 l/mg, referido a 20 5 C y 1013 mbar (hPa).El factor Z es igual a 1/densidad.

Valores del control a 21,5 C (Z = 1,0032)

Volumen controlado Vo (l): 200,0000

Valor nominal (mg) = Volumen controlado/Z

Valor nominal (mg): 199,3620

Ejm de 5 medidas: x1 =200,2000 x2=199,6000 x3= 199,4900 x4= 199,7000

x5= 199,7000


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Exactitud (E%)

Desviacin estndar

S = Z .(Xi X)2n-1

Coeficiente de variacin


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Para el ejemplo calculado se obtiene el siguiente resultado:

Volumen controlado (L): 200,0000

Volumen medio (L): 200,3772

E [%] 0,189

CV [%] 0,136

E [%] nominal* 0,500

CV [%] nominal* 0,200

* lmites de tolerancia de las instrucciones de manejo

Si los valores calculados de exactitud (E [%]) y coeficiente de variacin (CV

[%]) son menores que los valores de tolerancia o iguales a stos, entonces elaparato est en orden.

Objetivo:

Usar correctamente las micropipetas y calcular su exactitud

Material

Micropipetas de 20, 200 y 1000 ul

Tips Azules (1000 ul)

Tips Amarillos (200 ul)

Tips Blancos (20 ul)

Gradillas con 5 Tubos de vidrio 5ml

Agua Destilada

Buffer Laemmli

HCl 1 N


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PARTE EXPERIMENTAL

1. EXACTITUD (E%) Y EL COEFICIENTE DE VARIACIN (CV%)

Para cada micropipeta revisar el porcentaje de exactitud (E%) y el coeficiente de

variacin (CV%) en todo el rango usando al menos dos volmenes diferentes; porejemplo:

Procedimiento:1. Seleccionar la micropipeta y las puntas adecuadas.2. Colocar un trozo de papel parafilm (2x2 cm) en la balanza y tarar a cero.3. Tomar el volumen de agua destilada con la micropipeta y dispnselo sobre elparafilm. Anote el peso del agua aadido. La densidad del agua es 1 g/mL a 25 C,por lo tanto un volumen de 1 mL corresponde aproximadamente a una masa de 1 g,300 L a 0.3 g, 200 L a 0.2 g, 60 L a 0.06 g, 10 L a 0.01 g y 3 L a 0.003 g.4. Repita el procedimiento cinco veces para cada volumen.

Para la micropipeta P1000 revisar los volmenes de 300 L y 1000 L.Volumen (ul) Peso (mg)

300

300

300

300

300

Dibuje la micropipeta utilizada, anote sus caractersticas y Hacer los clculos paraencontrar el porcentaje de exactitud (E%) y el coeficiente de variacin (CV%). Cules el estado de su Micropipeta?

Volumen (ul) Peso (mg)

1000

1000

1000

1000

1000


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Para P200 revisar los volmenes de 60 y 200 L.


200

200

200

200

200

Dibuje la micropipeta utilizada, anote sus caractersticas y Hacer los clculos paraencontrar el porcentaje de exactitud (E%) y el coeficiente de variacin (CV%). Cules el estado de su Micropipeta?


60

60

60

60

60


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Para P20 revisar 3 y 10 L.


10

10

10

10

10

Dibuje la micropipeta utilizada, anote sus caractersticas y Hacer los clculos para

encontrar el porcentaje de exactitud (E%) y el coeficiente de variacin (CV%). Cules el estado de su Micropipeta?


3

3

3

3

3


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2. ERRORES EN LA MEDICIN.

Otro de los factores que influyen en el manejo es la forma correcta de pipetear.

Procedimiento:

1) Prepare una gradilla con 5 tubos Eppendorf conteniendo 1 ml de Agua2) Anadir a cada uno de los tubos 5 ul de buffer Laemmli 4X3) Mezclar los tubos, por inversin4) Anotar la absorbancia o intensidadi de color usando simbolos.5) Dibuje el experimento y comente los resultados..

Repetir el experimento, esta vez utilizando HCl 1N

Procedimiento:

1) Prepare una gradilla con 5 tubos Eppendorf conteniendo 1 ml de Agua2) Anadir a cada uno de los tubos 10 ul de HCl 1N3) Mezclar los tubos, por inversin

4) Anotar el PH de cada uno de los tubos.5) Dibuje el experimento y comente los resultados..

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