verificación de la calibración de micropipetas 2013

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Verificación de la calibración de micropipetas

2013


Certificación - Acreditación

Un fabricante que desee certificar sus productos deberá recurrir a una organización ACREDITADA, para que ésta realice dicho proceso.

ISO 17025


ILAC

• La Cooperación Internacional de Acreditación de Laboratorios es una cooperación internacional de acreditación de laboratorios y de organismos de inspección que se formo hace más de 30 años para ayudar a reducir las barreras técnicas al comercio.

• Es el máximo organismo internacional de cooperación para laboratorios y unidades de verificación acreditados . Esta integrado por más de 70 paises y organismos regionales.


Importancia de los acuerdos MRA

En efecto, cada miembro de un MRA reconoce los laboratorios acreditados de otro miembro como si ellos mismo hubiesen efectuado la acreditación de los laboratorios del este miembro.

ISO/IEC 17025

Acuerdos basados en la evalución y

aceptación mutua de los sistemas de acreditación de

laboratorios de cada uno

MRA

Arreglo de Mutuo Reconocimiento

Los resultados son ACEPTADOS

entre estos países


ILAC

• Los principales objetivos de ILAC son:

- Promover la aceptación de certificados de conformidad emitidos por organismos acreditados por sus miembros.

- Influir en el desarrollo de procesos y prácticas de acreditación de laboratorios .


ILAC

• ILAC y la lista de firmantes puede encontrarse en la página web de ILAC www.ilac.org.

• Deutscher Kalibrierdienst (DKD) Full Member (MRA Signatory) • Ente Costarricense de Acreditación (ECA). Full Member (MRA

Signatory) • Oficina Guatemalteca de Acreditación (OGA) Full Member (MRA

Signatory) • Entidad Mexicana de Acreditación (ema) Full Member (MRA

Signatory)

MéxicoEMAEntidad Mexicana de AcreditaciónTel:52 55 9148 4300Fax:52 55 5591 0529Email:[email protected]:http://www.ema.org.mxAccredited LaboratoriesFull Member (MRA Signatory)


BRAND BRAND Calidad certificadaCalidad certificada

Exigencias en la certificación de material volumétricoBPL- Buenas Prácticas de Laboratório

Control de medios de análisis


Buenas Prácticas de Laboratorio

ISO 9001ISO 9001

ISO 14001ISO 14001

Acreditación DAkkSAcreditación DAkkSAntes DKDAntes DKD


Laboratorio de calibración DAkkS Acreditado según ISO/IEC 17025

1998 - por primera vez en el mundo - un fabricante ha sido acreditado por el Instituto

Federal Físico Técnico (PTB) como laboratorio de calibración de instrumentos de

medición volumetricasegún la norma DIN EN ISO/IEC 17025

Pipetas de émbolo aspirante 0,1µl - 10 mlPipetas multicanal 0,1µl - 300 µlBuretas de émbolo 5 µl - 200 mlDosificadores, diluidores 5 µl - 200 mlpicnómetros 1 ml - 100 mlap. volumétricos en vidrio IN 1 µl - 10 000 mlap. volumétricos en vidrio EX 100 µl - 100 mlap. volumétricos en plástico IN 1 ml - 2000 mlap. volumétricos en plástico EX 1 ml - 100 ml

BRAND efectua el calibrado del instrumento

Independiente de la marca


Pipetas con cojín de aire

Pipetas de desplazamiento positivo

PipetasPipetas


2. Desplazamiento positivo

El piston tiene contacto directo con el Líquido aspirado. El émbolo moviblePerfectamente ajustado a los capilaresDeja siempre limpias las paredes de losMismos.

2.

1. Con cojín de aire

No hay contacto directo entre el pistónY el líquido (interfase de aire).Recomendado donde no se permite ningún arrastre, como con medios infecciosos o radioactivos

1.

Pipetas con cojín de aire - Pipetas con cojín de aire - Pipetas de desplazamientoPipetas de desplazamiento


- Ideal para pipetear líquidos de alta viscosidad y medios de alta densidad (soluciones protéinicas, aceites, resinas, grasas, glicerina, mercurio, ácido sulfúrico).- Medios que tiendan a producir espuma (tensoactivos).- Medios de alta presión de vapor (alcoholes, éter, hidrocarburos).

No es necesario cambiar la punta después de cada pipeteado, ya que el residuo en las paredes de la punta es mínimo.

Transferpettor


Pipetas de cojín de airePipetas de cojín de aire

Aplicaciones

Pipeteo exacto de cantidades pequeñas.Biología molecular PCR Secuenciación de DNA/RNA enzimología Pruebas de actividad Pruebas de inhibición


Calidad de las puntas Calidad de las puntas

1. Igualdad de lote a lote

2. Hermeticidad del sistema punta/pipeta

3. Calidad de la superficie

4. Calidad de la materia prima

5. Influencia de los aditivos en la materia prima

rebadas


Puntas de Pipeta

Rangonano-cap™ 0.1 - 20 µlPunta cristal 0.5 - 20 µlPunta amarilla 2.0 - 200 µlPunta neutra 5.0 - 300 µlPunta azul 50 - 1000 µlPunta 1250 µl 50 – 1250 µl Punta neutra 500 - 5000

µlPunta neutra 1000 -10000

µl


• esteriles

• Libres de DNA y RNasa

• Libres de endotoxinas

• Libres de ATP


Puntas de baja retención Puntas y puntas con filtro

¡Más hidrófobas que PTFE!


Comparción de líquido residual en puntas estandar BRAND y puntas de baja retención (liquido 60 % glicerina)



Comparación de líquidos residuales en puntas BRAND estándar y puntas de baja retención con diferentes líquidos (puntas de 200 µl utilizadas en una Transferpette S)



- Usar puntas originales o puntas comprobadas (examinación de la hermeticidad)

- Acoplar la punta girándola

- Al trabajar con volumenes pequeños esperar 10 s después de acoplar la punta

- Tiempo de espera: 1 s

Calibración


Instrucciones de calibrado

Pasos a seguir para la calibración:

Preparar la micropipeta y control visual. Aparatos de control y accesorios

Recipiente de recogidaBalanza*Termómetro *Hidrómetro•trazabilidad del control al patrón nacional

Control gravimétrico Valoración de los resultados gravimétricosProtocolo


Importante

•• igualdad de temperatura de la pipeta y del líquido

• control exacto de la temperatura del líquido

•• presionar el primer tope siempre con la misma fuerza

•• sostener la pipeta verticalmente al aspirar

•• usar puntas originales o adecuadas

•• humedecer las puntas 5 veces


Volumen

1. Volumen nominal

2. 50% del volumen nominal

3. 10 % del volumen nominal

• para examinar la conformidad: > 10 mediciones

• puede modificarse de manera adecuada para otros objetivos

ISO 8655


Calibración de pipetas

Condiciones de ensayo•Identificación de la pipeta•Igualdad de temperatura•Temperatura entre 15°C y 30°C•Temperatura constante ± 0,5°C•Termómetro ± 0,5°C•Balanza con una precisión diez veces mejor que la tolerancia de la pipeta•Humedad mayor de 50%

Calibración1. Acondicionar la pipeta2. Usar una punta nueva3. Tarar el recipiente de pesar4. Humedecer la punta una

vez5. Aspirar el agua sujetando

la pipeta verticalmente y sumergiendo la punta 2 - 3 mm

6. Escurrir la pipeta a lo largo de 8 - 10 mm en la

pared del recipiente7. Repetir 9 veces.Examinación en 100%, 50 %; 10 %

Evaluación y documentación


volumen lectura balanza reproducibilidad

0,1 hasta 10 µl 0,000001 g ± 0,003 mg

20 hasta 30 µl 0,00001 g ± 0,03 mg

50 hasta 250 µl 0,00001 g ± 0,02 mg

300 hasta 1000 µl 0,0001 g ± 0,1 mg

2 hasta 10 ml 0,0001 g ± 0,1 mg

20 hasta 300 ml 0,001 g ± 1 mg

500 hasta 1000 ml 0,01 g ± 10 mg

2000 hasta 5000 ml 0,01 g ± 50 mg

10 000 ml 0,1 g ± 100 mg

Balanzas


Control de pipetas con volumen < 50 µl

Reducción de la evaporación

1. utilización de micropipetas desechables intraEND 100 µl como recipiente de pesar

2. Utilización de microrecipientes con filtro

3. Trampa de evaporación


Frecuencia de control

Liquid Handling: cada 3 - 12 meses


EVPttWV dG

L

LWt

Ref11

1Ref

Densidad del agua

Densidad del aireDensidad del peso

Coeficiente de dilatación

Temp. del aguaDiferencia del peso

Evaporación

Influencia delusuario

Formula


CtZG

L

LW

2011

1

V20= Z * P

Cálculodel volumen


10

10987654321 xxxxxxxxxxx

zxV

9

210

29

28

27

26

25

24

23

22

21

xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx

zs

V

sCV

100%

100%0

0

V

VVE

Verificación


31

Faktor Z [µl/mg]


Cada certificado representa el RESULTADO de una calibración unicamente a un tiempo específico

pero….


• ¿La mayoria de las pipetas, independientemente del fabricante, fallan con el paso del tiempo?

• ~ 95 % de las fallas estan relacionadas al goteo del sistema de pipeteado, que conduce a la aspiración de volumenes menores!

• Ajustar la pipeta no resuelve el problema!

• Las fallas generalmente ocurren entre los intervalos de calibración.

Sabía Ud.?


Fallas típicas de las pipetas de cojín de aire

Sabía Ud.?


Resultados cuestionables.

Perdida de tiempo para identificar la causa del error durante la calibración y el rechazo de la pipeta al terminar la calibración.

Selección de intervalos cortos de calibración para asegurar el buen funcionamiento de las pipetas

Incremento de los costos, debido a los intervalos cortos de calibración.

Fugas no detectadas o dificiles de detectar:


Qué es la unidad PLT ?

PLT significa Pipette Leak Testing unit.

La unidad PLT de BRAND es el aparato verificador de sellado de pipetas de cojín de aire, que detecta las fugas más pequeñas en pocos segundos.

Después de generar un vacío, se mide el aumento de presión dentro de un período de tiempo. El cambio de presión en ese intervalo de tiempo, lleva a una taza de fuga, la tasa de filtración corresponde a un determinado volumen.


La unidad PLT no reemplaza la prueba gravimetrica periódica, pero asegura los períodos entre las calibraciones, mediante el control diario de las pipetas.

El aparato detecta incluso las fugas más pequeñas.

De esta forma, la seguridad operativa de las pipetas mejora decisivamente.

Unidad PLT


¿Verificación CON o SIN punta de pipeta?

Para verificar todo el sistema de pipeteado (completo), recomendamos realizar la prueba CON punta Y QUE ÉSTA SEA NUEVA .

Cuando una fuga ha sido identificada, la prueba se vuelve a realizar SIN la punta para determinar en que parte está localizada la fuga (en la zona de acoplamiento de la punta o en la punta misma)

¿Con o sin puntas?


¿Dinámico o estático?

En la prueba estática la tecla de pipeteo no se presiona durante el ensayo, esto es, el pistón no se mueve, con esto se determina una falta de sellado general, sin asignación a un componente específico.

Con la prueba dinámica puede determinarse si un émbolo defectuoso (sucio, rayado) ha causado una fuga.Durante la prueba de medición, la tecla de pipeteo debe presionarse varias veces hacia abajo.De esta forma, el movimiento de émbolo resultante permite detectar averías en el émbolo.


Adaptadormonocanal

Pantalla

Tecla retroceder

Tecla de inicio/confirmación

Botón de ajuste

Indicador LED

tapón

Unidad PLT


Adaptadores

Adaptador monocanalPara pipetas con punta

Adaptador monocanal para pipetas sin punta

Adaptador multicanal para pipetas con y sin punta

Filtro PE en adaptadores mono y multicanal (para proteger el aparato contra humedad o suciedad).


Pantallas


Resultados

Los valores límite para la verificación , representan un límite de advertencia! • Los límites de advertencia de todas las pipetas se almacenan.

Si el límite de advertencia es alcanzado (La pantalla muestra FALLA y hay una luz roja parpadenate, el volumen faltante es detectable gravimetricamente.

Este es el caso a partir de ¼ de tolerancia de volumen según la ISO 8655-2

Cuando la pipeta esta limpia, mecanicamente libre de error y pasa la prueba en la unidad PLT significa que el aparato esta dentro de las tolerancias de la norma ISO 8655-2.

Límite


Resultados

a) La barra ha sido completada en su totalidad hasta abajo: La pipeta es hermética

b) La barra ha sido completada desde arriba, sólo hasta el sector de la marca de valor límite. Recomendamos realizar un ensayo gravimétrico.

c) El llenado de la barra finaliza claramente por arriba de la marca de valor límite: La pipeta no es hermética. Debe hacerse un ensayo gravimétrico, y de ser necesario, la pipeta se debe enviar a reparación.


Bibliografia

1.- www.brand.de2.- Catálogo Brand 8003.- SOP procedimientos calibración4.- Manuales de usuario.


Gracias por su atención

verificación de la calibración de micropipetas 2013

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