obtención y caracterización de taninos-david campos

8/3/2019 Obtencin y caracterizacin de taninos-David Campos

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CONCURSO NACIONAL PERBIODIVERSO DEPROYECTOS EN CIENCIA Y TECNOLOGA

ORIENTADOS AL BIOCOMERCIO

Dr. David Campos GutierrezDra. Rosana Chirinos Gallardo Dr. Milber Urea peraltaMs. Sc. Indira Betalleluz Pallardel Ms. Sc. Ana AguilarGlvezMs. Sc. Freddy Yavar Villanueva Ing. Pablo Trellez Morales

Ing. Flor Chambi Jallurama Ing. Noem Bravo Aranibar


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La Tara (Caesalpinia spinosa) es un rbol de origen peruano que crece en las

zonas secas.

I. INTRODUCCION

Leyenda:

02 Ancash03 Apurmac04 Arequipa

05 Ayacucho06 Cajamarca09Huancavelica10 Hunuco11 Ica12 Junn

13 La Libertad14Lambayeque16 Lima19 Moquegua21 Piura24 Tacna


3/52

I.2. Industrializacin de la tara (Caesalpinia spinosa)

FrutoSemillas

Vainas

Goma

Tara en polvo A. glicoDerivados de a. glico


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I.1. Taninos de la tara

Las vainas de tara contienen entre 50 a60 % de taninos hidrolizables del tipogalotaninos y en muy baja proporcinlos elagitaninos

Para muchos galotaninos, el poliolcentral es la glucosa, en otros puede serel glucitol, hamamelosa (derivada de laribosa), cido sikimico, cido qunico yquercitol

Los taninos de las vainas de tara secomponen esencialmente de los sterespolidigalolicos de cido qunico

O

O

OO

OH

OH

OH

O

OH

OH

OH OO

O

O

OH

OH

OH

O

OH

OH

HO

O

OH

OHHO

-1,2,3,4,6-Pentagaloil-O-D-Glucopiranosa

O

OH

OHHO

O

OH

OH

O

Ester digaloil

(Enlace para-depsdico)


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Los taninos de la tarapueden ser divididos entres grupos:

cidos mono-, di-, tri-, ytetra-galoilqunico, los queno tienen enlacesdepsdicos;

despidos relacionados a la

estructura 3,4,5-trigaloil,considerados como losmayores componentes delos taninos de tara y

despidos relacionados alcido 1,3,4,5-Structure of 3,4,5 tri-O-galloylqui

Taninos de la tara


6/52

Taninos de la tara

La estructura de galotaninos de tara fuedetallada por Clifford y Bouchet (2007),

cido 4-galoil-5-(digaloil)qunico, cido 5-galoil-4-(digaloil)qunico,

cido 3-(digaloil)-4,5-digaloilqunico, cido 4-(digaloil)-3,5-digaloilqunico, cido 5-(digaloil)-3,4-digaloilqunico, y cido 1,3,4-trigaloilqunico.

Los galotaninos de tara cido 1,3-

digaloilqunico y cido 1,3,4-trigaloilqunico son de naturalezahidrfila.

Galotaninos de la tara

COOHHO

R1O

OR1

OR2

O

OH

OH

OH

C

O

O

OH

OH

C O

OH

OH

OH

C

R1 =

R2 =

n = 0, 1, 2n

tara

cido qunicoR

1= R

2= H


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En los galotaninos, los enlaces depsdicos son ms fcilmente hidrolizables que

los enlaces ster entre el cido qunico o glucosa y el cido glico. Puede ocurrir una metanlisis en un medio dbilmente acidulado y en

presencia de metanol, rompindose los enlaces depsdicos pero no los enlaces

estricos.

Sin embargo un tratamiento con un cido fuerte y calentamiento puede

producir hidrlisis de ambos enlaces, convirtiendo los galotaninos en cido

glico y su correspondiente poliol (azcar o cido qunico)

Hidrlisis de los taninos

O

OH

OHHO

O

OH

OH

O

+ H2O

OH

OH

OHHO

O

OH

OH

O HO

Ester digaloil

(Enlace para-depsdico)

+

Ester galoil cido glico


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Objetivo general

Determinar las condiciones ptimas para la obtencin de extractos

antioxidantes de tara y evaluar su eficacia en la proteccin frente a la

oxidacin en aceites y carnes.

Objetivos especficos

Determinar los parmetros ptimos de extraccin de taninos hidrolizables a

partir de la vaina de tara, determinando en el extracto ptimo los compuestos

fenlicos, actividad antioxidante, as como el perfil de compuestos fenlicos

principales mediante HPLC DAD.

Estudiar la cintica de hidrlisis qumica de los taninos del extracto de tara.

Determinar la influencia del grado de hidrlisis de los taninos en la capacidad

antioxidante in vitro y evaluar la eficacia antioxidante en aceite de soya y en

carne.

II. Objetivos


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III. MATERIALES Y METODOS


10/52

Materia prima

Se trabaj con vainas de tara (Caesalpinia spinosa) provenientes del

Departamento de Ancash, adquiridas en un mercado local


11/52

Determinacin de humedad y materia seca. Mtodo

gravimtrico reportado por la A.O.A.C (1990).

Determinacin de la capacidad antioxidante. Mtodo

reportado por Arnao (2001). Determinacin de compuestos fenlicos totales. Mtodo

reportado por Singleton y Rossi (1965).

Determinacin de taninos hidrolizables (Galotaninos).

Mtodo de Hagerman et al. (1998).

3.2. Mtodos de anlisis


12/52

Separacin, identificacin y cuantificacin de los principales compuestos

fenlicos mediante cromatografa lquida de alta performance y detector de

arreglo de diodos (HPLCDAD). Segn el mtodo reportado por Tsao y Yang

(2003). Los estndares, extractos y fracciones de fenlicos fueron separados

en una columna de fase reversa de C18 , X Terra RP 18 (250mm x 4,6mm; 5

m) de Waters, con una fase binaria compuesta de cido actico al 6% y

acetonitrilo. Los compuestos fenlicos fueron identificados en el rango de

200 700 nm, de acuerdo a su espectro de absorcin y su respectivo tiempo

de retencin al comparar con los estndares.

3.2. Mtodos de anlisis


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Eficacia antioxidante en aceite de soya mediante Calorimetra de Barrido

Diferencial (DSC). Segn el mtodo descrito por Besbes et al. (2005) y Tan

et al. (2002)

ndice de perxidos (IP). Segn el Mtodo 965.33 de la AOAC (1995) Contenido de dienos conjugados (%DC). Segn el mtodo 957.13 de la

AOAC (1995)

ndice o valor de p-anisidina (p-AV). Segn el mtodo 2.504 de la IUPAC

(1987)

3.2. Mtodos de anlisis (evaluacin de la eficacia antioxidante enaceite de soya)


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3.2. Mtodos de anlisis (evaluacin de la eficacia antioxidanteen carne)

Determinacin de la oxidacin de protenas en carne. Se utiliz el mtodo descritopor Oliver et al. (1987), donde las protenas oxidadas son detectadas con 2,4

dinitrofenilhidrazina (DNPH) el cual reacciona con los derivados de carbonilos de

protena para formar hidrazonas estables. Estas hidrazonas tienen absorbancia

mxima a 370 nm. Los resultados se expresan como nmol de carbonilos/ mg deprotena.

Determinacin de la oxidacin lipdica en carne. se emple el mtodo reportado

por Rosmini (1996), el cual se basa en la reaccin del malonaldehdo (MDA) con el

cido tiobarbitrico (TBA) para obtener un pigmento rojo que se forma por la

condensacin de dos molculas de TBA con una molcula de MDA. La lectura se

efectuar a 532 nm. Los resultados se expresarn como mg de MDA/ g de

muestra.


15/52

3.3.1. Optimizacin de la extra-ccin de

los taninos de tara

a. Obtencin de la Tara en polvoLas vainas de tara fueron procesadas

con la finalidad de obtenerla bajo la

forma de harina (Figura ), la cual

posteriormente fue empleada para laextraccin de taninos.

3.3. Metodologa experimental

Semilla

SECADO A 55C, humf. 6 A 8 %

Tara

SELECCIN Y LIMPIEZA

Vaina

Tara en polvo

DESVAINADO

MOLIENDA


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b. Pruebas preliminares

Fin seleccionar y reducir el nmero de variables* que puedan ser consideradas

en el mtodo de optimizacin de la extraccin de los taninos de la tara.

Variables a evaluar: Solvente: Metanol 80% (v/v), etanol 80% (v/v), agua y acetona 80% (v/v)

Nivel de pH: 2, 3 y 5

Constantes: Temperatura y tiempo de extraccin: 4C por 20 h Relacin materia prima/solvente: 1/375 Tamao de partcula: < 1 mm

*Las variables fueron tomadas de trabajos precedentes de extraccin detaninos hidrolizables de diferentes fuentes vegetales.

Se evalu el contenido de fenlicos totales, capacidad antioxidante ytaninos hidrolizables


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c. Screening de variables* a ser consideradas en el mtodo de Superficie Respuesta(MSR) utilizando el diseo de TaguchiFin seleccionar las variables a ser optimizadas por el MSR

VariablesRelacin materia prima:solvente: 1/10 1/ 60Temperatura de extraccin: 25 75CTiempo de extraccin: 0.5 3 h

ConstantesSolvente de extraccin : AguapH : nivel que den las variablesTamao de partcula: < 1 mm

* Los valores de las variables a evaluar fueron seleccionadas de investigacionesprevias realizadas en extraccin de taninos hidrolizables en diferentes fuentesvegetales.

Se evalu el contenido de taninos hidrolizables


18/52

Se aplic el diseo experimental correspondiente al criterio de mayor es

mejor del

mtodo de Taguchi con arreglo ortogonal L4 (23) evaluando simultneamente,

las tres

variables que condicionaran la extraccin de los taninos.

La distribucin de las variables, sus interacciones y los niveles mnimos ymximos de

cada factor evaluado se presentan en las Tablas X e Y:

Tabla X. Niveles mnimos y mximos para el screening de las variables en eldiseo experimental de Taguchi con arreglo ortogonal L4 (2

3)

Variables

Niveles

1

Mnimo

2

Mximo

Materia prima/solvente (p/v) (A) 10 60

Temperatura (C) (B) 25 75

Tiempo (h) (C) 0.5 3


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Tabla Y. Distribucin de las variables y sus niveles en el diseo experimental deTaguchicon arreglo ortogonal L4 (2

3)

Tratamientos

Variables de control

A B C

123

4

112

2

121

2

122

1d. Mtodo de Superficie Respuesta (MSR) para la optimizacin de la extraccin de

lostaninos hidrolizables de taraSe emple el Diseo Central Compuesto Rotable (DCC) con las variables que

resultaron ser significativas del diseo Taguchi.Se estableci el criterio del mayor es mejor.

El DCC estableci 13 corridas por triplicado y cinco rplicas alrededor del puntocentral

Se evalu el contenido de taninos hidrolizables


20/52

3.3.2. Estudio de la cintica de hidrlisis de los taninos


21/52

3.3.3. Estudio de la eficacia antioxidante en aceite de soya, mediante DSC

La fraccin acetato de etilo fue concentrada yresuspendida en etanol (FAEC), seguidamentese aplicaron 100 ppm de al aceite crudo desoya (0,1 mg glico equi / g aceite)

Las condiciones de trabajo para el anlisis porDSC fueron: velocidad de calentamiento 40C/min, temperatura 140 C, flujo de oxgeno35 mm3/min.

Se consider un blanco: aceite crudo de soya

sin antioxidantes y un antioxidante sinttico(TBHQ).

Se calcul el factor de estabilizacin:

F= PIinh/PI0Donde:

PIinh=periodo de induccin en

presencia de un inhibidor y

PI0=periodo de induccin en el

sistema sin inhibidor


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a. Extraccin de los taninos

Se realiz una extraccin bajo las siguientes condiciones:-Solvente : acetona al 80%

-Relacin materia prima:solvente de 1: 100 (p/v)-Tiempo y temperatura: 20 horas a 4 C;El extracto se concentr bajo vaco (~38 C), luego se mantuvo por 16 h a 4C(clarificacin). El extracto acuoso final fue denominado extracto bruto (EB).

b. Hidrlisis de los taninos

Al EB (20 mg AGE/mL) se le adicion H2SO4 hasta una concentracin 2N yluego se someti a 100C por diferentes tiempos: 0; 0.5; 1; 1; 2; 4; 5; 6; 8; 9;20; 24 y 28 horas.En los extractos hidrolizados (EH) se determin su concentracin de cidoglico, compuestos fenlicos, capacidad antioxidante y el grado de hidrlisis

(GH)100(%) x

AGAG

AGAGGH

IHC

IEH

Donde: AGEH

= Acido glico en el extracto hidrolizado a un tiempo tAG

I= Acido glico en el extracto antes de hidrolizar

AGHC= Acido glico en el extracto sometido a hidrlisis completa


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De acuerdo a los resultados precedentes: capacidad antioxidante especfica y

estabilidad oxidativa, se seleccionar dos hidrolizados con las mejores caractersticas(uno con mayor CAOX y otro con mayor F) en el menor tiempo (menor grado dehidrlisis).A los dos hidrolizados se les evaluar su eficacia antioxidante en aceite desoya a 140 C en DSC.

3.3.5. Eficacia antioxidante en aceite de soya, medianteDSC, a diferentes concentraciones de antioxidante

Ta Tb

ANLISIS DOSIMETRIAA 140 C

C1 C2 C3 C4 C1 C2 C3 C4

Tc

C1 C2 C3 C4

Ti = Tipo de antioxidante (hidrolizadosseleccionados H>caox , H>F y TBHQ)

Ci = Concentracin del antioxidante50, 100, 200 y 300 ppm


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3.3.6. Evaluacin de la actividad antioxidante de loshidrolizados en aceite de soya a 60 C (Estufa deSchall)

Los dos hidrolizados con las mejores caractersticas,mayor capacidad antioxidante (H>caox) y mayor factor deestabilidad (H>F) en el menor tiempo y un antioxidantecomercial (TBHQ) fueron aadidos al aceite de soya ados concentraciones (100 y 200 ppm) y se almacen

durante 0, 5, 10, 15 y 20 das a 60 C:

Variables a evaluar: ndice de perxido Valor de p-anisidina Dienos conjugados Tiempo de induccin residual a 140 C

Una muestra de aceite se soya sin antioxidantes se trat bajo lasmismas condiciones para ser usada como control (blanco)


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EVALUACIN DEL EFECTOANTIOXIDANTE EN ACEITE DESOYA A 60 C(Estufa Schall)

Ta

C1

q1 q2 q3 q4 q5

C2

q1 q2 q3 q4 q5

Tb

C1

q1 q2 q3 q4 q5

C2

q1 q2 q3 q4 q5

Tc

C1

q1 q2 q3 q4 q5

C2

q1 q2 q3 q4 q5

Ti= Tipo de antioxidante (hidrolizados seleccionados H>caox , H>F y TBHQ)Ci= Concentracin del antioxidante (100 y 200 ppm)qi tiem o de almacenamiento 5 10 15 20 das


26/52

3.3.7. Evaluacin de la eficacia antioxidante de losextractos hidrolizados en carne de cerdo

Carne de cerdo

Molienda, moldeado

Hamburguesas (50 g c/u)

H>COx H>Fc TBHQ

200 ppm

EE

100 ppm

300 ppm

600 ppm 100 ppm

300 ppm

600 ppm 100 ppm

300 ppm

600 ppm

Evaluacin de la oxidacin de lpidos y de las protenasA 4C, a 0, 2, 4 y 6 das de almacenaje


27/52

IV. RESULTADOS Y DISCUSION


28/52

4.1. Optimizacin de la extraccin de los taninos hidrolizables de tara

a. Pruebas preliminares

Contenido de taninos, compuestos fenlicos y capacidad antioxidante en los

extractos obtenidos con diferentes solventes de extraccin y a diferentesniveles de pHa

Solvente deextraccinb

Contenido detaninos

hidrolizablesGalotaninos

(mg GAE/g, b.s)

Compuestosfenlicos (mg

GAE/g, b.s)

Capacidad antioxidante(mol TE/g, b.s)

Nivel de pH

AguaMetanol

80%

Etanol 80%Acetona80%

2.08 3.06 5.05 2.08 3.06 5.05 2.08 3.06 5.05

485.0289.3373.5

542.3

505.1

251.

1355.

2538.

8

472.6

302.

9338.

4526.

4

338.2

569.

9435.

4582.

4

431.5

591.

8445.

1641.

5

345.8

526.

4448.

8552.

7

8775.912018.

4

12232.4

11827.9

10020.6

11300.

412815.

511691.

5

9610.112838.511807.5

11908.1

a Promedio de dos repeticionesb Condiciones de temperaturay tiempo de extraccin: 4 C por 20 h y relacin materia prima solvente: 1/375.

ANOVA mostr diferencias significativas en solventes y no para pH (p < 0.05)Se decidi continuar con el agua y evaluar slo los taninos hidrolizables


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b. Screening de variables a ser consideradas en el mtodo deSuperficie Respuesta (MSR) utilizando el diseo de Taguchi

Distribucin de las variables, sus niveles en el diseo experimental de Taguchicon arreglo ortogonal L4 (2

3) y el contenido de taninos*

Tratamientos(corridas)

Factores de control Contenido de

taninoshidroliza

bles(mg

AGE/g,

b.s)

Relacinmateria

prima/solvente

Temperatura (C)

Tiempo(h)

1234

1/101/101/601/60

25752575

0.533

0.5

294.1468.3462.8460.5

(*) Los tratamientos se realizaron por triplicado y aleatoriamente. Solvente de extraccin agua y pH ~ 3.50.


30/52

Valores seal/ruido (ETA) de cada variable evaluado para el contenido de taninoshidrolizables extrados aplicando el diseo Taguchi con arreglo ortogonal L4 (2

3)

ETA

=-10*log10(1/N*Sum(

49,0

49,5

50,0

50,551,0

51,5

52,0

52,553,0

53,5

1 2 1 2 1 2

(materia prima/solvente) (Temperatura) (Tiempo)

ETA

=-10*log10(1/N*Sum(

49,0

49,5

50,0

50,551,0

51,5

52,0

52,553,0

53,5

1 2 1 2 1 2

(materia prima/solvente) (Temperatura) (Tiempo)

ANOVA mostr diferencias significativas en las variables temperatura ytiempo pero no para materia prima/solvente (p < 0.05).Segn la premisa mayor es mejor se trabaj con los mayores niveles

de las variables temperatura y tiempo.


31/52

c. Mtodo de Superficie Respuesta (MSR) para la optimizacin de laextraccin de los taninos hidrolizables de tara

Corridas Temperatura (C) Tiempo (h)

1 65 2

2 60 1

3 65 3.41421

4 65 25 65 0.585786

6 72.0711 2

7 65 2

8 70 3

9 70 110 65 2

11 60 3

12 57.9289 2

13 65 2

Diseo Central Compuesto Rotable (DCC) del mtodo de Superficie

Respuesta para la extraccin de los taninos hidrolizables de la tara*

(*) Las trece corridas se hicieron por triplicado y con cinco puntos en el punto central. Condiciones de extraccinconstantes: solvente de extraccin agua, pH ~3.50 y relacin materia prima/solvente: 1/60.


32/52

Tem eratura Tiempo

Taninos

60 62 64 6668 70

1 1,41,82,2

2,63420430440450460470

Superficie Respuesta para el contenido de taninos de la tara en funcin a latemperatura y tiempo de extraccin

Modelo matemtico que predice el comportamiento de extraccin de los taninos:

Taninos hidrolizables (mg AGE/ g, b.s) = 306,85 + 7,51*Temp - 32,46*Tiempo

-0,075*Temperatura^2 + 0,036*Temperatura*Tiempo + 5,97*Tiempo^2

Modelo se ajusta en un 65.5%

2975T0350

20.075T-32.46-7.51T306.85bsgmgTH qqq ..)/(

C d i l d l S fi i R t l f t ti t t


33/52

Curva de nivel de la Superficie Respuesta para los factores tiempo y temperatura enla recuperacin de los taninos de la tara

Tem eratura

Tiempo

Taninos425,0

430,0435,0440,0445,0450,0455,0

460,0465,0

60 62 64 66 68 701

1,4

1,8

2,22,6

3

Se logr maximizar la extraccin de los taninos.Condiciones: temperatura de 57.9 C; tiempo de 0,58 h; solvente: agua, pH ~3.56 y relacin materia prima/solvente de 1/60; bajo estas condiciones lacantidad mxima de taninos recuperados fue de 473.4 mg AGE/g, b.s. El modelo

pas por una validacin


34/52

024

68

10121416

182022

0 5 10 15 20 25 30

Tiempo (h)Concentracindecidog

lico(mg/ml)

024

68

10121416

182022

Concentracindecompuestosfenlicos

.

(mgglicoequi./ml)

Compuestos fenlicos

cido glico libre

ab

abab abb b b b ab aba baba a

G

ABC

DDE

F

H IJ

I I

JK K

N = 3. Las letras maysculas y minsculas indican la existencia de diferenciasignificativa (p< 0,05).

Evolucin del grado de hidrlisis, durante la hidrlisis cida de extracto de

tara en H2SO4 2 N, 20 mg . glico equi./ mL y 100 C.

4.2. Estudio de la cintica de hidrlisis de los taninos


35/52

Contenido de: ExtractoBruto(EB)

ExtractoEntero (EE)

Comp. fenlicos tot. (mg .glico equiv./g. ms)

568,76 14,97

516,46 1,89

Galotaninos (mg . glicoequiv./g, ms)

537,2 17,51521,17

15,59

cido glico libre (mg . glicoequiv./g, ms) 17,96 5,57 22,51 6,31

Capa. antioxidante (mol troloxequiv./g, ms)

10 557,42 344,98

9 730,89 445,39

Contenido de compuestos fenlicos totales, galotaninos, cido glico libre ycapacidad antioxidante en los extractos bruto y entero


36/52

010

20

30

40

50

60

70

80

90100

0 6 12 18 24 30

Tiempo (h)

GradodeHid

rlisis(%)

a

bcd

e

f

g

d

h h hij jk k


Evolucin del grado de hidrlisis, durante la hidrlisis cida deextracto de tara en H2SO4 2 N, 20 mg . glico equi./ mL y 100C.

Tiempo

Grado deHidrlisis

(horas) %

Promedio SD

0 0 0

0.5 10.264 0.531

1 16.971 1.636

1.5 22.606 1.3472 23.302 0.93

4 38.852 2.835

5 55.252 0.083

6 77.156 2.318

8 88.445 0.503

9 93.773 2.242

12 97.045 0.453

16 98.869 0.834

20 100 0

24 86.122 0.832

28 86.128 1.42

Capacidad antioxidante de los extractos de tara a diferentes tiempos


37/52

100

200

300

400

500

600

0 5 10 15 20

Tiempo (h)

Capacidadantioxidante

(umoltrolox

equi./ml)

a

b

c

d

d

e ef g


Capacidad antioxidante de los extractos de tara a diferentes tiemposde hidrlisis (H2SO4 2 N, 20 mg . glico equi./ mL y 100 C).

Tiempo (h)

Grado deHidrlisis (%)

Cap. antioxidante(umol troloxequiv./ mg .

glico)

Incre.cap.antioxidante

(%)

Promedio

SDProme

dio SD

0 0 017.613 0.194 0.00

0.510.26

5 0.56718.709 0.199 6.22

1.522.60

6 1.3620.521 0.315 16.51

438.84

4 2.66725.986 0.269 47.54

555.25

2 0.2125.647 0.481 45.61

6 77.163 2.666 25.297 0.327 43.63

888.44

7 0.89525.594 1.457 45.31

993.76

7 1.83725.783 0.662 46.39

20 100 0.44825.749 0.198 46.19

Capacidad antioxidante especifica de los extractos de tara a


38/52

0

5

10

15

20

25

30

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Grado de hidrlisis (%)

C

apacidadantio

xidanteespecfica

(umoltroloxe

qui/mgglicoeq

ui)

a

bc

d d d d dd

N = 3. Las letras maysculas y minsculas indican la existencia de diferencias

significativas (p< 0,05).

Capacidad antioxidante especifica de los extractos de tara adiferentes tiempos de hidrlisis (H2SO4 2 N, 20 mg . glico equi./ mLy 100 C).


39/52

Blanco sin

antioxidante 10.3% 22.6%

38.8%

55.2%

77.1%

88.4.1%

TBHQ

93.7%

100%

Termogramas (140 0C) obtenidos mediante DSC del aceite de soya con 100

ppm de taninos hidrolizados ( GH), blanco (sin antiox.) y TBHQ 100 ppm

Evaluacin de la eficacia antioxidante de los taninos hidrolizados enaceite de soya, mediante calorimetra de barrido diferencial (DSC)


40/52

y = -2E-05x2 + 0,0049x + 1,077R2 = 0,97

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

1,6

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Grado de hidrlisis%

FactorEstabiliza

cion

Factor de estabilizacin

Polinmica (Factor de estabilizacin)

a

b cd d

e f g g

0

5

10

15

20

25

30

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

Grado de hidrlisis%

Actividadantirradicalespecifica

(umolEqTrolox/m

gEAG)

ab

c

d d d d d d

Capacidad antioxidante especfica de taninos hidrolizados de vainas de taraa diferentes grados de hidrlisis y su eficacia en aceite de soya a 140 C

C t HPLC DAD d l t t d


41/52

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

Minutes0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

Minutes

0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00

A.

glico

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

Minutes

0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00

A.glico

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

Minutes

0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00

A.glico

Extracto sin hidrolizar

GH = 38.8% (4 h) GH = 100% (20 h)

GH = 93.7 % (9 h)

Cromtogramas HPLC-DAD de los extractos detara de diferentes grados de hidrlisis

I fl i d l t i d ti id t l f t d


42/52

1,0

1,1

1,2

1,31,4

1,5

1,6

1,7

1,81,9

2,0

0 100 200 300

Concentracin (ppm)

Factord

e

estabilizacin

H>caox

H>F

TBHQ

Influencia de la concentracin de antioxidantes en el factor deestabilizacin de aceite de soya a 140 C.

94% 40%

Las curvas se ajustan a los siguientes modelos:-H>caox: F= 0,8451 + 0,0054 C 6E-06 C2 ,R2 = 0,998

-H>F: F = 0,9732 + 0,0029 C 8E-07 C2

, R2

= 0,999

- TBHQ: F = 0,966 + 0,0039 C -8E-06 C2 , R2

= 0,977

Donde F= factor de estabilizacin y C=concentracin (ppm)

4 6 E l i d l ti id d ti id t d l hid li d


43/52

0

20

40

60

80100

120

140

160180

0 5 10 15 20Tiempo (das)

Indicedeperoxidos

(meqperoxido

/kgaceite)

Blanco TBHQ 100 ppm H>F 100 ppmH>caox 100 ppm TBHQ 200 ppm H>F 200 ppm

H>caox 200 ppm

4.6. Evaluacin de la actividad antioxidante de los hidrolizados enaceite de soya a 60 C (Estufa de Schall)

. Evaluacin delndice de perxido en aceite de soya a 60 C (Estufa de Schall)

Evaluacin de la dienos conjugados en aceite de soya


44/52

. Evaluacin de la dienos conjugados en aceite de soyaa 60 C (Estufa de Schall)

0

5

10

15

20

25

0 5 10 15 20Tiempo (das)

%D

ienos

Conjugados

Blanco TBHQ 100 ppm H>F 100 ppm

H>caox 100 ppm TBHQ 200 ppm H>F 200 ppmH>caox 200 ppm

Evaluacin del valor p-anisidina en aceite de soya a 60 C


45/52

. Evaluacin del valor p-anisidina en aceite de soya a 60 C(Estufa de Schall)

0

5

10

15

20

25

30

0 5 10 15 20

Tiempo (das)

Valorp-anisidina

Blanco TBHQ 100 ppm H>F 100 ppm

H>caox 100 ppm TBHQ 200 ppm H>F 200 ppm

H>caox 200 ppm

E al acin del tiempo de ind ccin en aceite de so a a 60 C


46/52

. Evaluacin del tiempo de induccin en aceite de soya a 60 C

(Estufa de Schall)

0

10

20

30

40

50

60

70

80

0 5 10 15 20

Tiempo (das)

Tiemp

oonset

(min

utos)

Blanco TBHQ 100 ppm H>F 100 ppmH>caox 100 ppm TBHQ 200 ppm H>F 200 ppm

H>caox 200 ppm


47/52

Tiempo de

almacenamiento

(das)

EH4h EH9h EE BHT

(200ppm)

Control

(sin

antioxidante)

Aplicacin de extractos de tara a 100 ppm

0

2

4

6

2.47bC

5.54cB

5.77cB

9.18cA

2.84aC

5.67cB

5.69cB

8.27c,dA

2.83aD

6.16a,bC

7.51bB

10.91bA

2.39bC

5.01dB

5.48cB

7.43dA

3.09aD

6.70aC

8.74aB

11.88aA


0

2

4

6

2.91aD

4.80bC

5.34cB

7.35cA

2.92aD

4.78bC

5.79bB

7.93bA

2.94aD

4.78bC

5.79bB

7.93bA

2.39bC

5.01bB

5.48bB

7.43b,cA

3.09aD

6.70aC

8.74aB

11.88aA


0

2

4

6

2.79bC

2.99dC

3.88cB

4.66dA

2.69bC

2.77dC

3.10cC

4.11eA

2.76bD

4.06cC

5.20bB

6.04cA

2.39bC

5.01bB

5.48bB

7.43b,cA

3.09aD

6.70aC

8.74aB

11.88aA

Eoudcoeddmaodd

(modmaoddk*daee

amaemieorega(4Cd

hmbgaded

Tiempo de EH4h EH9h EE BHT Control


48/52

almacenamiento

(das)

(200ppm) (sin

antioxidante)


0

2

4

6

9.29bD

10.54bC

11.75cB

12.88cA

9.45bD

10.27bC

11.08cB

12.49cA

10.21aD

11.58aC

13.57aB

14.36aA

7.18dC

7.66cC

8.22dB

9.26dA

8.10bD

10.08bC

12.29bB

13.81bA


0

2

4

6

6.83cC

8.18cB

8.55cB

10.07cA

6.92cC

7.46dB

7.98dB

9.21dA

6.85cC

9.12bB

9.82bB

11.09bA

7.18bC

7.66dC

8.22cB

9.26dA

8.10aD

10.08aC

12.29aB

13.81aA


0

2

4

6

5.63dC

7.13cB

7.45dB

9.49cA

5.52dC

6.76dB

6.95eB

8.26dA

6.68cD

8.19bC

9.78bB

11.15bA

7.18bC

7.66cC

8.22cB

9.26cA

8.10aD

10.08aC

12.29aB

13.81aA

Eoudcoeddcabo

(nmo/kdaeeamaemieo

rega(4Cdhmbgad

ced


49/52

V. CONCLUSIONES

El mejor solvente de extraccin de los taninos de la tara result seracetona al 80%, seguido del agua, el etanol 80% y finalmente al

metanol 80%. El pH no tiene influencia significativa (p < 0.05) .

Segn el mtodo de Taguchi, utilizando agua como solvente de

extraccin, se determin que relacin materia prima/solvente no influyesignificativamente (p


50/52

Una hidrlisis cida a 100 C en H2SO4 2 N es capaz de liberar todo el cido

glico presente en los galotaninos de las vainas de tara en 20 horas.

La mxima actividad antioxidante (25,986 0,5 mol TE/ mg glico equi.)se obtiene a las 4 h de hidrlisis (47 % ms que la actividad obtenida sinhidrlisis), luego dicha actividad se mantiene constante.

Mediante Calorimetra de Barrido Diferencial (140C, 35 ml de O2/min y 100ppm) se estableci que con un GH de 88.4% se obtiene un eficaciaantoxidante igual al que con TBHQ. Con un GH de 93,8-100% la eficaciaantioxidante es mayor que con TBHQ.

..V. CONCLUSIONES

V CONCLUSIONES


51/52

El extracto entero de tara (EE) y los extractos hidrolizados

(EH4h y EH9h) a las concentraciones de 100, 300 y 600 ppmmostraron buenos efectos protectores contra la oxidacinlipdica y proteica de la carne de cerdo sometida aalmacenamiento refrigerado (4C) por seis das.

..V. CONCLUSIONES


52/52

obtención y caracterización de taninos-david campos

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