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Tesis de Posgrado

Obtención de ésteres nicotínicos deObtención de ésteres nicotínicos dealdopentosas y aldohexosas y sualdopentosas y aldohexosas y su

reacción con amoníacoreacción con amoníaco

Forlano, Eduardo Aníbal

1968

Tesis presentada para obtener el grado de Doctor en CienciasQuímicas de la Universidad de Buenos Aires

Este documento forma parte de la colección de tesis doctorales y de maestría de la BibliotecaCentral Dr. Luis Federico Leloir, disponible en digital.bl.fcen.uba.ar. Su utilización debe seracompañada por la cita bibliográfica con reconocimiento de la fuente.

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Cita tipo APA:Forlano, Eduardo Aníbal. (1968). Obtención de ésteres nicotínicos de aldopentosas yaldohexosas y su reacción con amoníaco. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidadde Buenos Aires. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_1322_Forlano.pdf

Cita tipo Chicago:Forlano, Eduardo Aníbal. "Obtención de ésteres nicotínicos de aldopentosas y aldohexosas y sureacción con amoníaco". Tesis de Doctor. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidadde Buenos Aires. 1968. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_1322_Forlano.pdf

UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS YNATURALES

Obtenciónde ésteres nicotínicosde aldopentosas y aldohexosas y

su reacción con amoniaco

EDUARDO ANIBAL FORLANO

Besumen de lav Tesis presentada para optar al título

de Doctor en Química

(Orientación Química Orgánica)

¡2

1968 91'21

1

RESUMEN

1) Sedectuó una revisión de las publicaciones sobre la sintesis de ésteres nicoti’nicos

de polialcoholes y de monosacáridos. Las sintesis publicadas tuvieron, en general,

como objetivo el estudio de las propiedades farmacológicas de dichos ésteres.

2) Se analizaron los distintos aSpectos estudiados hasta el presente sobre la reacción

del amoniaco con acetatos y benzoatos de monosacáridos, con formación de 1, l-bis

(acilamido)-1-desoxi-alditoles y N-acil-glicasilaminas.

3) Se hizo una revisión de las publicaciones sobre las transformaciones que sufren

los azúcares libres en medio amoniacal y en particular sobre aquellas relacionadas san

la formación de compuestos heteroci'clicos: pirazinas e imidazoles sustituidos.

4) Se llevó a cabo la sintesis de la penta-Ornicotinil-D-glucosa (XCVIII)por tratamiento

de la D-glucosa con una mezcla de clorhidrato de cloruro de nicotinilo y piridina en

medio clorofórmico, obteniendo 72,6 0/2de (XCVIH)pura y de punto de fusión superior

al publicado en la literatura (8). Utilizando el misrro método que en el caso anterior

se preparó, con un rendimiento del 88%, la penta-O—nicotinil-D-galactosa (C) como

un sólido amorfo de + 1330; este producto habi’asido descripto como un jarabe

por Strong y col. (9) quienes no indicaron constantes fisicas.

5) Se sintetizó la penta-O-nicotinil-D-manosa (XCIX)(rend. 72,5 %), la tetra-O-nico­

-tinil-L-arabinosa (CI) (Rendi 75 %)y la tetra-O-nicotinil-D-xilosa (CII) (Rend. 79%),

compuestos que no han sido descriptos en la literatura.

6) Se estudió la reacción de amonolisis, con amoniaco acuoso al 25 70, de los ésteres

nicotfnicos sintetizados; el producto de mayor rendimiento de cada reacción se aisló

por cristalización, mientras que las demás sustancias fueron separadas por croma­

tografía en columna de oelu‘osa. Se sintetizaron además los derivados acetilados de

los productos de amonolisis.

2

De la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-glucosa se aisló 16 %de N-nicotínil­

-D-glucofuranosilamina (CIII), 3,8 '¡cde 1,1-bis (nicotinamido)-1—desoxi-D-glucitol

(CIV)y 7,6 %de 2-(D-arabino—tetrahidroxibutil)-6-(D¡M—2, 3,4-trihidroxibutil)—

pirazina (XC).

De la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-manosa se obtuvo 22,5 %de 1,1-bis

(nicotinamido)-1-desoxi-D-manitol (CX)y 3,8 %de 2-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-6­

(Diego-2, 3,4-trihidroxibuti1)-pirazina(XC).

De la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D—galactosa se aisló 28 70de 1, l-bis

(nicotinamido)-1-desoxi-D-galactitol (CXII)y 1,4 %de N-nicotinil-D-galactofuranosi­

lamina (CXIII).

De la amonolisis de la tetra-O-nicotinil-L-arabinosa se aisló 26 %de 1, 1-bis

(nicotinamido)-1-desoxi-L-arabinitol (CXV)y 3,15 %de N-nicotinil-L-arabinofurano­

silamina (CXVI).

De la amonolisis de la tetra-O-nicotinil-D-xilosa se aisló, por cromatografía en

columna de celulosa, 13,2 %de 1, 1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-xilitol (CXIY).

7) Las estructuras de cadena abierta de los 1, 1-bis (nicotinamido)-1-desoxi-alditoles

y la naturaleza de los ciclos de las N-nicotinil-glicofuranosilaminas se determinó por

oxidación con metaperyodato de sodio, discutiendo las posibles etapas de sobreoxidación

de estas últimas.

8) La estructura de la 2-(D-arabino—tetrahidroxibutil)-6-(D-fio—2, 3,4-trihidroxibutil)

-pirazina (XC),aislada de las amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-gluc(may de 1a

penta-O-nicotinil-D-manosa, se demostró estableciendo la ubicación de los sustituyentes

en el anillo pirazfnico por oxidación con agua oxigenada con lo que se obtuvo el ácido

2,6-pirazindicarboxflico (CVII), que se identificó por su punto de fusión y mediant

5

la preparación de su éster metïlico (CVIII)por tratamiento con diazometano. El número

y la ubicación de los grupos hidroxilo en las cadenas laterales se determinó por oxida­

ción con metaperyodato de sodio y por su espectro de R.M.N. , que resultó análogo

al de su isómero , la 2-(D-arabino —tetrahidroxibutil)—5-(D—erigrgf-2,3,4-trihidroxibu­

til)-pirazina , cuya estructura ya habia sido demostrada por otro camino por Kuhny

col. (80). Se preparó el derivado heptacetilado de (XC), cuyo espectro de R:M:N:

confirmó la estructura propuesta.

9) Se discutieron las posibles reacciones que podrian conducir a la formación de la

2—(D-arabino-tetrahidroxibutil)-6-(D—É_rjgï>-2,3, 4-trlhidroxibutil)—pirazina (XC) en la

reacción de amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-glucosa y de la penta-O-nicotinil-D­

—manosa.

10) Se discutieron los resultados obtenidos comparándolos con los publicados para las

reacciones de amonolisis de benzoatos de monosacáridos y se llegó a la conclusión

que el grupo nicotinilo favoreceri’a la formación de nicotinamida, lo cual reduciría asii

número de grupos acilo disponibles para la migración intramolecular 0-} N.

UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES

Obtenciónde ésteres nicotfnicosde aldopentosas y aldohexosas y

su reacción con amoniaco

EDUARDO ANIBAL FORLANO

Tesis presentada para optar al títulode Doctor en Química

(Orientación Química Orgánica)

1968

"A1

A mis padres.A mi esposa.

Agradezco al Dr. Jorge Osvaldo Deferrari,

Consejero de Estudios y Director de esta

Tesis. por su permanente: apoyo y dedicación

a lo largo del dssarrollo del presente- trabajo.

Agradezco también:

Al Dr. Raul Cadenas por sus valiosos consejos y

oportunas sugerencias.

Al Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas

por haberme otorgado una beca, en cuyo peri’odo se llevó a

cabo gran parte de este trabajo.

A 1a Dra. Blanca Berinzaghi de Deferrari por la realización

de los microanálisis.

Al Dr. Enrique B. Dennler y a la Lic. E.M. Lalli por los

espectros realizados .

A1personal del Departamento de Quimica Orgánica por su

colaboración desinteresada

Al personal del Departamento de Biblioteca y Publicaciones

por la colaboración prestada para la impresión de esta tesis.­

.. 1 ..

INTRODUCCION

Hemos estudiado la síntesis de los ésteres nicotínicos de la D-gluc05a, D­

-galactosa, D-manosa, L-arabinosa y D-xilosa y su reacción con amoni’acoacuo­

so al 25%. Este tema es una extensión de los trabajos sobre la reacción de los

derivados acetilados y benzoilados de los monosacáridos con amoniaco, publicados

por Deulofeu, Deferrari y colaboradores; al abordarlo hemos pensado que, en el

caso de los ésteres nicoti’nicos, podria observarse un comportamiento similar,

lo cual conducirfa, por migración intramolecular del grupo nicotinilo, al. forma­

ción de sustancias con uno o dos grupos nicotinamido en el átomo de carbono-1

del monosacárido.

Además, el empleo de un sustituyente particularmente distinto de los hasta

ahora estudiados en la reacción de migración de acilos con formación de acilamido

derivados en el carbono-1 de las aldosas, permitió determinar el efecto del grupo

nicotinilo y preparar una senie de N-nicotinil-glicosilaminas y 1, 1-bis(nicotinamido)­

—1-desoxi-alditoles, compuestos nuevos de posible actividad farmacológica.

-2­

ESTEREE NICOTINICOS DE POLIALCOHOLES Y MONOSACAEIDOS

Badgett, Woodwa-d y col. (1), (2) fueron los primeros en preparar ésteres

nicotinicos de alcoholes superiores y polialcoholes con el fin de obtener sustitutos

insolubles de la niacina, para enriquecer cereales que generalmente son lavados

antes de la cocción. Con el fin mencionado prepararon el dínicotinato de etiléngllcol ,

el tetranicotinato de pentaeritritol, el hexanicotinato de inositol y el trinicotinato

de glicerol, por calentamiento de los correspodientes alcoholes con clorhidrato

del cloruro de nicotinilo. 'Empleando como agente acil ante una mezcla de anhidrido

nícotínico (3) y piridina, obtuvieron los ésteres nicotinicos de la isopropilidenglice­

rina y de la glicerina. Utilizando métodos análogos ó esterificando con una mezcla

de nicotinato de calcio y ácido clorosulfónico, Di Paco y Tauro (4) sintetizaron

el hexanicotinato de D-glucitol. Para preparar el hexanicotinato de mio-inositol,

Gonoy Nakajima (5) trataron dicho ciclitol con ácido nicotfnico y oxicloruro de

fósforo en medio piridi’nico. br.ercier et al.(3) estudiaron el efecto del hexanicotinato

de meso-inositol sobre la presión arterial de animales de laboratorio y Dorner

y Fischer (7) su efecto hipocolesterolémico en el hombre.

Strong, Lutwaky Farooqee (8) intentaron llevar a cabo la síntesis de los penta­

nicotinatos de D-glucosa y D-gatactosa, calentando en tubo cerrado y a 120o una

mezcla del azúcar libre con cloruro de nicotinilo y piridina, obteniendo jarabes,

a partir de los cuales prepararon sendos picratos cristalinos. Bajo las mismas

condiciones experimentales sintetizaron el metil tetra-O-nicotinil- (A-D-glucopi­

-ranósido y por demetilación de éste obtuvieron la 2, 3,4,6-tetra-0-nicotinil-D­

-glucosa: comprobando además que estos ésteres eranlen perros, desde el punto

de vista vitamfnico, tan efectivos como la niacina pura. Simultaneamente, Charon­

nat, Harispe y Chevillard (9) describieron la sintesis de varios nicotinatos de

.- 3 ­

de polialcoholes y de la penta-0-nicotinil-D-glucosa, que obtuvieron como

productos cristalinos esterificando el compuesto original con cloruro de nicoti­

nilo y piridina en cloroformo a temperatura ambiente y empleando un exceso de

50%del agente acilante. Recientemente, Sarkar y Arthur (10) repitieron la

síntesis del metil tetra-O-nicotinil-- :ïQ-D-glucopiranósidoen condiciones de

temperatura más suaves que las empleadas por Strong e interpretaron sus espec­

tros I Ii y de R M N. En el espectro de R M N observaron cuatro multipletes

correspondientes a los protones piridi'nicos HA, HB, HC y HD, un multiplete

a 3,47-4,84 que corresponde a cuatro protones del anillo piranósico y otro

multiplete a 5, 1- 5, 74 que fue asignado al metileno del C-6 y al protón restan­

te del anillo piranósico.

Lx: .- 4/”

31D (/NÏÏ HAH ¡y "w/NE

-4­LA REACCION DEL AMONLACO SOBRE ACILDERIVADOS DE N‘ONOSACARIDOS

A-Formggión de 1,1-bis(acilamido)-1-desoxi-aldg_oles y N-acilglicosilaminas por

amonolisis de ésteres de monosacáridos

La formación de 1, 1-bis(acilamido)-1-desoxi. alditoles y N-acilglicosilamim s

no está solamente limitada a la reacción de Wohlde amonolisis de nitrilos de

ácidos aldónícos acilados, ya que el 1, 1-bis(acetamido)-1-desox1—D-galactitol (I)

se aisló tanto como producto de amonolisis del hexa-O-acetil-Dïggggïg- Ljpm­

-heptononitrilo, como de 1apenta-0-acet11-D-galactopiranosa, de la pénta-O-acetil­

-D-galactofuranosa y de la penta-O-acetil-aldehido -D—galactosa(11).

C Nl

H C ORl

C OR H o 'í . H.OR

RO Í ORRO o

TiH (¡3OR pentr-O-acetil- H (¡30‘

CH2OR D-galaotopiranosa C HZORhexa-O-acetil- penta-O-acetil­

D_;¿1ícero_L_ma-no_ \ D-galactofuranosaheptononi'trilo\ ‘ /

H (5:0 H ([3(NH B)2

H C OR H (¡3 OHl

HO (l? H HO (13 H—-—-—-——-3 T A .

RO C H ho xí Hl

H C OR H ï OH¡

CHgOR 0112011

penta-O-aoe'til- ( I )aldehido-D-galactosa OR: —8—CH

Analogamente, en la reacción del amoniaco con el hexa-Owacetil-D-glfgirg-D­

—gg}9-heptononitrilo,como con la penta-O-acetil-aldehido-D-glucosa (12),. y penta­

-0-acetil- —D-glucopiranosa (13) se ha comprobado la formación de N-acetil--=’>L—

-D-glucofuranosilamina (II).

Las primeras experiencias para preparar 1, 1-bis(benzamido)—1—desoxi-aldito­

les a partir de derivados benzoilados de monosacáridos fueron realizados por

Brigl y col. (14) quienes obtuvieron 1, 1-bis(benzamido)-l-desoxi-D-glucitol al

tratar con amonÏaCOla penta-O-benzoil-aldehido-D-glucosa, la 3,4,5,6-tetra-O­

-benzoil—gldehido-D-glucosay la 3,5,6-tri-O-benzoil-D-glucopiranosa. Un año

Ï;N

OR

OH

H

(

C)“O-‘O

RO

H Q..-Q,...a. 1b ¿a

{L o,-. OR

cagoahexa-O-aootil­D-afieiro-D-gulg­heptononitrilo\

H C:O

H ó ORQ

C H _

RO g RO C hi2

É hu-_.-v_ oB a o.) H =/' ‘OR

.a. LL t ‘Nl

pettha-Ouacetil— FW"¿153; ¿“121;€._c_>_-¿-‘D—__¿,lucos- a, Ï-Ï CII

penta-O-acetil­¿”3—D—-g1ucopi ra­nosa

45..-”.

HO (¡3 HzHO C H

: 1- oxlJ/ \.\1ÍI

_ 6 _

después, Deulofeu (15)obtuvo 1, 1-bis(acetamido)-l-desoxi-L-eritriol por amono­

lisis en medio hidroalcohólico de la tri-O-acetil-aldehido -.4-eritrosa. Isbell y

Frush (15) estudiaron también esta reacción en medios acuoso y metanólico

sobre un derivado con la función aldehido libre, la tetra-O-acetfl -aldehido-—L—

-arabinosa, a partir de la cual aislaron 1,1-bis-(acetamido)-l-desoxi-L-arabi­

-nitol con unrendimiento del 40 a 50%en ambos solventes. Posteriormente

Deulofeuy Deferrari comprobaron que también se forman 1, 1-bis(aciiamido)-1—

-desoxi-alditoles en las amonolisis de monosacáridos acetilados y benzoilados

con estructuras ci’clicas. En tal sentido realizaron en medio metanóiico las

amonolisis que se indican en la tabla no. 1.

Los mismos autores (17)observaron, en la amonolisis de la penta-O-acetil­

- -D-glucosa, la formación de diglucosilamina que fué aislada bajo la forma

de octaacetato al acetilar el producto de la reacción y explicaron su formación

suponiendo que la glucosa, liberada por amonolisis de la totalidad de los grupos

acetilo, reaccionari'a con amoniaco para dar glicosilamina y ésta, por autocon­

densación,diglucosilamina. Este último paso fue posteriormente confirmado por

Isbell y Frush (22) al obtener diglicosilaminas por calentanie nto de giicosilat-..­

nas no sustituidas con metanol.—

Sustancia

Penta-O-benzoil­

Á-D-glucosa

6 -D-glucosa

D-manosa (W513)

q-D-galactosa

Tetra-O-benzoil­

eramnosa

D-ribopiranosa

(3,-L-arabinopiranosa

o<-D-líxosa

D-xilopiranosa

Penta-O-acetil­

9.3-D-manosa

EL-D-galacto;;iranosa

0‘ -D-galactopiranosa

Di-D-ga1actofuranosa{3-D-galactofurano sa

MÉ-D-galactosaTetra-O-acetil­

Q-D-ribopiranosa

ok-L-arabinopiranosa

\\-D-lixosa

Tabla no. 1

Ref.

(17)

(17)

(18)

(11)

(19)

(20)

(20)

(21)

(20)

(19)

(11)

(11)

(11)(11)(11)

(20)

(20)

(21)

Rendimiento %de l, 1-bis(acilamldo)-1-desoxi-alditol

21 , 2

19,4

20 (a)

35

19 (b)

35

35, 6

20

30,1

35

46

(a) también aislaron N-benzoil-D-manopiranosilamina (6-8%)y D-manosa (30%).

(b) también aislaron N-benzoil-L-ramnopiranosilamina (1,8%)y L-ramnosa.

B-Bigración intra molecular 0 -:.N

mecanismo de la forga_ciónde 1,l-bisgacilamidoQ-l-desoxi-alditoles

Las princígnalesexperiencias destinadas a aclarar detalles acerca de la

formaciónde 1,1-bis(acilamido)-l-desoxi-alditoles por amonolisis de ésteres de

monosacáridos fueron llevadas a cabo sobre benzoatos de monosacáridos en amo­

niaco metanóuco (23), (24), (25). ïegún Deulofeu, Gros y Lezerovich (25), cuando

un monosacárido benzoilado (furanósico ó piranósico) reacciona con amoniaco

metanólico se producen las siguientes reacciones:

1) Amonolisis de los grupos benzdloxi con formación de glicosila ninas las que,

según las condiciones del medio, estan en equilibrio con la aldosa y el amoniaco.

2) Formación de N-benzoil-glicosilaminas (furanósicas ó piranósicas) y 1, l-bis­

(benzamido)-1-desoxi-polioles.

3) Formación de 1, 1-bis(benzamido)-l-desoxi-alditoles con el hidroxilo alcohólico

primario esterificado con un grupo benzoilo, cuando la reacción se produce en

condiciones suaves y dependiendo del solvente y de la concentración de amoniaco.

4) Riivración de grupos benzoílo 040 intramolecular.

5) Transesterificación de los acilos con metanol para dar benzoato de metilo, lo

cual había sido postulado y demostrado por Deferrari y Cadenas (26).

Isbell y Frush (16)postularon un mecanismo intramolecular para la degradación

de Wohly para la reacción de aldehido -monosacáridos acetilados (Il'l) con amoniaco

(esquema no. 1), en el cual una molécula de amoniaco se adicionaría sobre el

carbonilo originando un grupo amino (IV); luego se formaría un ortoester lábil

entre el acetilo del carbono-2 y el nitrógeno del carbono-MV), el que se reordena­

ri'a por migración del grupo acetilo al nitrógeno, para dar el primer grupo aceta­

mido (VI). La migración del segundo grupo acilo se produciría deSpués de la

OHl

H—C=O H-C-NH

í (‘3 C c +NH É: g C1.. _ _ .. ._ _.

a o o H3 3 > HJ o o H3

Ch3OCO "C‘H CH3OCO—C—Hl

(III) _ (IV)

OH OHl i ¡H

H-C-NH-COCH H-C - N CHl ‘ 3 l \ C/ 3

IME-OH "-=----—-* H-C-O/ \OH_ ... I

CH3OCO C H CH OCO-C-HI 3 l

(VI) (V)l

+ NH3

7 PH H\ If

H-C-NH-COCH3 N-C-NH-COCHBr I

H-C-OH x CH - C-OH H-C-OH

l "’ 3 ‘H2? o-c-a(3113-9 - (3-1-1

OH I

(VII) (VIII)/HI

CHBOC-TNHf-NH-COCH3II-C-OH

I«0-­HO g H (IX)

Esquema n° l

_ 10 ­

adición de otra molécula de amoniaco al carbonillo dc un grupo acilo (VII)y

posterior ataque del nitrógeno de este intermediario al carbono-1 del monosacá­

rido para formar un nuevo ortoéster labil (VIII)el cual, por un nuevo reordena­

miento dari’a lugar a la formación del diacetamido derivado del alditol (IX).

La intramolecularidad de la reacción de migración O-->N de acilos para

formar 1,1-bis(acilamido)-1-desoxi-alditoles se demostró mediante las siguien­

tes experiencias: Deulofeuy Deferrari (27) amonolizaron tetra-O-acetilzalílílgclq­

-L-arabinosa en presencia de 8 moles de propionamida y obtuvieron 1,1-bis

(acetamido)-1-desoxi—L-arabinitol como único producto con un rendimiento del

53%, mientras que la probabilidad de formación de dicho compuesto, en las

condiciones de la reacción y a través de un mecanismo intermolecular, calculada

según la fórmula de probabilidad compuesta sin reposición, seria del 9, 1 %

frente a valores de 48,4%y 42,5% respectivamente para l-acetamido-l-propiona­

-mido-1-desoxi- L-arabinitol y el 1,1-bis(propionamido)-1-desoxi-L-arabinitr‘ï,­

compuestos que también podrian formarse si el producto de la reacción fuese el

resultado de la condensación de dos moléculas de amlda con la forma aldehi’dica

del monosacárido libre, como lo indica el esquema no.2, generalizando 10130691­

lado por Wohl.

Posteriormente, los mismos autores (17) amonolizaron penta-O-benzoil-D­

:i-glucopiranosa en presencia de 10 moles de acetamida y aislaron 1, 1-bis(benza­

mido)-1-desoxi-D-glucitol como único producto, con un rendimiento del 19%.

La probabilidad de formación de los productos esperados en una reacción inter­

molecular para esta experiencia, aplicando la fórmula de probabilidad compuesta

sin reposición, figuran en el siguiente cuadro( Pa3. 12)

-11­

H—Q=O

H-C-OCO-CHI

CH3OCO-(‘3-iï

CH3OCO—C—Hl

HZC—OCO-CH3

tetra-O-acetil-a1dehido-L-arabin08a

3

NH3

+

8 CH3-Cd2—CONH2

J,H-C=O CH

I l 3

H-C-OH CH CHa I 3 l 2

HO-C-H + 4 CONH2 + 8 CONH2l

HO-C-Ha

H2C—OH\ 44/\/ \ T\ __ \ ...C ...

¡AEICOCH3 T /}Eï OCH3 ',Nh COCHZCH3H—C\ :I—C\ H—C\

, T_ 1 '_ .1; T__rï 'r

‘ Nh com3 i NH C0CH201_.3 i Nh OCIfiZCH3

H-C-OH H-C-OH H—?—OHl i

PO-C-H ' HO-C-H HO-C-Hi l l

HO-C-H HO-C-H HO-C-Hu l 4

H2C—OH fi2u—OH H2C—OH

Prob. 9,1% Irob. 4894 fl Prob. 42,5 %

Esquema n° 2

_12_

Productos posibles Probabilidad %

1, 1-bis(benzamido)—1-desoxi-i’3-glucitol 9, 1

l-benzamido-1-acetamido-l-desoxi-D-glucítol 47.7

1,1-bis (acetamido)-1-desoxi-JZ-glucitol 43,2

gn excescHockett, ZDeulofeuy Deferrari (28) emplearon amoniaco etanólico con 6,2% de

15Npara amonoliza1tara J-acetfl -L-arabononitrilo en presencia de 4 y de 8

moles de acetamida Co- itrógeno común y obtuvieron 1, lrbÍS (acetamido)-1­

-desoxi-L—eritritol con 5,69 ‘75y 5, 71 % de 15M, resultados que están de acuerdo

con un mecanismo intramolecular. Además Gros, Ondetti, “proviero, Deulofeu

y Deferrari (23) efectuaron la amonolisis de la penta-O-benzoll- m-D-glucopira­

-nosa en presencia de benzamida-(carboniloMC) y no,34!observaron incorpora­

ción de 14Cen el 1,1-bis (benzarnido)-l-desoxi-D-glucitoi aislado. Postularon

que en los acetil y benznil derivados ci’clicos de los monosacáridos el grupo

acilo del carbono-1 se separari’a antes que los otros acilos por amonolisis

(esquema no. 3), dando lugar a la formación de un aldehido, que podri'a adicionar

amoniaco como lo propusieron Isbell y Frush para formar (Y). Este intermediario.

por pérdida de un hidroxilo. produciría (XI), el cual estaria en resonancia con el

ión imonio (XII). La migración de un acilo dari'a (XIII) y el carbono-1 de (XIII)

sufriri’a el ataque nucleofi'lico de otra molécula de amoniaco para formar (XIV),

que por una nueva migración de otro resto acilo produciría el 1,1-bis (acilamido)

-1-desoxi-alditol (YV)como producto final.

El intermediario (XIII)explicaría también la formación de las N-acil-glicosi­

-laminas (YVI)que se producen en las amonolisis de algunos monosacáridos

..13-_

H Hi __ S

HO-C-NH -OH + C-NHO¡ 2 üw‘figzz? , u

fi n +OH -C"*

l ‘ 3l

(X) (XI)

H Ht É

+ C-NH2 + C-NHCOR9 ” ¡C . “9­s\ > I’ \

H9C-O-C-RI ó

(XI) (XIII)

É RCOHN\Fí/NHCORH2N_C—NHCOR C“,.¡ ¡

o -—C ——o —--—-->l

l

R-C-O-C-H1'! io

(XIV) (XV)3

Esquema no 3

H I

l +

É, ?:vh2 i“NC._. i

I l

(XII)

Hi

H2N—C_NHCOR+ NH -(3——

3 J

H ­¡Z/NHCOR

C”+3%

(É ‘

-C-OH_H+

\\\35 /NHCORH-C-*——

I i

_¡_ o

' iCw_u¿i

(XVI)

_ ­acilados, pues permititi’a la ciclación mediante el ataque al C-l por el par de

electrones no compartidos del oxígeno de un h'idroxilo ubicado en una posición

estericamente favorable para la formación de un anillo hemiacetálico. "e ha

demostrado que las N-acilglicosilaminas no son precursoras de las aldosa­

-diamidas ya que son recuperadas con buen rendimiento por amonolisis de sus

derivados acetilados y benzoilados (29). Los mismos autores (23) han realizado

un estudio de reacción de migración 0-;- N de acilos en hexosas benzoiladas para

establecer la contribución a la migración de cada benzoilo en forma individual

y determinaron la contribución aparente (*) a la migración de cada grupo benzoi­

loxi en la 2, 3,4,6-tetra-0-benzoil-glucosa y en la 1,2, 3,4,6-penta-0-benzoil­

-glucosa, empleando dichas benzoilglucosas con grupos benzoiloxi marcados

en diferentes carbonos. Los resultados que figuran en la tabla no. 2 muestran

una alta contribución de los benzoilos unidos al C-3 y C-4, una mediana contri­

bución de los benzoilos del C-G, una pequeña contribución de los del C-2 y que el

grupo benzoiloxi unido al C-1 no participa en la reacción de formación de 1, 1

bis(benzamido)-1—desoxi-alditoles.

Además, observaron un aumento del rendimiento en el producto de migración

al pasar de la 1,2, 3,4,S-penta-O-benzoil-D-glucosa a la 2, 3,4,6-tetra-O-benzoil­

-D-gluc05a, aumento que fué explicado (25) admitiendo que en este último caso

se formaría mayor concentración del intermediario (YI)debido a que en la

(*) La contribución se califica como aparente porque no es posible asegurar si

la migración es directa desde cada atomo de carbono al cual el benzoiloxi está

unido originalmente o si es el resultado de una migración 0-) 0 por formación

intermedia de ortoésteres a través de otros grupos hidroxilos.

Contribuciónaparenteenmoles/moldecadagrupobenzoilo,alamigración0-9Nenlaformación

de1 ,1-bis(benzamido)-1-desoxi-D-glucitol

SustanciaC-lC-2C-‘3

1,2,3,4,6-penta-0-benzoiLJJ-glucosao0,12t0,03o,7s¿o,oz 2,3,4,6-tetra-O-benzoil-D-glucosa-O,12:0,O30,80:0,03 1,2,3,5,6-penta-0-benzoil-D-glucosa(XX00,10+0,01­ 2,3,5,6-tetra-0-benzoil-D-glucosa(XXI)O,11:0,O2­ ",5.6-tri-0-benzoil-D-glucosa(XXII)--— Z,J,4,5,6-penta-O-benzoil-aldehldg-D-glucosa-0,8110,02 ­ 2 ,3 ,4 ,5 ,6-penta-O-benzoil-D-glucosa­

(derivadobisulfftico)

me@om2­

Tablano.2

C-4

0,32:0,02 0,8110,02

C-6

0,2110,02 0.27t0,02

R%> 21 28 52 62 16(14) 61 62

-15­

RCOOH o o2 \ ¿5/4\¿/ 2\ CH

,’k l/ y nHo H H OCOR +NH2

(XVII)

C4

RCOO.\ ' H

\\Hcoo H

C1

(XVIII)

RCOO

RCOO H

H \\\CA

c

l R"<Ó/(XIX)

_ _

1,2, 3,4,6-penta-0-benzoil-D-glucosa debe ser primero amonolizadoel acilo

en C-l, lo cual requiere mayor tiempo y da lugar a la pérdida de otros benzoilos

bajo la forma de benzamida. Discutieron también las posibles conformaciones

que podria adoptar el intermediario de cadena abierta (YR-WII), llegando a la

conclusión que la migración directa Ci.»C1 y C{>01 se produciri’a sin dificultad

si dicho intermediario adopta una conformación tal en la que los átomos de carbo­

no están ubicados en zig-zag en un plano (XVII), mientras que en dicha conforma­

ción la migración directa desde otros carbonos quedaria impedida estericamente;

las posibilidades de migración se pueden ver en el rotámero C2 - C"3(XVIII)de

la conformación (XVII). En cambio, si el intermediario (XIe-yXII)adopta otra

conformación como la representada por (XIX)para la proyección C2 -C3, estaria

dificultada la migración directa C37C pero no habri'a impedimento estérico para1

la migración C4->C1 y C-vC .2 1

Posteriormente Lezerovich (30)y Deulofev, Gros y Lezerovich (25) estudiaron

la amonolisis de penta-O-benzoilglucosas furanósicas y de cadena abierta con el

benzoilo marcado en el C-2. Encontraron que la presencia de un ciclo furanósico

no modifica la contribución del grupo benzoiloxi unido al C-2 (XX 2 XXII), pero

ésta aumenta notablemente en las benzoilglucosas de cadena abierta como se

observa en la tabla no. 2. Para explicar este diferente comportamiento del

benzoilloxi del C-2, según se trate de compuestos ci‘clicos o de cadena abierta,

supusieron que el benzoiloxi del C-2 de los derivados ci’cliCOSreacciona,durante

la etapa de apertura del ciclo, con el oxigeno del C-l formando el ortoesterG‘íXIII),

lo cual hace que, al ser eliminado luego del C-l dicho benzoiloxi, no pueda parti­

cipar en la migración 0-)N. La formación de (XXIII)estabilizari'a la carga

-18­

positiva del C-l, facilitando asi’ la fijación de amoniaco para dar (XXIVy XXV).

r"; +.—-—«—-—-—-— o . 4 _ OH

_ _ _C_H OH ‘ +15; _H+ H q oH-C-O-g-R Mi *> H-C-O-g-R

l o ' o

+NH3 _ a _H-C'3-—O\C/ o OH NH 1:1 —o\C /o OHH-C-O’ \R < 3 H-C-O’ \R

(XXIV) (XXIII) /

_H+

\/

s2 _H-C-O o

l \ / _ / \H-(ï-O/C\R OH R“ nO,(m)/

La participación del benzoiloxi del C-2 en la formación del ortoester, provo­

carí’a entonces una disminución en su contribución a la migración 0 1:.‘N,mientras

que en los derivados acíclicos la formación del ortoester entre el C-l y el (3-2

no ocurriría con la misma facilidad puesto que el amoniaco puede adicionarse

directamente al carbonilo del C-l. 'Además, los modelos moleculares indicaron

que un ortoester entre el C-1 y el C-2 no produce modificaciones de las condicio­

nes estéricas necesarias para la migración del resto de los benzoilos en los

derivados ciclicos. La hipótesis que atribuye la baja contribución a la migraciór

O-aNdel benzoilo del C-2 en los derivados ci’clicos, al hecho que el mismo es

_ 19 ­

eliminado como benzamida antes de tener la posibilidad de migrar, fué descarta­

da por los autores porque no permitió explicar las variaciones observadas en los

rendimientos de 1, 1-bis(benzamido)-l-desoxi-D-glucitol obtenidos a partir de

los derivados (XXI)y (XXII)(tabla no.2). La diferencia estructural entre esos

derivados consiste en la sustitución del benzoiloxi por un hidroxilo en el C-2 de

(XXII), lo cual determina una disminución en el rendimiento del 62%al 16%. Pero

si la baja contribución a la migración 0 ->Ndel benzoilo del C-2 observada en

(XXI)obedeceri’a a su eliminación como benzamida antes de tener la posibilidad

de migrar, no hubiera sido posible alcanzar un rendimiento del 62%,es decir

que cabri’a esperar un rendimiento menor para el producto de amonolisis del

derivado (XXI), y? que la única diferencm entre los compuestos mencionados

es la presencia del benzoilo del C-2 el cual contribuye con 0, 11 moles/mol a

la migración 0—>Nen los derivados ci’clicos. Esto significa que en los compues­

tos ci'clicos el grupo benzoiloxi del C-2 contribuye poco a la formación del 1,1­

-bis(benzamido)-1-desoxi—B-glucitoi, pero su presencia resulta indispensable

para obtener rendimientos elevados, lo cual refuerza la hipótesis de que es

necesaria la formación del ortoester en'ife el C-1 y el C-2 para facilitar la

apertura del anillo hemiacetálico y el posterior ataque por el amoniaco al C-l.

Gros y Deulofeu (24) estudiaron también la contribución de cada grupo ben­

zoilo de la 1,2, 3,4,6-penta-O-benzoil-D-galactosa en la formación de 1¿1—bis

(benzamido)-1-desoxi-D-galactitol, Coneste propósito efectuaron las sintesis

y posterior amonolisis de penta-O-benzoil-galactopiranosas marcadas con ben­

zoilos- carbonilo 14C en distintas posiciones y calcularon la contribución de

cada grupo benzoilo en base a medidas de actividad eSpeci’ficade las galactopi­

ranosas benzoiladas y del 1, 1-bis(benzamido)-1—desoxi-D—galactitolobtenido

-20­

como producto de la reacción. {ns result dos obtenidos figuran en la tabla no.3.

sustancia

1, 2 , 3, 4 , 6-penta-0­-benzoil-D-gluco sa

2, 3, 4, 6-tetra -0­benzoil-D-glucosa

1, 2, 3, 4, 6-penta-0­benzoil-D-galactosa

TABLA no.3

contribución aparente en moles de cada grupo benzoilo a lamigración C-eN.

C-20, 12_+0, 03

0,12t0,03

o,13¿o,01

c-30,76:0,02

0,80Ï0,03

0,62:0,01

C-40, 82:0, 02

0,81Ï0,02

Logo»:

C-6o,31¿o,02

mzyomz

mIQONI

El valor de 1, 02 mol/mol para la contribución del benzoiloxi en el carbono-4

de la penta-O-benzoil-galactopiranosa, significa un aumento de 0, 18 mol/ mol

respecto de la contribución del benzoilo ubicado en la misma posición de la penta­

—0-benzoil-glucopiranosa, aumento que va acompañado de una disminución en la

contribución de los grupos benzoiloxi en los carbonos 3 y 6, mientras se mantienen

los valores de la contribución del benzoilo del C-2.

La migración completa (lmol/ mol) del benzoiloxi del carbono-4, indicó que

este grupo estaria presente en todas las moléculas del hipotético intermediario

aci’clico (XXVI)formado en los primeros pasos de la reacción de amonolisis de

la penta-O-benzoilgalactosa, a partir del cual se produciría luego la migración

de los benzoilos hacia el átomo de N del átomo de carbono-1.

La diferencia en la contribución del grupo benzoilo del C-4 de la penta-O­

—benzoil-D-galactosay la penta-O-benzoil-D-glucosa no se debe a una distinta

eliminación del grupo benzoiloxi en la etapa de formación de los correspondien­

tes intermediarios de cadena abierta de la D-galactosa (XXVI)y de la D-glucosa

-21­

RCOOH C2\HO ' kE H OCOR NH2

(EDWI)

H x [0%on ¡0003RCOOH2C _c "C\ 5/4\2/ 2\CH

’V u­I’O' kB H ' l EOOOR NH2

(XXVII)

a=©>

(XXVII.), sino a una ubicación más favorable para la migración del sustituyente

en el C-4 del derivado de la D-galactosa (XXVI). Debido a la conformación que

podría adoptar la galactosa, pensaron que seria más veloz la migración intramo­

lecular 0-9N del benzoiloxi del C-4 que las otras reacciones competitivas, tales

como la amonolosis del benzoiloxi para dar benzamida, o la transesterificación

con el solvente para dar benzoato de metilo.

Conel objeto de confirmar esta hipótesis, los autores analizaron la estabilidad

de las posibles conformaciones que podrían adoptar los intermediarios (XXVI)y

(XXVII). La conformación más estable, através de la unión CZ—C3,seri'a aquella

en la que los sustituyentes voluminosos están más separados entre si, o sea la

representada por (XXIX)para los intermediarios (XXVI)y (XXVII)y no la que

-22­

adoptarfa una cadena abierta en zig-zag con todos los átomos de carbono coplanares,

es decir (XXVIII).A través de la unión C3--C4 del derivado de la D-glucosa, los

sustituyentes podrían adoptar las conformaciones (XXX)o (XXXI), correspondien­

do, la primera a una distribución coplanar de los átomos de carbono, pero que, de

acuerdo con el argumento expuesto en el párrafo anterior, sería menos estable

que 1a segunda. En cambio la conformación más estable de los sustituyentes sobre

los carbonos 3 y 4 de la estructura (XXVI)de la D-galactosa es la que corresponde

a una disposición de los carbonos coplanares en zlg-zag (XXXII).

Ï4 HcooRCOO ¡,H RCOO H

62\\

Hcoo // H H c4Cl C1

(XXVIII) (XXIX)

C2

RCOO

¿{3 HHooo f’ H

o5

C e C2 (XXX) 2

H-\ c5 H OCOR

RCOO t H Hcoo HOCOR C

5

(XXXI) (XXXII)

-23­

Los modelos moleculares de las conformaciones de los rotámeros C2-C3 y

C3-C4 más estables de los derivados de cadena abierta de la D-glucosa y la D­

-galactosa, es decir la estructura (XXVH)con las conformaciones (XXIX)y

(XXXI)a lo largo de las uniones CZ-Cfi y C3-C4 respectivamente y (XXVI) con

las conformaciones (XXIX)y (XXXII)a través de las mismas uniones, muestran

que el benzoiloxi del C-4 está más cerca del C-l en el derivado de la D--galactosa

que en el correspondiente de 1a D-glucosa. Esto significa que la configuración

más estable para el intermediario aci’clicode la D-galactosa es también la más

favorable para la migración directa del grupo benzoiloxi desde el C-4 hacia el

N del C-l; enla conformación más estable del derivado de la D-glucosa, la dis­

tancia Cl--C4 es mayor, lo cual dificultari’a la migración directa. Para posibili­

tar la migración mencionada, la molécula de la D-glucosa deberia adoptar una

conformación menos estable y aunque las diferencias energéticas entre las confor­

maciones son pequeñas, este factor se ri'a uno de los que determinari’a la migra­

ción 0--)Ndel benzoiloxi del C-4 en forma completa en la penta-O-benzoil-D­

'galactosa y sólo de 0,82 mol/mol en la penta-O-benzoil-D-glucosa.­

N-acilglicosilaminas

En algunas reacciones de amonolisis de acetatos y benzoatos de monosacaridos

se han aislado N-acilglicosilaminas como productos principales de la reacción o

como productos secundarios acompañandoa los 1,1-bis(acilamido)-1-desoxi­

-a1ditoles. Hockett y Chandler (12) encontraron que la N-acetil- (X-D-glucofura­

-nosilamina se formaba con un rendimiento del 56%en la amonolisis de la penta­

oacetil-aldehido-D-glucosa. Posteriormente Niemanny Hays (13) aislaron elr

\mismo producto de la amonolisis de la penta-O-acetil- (5 —D-glucopiranosacon

9924:

rendimiento del 8%. Para la demostración de la estructura del ciclo de la N-acetil­

- -D-glucofuranosilamina fueron empleados distintos métodos. Hocketty Chan­

dler (12) efectuaron la oxidación con tfiaacetato de plomo, aislando formaldehído

como 2,4-dinitro fenilhidrazona y asignaron en base a este resultado una estruc­

tura furanósica para dicho compuesto . Niemann y Hays (13) llegaron a la misma

conclusión basándose en que la curva de consumo de tetraacetato de plomo era

análoga Iala del -etil-D-galact( efuranósido determinada previamente por Hockett

y col. (12).

Deferrari y Deulofeu (19) confirmaron estos resultados al efectuar la oxidación

con metaperyodato de sodio, en la cual observaron un consumo inicial de un mol

de metaperyodato y la producción de un mol de formaldehído sin producción de

ácido fórmico, encontrando que-con un consumo de 2 moles de metaperyodato

comenzaba la producción de ácido fórmico. Los resultados hasta esta etapa corres­

ponden a la ruptura de las uniones C ---C6 y Cz-—-CQde un ciclo furanósico.5

Después de 28 horas de reacción observaron una marcada sobreoxidación que

alcanzaba un consumo de 5 moles de metaperyodato con producción de 3 moles

CH OH4-2HO H H

_ 0= o H O: o \H. l- I cn­

IO x 104 E" OH. D Í \ 1I\THR

NHR H ¿muy NHR HC HC

H OH H ' OH g g

N-ace’cil-D-gluco- + HZC=Ofura-¿nos i lamina Si

R: -—C-CH

-25­

de ácido fórmico, mientras se mantenía constante (1 mol) la cantidad inicial de

formaldehído .

En las amonolisis de la penta-O-benzoil-D-manosay tetra-O-benzoil-L-ram­

—nosa,Deferrari y Deulofeu (18) (19) aislaron, acompañando a los correspondientes

1,1-bis(acilamido)=—1—desoxi--alditoles,la N-benzoil-Dnmanopiranosilamina y

N-benzoil-L-ramnopiranosilamina respectivamente. Demostraron la estructura

piranósica de ambas glicosilaminas por oxidación con metaperyodato de sodio,

observando en cada caso un consumo de dos moles de metaperyodato de sodio y

la formación de 1 mol de ácido fórmico sin producción de formaldehído, resultados

que corresponden a estructuras piranósicas para derivados de hexosas.

CHZOH

/ oO: ,

fl N HRHC=O

H H

Ïïo‘oenzoil-D-ï-¿no- + H CO OH:irano silamina

—o-<O>1|O .

En las primeras experiencias de amonolisis de la tetra-—0-acetil-D-xilopiranosa

(20)y de la tetra-O-acetil-aldehido—D-xilosa (12) no se aislaron productos crista­

linos. Posteriormente Cerezo y Deulofeu (33) estudiaron la amonolisis de la

1,2, 3,4-tetra-0-acetil- -D—xilosay aislaron, por cromatografía en columnade

-26­

celulosa, N-acetil- üg-E-xilofuranosilamina (9,277)y N-acetil-¿’ó-D-xilopiranosila­

-mina (3,1%)-. Demostraron la estructura de ambas sustancias por oxidación con

metaperycdatu de sodio; la N-acetil- (5-_ -xilopiranosilamina consumió dos moles

de metaperyodato y produjo un mol de ácido fórmico, mientras que la N-acetil- De

-E-xilofuranosilamina consumió un mol de metaperyodato sin producir ácido fórmi­

co y en ambos casos no se produjo formaldehido.

Frush e Isbell (31) prepararon una N-acetil-IÏ o ‘ ‘ ¡pia " ina de [353D

+194,9° (XXXIII)y otra de [ok-¡Ii 8° (XXXIV)por desacetilación de la penta-acetil­

- (X-D-galactopiranosilaminay la penta-acetil- (Z-E-rralactopiranosiïamina respec­

tivamente con metóxido de bario en metanol anhidro; en ambos casos demostraron

la presencia de ciclos piranósicos (esquema 110.4)por oxidación con metaperyodato

de sodio, observando un consumode 2 moles de metaperyodatoy valores de D

+600 yLDGn-QGOpara los dialdehidos formados de las respectivas N-acetil-D­

-galactopiranosilaminasi Además reoxidaron non agua de broma los productos de

oxidacióny por posterior hidrólisis identificaron ácido glicérico; en base a estos

resultados llegaron a la conclusión que estaban en presencia de un parqfipiranósico

y asignaron al producto de [uk']Ï+EI94,9°la configuración ¿en el carbono 1 y al de

[N1+9,8° la {3. La preparación de este par anomérico de N-acetilgalactopira­

-nosilaminas hizo posible la determinación de la configuración del Carbono-1 de

otras N-acetil-hexopiranosilaminas por comparación de los poderes rotatorios

de los dialdehidos formados en la oxidación con metaperyodato de sodio; posterior­

mente los mismos autores (22)asignaron sus estructuras a la N-acetil- (S-D­

-glucopiranosilamina y a la N-acetil-(S -D-manopiranosilamina y establecieron

además que todas las N-acetil r ‘ -pi¡au- " ’ que tienen la misma configu­

ración absolut: en el carbono-1 que la N-acetil- oK-L-arabinopiranosilamina (XXXV)

dan, por oxidación con metaperyodato, un dialdehido de rotación especifica

.. 27.­

("ï '

CHZOH ïJZOHO ¡mo

HO/Iï H 2 IO4Na /Ïí :ÍIH H H HHH""“"“‘"‘9H'C=O i NÏRH—C=O _

H OH 1) B oI'

ÉXJ+19499° Bx]-+60° 2)Hidrólisis“D .D

(XXXIII), _¿ COOHi

H-C-OHs4CHZOH

CHZOh CHZOd l) Bro­

HO o NHR NHR . , . .

I 2104Na H y 2)H1drolls1s.> _

H OH H H H—O_O H

H OH H‘C=O

o o ' -0 oWLM [049“6(XXXIV)

H H

HO ‘-"O NHR Eï”0 HHHH 2104Ha //OH H ———————7H-Czo

H ,/H HF—C=O

H OH

[°<]J,+ 69,7° [0433-490

(XXXV)

-28­

- 49°. En base a este valor asignaron configuración (3 a la N-acetil-D-xilopirano­

-silamina de [cOn-0,7° que por oxidación con metaperyodato dió un dialdehido de

[dig-39,3%­Cerezo y Deulofeu (33) introdujeron una modificación importante al método de

Frush e Isbell reduciendo los aldehidos formados en la oxidación con metaperyo­

dato. a alcoholes con borohidruro de sodio; en estos alcoholes el único centro

asimétrico es el carbono anomérico, ya que al reducir los aldehidos de la hexo­

piramsilaminas el C-5 pierde su asimetría. Por este procedimiento se forma el

mismo producto a partir de N-acetil L l ‘ mu " ’ , N-acetflhexofuranosi­

-laminas y N-M'M"r * L m-r " ‘ de la misma configuración anomérica,

CHZOH CHZOHO .o... H ._

IO4J / < 2 IO4H H HR H . R

H ‘ H g

H OH ó o \

BH4Na

q H20H ' \HOCH ÁCH OH

o HOHZC CHQOH

. H 2.0 751-0: 0' H BHNa o H

\¡_24_> k/ >‘._A-____> >LmOH HNHR H RH SH ‘HNHR

H OH 0

no .­R=-C-—CH

_ 29 _

lo cual hace que el método permita establecer la configuración anomérlca del C-l

también en compuestos con ciclos furanósicos. Cerezo y Deulofeu (33) al aplicar

este tratamiento a la N-acetil- .x-D-galactopiranosilamira (de configuración anomé­

rica conocida), a la N-acetil-D-glucofuranosilamina y a la N-acetil-D-xilofurano­

—silamina, obtuvieron aICOholesque presentaron va]0:es positivos de rotación

específica entre +7, 1° y +9,50, por lo cual asignaron la configuración aga ambas

furanosilaminas. En la tabla no.4 figuran los valores de rotación especifica de

los alcoholes correspondientes a las formas {5que oscilan entre —8,6°y -10,8°

y en base a esto asignaron la configuraciónfi;a la N-acetil-D-xilofuranosilamina de

L"(x131000 yr- a la N-acetil-D-lmopiranosilamina deyïly-470.

Tabla no. 4

Poder rotatorio específico de los productos de oxidación y posterior reducción dealgunas N-acetil-D-glicosilaminas

N-acetil- polialdehido ïláfigggido

[5-D-zalactopiranosilamina -9, 8 -'a7, '3 -10, 8

(3- D-¿lucopiranosilamina -22 , 0 -95 , 4 -.9, 3

(L-D-manopiranosilmnina -47, 8 -99 ,9 -1o, 6

(5-33-in wpiranosilamina —1,o -4o, 5 -8 , 6

{3—D-lixopiranosilamina -47, o —4.3,3 -10,9

x-D-galactopiranosilamina -.‘94 ,9 +59, 2 +9, '3

d\-13-glucofuranosilamina (XXXVI) +87, 9 +10, 7 +9, 5

o(-D—xilofuranosilamina (YYXVII) +100, o +57, 4 +7,1

-30 _

Confirmaron la configuración ¡de la N-acetil-D-glucofuranosilamina (X‘FXVI)y

de la N-acetil-D-xilofuranosilamina (XXXVII)por aplicación de las reglas de

Hudson, empleando el valor de ¡"+2049obtenido a partir del par anomérico de las

N-acetilgalactopiranosilaminas. Para calcular la rotación molecular de la N-acetil­

- 0€-D-glucofuranosilamina utilizaron los valores de B +39o y +16° que derivan

de los metil glucofuranósidos anoméricos respectivamente; con el primer valor

de B dió un {55132430y con el segundo valor de B resultó un [55132200, mientras

que el valor experimental fué ljá-]51940. Para la N-acetil-D-xilofuranosilamina

efectuaron el cálculo con el valor de B de -76° que deriva de los anómeros del

metil-D-xilofuranósido y mediante su aplicación obtuvieron un [9313-2800, frentey

al valor experimental del {Z2-131910 mientras que el cálculo para el anómero dió

[ 551-1230. yID

Brigl y col. (14) obtuvieron la N-benzoil-D-manopiranosilamina al degradar

_.

el hexa-O-benzoil-D-gliCcro-D—3¿l¿q_o-heptono1itrilo con amoniaco y nitrato de

plata. InterpretarOu su formación como el resultado de la acción del ácido nítrico

sobre el 1, lbis(benzamiclo)—1-desoxi-D-manitol; suponiendo que se formaba ácido

nítrico cuando se precipitaban los iones Ag+ con ácido clorhídrico. Deulofeu y

D ferrari (18)., al recuperar cuantitativamente 1,1-bis(benzamido)-l-desoxi-D­

-manitol de la amonolisis del pentabenzoato de dicho compuesto, comprobaron

que los 1,1-bis(acilamido)-1-desoxi-alditoles no son precursores de las N-acil­

-glicosilaminas. Gros, Ondetti, Sproviero, Deulofeuy Deferrari (23)propusieron

un mecanismo de formación de N-acilglicosilaminas que abarca las primeras

etapas del propuesto para la formación de 1, 1-bis(nicotinamido)—1-desoxi-alditoles

( pag. 13). Después de la migración del primer grupo acilo hacia el N del C-l

.. 31 ..

se podría producir la ciclación del ión (XIII)por ataque del par de electrones del

hidroxilo ubicado en el C-4 ó C-5 para formar un ciclo furanósica ó piranosico

respectivamente (XVI).

NH-COR NH-COB NH-CORl l l

H-C + H-C -—-- H-C

' I Í + -.T:I+ '

i > 1 OH > 1 oOO I l

H-C—oH Uri-Q H-C mii | I

(XIH) (XVI)

En la literatura figuran numerosos ejemplos sobre la formación de derivados

de monosacáridos con ciclos furanósicos a partir de compuestos de cadena abierta

en reacciones irreversibles (34) (35) (36), en las cuales se forman preferentemente

ciclos pentaatómicos, por estar ubicado el hidroxilo del C-4 del monosacárido en

una posición estericamente favorecida. En base andichos ejemplos y teniendo en

cuenta que las N-acilglicosilaminas se forman a través de una reacción irreversi­

ble, ya que generalmente se las recupera inalteradas cuando se las trata con amo­

m’acometanólico (29), Zanlungo (37) explicó la formación preferencial de N-acetil­

-D-glucofuranosilamina con respecto a la N-acetil-B-glucopiranosilamina en la

reacción del amoniaco con penta-O-acetil-D-glucosa. 1‘demás supuso que la reacción

de ciclación se podría producir a través de un estado de transición (YXXVIII)(pag. 32)

(esquema no.5) donde estarían libres los hidmxilos de los carbonos 4 y 5 del

-32­

monosacárido, mientras que los restantes hidroxilos permaneceríen esterificados.

De la comparación de los posibles estados de transición para ciclos furanósicos

y piranósicos de la N-acetil-D-glucosilamina (XXXI?)(XL)y N-benzoil-D-manosil­

NH-CORl

I

í |

‘_J—C

i

T-_

J 05‘30+

(ECXVIII)

-amina (XLI) (XLII)dedujo que, en este último caso la formación del intermedia­

rio furanósico (XLI) presenta mayor impedimento estérico que el piranósico (XLII)

por tener dos grupos benzoiloxi vecinos ubicados en posición cis, mientra que el

intermediario piranósico tendría cuatro sustituyentes en posición ecuatorial y uno

en posición axial, por lo que este intermediario tendria una entropía y una energia

libre de activación menores que el correspodiente intermediario furanósico, lo

cual facilitari'a la formación de N-benzoil-D-manopiranosilamina en la amonolisis

de la penta-O-benzoil-l:-manosa.

-33­

fi o¿c

O¡C fi NHÁC_ ,J

H-¿SÉFQ ¿f H1.7/14

H

+

H-C-NHAC /////,/,,ra1

H -C-O¿'L CI

ACO-C-q(XXXÏX

, ÓH20ÁCH-C-OH

1

' ‘ í “r A ..CHzohc AGO fl_ï>&fifc ¡A OH

\É*"; 9"¿L.—CH20AC¿5.CO "m ¡ Í; É . =\

H ‘

(XL)

+

H-C-NHBZ/|BzO-C-H »/

BzO-¿—Hs

E-C-OH‘,

H-C-OH -¿ OBZ Hl 1 1\ I '

CHOBZ H _,Ï>\SHBZI///”0H2 É:;É%Hr

' Bzolfi + u‘\¡——CH OBzII

H H

(XLII)

Esquema. n° 5

C-Migración intramolecular 0-90 de grupos benzoilo en la amonolisis de penta-O­

-benzoil-D-glucosas

Restelli de Labriola y Deulofeu (38) encontraron que al tratar con etanol amonia­

cal al 10%durante 3 horas los nitrilos benzoilados de los ácidos D-glucónico (XLIII)

D-manónico (XLIV)y IZ-galactónico (XLV), se forman respectivamente 1, l-bis

(benzamido)—5-0—benzoil-l-desoxi-D-arabir(tol(I'LVI) a partir de los dos primeros

1,1-bis(benzamido)-5-0-benzoil-1-desoxi-D-lixitol (XLVII)a partir del tercero.

Posteriormente, Deferrari, Deulofeuy Recondo (11)trataron el 1,1-bis(benzamido)

-5-0—benzoil-1-desoxi-D-lixitol con amoniaco metanólico al 16%durante 24 horas

y lograron eliminar totalmente el benzoilo del C-5, aislando el 1, 1-bis(benzamido)-—

-1-desox1-D-1ix1t01 (y LVIII) como se indica en la página siguiente.

Gros, Lezerovich, lïecondo, Deulofeuy Deferrari (39) encontraron que los

factores que pueden influir en el comportamiento diferente del grupo benzoiloxi

primario son: la concentración del amoniaco, el tiempo, la temperatura y la

naturaleza del solvente; efectuaron la amonolisis del 1, 2, 3,4, 6-penta-0-benzoil­

-D-glucosa (IL) con metanol amoniacal al 8%y con isopropanol amoniacal de la

misma concentración; en el primer caso aislaron 1, 1-bis(benzamido)-1-desoxi­

-D-glucltol (L), mientras que en el segundoobtuvieron 1, 1-bis(benzamido)-6-0­

-benzoil-l-desoxi-D-glucitol (LI). Repitieron las mismas experiencias utilizando

como sustrato la l, 2, 3,4,6—penta-0—benzoil-D-galactosay obtuvieron 1, l-bis

(benzamldo)-l-desoxi-D-galactitol y 1, 1-bis(benzamido)-6-0-benzoil-l-desoxi­

-D-galactltol. Por oxidación con metaperyodato de sodio, demostraron que en los

compuestos del tipo (LI) el benzoilo estaba unido al hidroxilo del C-6.

Recondo (40) repitió la amonolisis del penta-O-benzoil-galactononitrilo en etanol

y consiguió desplazar todos los grupos becacflo, aislando el 1, 1-bis(benzamido)­

-35­

CENl

H-C-ORI

RO-C-HI

H-C-OR + NH3 (Etanol)I

H-C-OR ““”""‘“” \v HPC(NHR)2¡ 3 horas .i ,CHZOR HO-C-H

_ l

(XLIII) ° h'9'OHH-C-OH

l

CH2OH

(XLVI)CEN

I

RO-ï-HRO-C-H + NH (Etanol) ///fll _3____

H-C-OR 3 horasl

H-C-ORl

0H20R

(XLIV)

C-zNn

H-C-OR C (NHR)2 c (NHR)2l n n

RO-ï-H +NH (Etanoll;> HO-?—H + NH3(CH3OH) HO-?-HR0-C-H 3 horas HO-C-H .___—_—————7— HO-?-H¡ .

H-C-OR H-ó-OH 24 h°ras H-C-OH1

CHQOR ¿H20H CH20K

(XLV) (XLVII) (XLVIII)o\\

R: —C-06%.

-36."­

-1-desoxi-D-lixitol, al aumentar el tiempo de reacción a 24 horas.

H-C (NH-R)g 2

H-C —OHi

HO-C —I-Ïl

f, H-C —OH

H-C (WIR)¡ 2

H-C-OH_ |

l

H-C-OHl

g O H-C-OH= ... .... l

H2C—O—R

(LI)

El aislamiento de productos de amonolisis con un grupo O-benzoilo en el C-6

permitió determinar, usandotres penta-0-benzoil-D-glucopiranosas marcadas

en diferentes posiciones, si el grupo 6-O-benzoilooriginal era reemplazado total

o parcialmente por otros grupos idénticos durante la reacción de amonolisis. Leze­

rovich, Gros, Sproviero y E‘eulofeu(41) amonolizaron 1,2, 3,4-tetra-0-benzofl­

-6-0-benzoil-(carbonilo 14C)- fi-D-glucopiranosa (LH), 1,2,3,6-tetra-0-benzoil—

—4-O-benzoil-(carbonilo 14*C)--D--glv.icopiranosa(LIII) y 1,2, 3-tri-0-benzoil-(carbo­

—nilo14‘C)--¿i,6—di-0-—benzoil-D--glucopiranosa(LIV) con una solución de amoniaco

- 37 ­

en isopropanol al 8%, aislando en cada caso 1,1-bis(benzamido)-6-0-—benzoil-1­

-desoxi-D-¿lucitol (LV), del que se eliminó posteriormente e grupo 6-0-benzoilo

con amoniaco metanólico al 16%con lo que se obtuvo 1,1-bis(benzamido)-1-desoxi­

-D-glucitol (LVI) (esquema no.6)'. Por medidas de actividad especifica de estos

compuestos se pudo determinar que en la amonolisis isopropanóllca se produci’a

la migración de 0,09 moles/ mol del O-benzoilo presentó en el C--1hacia el hidroxilo;

del C-S ; 0,07 moles/mol del benzoilo del C-6 hacia el Ndel C-l y no se observó

migración hacia el hidroxilo del C-6 de los 0-benzoilos ubicados en los carbonos

2 y 3.‘Aplicaron la misma Serie de reacciones a un. compuesto aci’clico, el 2-0­

-benzoil(carbonilo 14C)-3,4,5,6-0-benzoil-D-glucitol-—1-sulfonato de sodio (LVII)

(esquema no.3) y obtuvieron resultados distintos a los observados en las D-gluco­

-piranosas; en este caso migraron 0,11 moles/mol del C-benzoilo del C-2 hacia

el C-6 y 0,76 moles/mol hacia el N del C-l. El comportamiento diferente del

compuesto aci’clico (LVII)con respecto al de las penta-0-benzoil-D-glucopiranosas

se originaria en la diferencia estructural de los compuestos de partida, que traería

como consecuencia un diferente desarrollo de la reacción a través de las distintas

etapas, que conducen en ambos casos al mismo producto final (LV). Esto significa

que en las primeras etapas de la amonolisis, la penta-O-benzoil-D-glucopiranosa

conservari'a una estructura ci’clica, mientras que en el caso del compuesto (LVII)

se parte de una molécula de cadena abierta.

La migración de grupos acilo en polihidroxicompuestos parcialmente acetilados,

en condiciones alcalinas suaves ha sido observado en numerosas oportunidades. En

1920 E. Fisher (42) comprobó este huChOen esteros del glicerol parcialmente aceti­

lados y Ohle (43) en 1924, estudió la conversión 3-O-benzoil-1,2-0-isopropiliden-(‘kD­

-glucofuranosa en ¡.316-0-benzoil derivado por acción de trazas de álcali.

ROC O

-38­

o

Heo (NHÉíR)2¿o

H-C (NHÉ-R)l i 2

H-C-OH HkC-OHi

HO-CnH BO-C-H

x ._‘ - ___.___;7 ví ,*--*1' H-C—Oh h-C-OHl i

h-C-OH B-C-OHl I

H C-OïOR H2C_oflhh(LV) (LVI)

[98] [7)

l o ¿9,0H-C (NH5¿R)2 HF? (NEC-Bb

l

H-C-OH H-C-OHI

l .w

HO-C-H ho'?-HI

x‘ H-C-OH HF9-OH/t 1H_C“OH h—C-OHIX l­H2C—OCOB HQC"OH

(LV) (LVI)

(93] [82]

X/ o 55/0H-C (NHC-íïh H—C (NHCíR) 2

I i

H-C-OH H-C-OH4 l

HO-C-H HO-C-Hl u

__._.;;> H-g-OH ———-——€3>Hr?-—0HH-C-OH H-C-OH

. l l

n2CwOCOR HéC-OH(LV) (LVI)

[37 J R:—06H5 [37]Es;quema n ° 5

-39­

OHI

H-p-So Na H-o (331503) 2 22-9 ( NHKÏOR)2H-C-OÜOR H-C -OH H-C -OH

ROCO-é-H HO4:3—H I-IO-é-HH-C-OCOF. H-C-OII H-C-OH

H-CI‘-OCOR Hi; —OH H—('3—OH

H2¿—OCOR H2 ¿—oÜOR H2¿—0H(LVII) (LV) (LVI)

[100] [a7] [ 76 ]Esquema n° Q

Bonner (44)observó que al metilar con yoduro de metilo-óxido de plata la 1,3,4,

6-tetra-O-acetil-D-glucopiranosa se obteni’ael metil tetra-O-acetil- f5-D-gluco­

-piranósido y publicó una extensa tabla donde figuran migraciones desde distintos

carbonos en hexosas parcialmente aciladas, en la que puede observarse que la

migración de acilos procede casi invariablemente "desde" el carbono-1 y "hacia"

el carbono-6, figurando migraciones desde otras posiciones, excepto desde el

carbono-6 de las hexosas.

Fischer sugirió que el mecanismo de migración de acilos en un polihidroxi­

compuesto parcialmente acilado se produciría a través de un 1, 2 ortoester y

Bonner (44) supuso que las migraciones a lo largo de carbonos no vecinos podrian

producirse a través de una serie de migraciones sucesivas entre carbonos vecinos.

vi’ala formación intermediaria de ortoésteres.

_ 40 _

E-Transesterificación

Cadenas y Deferrari (26)observaron un apreciable aumento en el rendimiento

del producto de migración 0-9N (el 4-0- og-D-glucopiranosil-l, 1-bis(acetamido)­

-1-desoxi-D—glucitol)en la amonolisis de la e, -octa-O-acetil-maltosa cuando

emplearon agua en el lugar de metanol como solvente de la reacción. Las reaccio­

nes competitivas de amonolisis de los grupos acet ilo para dar amidas y la de

transesterificación con el metanol del medio para dar ésteres metflicos cuando

se emplea amoniaco metanólico, serían las responsables del bajo rendimiento

obtenido para los productos de migración O-eNen medio metanólico, ya que el

ión CH3O-cataliza ambas reacciones como puede apreciarse en los esquemas

no.8 y no.9 para el caso de la penta-O-benzoil-D-glucosa. Además los autores

hicieron un estudio comparativo de la reacción de la penta-O-te nzoil- d-D-gluco­

-piranosa con amoniaco metanólico y amoniaco metanólico con el agregado de

0,015 moles de sodio para aumentar la concentración de C830", lo cual provocó

una disminución del rendimiento del 1, 1-bis(benzamido)-1-desoxi-D-glucitol del

25,6% al 14%y un aumento en el rendimiento del benzoato de metilo del 5% al

13%, con lo que quedó demostrado que la reacción dc transesterificación compite

con la de migración 0--!N.

-41­

- . -.+ . ­NH + CF OH ¿1:? NH + CH O

. 3 l3 4 3

CH OH CH ORQHZOR 2 .

o ___._

H H H H H o H x H H o H

+ PH —-ï>R’ \ï txRO OR OH o\0H H/ OR <—.— R OH OR

. + 9 - 9

0:0 h3N-C—O H2N—C—OH" ‘ b Hbóh‘ñ 06H5 6 5

CH o‘3///////.. /011203 CH2OH¡. Jr.mo 4 n- ‘

HI/ H NH CH3OH H/H o HH..- "\ TROY? 3/ OR \ RO\ÏR h OR

OocrHcooOCH O .­

É _ 3 H2‘\T—ó—oH N- —O ' T

2 á H (361%6 5

¡oH o“ + C H —CC——NH

+ C 3 6 5 2

9-c-<<:>>

Esquema n° 8

-42­

RO OR H OR

H O

C=O

i 7

C6h5

CH OH3

3

CHÉOR CHQOR

T / “o

ht H \H<+-——-­

RO OR H OR

H o---H---OCH- 3

+ ' —CH —o -C—O/o 3 |

C6n5—C;: C HO-CH 6 5

+

CH O3

queman0 9

-Q3­

ACCION DEL MONIACO SOBRE LOS HIDRATOS DE CARBONO

La accclón del amoniaco sobre los hidratos de carbono puede conducir a las

siguientes reacciones:

a) Isomerización

b) Deshidratación y transposiclones intramoleculares

c) Aldolización-desaldolización

d) Formación de compuestos heterocí’clicos

e) Formación de melanoidinas

a) Isomerización

Las aldosas en medio alcalino, además de la transformación de Lobry de

Bruyn-Alberda van Ekenstein (45), que conduce al equilibrio aldosa-cetosa y de

éstas con sus correspodientes epïmeros, sufren otras reacciones laterales como

la desaldolización, aldollzación y deshidratación (46).

H—(,3=O :ï-C-OH Háï-OH HZC‘J—OHnH-C-OH me» (3-0}; -—-—-—‘-> 0:0 —-———-;\2 C-OH.5... t «a... l 4- n

HO-C-H HO-C-H \ HO-C-H \ HO-Cl i t

R \ R R

H-C=O H C-OH

L 2*HO-u-I-I (¡3:

lHO—C—H H-C-OH

_ .14 ­

Hough, Jones y Richards estudiaron la transformación de Lobry de Bruyn-Alberda

van Ekenstein en medio amoniacal sobre D-glucosa, lactosa, maltosa (47) y

melibiosa (48). prepararon D-psicosa por acción del amoniaco acuoso sobre la

D-glucosa a 37° durante 48 horas y aislaron lactulosa y IÉ-galactosa a partir de

lactosa en condiciones similares a las anteriores. Aplicandoel mismo tratamiento

a la maltosa, lograron‘aislar maltulosa y D-glucosa e identificaron fructosa y

manosa. Bajo idénticas condiciones y a partir de melibiosa, obtuvieron melibiu­

losa, 6-0-(,K-D-gaiactopiranosil-B- D-manosa, D-galactosa y D-tagatosa. En

el esquema no. 10 se describen las transformaciones que, según lsbell (49) (50)

permitirían explicar la formación de D-galactosa a partir de lactosa; en dicho

esquema se postula un glucósido vinflico intermediario (LVIII)que se hidrolizari'a

facilmente para dar D-galactosa. Mediante un esquema análogo se podria explicar

la formación de D-glucosa a partir de maltosa en amoniaco acuoso.

b) Deshidratación y transmsiciones intramoleculares

Formación de desoxiosonas

Las 3-desoxiosonas se forman como productos laterales en la transformación

de Lobry de Bruyn-¡slberda van Ekenstein y su formación es catalizada por ácidos.

bases, sulfitos y aminas (51). En la catálisis por aminas, las primarias y secun­

darias reaccionan con aldosas y algunas cetosas para formar glicosilaminas (LIX),

las cuales sufren luego la transposición de Amadori. Cualquiera de los intermedia­

rios (LXI) (LXIV)(LXVI)del esquema no. 11, propuestos para esta reacción, por

eliminación del protón del carbono-2 y ruptura de la unión entre C-l y el átomo

cargado positivamente, dan lugar a la formación del enol (LXIII), el cual por

tau'comerización conduce al producto de Amadori (LXVIII). El enol (LYIII) por

pérdida de un hidroxilo del C-3 puede formar la base de Cchiff(LXX)y por

_ 45 _

OHZOH ï OH OHggH H ¡[oÉ {I‘M-“5‘ ¡I 'w" “m

HOH \Ïwo«gofi I{\H ___@ Hï<ÏI \mno “(/OH. “é ' ü ‘ OHp 5V

‘ ' x i X \'\ 2

H OH EÏ/H mi? ./ op ,OH II/ H Hxfi,¿rm-"1’ Ï H Y 1*OH

H OH 3203 H OH CHZOH

F —1actosa lactulosa’Í é '

1

} Ef

CH OH CH OH |

z 3 O\\ H.OH ,3. o MHHO O\ -0 .. (mu. HO H x ¡ -O .., \ .

i CH 03-.-; \1 x CHZOH lHNOH H J “x H H H H

/ L H \. \ H H \ u«m» 1-»OH Fm I-OH ;

H OH 0H20H H OH OH OH i

N 'I013 H.OH ‘

HO/H ‘ l... Omi \,- - CH OH

H VO} ¿g/H H 2\;»w--ug ‘SMMOH

H OH CHZOH .

‘ (Lvm) '\íCH OH, 2

(¿H-¿OH CH.OH

HO “H - O-OH.OH +

H OH H/ ‘—OHm4 H-C-OHH OH l

CH2OH

Esquema no lO

-46­

+ +

H-C-NRR' H-C:ÏFRR' H;C=NRR'i l ' i

H;C—0H 1 + H+w_"_:, H;C—OÉÏ‘7 __ z Bea-OH' . 7- """ .

HO-C-H P hO-¿mH 9 <EE-”* HO-Ó-H ?H

(LIX) (LXI) (LXII)

+ NHRR' '—H+

A] I+

H;Cffifïi\ H-C-NRR' + Bee-NRR's _' á

H9á-OH ó + H-C-OH fi“ .ií_y É-OHHO-C-H j HO-C-H i Ho—¿—H

1 y/ I i(LXIV) (LXV) (LXIII)

x [I /I H/- NRR’ _ '

H ? ( )2 Hé? NRBH;C—0H C=O

1 1

HO-C-H HO-C-Hi l

(LX) _OH¿ (LXVIII)-+

1p 1-1

R'RN ¡ÑHRR' ï+ Ñ

Ein RFC-NRR' \\\\ H+C—NRR'. h l I v‘ ""M...Nak tBEC-OH —hNRR H-C-Oh ** —OH

._..__.___=> l fHO-C-H HO-C-H +C-H

i t g

(LXVI) (LXVII) (LXIX)

-4+H—C=O HéCzNRR'

=o <5_.____n —OH¿H 8 Ha 2 z­

(LXXI) (LXX)

Formación de 3-desoxiosonas

Esquema no ll

_ 47 ..

hidrólisis de esta dar lugar a la Formación de la 3-desoxi050na (LV‘XI)(51). Kato

(52) (74) preparó la ‘3-desoxi-D-xilosona a partir de D-xilosa y n-butilamina.

c) Aldolización-desaldolizacfl

La reacción de aldolización-desaldolización se produce por efecto de una catalisis

básica. De esta manera se interpretó la formación de una mezcla de D y D-,L­

-sorbosa a partir de D-fructosa en medio de hidróxido de sodio (53) (54) (esquema

no. 12).

La aldolización de triosas con formación de hexosas en medio alcalino fué

estudiada por varios investigadores (55) (56). "Elamoniaco y las aminas primarias

y secundarias catalizan también la reacción de alCÏOÏiLauÍÓu-‘J "‘ ‘ineir'm (57).

Grimmett y Richards (58) trataron D-,-L-gliceraldehido con amoni’acoacuoso a

37° durante 8 semanas y obServaron la formación de una mezcla de hidratos de

carbono e imidazoles. Entre los azúcares formados identificaron; arabinosa,

lixosa, glucosa, manosa y fructosa, y entre los compuestos básicos aislaron

4(5)-metilimidazol (LXYII), 4(5)-hidroximetilimidazol (LYXIII), 2-hidroximetil­

-4(5)-metilimidazol (LX‘YIV)y 4(5)-(2hidroxietil)-imidazol (LXYV). La formación

de estos compuestos fué interpretada por la secuencia de reacciones que figura

en el esquema no. 13.

d) Formación de comguestos heterocfclicos

La principal diferencia que existe entre el amoniaco y las bases minerales

fuertes, en su reacción con los hidratos de carbono, es la formación de hetero­

ciclos. La primera descripción de formación de compuestos heteroci'clicos por

reacción de hidratos de carbono con amoniaco fué hecha por Brandes y {toher

(59) en 1896, quienes obtuvieron piridina, pirazina, y metil pirazinas como

productos de la reacción entre D-giucosa y amoniaco acuoso al 25%a 100°.

0H20H:O

HO- —H

H; —OH

HkC-OHI

CHzOH

«—c>«o——a——

D-fructosa

-48­

I ÉHQOH OHéOhdesaldolizaoión :0 aldolizaoión gzo

:> ‘EQOH mü________¿Ï,, H-C-OHI+ . ñ.

T-I ._ _ 2

wii-0:0 g________. “o (¡3h' ' c " - l -n 7 'aJa ' ‘;'—¿1d0112101on h_C_OHdesalqollaV elón h O OH

[ -.

CH OH CHZOL2 D-sorbooqDihidroxiacetona °°

+

D—gliceraldehido

A

V

' CH OH CH "OHZOH l 2 i 20hC=O desaldolización C20 aldolizaolón x“ C=O¡ ———*———-——-vw-5’ g “““"-—“‘-“——"‘3/ l

H-C-OH CH Oh Ho_C_HI á%——————-———m 2 <&—————————umw l

HO-C-H aldolización 4+ desaldolización H;C—OHI l

HO-C-H ByCzO HO_C_Hl i ¡

CH OH HO-C-H ,H OH2 ¡ 2

L-fructosa CHQOB L-sorbosaDihióroxiacetona

+

L-gliceraldehido

Esquema no 12

-49­

penÍosa fructosa ï’“'5 manosa+ glucosa

z— — / — : Y 1.

H CwO _H 0:0 H H o _€> ?h20L. ?H2OHCH OH q————.— H—C—OH 0:0 o 0:0

2 (w..- t ___.>0H20H CHEOH H9É=OJhL

H =_H20 + 20 O

2 NHy 3

CH OH H'?=O w2 C-O

¿:0 ¡‘ H2C<pHI CH '““W

CH.OH 3 // /:>l H

CH OH \\\\\ 2 N

H

-'H20 (LXXIII)H C=O

I4:3:0 Í + ÉNH3 CH0:0 A \3l t N(¡mz \\CHZOH i l \\\yN///

l g H2 NH (LXXII)

HzczoW

*_ CH

hOHZC CH2 N; + \ 3

// l\ // N\3H' /:> \\\‘ ¡>V‘ H2

N NH H

(LXXV) (LXXIV)Esquema n° 13

-50­

En 1898 Lobry de Bruyn (60) aisló un compuesto heteroci'clico por calentamiento

de D-glucosamina en solución metanólica. Al año siguiente, haciendo reaccionar D­

-fructosa con amoniaco metanólico, obtuvo la fructosazina ó 2,5-bis(tetrahidroxibu­

-til)-pirazina (LXXVI)(61), la cual resultó idéntica al compuesto aislado por él a

partir de D-glucosamina.

a os. ¡í110H20«c-c'-g—/‘ ‘xa_ ¡777

oa Ohm O H oH oh",/ —ó—c—o—CH20HN- on H H

(LXXVI)

fi Formación de imidazoles

En 1905 Windaus y Knoop (62) obtuvieron 4(5)—metilimidazol (LXXII) por acción

del amoni’acosobre D-glucosa en presencia de hidróxido de cinc.

H3C./ \\\‘ / (LVÁII)

H

Desde entonces la reacción del amoniaco sobre monosacáridos, disacáridos y melazas

ha sido ampliamente estudiada, obteniéndose de ella distintos imidazoles y pir'azinas.

Una revisión de la mayoría de los trabajos sobre este tema hasta 1965fué publicada

por Grimmett (63).

CuandoWindaus y Knoop aislaron 4(5)-metilimidazol a partir de glucosa,amoni’aco

e hidróxido de cinc, 1a reacción despertó gran interés porque se creyó que la misma

podría aclarar la biosintesis del anillo imidazólico y que las proteinas en las plantas

podrian formarse por interacción de azúcares con amoniaco.

-51­

tí É

R»-Czo Nh // N3 ‘- RI > R"

0:0- R" mRL cTzo H \¿\]

J. HH

3

Luego Weidenhagen y Herrmann (64) estudiaron la oxidación de hidroxicetonas

a compuestos carbonilicos con acetato cüpri00 amoniacal. Cuandoesta reacción

se llevó a cabo en presencia de aldehidos, condujo a la formación de imidazoles.

En general, por interacción de hidratos de carbono con amoniaco, se forman

mezclas complejas de imidazoles cuyo rendimiento depende de las condiciones

de presión, temperatura y catálírls empleadas (65), (66), (67), (68), (69). Parrod

(70) (71) preparó el 4-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-imidazol (LXXVIII)a partir

de D-glucosa, D-fructosa y D-manosa por tratamiento con amoniaco acuoso, e

hidróxido cúprico en corriente de aire. Comoobtuvo el mismo producto tratando

con amoniaco y formaldehído la glucosona, consideró que el primer paso de la

reacción era la oxidación de fructosa a glucosona (LXXVII)y luego la condensación

de ésta con dos moléculas de amoniaco y una de formaldehído para dar 4-(D­

-arabino —tetrahidroxibutil)-imidazol (LXXVIII).

-52­

CHQOHCHF‘OH :L‘ o: ,_

¿ 1 ¡ o rio-(¡FH

czo czo HO-C“Hi g- _ YHO-C—H o HO-C-H + 2 NH H C Oh

¡ M. ¡ 3 YNH»C«-0H ELO-OH + Hzczo ' /i z

H—C—0H H-C-OHs n

CHK OH CHÓOH N2 L H

(LXÁVII)Los resultados obtenidos por Parrod se describen en la tabla no. 5

Tabla no.5

1Relaciónmolar: azúcar 1; Cu(OH)22; NH216; temperatura ambiente

Azúcar tiempo imidazol A B C D E(100 g.) diasE-fructosa 15 25 15 11D-glucosa 15 1 24D-manosa 15 5 10D-galactosa 60 15 0,5 0,4L-arabinosa 30 31D-Xilo sa 30 7 , 3Ramno sa 30 3 1 , 5

A: 2-metil imidazolB: 4(5)-hidroximetil imidazolC: 4 D-arabino-tetrahidroxibutil-imidazolD: 4 B-lixo-tetrahidroxibutil-imidazolE: 2 hidroximetil-Ki-I‘x-lixo—tetrahidrobutil imidazol

Un estudio completo de los productos de la reacción de la glucosa con amoniaco

acuoso, fué hecho en 1962 por Komotoy col. , (68) quienes identificaron por cromato­

grafía en papel, manosa, fructosa, glucosilamina, diglucosilamina y ocho imidazoles

diferentes, de los cuales pudieron identificar 4(5)-—metilimidazol(LXXII), 2-hidroxi­

-metil-—4(5)—metilimidazol(LX'XIV),4(5)-(2-hidroxietil)-imidazol (LXXV)y aislar

el 4(5)-(2, 3, 4-trihidroxibutil)- imidazol (LYXXIX)y posible mente el 4(5)-(2, 3­

-dihidroxi1pn pil)-imidazol (LXXX). Los intermediarios y las reacciones que condu»

.1, .7

‘ OHZOH HC=O CHZOH , O.. 1 i r

(CH.OH)4 C: é. OH.OH + C: íCí)-9 HOi ,r f T ' Í

l CH OH ¿gi? (CH.Oh)3 CHZOH CHZOH2 OH OH ‘ » I H2C

L \—u2 3/ \ í aV l / H

HO: HO=O " CHZOH > Ém=o OHZOH .;,'i x r _ :n

O: ‘ (OH.OH)3 ...¿ O=O (OH.OH)2 O=O ?H3“OH2 CHZOH ‘ (CH.OH)2 CHZOH}¿:j? CH.OH 'C=O. ' *‘ l l‘f

({1H.OH)2 \ = CHZOH y 1 CHZOH I HCÉO.

CH OH 4 (:) ' “

2 _ 5 z,V

l HC=OH HC=Oi

C=O ?_o /////óH CH

L » 2 2 © /y OH.OH CHZOH ¡

CHZOH ¿H OH i i \\2 ;

(CH.OII)2 [g\(EH2 CH3 ,L‘HN O CH OH 2?’ N y “4‘

/¿7 ‘ ‘ CH OH ’ 2 /j>’0ï OH'\ y ‘ 2 GHz \N L2 "H OH.OH Ñ.“ HH ' ¿7 QR (LXXIV)

OH2 . ¿(LXXIX) í \ / ví\ “N N A1/

¿7 \ H‘\\N (LXXV)

y H (í>DesaldOlización ‘ _¿

(mm) + O=CH—-«CH20H _.p.

J+ H2C=O —Hgo l y ‘

'\ .—_ ' z...(Ej + H2C O + 2 NH3 + O CH CHZOH + 2 NH3(En

Esquema n°

-54­

-cen a estos compuestos imidazólicos están indicados en el esquema no.14 (63).

Jezo (69), calentando sacarosa y amoniaco a 180o en presencia de fosfato de amonio

como catalizador, ó a 2200 sin catalizador, obtuvo 25%de productos nitrogenados

compuestos por pirazinas y 4(5)-metilimidazol, 2,4(2, 5) -dimetilimidazol, 4,5­

—dimetilimidazoly 4(5)-hidroximetilimidazol. Parrod (67) encontró que el pasaje de

aire a través del sistema azúcar-amoni'aco-Cu++ aumenta el rendimiento de los imi­

dazoles oxigenados. Asi, por burbujeo de aire en la reacción entre fructosa y amoniaco

se forma, además del 4(5)-metilimidazol que es el producto principal, 4(5)-hidroxi­

-—metilimidazol.Cuando la reacción se realiza en presencia de acetaldehido (72), se

ve favorecida la formación de 2,4 (2,5)—dimetilimidazoly por agregado de formalde­

hído aumenta el rendimiento del 4(5)—mctilimidazol. Estos hechos favorecen 1a inter­

prctación de Windaus acerca del mecanismo de 1a reacción, en el sentido que la mis‘

ma comienza por la desaldolización de 1a hexosa y deshidratación de la triosa forma­

da a aldehido pirúvico (LXXXI), el cual produce luego imidazoles por posterior con­

densación con amoniaco y formaldehído./ \CHZOH H (3:0 H C:O

.. s; a

hexosa _—..> (2:0 “á; CH OH 12.0\ (3:0‘_‘ T 6- ! "7/ i 7Cfi20rï CHZOH C H3

‘K / (mm)w- /

+ h2CzOCH

3 + 2 NH¿y¿L

( LKXIÏ )

-55­

Recientemente , Grimmett y Iïichards (73) trataron aldehido pirúvico con

amoniaco y obtuvieron 4(5)-metilimidazol y 2,4(2,5)-dimetilimidazol en cantidades

equimoleculares; en base a este resultado postularon las siguientes degradaciones

del aldehido pirúvico .

_ C Ha (3:0z H o / i 3 + co OH0:0 ‘2 [1-1 0:0

¿w —-——-—»—<fl.C H

3 A l 3 + HZCzoco OH

Estos hechos confirman las etapas que habia propuesto anteriormente Grimmett

(63)y que figuran en el esquema no. 14, donde se resumen las posibles reacciones

que conduciri’ana la formación de los distintos imidazoles que generalmente se

forman entre hexosas y amoniaco.

Fujii y col. (74) demostraron que el 4(5)-(2.,3-dihidroxipropil)—imidazol que

se forma por reacción entre glucosa y amoniaco, no se produce según el camino

"A" del esquema no. 15, sino por recombinación de una molécula de triosa y otra

de aldehido glicólico formadas por fragmentación de la glucosa, según el camino

"B". El imidazol obtenido presentó idéntico espectro IB y el mismo Rf que el

4(5)-(D(-)glicér0o-2, 3-dihidroxipropil)=—imidazol(LXYYII), pero mientras este

último teni’a un bsq’ï-EÏZ,3°, aquel no presentó actividad óptica. El hecho que elproducto aislado fué el 4(5)-(D, nglícero-Z, 3-dihidroxipropil)-imidazol (LXXXIII),

-56­

H90=Oy

HPC-OHz

l‘"“ hO-?—B' H- n p

(E) u 9 O“_H2C:O 5 h-?«Oh

i CHÑOHd

D-gluCOSaf \.

g H—czo H—czo Él l

HO-C-h H-C-OH¡ 1

Í H;C—0H HO-Ó-Ei i

i h—C-OH H-C-OH

s _ 5 Y

CH2OH ChÉOh/D-arabinosa D-xilosa

- H2O

é

H-ïzOC=O

waHPC-OH

i

0H20d

H

//"N;>>L‘xN”//9H2

H;C—OH

CflzOH(D-glícero)(LXXXII)

Esquema no 15

f¡H;C=o

i

CH.OEí

CHQOH

ÍH

N

>1 NCB

CH.OHóH OH

__% I

H4C:O

¿EL OH

¿H.OH

‘CH. OH

¿HgoHD-L-pentosa

l_h20H—C=O

(D-L)(LXXXIII)

-57­

indicarfa que el camino correcto seria el "B", en el cual la D-L-pentosa tendria

su origen en la condensación aldólica del aldehido glicólico con el DTL-aldehido

glicérico formado en el equilibrio aldehido ¿licérico-cetona glicérica. En cambio,

si la reacción se hubiese desarrollado a través del camino "A", el dihidroxipropil

-imidazol tendria que haber presentado actividad óptica, pues necesariamente debe­

ri’a pertenecer a la serie 13-,ya que los compuestos que pueden formarse por pérdida

de cualquiera de los carbonos terminales de la D-glucosa como formaldehido, son

la D-arabinosa y la.D-xilosa. Los intermediarios o(-dicarbonflicos ó M-hidrocar­

-boni’licos postulados por Komoto (68) y por Fujii (74), para explicar la formación

de imidazoles, no se han podido aislar de las soluciones amoniacales de los azúca­

res; por lo tanto, para explicar la formación del :1 6‘-hidroximetilimidazol a partir

de gliceraldehido con amoniaco acuoso es necesario postular la formación de

hidroxipiruvaldehido (esquema no.13, pag. no. «19).Grimmett y Richards

(75)demostraron la formación de estos compuestos al aislar 4(5)-hidroximetilimida­

zol por tratamiento de hidroxipiruvaldehido (LXXXIV)con amoniaco y además,

obtuvieron en esta reacción 4(5)—metilimidazoly 2-hidroximetil-4(5)’-metilimidazol,

cuya formación no ha tenido explicación satisfactoria ya que ambos productos re­

quieren la presencia de piruvddehido como intermediario para su síntesis.

-58­

CH OH

H_C=o HZO (¡3:0+ \ H_C:O O=CH

H COOH NH

H o (LXXXIV) 32

¿4

?H20H + chzoCOOH

\2N

’ <F>

CH OH

H

(LXXIII)

Estos autores (75)prepararon imidazol (LXXXV)y 2-hidroximetilimidazol

(LXXXVI)tratamiento amoniacal del aldehido glicólico y propusieron los siguientes

pasos para explicar su formación:

CHQOH o H—?=oH-C:O Hl(LXXXVII)

H—C=O + 2 NH \\\l 3H-C=O

\I,I

/ ­/Ï> CHZOHN

iH

H O H C=O2 t: É

H COOH

+ 2 NH3

H2C=O

._ _.

Formación de Bírazinas

En la reacción entre hidratos de carbono y amoniaco, además de los compuestos

imidazólicos, se forman pirazinas sustituidas. Houghy col. (76) aislaron 2-metil­

-5-(EL-arabino-tetrahidroxibutil)—pirazina por acción del amo faco sobre la D-glu­

—cosadurante dos semanas a 37°. Taha (77) estudió la reacción entre glucosamina

y amoniaco y después de seis meses de reacción a temperatura ambiente pudo

aislar 2-meti1-—6-(D¿anafgngtetrahidroxibutil)—pirazina;2, 5-bis(D-arabino-tetra­

-hidroxibutil)—pirazina (fructosazina) (LXXVI) y 2-metíl-5-D—arabino-tetrahi­

-droxibutil-3-D-gfi‘gtrihidroxipropil-pirazina. Las polihidroxialquilpirazinas

preparadas con fines sintéticos son: la fructosazina, la tagatosazina y la desoxi­

fruetosazina. La fructosazina (LXXVI) fué sintetizada a partir de D-fructosa

H H OH

HOHzC-O-O-COH OH H\\

H-C-NH O=O—Ht 2 l

— = —I T— —HECO I21\C'H OHOH2-an1ino-2-dcsoxi-D-manosa C" C "C °' CHgoH

OHH H

\L/‘I H UH _, y?PH

HMïO«O-OHO— ‘ \xOH OH H f ¡ H OH OH

K&w//—O—C—O-CÉQHN OH H H

(LXXVI)

H H OH T\HOH2O—-O— O*'O

H OH H\

(¡3:0 H2N('3H2

h’C"NH2 O=C\\H OH OHO—-C"O -OH20Hl-amino-l-der:oxi—fructosa OHH H

-60­

y amoniaco (61) (78), de glucosamína ó de 2-amino-2-desoxi-manosa con metano]­

-metóxidode sodio en corriente de aire (79)ó a partir de l-amino-l-desoxi-fruc­

-tosa con dietanolamina (80).

La tagatosazina ó 2,S-bisa)-@-tetrahidroxibutil)-pirazina (LÍIXXVIII)se

sintetizó a partir de 2-amino-2-desoxi-galactosa con metanol-metóxido de sodio

en corriente de aire (81)y la desoxifructosazina ó 2—(D-arabinotetrahidroxibutil)­

-5-(D-__e_1_'_i_t_r_(_)-2,3,4-trihidroxibutil)—pirazina (LXYYI'V) fué sintetizada por autocon­

densación de la glucosamina por calentamiento en ácido acético (80).

H osos /NHOH2C«-C-—C _//-\.\\

OHH H H H H oa. '-C—-C-C-CHOHN/ OHOHH 2

(LXXXVIII )

Jezo (82) estudió la amonolisis de la sacarosa, lactosa, celobiosa y almidones (69)

a 200°. En la reacción con la sacarosa aisló, por extracción con eter, además

de varios imidazoles, 2-metilpirazina, 2,5-dimetilpirazina, 2,6-dimetilpirazina e

interpretó la formación de estos compuestos considerando que la reacción se

iniciarïa con la hidrólisis de la sacarosa (XCI)(esquema no. 16)para dar glucosa

y fructosa y luego estos monosacáridos, con el amoniaco, formarfan glucosilamina

y fructosilamina respectivamente; la fructosilamina por transposición de Heyns se

transformari’a en glwosanina, mientras que la glucosilamina dari’a 1-amino-1­

-desoxi-fructosa por una transposición de Amadori. La condensación de dos mole­

¿“I

HOF“H OH

D-glucosa

NH3HOH w

2 oH

J.

HO ïH H/ NFH H

‘2

D-glucosilaminai

T. de Amadori

J/

H C-NH24

C=Ol

HO-O-HH-C-OH

l

‘H—C—OH

2

lCH OH

2

l-amino—l—desoxi­fructosa

Esquema n° 16.¡u

HO

HO ii HZOHOH

D-fructoaa

HOH C '

2 \\\HHO

HZN i*___f CHZOH

OH H A <

D-fruqtosilaminai

T. de Heyns

H-O=O_ _ x

H O NL2HO-C-H

l

H-O-OH

H-O-OH

CHZOH

D-glucosamiha.

H H OHÜHOH20—¿—O-O«O _ L :

OH OH H\\‘ ' wH- 0*NH O=O—H

t 2. 1‘ .1- = T_ ..'-T ‘

y y JCO H21\‘C11H OH OH ‘

‘ O CMC -—C — CHZOH

\ g OH H H

D-gluOOsamina

H H H

HOH20._.O._C“Ca .- OH OH H I ‘ l H OH OH .

—O—O«O- CHZOH‘- 'OH H H

N

( LXXXIK)

H H H H OH OH

’ ' HOH C—-’C—40*C —— x --C no -'O —-CH OH2 OHOHH ‘\N/ OHH H 2

_ = H; IH (Í O ,Hzl. O32

H-O—NH2 O=C—H’H H OH ' ,H OH OH A »

HOH2O«O—O«-O/' H \C.-—C-—C-—-CH20OH OH H . . OH H H ­

H;

\D¿glucosamina " l-aminO-l—desoxi-D-frubtos

/Bsquema‘n9 17”‘ ¿w .v. 57x. É* k- n.

_ 62 ­

-culas de glucosamina conduciri'a a la formación dc la desoxifructosazina (LY‘XYIY)

(esquema no. 17). En cambio, la condensación de glucosamina con 1-amino-1­

-desoxi-fructosa, dari’a lugar a la formación del isómero 2,6 de la desoxifructo­

sazina, o sea la 2-(13-arabino-tetrahidroxibutil)-6—(IÏ-e_gigp-2,3,4-trihidroxibutil)­

¿pirazina (XC). Por posterior degradación térmica de las cadenas polihidroxiladas

de estos compuestos (LE-“’Z‘FIX)y (YC) se producirfan respectivamente la 2,5 y

la 2,6 dimetil-pirazina aisladas por Jezo. Esta interpretación de Jezo es análoga al

mecanismo propuesto por Kuhny col. (80) para la síntesis de la fructosazina

(LXE’LYVII)a partir de 1-amino-1-desoxi-fructosa (YCII)y de la desoxifructosazina

(LXI’XIX)a partir de glucosamina (XCIV)y que figura en los esquemas no. 18 y 19

respectivamente. SegúnKuhn, de la 1-amino-1-desoxi-fructosa (XCII)se formaría

iniCÍalmente la dihidropirazina (XCIII). que contiene dos grupos metilenos sobre

el anillo heteroci’clico y se deshidrogenari’a por acción del oxigeno atmosférico

dando la fructosazina (LT-CXVI) . En el caso de la glucosamina (YCIV) se forma­

ri’a la dihidropirazina (YCV)que no tiene grupos metilenos, sino dos hidrógenos

en sendos carbonos terciarios del heterociclo y de la cual se podri’aeliminar

facilmente una molécula de agua por un mecanismo análogo al de la crotonización

del acetaldol; el compuesto resultante (YCVI)se estabilizari’a por aromatización

del anillo heterociclico con formación de la desoxifructosazina (LXXXIX).El

curso diferente de ambas reacciones se puede atribuir a que, por razones estruc­

turales, la dihidropirazina (XCIII)serí’a más susceptible a una deshidrogenación

que a una deshidratación. En cambio la dihidropirazina (YCV), por su estrutura

"cuasi-aldólica" por el hidroxilo en posición upon respecto a la unión -(,ïNï

dari’a lugar a una deshidratación.

»"fl;“¡ iv

, Y H H OH- ‘ I

HOH C--—C—«C«C Y J OOH OH H\ '

H- C-.-NH O=O—H

t 2‘ T 1‘ ,1_ = __ _,Il y I ¿OO H21\OIH OHOH‘ CmaC —-CHZOH

\ ' g OH H H

D-glucosamina

H H H ’xÑHOH0-0.4300;/OHOHH H OHOH‘"

C -- C “C w CHZOHOH H H

(LXXXIX)

H ‘ ' ‘

z’l \\ H z

. O H H H H OHOH OHOH C+C-’O-—C -—— k «C WC —'O—OH OH _ s’ 2 OHOHH \N/‘ OHH H 2

. (XC)

_ _—_ \y_ I

H O O Hzl, 032

’H H OH ' ‘H OH OH ‘

HOH2C*C*C-'C/' ‘ \C.-«C—-C-—-CH2OHÏOH OH H OH H H ‘ '

\D-glucosamina

_ 6"; ­

-culas de glucosamina conducirí‘a a la formación dc la desoxifructosazina (LYYYIY)

(esquema no. 17). En cambio, la condensación de glucosamina con l-amino-l­

-desoxi-fructosa, dari’a lugar a la formación del isómero 2,6 de la desoxifructo­

sazina. o sea la 2-(13—arabino-tetrahidroxibutil)-6-(r-gigp-2. 3,4-trihidroxibutil)­

¿pirazina (XC). Por posterior degradación térmica de las cadenas polihidroxiladas

de estos compuestos (LJ-"’I‘FIX)y (YC) se producirfan respectivamente la 2,5 y

la 2,6 dimetil-pirazina aisladas por Jezo. Esta interpretación de Jezo es análoga al

mecanismo propuesto por Kuhny col. (80) para la síntesis de la fructosazina

(LXEÍYVII)a partir de 1-amino-l-desoxi-fructosa (YCII)y de la desoxifructosazina

(LXZ’XIX)a partir de glucosamina (XCIV) y que figura en los esquemas no. 18 y 19

respectivamente. SegúnKuhn, de la 1-amino-1-desoxi-fructosa (XCII)se formari’a

ÍflÍCÍalmente la dihidropirazina (XCIII), que contiene dos grupos metilenos sobre

el anillo heterociclico y se deshidrogenari’a por acción del oxígeno atmosférico

dando la fructosazina (LT-(XVI). En el caso de la glucosamina (YCIV) se forma­

ri’a la dihidropirazina (XCV)que no tiene grupos metilenos, sino dos hidrógenos

en sendos carbonos terciarios del heterociclo y de la cual se podria eliminar

facilmente una molécula de agua por un mecanismo análogo al de la crotonización

del acetaldol; el compuesto resultante (YCVI)se estabilizari’a por aromatización

del anillo heterociclico con formación de la desoxifructosazina (LXXXIX).El

curso diferente de ambas reacciones se puede atribuir a que, por razones estruc­

turales, la dihidropirazina (XCIII)sería más susceptible a una deshidrogenación

que a una deshidratación. En cambio la dihidropirazina (YCV), por su estrutura

"cuasi-aldólica" por el hidroxilo en posición rxkconrespecto a la unión -(.5Nï

dari’a lugar a una deshidratación.

H H OHHOHO-an -O ‘

2 OHOH:o H N-CH

2 l4.a O=O

2 2 OHOH '*Omega-OH OHOH H H 2

2

(XCII)Í

O " 2 Hzo kJi Í

H H OH T

HOHZO-O-O- C¿f \H2OH OH H I H OH OH n ,

, H2R / "cmo-O —-CHOH\ y' \H ‘ OH H H 2

(XCIII)

H H OH NHOH C-C-——C-——C—-/’“ H

OH OH H l H OH OH\ l/ — O ——O- O -—CH2OH

N OH H H

(mamá) ¿l I

HBSqueman° 18'y gr

, H H OH

HMÏC-C-CtC‘2 O OH OH H‘\\

H-O-HH2 ‘ O=C—Hi v 1 r

H—O=O H2N—C—H /H’ OH OH, _­

« (XCIV) \\\ O—-O-O-—OH20H",_ i OH H H

, \— 2 HZO

H L HO H . N

HOH2O——-O-.»O-u-O«- QQ>+J1OH OH H H OH OH

,\\ —C«4—*C*®HOHH Ï\\N»<g OH H H 2

(XCV)

ly I

— IIZO

. 4/

H. H N x

HOHZC--C--mC«—-C==f// <:\,H

OH OH H g H OH OHH- ._O—O—O—JHMÏ\\N/H OHH 2

(XCVI)

' H H H N

m%n*o—c_ofl//N\ _\ OH OH H H OH OH“0*chanMÏ

\\ÉN‘//' OH H. H 2

(LXXXIX)

,Esquema n° 19¡ /x‘

._ 66 _

La formación de la fructosazina (LXXVI) por tratamiento de la D-glucosamina

con metanol-metóxido de sodio en corriente de aire y a 400 (79), podria explicarse

mediante la deshidrogenación de 1a dihidropirazina (YCV), por acción del oxigeno del

aire.

Para demostrar la estructura de la desoxifrutosazina (LYYXIX),Kuhny col. (80)

la sometieron a una hidrogenación catali'tica y posterior hidrólisis ácida (esquema

no.20), con lo cual pudieron aislar el clorhidrato de 1-amino-1-desoxi-fructosa e

identificaron la 1-amino-1, 3-didesoxi-fructosa (XCVII)como p-nitro-fenilo sazona.

Además obtuvieron el ácido 2,5-pirazindicarboxi’lico por oxidación de la desoxifruc­

tosazina con agua oxigenada en medio alcalino, determinando de este modo la posición

de los sustituyentes en el núcleo pirazihico.

* ‘C*R x ‘ —C—R V—R\N/OH “ii/OH Hg\NáóH

(LXXXÏX) /H20/:+:: L".... ._ : í...

H DJ R (¡3 o + H2} CH25* ——C o — oa- OH’ __*LT :

‘ H 2 126 mig o o I?\C—R

VI i(XC I) OH

Esquema no 2 o

Por tratamiento de la sacarosa con metilamin? , en las mismas condiciones em­

pleadas en la reacción con amoniaco, Jez( (33) encontró que se formaban imidazolinas

y dihidropirazinas N-sustituidas.

-67­n

¡xplicacioncs de la reacción del amoniaco con hidratos de carbono

La condensación de hidratos de carbono con amoniaco es una reacción de interés

industrial para el aprovechamiento de melazas (84); con ella se pretende establecer

una posible ruta para obtener un sustituto económico de las proteinas en alimentos

para animales. En las primeras experiencias se obtuvieron productos con 2,5% de N,

pero hidrolizando las melazas antes del tratamiento con amoniaco se consiguió elevar

el contenido de N al 4-6 %.

Grimmett y col. (85) emplearon la reacción entre azúcares y amoniaco para la

microdeterminación de la posición de la unión glicosidica entre las hexosas de un

disacárido, calentando cn tubo cerrado a 110° 0, 1-1 mg del disacárido con 0,1 ml de

amoniaco acuoso al 25 %. De esta manera se pueden diferenciar disacáridos con unio-.­

ones glicosidicas 1-2, 1-3, 1-5, y 1-6, ya que cada uno c‘eestos tipos de unión glicosi­

dica conduce a la formación ae ciertos imidazoles. los cuales pueden ser identificados

por cromatografia en papel, cuyos Í‘f respecto del imidazol figuran en la tabla no.6.

_Tabla no.6

Unión En:

1-2 - — ­

1-3 0,63 (F) - 1.28 (lu)

1-4 - 0.74 (F) 1,28 (D)

1-6 — — 1,28 (F)

(F) = fuerte, (M) = mediano, (D) = débil

Los datos de FIN corresponden a cromatogramas sobre papel Whatman 3MM

desarrollados con butanol-acético-agua 4:1:1 y revelados con el reactivo de Pauly.

-68­

DESCRIPCIONES DE NUESTRAS EXPERIENCIAS E INTERPRETA CION DE LOSRESULTADOS

ggesis de los ésteres ni_croti'nicosde monosacáridgi

Los ésteres nicotfnicos dc monosacáridos se obtuvieron por acilación diree a de

los correspondientes azúcares con una mezcla de clorhidrato de cloruro de nieotinilo

y piridina en medio clorofórmico y se sintetizaron los siguientes compuestos: penta­

-0—nicotinil-D-glucosa (XCVIII), penta-O-nicotinil-D-manosa (XCIX), penta-O-nicoti­

-ni1-D-ga1actosa(C), tetra-O-nicotinil-L-arabinosa (CI)y tetra-O-nicotinil-D-xilosa

(CII).

Ax . o

‘H ' COC]. - .d- .V H/H \ O .1- + (<3 ----— - CvHO f OH xN‘ C013H C-O H H/

OH oa ¡fi

._\ f 1

R: «CH2OHhexosas É I kWh."R: H pentosas

.Tmed

o .a¡ .

R’: —CH2—O—Ó—<Ó hexosas

Ré H pentosas

La penta-O-nicotinil-D-glucosa había sido descripta por Charonnat y col. (9)

como una sustancia de p.f. 168o quienes dieron solamente su análisis de N. Nosotros

efectuamos la síntesis de esta sustancia modificando las condiciones de purificación

y recristalización publicadas, con lo que se obtuvo, con un rendimiento del 80%, un1‘3

producto cristalino de p.f. 188-1890, Lbd + 133°(cloroformo). La penta-O-nicotinil­T)

-D-galactosa, que habia sido descripta como un jarabe por Strong y col. (8), se

-69­

preparó, eon un- rendimiento del 88 %, como un sólido amorfo que fundió entre 90° y

105° y presentó un[CX]:+172°(cloroformo). El resto de los ésteres nicotfnicos cuya

preparación se describe en esta tesis. no han sido descriptos en la literatura.

Amonolisis de los ésteres nicotínicos. ­

Se estudió luego la reacción de amonolisis. con amoniaco acuoso al 25%, de los

ésteres nicotfnicos sintetizados, aislándose por cristalización el producto de mayor

rendimiento de cada reacción, mientras que los demás productos fueron separados

por cromatografía en columna de celulosa. I-‘arasintetizar los derivados acetilados

de los productos obtenidos en las reacciones de amonolisis se empleó una mezcla de

anhídrido acético y piridina.

De la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-g1ucosa (YCVIII)se aislaron N-nico­

-tinil-I -glucofuranosilamina (CIII)(16%), 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-glucitol

(CIV) (3,8%) y 2-(D-Mng-tetrahidroxibutil)—6-(D- e_ri_t_,1;<_)-2,3,4-trihidroxibutll)­

-—pirazina(XC) (7,6%). De la N-nicotinil-D-glucofuranosilamina se preparó su tetra­

acetato (CV)y se demostró su estructura furanósica por oxidación con metaperyodato

de sodio. Del 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-glucitol se preparó su pentaacetato

(CVI)y se demostró su estrutura de cadena abierta por la presencia de cinco hidro­

xilos vecinos en su molécula, determinados por oxidación con metaperyodato de sodio.

Para demostrar la estructura de la 2-(D-alapgig-tetrahidroxibutil)-6-(D-ïgro-2, 3,

4-trihidroxibutil)-pirazina, se estableció primero la ubicación de los sustituyentes

en el anillo pirazi'nico por oxidación con agua oxigenada, obteniéndose el ácido 2,6­

pirazindicarboxi'lico (CVII), que se identificó mediante la preparación de su éster

metflico (CVIII)por tratamiento con diazometano en medio etéreo. Luego se determi­

nó el número y la ubicación de los grupos hidroxilos en las cadenas laterales por

-70­

oxidación con metaperyodato de sodio y por su espectro de R. M.N. Además se

preparó su derivado heptaacetllado (CIX), cuyo espectro de R M N confirmó la

estructura propuesta.

0 H

. . H OH H/Amonollsstde la 1...4 openta-O-nicotinil-D-glucosa H OH xN

4 (CIII)

CH2OR H4;(lasO

HfH HPC-OH

fi\ i IH.OR + NTÏ ————;> HO_¿_HRO OR y 3 tY———— H-C-OH

h’ OR nH—O—OH

(XCVIII) aCH OH

2

0 “N CIVR: —C—/ \. \ ( )

/'N\'H H H I<:::) i H OH OHHüïC-C-C‘C—\\ —C-C—O-CHOH

2 OH.OH H N //’ OH H H 2

(XC)

-71._

Be la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-manosa (XCIX)se obtuvieron 1, l-bis

(nicotinamido)-1-desoxi-D-manitol (CX)(22,5%)y 2-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-6­

-(D—eritro-2, 3,4-trihidroxibutil)—pirazina (XC) (3, 8%), idéntica a la aislada en la

amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-glucosa. Se demostró la estructura de cadena

abierta del 1, 1-bis(nicotinamido)—1-desoxi-D-manitol por oxidación con metaperyodato

de sodio y se sintetizó su derivado pentaacetilado (CW). ­

HO-C-HI

C H OR HO“C’“

2 ‘”’ É OH,_— /' H, — ’o\ / _R.H > H.0H + NH3 h-Q-OHI

RO OR RO/ CHZOH

H

(CX)(XCIX) \\

o w*¿

H: —Ó—<4' u Í

H H H (Ïfixw H OH 91/ —C—ó_q—CHOHHM1C_Q—Ó—Qr\x«

2 OH OH H \‘N

-72­

Comoproductos de la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-galactosa (C) se aisla­

ron 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi—D-galactitol (CXII)(28%)y N-nicotlnil-D-galacto­

-furanorflamina (CXIII)(1,4%). El 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-galactltol se

oxidó con metaperyodato de sodio para demostrar su estructura, la que resultó acícli­

ca y se acetiló para obtener su derivado pentaacetilado (CÉCIV).La estructura {uranósi­

2ca de la N-nicotinil-D a ‘ ‘ ¡fmaut, " se demostró por oxidación con metaperyo­

dato de sodio.

H o ¡“-H7:- L'!-Lo (N exo» 2H-C-OH

l

HO—C*Hl

hOwC—H_ l

/7 H-C-OH¡

ChQOR CHZOE

RO H O\\ H.OR + NH (CXII)OR H// 3

H 1'

H OR

(C)

\ k-Lh] ',/\\¿»4,H os. N

h-C-Oh (CXIII)CH On

-73­

De la amonolisis de la tetra-O-nicotinil-L-arabinosa (CI) se aislaron 1,1-bis

(niéotinamidokl-desoxi-L-arabinitol (CXV)(26%)y N-nicotinil-L-arabinosilamina

(CXVI) (3, 15%). Se demostró la estructura de cadena abierta del 1, l-bis(nicotinamido)

-1-desoxi-L-arabinitol por oxidación con metaperyodato de sodio y se preparó su

derivado tetraacetílado (CXVII).La estructura furanósica de la N-nicotinll--L-arabi­

4nofuranosilamina se demostró por oxidación con metaperyodato de sodio y por la

obtendión de su derivado triacetilado (CXVIII).

4 HO-C-HIoa Oh

H 2

RO/L O.

¡K ‘ H.OR + NH3H OR a x­

OR

(CI)

H .1.

O //‘ ’

k 1*H OH 9“

CHZOrÏ

-74­

El 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-xilitol (CXIY)se obtuvo con un rendimiento

del 13,2 %de la amonolisis de la penta-o-nicotinll-D-xflosa (CII). Suestructura de

cadena abierta se demóstró por oxidación con metaperyodato de sodio y se preparó

su tetraacetato (CXX).

H O f"

H4}kÑ’ó O )2l

H9C—OH1

> HO-C-h‘I

H-C-OHi0H20n

(CXIX)

-75­

Qemostracíón de las estructuras ds los 1,1-bis(nicot inamido2-1-dqsoxi-alditoles y

las N-nicotínil-glicosilaminas por oxidación con metapgryodfio de sodio

Para la determinación de las estructuras de los 1,1-bis(nicotinamido)—l-desoxi­

-alditoles aislados en las reacciona-s de :tmonolisis se empleó la reacción de oxidación

con metaperyodato de sodio. Para los 1,1-bis(nicotinamido)—1-desoxi-hexitoles se

observó un consumo de 4 moles da metaperyodato de sodio con producción de 3 moles

de ácido fórmico y uno de formaldehído, lo cual indicó una estructura de cadena abier­

ta normal con un grupo alcohólico en cada uno de los carbones, con excepción del C-l.

H-C (NH—8—<3::2>)2H-(l3 —OH

H—(|3—OH

H-C|} —OH

H-C —OH

H2¿ -—OH

4 IOANa 3 HCOOH + H2C=O" 7

OH-F (NH-8-<É:áy92H-C-OH

l

H-C- H‘ ' IQ {o A 3 C=O

H_C_OH 3 ¿O4Irw N 2 I OOH + 12l W/— z

HZC OI

Se llegó a la misma conclusión al oxidar los 1, 1-bis(nicotinamido)—1-desoxi­

-pentioles, ya que estos compuestos consumieron 3 moles de metaperyodst o, con

formación de 2 moL-s de ácido fórmico y uno de formaldehído.

-75­

Los resultados obtenidos en las oxidaciones de las N-nicotinilglicosilaminas

(D-glucosil, D-galactosil, L-arabínosil) con metaperyodato de sodio, coincidieron

en los tres casos con los esperados para anillos furanósicos. En la oxidación de la

N-nicotinil-L-arabino-furanosilamina (CYV1) concumió un mol de metaperyodato

de sodio y no se detectó ácido fórmico ni formaldehído, lo cual permitió afirmar la

existencia de una estructura furanósica para esta sustancia.

4/0H/ n

; PLN-0:0

CHZOH

(CXVI)

En el esquema no. 21 figuran los pasos correspodientes a la oxidación y sobre­

oxidación de la N-nicotini-E—ga1actofuranosilamina (CXIII)con metaperyodato de

sodio. El consumo inicial de 2 moles de metaperyodato y la producción de un mol de

formaldehído corresponde a la ruptura de las uniones Cz--C3y C5-C6. Después de

20 minutos de reacción se inició la sobreoxidación para la que se emplearfa un mol

de metaperyodato en la hidroxilación del C-4 que estaria activado por la presencia

de dos carbonilos vecinos para dar (CXXI), el cual continuaría oxidandose con produc­

ción de la primera molécula de ácido fórmico y del éster (CXXII)que por hidrólisis

daría ácido glioxflico; este consumiria una nueva molécula de metaperyodato y se

formaría la segunda molécula de ácido fórmico. Otro camino posible contempla ladfaJQ'Cfih/o mesetaZ'co

formacióndelm porhidrólisisde(CXXI)y posterioroxidacióndel

mismo para consumir igual cantidad de metaperyodato y producir la misma cantidad

de ácido fórmico que en el camino anterior. Esta explicación, basada en la interpre­

-77­

+ HCOOH

COOH

H- :0

IO.p

CO + HCOOH

Esquema n° 21

IO

2 HCOOH + 002

-78­

tación dada por Cantley et al. (86)para la oxidación de alcoximalonaldehidos, lleva

a un consumo total de 5 moles de metaperyodato, formación de un mol de formaldehído

y 2 moles de ácido fórmico, cifras estas que coinciden con las observadas experimen­

talmente en la oxidación de la N-nicotinil-D o ‘ ‘ ¡fmaun " ' (CXIII).­

El mecanismo de la hidroxilación del carbono unido a dos grupos carbonilos no

ha sido demostrado aun (87). Bose et al. (88) supusieron que el aldehido malónico se

hidroxilaba a través de un intermediario ci’clicode su forma enólica con una molécula

de IO4' (CXXIII);este mecanismo no puede extenderse al ácido malónico ya que la

enolización no es el factor determinante, puesto que algunos compuestos que se

enolizan debilmente como el ácido malónico son rapidamente oxidados , mientras que

otros fuertemente enolizados como la acetilacetona, son dificilmente atacados.

i; ¿0:0H202»/"”C!3H (í? u > iiO-C-Ï‘ï

Joni /*Io3 Házo0*}

(CXXIII)

Hudson y Barker (89) estudiaron la oxidación del 1,4-anhidroalitol (CXXIV)con

metaperyodato de sodio y en base a los espectros U. V. , LR. y de R.M.N. del pro­

ducto formado después de haberse consumido los dos primeros moles de metaperyodato

de sodio (CXXV)(esquema no. 22), supusieron que antes de sufrir la etapa de sobre­

oxidación, el trialdehido (CXXV) adoptari’a la estructura cíclica (CXXVI);2(CXXVII).

Segúnestos autores, la hidroxilación del metilideno activado de (CXXV)se produciría

a través del compuesto cíclico (CXXVII)y seria análoga a la hidroxilación de una

-79­

CHZOHHO-C-H

O H _ OZCH O\ Tí2 104 ;>/// *

Ü H H H H t> H \\ H‘ O=CH Hc=o

OH OH

(CXXIV) (CXXV)

1,?

= _I O

O C‘íí/l \\=HHo/“\H HL:

o=o_H o=C_H 0‘\»//O ‘\\H —H+ \\//' ‘\JH

a ' 2 __ í 2 .

¡ Q- 3. i H;m x. Á

H’\\o,//\oï +H+ H'“\ o/// 0*( CXXVII) (CXXVI)

\\\íÏ44

O=C—H\/O \ HHo /1 '2Ho s‘ ‘,lï

TT/\”O/‘\O_(CXKVIIm)

¿squema 11° 22

: -80­

doble ligadura atilénica para dar (CXXVIII).A través de un intermediario análogo a

(CXXVI)se podria explicar también el consumo de peryodato y la formación de ácido

fórmico observado en la sobreoxidación de la N—nicotinil-D o ‘ ‘ -fu-mu " ’

(CXIII). En este caso la estructura del intermediario seri’a (CXXIX)y éste consumi­

ri’a 3 moles de metaperyodato y producía 2 moles de ácido fórmico en la sobreoxida­

ción (esquema no.23).

En la oxidación de la N-nicotinil-D-glucofuranosilamina (CIII) la unión C5-C5

sufre el primer ataque, ya que el consumo del primer mol de metaperyodatoóes

simultáneo con la aparición de un mol de formaldehído. Cuatro horas después se

consumió un segundo mol de metaperyodato sin aparición de cantidades apreciables

de ácido fórmico, lo cual corresponde a la oxidación de la unión 02-C3 y coincide

con el comportamiento esperado para un ciclo furanósico.

H_C=o l/o H

/H,N_o=oH /C o.'ó ó “N

-81...

H o O=CH .o HH.NHC=O 1) 2 Io" \/ /

OH H I y N 4 _, R/;::\ 2) Vlclac1on ‘ a, HH l .-—_——-—__——> H ‘

H- —0H í El o //W\OH\._,//N

¿ ' (CXÏÁIX)H OH _2 IO

(CXIII) 4

O=CH,..o H\l_/ \<

HO/¡ ‘ RHHO\‘ /

HO Ho H o lo Ho=ó| \,/ HZO \\/’ \./

Í r R < FO I r R + HCOOHHO\¡ , H * y ¡HH/\o/\0H H/\O/SOHI­\Ï)4

HOVH .

HCOOH / 5’ “H‘g i\R + co2AO=Cv / H-' —-\—ko. \

quuema n° 23

¿82’­

Demostración de la estructura de 2-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-6-(D—eritro-2, 3,4-r

-trihidrox1butfl)Lfiïf‘áïm‘a (XC)

,N/ \H H Ñ H QHQH

HOH?CwC-Q- 0- \._/ _o—c—c-CH20H‘ OH OELH N OHH H

(XC)

La fórmula molecular (C12H20N207),calculada en base al análisis elemental de

este compuesto, de su derivado acetilado y al peso molecular de éste último, indicó

la posible condensación de dos moléculas de monosacáridos para su formación, ya que

contiene 12 átomos de carbono. El n ¡emo compuesto se aisló en 1a amonollsis de

la penta-O-nicotinil-D-manosa, hecho que sugirió la participación del carbono-2 de

ambos monosacáridos en la condensación que produciría un anillo pirazi'nico. Estas

suposiciones se vieron confirmadas en el espectro ultravioleta que presentó un

¿inax=274my, correspodiente a una transición Way)“ en las pirazinas (90)y coinci­

dente con la banda de absorción observada en el espectro de la desoxifructosazina*

(LXXXDï)y con el valor publicado para la fructosazina (LX‘»’VI ) por Fujii y col.(79).

* Con el fin de comparar las propiedades químicas y físicas de (XC) se llevó a cabo

la síntesis de su isómero 2, 5 o sea la dcsoxifructosazina (LXXXIX)según la técnica

descripta por Kuhny col. (80).

¿.5 . A A ' A l A

¿50 ' ¿60 270 ¿80‘ 270 ¿oo ¿{OA/nf!

Eapectroa de absorciónegl ultravioleta2-(D-arabino-tetrahidroxi butil )-6- (D-eritro­2,3,4-trihidroxibutil)-pirazina a2-(D-arabino-tetrahídroxibutil)-51-(D-eritro­2, 3,4-trihidroxibutil)—pirazinag —_ . . .. _ácido 2, 6-pi’razindicarboxí11cc: - - - ooooo- ovo

-84­

Para determinar la posición de los sustituyentes sobre el anillo pirazi’nico se

oxidó este compuesto con agua oxigenada en medio alcalino empleando, ¿nn ligeras

modificaciones, el método descripto por Kuhny col. (80). Si se usa permanganato de

potasio como agente oxidante los rendimientos son inferiores al 5%(91). Mediante

el procedimiento antes mencionado se obtuvo el ácido 2, 6-pirazindicarboxfltco (CVII)

de p.f. 224-2250, ya descripto en la literatura (92), el que presentó la misma banda

de obsorción en el ultravioleta que (XC)y reaccionó con Fe” para dar un complejo

de color rojo-violado, característico de los ácidos pirazindicarboxi'licos (93). A partir

de éste ácido y por reacción con diazometano se preparó la 2,6-dicarbometoxipirazina

(CVIII)de p.f. 126-1270, la que a pesar de superar en 9Oel valor publicado por

Magen y Belends (92) indicó indudablemente una sustitución 2,6, ya que las 2, 3 y

2,5 dicarbometoxipirazinas funden a 560w.) y 1700 (95) respectivamente, temperatu­

ras que difieren notablemente del resultado obtenido por nosotros.

N N/ \ HO //*\\,t T 2 2 a“

h LO fh "‘ ’ Ji_ _ i-C-B OH _' _R C \(//, _ hOOC «\\ ,/ coonli -4

(X0) (CVII)

' H NOH OH C 2

:-C—C_CH H2 a.

H H 1\1‘¡Ü— ‘H

CHBOOC \ COOC-3, ._.I/

TT v,

(CVIII)

\

HuH

HaH¿C—C-C—C

OHOHH

HOHOH-C-C-C-CH¿OH

OHHH

(xc)

MW

1‘..

85

g

q.,

ou

«-3

.3

qfl

._.3

EspectrodenMNdela2-(D-arabino-tetrahidrox1but11)­6-(D-er1tro-2,3,4-tr1h1droxibu‘ttl)-p1razina.—

HHHN

HogC-ïc-C-\

oHH HouOH

-C-C-C-CH¿0H

¡1OHHH

(LXXXIX)

EspectrodeRXNdela2-(D-arab1no-tr1h1dronbutil)­5-(D-er1tro-2 ,3,4-tz-1n1dronbut11')-p1raz1na.­

86

Y

-37­

El espectro de R M N de (XC) (pag.85) coincidió casi exactamente con el de su

isómero, la dcsoxifructosazina (LXXXIX)(pag.86) , cuya estrutura fué demostrada

por Kuhny col. (80), en ambos casos se observaron los protones aromáticos del

anillo pirazi'nico («S8,61 y 5 8,52) para (XC), el pm tón unido al C-l' de una cadena

lateral (.5 5.20) y los protones metilénicos del C-l" ( ,6 3,11) de la otra cadena

lateral, cuyos valores de S coinciden con los tabulados respectivamente para

(-C 1;]. OH—)y (-C ¿'12-) unidos a un resto aromático.

Interpretación de los espectros de R M N de la desoxifructosazina (LXXXIX)y de la

¡(D-arabino -tetrahidroxibutil)—6-(D—eritro-2,3,4-tr1hidroxibutil)-pirazina (XC)

(LXXXIX) (XC)

l

ó no. prot . posición ¡S no. prot . posición

8,80 (s) 8,67(s)2 c-3 y C-6 2 C-3 y c-s

8,62 (s) y 8,52(s)

5,22 (s) 1 c-1' 5,20(s) 1' C-l’

3,85 (m) 8 c-2: c-2" 3,82(m) s 0-2: c-2"

C-3; 0-3" c-3: 0-3"

0-4: C-4” C-4,’ C-4"

3,10 (m) 2 0-1" 3,11(m) 2 c-1"

Por tratamiento de (XC)con una mezcla de anhídrido de acético y piridina se

preparó su derivado totalmente acetilado, la i-(D-arabino-tetraacetoxibutil)-6-(D­

—eritro-2,3,4-triacetoxibutil)-pirazina (CIX)y se determinó su peso molecular por

-83­

el método de Rast, dando un valor de 620_+40 que permitió calcular la fórmula mole

cular del compuesto (XC). También se analizó el espectro de F: M N de dicho deriva­

do acetilado (pag. 90 y 91 ) donde se observaron valores ¡Spara los protones uni­

dos a los carbonos 1',‘2', 3’, 3" , 4', y 4" coincidentes Conlos valores publicados

para los correspondientes protones de las cadenas laterales de los derivados acetila­

dos de la fructosazina (CXXXI)(79) y de la 2-(tetrahidroxibutil)-quinoxalina (CXXX)

(96), presentando además un doblete correspodiente a dos protones metilénicos del

C-1" (6 3,2) unido a un resto aromático. El deSplazamiento presentado por la

señal del protón ubicado en el C-1 'respecto del observado para el mismo protón en

el compuesto desacetilado (4 S Mi ) coincide con el desplazamiento generalmente

observado entre alcoholes secundarios libres y sus derivados acetilados.

Para confirmar los resultadcs de los espectros de F. M N respecto de la ubica­

ción de los hidroxilos sobre las cadenas laterales y la posición del grupo metileno, se

estudió la oxidación de (XC)con metaperyodato de sodio, observandose un consumo

inicial de 5 moles de metaperyodato, formación de 3 moles de ácido fórmico y dos

moles de formaldehído. Estos valores se mantuvieron constantes durante las primeras

cinco horas de oxidación e indicaron la presencia de dos grupos alcohólicos primarios

acompañados por dos alcoholes secundarios en una cadena lateral y tres en la otra.

Posteriormente se consumieron dos moles más de metaperyodato y se formó un

nuevo mol de ácido fórmico; esto correspondería a la introducción de un grupo OH

en el metileno activado de (CXXXII)para formar el hidroxialdehido (CXXXIII)y pos­

terior ruptura de la unión C-C para dar el dialdehido (CXXXIV)(esquema no. 24).

Con el fi'n de comparar los resultados obtenidos en la oxidación de (XC) eon

metaperyodato de sodio se llevó a cabo la oxidación de su isómero 2,5 o sea la(cont.pag.92)

’If 1 2 H20=O

H H :K\*J H +/O=N"-C-* ' -C=O 3 HCOOH

V H \N

(CXXXII)

i

IO Na4

J/

//HN.\\]H OH¡(:::); H_ _ _ z_ =

0-o C \\\N //, c oH

(CXXXIII)

IO4Na

4/¿N­

H (z:::> H + HCOOHO= —1 -c=o\\‘N

(CXXXIV)

Esquema no 24

90

-'Bw=u1=d-(Innthozooam—t‘í‘z-onï-Io-a)-9'(umrxozomzoz-onqua-q)—ga1;epngaap(mundi:

(mm0'0':Q'S0'9bz0‘8osfiwvII¡UII'll!IvrrñchvyvV¡yyny+yuuv¡rïyy[v.¡.VÏT..v'vv]—v—rvv¡llvíl

(xra)

HH’voNH’uo’oo

’vo’HJ-a->—a-/aaa-fm

’uo’voHHun

\N

-91..

Comparación del espectro de R M N de la 2-(D-arabino-tetraacetoxibutil)-6-(D­

-eritro -2, 3,4—triacetoxibutil)—pirazina(CIX)con los publicados para la 2-(D-arabíno­

-tetraacetoxibutil)-quinoxalina (CXXX)(96)para la 2, 5-bis(D-arabino-tetraacetoxibu­

-tíl)-pirazina (CXXXI)(79).

CXXX CXXXI CIX

I Mo , .#osúcio‘n ,5 baby“; 'SPOSICHSH

C-l' 6,42 (d) 6,23 (S) 6,17 (d) 1 C-l'

0-2" 5,86 (c) 5,73 (d) 5,75 (rn) 1 C-2'

c-3' 5,50 (m) 5,37 (m) 5,40 (m) 3 0-2", 3'y 3"

C-4' 4,34 (m) 4,25 (m) 4,33 (m) 4 C-4'y 4"

3,20 (d) 2 C-l” (metileno)

8,42 (s) 2 0-3 y 5

Las señales entre 1,96 y 2,25 corresponden

CAC N alos CH -de los acetatos

ACOHZC-q- qaq- 3O O H B'ï (RACOAC

AC AC —c—C45405120MÓAcÍ-i É /

(CXXXI) Ac ’5 51 o,¿comc- C-C-C­

¿ i ío o HAc AC

N x

AcAc¿(:0ch - ó —q —<?—k {/2 —<;-<; - g -CH20Ao

ó o H N o H 'nAc Ac Ac

(CIX)

-92­

desoxifructosazina (LXXXI‘X).En este caso se observaron los mismos valores totales

para el consumo de metaperyodato (7 moles), formación de formaldehído (2 moles)

y ácido fórmico (4 moles) pero en un lapso de tiempo cuatro veces menor. El aumen­

to de la velocidad de oxidación podria atribuirse, en parte, a la presencia de un

grupo carbonilo en posición para, cuyo efecto mesomérico aumentaría la reactividad

del metileno activado de (CXXXV)para la reacción de hidroxilación. El,mecanismo

de la etapa posterior, es decir la oxidación del hidroxialdehido, aún no está aclarado

totalmente .

H—C=Ol

H2C\® Nik!\) _N üfi-OO

( CXXXV)

-92­

Formaciónde la 2-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-6-(D-eritro-2, 3,4-trihidroxibutil)­

-pirazina (XC)en la reacción de amonolisis de la penta-Onicotinil-D-glucosa y de

la penta-O-nicotinil-D-manosa

Para explicar la formación del heterociclo pirazinico (XC)aislado en la reacción

de amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-glucosa se puede suponer que la glucosa,

liberada por la amonolisis de todos los restos nicotinilo, estaria, en el medio amonia­

cal, en equilibrio con D-fructosa a través de una transformación de Lobry de Bruyn­

Alberda van Ekenstein. Al reaccionar con amoniaco, la glucosa y la fructosa forma­

ri’anrespectivamente D-glucosilamina y D-fructosilamina; la glucosilamina dari’a

1-amino-1-desoxi-fructosa por una transposición de Amadori, mientras que la

fructosilamina, por una transposición de Heyns pasaría a glucosmnina (esquema no.

25). La condensación de la D-glucosamina con 1-amino-1-desoxi-D-fructosa

dari’alugar a la formaciónde la 2-(D-M-tetrahidroxibutilkG-(D-giigc¿-2,3,4­

-trihidroxibutil)- pirazina (XC)según se formula en el esquema no.2-'. Idéntico

razonamiento puede extenderse al monosacárido D-manosa, ya que si sufre el mismo

tipo de transformaciones que las propuestas para la D-glucosa podri’aconducir a la

formación de D-glucosamina y 1-amino-1-dcsoxi-D-fructosa; lo cual explicaría la

formación del mismo compuesto heteroci’clico (XC)en la amonolisis de la penta-O­

-nicotinil-D-manosa. El esquema propuesto está basado en la interpretación dada

por Jezo (82) para explicar la formación de la 2. 6-dimetilpirazina en la reacción de

amonolisis de la sacarosa ( pag/32 ).

La presencia de glucosilamina en la reacción de amonolisis de ésteres de mono­

sacáridos ya fué mencionada por Deulofeuy Deferrari (17), quienes la propusieron

como intermediaria para explicar la formación de digl ucosilamina, que fué aislada

-94­

CHZOH

H o

H y ————.A .———BO OH Ji OH

H OH C ­D-fructosa HZOH

D-glucosilaminaD-fructosilamina

1

Transpos. Transpos.de Amadori de Heyns

J, @

H2%—NH2 n-?=OC=O H-C-NH. 2

BO-C-H BO-C-HI l

H-C-OH H-C-OHl

h-C-OL h-C-OH_' _¡.h2C—OH h2C—Oh

l-amino-l-de50xi— D-clucosaminaD-fruetosa o

Esquema nO 25

-95­

H—C=O H N-CH2 i 2

H—¿—NH2 O=CH H Oy OHOH

HOH2C-C-CwC‘ C-C-C-CHZOHOH OH H OH H H

D-glucosamina l-amino-l-desoxi-D-fructosa

—2 HZO

J,/N‘\

H 1/] H2H H OH H OH OH

HOHZCnC-C—C»-— ‘/’O—C-C-CH20HOH OH H F -N OH H H

(CXXXVI)

l

-H20

J,

//'N‘\\ TH / ‘h,H H g H OH OH

HOHZC-CT-C:C= ¿A-C-C-OT-OHQOHOH Oh H N OH H H

(CXXXVII)

N/H H H H OH OH '

HOHZC-C—-C- C- -C- C -C-CH2OHOH OH H N OH H

(XC)

Esquema no 26

-95­

como octaacetato en la reaccion de amonolisis de la penta-O-acetil-D-glucosa.

Además , en el mecanismo propuesto para la migración de acilos por Deulofeu

y col. (23) (pag. 13 ) se postula un intermediario de tipo imonio (XIHXII) a partir del

cual se podri’aformar el producto r‘eAmadori, es decir la 1-amino-1-desoxi-D-fruc­

-tx>sapor pérdida de un protón del C-2 y posterior tautomerización (esquema no. 97);

de esta manera uno de los precursores del heterociclo pirazfniCo (XC) se produciría

a través del mismo intermediario que daria origen a los productos de migracion de

acilos.

En el primer paso de la condensación, la D-glucosamina con 1-amino-1-desoxi­

-D-fructosa formarfan la dihidropirazina (CXXXVI)(esquema no. 96 la cual se (les­

hidratari’a eliminando una molécula de agua, por un mecanismo análogo a la crotoni­

zación del acetaldol, perdiendo un protón del carbono terciario del heterociclo y un

hidroxilo de su carbono vecino de la cadena lateral; finalmen te, el intermediario

(CXXXVII)se estabilizari’a por aromatización del anillo heteroci’clico para dar origen

a la 2-(D-arabino-tctrahidroxibutil)-6-(D-flg-2, 3,4-trihidroxibutil)-pirazina (XC).

La formación del heterociclo pirazi’nico (XC)podría explicarse también como

el resultado de la condensación de la 3-desoxi-D-glucosona (CXXXVIII)con la l-amino­

-1-desoxi-D—glucosamina (CXXXIX)(esquema no.2ts). La 3-desoxi-D-g1ucosona se

podria formar a partir c‘elintermediario (XI---Xl li) propuesto para la migración de

acilos según se puede ver en el esquema no. 3, y siguiendo el mecanismo indicado

en el esquema no. 11 para la formación de 3-desoxiosonas catalizada por aminas.

La 1-amino-1-desoxi-D-gluCosamina podria originarse por reacción entre la D-gluco­

samina y el amoniaco y a su vez la D-glucosamina se produciría por una tranSposición

de Heyns de la D-fructosilamina según cl esquema no. 35.

HI

+ C-NH2

H-C -OH

(XI)

H

i

th—NH

l

. II-C —OH ya V

l

l .

H—C—O#a

O

H

H-ï-NfigC:i

Amonolisis de

ac1los C3—06

l-amino-l-desoxi­fructosa

H H

HOHZC--C—Cnc' I HO/xH’ OHOHH '\ l

(CXXXVIÏI) —2 HZO (CXXXIX)fi H y//.N\\Ú/,o‘\.//H

I > // e '\OHOH« H H H OH2HOHC'C“n“C'"\ /.\

, OHOHH \N/Ht “1/ \ HHO“H

/ +j50

/HfOH

H H H H OHOH

HMECMC—C;C_¿.\ [._C‘C,C_flHáüOH OH H H OH H H

' t

._ LI-20

V

H Í 1 . H OHOHHM5C-C-C-*C*' —O-O«O-OH¿m

OH OH H OH H H

(XC)

¿Squema n° 28

Efecto del grugo nicotinilo en la reacción de amonolisis

Según Ingold (97), el efecto de los sustituyentes sobre el núcleo aromático en la

velocidadde formaciónde amidaspor amonolisisde esteres del tipo ©-C0.0R

es consistente con mecanismo del tipo BACZ(*) y por lo tanto los sustituyentes que

provoquen una disminución de la densidad electró nica en el carbono carboni'lico acele­

rarán la reacción, correspodiendo un efecto opuesto para aquellos que aumenten la

densidad electrónica en dicho carbono.

OR OR ORt + ' ,_ l _

H N: + C=O H N-O-O H N- C -O3 1 3 _¡ 2 g + H+> /'\ >@<:©

H2N— c=o

ROH + ÓÍV

En concordancia con lo expuesto, Grovin (98) encontró el siguiente orden de

reactividad para algunos sustituyentes del núcleo aromático en la reacción de ameno­

(*) hidrólisis básica bimolecular con ruptura aciloaoxi’geno

lisis del benzoatodc etilo: p-NOZ) m-Noz) p-Mc ) p-OMc7 p-NH2> p-0_

Estos resultados concuerdan con los encontrados en la hidrólisis alcalina de

esteres por proceder ambas reacciones a través de mecanismos análogos (BACZ),

pudiendose predecir entonces, el efecto de la sustitución de un -C H: del anillo

aromático por un -N=, en la reacción de amonolisis de (:steres, es decir pasar de

1'1amonolisis de los benzoatos a la de los nicotinatos, en base a los resultados encon­

trados para la hidrólisis de éstos últimos.

Falkner y Harrison (99) estudiaron la hidrólisis alcalina de las 2,3 y 4 carbetoxi

piridinas encontrando que la velocidad dc hidrólisis alcalina del nicotinato de etilo es

40 veces mayor que la del benzoato de etilo, lo cual fue atribuido a la disminución de

densidad electrónica que produce la introducción de un átomo de N en el núcleo aro­

mático.

Tabla no. 7

k (1. mol"1 . seg.'1 )2-carbetoxipiridina 0, 065

3- " 0, 038

4- " 0,20

benzoato de etilo 0, 00093

El orden de reactividad señalado cn la tabla no.7,4 7 2 y 3 , cs inverso al

orden de densidad electrónica 77",dc cada carbono del núcleo piridi’nico calculado

por Languet-Higgins y Coulson (100) empleando cl método de los orbitales molecula­

res.

O 822

o 0,947v/N

.- 101:­

Estos resultados permiten suponer que la eliminación de restos nicotinilo como

nicotinamida en la amonolisis de éste-res nicotinicos de monosacáridos, reacción que

compite con la migración de acilos hacia el N del C-l, es más veloz que la formación

de benzamida a partir de benzoatos de monosacáridos. Como consecuencia de ésto se

producirá una mayor eliminación de restos acilo para formar amida en los nicotinatos

respecto de los benzoatos, y esto seria cl factor determinante de la disminución de

ios rendimientos de los productos de migración de acilos, observados en la mayoria

de los casos al pasar de los benzoatos a los niCotinatos de monosacáridos, tal como

puede apreciarse en la tabla no. 8.

Este hecho puede interpretarse como se ha expuesto, ya que no hay diferencias

en el volumen de los sustituyentes en cuestión.

Tabla no . 8

Ester Rendimiento %de 1, 1-bis(acflamido)-1-desoxi-alditol

penta-O-benzoil-D-gluco sa 19, 4

penta-O-nicotinil-D-gluco sa 3, 8

penta-O-benzoil-D-galacto sa 35

penta-O-niCotinil-D-ga1acto sa 28

penta-O-benzoil-D-manosa 20

penta-O-nicotinil-D-mano sa 24, 2

tetra-O-benzoil-D-xilo sa 30, 1

tetra-O-nicotinil-D-xilo sa 13, 2

tetra-O-benzo il- L-arabino sa 35,6

tetra-O-nicotinil- L-arabinosa 28

-102—

Es importante hacer notar que los datos de los rendimientos de 1, 1-bis(benza­

mido)-1-desoxi—alditoles corresponden a la amonolisis de benzoatos en amoniaco

metanólico, mientras que para los nicotinatos se empleó amoniaco acuoso. El empleo

de agua como solvente para la reacción de amonólisis deberia producir un aumento

del rendimiento dc 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-alditoles, ya que Deferrari y

Cadenas (26) demostraron que los rendimientos de los productos de migración aumen­

tan al usar agua en vez de metanol, dado que en el segundo caso está presente el ión

CH30-, nucleófilo más fuerte que el OH- y que determina la eliminación de los restos

benzoilo por transesterificación con el metanol del medio formando benzoato de meti­

lo. Esto confirma el predominio de la influencia del grupo nicotinilo en la eliminación

del mismo como nicotinamida, sustrayendolo de esta manera a la posibilidad de inter­

venir en la reacción de migracion de acilos que Conduce a los 1,1-bis(nicotinamido)­

-1-desoxi—a.lditoles. ­

Formación de ácido nicotinico en la reacción de amonoiisis

Cuandose somete un éster a la reaccion amonolisis en un solvente acuoso,

es sabido que la formación de amida esta acompañada por una apreciable hidrólisis

del éster (101), (102), pues a posar de ser un nucleñfilo más debil que el amoniaco,

el agua está presente en gran exceso. El ácido nicotinico aislado en las reacciones de

amonolisis de los ésteres nicotiniCos de monosacáridos se originaria como producto

de la hidrólisis del éster, ya que ul nicotinato de amonio, formado en el medio amonia­

cal se hidrolizaria facilmente para ponerse en equilibrio con amoniaco y ácido nico­

tiniCo libre. Este equilibrio se :ïesplazaria totalmente hacia la formación de ácido

nicotinico durante la eliminación del amoniaco al evaporar a presión reducida.

COO- ÏÏ

Ï? IN/ 3

- 103­

PARTE EXPERIMENTA L

Los puntos de fusión no estan Corregidos. Para las cromatografias sobre papel

se utilizó papel Whatman no. 1 y para cromatografía en columna, celulosa S & S no.

123, empleando los siguientes solventes: A: butanol-etanol-agua (5:124v/v. , capa

superior); B2butanol-agua (100215v./v.); Czbutanol-etanol-agua (10:1:2 v./v.); D:

butanol-etanol-agua (102_424v./v.); Ezacetato de ctilo-piridina-agua-bencero (5232321

v./v. capa superior).

Comoreveladores se usaron los siguientes reactivos: anitrato de plata-amonia­

co-metóxido de sodio (103); G2ftalato ácido de anilina (104) H: ninhidrina al 0,1 % en

butanol saturado con agua.

El secado en desecador a presión reducida se hizo siempre sobre ácido sulfúri­

co e hidróxido de sodio.

Oxidaciones con metapegodato de sodio: en un matraz aforado de 25 ml se colocó una

solución de metaperyodato de sodio 0,1 M (cuatro veces el consumo esperado), 10 ml

de agua destilada, 15-20 mg. de 1a sustancia a oxidar disreltos en 2 ml de agua des­

tilada y se completo con agua destilada hasta 25 ml. Luego se termostatizo a 20° en

la oscaridad y se midió el consumo de metaperyodato, la formación de formaldehido

y ácido fórmico a distintos tiempos hasta que se observó marcada sobreoxidacïón.

Determinación del consumo de pegodato: se empleó un micrométodo volumétrico basado

en la técnica descripta por Fleury-Lange (105). Se extrajeron ali'cuotas de 0, 2 ml

que se agregaron a una solución de 2 ml de arsenito de sodio 0,01 N y un ml de

bicarbonato de sodio M; luego se agregaron 0,2 ml de ioduro de potasio 20%, se dejó

una hora en la oscuridad y sc titulo el exceso de arsenito de sodio con solución de

iodo 0,01 N, empleando como indicador 0,2 ml de solución de almidón 0,2 %.

-104­

Determinación del ácido fórmico: se tomaron alfcuotas de un ml, recogiendolas sobre

0,4 ml de etilenglicol y se mantuvieron una hora en la oscuridad. Luego se tituló con

hidróxido de sodio 0,01 N, utilizando como indicador una mezcla 1:1 de rojo de metilo

0,2 (l;y azul de metileno 0,1 %.

Determinación del formaldehido: se empleó la técnica descripta por Mac Fadyen

(106). Se tomaron alícuotas de 1 ml, recogiendolas en un matraz aforado de 10 ml

que contenía 0,2 ml de arsenito de sodio M y 0,4 ml de acido sulfúrico 0,5 M; se

completó con agua destilada hasta 10 m1; un ml de esta solución se mezcló con 10 ml

de una solución de acido cromotrópico en ácido sulfúriCOy se midió la absorbe! oía

a 570 m/¿(/ en un espectrofotómetro Beckman D U.

Los espectros de resonancia magnética nuclear fueron determinados mediante

un espectrofotómetro Varian A-GOa 60 Mc. , . Para los desplazamientos quimicos

se usó la convención(S (ppm) relativo al tetrametilsilano 0l2,2-dimetil-2-silapentano

-5-su1fonato de sodio considerados como 0 ppm.

Los poderes rotatorios fueron determinados en un polari'metro O. C.Rudolph

and Sons modelo 70. La concentración se expresó en gramos de soluto por 100 ml

de solución.

Los microanális fueron efectuados por la Doctora Blanca Berinzaghi de

Deferrari en el Laboratorio de Microz..¡álisis de la Facultad de Ciencias Exactas y

Naturales.

Los eSpectros U. V. se determinaron mediante un espectrofotómetro Zeiss

RPQ 20 C, en agua destilada.

El ácido nicotínico y la nicotinamida aislados en las reacciones de amonolisis

fueron identificados por el punto de fusión mezcla.

- 105­

gloruro de nicotinilo

Se empleó la técnica descripta por Badgett y Woodward (1). En un balón de

tres bocas y de dos litros de ca acidad, provisto de refrigerante a reflufp con tubo

de cloruro de calcio, agitador con cierre de mercurio y ampolla de decantación, se

colocaron 192 g. de ácido nicotinico y se agregaron lentamente y agitando 510 ml de

cloruro de tionilo (purificado según Vogel (107)), enfriando a 0° durante tooo el

agregado. Se calentó a reflujo, en baño de agua, durante dos horas, manteniendo

continuamente la agitación mecánica. Después de diez minutos de calentamiento a

reflujo el ácido nicoti’nicose disolvió completamente y comenzó a cristalizar el

cloruro de nicotinilo como un sólido blanco. Se uestiló el exceso de cloruro de tionilo

a presión reducida y se agregaron 500 ml de benceno anhidro; despue‘s de enfriar

a temperatura ambiente se filtraron y lavaron los cristales con benceno anhidro.

Se secó en desecador a presión reducida en presencia de parafina. Se obtuvieron

224 g. (80 %) de clorhidrato del cloruro nicotinilo de p.f. 152-41:o(Charonnat y col.

(108) dan p.f. 155).

Penta-Onicotinil-D-glucosa (XCVIII)

Se empleó la tecnica descripta por Charonnat, Harispe y Chevillard (9). Se

disolvieron 224 g. de clorhidrato de cloruro de nicotinilo en 510 ml de cloroformo

exento de etanol y 200 ml de piridina anhidra, contenidos en un orlenmeyer de dos

litros. A la mezcla enfriar a temperatura ambiente se agregaron lentamente 30 g.

de glucosa bien pulverizada, manteniendo la temperatura por debajo de 40°; se agitó

durante dos horas hasta completar la disolución de la glucosa y se dejó a temperatura

ambiente durante cuatro horas. Se lavó dos veces con agua (290 ml cada vez), dos

veces con carbonato de sodio 10 9%(30" ml cada vez) y finalmente tres veces con agua

(200 ml cada vez). Se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y evaporó a presión

reducida. Se obtuvo un jarabe que, secado en un desecador a presión reducida durante

48 hs. dió un sólido blanco, el cual se disolvió en 750 ml de etanol 60 % y se volcó

sobre 10 1. de agua-hielo. Después de doce horas se filtró el precipitado blanco

pulverulento, se lavó con etanol 60 % frio y se secó en desecador a presión reducida.

Se obtuvieron 116,5 g. de producto bruto (99SS)de p.f. 74-830, que recristalizaz’os

de 1,2 1. de etanol 30 %decolorando con carbón dieron 85 g. (72,6 %)de cristales

blancos de p. f. ( 186-80 que después de una nueva recristalización del mismo solvente

fundieron a 188-90. El producto puede ser recristalizado también dc acetona-éter (9).

Unamuestra recristalizada para análisis dió p. f. 189-900, 39+ 133°(c 0,24;

cloroformo). Análisis (muestra secada 115° y 1 mm de Hg sobre P205).

H 0 : ' : , 4 : : ,Calculado para 036 27 11N5 C 61,27, H 3 8 N 9 92

Encontrado C: 61,24 : H: 3,89 : N: 10,3!)

Charonnat y col. (9) dieron p.f. 169° y no indicaron poder rotatorio ni análisis

de carbono e hidrógeno.

Penta-O-nicotinil-D-manosa gxcrxz

A una solución dc 97 de clorhidrato de cloruro de nicotinilo en 106 ml de

piridina anhidra y 250 ml de clorotormo exento de alcohol, se agregaron 12,7 g. de

D-manosa pulverizada, manteniendo la temperatura entre -5Oy 0° y agitando mecani­

camente durante cinco horas. Se dejó luego 14 hs. a 0o y 24 hs. a temperatura ambiente

Se lavó tres veces con agua (250 mi cada vez), dos veces con carbonato de sodio 10%

(150 ml cada vez) y luego tres veces con agua (250 ml cada vez). Se sacó con sulfato

de sodio anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida. El jarabe obtenido se

1ecó en deseacdor a presión reducida durante 48 hs. y se disolvió en 400 ml de

etanol 50 %, la solución se volcó en 8 1. de agua-hielo con lo que se separó un

producto blanco pul'rerulento que se filtró, 12.76con etanol 50 % fri'o y ".e secó en

-107­

deseacdor a presión reducida; se obtuvieron 44 g. (88 ‘7c):le producto bruto de p.f.

40-500 que se disolvió en 60 ml de acetona caliente y se decloró con carbón. La solu­

ción acetónica se diluyó lentamente y agitando con 120 ml de eter eti’lico caliente y se

dejó precipitar durante doce horas. Se obtuvieron 36,1 (72,5 ‘70de un producto

amorfo de p.f. de 129- 130oque después de tres purificaciones como la descripta

cristalizó en forma de agujas de p.f. 132-30 1235-.82,4°(c 1, 3; clorof01-mo-)

Análisis (muestra secada a 100Oy 1 mm de Hg sobre P2 05)

Calculado para C36 H27 0 N5 C: 61,27 ; H: 3,84; N: 9,9211

Encontrado C: 61,60; H: 3,64; N: 9,88

Penta- )-nicotinil-D-gal actosa 1C)

A una soluclón de 69, 8 g. de clorhidrato de cloruro de nicotinilo en 170 ml de

cloroformo exento de alcohol y 75 ml de piridina anhidra, se agregaron lentamente

9,3 g. de D-‘ralactosa pulverizada, manteniendo la temperatura entre -5o y O0y

agitando mecanicamente durante 5 hs. . Se dejó luego 14 "ns. a 0o y para completar

la disolución de la D-galactosa se agitó 3,5 hs. a temperatura ambiente, después de

lo cual se dejó 24 hs. a temperatura ambiente. Se lavó tres veces con agua (200 ml

cada vez), dos veces con carbonato de sodio 10 ‘7r(100 ml cada vez) y finalmente tres

veces con agua (200 ml cada vez). Se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y

evaporó a presión reducida. El jarabe obtenido se secó en desecador a presión reduci­

da durante 36 hs.; se disolvió en etanol caliente y se decoloró con carbón, luego se

volcó sobre 6 1. de agua-hielo obteniendose un precipitado pulvurento que se trató

con eter de petróleo (p.e. 700-800)caliente, se dejó enfriar a temperatura ambiente

se filtró, y se lavó con eter de petróleo frio, obteniéndose 32,5 g. (88 70)de un pro­

ducto amorfo que después de tres tratamientos similares con eter de petróleo fundió

- 108­

88-1100 : 1237+ 172°(c1.6 ; cloroformo). Se analizó una muestra secada a tempe­

ratura ambiente y 10-3 mm de Hg

Análisis Calculado para C36 P127O11 N5 C: 61,27 ; H: 3,84; N: 9.92

Encontrado C: 60,81 ; H: 3,90 ; N: 10,16

Esta sustancia no pudo ser cristalizada ni aún después de una cromatografía en

columna de alúmina neutra Woelm, eluyendo con mezclas de metanol en benceno de

concentración creciente (0,5 - 15 %)..Por cromatografía en placa de alúmina neutra,

desarrollada con una mezcla de benceno-metanol 85:15 y revelada con ácido sulfúrico

concentrado, dió 2 manchas de Rf 0,52 y 0,58 que posiblemnnte correspcndan a los

anómeros y (5 .

Tetra-Oolintlnil-L-arabgigsa (CI)

A una solución de 90 g de clorhidrato de cloruro de nicotinilo en 90 ml de

piridina anhidra y 250 ml de cloroformo libre de etanol, se agregaron lentamente 12

g. de L-arabinosa pulverizada, manteniendo la temperatura entre -5° y 0° y agitando

mecanicamente durante 3 horas. Se dejó luego 12 hs. a 0o y 24 hs. a temperatura

ambiente. Se lavó tres veces con agua (150 ml cada vez), dos veces con solución de

carbonato de sodio al 10 % (100 ml cada vez) y tres veces con agua (150 ml cada vez).

Se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y evaporó a presión reducida. El jara­

be obtenido se secó en desecador a presión reducida durante 48 hr. y se disolvió

en 5 1. de etanol 13 % caliente; por enfriamiento a temperatura ambiente se separó

un producto de aspecto siruposo que se dejó a temperatura ambiente durante 24 hs.

y por raspado periódico se hizo friable. Se filtró y lavó con etanol 13 % frio. Se

obtuvieron 35 g. (76 %)de un producto blanco pulverulento de p.f. 88-950. Se recris­

taiizó 1 g. de 500 ml de alcohol 10 % y se obtuvieron 8.00mg de cristales en forma

de agujas finas de p.f. 90-960, Lo(Lz)5+323° (c 1,1 ; cloroformo). Por posteriores

- 109­

recristalizaciones del mismo solvente no cambió el p.f. . Análisis (muestra secada

a _60° y 1 mm de Hg sobre P2 05 ).

Calculada para C29 [-12209 N4 C: 61,05 ; H: 3,89 ; N: 9,82

Encontrado C: 60,95 ; H: 3,95; N: 9,50

Tetra-Owninctmll-D-xllosaÁCHL

A una solución de 80 g. de clorhidrato de cloruro de nicotinilo en 80 ml de piri­

dina anhidra y 250 ml de cloroformo libre de etanol se agregaron lentamente 10 g.

de D-xilosa pulverizada, manteniendo la temperatura entre -5° y 0° y agitando meca­

nicamente durante 3 hs. Se dejó luego 12 hs. a 0° y 24 hs. a temperatura ambiente.

Se lavó tres veces con agua (150 ml cada vez), dos veces con carbonato de sodio 10%

(100 ml cada vez) y nuevamente tres veces con agua (150 ml cada vez). Se secó con

sulfato de sodio anhidro, se filtró y se evaporC a presión reducida. El jarabe obtenido

se secó en desecador a presión reducida durante 48 hs. y se disolvió en 3,2 1. de

etanol 20 %hirvientejpor enfriamiento a temperatura ambiente cristalizaron 30 g.

(79 (lo)de cristales aciculares de p. f. 155-70 , Una nueva recristalización para análi­

sis dió p.f. 157-80, + 15€0(C1,3 ; cloroformo).Análisis (muestra secada

a 100°y 1 mm Hg sobre P2 05).

Calculado para C29 1-122N4 09 C: 61,05 ; H: 3,89 ; N: 9,82

Encontrado C: 61,37 ; H: 4,20 ; N: 9,84 y

¿MONOLISIS DE PENTA-0-NICOTINIL-D-GLUCOSA (LVIII) CON AMONIACOAcuoso AL 25%.

Aislamiento de N-nicotinil-D-gluoofuranosilamina {CHI}

Se suspendieron 81,7 g. de penta-O-nicotinil-D-glucosa de p.f. 187-9o en

2,025 1. de amoniacoa acuoso al 25 ‘Z-y se agitó la mezcla hasta disolución completa

- 110­

(6 hs.). Después de 24 hs. se evaporó el solvente a pre-sión reducida y temperatura

menor de 60°. El jarabe asf obtenido se secó en desecador a presión reducida, se

maceró con 2J ml de acetato de etilo y se secó a presión reducida, repitiendo el

tratamie nto tres veces. Se obtuvo un sólido amorfo que se extrajo dos veces con

acetato de etilo frio (150 ml cada vez) y ocho veces con acetato de etilo hirviente

(250 ml cada vez), malaxando el residuo fundido durante la extracción en caliente

para eliminar la nicotinamida. Quedó un jarabe que después de secado en desecador

a presión reducida pesó 37,4 g. y del cual, por agregado de 300 ml de metanol se

separaron 5, 3 g, (16 %)de N-nicotinil-D-glucofuranosilamina de p.f. 176-7" (d), que

cristalizó de metanol-agua 8:1 en placas rectangulares de p.f. 176-7o (d). Una mues­

tra recristalizada tres veces del mismo solvente fundióa la misma temperatura.

[CL] 2DG+38° (c 0,5; agua).

Análisis (muestra secada a 100° y 1 mm de Hg sobre P2 05)

Calculado para C12 H16 N2 06: C: 50,70; H: 5,67 ; N: 9,85

Encontrado: C: 50,30 ; H: 5,40 ; N: 9,60

Aislamiento de 1,1-bisgnlcotinamidoj-l-desoxi-D-glucitol (CIVL

Por evaporación a presión reducida de las aguas madres de la separación de

la N-nicotinil-D-glucofuranosilamina se obtuvo un jarabe que una vez secado en

desecador al vació pesó 47,5 g. . Este jarabe se cromatografió en una columna de

celulosa de 4,5 x 90 cm eluyendo con el solvente A. Se recogieron 30 fracc‘ones de

100 ml cada una, se evaporó el solvente a presión reducida, el residuo se tomó con

etanol caliente y se cromatografió en papel cada fracción. De las fracciones 7-12

cristalizaron 1,25 g. de nicotinamida de p.f. 115-7o que después de recristalizada

de cloroformo y de benceno fundió a 130.-2o '

—111­

De las fracciones ,13-22cristalizaron 8,36 g. de ácido nicotfnico de p.f. 225­

-7° que se recristalizó de agua y dió p.f. 230-2Oy no presentó depresión su p.f. mezcla

con ácido nicotfnico puro.

Las aguas madres de cristalización del ácido nicoti'nico se llevaron a sequedad

por evaporación a presión reducida y se obtuvieron 22,8 g. de un jarabe que por cro­

matografi’a sobre papel con solvente C, reveló la presencia de nicotinamida y dos

sustancias más de Rf. 0,2 y 0,4 con el reactivo F; se recromatografió en una colum­

na de celulosa de 4,5 x 90 cm eluyendo con el solvente C y se recogieron 36 fraccio­

nes de 100 ml cada una. De las fracciones 22-25, evaporadas a sequedad y tomadas

con etanol caliente, cristalizaron 1,8 g. de' 1, l-br's(nicotinamido)-1-dcsoxi-D-glu­

-citol de p.f. 1225-70(3, 8 %), que recristalizado de etanol dió agujas de p.f. 188-90,

“¿TÍ? (c0,6; agua)Rf. o 2..D

Análisis (muestra secada a 115° y 1 mm de Hg sobre P2 05)

Calculado para 018 H N 0 C: 53,19 ; H: 5,46 ; N: 13,7922 4 7 2

Encontrado : C: 53,06 ; H: 5,25 ; N: 14,16

Aislamiento de 2--gD-arabino-tetrahidroxibutil)-6-(D-eritro-2, 3,4-trihidroxibutil)­

-pirazina {XC}

De las fracciones 23-27 de la primera cromatografía en columna cristalizaron

1, 35 g. de un producto de p.f. 155-60o que por cromatografía sobre papel cor. solven­

te A, reveló con el reactivo F la presencia de dos sustancias de Rf. 0,14 y 0,08.

Esta mezcla se recromatografió en una columna de celulosa de 2,6 x 59 cm, eluyendo

con el solvente A ; se recogieron 60 fracciones de 25 ml cada una que se evaporaron

a presión reducida, se tomaron con etanol caliente y se cromatografiaron sobre papel.

De las fracciones 36‘42 cristalizaron 0,550 g. (3, 2 94)de agujas de p.f. 166-70, Rf.

-112­

0,14, que recristalizadas etanol fundierona 166-70,¿3110o (c 1,0 ; agua).

Esta sustancia no se reveló sobre papel con el reactivo G, lo cual indicó su naturaleza

no reductora.

Análisis (muestra secada a 110o y 1 mm de Hg sobre P2. 05)

Calculado para C 0 C: 47,36 ; H: 6,63; N: 9,2112 H20 N2 7 ’

Encontrado C: 47,51 ; H: 6,50 ; N: 9,20

De las fracciones 43-60 de esta columna se obtuvieron 490 mg. de una mezcla de los

productos originales.

Se lavó la columna de la primera separación cromatográfica con 2 1. de meta­

nol y por último con 3 .1. de agua. Después de cvaporados estos solventes de lavado

se obtuvieron residuos de 0,9 g. y 1,6 g. respectivamente que, por cromatografía

sobre papel dieron muchas difusas en la zona del origen, indicando suncaracter de

melanoidinas.

Conel fin de obtener mayores cantidades de 2-(D-_arabin9-tetrahidroxibutil)­

—6-(D-gr_i_t¿9-2,3,4-1rihidroxibutil)-pirazina se llevó a cabo una nueva amonolisis

de la penta-0-nicotinil-D-glucosa (81.7 g.). En este caso se procedió como en la

experiencia original hasta la etapa de separación de la N-nicotinil-D-gl'lcofuranosila­

-mina; las aguas madres se llevaron a sequedad por evaporación a presión reducida

y los 47 g. de jarabe asi’obtenidos se cromatografiaron en una columna de celulosa

de 4,5 x 90 cm, eluyendo con e} solvente B (se empleó este eluyente en lugar del A

para obtener la sustancia deseada en una sola operación) y se recogieron 58 fracciones

de 100 ml cada una. De las fracciones 38-48, evaporadas a sequedad y tomadas con

etanol caliente, :ristalizaron 1,31 g- (7,6 %)de 2-(D-aiïbi_nc_>-tetrahidroxibutil)—6­

-(D—eritro-2,3,tl-trihidroxi-butil)-pirazina cromatograficamente pura de p. f. 166-7o2,0

[q]6no° (c1,0; agua)

- 113­

2, 3, 5, 6-Tetra-0-acetil-N-nicotinil-D-glucofuranosilamina {CV}

Se suspendieron 0,200 g. de N-nicotinil-D-glucofuranosilamina en 2 ml de una

mezcla 1:1 de anhidrido acético y piridina anhidra y se calentó en baño de agua hir­

viente hasta la disolución (20 minutos). Después de 24 hs. a temperatura ambiente

se evaporó hasta sequedad en desecador a presión reducida, con lo que se obtuvieron

0, 310 g. (97 %)de 2, 3,5,6-tetra-0-acetil-N-nicotinil-D—glucofuranosilamina de p.f.

127-90, que cristalizaron de agua como cristales prismáticos de p.f. 129-300,[cito

+390 (c 0,7 ; cloroformo).

Análisis (muestra secada a 100° y 1 mm de Hg sobre P205)

Calculado para 020 ¡{28 N2 o C: 53,09 ; H: 5,35 ; N: 6,1910 ’

Encontrado C: 52,88 ; H: 5,17 ; N: 6,38

Oxidación de la N-nicotinil-D-glucofuranosilarrina {CHI}con metagegodato de sodio

Se oxidaron 0,01902 g. de N-nicotinil-D-glucofuranosilamina con 5 ml de meta­

peryodato de sodio 0, 1 My los resultados obtenidos figuran en tabla no.9

Tabla no.9

T IO4Na HCOOH HZCOmoles/mol de (CIII) '

15' 0,9 -- 1,0

30' 1,0 —— 1,1

1h. 1,0 -- 1,0

2h. 1,2 0,06

5 h. 1,9 0,3 1,0

19 h. 3,4 1,2

29 h. 4,0 1,8

44h.30' 4,8 2,5 1,0

-114­

El consumo de dos moles de metaperyodato durante las primeras cinco horas, con

escasa producción du ácido fórmico y la formación de un mol de formaldehído, demos­

traron la estructura furanósisa de este compuesto.

Penta-O-acetil-ll1-bisgnicctinamido)-1-desoxi-D-ngVI)

Se suspendieron 0,090 g. de 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi -D-glucitol en l m1

de una mezcla de 1:1 de anhídrido acético y piridina anhidra y se :alentó en baño de

agua hirviente hasta disolución. Después de 24 hs. a temperatura ambiente se evapo­

ró hasta sequedad en desecador a presión reducida, con lo que se obtuvieron 0,120 g.

(88%)de penta-O-acetil-l, 1-bis(nicotinamido)--1-desoxi-D-g’v:itol de p. f. 163-4o

que se recristalizaron de agua, obteniéndose cristales aciculares dep.f. 164-5°,(\_0():0

-2 )° (c 0,95 ; cloroformo).

Análisis (muestra secada a 100" y 1 mm de Hg sobre P205)

Calculado paz-¿1.C28H32N4012: C: 54,54 ; H: 5,23; N: 9,09

Encontrado : C: 54,54 ; H: 5,50 ; N: 9.30

Oxidación de 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-glucitol (CIV)con metaperyodato desodio

Se oxidaron 0,0202 g. de 1,l-bis(nicotinamido)-1-desox1-D-glucitol con 7 ml

de metaperyodato 0, 1 M. Los resultados de la oxidación figuran en la Tabla no. 10

Tabla no. 10

T IO4Na HCOOH H2COmoles/mol de (CIV) '

30' 3,8 2,9 1,0

1 h. 4,0 2,9 1,0

2 ha 4.o 2,9 1,0

El consumo de 4 moles de metaperyodato con producción de 3 moles de ácido fórmico

y 1 mol de formaldehído indicó una estructura de cadena abierta para esta sustancia.

Demostración de la estructura de la 2­ D-arabino—tetrahidroxibutil-6- D-eritro­

-2J 3,4-trihid roxibutil)-pirazina (XC).

EsEectro U.V. de (XC) Amax. 274 m/4/(¿8900). Fujii y col. (79) (81) determinaron

los espectros U. V. de la fructosazina (LXXVI)y de la tagatosazina (LXXXVIII),encon­

trando un Amax. 274 nyM

Esgectro de R.M.N. de (XC)(D20), standard'D.S.S.

L señal integración

8, 67 singulete 1HC3 y C5 (aromáticos)

8,52 singulete 1H

5 , 20 singulete 1H C1 I

3,82 multiplete SH Cza, C2" , C3" C3" , C40. C4"

3,11 multiplete 2H metileno de Cl"

Oxidación de (XC) con metapegodato de sodio

Se oxidaron 0,0122 g. de (XC) con 7 ml de metaperyodatod de sodio 0,1 M

siguiendo la técnica general. Los resultados de la oxidación figuran en la t abla no. 11

Tabla no. 11

T temp. IO4Na HCOOH H2COmol/mol de (XC)

15' 0° 4,9 2,7 2,030' " 4,9 2,7 2.o1 h " 4,9 2,7 2,02 h " 5,2 2,8 2,05 h " 5,2 2,87 h 20O 5,3 3,09 h " 6,0 3,111 h " 6,1 3,1 2,026 h " 6,5 3,233h " 6,6 3,757 h " 7,0 3,9 2,077 h " 7 o 3 o 2 on e

- 116­

El consumo de 5 moles de metaperyodato de sodio, aompañado de la formación

de 3 moles de ácido fórmico y 2 moles de formaldehído coincide con la existencia de

dos grupos alcohólicos primarios, acompañados por dos alcoholes secundarios en

una cadena lateral y tres en la otra. Finalmente el consumo de metaperyodato se

elevó a 7 moles y la formación de ácido fórmico a 4 moles, manteniendose constante

(2 moles) la cantidad de formaldehído; estos valores corresponderfan a la etapa de

hidroxilación de un metileno activado para dar un og-hidroxialdehido y posterior

oxidación de'éste como se indica en cl esquema no. Zóde la pag. 31 .

¿(1do 2,6-pirazindicarboxflico {CVIQ

Se adaptó la técnica descripta por Kuhny col. (80) para oxidar la desoxi­

fructosazina al ácido 2,5-pirazindicarboxi'lico. Se agregaron 2,0 g. de hidróxido de

sodio a una solución de 1,215 g. de (XC) en 50 ml de agua oxigenada al 6%. Cuando

disminuyó el desprendimiento de burbujas (45 minutos), se calentó paulatinamente

hasta 800 en baño de agua, se agregaron 3 ml de perhidvol y se mantuvo el calenta­

miento a esa temperatura hasta reacción de Fehling negativa (1 hora). Una vez

enfriado a temperatura ambiente se acidificó con ácido clorhídrico concentrado hasta

pH 3 y se dejó en reposo durante la noche. Por enfriamiento a 0o y raspado de las

paredes del recipiente se separó un precipitado amorfo que se filtró y lavó con agua

helada. Se obtuvieron 0,308 g. de un compuesto infusible a 350°. Este producto se

disolvió en 5,5 ml de agua caliente, se decloró con carbón y se acidificó con ácido

clorhídrico concentrado hasta pH 1. Por enfriamiento a 0o cristalizaron agujas

prismáticas que se filtraron y lavaron con agua helada, obteniendose 0,208 g. (31%)

del ácido 2,6-pirazindicarboxi’lico de p.f. 224-50 que se recristalizó de agua sin

variar el p.f. . Su espectro U.V. presentó un >max. 274 m/t (fi 9200). Por reacción

-117—

con ión Fe++ desarrolló un color rojo-violácco, característico de piridinas y pira­

zinas con grupos carboinOS en posición “(9 3). Mager y Berends (92) dieron p.f.

224-50. Análisis (muestra secada a 1 mm de Hg sobre P205)

Calculado para C6H4N201 : C: 42,86 ; H: 2,40 ; N: 16,67

Encontrado z C: 42,66 ; H: 2,43 ; N: 16,75

2, G-dicarbometoxipirazina (CVIII)

A una suspensión de 0,031 de ácido 2,6-pirazindicarboxflico anhidro en 5

ml de eter a 0Ose agregó una solución de 0, 180 g. de diazometano en 8 ml de eter

a la misma temperatura. Se mantuvo en la heladera durante la noche y luqu se dejá

evaporar el eter. Por sublimación del residuo sólido a 90-100o y 0,01 mm de Hg se

obtuvieron 0,0296 g. (91%)de 2,6-dicarbometoxipirazina de p.f. 124-50. Se recris­

talizó de agua decolorando con carbón y dió p.f. 126-70. Análisis (muestra secada

a 1 mm de Hg sobre P205)

Calculado para C8 H8 N2 01,}: C: 48,98 ; H: 4,11 ; N: 14,28

Encontrado C: 48,83 ; H: 4,00 ; N: 14,45

(Mager y Berenda (92) dieron un p.f. 119-200). La 2, 3--:!icarbometoxipirazina funde

a 56O(94)y la 2,5-dicarbometoxipirazina tiene un p.f. 169-70o (95).

2-(D—arabino-tetraacetoxibutil)-6-(D-e ritro-2 , 3,4-triacetoxibutil)-pirazina (CIX)

Se suspendieron 0,150 de (XC)en 1,5 ml de una mezcla 1:1 de anhídrido

acético y piridina anhidra y se calentó en baño de agua hasta disolución (20 minutos)

DeSpués de 24 horas a temperatura ambiente se llevó a sequedad en desecador a

presión reducida, obteniendose 0,220 g. (75%)de producto bruto de p.f. 140-10. Se

recristalizó de agua y dió p.f. 141-2C,>[Más-8° (c, 0°,73cloroformo). Análisis(Muestra

secada a 1000 y 1 mm de H3;sobre P205)

- 118­

Calculado para C26 ¡{34 N2 014: C: 52,17 ; H: 5,73 ; N: 4,68

Encontrado : C: 52, 48 ; H: 5,62 -,N: 4,58

Espectro de R.M.N. deGCIX)(CDC13), standard T.M.S.

S señal no.protones posición

8,42 singulete 2 C3 y C5

6 , 17 doblete 1 C1 ,

5 , 75 multiplete 1 C2 —

5,40 " 3 C2" , C34 C3"

4,33 " ¿i metllenos C41 C4"

3,20 doblete 2 metileno C1"

1,96-2,256 picos 21 metilos de acetatos

Determinación del peso molecular de {CDQ

Se empleó el método de Rast, utilizando alcanfor (k=40,8) como solvente y un

termómetro con un error de Í 0, 1‘:

P.M. calculado para C26 ¡134 N2 014-: 598,54

1o determinación: se emplearon 0,00150 g. de (CDí)y 0,02851 g. de alcanfor, obser­

vándose unbt de 3,40 ; P.M. 630i 40.

2° determinación: se emplearon 0,00140 g. de (CIX)y 0,02995 g. de alcanfor, obser­

vándose unAt de 3,10 ; P.M. 615 Ï 40.

Desoxlfructosazina ó 2-gD-arablno-tetrahid roxlbutll)-S-jD-eritro-Z, 3, 4-t11hjdroxibu­

-tll)-plrazlna (LXXXIX)

Este compuesto se sintetlzó según la técnica descripta por Kuhny col. (80),

con el fin de comparar sus propiedades físicas y químicas con las que presentó la

2-(D-arablno-tetrahldroxibutil)-6-(D-eritro-2 , 3,4-trihidroxibutil)-pirazlna formada

- 119­

en las amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-glucosa y penta-O-nicotinil-D-manosa.

La glucosamlna empleada en la sintesis de este compuesto se obtuvo a partir

del clorhidrato de glucosamina con dietilaminn en etanol absoluto según la técnica

de Breuer (109).

Se disolvieron 5 g. de glucosamina en 50 ml de ácido acético glacial, se calen­

tó en baño de agua hirvi ente durante 30 minutos y se filtro. El filtrado se evaporó a

presión reducida , el residuo obtenido se trató con agua repitiéndose la evaporación

hasta eliminar el ácido acético y se disolvió en 25 ml de piridina caliente. Por enfria­

miento y raspado de la pared del recipiente comenzó la cristalización . Después de

12 hs. a 0° se filtro y lavó con piridina fri'a y finalmente con metanol frío. Se obtu­

vieron 2, 1 g. (49%) de 2-(D-arabino—tetrahidroxibutil)—-5—(D——oritro—2,3.4-tr1hidroxi­

butil)-pirazina de p.f. 157-90 que se rccristalizó dos veces de etanol y dió p.f.

159-600,[o(]:;-8810 (c 0,7 ; agua) ; (Kuhn y col. (80) dan p.f. 161-20, [Cab-780 (C 0,6

agua).

Espectro U.V.: A max. 276 m/u- (s, 8800)

Espectro de R.M.N. de (LXXXIX) (D20), standard 13.8.

s no. de protones posición

8,80 single-te 1 1

8,62 " 1 É C3 y C6 del anillo pirazi’nico

5 , 22 " 1 C1 ,

3,85 8 C24 2" ; 03,3" , C44"

3, 10 multiplete 2 metilo-no de C1"

Qxidación de (LXXXIX)con metaperyodato sodio

Seoxidaron 0, 0137 de 2-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-5-(D-eritro-Q, 3,4­

-trihidroxibutil)-pirazina con 7 ml de mctaperyodato de sodio 0, 1 M, siguiendo la

-120­

técnica general. Los resultados de la oxidación figuran en la tabla no. 12.

Tabla no. 12

T t IO4Na HCOOH HZCOmoles/mol de (LXXXIX)

20' 0o 5,8 3.1 2.0

60' " 5,9 3,3 2,0

2 h " 6,3 3,4 2,0

3,5 h 20o 6,7 3,8 2.o

5 h " 6,8 3,8 2,0

19 h " 7,0 4,0 2,0

El consumo de 7 moles de metaperyodato de sodio, acompañado de la formación

de 4 moles de ácido fórmico y 2 moles de formaldehído coincide con los resultados

finales de la oxidación de (XC)(pag.115) y es susceptible de una interpretación simi­

lar a la indicada en el esquema no. 2fde la página.8! .

- 121­

AMONOLISIS DE PENTA-O-NICOTINIL-D-MANOSA (XCIX) CON AMONIACO ACUOSO

AL25%

Aislamiento de 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-manltol (qa

En 1,25 1. de amoniaco acuoso al 25 % se suspendieron y se agltaron hasta

disolución (3,5 hs.) 50 g. de penta-O-nicotinil-D-manosa de p.f. 130-20. Después

de 24 hs. a temperatura ambiente se evamro el agua a presión reducida y temperatura

menor de 600; el jarabe residual se secó en desecador a presión reducida, se maceró

con 20 ml de acetato de etilo y se secó a presión reducida repitiéndose el tratamiento

tres veces. Se obtuvo un sólido amorfo que se extrajo dos veces con acetato de etilo

fri'o (100 ml cada vez) y luego siete veces con acetato (le etilo hirviente (350 ml cada

vez), malaxando el residuo fundido durante la extracción. El residuo, después de

secado en desecador a presión reducida, pesó 46,0 g. ; se recrlstalizó de butanol

decolorando con carbón y se lavaron los cristales con etanol frio; se obtuvo 5, 0 g.

de 1,1-bis(nicotinamido)—1-desoxi—D-manitolde p.f. ISS-9° ; las aguas madres se

enfriaron a 0o y se obtuvieron 1,5 g. más de (CX)de p.f. 180-50. Ambas fracciones

se recristalizaron de etanol, obteniéndose (CX)como cristales aciculares de p.f.

191-2o , [dilo-4° (c 1,1 ; agua) como se describe en la pag. 122se aislaron 0,51 g.

mas de (CX). Rendimiento total 24,2 Análsis (muestra secada a 110oy 0,001 mm

de Hg.)

Calculado para 018 H22 N4 07.112 0 : C: 50,94 ; H: 5,72 ; N: 13,20

Encontrado C: 51,00 ; H: 5,94 ; N: 12,82

Aislamiento de 2—(D—arabino-tetrahidroxibutil)-6-(D-eritro-2, 344-tr1hidroxibuti11­

epirazina {XC}.

Las aguas madres butanólicas de la cristalización ..el 1,1-bis(nicotinamido)­

-1-desoxi-D-manitol se concentraron a presión reducida hasta un tercio de su volú­

- 122­

men inicial y por posterior enfriamiento cristalizaron 11,8 de ácido nicotínico de

p.f. 228-300. Las aguas madres de esta cristalización se llevaron a sequedad por

evaporación a presión reducida obteniendose 17,0 g. de un jarabe que sc cromatogra­

fió en una columna de celulosa de 92 x 4,5 cm ; eluyendo con el solvente B se reco­

gieron 88 fracciones de 100 ml cada una y luego 22 fracciones del mismo volúmen

eluyendo cor. el solvente D. Se evaporó el solvente de cada fracción a presión reduci­

da, el residuo se tomó con etanol caliente y luego se cromatografió en papel. De las

fracciones 13 a 16 (10,3 g.) cristalizaron 2,5 g. de nicotinamida de p.f. 118-20o que

se recristalizó de benceno y dió p.f. 130-1o .

De las fracciones 18-20 (1, 3 g.) cristalizaron 0,510 g. de 1,1-bis(nicotinamido)

-1-desoxi-D-manitol de p.f. 190-10.

De las fracccion es 21-—38(2, 2 g.) cristalizaron 0,6 g. de ácido nicotínico de

p.f. 228-300.

De las fracciones 44-47 (0,91 g.) cristalizaron 0,41 g. (3,8 %)de 2-(D-arabino­

-tetrahidroxibutil)-6-(D-eritro-2,3,4-trihidroxibutil)-pirazinade p.f. 165-60,

-110o (1,1 ; agua), Rf 0,14 en cromatografía sobre papel con áolvente A (revelado

con el reactivo F). Todas sus propiedades coincidieron exactamente con las encon­

tradas para el compuesto (XC) aislado en la amonolisis de la penta-O-nicotinil—D­

-'xlucosa y no presentó depresión el punto de fusión mezcla con una muestra auténtica

de (XC)proveniente de la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-glucosa.

Por último se lavó la columna con 2,5 1. de metanol y 2 1. de agua destilada

con lo que se obtuvieron residuos de O,8 y 0,6 g. respectivamente, formados por

mezclas de compuestos fuertemente coloreados que en cromatografía sobre papel

corrían cerca del origen y probablemente se trata de una mezcla de productos poli­

mérico s .

Penta-O-acetil-ll 1-bis(nicotinamido)—l-desoxi-D-manitol (CX41)

Suspendieron 0,20 2;. de 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-manitol en 1,5 ml

de una mezcla 1:1 de anhídrido acético y piridina anhldra y se calentó en baño de agua

hirviente hasta disolución (5 minutos). Después de 24 hs. se llevó a sequedad a tem­

peratura ambiente en deseca-ïbr a presión reducida, el jarabe resultante se cristali­

zó de benceno, obteniéndose cristales blancos de p.f. 202-30. Se recristalizó de

benceno y se obtuvo (CXI)de p.f. 204-50, que no varió por nuevas recristalizaciones,

LDK 24° (c 1,0 ; cloroformo)

Análisis (muestra secada a 110oy 0,01 mm de Hg)

Calculado para C28 H32 N2 012 : C: 54,54 : H: 5,23 ; N: 9,09

Encontrado C: 54,78 ; H: 5,50; N: 8,’97

Oxidaciónde 1,1-bisgnicotinamidg-1-desoxi-D-manitol (CX)con metaperyodato de

Z Se oxidaron 0,0202 g. de 1, 1-bis(nicotinamido)-1-desoxi—D-manitol con 7 ml

de metaperyodato de sodio 0,1 M.

’I_‘abla no. 13

T IO4Na HCOOH HZCOmoles/mol de (CX)

30' 3,9 2,9 0,9

1 h. 4,0 3,0 1,0

5 h. 4,0 3,0 1,0

Los resultados que figuran en la tabla no. 13 indican un consumo de 4 moles de

metaperyodato de sodio con formación de 3 moles de ácido fórmlco y 1 mol de for­

maldehído, lo que corresponde a una cadena abierta de 6 carbonos con 4 Mdroxilos

secundarios y uno primario vecinos.

-124­

AMONOLISISDE PENTA-O-NICOTINIL-D-GALACTOM CON¿MONIACOACUOSO

AL 25 %

Aislamientode 1,1-bMtinamido)-1-desoxi-D-galactitol (CXII)

En 1,77 1. de amoni'aco acuoso al 25 ‘70se suspendieron y se agitaron hasta

disolución(2 horas) 70,57 g. de penta-O-nicotinil—D-galactosade 1720. Des­

pués de 24 hs. a temperatura ambiente se evaporó el agua a presión reducida y tem­

peratura menor de 60o ; el jarabe obtenido se secó en desecador al vacio sobre ácido

sulfúrico, se maceró con 20 ml de acetato de etilo y se secó al vaci’orepitiéndose

este tratamiento tres veces. Se obtuvo un sólido amorfo que se extrajo dos veces

con acetato de etilo fri'o (150 ml cada vez) y luego siete veces con acetato de etilo

hirviente (250 ml cada vez), dejando un jarabe que una vez secado en desecador a

presión reducida pesó 63,9 g. ; se tomó con 200 ml de metanol caliente y al enfriar

a temperatura ambiente cristalizaron 3,1 g. de 1, 1-bis(nicotinamic‘.o)-1-desoxi-D­

-galactitol de p.f. 176-80. Concentrando las aguas madres hasta la mitad del volu­

men inicial y enfriando a 00 se obtuvieron 1, 3 g. de (CXII)p.f. 176-80. Las aguas

madres metanólicas se concentraron a presión reducida hasta consistencia de jarabe

del cual, por disolución en butanol caliente y decolorando con carbón se obtuvieron

3.8g. (CXII)de p.f. 174-80. Ins productos cristalizados de metanol y butanol

se recristalizaron por separaïïo en metanol, obteniendo en ambos casos cristales"J a

de p.f. 180-20, [5K];+7,4° (c 1,2 ; agua) que no dieron depresión del p.f. mezcla­

dos entre si y ambos presentaron el mismo Rf en cromatografía sobre papel. Como

se describe en la pag. 1'26 se aislaron 0,7 g. más de (CXII). Rendimiento tota110,6g.

(28%).

- 125­

Análisis (muestra secada a 110Óy 0,001 mm de Hg)

Calculado para C18 H N4 07 : C: 53,19 ; H: 5,41 ; N: 13,7922

Encontrado : C: 52,93 ; H: 5,74 ; N: 13,80

Aislamiento de N-nicotinil-D-zalactofuranosilamina CXIII

Las aguas madres butanólicas de la cristalización del 1,1-bis (nicotinamido)-1­

¿lesoxi-D-galactitol se llevaron a sequedad a presión reducida y el residuo se disol­

vió en etanol caliente; por enfriamiento a 0o cristalizaron 6,A g- de ácido nicoti‘nico

de p.f. 224-5o que se recristalizó de agua y dió p.f. 230-20. El etanol madre de la

separacion del ácido nicotinico :e llevó a sequedad , obteniendo 30,0 g. de un jarabe

que se cromatografió en una columna de celulosa de 90 x 4,5 cm. Se eluyó primero

con cl solvente B ( fracciones 1-54), luego con cl solvente C (fracciones 55-75) y por

último con el solvente D ( fracciones 76-88), recogiendose en cada caso fracciones

100 ml. Se evaporó el solvente a presión reducida, se tomó el residuo con etanol

caliente y cada fracción se cromatografió en papel. De las fracciones 14-20 se obtu­

vieron 10,5 de nicotinamicïade p.f. 122-5o que se rccristalizó de benceno y dió

p.f. 130-10.

De las fracciones 31-54 (6,23 g.) cristalizaron 1,57 a. de 1,1-bis(nicotinamido)

-1-c‘.esoxi-D-galactitolde p.f. 180-20. De las fracciones 55-82 se obtuvieron 3,5

de un jarabe muy oscuro del cual no se pudo obtener ningún producto cristalino y por

cromatografía en papel presentó manchas difusas en la zona cercana al origen. Final­

mente se lavó la columna 2 1. de metanol y 3 1. de agua, que por evaporación del

solventedieron jarabes las mismas caracteristicas cromatográficas que las frac

ci'on 65-82. ­

- 125­

De las fracciones 21-30 se obtuvieron 5,8 g. de un jarabe que por cromatografía

en papel con solvente B y revelado con el reactivo F presentó una mancha nicotinami­

da, otra de 1, 1-bis(nicotinamido)-1-dcsoxi-D-galactitol (Rf 0,37) y una tercera

correspondiente a una sustancia dc Ef 3,50. Este jarabe se recromatografió en una

columna de celulosa de 83 x 4,5 cm. , eluyendo con el solvente B y recogiendo 42

fracciones de 50 ml cada una; se evaporó el solvente a presión reducida, se t mó

el residuo con etanol caliente y cada fracción se cromatografiá en papel. De las

fracciones 14-28 (2,08 g.) cristalizaron 0,3 g. de ácido nicotínico de p.f. 228-30O

y las aguas madres acusaron la presencia de nicotinamida por cromatografía en papel.

De las fracciones 19-25 (1,1 5.) cristalizaron 0, 98 7;. (1,4%) de N-nicotfnil-D-galac­

-tofuranosilamina de p.f. 165-7”, que recristalizada de etanol absoluto dió p.f.o

166-7“, [ 0('_]:;+ 180 (c 0,44 ; agua).

Análisis (muestra secada a 100” y 1 mm de Hg sobre P205)

Calculaclo para C11 HI4 N2 05 : C: 50,70 ; H: 5,67 ; N: 9,85

Encontrado : C: 50,93 ; H: 5,93 ; N: 9,61

De las fracciones 26-31 se obtuvieron 1,17 g. de un jarabe que por cromatografía

en papel dió manchas correspodientes a una mezcla N-nicotinil-D-glucofuranosi­

-lamina y 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-galactitol. De las fracciones 32-36 (1,275.)

cristalizaron 0,7 de 1,1-bis(n1c0tinamid'))—1-desoxi-D-galactitol de p.f. 180-10.

Finalmente se lavó la columna con 1,5 1. de metanol y dos 1. de agua obteniendose

0, 3 de un jarabe formado por varios productos siendo el 1,1-bis(nicotinamido)­

-1-clesoxi-D-galactitol el componente principal (identificado por cromatografía en

papel). ­

-127­

Benta-O-acetil-l , 1-big(n_icotinamido)-l-desoxi-D-gz'lactit/ol (CXIV)

Se suspendieron 0,30 g. de 1,1-bis(nicotinamido)-l-desoxi-D-galactitol en 3 ml

de una mezcla 1:1 de anhídrido acético y piridina anhidra y se calentó en baño de

agua hirviente hasta disolución. Después de 24 horas a temperatura ambiente se

evaporó la solución hasta sequedad en desecador a presión reducida con lo que se

obtuvo un residuo que pesó 0, 36 g. (80%). Por cristalización de benceno dió cristales

aciculares de p. f. 110-40, que se mantuvo constante después de varias recristaliza­o

ciones, [Mg-30° (c 0,6 ; cloroformo).

Análisis (muestra secada a 60Oy 0, 001 mm de Hg)

Calculado para C28 1-132N4 0 C: 54,54 ; H: 5,23 ; N: 9,0912 ’

Encontrado : C: 54,58 ; H: 5,50 ; N: 9,30

Oxidación de 1,1-bisgnicotinamido)-1-dcsoxi-D-galactitol (CXII)con metajeryodato

de sodio

Se oxidaron 0,0202 de 1,1-bis(nicotinamido)-1—desoxi-D-galactitol con 7 ml

de metaperyodato de sodio 0,1 M de acuerdo con la técnica general. Los resultados

de la oxidación figuran en la tabla no. 14

Ïabla no. 14

T IO4N9. HCOOH HZCOmol/mol de (CXII)

30' 4,0 3,0 0,9

1 h. 4,1 3,0 1,0

5 h. 4,1 3,0 1,0

El consumo de 4 moles de metaperyodato , la producción de 3 moles de ácido fórmico

y de uno de formaldehido, indicó la estructura de cadena abierta para este compuesto.

- 128­

Oxidación de N-nicotinil-D-ríalactofuranosflamina con metagegodato de sodio

Se oxidaron 0,0155 g. de N-nicotinil-D-galactofuranosllamina con 5 ml de meta­

peryodab 0,1 M. Los resultados de la oxidación figuran en la tabla no. 15

{abla no. 15

T 104Na HCOOH HZCOmoles/mol (CXlII)

20' 2,1 0,0 1,0

1 h. 2,6 0,1 1,0

2,5 h. 3,0 0,4 1,0

5 h. 3,5 0,7 1,0

17,5 h. 5,1 2.0 1,0

24 h. 5,4 2,2 1,0

El consumo inicial de dos moles de metaperyodato , sin formación de ácido fórmlco

y al producción de un mol de formaldehído, coinciden con los resultados esperados

para un anillo furanósico.

-129­

ÉMONOLISIS DE TETRA-O-NICOTINIL-L-A RABINO FA (_CI)CON AMONIAC0 ACUOSO

AL 25 %

Aislamientode 1, 1-bisgnicotinamM-1-desoxi-L-arabfitol (CXV)

Se agitaron 35 g. dc tetra-O-nicotinil-L-arabinosa de p.f. 90-60 con 1, 1 1. de

amoniaco acuoso al 25 % hasta disolución, Después de 24 horas a temperatura ambiente

se evaporó el agua a presión reducida y temperatura menor dc 600. El jarabe obtc­

nido se secó en desccador a presion reducida; se maccró con 10 ml de acetato de

etilo y se secó a presión reducida, repitiendo este tratamiento tres veces con acetato

de etilo fri'o (-00 ml cada vez) y por último 6 veces con acetato de etilo hirviente

(2'50ml cada vez). Quedó un jarabe que después d : secado pesó 29,8 g. y a partir

del cual se obtuvieron, por cristalización de isopropanol, 5,9 z. de 1,1-bis(nicotina­

-mido)—1-desoxi—L-arabinitol dc p. f. 195-99, cl cual se recristalizó de etanol dando

p.f. 210-20; después de una recristalizaclón de etanol-agua 5:1 fundió a 231-232Oy7.9

no se observaron nuevos ascensos del p.f. por posteriores rccristalizaciones, LOQD

-9,70 (c 0,5 ; agua) como sc describe en la pag. 130 sc aislaron 0,4 g. más de (CYV)

Rendimiento total 6, 3 g. (28 %).

Análisis (muestra secada a 110o y 1 mm de Hg;sobre P205)

Calculado para C17 H20 N4 O6 : C: 54,25 : H: 5,35 ; N: 14,89

Encontrado C: 54,33 ; H: 5,17 ; N: 14,66

Aislamiento de N-nicotinil-L-aragiosilamina (CXVI)

Por concentración de las aguas madres isopropanólicas de la cristalización de

1, 1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-L-arabinltol, hasta la mitad do].volumen inicial l

cristalizaron 3,7 g. de ácido nicotínico dc p.f. 225-300, el cual se cristalizó de

agua y dió p.f. 230-3o ; las aguas madres sc cvaporaron a presión reducida y el

- 130­

residuo obtenido se secó en dosecador al vaci'o dando 12,0 .3. de un jarabe que se

cromatografió en una columna de celulosa de 4,5 x 90 cm, recogiendo 40 fracciones

de 100 m1 cada una eluyendo con el solvente B y luego 20 fracciones del mismo volu­

men eluyendo con el solvente D. Se evaporó el solvente a presión reducida, se tomó

el residuo con etanol caliente y cada fracción se cromatografió en papel. De las

fracciones 13-15 cristalizaron 2,85 g. de nicotinamida de p.f. 129-300.­

De las fracciones 16-18 se obtuvieron 3,0 g. de una jarabe que por cromatogra­

fi'a en papel dió una mancha de Ff 0,6 (nicotinamida) y otra correspondiente a una

sustancia de Rf 0,41 (solvente B, revelado con el reactivo F).

De las fracciones 19-23 (2,6 g.) cristalizaron 0,49 g. (3,15 %)de N-nicotinil­

-L-arabinc furanosilamina de p.f. ZOO-1°que recristalizada tres veces de etanol no

cambió el p.f., [dJ;O-7,6° (c 0,75 ; agua)Rf 0,41.

Análisis (muestra secada a 110° y 1 mm de Hg sobre P205)

N0Calculaoo para CHI-I14 2 5 ; C: 51,96 ; H: 5,55 ; N: 11,02

Ener ntrado C: 51,76 ; H: 5,59 ; N: 10,84

las fracciones 24-30recristalizaron 0,4 g. de 1,1-bis(nicotinamido)-1­

desoxi-L-arabinitol de p.f. 230-1”, m 0,29 (solvente B)

De las fracciones 31-35 (1,4 g.) cristalizaron 0,6 g. de ácido nicotinico de p.f.

230-20. De las restantes fracciones, 36-60, se obtuvieron 1,05 g. de un jarabe que

por cromatografía en papel dió manchas difusas en la zona del origen.

Se lavó la columna con 1 1. de metanol y 2 1. de agua, obteniendose 0,35 g.

de un jarabe de las mismas caracteristicas cromatográficas que el de las fracciones

36-60.

-131­

Tetra-O-acetil-lg1-bisgnicotinamier1-desoxi-L-arabflnlfix VII)

Se suspendieron 0,20 de 1,1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-L-arabinitol en

1,5 ml de una mezcla 1:1 de anhídrido acético y piridina anhidra y se calentó en

baño de agua hirviente hasta disolución (20 minutos). Después de 24 horas a tempe­

ratura ambiente se evaporñ hasta sequedad en desecador a presión reducida obtenien­

dose unjarabe quepor cristalizaciónde bencenodió agujasde p.f. 136-70,

-60° (c 1,3 ; agua).

Análisis (muestra secada a. 100° y 1 mm de Hg sobre P205)

Calculado para C25 H28 N4 010; C: 55,14 ; H: 5,18; N: 10,29

Encontrado : C: 54,83 ; H: 5,23 ; N: 10,38

Oxidaciónde 1,1-bisgnicotinamid'y-1-desoxi-L-arabirgtol (CXV)con metagegodato

de sodio

Se oxidaron 0,0188 g. de 1,1-bis(niC')tinamido)-1—desoxi—L-arabinitol con 5 ml

de metaperyodato de sodio 0, 1 M siguiendo la técnica habitual. Los resultados obte­

nidos figuran en 1a tabla no. 16

Tabla no. 16

t 10(¿Na HCOOH H2COmoles/mol de (CXV)

00' 3,0 1,9 1.o

1 h. 3,0 1.9 1.0

6 h. 3,0 1,9 0,9

El consun o de tres moles de metaperyodato con formación de 2 moles de ácido

fórmico y 1 mol de formaldehido corresponde a una estructura de cadena abierta

para este compuesto.

-132­

2, 3, 5-Tri-O-acetil-N-nicotinil-L-arabinofuranosilamina (CXVIII)

Se suspendieron 0,15 g. de N-nicotinil-L-arabinofuranosilamina en 2 mi de

una mezcla 1:1 de anhidrido acético y piridina anhidra y se calentó en baño de agua

hirviente hasta disolución (5 minutos). Después de 24 horas a temperatura ambiente

se evapof'o hasta sequedad en desecador a presión reducida, obteniéndose un jarabe

que se lavó tres veces con eter de petróleo 60-70o hirviente y después secado a 80o25

y 0,001 mm de Hgpresentó un —34°(c 1,1 ; cloroformo)D

Analisis (muestra secada a 80° y 0,001 mm de Hg)

Calculado para C17 ng N2 0 C: 53,82 ; H: 5,05 ; N: 7,398 2

Encontrado : C: 53,58 ; H: 5,39 ; N: 7,55

Oxidación de N-nicotinil-L-arabinofuranosilamlna con metagegodato de sodiode (CXVI)

En un matraz aforado de 10 m1, termostatizado a 0° y siguiendo la técnica

habitual, se oxidaron 0,0127 g. de N-niCOtinil-L-arabinofuranosilamina con 3 ml

de metaperyodato de sodio 0, 1 M. Los resultados figuran enl la tabla no. 17

Tabla no. 17

t T 104Na HCOOH H2COmoles/mol de (CXVI)

15' 0o 0,1 0,0 0,0

30' " 0,2 0,0

1 h. " 0,3

3 h. " 0,6

5,5 h. " 0,9

7,5 h. " 1,0 0,0 0,0

22 h. " 1,0

27h. 200 1,01 0,0 0,0

-133-.

El consumo de 1 mol de metaperyodato de sodio a las 7 horas de oxidación, sin

producción de ácidotótmico, valores que se mantuvieron después de elevar la

temperatura a 20°, coinciden 00.1los esperados para un anillo furanósico.

- 134­

¿XMONOLISISDE TEEAÉNICOTINIL-D-XILOSA (CIILCON AMONIACOACUOEQ

AL 25 %

Aislamiento de 1!1-bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-xilit_ol (CXIX)

Se agitaron 32 g. de tetra-O-nicotinil-D-xilosa de p.f. 155-7o con 1 1. de amo­

niaco acuoso al 25 % hasta disolución. Después de 24 horas a temperatura ambiente

se evaporó el agua a presión reducida ty temperatura menor de 60°. El jarabe obte­

nido se secó en desecador a presión reducida, se maceró con acetato de etilo y se

secó a presión reducida, repitiéndose este tratamiento tres veces. Se extrajo luego

dos veces con acetato de etilo frio (50 ml cada vez) y por último 7 veces con acetato

de etilo hirviente (150 ml cada vez). El residuo después de secado en desecador a

presión reducida pesó 25,2 g. . Por cristalización de isopropanol se separaron 1,6 g.

de un sólido amorfo de color pardo que cromatografiado en papel y revelado con el

reactivo F presentó una mancha difusa en la zona del origen. La solución isopropa­

nóñica restante se concentró hasta la mitad de su volumen a presión reducida y por

enfriamiento a 0o cristalizaron 1,6 g. de ácido nicotfnico de p.f. 220-5o que se

recristalizó de agua y dió p.f. 230-20. El isopropanol madre se evaporó a presión

reducida hasta sequedad, obteniéndose 18,9 g. de un jarabe, el cual se cromatogra­

fió en una columna de celulosa de 4,5 x 90 cm. y eluyendo con el solvente B se

recogieron 40 fracciones de 100 ml cada una; se evaporó el solvente a presión redu­

cida, se tomó el residuo con etanol caliente y se cromatografió en papel cada frac­

ción. De las fracciones 18-22 (3,6 55;)cristalizaron 2,78 g. (13,2%)de 1,1-bis(ni­

cotinamido)-1-desoxi-D—xilitol(leang. 202-50 que se recristalizó tres veces de2

metanol y dió p.f. 211-20, [Gap-4° (c 0,72 ; agua). Rf 0,39 (solvente B)

Análisis (muestra secada a 110o y 1 mm de Hg sobre P205)

- 135 ­

Calculado para C H N4 017 20 C: 54,25 ; H: 5,23 ; N: 14,896 :

Encontrado : C: 54,20 ; H: 5,35 ; N: 14,72

De las fracciones 13-17 (10,1 gr.) cristalizaron 3,5 g. de ácido nicoti’nicode

p.f. 228-300 ; las aguas madres se llevaron a sequedad por evaporación a presión

reducida, obteniendos< 7,4 g. de un jarabe que por cromatografía en papel presentó

tres manchas de Rf 0,59 (nicotinamida), 0,47 y 0,39 con solvente B; el jarabe se

extrajo 7 veces con acetato de etilo hirviente (40 ml cada vez) para eliminar la

nicotinamida. El residuo se secó‘en desecador a presión reducida, quedando 2, 3 g.

de un jarabe que, con el fin de separar el producto de Rf 0,47 , se recromatografió

en una columna de celulosa de 4,5 x 64 cm y se eluyó con el solvente E recogiendo 40

fracciones de 50 ml cada una con lo que fué posible obtener fracciones cromatogra­

ficamente puras ni productos cristalinos.

De las fracciones 24-30 de la primera cromatografía (2,3 ,3.) cristalizaron 0,9 g.

de ácido nicoti’nicode p.f. 230-1o ; las aguas madres se llevaron a sequedad por

evaporación a presión reducida obteniendo 1,2 g. de un jarabe que por cromatogra­

fi’aen papel presentó una mancha no reductora dc Rf 0,35 (solvente D) revelable con

el reactivo F y no revelable con el reactivo G, pero no se pudo obtener ningún pro­

ducto cristalino de este grupo de fracciones.

De las fracciones 30-40 se obtuvieron 0,9 g. de un jarabe que por cromatografía

en papel presentó manchas difusas en la zona cercana al origen. Se lavó la columna

con 1 1. de metanol y por último con 2 1. de agua y_al evaporar los li’quidos de lava­

do se obtuvieron 0,8 g. de un jarabe que presentó las mismas características cro­

matográficas que el de las fracciones 30-40.­

- 136­

Tetra-O-a_cetil-1 , 1-bis(nicotinamido)-1-dosoxi-D-xilg_ol (CXX)

Se suspendieron 0,2 g. de 1,1—bis(nicotinamido)-1-desoxi-D-xilitol en 1,5 ml

de una mezcla 1:1 de anhídrido acético y piridina anhidra y se calentó en baño de

agua hirviente hasta disolución (5 minutos). Después de 24‘horas a temperatura

ambiente se llevó a sequedad.por evaporación cn desecador a presión reducida,

obteniéndose un jarabe que se lavó tres veces con eter de petróleo 60-700 hirviente

y que presentó una única mancha de Rf 0, 12 por cromeatografl'a en placa delgada de2 .

silica gel, cluyendocon benceno-metano]9-1 —35o(c 1,0 ; cloroformo)

Análisis (muestra secada en navecilla a 80o y 0,001 mm de Hg)

Calculado para C25 H28 N4 010 z C: 55,14 ; H: 5,18 ; N: 10,29

Encontrado C: 55,08 ; H: 5,39 ; N: 10,30

Qxidación de lll-bis; nicotinamido);1-desoxi-D-xilitol (CXIX)con metaperyodato

de sodio

Se oxidaron 0, 0263 g. (le 1, 1-bis(nicotinamido)—1-cÏesoxi-D-xilitol con 5 ml

de metaperyodato de sodio 0,1 M siguiendo la técnica habitual. Los resultados

figuran en la tabla no. 18

Tabla no. 18

T IO4Na HCOOH H2COmoles/mol de (CXIX)

30' 2,9 1,8 1.o

1 h. 3,1 2,0 1,1

6 h. 3,1 2,0 1,1

El consumo de 3 moles de metaperyodato de sodio con formación de 2 moles de

ácido fórmico y un mol de formaldchido, corresponden a una estructura de cadena

abierta de cinco átomos de carbono con tres hidmxilos secundarios y uno primario

vecinos.

-137­

FESUMEN

1) Seáectuó una revisión de las publicaciones sobre la sintesis de ésteres nicoti’nicos

de polialcoholes y de monosacáridos. Las sintesis publicadas tuvieron, en general,

como objetivo el estudio de las propiedades farmacológicas de dichos ésteres.

2) Se analizaron los distintos aspectos estudiados hasta el presente sobre la reacción

del amoniaco con acetatos y benzoatos de monosacáridos, con formación de 1, 1-bis

(acilamido)-1-desoxi—alditolesy N-acil-glicasilaminas.

3) Se hizo una revisión de las publicaciones sobre las transformaciones que sufren

los azúcares libres en medio amoniacal y en particular sobre aquellas relaciona/l":- son

la formación de compuestos heteroci'clicos: pirazinas e imidazoles sustituidos.

4) Se llevó a cabo la sintesis de la penta-O=nicotinil-D-glucosa (XCVIII)por tratamiento

de la D-glucosa con una mezcla de clorhidrato de cloruro de nicotinilo y piridina en

medio clorofórmico, obteniendo 72,6 % de (XCVIII)pura y de punto de fusión superior

al publicado en la literatura (8). Utilizando el misrro método que en el caso anterior

se preparó, con un rendimiento del 88%, la penta-O-nicotinil-D-galactosa (C) como

un sólido amorfo de + 133° ; este producto habi’asido descripto como un jarabe

por Strong y col. (9) quienes no indicaron constantes físicas.

5) Se sintetizó la penta-O-nicotinil-D-manosa (XCIY)(rend. 72,5 %), la tetra-O-nico­

-tinil-—L-arabinosa (CI) (Rand. 76 %)y la tetra-O-nicotinil-D-xilosa (CII) (Rend. 79%),

compuestos que no han sido descriptos en la literatura.

6) Se estudió la reacción de amonolisis, con amoniaco acuoso al 25 %. de los ésteres

nicotfnicos sintetizados; el producto de mayor rendimiento de cada reacción se aisló

por cristalización, mientras que las demás sustancias fueron separadas por croma­

tografía en columna de oelu‘osa. Se sintetizaron además los derivados acetilados de

los productos de amonolisis.

-138—

De la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-glucosa se aisló 16 %de N-nicotinil­

-D-glucofuranosilamina (CHI), 3,8 ‘Z’cde 1, 1-bis (nicotinamido)-l-desoxi-D-glucitol

(CIV)y 7,6 7€de 2-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-6—(D¡M-2, 3,4-trihidroxibutil)­

pirazina (XC).

De la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-mano sa se obtuvo 22,5 ‘70de 1, l-bis

(nicotinamido)-1—desoxi-D-manitol (CX)y 3,8 %dc 2-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-6­

(D-m-Z, 3,4-trihidroxibutil)-pirazina(XC).

De la amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-galactosa se aisló 28 %de 1, l-bis

(nicotinamido)-1-desoxi-D-galactitol (CXII)y 1,4 %de N-nicotinil-D-galactofuranosi­

lamina (CXIU).

De la amonolisis de la tetra-O-nicotinil-L-arabinosa se aisló 26 %de 1, 1-bis

(nicotinamido)-1-desoxi-L-arabinitol (CXV)y 3, 15 ‘ïcde N-nicotinil-L-arabinofurano­

silamina (CXVI).

De la amomlisis de la tetra-O-nicotinil-D-xilosa se aisló, por cromatografía en

columna de celulosa, 13,2 ‘7/rde 1,1-bis(nicotinam1do)-1-desoxi-D-xilitol (CXIY).

7) Las estructuras de cadena abierta de los 1, 1-bis (nicotinamido)-1-desoxi-alditoles

y la naturaleza de los ciclos de las N-nicotinil-glicofuranosilaminas se determinó por

oxidación ccn ¿netapcryodato de sodio, discutiendo las posibles etapas de sobreoxidación

de estas últimas.

8) La estructura dc la 2-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-S-(D-M—2, 3.4-trihidroxibutil)

-pirazina (XC),aislada de las amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-glucoSay de la

penta-O-nicotinil-D-manosa, se demostró estableciendo la ubicación de los sustituyentes

en el anillo pirazi’nico por oxidación con agua oxigenada con lo que se obtuvo el ácido

2,6-pirazindicarboxflico (CV'II),que se identificó por su punto de fusión y mediant

—139—

la preparación de su ester metïlico (C‘VIII)por tratamiento con diazometano. El número

y la ubicación de los grupos hidroxilo en las cadenas laterales se determinó por oxida­

ción con metaperyodato de sodio y por su espectro de R. M.N. , que resultó análogo

al de su isómero, 1a 2-(D-arabino -tetrahidroxigutil)-5-(D-e¿ritrg;-2, 3,4-trihidroxibu­

ti1)-pirazina , cuya estructura ya había sido demostrada por otro camino por Kuhny

col. (80). Se preparó el derivado heptacetilado de (XC), cuyo espectro de R:-M-.-N:

confirmó la estructura propuesta.

9) Se discutieron las posibles reacciones que podrían conducir a la formación de la

2-(D-arabino-tetrahidroxibutil)-6-(D-_esitp—2, 3, 4-trihidroxibutil)npirazina (XC)en la

reacción de amonolisis de la penta-O-nicotinil-D-g1ucosa y de la penta-O-nicotinil-D­

-manosa.

10) Se discutieron los resultados obtenidos comparándolos Conlos publicados para las

reacciones de amonolisis de benzoatos de monosacáridos y se llegó a la conclusión

que el grupo nicotinilo favoreceri’a la formación de nicotinamida, lo cual reduciría =.:-f

número de grupos acilo disponibles para la migración intramolecular 0-9 N.

-- 140 —

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INTRODUCCIONESTEBES NICOTINICOS DE POHIALCOHOLES Y IHONOSACARIDOS . . . . . 2

LA REACCIONDEL AMONIACC ACILDEBIV/‘COS1:3

RAEONOSACARIDOS

A.- Formación de 1, 1-bis (acilamido)-1-desoxi-alditoles por

amonolisis de esteres dc monosacáridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .,. . 4

B. - Migración intramolecular 0->N . . . . . . . . . . . .

Mecanismo de la formación de 1,1-bis (acilamido)-1-desoxi

alditoles . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 8

N-acilglicosilaminas.... ........... .... 23

C.- 1'-¡.=.ígraciónintramolecular C --'O de grupos benzoilo . . . . . . . . . . . . 34

D . - transesterificación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40

1’.CCION PEL ¿MONIA CO SOBRE ïIEBATOS DE CAFBONO . . . . . . . . . . . 43

Isomerización . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43

Zeshid‘ratacióny transposiciones intramolecul ares, formación

dedesoxiosonas. .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 44

¡.-1cïolización-desaldolización .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . ._. . . .. . . . . . . . . . 47

Formación de compuestosheterocfclicos . . . . . .. . . . .. .. . .. ..... 47

Formacióndcimidazoles 50Formacióndepirazinas 59

Aplicaciones de la reacción del amoni‘acocon hidratos de

carbono..... .... ......... .... 67

agLEESCFIT-CION NUESTRAS S3"PSFIENCIAS E INTEFPFETACION p

DE LOSFESULTAEOS .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 68

Síntesis de ésteres nicotïnicos de monosacáridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68

Amonolisis de los ésteres nicotïnicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69

Demostración de las estructuras 6.3los 1.1-bis (nicotinamido)­

l-desoxi-alditoles y N-nicotinil-glicosilaminas por oxidación

conmetaperyodatodesodio.................. 75Demostración de la estructura de la 2(D-arabino-tetrahidroxibutil)­

5-(D-eritro-2, 3,4-trihidroxi‘out il)- pirazina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82

La formación de la 2-(D—arabino-tetrahidroxibutil)—6-(i -eritro—

2, '3,4-trihidroxibutil)—pirazina en la reacción de amonolisis de la

penta-O-nicotinil-D-=glucosa y de la penta-O-nicotinil-D-manosa . . . . . 93

Efecto del grupo nicotinilo cn la reacción dc amonolisis . . . . . . . . . . . . . . . . 99

La formación de ácido nicotïnico en la reacción de amonolisis . . . . . . . . . . 102

PAP-TE¿EXPERIMENTAL-n“.... ..........ácido2,6-pirazindicarbox1’lico . . . . . . . . . . . . . ........116

clorurodenicotinilo...... ......... .... ......105

2, S-dicarbometoxipirazina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 117

1, 1-bis (nicotinamído)—1—desoxi-L-arabinitol

aislamiento. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..129

acetilación.................... . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . ..131

oxidación con metaperyodato de sodio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 131

1, l-bis (nicotinamido)-1-dcsoxi-D-galactitol

aislamiento........................... .. .. .... .. .. ........124acetilación........oxidaciónconmetaperyodatodesodio

pag.

1, l-bis (nicotinamido)—1-desoxi-Z-fá'ucitolaislamiento .... 110acetilación.............................. 114oxidaciónconmetaperyodatodesodio 114

1, l-bis (nicotinamido)-1-desoxi-D—manítolaislamiento .... 121acetilación...... .... .......... .......123oxidaciónconmetaperyodatodesodio . . . . . . . . . . 123

1, l-bis (nicotinamido)-l-desoxi-E -xilitol

aislamiento. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .....134

acetilación.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 136

oxidación con metaperyodato de sodio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 136

N-nicotinil- L-arabinofuranosilaminaaislamiento ........ 129acetilación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..132

oxidaciónconmetaperyodatodcsodioN—nicotiníl—D-galactofuranosilamina

aislamiento........... ..... ............125oxidaciónconmetaperyodatodesodio

N-nicotinil-D-glucofuranosilamina

aislamiento....... ........ ....... ......109acetilación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..11'3

oxidación con metapcryodato de sodio ... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 113

3 '52°;s::.:-‘:.

penta-C-nicotinil-D-galacto sa .... 107amonolisis 124

penta-O-nicotinil-D-glucosa

síntesis.......................... 105amonolisis......................... 109

penta-O-nicotinil-D-manosasíntesis....amonolisis......... .........

2-(D-arabino-tetraacetoxibutil)-6-(D-eritro—2 , 3,4-triacétoxi­

butil)—pirazinasíntesis.....espectrodeR.M.N. ......................90,118pesomoiecular............... .....

2-(3 -ara’oi_no-tetrahidroxibutil)—5-—(D—eritro-2, 3, 4-trihidroxi­

butil)—pirazina

síntesis........... ............... ......118

espectrodeR.M.N. ....................86,119espectroU.V............. ....119oxidación con metaperyodato de sodio . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .119

2-(D-arabino-tetrahidroxibuti1)-6—(D-eritro—2, 3,4-trihidroxi­

butíl)-pirazina

aislamiento............................. 121acetilación................................. .......117

. U. .4 o =o a a Ioa . z. . ¡,{o .: l.1' . un .'< H o. l'a . ' .I. . l .1..n I1 n 0'. .¡a ... o o 0.a

Pag ­demostracióndelaestructura....................................115

RQMJN.OICIOICOOÓO.IÍOÁOOOI.‘OOOOIIIUOI'...'0'..85,115

espectroU.V............................oxidaciónconmetaperyodatodesodio

tetra-O-nicotinil-L-arabino sa

o.nouoaoooaa.¡o00IIoIoaooctu...utonioooo-ooooooooo-osoloe

.......-.oo.-.....o..........u..o.......-oo...-o.o.129tetra-O-nicotinil-D-xilo sa

...109síntesis.................................noo-ouocoolovoosocoloool¡osito-ooonoltosoooaoon¡0.134

IOOI'UOIIIOOOIOIOVOIOIIOOOIOOOOOO.CIIOOOIOIOIOIIOIoiiotla']

REFERENCIASBIBLIOGRAFÏCÁS..................................140