micro esterilización

8/18/2019 Micro Esterilización

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DIAGRAMA DE FLUJO

Autoclave

Horno Pasteur

En un matraz Erlenmeyer

preparar 20 mL de

suspensión bacteriana.

En una placa de agar nutritivo dividirá a la

mitad y rotularla como antes y después

Sembrar en “Antes” la suspensión

bacteriana con ayuda de un hisopo

estéril, rotulando inicialmente con una

línea media prosiguiendo de un lado

hacia otro de modo curveado sobre la

línea media.

Esterilizar el matraz de suspensión

bacteriana en Autoclave bajo las

condiciones 121°C/15 psi/15 min.

Realizando un purgado

Sembrar en “Después” la

suspensión bacteriana con ayuda

de un hisopo estéril, utilizando la

misma técnica que con “Antes”. Incubar de 24/48 hrs a 37°C en

estufa bacteriológica

Observar crecimiento

Preparar caldo nutritivoEn 1 matraz Erlenmeyer de 125 mL poner

un tapón de aluminio

Y verter caldo nutritivo no estéril e incubar

30 min/37°C


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Filtración por membrana

Luz Ultravioleta (UV)

Preparación del medio de

cultivo (caldo nutritivo)Rotular agar nutritivo

Con ayuda de un filtro de .20 μm filtrar el

medio de cultivo recibiéndolo en una placa de

agar nutritivo

Incubar 24/48hrs a 37°C en estufa

bacteriológica

Sembrar caldo inoculado de

Escherichia coli en placas de agar

nutritivo rotuladas respectivamente

de 1min/ 5 min/10 min/ 15 min/30

min y 45 min que serán repartidas

por mesa

Exponer a Luz UV de acuerdo al

tiempo asignado para cada una

de las placas


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OBJETIVO GENERAL:

Seleccionar los métodos de esterilización adecuados para las diversasnecesidades del laboratorio de microbiología y poder comprobar la efectividad delproceso de esterilización.

OBJETIVOS PARTICULARES

- Explicar el concepto de esterilización y su utilidad en microbiología.- Preparar correctamente el material que se someterá a esterilización.- Reconocer las características de cada método de esterilización.

Resultados

UTILIZACIÓN DE LA AUTOCLAVE

FOTOGRAFÍA 1.0ENCENDIDO Y PREPARACIÓN DEL

MATERIAL

FOTOGRAFÍA 1.1NIVELACIÓN Y CERRADO DE LA

AUTOCLAVE

FOTOGRAFÍA 1.2PURGADO

FOTOGRAFÍA 1.3TOMA DE PRESIÓN Y TIEMPO

FOTOGRAFÍA 1.4 APERTURA

FOTOGRAFÍAS 1.0-1.4 UTILIZACIÓN

DE LA AUTOCLAVE


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HORNO PASTEUR

FOTOGRAFÍA 1.7 MATRAZ CON MEDIO NO ESTÉRIL DESPUÉS DE LAINCUBACIÓN COMPARADO CON MATRAZ ESTERILIZADO DE AUTOCLAVE

FILTRACIÓN POR MEMBRANA

FOTOGRAFÍA 1.8 PLACA DE AGARNUTRITIVO DESPUÉS DE LA INCUBACIÓN


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LUZ ULTRAVIOLETA (UV)

FOTOGRAFÍA 1.9 SECUENCIA DE TIEMPO DE AGARES NUTRITIVOSDESPUÉS DE LA INCUBACIÓN.

FOTOGRAFÍA 2.0 SECUENCIA DE TIEMPO 1, 5, 10, 15, 30 MINUTOSDESPUES DE LA INCUBACIÓN.


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ANÁLISIS DE RESULTADOS

Durante la práctica esterilización se utilizó la suspensión bacteriana “caldo nutritivo” el cual es un

medio líquido, elaborado de acuerdo a la fórmula del APHA y en el cuál se pueden desarrollar gran

variedad de microorganismos que no son muy exigentes en cuanto a sus necesidades

nutricionales como lo es laSe investigaron previamente para la realización de esta práctica conceptos básicos de los tipos de

esterilización, que en este caso se utilizó 4 métodos físicos: Calor húmedo, calor seco, filtración y

radiación no ionizante

Calor húmedo (AUTOCLAVE)

La autoclave que posee los requisitos indispensables para eliminar los microorganismos que

pudieran haber quedado en el medio ya que la acción mortal del vapor se deriva del calor latente

que se libera cuando se condensa sobre una superficie enfriada y se eleva la temperatura dedicha área, la temperatura óptima del autoclave es de 121°C/15 psi/15 min. Los microorganismos

mueren por la coagulación de sus proteínas. Es por eso que en la placa de agar nutritivo en el

“antes” hubo solo 2 UNIDADES FORMADORAS DE COLONIA (UFC) la mínima cantidad de

crecimiento bacteriano se debe a que la concentración de la bacteria era mínima. En la parte del

“ después” de haberse realizado una esterilización en la autoclave no hubo UFC (UNIDAD

FORMADORA DE COLONIA).

Calor seco (HORNO PASTEUR)

El horno Pasteur es un equipo que está dentro del grupo de esterilizaciones con el calor seco. El

airé ardiente generado por el calentamiento a base de resistencia eléctricas produce; La disecación

de la células, efectos tóxicos por niveles elevados de electrolitos. Por tal motivo provoca procesos

oxidativos, fusión de membrana, y desnaturalización de la membrana. Se le considera un método

de estilización ya que alcanza temperaturas de hasta 250 °C, considerando que los

microorganismos y las esporas se mueren a los 121°C.

A diferencia de la autoclave, el horno Pasteur no utiliza presión y el tipo de calor que genera es

seco. Esto permite que gracias a que utiliza resistencias para generar el calor puede alcanzar

temperaturas mayores a comparación del autoclave.

En nuestra práctica esterilizamos un matraz Erlenmeyer, con un tapón de aluminio; Debido que a

altas temperaturas el papel se calcinera.


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Para poder tener una estilización eficiente y homogénea solo se colocan dentro del horno Pasteur

en la carga, objetos iguales. Debido a que sino por la diferencia del tamaño el calor no es

homogéneo y no permite una estilización adecuada.

Las condiciones para la esterilización del Horno Pasteur son de:

100 °C por 2 horas

180 °C por 1 hora

250 °C por 5 horas (despirogenacion)

Para corroborar que nuestro equipo fue esterilizado, se utiliza indicadores. En caso del Horno

pastear. Se utilizan indicadores biológicos y certificaciones.

Las certificaciones las realiza un técnico especializado, que coloca varios termómetros en puntos

clave del Horno Pasteur. Y corrobora que el calor circule a la misma temperatura en todos los

puntos del Horno (homogéneo).

Los controles bilógicos para el Horno Pasteur son bacterias Extremopphilas: Se colocan en forma

de ampolletas que están separadas en dos. De un lado contiene un medio óptimo para el

crecimiento de las bacterias y del otro tienen a la bacteria Bacillus Subtilis o Clostina. Se colocan

junto a la carga que se esteriliza. Cuando se sacan del Horno Pasteur que finalizo el tiempo. Se

rompe la ampolleta y se unen los dos compartimentos. Si las bacterias sobrevivieron crecerán en el

cultivo a 37°C en el medio. Se manifestara provocando un cambio de color en la ampolleta debido

a un cambio en el pH. Esto significará que la estilización no funciono.

Filtración por membrana

En nuestra práctica utilizamos la técnica de filtración para esterilizar un caldo bacteriano. El

principio de la filtración es eliminar por remoción completa los microorganismos particulares

dependiendo el diámetro del poro, que se encuentra en un líquido o en un gas.

En la esterilización por filtración existen dos tipos; por profundidad. Que se utiliza para materiales

fibrosos o glándulas que se usan para formar una capa grasosa rellena de canales o, por

membrana. Que con una capa o gasa ligeramente superior a 0.1 mm fabricado a partir de acetato

de celulosa, nitrato de celulosa o policarbonato.

En nuestra filtración utilizamos una membrana con un poro de 0.22 Nanómetros. Esto permite que

nuestras bacterias queden atrapadas. Y nuestro caldo sea esterilizado. Sin embargo los virus y

bacterias sin capa. Ya que estas son más pequeñas o se pueden escabullir entre los huevos. Para

eso se utilizan membranas mucho más pequeñas.


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Radiación no ionizante (Luz Ultra violeta)

El sembrado de caldo inoculado de Escherichia coli en placas de agar nutritivo rotuladas

respectivamente de 1min/ 5 min/10 min/ 15 min/30 min y 45 min fueron expuestas a luz UV la cual

es una radiación no ionizante, esta luz lesiona el DNA de las células expuestas por que forman

enlaces entre bases de pirimidina adyacentes. La longitud de onda UV más eficaz para eliminar a

los microorganismos es de alrededor de 260nm, el poder de penetración de estoy rayos es muy

bajo por lo que los microorganismos deben estar expuestos directamente para que mueran. La

dosis que se requiere para matar 99.19% de E. Coli, es de 12,000 micro vatios/segundo/cm2.

Las placas salieron con crecimiento bacteriano ya que el caldo nutritivo del que fueron extraídas

era no estéril.

CONCLUSIONES:

Por medio de esta práctica se logró identificar los tipos de esterilización realizando los métodos

físicos más óptimos y accesibles con el fin de poder comprobar la efectividad de cada uno, ya que

posteriormente en las prácticas siguientes podamos utilizar la que más nos convenga.

BIBLIOGRAFIA

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1999.

Proposed Guidelines for Goals for Working Safely with Mycobacterium tuberculosis in Clinical,

Public Health, and Research Laboratories.

Seguridad para los Laboratorios Biomédicos. Lineamientos, prevención y protección. Castellanos

C, López M-Marín LM, Rosales C, Ladrón de Guevara O, Herion P, Osorio A, Garduño Soto G.

Instituto de Investigaciones Biomédicas. UNAM, 1999.

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No. (CDC) 93-8395. MMWR 1994; 43 (No. RR-13). 3a ed. USA Department of Health and Human

Services, Public Health Service. CDC y NIH. Atlanta, 1994.

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