ESQUEMA SIMPLE, FIABLE Y RENTABLE DE

IDENTIFICACIÓN PARA LEVADURA EN EL

LABORATORIO CLÍNICO

Agar cromogenico

Agar harina de maíz-Tween 80

API353 AISLAMIENT

OS

PROCEDIMIENTOS DE REFERENCIA •Utilizan y los estudios

morfológicos, bioquímicos y temperatura.

•No son viables para el laboratorio clínico.

•Duran varias semanas

SISTEMAS ENVASADOS•Ampliamente utilizados•Son caros•Están limitadas por el

tamaño de sus bases de datos

SISTEMAS AUTOMATIZADOS•Mismas limitaciones

IDENTIFICACION DE ESPECIES

• SE UTILIZÓ EL ASPECTO DE LA COLONIA EN CMA EN COMBINACIÓN CON MORFOLOGÍA EN AGAR HARINA DE MAÍZ-TWEEN 80 Y SE COMPARARON LAS IDENTIFICACIONES CON LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON EL SISTEMA DE API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C.

MATERIAL Y METODOS

• MEDIOS DE AISLAMIENTO RUTINARIO.• LOS AISLAMIENTOS FUERON SUBCULTIVADOS EN ASD.• SE INCUBARON A 30° C DURANTE 48 H.• SE AJUSTÓ A ESCALA DE MCFARLAND CON UN

ESPECTROFOTÓMETRO.• SE SEMBRÓ EN UNA PLACA DE CMA.• CTA FUE INOCULADA POR EL MÉTODO DE DALMAU • LAS TIRAS DE API SE INTERPRETARON CON EL SOFTWARE DE

IDENTIFICACIÓN.

RESULTADOS

CÁNDIDA ALBICANSCARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

-COLONIAS DE COLOR VERDE; APARIENCIA DISTINTIVA CONSISTENTECARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

-PRESENTA CLAMIDOSPORAS , ABUNDANTES PSEUDOHIFAS, ALGUNAS HIFAS VERDADERAS, AGRUPACIONES DE BLASTOSPORAS JUNTO A PSEUDOHIFAS LA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:-LA IDENTIFICACIÓN ES PRECISA CON AMBOSIDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

-UNA CEPA FUE IDENTIFICADA COMO C. PARAPSILOSIS

CÁNDIDA DUBLINIENSIS

CARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

-COLONIAS DE COLOR VERDE OSCURO

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

-PRESENCIA DE ABUNDANTES CLAMIDOSPORAS PSEUDOHIFAS, ALGUNAS HIFAS VERDADERAS, LAS AGRUPACIONES DE BLASTOSPORAS JUNTO PSEUDOHIFAS

LA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

- LA IDENTIFICACIÓN ES PRECISA CON AMBOS

IDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

- NO SE ENCUENTRA EN LA BASE DE DATOS API, IDENTIFICADO COMO CÁNDIDA SAKE CON BAJO NIVEL DE CONFIANZA

CÁNDIDA TROPICALISCARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

-AZUL OPACO, COLONIAS A VECES COLOR ROSA; TODOS DESARROLLADOS DE HALO PÚRPURA DE PIGMENTO QUE DIFUNDE EN AGAR CIRCUNDANTE; ASPECTO DISTINTIVO

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

-PSEUDOHIFAS ABUNDANTE CON FRECUENCIA SE IRRADIA CON RACIMOS DE BLASTOCONIDIOS EN EL CENTRO; ASPECTO VARIABLE

LA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

-LA IDENTIFICACIÓN PRECISA CON CMA

IDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

- IDENTIFICA TODAS LAS CEPAS COMO C. TROPICALIS

TRICHOSPORON BEIGELIICARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

-DIMINUTAS COLONIAS DE ÁSPERO, SUCIO AZUL-GRIS DE ASPECTO DISTINTIVO Y SECOCARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

-PSEUDOMICELIO Y ABUNDANTE MICELIO VERDADERO RUPTURA EN ARTROSPORAS; APARIENCIA DISTINTIVALA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

- IDENTIFICACIÓN PRECISA CON AMBOSIDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

- IDENTIFICA TODAS LAS CEPAS COMO T. BEIGELII

CÁNDIDA KRUSEICARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

-COLONIAS GRANDES, DIFUSAS DE COLOR ROSA PÁLIDO PLANAS CON SUPERFICIES MATE; APARIENCIA DISTINTIVACARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

- PSEUDOMICELIO AMPLIO RAMIFICADO CON CADENAS DE CÉLULAS ALARGADAS QUE DAN LA APARIENCIA EN FORMA DE ÁRBOL; CADENAS EN RACIMOS DE BLASTOSPORAS JUNTO CON PSEUDOHIFAS; APARIENCIA DISTINTIVA CONSISTENTELA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

-PRECISA IDENTIFICACIÓN CON AMBOSIDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

- LAS CEPAS IDENTIFICADAS COMO C.KRUSEI CON UN 50% CONFIANZA

CÁNDIDA GLABRATACARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

-COLONIAS GRANDES DE COLOR ROSA PÁLIDO A PÚRPURA BRILLANTECARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

- SIN PSEUDOHIFAS O HIFAS; CÉLULAS DE LEVADURA SON; 2,5 X 4UM; APARIENCIA DISTINTIVA CONSISTENTELA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

- IDENTIFICACIÓN PRECISA, MORFOLOGÍA ESENCIALIDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

- IDENTIFICA TODAS LAS CEPAS COMO C.GLABRATA

C. PARAPSILOSISCARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

- COLONIAS DE BLANQUECINO A COLOR ROSA PÁLIDO; ASPECTO VARIABLECARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

-CADENAS RAMIFICADAS DE LAS CÉLULAS ALARGADAS CON RACIMOS DE BLASTOSPORAS; CÉLULAS GIGANTES OCASIONALES; ASPECTO VARIABLELA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

-NO SIEMPRE CAPAZ DE IDENTIFICARIDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

- IDENTIFICA TODAS LAS CEPAS COMO C.PARAPSILOSIS

C. NEOFORMANSCARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

- COLONIAS DE COLOR ROSA, A VECES MUCOIDESCARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

- SIN PSEUDOHIFAS O HIFAS; GRANDES CÉLULAS DE LEVADURA ESFÉRICA; 3-7,5 UM DE DIÁMETRO; ASPECTO DISTINTIVOLA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

- IDENTIFICACIÓN PRECISA, MORFOLOGÍA ESENCIALIDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

- IDENTIFICADAS COMO C.NEOFORMANS

CANDIDA GUILLIERMONDII

CARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

- COLONIAS PEQUEÑAS DE COLOR ROSA A PÚRPURA; ASPECTO VARIABLECARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

- PSEUDOHIFAS CON RACIMOS DE BLASTOSPORAS DE ASPECTO VARIABLELA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

- NO SIEMPRE SE PUEDEN IDENTIFICARIDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

- API32C IDENTIFICA CEPAS CON 53,7% CONFIANZA

SACCHAROMYSES CEREVISIAE

CARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

- PEQUEÑAS COLONIAS PURPURASCARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

- CÉLULAS OVALES CON MUY CORTA BROTACIÓN MULTILATERALLA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

- IDENTIFICACIÓN PRECISA DE LAS CEPAS EXAMINADAS, MORFOLOGÍA ESENCIALIDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

-IDENTIFICO UNA CEPA COMO CRYPTOCOCCUS LAURENTII

PROTOTHECA WICKERHAMII

CARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA EN CMA:

- GRANDES CÉLULAS ESFÉRICAS DE TAMAÑO VARIABLE, QUE CONTIENE, ALGUNOS ESPORANGIOS; ASPECTO DISTINTIVOCARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS EN CTA:

- GRANDES CÉLULAS ESFÉRICAS DE TAMAÑO VARIABLE, 2-16, MM, QUE CONTIENE ALGUNOS ESPORANGIOS; ASPECTO DISTINTIVOLA IDENTIFICACIÓN CON CMA ADEMÁS CTA:

- IDENTIFICACIÓN PRECISA, MORFOLOGÍA ESENCIALIDENTIFICACIÓN POR API 20C AUX O EL SISTEMA API 32C:

- NO SE ENCUENTRA EN LA BASE DE DATOS DE LA API; IDENTIFICADO LA CEPA COMO C.GLABRATA

DISCUSIÓN

• C. GLABRATA NO PODÍA DISTINGUIRSE POR SU APARIENCIA EN PLACAS CMA.

• C. KRUSEI FIABLE SE PUEDE IDENTIFICAR CON LA COMBINACIÓN DE CMA Y CTA, EN API NO FUNCIONAN CORRECTAMENTE.

• C. TROPICALIS EN CMA PERMITE LA DISCRIMINACIÓN DE ESTA ESPECIE CON CONFIANZA> 99%.

• TRICHOSPORON BEIGELII VARIABLE, PERO DISTINTIVA EN CMA CON PEQUEÑAS COLONIAS DE ASPECTO SECO, Y LA FORMACIÓN DE ARTROCONIDIAS EN CTA ES CONFIABLE.

• C. NEOFORMANS COLONIAS EN CMA SON UN COLOR DE ROSA LEVADURA REDONDAS GRANDES, A MENUDO CON LA PRESENCIA DE LAS CÁPSULAS.

• P. WICKERHAMII TIENE MORFOLOGÍA SIMILAR A LAS LEVADURAS EN SABURAUD Y AGAR SANGRE, API IDENTIFICA COMO C. GLABRATA PORQUE AMBAS ESPECIES ASIMILAN SÓLO GLUCOSA Y TREHALOSA.

• C. DUBLINIENSIS A 42 ° C ES POBRE RESPECTO A LA DE C. ALBICANS Y C. DUBLINIENSIS NO CRECEN EN ABSOLUTO A 45 ° C Y EN CMA PRESENTA COLONIAS MAS OSCURAS.

• EL TIEMPO DE RESPUESTA DE 48 H PARA EL ESQUEMA DE CMA Y CTA ES SIMILAR A LA DE LOS SISTEMAS DE KIT COMERCIAL, QUE REQUIEREN DE 24 A 72 H. EL TIEMPO MEDIO EMPLEADO POR UN PERSONAL CON EXPERIENCIA PARA LEER PLACAS CMA Y CTA SE ENCUENTRA A 3 MINUTOS POR AISLAMIENTO, MIENTRAS QUE EL TIEMPO NECESARIO PARA LEER UNA TIRA DE API ES DE 10 A 15 MIN.

• ES IMPORTANTE QUE LAS COLONIAS AISLADAS SE OBSERVAN EN CMA PORQUE LAS DESCRIPCIONES SE BASAN EN LA IDENTIFICACIÓN DE LA FORMA, EL COLOR Y LA PRODUCCIÓN DE PIGMENTOS DE COLONIAS INDIVIDUALES.

• LA OBSERVACIÓN CUIDADOSA DE LA MORFOLOGÍA DE LA LEVADURA PUEDE AÑADIR CONFIANZA A LA IDENTIFICACIÓN DE LAS ESPECIES.

• LA MALA IDENTIFICACIÓN PUEDE TENER GRAVES IMPLICACIONES CLÍNICAS.