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Mtodos rpidos de identificacin. Mtodos basados en el ADN para la deteccin de bacterias patgenas transmitidas por los alimentos Ever Hernndez Olivas Universidad Autnoma de Chihuahua Facultad de Ciencias Qumicas Microbiologa de Alimentos

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o Enfermedades - bacterias patgenas o La deteccin de bacterias patgenas (presentes en bajo nmero) o Escondidas en las matrices alimenticias y pueden estar superadas por el nmero por un alto contenido de bacterias propias. Introduccin. Reservorio (animales y por lnea de produccin). Humanos

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Mtodos tradicionales (Etapas de enriquecimiento y pre-enriquecimiento) Son laboriosas y consumen mucho tiempo Acelerar la deteccin de bacterias patgenas Incrementar la sensibilidad a la deteccin

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Ejemplos de tecnologas que se han aplicado para mejorar los mtodos para la deteccin de bacterias patgenas en los alimentos.

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AplicacinVentajasProblemas Deteccin directa de patgenos en alimentos No requiere cultivacin Puede detectar clulas muertas (PCR). Alto nivel de deteccin debido a un volumen de prueba pequeo. Inhibicin debido a los componentes de los alimentos. Muy sensibles a contaminacin de alimentos. confirmacin de cultivo en caldos de enriquecimiento Rpido y sensible Posible deteccin automtica Insensible a altas concentraciones de microbiota propia No se obtiene una colonia, y por eso ms adecuado para detectar muestras negativas. Caracterizacin de bacterias patgenas obtenidas de muestras de alimentos Puede separar bacterias virulentas de las no virulentas por focalizacin de genes virulentos Es posible la caracterizacin mltiple Otras aplicacionesPuede detectar especficamente organismos genticamente modificados. Ventajas y los problemas generales de los mtodos basados en el ADN para la deteccin y caracterizacin de bacterias patgenas transmitidas por los alimentos en comparacin con los mtodos basados en la cultura tradicional

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o 20-30 aos o Conocidos por las personas que se ocupan de la microbiologa alimentaria o La capacidad de dos molculas de ADN de cadena sencilla in vitro, en las condiciones adecuadas, para formar ADN de cadena doble mediante apareamiento de bases especficas (hibridacin). Metodologa para la deteccin e identificacin de bacterias patgenas por mtodos basados en ADN.

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o Mtodos diferentes basados en el apareamiento de bases especficas o hibridacin de colonias, o una sola fase, ensayos de hibridacin de lquidos, o PCR o Relevantes para la deteccin de bacterias en los alimentos.

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1.Desnaturalizacin de ADN de la muestra para obtener cadenas simples objetivo. 2.Unin de primers especficos a el ADN objetivo. 3.La polimerizacin de ADN. PCR ( Reaccin de polimerizacin en cadena)

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Rpida Sensible Especifica Proceso simultaneo (gran numero de muestras)

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Problemtica en la aplicacin de PCR en alimentos.

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Puede hacerse mediante la demostracin del fragmento de ADN correcto mediante electroforesis en gel de agarosa Deteccin de reaccin positiva Mquinas de PCR semi-automatizadas existentes en el mercado hacen una determinacin cuantitativa de bacterias patgenas a partir de cultivos puros posibles.

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Mtodos confiables desarrollados para las bacterias patgenas pertinentes.

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Salmonella Escherichia coli Coliformes Shigella Vibrio cholerae y no cholerae Yersinia Enterocolitica Campylobacter Listeria monocytogenes Staphylococcus aureus Bacillaceae

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Probes and polymerase chain reaction for detection of food- borne bacterial pathogens, J.E. Olsen et al, International Journal of Food Microbiology 28 (1995) 1-78 DNA-based methods for detection of food-borne bacterial pathogens, John Elmerdahl Olsen *, Food Research International 33 (2000) 257266. Deteccin de patgenos alimentarios mediante tcnicas de PCR, B. Martn, M. Garriga, J.M. Monfort y T. Aymerich, IRTA. Tecnologa de los Alimentos. Monells, 2009. Bibliografa