la combinación más armónica para el cirujano - … · palabras clave:. hipoglucemia. insulinoma....
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La combinacioacuten maacutes armoacutenica para el cirujano
~tmiddot
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Safil es una sutura sinteacutetica de aacutecido poliglicoacutelico puro absorbibletrenzada y recubierta con las caracteriacutesticas y propiedadessiguientes
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A V E P A Vol 20 bull N 1 bull Enero Marzo 2000
Presidente AVEPAPrancisco Florit CorderoSecretarioRafael Mendieta FiterTesorero y coordinador de vocaliacuteasJavier Villamor UrbanDirector Comiteacute CientiacuteficoJosep Aguiloacute BonniacutenDirector FE CAVAJuan Frandsco Rodriacuteguez
Vocaliacutea IVocal Ignasi Farras GuaschSecretaria Jordi Gineacute Puiggros
Vocaliacutea 11Vocal Joseacute Silva TorresSecretario Adolfo Elvira Utrilla
Vocaliacutea IIIVocal Julio Conde MartiacutenezSecretario Antonio Navarro Alberola
Vocaliacutea IVVocal Joseacute Capaces SalaSecretario Manuel Garda Sebastiacutean
Vocaliacutea VVocal Enrique Moya BarrionuevoSecretario Emilio Moya Barrionuevo
Vocaliacutea VIVocal Tomaacutes Elvira BuergoSecretario Norberto Gonzaacutelez Alonso
Vocaliacutea VIIVocal Jesuacutes Nuacutentildeuez-TorronSecretario Jesuacutes Iribar Ibabe
Vocaliacutea VIIIVocal Justo Berganzo ZaeraSecretario Juan Joseacute Martiacutenez Galdarnes
VocaJia IXVocal Gabriel Palmer Lerdo de Tejada
Secretaria Antonio Perelloacute PonsVocaliacutea X
Vocal Manuel Morales DoresteSecretario Alejandro Bantildeares Rodriacuteguez
Director Revista AVEPAJosep Aguiloacute Bonniacuten
Comiteacute CientiacuteficoJosep Aguiloacute BonniacutenJoseacute Ballester DuplagraveIgnasi Durall RibasM Josefa Fernaacutendez del PaladoLluis Ferrer CaubetArtur Font UtsetManuel Gascoacuten PeacuterezJoan Mascon Boixedafgnacio Menes AacutelvarezAntoni Ramis SalvaacuteJuan J Tabar BarriosPco Javier Tendillo CortijoMiguel Vilafranca CompteManuel Villagrasa Hijar
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Rambla del Celler 117-11908190 Sant Cugat del Vallegraves (Barcelona)TeJ93 589 62 64 bull Fax 93 589 5077E-mail pulsopulsocomhttpwwwpulsocom
DE PE Q U E Ntilde O Smiddot A N I M A L E SRevista Oficial de AVEPA
s U M A R I O
CASOS CLIacuteNICOS
ARTIacuteCULOS DE REVISIOacuteN
Insulinoma en una hembra adul-ta de Pastor AlemaacutenA Andaluz R Ruiz de Gopequiy Espada F Garda
Hernia hiatal traumaacutetica en unagataG Riera Palou
Lupus eritematoso sisteacutemico enun gatoJ Laacutepez Peacuterez A Loacutepez PajueloM Aranda Luque
Evaluacioacuten de tiroxina total yhormona estimulante del tiroidesen perros sanos y enfermosMC Marca A LosteL OrdenJM Gonzaacutelez JA Marsellaacute
Estudio experimental en el perroacerca de los efectos nocivos delos ultrasonidos sobre la vitalidadpulpar1L Veacuterez-Fraguela MA Vivesvalleacutes 1J Ezquerra Calvo
Diagnoacutestico de leishmaniosiscanina mediante la teacutecnica dereaccioacuten en cadena de la polirnc-rasa (peR) un procedimientosimple para use en la cliacutenicaP Zaragoza 1 Martin-BurrielR Osta MGascoacuten
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Realizacioacuten y distribucioacutenPulso ediciones sa
ImpresioacutenPolicrorn SA
ISSN1130-7064
Depoacutesito LegalB -25427-81 MQlW
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AV E PAVol 20 bull N 1 bull Enero Marzo 2000
DE- PEQUENtildeOS-ANIMALES
Revista Oficial de AVEPA
RESUMEN DEL CONTENIDO
A Andaluz R Ruiz de Gopegui Y Espada F Garciacutea
Se describe un caso de hipoglucemia persistente La historia cliacute-nica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacuterica ecografiacutea e histopa-tologiacutea permiten establecer un diagnoacutestico de insulinoma
G Riera Palou
Se describe la presentacioacuten de una gata disneacuteica tras haber caiacutedodesde una altura de seis metros la exploracioacuten radioloacutegicademostroacute la presencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y la lapa-rotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia de hiato
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez Pajuela M Aranda Luque
Se describe el caso cliacutenico de un gato macho de dos antildeos de edadcon un historial de gingivoestomatitis ulcerativa
MC Marca A Laste 1 Orden JM Gonzaacutelez JA Marsellaacute
Se comprobaron pequentildeas diferencias entre los resultados deTSH con los tres meacutetodos analiacuteticos ensayados pero en generallos valores maacutes elevados se obtuvieron en los perros hipotiroide-os
J1 Veacuterez-Fraguela MA Vives Valleacutes 1J Ezquerra Calvo
La metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie de medicionesprevias sobre animales de experimentacioacuten y finalmente ungrupo de seis animales y un animal control
P Zaragoza 1 Martiacuten-Burriel R asta MGascoacuten
El diagnoacutestico se ha realizado por presenciaausencia del paraacutesi-to utilizando para ello muestras de sangre meacutedula oacutesea y gan-glio linfaacutetico principalmente
El libro del Dr Patrick Pageat(en su uacuteltima edicioacuten) aportaun inmenso caudal deconocimientos acerca de lapatologiacutea del comportamientccedil
caruno y una nueva VISIonsobre dicha patologiacuteaespecialmente interesantepara lascliacutenicas
Patologiacutea delcOllllportalllliento
del perro
AutorDr Patrlck Pageat
TraduccioacutenDra Victograveria Coll
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INSULINOMA EN UNA HEMBRA ADULTADE PASTOR ALEMAacuteN
A Andaluz R Ruiacutez de Gopegui Y EspadaF Garciacutea
RESUMEN
Se describe un caso de hipoglucemia persistente enuna hembra adulta de Pastor alemaacuten La historiacliacutenica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacutericaecografiacutea e histopatologiacutea permiten establecer undiagnoacutestico de insulinoma Se procede a la resolucioacutenquiruacutergica de la neoplasia sin complicacionespostquiruacutergicas y con una evolucioacuten favorable durantelos primeros seis meses aunque el pronoacutestico esreservado
Palabras clave Hipoglucemia Insulinoma Perro
INTRODUCCIOacuteN
Los insulinomas son tumores funcionales de lasceacutelulas ~ del paacutencreas endocrino Estos se carac-terizan por una produccioacuten excesiva de insulinaSuelen aparecer en perros adultos de 4 a 15 antildeosde edad No obstante la maacutexima incidenciacorresponde a edades comprendidas entre los 9 y10 anos-- 3 Asiacute mismo se ha descrito una predis-posicioacuten racial en el Pastor alemaacuten GoldenRetriever Setter Irlandeacutes Fax Terrier y Boxer-No hay diferencias de incidencia entre machos yhembras- 3 8
Los insulinomas caninos son tumores malignosy suelen metastatizar a hiacutegado bazo y noacutedulos lin-faacuteticos reqionalesegrave 3 Las metaacutestasis pulmonaresno son frecuentes de modo que las radiografiacuteasde toacuterax no estaacuten indicadas para el diagnoacutestico nipara poder establecer un pronoacutestico fiablegt
En el diagnoacutestico de estas neoplasias el signolaboratorial maacutes indicativo es la deteccioacuten delestado de hipoglucemia de ayuno persistente 3
Esta hipoglucemia definida como una concentra-cioacuten seacuterica de glucosa inferior a 60 mgdl sedebe a la hiperinsulinemia derivada de la produc-
Departamento de Patologiacutea y ProduccioacutenAnimalesFacultad de VeterinariaUniversitatAutoacutenoma de Barcelona08193 BellaterraTelf 93 581 10 90email rafaelruizuabes
ABSTRACT
A clinical case of persistent hypoglycemia wasdescribed in an adult intact female German Shepherddogo Diagnosis of insulinoma was based on clinicalhistory physical exam ultrasonography serumbiochemistry and histopathology Surgical therapywas performed without postsurgical complicationsEvolution six months after surgery was alsoappropriate However prognosis is guarded
Rey words Hypoglycemia Insulinoma Dog
Clan excesiva por las ceacutelulas ~ neoplaacutesicas Lahipoglucemia es la responsable en gran medidade la sintomatologiacutea que manifiestan los perroscon insulinoma debido a la dependencia que tie-nen algunos tejidos de ella Los principales siacutento-mas son neuroloacutegicos y en segundo lugar tambieacutenpodemos observar siacutentomas renales hepaacuteticos ycardiacuteacos1 2 3
No obstante debemos tener en cuenta que elinsulinoma no es la uacutenica causa de hipoglucemiasEn perros de edad adulta la hipoglucemia puedeestar producida por distintos procesos entre losque destacan (Tabla I)
- Errores laboratoacuteriales (hipoglucemia espuacuterea)- Insulinoma- Hipoglucemia paraneoplaacutesica (neoplasia extra-
pancreaacutetica en la que se estariacutean produciendootros factores hipoglucemiantes como el factor decrecimiento afiacuten a la insulina [IGF] I y lI)
- Insuficiencia hepaacutetica- Hipoadrenocorticismo- Procesos intestinales o pancreaacuteticos que cur-
sen con malabsorcioacutenDe todas estas causas el insulinoma y la hipo-
glucemia paraneoplaacutesica son las maacutes frecuentes
r5
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla I Diagnoacutestico diferencial de hipoglucemia
Cachorrosbull Hipoglucemia neonatalbull Hipoglucemia juvenil transitoriabull Anomalias portosisteacutemicasbull Enfermedades del almacenamiento de glucoacutegeno
Adultosbull Hipoglucemia del perro de caza (de esfuerzo)bull Insulinomabull Hipoglucemia paraneoplaacutesicabull Insuficiencia hepaacuteticabull Caquexia
Todosbull Septicemiabull Hipoadrenocorticismobull Enanismo hipoiacuteisanobull Hipoglucemia espuacutereabull Medicamentos
InsulinaEtilenglicolEtanolSalicilatosSulfonilureas
Tabla Il Resultados del hemograma
Muestra ReferenciaEritrocitos 66 x 106111 55-85 106111Hemoglobina 137 gdi 12-18 gdIValor hematocrito 40 37-55 VCM 606 fl 60-77 nCCMH 342 gdi 32-36 gdiHCM 193 pg 195-245 pgLeucocitos 9900111 6000-17000111Linfocitos 891111 720-5100111Monocitos 792111 180-1 700111Cayados 297111 lt 510111Segmentados 6831111 3600-13090111Eosinoacutefilos 1089111 120-1700111Basoacutefilos - lt 170111Plaquetas 220000111 200000-500000111
una vez descartado el error laboratorial Parapoder distinguir entre estos dos procesos esnecesario determinar si la hipoglucemia estaacute pro-ducida por una hiperinsulinemia o bien por unaproduccioacuten excesiva de IGF I o IGF n Esta dife-renciacioacuten se puede realizar mediante la determi-nacioacuten de insulina seacuterica calculando la proporcioacuteninsulinaglucosa corregida En condiciones nor-males el valor de esta proporcioacuten debe ser inferiora 30 microunidades de insulina por mg de gluco-sa2 3 Cuando este valor es superior indica que lacantidad de insulina en relacioacuten a la cantidad deglucosa seacuterica es maacutes alta de lo normal se estaacuteproduciendo maacutes insulina de la que el organismonecesita y el paacutencreas no estaacute respondiendo a laretroalimentacioacuten negativa que en condicionesnormales se produce al disminuir la glucosa seacuteri-ca Estos hechos sugieren la existencia de un insu-linoma
Tabla III Resultados de la bioquiacutemica seacuterica
Muestra ReferenciaGlucosa 45 mgdi 60-115 mgdiColesterol 186 mgdi 140-290 mgdiProteiacutenas totales 76 gdi 65-8 gdICalcio 11 mgdi 89-133 mgdiFoacutesforo 24 mgdI 25-5 mgdiFosfatasa alcalina 54 UI 35-150 UICK 165 UI 30-200 UISodio 151 mEql 141-160 mEqlPotasio 42 mEql 4-54 mEq1Cloruro 96 mEql 96-122 mEql
Por el contrario si el valor de la proporcioacuten estaacutedentro de la normalidad se puede realizar unadeterminacioacuten de IGF I para confirmar o descar-tar la presencia de una neoplasia extrapancreaacuteti-ca Por el momento soacutelo es posible determinar elvalor de IGF-I y no de IGF-n
Finalmente para confirmar el- diagnoacutestico ysiempre que sea posible es aconsejable realizar elestudio histopatoloacutegico de la masa
CASO CLIacuteNICOEl paciente del caso cliacutenico que nos ocupa es
una perra de raza Pastor alemaacuten de 9 antildeos deedad con una historia cliacutenica anterior de leishma-niosis desde los cuatro antildeos de edad En elmomento de su visita al Hospital Cliacutenico Veteri-nario de la UAB habiacutea sido tratada con N-metil-glucosamina y se le seguiacutea administrando alopuri-noI Los propietarios advierten que desde hace unantildeo la perra ha adelgazado considerablementeaunque su apetito parece haberse incrementado
En el examen fiacutesico se observa una peacuterdida depeso de un 20 depresioacuten debilidad y ataxia Serealiza un hemograma y una bioquiacutemica seacuterica Eluacutenico valor alterado es la concentracioacuten de gluco-sa que resultoacute ser inferior al rango de normalidad(Tablas n y III)
Para la confirmacioacuten de esta posible hipogluce-mia se decide hospitalizar a la perra y se realizancinco determinaciones de glucosa seriadas cada 2horas En todas las determinaciones realizadas elnivel de glucosa seacuterica se mantiene entre 38 y 45mgdi (muy por debajo de los 60 mgdi) por loque pudimos confirmar la hipoglucemia de ayunopersistente
Con los resultados obtenidos se establecioacute undiagnoacutestico diferencial de insulinoma o hipogluce-mia paraneoplaacutesica (ocasionada por una neopla-
amp6
Gama dealimentos Hills
Science PlanCanine en seco
lkgNuevo tamantildeo de
prueba de 1 kg
3 kgTamantildeo de 3 kg a un
mejor precio(coste por diacutea)
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Fig 1 Ecografiacutea de la masa en corte transversal Masa redondeada (23 x 22cm) hipoecogeacutenica en la rama izquierda del paacutencreas
Fig 3 Aspecto macroscoacutepico de la porcioacuten del paacutencreas afectado por la neo-plasia una vez se ha extraiacutedo quiruacutergicamente
sia extrapancreaacutetica) Para diferenciar entre estosdos procesos y poder llegar a un diagnoacutestico defi-nitivo se optoacute por la realizacioacuten de una ecografiacuteaabdominal determinacioacuten de la proporcioacuten IGcorregida y por la realizacioacuten de una laparotomiacuteaexploratoria para poder de esta forma localizarextirpar y realizar el estudio histopatoloacutegico de lamasa
En la ecografiacutea abdominal no se observaron alte-raciones ecograacuteficas en bazo rintildeones ni hiacutegadoSe observoacute el tracto gastrointestinal con gas y unamasa hipoecogeacutenica con un tamantildeo en corte lon-gitudinal de 41 x 22 cm y de 23 x 22 en cortetransversal en la rama izquierda del paacutencreascompatible con una neoplasia pancreaacutetica (Fig 1)
La proporcioacuten IG corregida dio un valor de15875 compatible con un diagnoacutestico de insuli-noma
En la laparotomiacutea exploratoria para mantenerla normoglucemia se instauroacute una fluidoterapiacon dextrosa al 5 y glucosalino isotoacutenico reali-zando controles de glucemia cada 30-60 minutosUna vez estabilizada la perra fue anestesiadasiguiendo un protocolo habitual consistente en la
Fig 2 Localizacioacuten de la masa neoplaacutesica en el paacutencreas
Fig 4 Citologia realizada mediante impronta de la masa neoplaacutesica Diff-QuiklOOOx
premedicacioacuten con diacepam y buprenorfinainduccioacuten con tiopental y halotano para el man-tenimiento
La laparotomiacutea exploratoria se realizoacute de formaconvencional Se localizoacute el noacutedulo en la ramaizquierda del paacutencreas tal y como se habiacutea deter-minado en la ecografiacutea (Fig 2) No se detectaronotros noacutedulos ni en el paacutencreas ni en el resto deoacuterganos abdominales Asiacute mismo los gangliosregionales presentaban un aspecto normal Laexeacuteresis del noacutedulo se realizoacute mediante una pan-createctomiacutea parcial (Fig 3)
Durante el postoperatorio se mantuvo a la perraen ayuno completo (NPO) durante 72 horas paraprevenir una pancreatits postquiruacutergica Duranteeste tiempo se instauroacute una fluidoterapia y anti-bioterapia viacutea sisteacutemica y se realizaron controlesde la glucemia para comprobar que evolucionabacorrectamente La paciente fue dada de alta al ter-cer diacutea de la cirugiacutea presentando una evolucioacutenfavorable La fluidoterapia y la medicacioacuten IV sesustituyoacute por medicacioacuten oral (amoxicilina y cime-tidina) y una dieta rica en fibra (wd)
La citologiacutea de la impronta y el estudio histopa-
r8
Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
9
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
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Miguel Ruiz Peacuterez Cliacutenica Veterinaria Mediterraacuteneo (Madrid)Guadalupe Miro Facultad Veterinaria de MadridFernando Rodriacuteguez Franco Facultad de Vererinaria de Madrid
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bull Jornada de Grupos de Trabajo de AVEPA 12 de Octubre del 2000bull Jornada de ATV 14 de Octubre de12000bull Casos Cliacutenicos y Comunicaciones Libresbull Talleres Praacutecticosbull Temas Generales del Congreso Digestivo - Neurologiacutea - Endocrino - Oncologiacutea - Medicina Interna
Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
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FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
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HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
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CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
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Dermatologia 11Santiago24 - 25
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INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
32
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
34
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
A V E P A Vol 20 bull N 1 bull Enero Marzo 2000
Presidente AVEPAPrancisco Florit CorderoSecretarioRafael Mendieta FiterTesorero y coordinador de vocaliacuteasJavier Villamor UrbanDirector Comiteacute CientiacuteficoJosep Aguiloacute BonniacutenDirector FE CAVAJuan Frandsco Rodriacuteguez
Vocaliacutea IVocal Ignasi Farras GuaschSecretaria Jordi Gineacute Puiggros
Vocaliacutea 11Vocal Joseacute Silva TorresSecretario Adolfo Elvira Utrilla
Vocaliacutea IIIVocal Julio Conde MartiacutenezSecretario Antonio Navarro Alberola
Vocaliacutea IVVocal Joseacute Capaces SalaSecretario Manuel Garda Sebastiacutean
Vocaliacutea VVocal Enrique Moya BarrionuevoSecretario Emilio Moya Barrionuevo
Vocaliacutea VIVocal Tomaacutes Elvira BuergoSecretario Norberto Gonzaacutelez Alonso
Vocaliacutea VIIVocal Jesuacutes Nuacutentildeuez-TorronSecretario Jesuacutes Iribar Ibabe
Vocaliacutea VIIIVocal Justo Berganzo ZaeraSecretario Juan Joseacute Martiacutenez Galdarnes
VocaJia IXVocal Gabriel Palmer Lerdo de Tejada
Secretaria Antonio Perelloacute PonsVocaliacutea X
Vocal Manuel Morales DoresteSecretario Alejandro Bantildeares Rodriacuteguez
Director Revista AVEPAJosep Aguiloacute Bonniacuten
Comiteacute CientiacuteficoJosep Aguiloacute BonniacutenJoseacute Ballester DuplagraveIgnasi Durall RibasM Josefa Fernaacutendez del PaladoLluis Ferrer CaubetArtur Font UtsetManuel Gascoacuten PeacuterezJoan Mascon Boixedafgnacio Menes AacutelvarezAntoni Ramis SalvaacuteJuan J Tabar BarriosPco Javier Tendillo CortijoMiguel Vilafranca CompteManuel Villagrasa Hijar
~PUI~SOediciones sa
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s U M A R I O
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Hernia hiatal traumaacutetica en unagataG Riera Palou
Lupus eritematoso sisteacutemico enun gatoJ Laacutepez Peacuterez A Loacutepez PajueloM Aranda Luque
Evaluacioacuten de tiroxina total yhormona estimulante del tiroidesen perros sanos y enfermosMC Marca A LosteL OrdenJM Gonzaacutelez JA Marsellaacute
Estudio experimental en el perroacerca de los efectos nocivos delos ultrasonidos sobre la vitalidadpulpar1L Veacuterez-Fraguela MA Vivesvalleacutes 1J Ezquerra Calvo
Diagnoacutestico de leishmaniosiscanina mediante la teacutecnica dereaccioacuten en cadena de la polirnc-rasa (peR) un procedimientosimple para use en la cliacutenicaP Zaragoza 1 Martin-BurrielR Osta MGascoacuten
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bull El condroitiacuten sulfato es un productonatural extraiacutedo a partir del cartiacutelago
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COMPRIMIDOS
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DE- PEQUENtildeOS-ANIMALES
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RESUMEN DEL CONTENIDO
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Se describe un caso de hipoglucemia persistente La historia cliacute-nica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacuterica ecografiacutea e histopa-tologiacutea permiten establecer un diagnoacutestico de insulinoma
G Riera Palou
Se describe la presentacioacuten de una gata disneacuteica tras haber caiacutedodesde una altura de seis metros la exploracioacuten radioloacutegicademostroacute la presencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y la lapa-rotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia de hiato
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez Pajuela M Aranda Luque
Se describe el caso cliacutenico de un gato macho de dos antildeos de edadcon un historial de gingivoestomatitis ulcerativa
MC Marca A Laste 1 Orden JM Gonzaacutelez JA Marsellaacute
Se comprobaron pequentildeas diferencias entre los resultados deTSH con los tres meacutetodos analiacuteticos ensayados pero en generallos valores maacutes elevados se obtuvieron en los perros hipotiroide-os
J1 Veacuterez-Fraguela MA Vives Valleacutes 1J Ezquerra Calvo
La metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie de medicionesprevias sobre animales de experimentacioacuten y finalmente ungrupo de seis animales y un animal control
P Zaragoza 1 Martiacuten-Burriel R asta MGascoacuten
El diagnoacutestico se ha realizado por presenciaausencia del paraacutesi-to utilizando para ello muestras de sangre meacutedula oacutesea y gan-glio linfaacutetico principalmente
El libro del Dr Patrick Pageat(en su uacuteltima edicioacuten) aportaun inmenso caudal deconocimientos acerca de lapatologiacutea del comportamientccedil
caruno y una nueva VISIonsobre dicha patologiacuteaespecialmente interesantepara lascliacutenicas
Patologiacutea delcOllllportalllliento
del perro
AutorDr Patrlck Pageat
TraduccioacutenDra Victograveria Coll
Formato 17x 24 cm384 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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INSULINOMA EN UNA HEMBRA ADULTADE PASTOR ALEMAacuteN
A Andaluz R Ruiacutez de Gopegui Y EspadaF Garciacutea
RESUMEN
Se describe un caso de hipoglucemia persistente enuna hembra adulta de Pastor alemaacuten La historiacliacutenica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacutericaecografiacutea e histopatologiacutea permiten establecer undiagnoacutestico de insulinoma Se procede a la resolucioacutenquiruacutergica de la neoplasia sin complicacionespostquiruacutergicas y con una evolucioacuten favorable durantelos primeros seis meses aunque el pronoacutestico esreservado
Palabras clave Hipoglucemia Insulinoma Perro
INTRODUCCIOacuteN
Los insulinomas son tumores funcionales de lasceacutelulas ~ del paacutencreas endocrino Estos se carac-terizan por una produccioacuten excesiva de insulinaSuelen aparecer en perros adultos de 4 a 15 antildeosde edad No obstante la maacutexima incidenciacorresponde a edades comprendidas entre los 9 y10 anos-- 3 Asiacute mismo se ha descrito una predis-posicioacuten racial en el Pastor alemaacuten GoldenRetriever Setter Irlandeacutes Fax Terrier y Boxer-No hay diferencias de incidencia entre machos yhembras- 3 8
Los insulinomas caninos son tumores malignosy suelen metastatizar a hiacutegado bazo y noacutedulos lin-faacuteticos reqionalesegrave 3 Las metaacutestasis pulmonaresno son frecuentes de modo que las radiografiacuteasde toacuterax no estaacuten indicadas para el diagnoacutestico nipara poder establecer un pronoacutestico fiablegt
En el diagnoacutestico de estas neoplasias el signolaboratorial maacutes indicativo es la deteccioacuten delestado de hipoglucemia de ayuno persistente 3
Esta hipoglucemia definida como una concentra-cioacuten seacuterica de glucosa inferior a 60 mgdl sedebe a la hiperinsulinemia derivada de la produc-
Departamento de Patologiacutea y ProduccioacutenAnimalesFacultad de VeterinariaUniversitatAutoacutenoma de Barcelona08193 BellaterraTelf 93 581 10 90email rafaelruizuabes
ABSTRACT
A clinical case of persistent hypoglycemia wasdescribed in an adult intact female German Shepherddogo Diagnosis of insulinoma was based on clinicalhistory physical exam ultrasonography serumbiochemistry and histopathology Surgical therapywas performed without postsurgical complicationsEvolution six months after surgery was alsoappropriate However prognosis is guarded
Rey words Hypoglycemia Insulinoma Dog
Clan excesiva por las ceacutelulas ~ neoplaacutesicas Lahipoglucemia es la responsable en gran medidade la sintomatologiacutea que manifiestan los perroscon insulinoma debido a la dependencia que tie-nen algunos tejidos de ella Los principales siacutento-mas son neuroloacutegicos y en segundo lugar tambieacutenpodemos observar siacutentomas renales hepaacuteticos ycardiacuteacos1 2 3
No obstante debemos tener en cuenta que elinsulinoma no es la uacutenica causa de hipoglucemiasEn perros de edad adulta la hipoglucemia puedeestar producida por distintos procesos entre losque destacan (Tabla I)
- Errores laboratoacuteriales (hipoglucemia espuacuterea)- Insulinoma- Hipoglucemia paraneoplaacutesica (neoplasia extra-
pancreaacutetica en la que se estariacutean produciendootros factores hipoglucemiantes como el factor decrecimiento afiacuten a la insulina [IGF] I y lI)
- Insuficiencia hepaacutetica- Hipoadrenocorticismo- Procesos intestinales o pancreaacuteticos que cur-
sen con malabsorcioacutenDe todas estas causas el insulinoma y la hipo-
glucemia paraneoplaacutesica son las maacutes frecuentes
r5
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla I Diagnoacutestico diferencial de hipoglucemia
Cachorrosbull Hipoglucemia neonatalbull Hipoglucemia juvenil transitoriabull Anomalias portosisteacutemicasbull Enfermedades del almacenamiento de glucoacutegeno
Adultosbull Hipoglucemia del perro de caza (de esfuerzo)bull Insulinomabull Hipoglucemia paraneoplaacutesicabull Insuficiencia hepaacuteticabull Caquexia
Todosbull Septicemiabull Hipoadrenocorticismobull Enanismo hipoiacuteisanobull Hipoglucemia espuacutereabull Medicamentos
InsulinaEtilenglicolEtanolSalicilatosSulfonilureas
Tabla Il Resultados del hemograma
Muestra ReferenciaEritrocitos 66 x 106111 55-85 106111Hemoglobina 137 gdi 12-18 gdIValor hematocrito 40 37-55 VCM 606 fl 60-77 nCCMH 342 gdi 32-36 gdiHCM 193 pg 195-245 pgLeucocitos 9900111 6000-17000111Linfocitos 891111 720-5100111Monocitos 792111 180-1 700111Cayados 297111 lt 510111Segmentados 6831111 3600-13090111Eosinoacutefilos 1089111 120-1700111Basoacutefilos - lt 170111Plaquetas 220000111 200000-500000111
una vez descartado el error laboratorial Parapoder distinguir entre estos dos procesos esnecesario determinar si la hipoglucemia estaacute pro-ducida por una hiperinsulinemia o bien por unaproduccioacuten excesiva de IGF I o IGF n Esta dife-renciacioacuten se puede realizar mediante la determi-nacioacuten de insulina seacuterica calculando la proporcioacuteninsulinaglucosa corregida En condiciones nor-males el valor de esta proporcioacuten debe ser inferiora 30 microunidades de insulina por mg de gluco-sa2 3 Cuando este valor es superior indica que lacantidad de insulina en relacioacuten a la cantidad deglucosa seacuterica es maacutes alta de lo normal se estaacuteproduciendo maacutes insulina de la que el organismonecesita y el paacutencreas no estaacute respondiendo a laretroalimentacioacuten negativa que en condicionesnormales se produce al disminuir la glucosa seacuteri-ca Estos hechos sugieren la existencia de un insu-linoma
Tabla III Resultados de la bioquiacutemica seacuterica
Muestra ReferenciaGlucosa 45 mgdi 60-115 mgdiColesterol 186 mgdi 140-290 mgdiProteiacutenas totales 76 gdi 65-8 gdICalcio 11 mgdi 89-133 mgdiFoacutesforo 24 mgdI 25-5 mgdiFosfatasa alcalina 54 UI 35-150 UICK 165 UI 30-200 UISodio 151 mEql 141-160 mEqlPotasio 42 mEql 4-54 mEq1Cloruro 96 mEql 96-122 mEql
Por el contrario si el valor de la proporcioacuten estaacutedentro de la normalidad se puede realizar unadeterminacioacuten de IGF I para confirmar o descar-tar la presencia de una neoplasia extrapancreaacuteti-ca Por el momento soacutelo es posible determinar elvalor de IGF-I y no de IGF-n
Finalmente para confirmar el- diagnoacutestico ysiempre que sea posible es aconsejable realizar elestudio histopatoloacutegico de la masa
CASO CLIacuteNICOEl paciente del caso cliacutenico que nos ocupa es
una perra de raza Pastor alemaacuten de 9 antildeos deedad con una historia cliacutenica anterior de leishma-niosis desde los cuatro antildeos de edad En elmomento de su visita al Hospital Cliacutenico Veteri-nario de la UAB habiacutea sido tratada con N-metil-glucosamina y se le seguiacutea administrando alopuri-noI Los propietarios advierten que desde hace unantildeo la perra ha adelgazado considerablementeaunque su apetito parece haberse incrementado
En el examen fiacutesico se observa una peacuterdida depeso de un 20 depresioacuten debilidad y ataxia Serealiza un hemograma y una bioquiacutemica seacuterica Eluacutenico valor alterado es la concentracioacuten de gluco-sa que resultoacute ser inferior al rango de normalidad(Tablas n y III)
Para la confirmacioacuten de esta posible hipogluce-mia se decide hospitalizar a la perra y se realizancinco determinaciones de glucosa seriadas cada 2horas En todas las determinaciones realizadas elnivel de glucosa seacuterica se mantiene entre 38 y 45mgdi (muy por debajo de los 60 mgdi) por loque pudimos confirmar la hipoglucemia de ayunopersistente
Con los resultados obtenidos se establecioacute undiagnoacutestico diferencial de insulinoma o hipogluce-mia paraneoplaacutesica (ocasionada por una neopla-
amp6
Gama dealimentos Hills
Science PlanCanine en seco
lkgNuevo tamantildeo de
prueba de 1 kg
3 kgTamantildeo de 3 kg a un
mejor precio(coste por diacutea)
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Fig 1 Ecografiacutea de la masa en corte transversal Masa redondeada (23 x 22cm) hipoecogeacutenica en la rama izquierda del paacutencreas
Fig 3 Aspecto macroscoacutepico de la porcioacuten del paacutencreas afectado por la neo-plasia una vez se ha extraiacutedo quiruacutergicamente
sia extrapancreaacutetica) Para diferenciar entre estosdos procesos y poder llegar a un diagnoacutestico defi-nitivo se optoacute por la realizacioacuten de una ecografiacuteaabdominal determinacioacuten de la proporcioacuten IGcorregida y por la realizacioacuten de una laparotomiacuteaexploratoria para poder de esta forma localizarextirpar y realizar el estudio histopatoloacutegico de lamasa
En la ecografiacutea abdominal no se observaron alte-raciones ecograacuteficas en bazo rintildeones ni hiacutegadoSe observoacute el tracto gastrointestinal con gas y unamasa hipoecogeacutenica con un tamantildeo en corte lon-gitudinal de 41 x 22 cm y de 23 x 22 en cortetransversal en la rama izquierda del paacutencreascompatible con una neoplasia pancreaacutetica (Fig 1)
La proporcioacuten IG corregida dio un valor de15875 compatible con un diagnoacutestico de insuli-noma
En la laparotomiacutea exploratoria para mantenerla normoglucemia se instauroacute una fluidoterapiacon dextrosa al 5 y glucosalino isotoacutenico reali-zando controles de glucemia cada 30-60 minutosUna vez estabilizada la perra fue anestesiadasiguiendo un protocolo habitual consistente en la
Fig 2 Localizacioacuten de la masa neoplaacutesica en el paacutencreas
Fig 4 Citologia realizada mediante impronta de la masa neoplaacutesica Diff-QuiklOOOx
premedicacioacuten con diacepam y buprenorfinainduccioacuten con tiopental y halotano para el man-tenimiento
La laparotomiacutea exploratoria se realizoacute de formaconvencional Se localizoacute el noacutedulo en la ramaizquierda del paacutencreas tal y como se habiacutea deter-minado en la ecografiacutea (Fig 2) No se detectaronotros noacutedulos ni en el paacutencreas ni en el resto deoacuterganos abdominales Asiacute mismo los gangliosregionales presentaban un aspecto normal Laexeacuteresis del noacutedulo se realizoacute mediante una pan-createctomiacutea parcial (Fig 3)
Durante el postoperatorio se mantuvo a la perraen ayuno completo (NPO) durante 72 horas paraprevenir una pancreatits postquiruacutergica Duranteeste tiempo se instauroacute una fluidoterapia y anti-bioterapia viacutea sisteacutemica y se realizaron controlesde la glucemia para comprobar que evolucionabacorrectamente La paciente fue dada de alta al ter-cer diacutea de la cirugiacutea presentando una evolucioacutenfavorable La fluidoterapia y la medicacioacuten IV sesustituyoacute por medicacioacuten oral (amoxicilina y cime-tidina) y una dieta rica en fibra (wd)
La citologiacutea de la impronta y el estudio histopa-
r8
Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
9
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
Oil PET eARE AUO NUTRmON
-~--- ---- ~-- ~
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PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
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NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
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IMAGEN Y EMERGENCIASPim Wolwekamp Utrecht University
(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
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Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
INFORMACIOacuteN GENERAL
FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
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HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
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CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
PU~ecIIcIona ICL
Rambla del Celler 117-11908190 Sant Cugat del Vallegraves bull Tel 93 589 62 64
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~16~ 14e 12
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O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
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O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
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AV E PAVol 20 bull N 1 bull Enero Marzo 2000
DE- PEQUENtildeOS-ANIMALES
Revista Oficial de AVEPA
RESUMEN DEL CONTENIDO
A Andaluz R Ruiz de Gopegui Y Espada F Garciacutea
Se describe un caso de hipoglucemia persistente La historia cliacute-nica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacuterica ecografiacutea e histopa-tologiacutea permiten establecer un diagnoacutestico de insulinoma
G Riera Palou
Se describe la presentacioacuten de una gata disneacuteica tras haber caiacutedodesde una altura de seis metros la exploracioacuten radioloacutegicademostroacute la presencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y la lapa-rotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia de hiato
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez Pajuela M Aranda Luque
Se describe el caso cliacutenico de un gato macho de dos antildeos de edadcon un historial de gingivoestomatitis ulcerativa
MC Marca A Laste 1 Orden JM Gonzaacutelez JA Marsellaacute
Se comprobaron pequentildeas diferencias entre los resultados deTSH con los tres meacutetodos analiacuteticos ensayados pero en generallos valores maacutes elevados se obtuvieron en los perros hipotiroide-os
J1 Veacuterez-Fraguela MA Vives Valleacutes 1J Ezquerra Calvo
La metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie de medicionesprevias sobre animales de experimentacioacuten y finalmente ungrupo de seis animales y un animal control
P Zaragoza 1 Martiacuten-Burriel R asta MGascoacuten
El diagnoacutestico se ha realizado por presenciaausencia del paraacutesi-to utilizando para ello muestras de sangre meacutedula oacutesea y gan-glio linfaacutetico principalmente
El libro del Dr Patrick Pageat(en su uacuteltima edicioacuten) aportaun inmenso caudal deconocimientos acerca de lapatologiacutea del comportamientccedil
caruno y una nueva VISIonsobre dicha patologiacuteaespecialmente interesantepara lascliacutenicas
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Ndeg de cuenta2013 0611 51 0200406385
(Rogamos nos enviacutee fotocopia del comprobante bancario)
Firma
INSULINOMA EN UNA HEMBRA ADULTADE PASTOR ALEMAacuteN
A Andaluz R Ruiacutez de Gopegui Y EspadaF Garciacutea
RESUMEN
Se describe un caso de hipoglucemia persistente enuna hembra adulta de Pastor alemaacuten La historiacliacutenica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacutericaecografiacutea e histopatologiacutea permiten establecer undiagnoacutestico de insulinoma Se procede a la resolucioacutenquiruacutergica de la neoplasia sin complicacionespostquiruacutergicas y con una evolucioacuten favorable durantelos primeros seis meses aunque el pronoacutestico esreservado
Palabras clave Hipoglucemia Insulinoma Perro
INTRODUCCIOacuteN
Los insulinomas son tumores funcionales de lasceacutelulas ~ del paacutencreas endocrino Estos se carac-terizan por una produccioacuten excesiva de insulinaSuelen aparecer en perros adultos de 4 a 15 antildeosde edad No obstante la maacutexima incidenciacorresponde a edades comprendidas entre los 9 y10 anos-- 3 Asiacute mismo se ha descrito una predis-posicioacuten racial en el Pastor alemaacuten GoldenRetriever Setter Irlandeacutes Fax Terrier y Boxer-No hay diferencias de incidencia entre machos yhembras- 3 8
Los insulinomas caninos son tumores malignosy suelen metastatizar a hiacutegado bazo y noacutedulos lin-faacuteticos reqionalesegrave 3 Las metaacutestasis pulmonaresno son frecuentes de modo que las radiografiacuteasde toacuterax no estaacuten indicadas para el diagnoacutestico nipara poder establecer un pronoacutestico fiablegt
En el diagnoacutestico de estas neoplasias el signolaboratorial maacutes indicativo es la deteccioacuten delestado de hipoglucemia de ayuno persistente 3
Esta hipoglucemia definida como una concentra-cioacuten seacuterica de glucosa inferior a 60 mgdl sedebe a la hiperinsulinemia derivada de la produc-
Departamento de Patologiacutea y ProduccioacutenAnimalesFacultad de VeterinariaUniversitatAutoacutenoma de Barcelona08193 BellaterraTelf 93 581 10 90email rafaelruizuabes
ABSTRACT
A clinical case of persistent hypoglycemia wasdescribed in an adult intact female German Shepherddogo Diagnosis of insulinoma was based on clinicalhistory physical exam ultrasonography serumbiochemistry and histopathology Surgical therapywas performed without postsurgical complicationsEvolution six months after surgery was alsoappropriate However prognosis is guarded
Rey words Hypoglycemia Insulinoma Dog
Clan excesiva por las ceacutelulas ~ neoplaacutesicas Lahipoglucemia es la responsable en gran medidade la sintomatologiacutea que manifiestan los perroscon insulinoma debido a la dependencia que tie-nen algunos tejidos de ella Los principales siacutento-mas son neuroloacutegicos y en segundo lugar tambieacutenpodemos observar siacutentomas renales hepaacuteticos ycardiacuteacos1 2 3
No obstante debemos tener en cuenta que elinsulinoma no es la uacutenica causa de hipoglucemiasEn perros de edad adulta la hipoglucemia puedeestar producida por distintos procesos entre losque destacan (Tabla I)
- Errores laboratoacuteriales (hipoglucemia espuacuterea)- Insulinoma- Hipoglucemia paraneoplaacutesica (neoplasia extra-
pancreaacutetica en la que se estariacutean produciendootros factores hipoglucemiantes como el factor decrecimiento afiacuten a la insulina [IGF] I y lI)
- Insuficiencia hepaacutetica- Hipoadrenocorticismo- Procesos intestinales o pancreaacuteticos que cur-
sen con malabsorcioacutenDe todas estas causas el insulinoma y la hipo-
glucemia paraneoplaacutesica son las maacutes frecuentes
r5
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla I Diagnoacutestico diferencial de hipoglucemia
Cachorrosbull Hipoglucemia neonatalbull Hipoglucemia juvenil transitoriabull Anomalias portosisteacutemicasbull Enfermedades del almacenamiento de glucoacutegeno
Adultosbull Hipoglucemia del perro de caza (de esfuerzo)bull Insulinomabull Hipoglucemia paraneoplaacutesicabull Insuficiencia hepaacuteticabull Caquexia
Todosbull Septicemiabull Hipoadrenocorticismobull Enanismo hipoiacuteisanobull Hipoglucemia espuacutereabull Medicamentos
InsulinaEtilenglicolEtanolSalicilatosSulfonilureas
Tabla Il Resultados del hemograma
Muestra ReferenciaEritrocitos 66 x 106111 55-85 106111Hemoglobina 137 gdi 12-18 gdIValor hematocrito 40 37-55 VCM 606 fl 60-77 nCCMH 342 gdi 32-36 gdiHCM 193 pg 195-245 pgLeucocitos 9900111 6000-17000111Linfocitos 891111 720-5100111Monocitos 792111 180-1 700111Cayados 297111 lt 510111Segmentados 6831111 3600-13090111Eosinoacutefilos 1089111 120-1700111Basoacutefilos - lt 170111Plaquetas 220000111 200000-500000111
una vez descartado el error laboratorial Parapoder distinguir entre estos dos procesos esnecesario determinar si la hipoglucemia estaacute pro-ducida por una hiperinsulinemia o bien por unaproduccioacuten excesiva de IGF I o IGF n Esta dife-renciacioacuten se puede realizar mediante la determi-nacioacuten de insulina seacuterica calculando la proporcioacuteninsulinaglucosa corregida En condiciones nor-males el valor de esta proporcioacuten debe ser inferiora 30 microunidades de insulina por mg de gluco-sa2 3 Cuando este valor es superior indica que lacantidad de insulina en relacioacuten a la cantidad deglucosa seacuterica es maacutes alta de lo normal se estaacuteproduciendo maacutes insulina de la que el organismonecesita y el paacutencreas no estaacute respondiendo a laretroalimentacioacuten negativa que en condicionesnormales se produce al disminuir la glucosa seacuteri-ca Estos hechos sugieren la existencia de un insu-linoma
Tabla III Resultados de la bioquiacutemica seacuterica
Muestra ReferenciaGlucosa 45 mgdi 60-115 mgdiColesterol 186 mgdi 140-290 mgdiProteiacutenas totales 76 gdi 65-8 gdICalcio 11 mgdi 89-133 mgdiFoacutesforo 24 mgdI 25-5 mgdiFosfatasa alcalina 54 UI 35-150 UICK 165 UI 30-200 UISodio 151 mEql 141-160 mEqlPotasio 42 mEql 4-54 mEq1Cloruro 96 mEql 96-122 mEql
Por el contrario si el valor de la proporcioacuten estaacutedentro de la normalidad se puede realizar unadeterminacioacuten de IGF I para confirmar o descar-tar la presencia de una neoplasia extrapancreaacuteti-ca Por el momento soacutelo es posible determinar elvalor de IGF-I y no de IGF-n
Finalmente para confirmar el- diagnoacutestico ysiempre que sea posible es aconsejable realizar elestudio histopatoloacutegico de la masa
CASO CLIacuteNICOEl paciente del caso cliacutenico que nos ocupa es
una perra de raza Pastor alemaacuten de 9 antildeos deedad con una historia cliacutenica anterior de leishma-niosis desde los cuatro antildeos de edad En elmomento de su visita al Hospital Cliacutenico Veteri-nario de la UAB habiacutea sido tratada con N-metil-glucosamina y se le seguiacutea administrando alopuri-noI Los propietarios advierten que desde hace unantildeo la perra ha adelgazado considerablementeaunque su apetito parece haberse incrementado
En el examen fiacutesico se observa una peacuterdida depeso de un 20 depresioacuten debilidad y ataxia Serealiza un hemograma y una bioquiacutemica seacuterica Eluacutenico valor alterado es la concentracioacuten de gluco-sa que resultoacute ser inferior al rango de normalidad(Tablas n y III)
Para la confirmacioacuten de esta posible hipogluce-mia se decide hospitalizar a la perra y se realizancinco determinaciones de glucosa seriadas cada 2horas En todas las determinaciones realizadas elnivel de glucosa seacuterica se mantiene entre 38 y 45mgdi (muy por debajo de los 60 mgdi) por loque pudimos confirmar la hipoglucemia de ayunopersistente
Con los resultados obtenidos se establecioacute undiagnoacutestico diferencial de insulinoma o hipogluce-mia paraneoplaacutesica (ocasionada por una neopla-
amp6
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Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Fig 1 Ecografiacutea de la masa en corte transversal Masa redondeada (23 x 22cm) hipoecogeacutenica en la rama izquierda del paacutencreas
Fig 3 Aspecto macroscoacutepico de la porcioacuten del paacutencreas afectado por la neo-plasia una vez se ha extraiacutedo quiruacutergicamente
sia extrapancreaacutetica) Para diferenciar entre estosdos procesos y poder llegar a un diagnoacutestico defi-nitivo se optoacute por la realizacioacuten de una ecografiacuteaabdominal determinacioacuten de la proporcioacuten IGcorregida y por la realizacioacuten de una laparotomiacuteaexploratoria para poder de esta forma localizarextirpar y realizar el estudio histopatoloacutegico de lamasa
En la ecografiacutea abdominal no se observaron alte-raciones ecograacuteficas en bazo rintildeones ni hiacutegadoSe observoacute el tracto gastrointestinal con gas y unamasa hipoecogeacutenica con un tamantildeo en corte lon-gitudinal de 41 x 22 cm y de 23 x 22 en cortetransversal en la rama izquierda del paacutencreascompatible con una neoplasia pancreaacutetica (Fig 1)
La proporcioacuten IG corregida dio un valor de15875 compatible con un diagnoacutestico de insuli-noma
En la laparotomiacutea exploratoria para mantenerla normoglucemia se instauroacute una fluidoterapiacon dextrosa al 5 y glucosalino isotoacutenico reali-zando controles de glucemia cada 30-60 minutosUna vez estabilizada la perra fue anestesiadasiguiendo un protocolo habitual consistente en la
Fig 2 Localizacioacuten de la masa neoplaacutesica en el paacutencreas
Fig 4 Citologia realizada mediante impronta de la masa neoplaacutesica Diff-QuiklOOOx
premedicacioacuten con diacepam y buprenorfinainduccioacuten con tiopental y halotano para el man-tenimiento
La laparotomiacutea exploratoria se realizoacute de formaconvencional Se localizoacute el noacutedulo en la ramaizquierda del paacutencreas tal y como se habiacutea deter-minado en la ecografiacutea (Fig 2) No se detectaronotros noacutedulos ni en el paacutencreas ni en el resto deoacuterganos abdominales Asiacute mismo los gangliosregionales presentaban un aspecto normal Laexeacuteresis del noacutedulo se realizoacute mediante una pan-createctomiacutea parcial (Fig 3)
Durante el postoperatorio se mantuvo a la perraen ayuno completo (NPO) durante 72 horas paraprevenir una pancreatits postquiruacutergica Duranteeste tiempo se instauroacute una fluidoterapia y anti-bioterapia viacutea sisteacutemica y se realizaron controlesde la glucemia para comprobar que evolucionabacorrectamente La paciente fue dada de alta al ter-cer diacutea de la cirugiacutea presentando una evolucioacutenfavorable La fluidoterapia y la medicacioacuten IV sesustituyoacute por medicacioacuten oral (amoxicilina y cime-tidina) y una dieta rica en fibra (wd)
La citologiacutea de la impronta y el estudio histopa-
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Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
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Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
Oil PET eARE AUO NUTRmON
-~--- ---- ~-- ~
Av E PALooo
xxxv CONGRESO NACIONALMADRID
PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
12-15 de Octubre- del 2000
ASOCIAClON DE VETERINARIOS ESPANtildeOLES ESPECIALISTASEN PEQUENtildeOS ANIMALES
PONENTES EXTRANJEROS
DIGESTIVOMike WiIlard College Station Texas (USA)
NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
Todd R Tams Santa Moacutenica(California - USA)
ONCOLOGIacuteAGregory Ogilive Colorado State University (USA)
IMAGEN Y EMERGENCIASPim Wolwekamp Utrecht University
(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
PONENTES NACIONALES
Miguel Ruiz Peacuterez Cliacutenica Veterinaria Mediterraacuteneo (Madrid)Guadalupe Miro Facultad Veterinaria de MadridFernando Rodriacuteguez Franco Facultad de Vererinaria de Madrid
SESIONES INTERACTIVAS SOBRE CASOS CLIacuteNICOS (2 HORAS CADA UNA) DE
Oftalmologiacutea - Reproduccioacuten - Exoacuteticos - Neurologiacutea - Anestesia
ACTIVIDADES DEL CONGRESO
bull Jornada de Grupos de Trabajo de AVEPA 12 de Octubre del 2000bull Jornada de ATV 14 de Octubre de12000bull Casos Cliacutenicos y Comunicaciones Libresbull Talleres Praacutecticosbull Temas Generales del Congreso Digestivo - Neurologiacutea - Endocrino - Oncologiacutea - Medicina Interna
Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
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SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
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bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
ili45
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
AV E PAVol 20 bull N 1 bull Enero Marzo 2000
DE- PEQUENtildeOS-ANIMALES
Revista Oficial de AVEPA
RESUMEN DEL CONTENIDO
A Andaluz R Ruiz de Gopegui Y Espada F Garciacutea
Se describe un caso de hipoglucemia persistente La historia cliacute-nica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacuterica ecografiacutea e histopa-tologiacutea permiten establecer un diagnoacutestico de insulinoma
G Riera Palou
Se describe la presentacioacuten de una gata disneacuteica tras haber caiacutedodesde una altura de seis metros la exploracioacuten radioloacutegicademostroacute la presencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y la lapa-rotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia de hiato
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez Pajuela M Aranda Luque
Se describe el caso cliacutenico de un gato macho de dos antildeos de edadcon un historial de gingivoestomatitis ulcerativa
MC Marca A Laste 1 Orden JM Gonzaacutelez JA Marsellaacute
Se comprobaron pequentildeas diferencias entre los resultados deTSH con los tres meacutetodos analiacuteticos ensayados pero en generallos valores maacutes elevados se obtuvieron en los perros hipotiroide-os
J1 Veacuterez-Fraguela MA Vives Valleacutes 1J Ezquerra Calvo
La metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie de medicionesprevias sobre animales de experimentacioacuten y finalmente ungrupo de seis animales y un animal control
P Zaragoza 1 Martiacuten-Burriel R asta MGascoacuten
El diagnoacutestico se ha realizado por presenciaausencia del paraacutesi-to utilizando para ello muestras de sangre meacutedula oacutesea y gan-glio linfaacutetico principalmente
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INSULINOMA EN UNA HEMBRA ADULTADE PASTOR ALEMAacuteN
A Andaluz R Ruiacutez de Gopegui Y EspadaF Garciacutea
RESUMEN
Se describe un caso de hipoglucemia persistente enuna hembra adulta de Pastor alemaacuten La historiacliacutenica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacutericaecografiacutea e histopatologiacutea permiten establecer undiagnoacutestico de insulinoma Se procede a la resolucioacutenquiruacutergica de la neoplasia sin complicacionespostquiruacutergicas y con una evolucioacuten favorable durantelos primeros seis meses aunque el pronoacutestico esreservado
Palabras clave Hipoglucemia Insulinoma Perro
INTRODUCCIOacuteN
Los insulinomas son tumores funcionales de lasceacutelulas ~ del paacutencreas endocrino Estos se carac-terizan por una produccioacuten excesiva de insulinaSuelen aparecer en perros adultos de 4 a 15 antildeosde edad No obstante la maacutexima incidenciacorresponde a edades comprendidas entre los 9 y10 anos-- 3 Asiacute mismo se ha descrito una predis-posicioacuten racial en el Pastor alemaacuten GoldenRetriever Setter Irlandeacutes Fax Terrier y Boxer-No hay diferencias de incidencia entre machos yhembras- 3 8
Los insulinomas caninos son tumores malignosy suelen metastatizar a hiacutegado bazo y noacutedulos lin-faacuteticos reqionalesegrave 3 Las metaacutestasis pulmonaresno son frecuentes de modo que las radiografiacuteasde toacuterax no estaacuten indicadas para el diagnoacutestico nipara poder establecer un pronoacutestico fiablegt
En el diagnoacutestico de estas neoplasias el signolaboratorial maacutes indicativo es la deteccioacuten delestado de hipoglucemia de ayuno persistente 3
Esta hipoglucemia definida como una concentra-cioacuten seacuterica de glucosa inferior a 60 mgdl sedebe a la hiperinsulinemia derivada de la produc-
Departamento de Patologiacutea y ProduccioacutenAnimalesFacultad de VeterinariaUniversitatAutoacutenoma de Barcelona08193 BellaterraTelf 93 581 10 90email rafaelruizuabes
ABSTRACT
A clinical case of persistent hypoglycemia wasdescribed in an adult intact female German Shepherddogo Diagnosis of insulinoma was based on clinicalhistory physical exam ultrasonography serumbiochemistry and histopathology Surgical therapywas performed without postsurgical complicationsEvolution six months after surgery was alsoappropriate However prognosis is guarded
Rey words Hypoglycemia Insulinoma Dog
Clan excesiva por las ceacutelulas ~ neoplaacutesicas Lahipoglucemia es la responsable en gran medidade la sintomatologiacutea que manifiestan los perroscon insulinoma debido a la dependencia que tie-nen algunos tejidos de ella Los principales siacutento-mas son neuroloacutegicos y en segundo lugar tambieacutenpodemos observar siacutentomas renales hepaacuteticos ycardiacuteacos1 2 3
No obstante debemos tener en cuenta que elinsulinoma no es la uacutenica causa de hipoglucemiasEn perros de edad adulta la hipoglucemia puedeestar producida por distintos procesos entre losque destacan (Tabla I)
- Errores laboratoacuteriales (hipoglucemia espuacuterea)- Insulinoma- Hipoglucemia paraneoplaacutesica (neoplasia extra-
pancreaacutetica en la que se estariacutean produciendootros factores hipoglucemiantes como el factor decrecimiento afiacuten a la insulina [IGF] I y lI)
- Insuficiencia hepaacutetica- Hipoadrenocorticismo- Procesos intestinales o pancreaacuteticos que cur-
sen con malabsorcioacutenDe todas estas causas el insulinoma y la hipo-
glucemia paraneoplaacutesica son las maacutes frecuentes
r5
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla I Diagnoacutestico diferencial de hipoglucemia
Cachorrosbull Hipoglucemia neonatalbull Hipoglucemia juvenil transitoriabull Anomalias portosisteacutemicasbull Enfermedades del almacenamiento de glucoacutegeno
Adultosbull Hipoglucemia del perro de caza (de esfuerzo)bull Insulinomabull Hipoglucemia paraneoplaacutesicabull Insuficiencia hepaacuteticabull Caquexia
Todosbull Septicemiabull Hipoadrenocorticismobull Enanismo hipoiacuteisanobull Hipoglucemia espuacutereabull Medicamentos
InsulinaEtilenglicolEtanolSalicilatosSulfonilureas
Tabla Il Resultados del hemograma
Muestra ReferenciaEritrocitos 66 x 106111 55-85 106111Hemoglobina 137 gdi 12-18 gdIValor hematocrito 40 37-55 VCM 606 fl 60-77 nCCMH 342 gdi 32-36 gdiHCM 193 pg 195-245 pgLeucocitos 9900111 6000-17000111Linfocitos 891111 720-5100111Monocitos 792111 180-1 700111Cayados 297111 lt 510111Segmentados 6831111 3600-13090111Eosinoacutefilos 1089111 120-1700111Basoacutefilos - lt 170111Plaquetas 220000111 200000-500000111
una vez descartado el error laboratorial Parapoder distinguir entre estos dos procesos esnecesario determinar si la hipoglucemia estaacute pro-ducida por una hiperinsulinemia o bien por unaproduccioacuten excesiva de IGF I o IGF n Esta dife-renciacioacuten se puede realizar mediante la determi-nacioacuten de insulina seacuterica calculando la proporcioacuteninsulinaglucosa corregida En condiciones nor-males el valor de esta proporcioacuten debe ser inferiora 30 microunidades de insulina por mg de gluco-sa2 3 Cuando este valor es superior indica que lacantidad de insulina en relacioacuten a la cantidad deglucosa seacuterica es maacutes alta de lo normal se estaacuteproduciendo maacutes insulina de la que el organismonecesita y el paacutencreas no estaacute respondiendo a laretroalimentacioacuten negativa que en condicionesnormales se produce al disminuir la glucosa seacuteri-ca Estos hechos sugieren la existencia de un insu-linoma
Tabla III Resultados de la bioquiacutemica seacuterica
Muestra ReferenciaGlucosa 45 mgdi 60-115 mgdiColesterol 186 mgdi 140-290 mgdiProteiacutenas totales 76 gdi 65-8 gdICalcio 11 mgdi 89-133 mgdiFoacutesforo 24 mgdI 25-5 mgdiFosfatasa alcalina 54 UI 35-150 UICK 165 UI 30-200 UISodio 151 mEql 141-160 mEqlPotasio 42 mEql 4-54 mEq1Cloruro 96 mEql 96-122 mEql
Por el contrario si el valor de la proporcioacuten estaacutedentro de la normalidad se puede realizar unadeterminacioacuten de IGF I para confirmar o descar-tar la presencia de una neoplasia extrapancreaacuteti-ca Por el momento soacutelo es posible determinar elvalor de IGF-I y no de IGF-n
Finalmente para confirmar el- diagnoacutestico ysiempre que sea posible es aconsejable realizar elestudio histopatoloacutegico de la masa
CASO CLIacuteNICOEl paciente del caso cliacutenico que nos ocupa es
una perra de raza Pastor alemaacuten de 9 antildeos deedad con una historia cliacutenica anterior de leishma-niosis desde los cuatro antildeos de edad En elmomento de su visita al Hospital Cliacutenico Veteri-nario de la UAB habiacutea sido tratada con N-metil-glucosamina y se le seguiacutea administrando alopuri-noI Los propietarios advierten que desde hace unantildeo la perra ha adelgazado considerablementeaunque su apetito parece haberse incrementado
En el examen fiacutesico se observa una peacuterdida depeso de un 20 depresioacuten debilidad y ataxia Serealiza un hemograma y una bioquiacutemica seacuterica Eluacutenico valor alterado es la concentracioacuten de gluco-sa que resultoacute ser inferior al rango de normalidad(Tablas n y III)
Para la confirmacioacuten de esta posible hipogluce-mia se decide hospitalizar a la perra y se realizancinco determinaciones de glucosa seriadas cada 2horas En todas las determinaciones realizadas elnivel de glucosa seacuterica se mantiene entre 38 y 45mgdi (muy por debajo de los 60 mgdi) por loque pudimos confirmar la hipoglucemia de ayunopersistente
Con los resultados obtenidos se establecioacute undiagnoacutestico diferencial de insulinoma o hipogluce-mia paraneoplaacutesica (ocasionada por una neopla-
amp6
Gama dealimentos Hills
Science PlanCanine en seco
lkgNuevo tamantildeo de
prueba de 1 kg
3 kgTamantildeo de 3 kg a un
mejor precio(coste por diacutea)
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Fig 1 Ecografiacutea de la masa en corte transversal Masa redondeada (23 x 22cm) hipoecogeacutenica en la rama izquierda del paacutencreas
Fig 3 Aspecto macroscoacutepico de la porcioacuten del paacutencreas afectado por la neo-plasia una vez se ha extraiacutedo quiruacutergicamente
sia extrapancreaacutetica) Para diferenciar entre estosdos procesos y poder llegar a un diagnoacutestico defi-nitivo se optoacute por la realizacioacuten de una ecografiacuteaabdominal determinacioacuten de la proporcioacuten IGcorregida y por la realizacioacuten de una laparotomiacuteaexploratoria para poder de esta forma localizarextirpar y realizar el estudio histopatoloacutegico de lamasa
En la ecografiacutea abdominal no se observaron alte-raciones ecograacuteficas en bazo rintildeones ni hiacutegadoSe observoacute el tracto gastrointestinal con gas y unamasa hipoecogeacutenica con un tamantildeo en corte lon-gitudinal de 41 x 22 cm y de 23 x 22 en cortetransversal en la rama izquierda del paacutencreascompatible con una neoplasia pancreaacutetica (Fig 1)
La proporcioacuten IG corregida dio un valor de15875 compatible con un diagnoacutestico de insuli-noma
En la laparotomiacutea exploratoria para mantenerla normoglucemia se instauroacute una fluidoterapiacon dextrosa al 5 y glucosalino isotoacutenico reali-zando controles de glucemia cada 30-60 minutosUna vez estabilizada la perra fue anestesiadasiguiendo un protocolo habitual consistente en la
Fig 2 Localizacioacuten de la masa neoplaacutesica en el paacutencreas
Fig 4 Citologia realizada mediante impronta de la masa neoplaacutesica Diff-QuiklOOOx
premedicacioacuten con diacepam y buprenorfinainduccioacuten con tiopental y halotano para el man-tenimiento
La laparotomiacutea exploratoria se realizoacute de formaconvencional Se localizoacute el noacutedulo en la ramaizquierda del paacutencreas tal y como se habiacutea deter-minado en la ecografiacutea (Fig 2) No se detectaronotros noacutedulos ni en el paacutencreas ni en el resto deoacuterganos abdominales Asiacute mismo los gangliosregionales presentaban un aspecto normal Laexeacuteresis del noacutedulo se realizoacute mediante una pan-createctomiacutea parcial (Fig 3)
Durante el postoperatorio se mantuvo a la perraen ayuno completo (NPO) durante 72 horas paraprevenir una pancreatits postquiruacutergica Duranteeste tiempo se instauroacute una fluidoterapia y anti-bioterapia viacutea sisteacutemica y se realizaron controlesde la glucemia para comprobar que evolucionabacorrectamente La paciente fue dada de alta al ter-cer diacutea de la cirugiacutea presentando una evolucioacutenfavorable La fluidoterapia y la medicacioacuten IV sesustituyoacute por medicacioacuten oral (amoxicilina y cime-tidina) y una dieta rica en fibra (wd)
La citologiacutea de la impronta y el estudio histopa-
r8
Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
9
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
Oil PET eARE AUO NUTRmON
-~--- ---- ~-- ~
Av E PALooo
xxxv CONGRESO NACIONALMADRID
PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
12-15 de Octubre- del 2000
ASOCIAClON DE VETERINARIOS ESPANtildeOLES ESPECIALISTASEN PEQUENtildeOS ANIMALES
PONENTES EXTRANJEROS
DIGESTIVOMike WiIlard College Station Texas (USA)
NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
Todd R Tams Santa Moacutenica(California - USA)
ONCOLOGIacuteAGregory Ogilive Colorado State University (USA)
IMAGEN Y EMERGENCIASPim Wolwekamp Utrecht University
(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
PONENTES NACIONALES
Miguel Ruiz Peacuterez Cliacutenica Veterinaria Mediterraacuteneo (Madrid)Guadalupe Miro Facultad Veterinaria de MadridFernando Rodriacuteguez Franco Facultad de Vererinaria de Madrid
SESIONES INTERACTIVAS SOBRE CASOS CLIacuteNICOS (2 HORAS CADA UNA) DE
Oftalmologiacutea - Reproduccioacuten - Exoacuteticos - Neurologiacutea - Anestesia
ACTIVIDADES DEL CONGRESO
bull Jornada de Grupos de Trabajo de AVEPA 12 de Octubre del 2000bull Jornada de ATV 14 de Octubre de12000bull Casos Cliacutenicos y Comunicaciones Libresbull Talleres Praacutecticosbull Temas Generales del Congreso Digestivo - Neurologiacutea - Endocrino - Oncologiacutea - Medicina Interna
Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
INFORMACIOacuteN GENERAL
FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
15
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
r17
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
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Dermatologia 11Santiago24 - 25
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INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
El libro del Dr Patrick Pageat(en su uacuteltima edicioacuten) aportaun inmenso caudal deconocimientos acerca de lapatologiacutea del comportamientccedil
caruno y una nueva VISIonsobre dicha patologiacuteaespecialmente interesantepara lascliacutenicas
Patologiacutea delcOllllportalllliento
del perro
AutorDr Patrlck Pageat
TraduccioacutenDra Victograveria Coll
Formato 17x 24 cm384 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
CUPOacuteN DE PEDIDOO Siacute deseo recibir el libro Patologiacutea del comportamiento del perro 11
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Nombre Apellidos Direccioacuten Poblacioacuten CP Paiacutes ~ Telf Actividad
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Firma
INSULINOMA EN UNA HEMBRA ADULTADE PASTOR ALEMAacuteN
A Andaluz R Ruiacutez de Gopegui Y EspadaF Garciacutea
RESUMEN
Se describe un caso de hipoglucemia persistente enuna hembra adulta de Pastor alemaacuten La historiacliacutenica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacutericaecografiacutea e histopatologiacutea permiten establecer undiagnoacutestico de insulinoma Se procede a la resolucioacutenquiruacutergica de la neoplasia sin complicacionespostquiruacutergicas y con una evolucioacuten favorable durantelos primeros seis meses aunque el pronoacutestico esreservado
Palabras clave Hipoglucemia Insulinoma Perro
INTRODUCCIOacuteN
Los insulinomas son tumores funcionales de lasceacutelulas ~ del paacutencreas endocrino Estos se carac-terizan por una produccioacuten excesiva de insulinaSuelen aparecer en perros adultos de 4 a 15 antildeosde edad No obstante la maacutexima incidenciacorresponde a edades comprendidas entre los 9 y10 anos-- 3 Asiacute mismo se ha descrito una predis-posicioacuten racial en el Pastor alemaacuten GoldenRetriever Setter Irlandeacutes Fax Terrier y Boxer-No hay diferencias de incidencia entre machos yhembras- 3 8
Los insulinomas caninos son tumores malignosy suelen metastatizar a hiacutegado bazo y noacutedulos lin-faacuteticos reqionalesegrave 3 Las metaacutestasis pulmonaresno son frecuentes de modo que las radiografiacuteasde toacuterax no estaacuten indicadas para el diagnoacutestico nipara poder establecer un pronoacutestico fiablegt
En el diagnoacutestico de estas neoplasias el signolaboratorial maacutes indicativo es la deteccioacuten delestado de hipoglucemia de ayuno persistente 3
Esta hipoglucemia definida como una concentra-cioacuten seacuterica de glucosa inferior a 60 mgdl sedebe a la hiperinsulinemia derivada de la produc-
Departamento de Patologiacutea y ProduccioacutenAnimalesFacultad de VeterinariaUniversitatAutoacutenoma de Barcelona08193 BellaterraTelf 93 581 10 90email rafaelruizuabes
ABSTRACT
A clinical case of persistent hypoglycemia wasdescribed in an adult intact female German Shepherddogo Diagnosis of insulinoma was based on clinicalhistory physical exam ultrasonography serumbiochemistry and histopathology Surgical therapywas performed without postsurgical complicationsEvolution six months after surgery was alsoappropriate However prognosis is guarded
Rey words Hypoglycemia Insulinoma Dog
Clan excesiva por las ceacutelulas ~ neoplaacutesicas Lahipoglucemia es la responsable en gran medidade la sintomatologiacutea que manifiestan los perroscon insulinoma debido a la dependencia que tie-nen algunos tejidos de ella Los principales siacutento-mas son neuroloacutegicos y en segundo lugar tambieacutenpodemos observar siacutentomas renales hepaacuteticos ycardiacuteacos1 2 3
No obstante debemos tener en cuenta que elinsulinoma no es la uacutenica causa de hipoglucemiasEn perros de edad adulta la hipoglucemia puedeestar producida por distintos procesos entre losque destacan (Tabla I)
- Errores laboratoacuteriales (hipoglucemia espuacuterea)- Insulinoma- Hipoglucemia paraneoplaacutesica (neoplasia extra-
pancreaacutetica en la que se estariacutean produciendootros factores hipoglucemiantes como el factor decrecimiento afiacuten a la insulina [IGF] I y lI)
- Insuficiencia hepaacutetica- Hipoadrenocorticismo- Procesos intestinales o pancreaacuteticos que cur-
sen con malabsorcioacutenDe todas estas causas el insulinoma y la hipo-
glucemia paraneoplaacutesica son las maacutes frecuentes
r5
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla I Diagnoacutestico diferencial de hipoglucemia
Cachorrosbull Hipoglucemia neonatalbull Hipoglucemia juvenil transitoriabull Anomalias portosisteacutemicasbull Enfermedades del almacenamiento de glucoacutegeno
Adultosbull Hipoglucemia del perro de caza (de esfuerzo)bull Insulinomabull Hipoglucemia paraneoplaacutesicabull Insuficiencia hepaacuteticabull Caquexia
Todosbull Septicemiabull Hipoadrenocorticismobull Enanismo hipoiacuteisanobull Hipoglucemia espuacutereabull Medicamentos
InsulinaEtilenglicolEtanolSalicilatosSulfonilureas
Tabla Il Resultados del hemograma
Muestra ReferenciaEritrocitos 66 x 106111 55-85 106111Hemoglobina 137 gdi 12-18 gdIValor hematocrito 40 37-55 VCM 606 fl 60-77 nCCMH 342 gdi 32-36 gdiHCM 193 pg 195-245 pgLeucocitos 9900111 6000-17000111Linfocitos 891111 720-5100111Monocitos 792111 180-1 700111Cayados 297111 lt 510111Segmentados 6831111 3600-13090111Eosinoacutefilos 1089111 120-1700111Basoacutefilos - lt 170111Plaquetas 220000111 200000-500000111
una vez descartado el error laboratorial Parapoder distinguir entre estos dos procesos esnecesario determinar si la hipoglucemia estaacute pro-ducida por una hiperinsulinemia o bien por unaproduccioacuten excesiva de IGF I o IGF n Esta dife-renciacioacuten se puede realizar mediante la determi-nacioacuten de insulina seacuterica calculando la proporcioacuteninsulinaglucosa corregida En condiciones nor-males el valor de esta proporcioacuten debe ser inferiora 30 microunidades de insulina por mg de gluco-sa2 3 Cuando este valor es superior indica que lacantidad de insulina en relacioacuten a la cantidad deglucosa seacuterica es maacutes alta de lo normal se estaacuteproduciendo maacutes insulina de la que el organismonecesita y el paacutencreas no estaacute respondiendo a laretroalimentacioacuten negativa que en condicionesnormales se produce al disminuir la glucosa seacuteri-ca Estos hechos sugieren la existencia de un insu-linoma
Tabla III Resultados de la bioquiacutemica seacuterica
Muestra ReferenciaGlucosa 45 mgdi 60-115 mgdiColesterol 186 mgdi 140-290 mgdiProteiacutenas totales 76 gdi 65-8 gdICalcio 11 mgdi 89-133 mgdiFoacutesforo 24 mgdI 25-5 mgdiFosfatasa alcalina 54 UI 35-150 UICK 165 UI 30-200 UISodio 151 mEql 141-160 mEqlPotasio 42 mEql 4-54 mEq1Cloruro 96 mEql 96-122 mEql
Por el contrario si el valor de la proporcioacuten estaacutedentro de la normalidad se puede realizar unadeterminacioacuten de IGF I para confirmar o descar-tar la presencia de una neoplasia extrapancreaacuteti-ca Por el momento soacutelo es posible determinar elvalor de IGF-I y no de IGF-n
Finalmente para confirmar el- diagnoacutestico ysiempre que sea posible es aconsejable realizar elestudio histopatoloacutegico de la masa
CASO CLIacuteNICOEl paciente del caso cliacutenico que nos ocupa es
una perra de raza Pastor alemaacuten de 9 antildeos deedad con una historia cliacutenica anterior de leishma-niosis desde los cuatro antildeos de edad En elmomento de su visita al Hospital Cliacutenico Veteri-nario de la UAB habiacutea sido tratada con N-metil-glucosamina y se le seguiacutea administrando alopuri-noI Los propietarios advierten que desde hace unantildeo la perra ha adelgazado considerablementeaunque su apetito parece haberse incrementado
En el examen fiacutesico se observa una peacuterdida depeso de un 20 depresioacuten debilidad y ataxia Serealiza un hemograma y una bioquiacutemica seacuterica Eluacutenico valor alterado es la concentracioacuten de gluco-sa que resultoacute ser inferior al rango de normalidad(Tablas n y III)
Para la confirmacioacuten de esta posible hipogluce-mia se decide hospitalizar a la perra y se realizancinco determinaciones de glucosa seriadas cada 2horas En todas las determinaciones realizadas elnivel de glucosa seacuterica se mantiene entre 38 y 45mgdi (muy por debajo de los 60 mgdi) por loque pudimos confirmar la hipoglucemia de ayunopersistente
Con los resultados obtenidos se establecioacute undiagnoacutestico diferencial de insulinoma o hipogluce-mia paraneoplaacutesica (ocasionada por una neopla-
amp6
Gama dealimentos Hills
Science PlanCanine en seco
lkgNuevo tamantildeo de
prueba de 1 kg
3 kgTamantildeo de 3 kg a un
mejor precio(coste por diacutea)
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Fig 1 Ecografiacutea de la masa en corte transversal Masa redondeada (23 x 22cm) hipoecogeacutenica en la rama izquierda del paacutencreas
Fig 3 Aspecto macroscoacutepico de la porcioacuten del paacutencreas afectado por la neo-plasia una vez se ha extraiacutedo quiruacutergicamente
sia extrapancreaacutetica) Para diferenciar entre estosdos procesos y poder llegar a un diagnoacutestico defi-nitivo se optoacute por la realizacioacuten de una ecografiacuteaabdominal determinacioacuten de la proporcioacuten IGcorregida y por la realizacioacuten de una laparotomiacuteaexploratoria para poder de esta forma localizarextirpar y realizar el estudio histopatoloacutegico de lamasa
En la ecografiacutea abdominal no se observaron alte-raciones ecograacuteficas en bazo rintildeones ni hiacutegadoSe observoacute el tracto gastrointestinal con gas y unamasa hipoecogeacutenica con un tamantildeo en corte lon-gitudinal de 41 x 22 cm y de 23 x 22 en cortetransversal en la rama izquierda del paacutencreascompatible con una neoplasia pancreaacutetica (Fig 1)
La proporcioacuten IG corregida dio un valor de15875 compatible con un diagnoacutestico de insuli-noma
En la laparotomiacutea exploratoria para mantenerla normoglucemia se instauroacute una fluidoterapiacon dextrosa al 5 y glucosalino isotoacutenico reali-zando controles de glucemia cada 30-60 minutosUna vez estabilizada la perra fue anestesiadasiguiendo un protocolo habitual consistente en la
Fig 2 Localizacioacuten de la masa neoplaacutesica en el paacutencreas
Fig 4 Citologia realizada mediante impronta de la masa neoplaacutesica Diff-QuiklOOOx
premedicacioacuten con diacepam y buprenorfinainduccioacuten con tiopental y halotano para el man-tenimiento
La laparotomiacutea exploratoria se realizoacute de formaconvencional Se localizoacute el noacutedulo en la ramaizquierda del paacutencreas tal y como se habiacutea deter-minado en la ecografiacutea (Fig 2) No se detectaronotros noacutedulos ni en el paacutencreas ni en el resto deoacuterganos abdominales Asiacute mismo los gangliosregionales presentaban un aspecto normal Laexeacuteresis del noacutedulo se realizoacute mediante una pan-createctomiacutea parcial (Fig 3)
Durante el postoperatorio se mantuvo a la perraen ayuno completo (NPO) durante 72 horas paraprevenir una pancreatits postquiruacutergica Duranteeste tiempo se instauroacute una fluidoterapia y anti-bioterapia viacutea sisteacutemica y se realizaron controlesde la glucemia para comprobar que evolucionabacorrectamente La paciente fue dada de alta al ter-cer diacutea de la cirugiacutea presentando una evolucioacutenfavorable La fluidoterapia y la medicacioacuten IV sesustituyoacute por medicacioacuten oral (amoxicilina y cime-tidina) y una dieta rica en fibra (wd)
La citologiacutea de la impronta y el estudio histopa-
r8
Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
9
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
Oil PET eARE AUO NUTRmON
-~--- ---- ~-- ~
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xxxv CONGRESO NACIONALMADRID
PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
12-15 de Octubre- del 2000
ASOCIAClON DE VETERINARIOS ESPANtildeOLES ESPECIALISTASEN PEQUENtildeOS ANIMALES
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DIGESTIVOMike WiIlard College Station Texas (USA)
NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
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ONCOLOGIacuteAGregory Ogilive Colorado State University (USA)
IMAGEN Y EMERGENCIASPim Wolwekamp Utrecht University
(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
PONENTES NACIONALES
Miguel Ruiz Peacuterez Cliacutenica Veterinaria Mediterraacuteneo (Madrid)Guadalupe Miro Facultad Veterinaria de MadridFernando Rodriacuteguez Franco Facultad de Vererinaria de Madrid
SESIONES INTERACTIVAS SOBRE CASOS CLIacuteNICOS (2 HORAS CADA UNA) DE
Oftalmologiacutea - Reproduccioacuten - Exoacuteticos - Neurologiacutea - Anestesia
ACTIVIDADES DEL CONGRESO
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Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
INFORMACIOacuteN GENERAL
FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
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CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
PU~ecIIcIona ICL
Rambla del Celler 117-11908190 Sant Cugat del Vallegraves bull Tel 93 589 62 64
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~16~ 14e 12
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O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
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O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
INSULINOMA EN UNA HEMBRA ADULTADE PASTOR ALEMAacuteN
A Andaluz R Ruiacutez de Gopegui Y EspadaF Garciacutea
RESUMEN
Se describe un caso de hipoglucemia persistente enuna hembra adulta de Pastor alemaacuten La historiacliacutenica exploracioacuten directa bioquiacutemica seacutericaecografiacutea e histopatologiacutea permiten establecer undiagnoacutestico de insulinoma Se procede a la resolucioacutenquiruacutergica de la neoplasia sin complicacionespostquiruacutergicas y con una evolucioacuten favorable durantelos primeros seis meses aunque el pronoacutestico esreservado
Palabras clave Hipoglucemia Insulinoma Perro
INTRODUCCIOacuteN
Los insulinomas son tumores funcionales de lasceacutelulas ~ del paacutencreas endocrino Estos se carac-terizan por una produccioacuten excesiva de insulinaSuelen aparecer en perros adultos de 4 a 15 antildeosde edad No obstante la maacutexima incidenciacorresponde a edades comprendidas entre los 9 y10 anos-- 3 Asiacute mismo se ha descrito una predis-posicioacuten racial en el Pastor alemaacuten GoldenRetriever Setter Irlandeacutes Fax Terrier y Boxer-No hay diferencias de incidencia entre machos yhembras- 3 8
Los insulinomas caninos son tumores malignosy suelen metastatizar a hiacutegado bazo y noacutedulos lin-faacuteticos reqionalesegrave 3 Las metaacutestasis pulmonaresno son frecuentes de modo que las radiografiacuteasde toacuterax no estaacuten indicadas para el diagnoacutestico nipara poder establecer un pronoacutestico fiablegt
En el diagnoacutestico de estas neoplasias el signolaboratorial maacutes indicativo es la deteccioacuten delestado de hipoglucemia de ayuno persistente 3
Esta hipoglucemia definida como una concentra-cioacuten seacuterica de glucosa inferior a 60 mgdl sedebe a la hiperinsulinemia derivada de la produc-
Departamento de Patologiacutea y ProduccioacutenAnimalesFacultad de VeterinariaUniversitatAutoacutenoma de Barcelona08193 BellaterraTelf 93 581 10 90email rafaelruizuabes
ABSTRACT
A clinical case of persistent hypoglycemia wasdescribed in an adult intact female German Shepherddogo Diagnosis of insulinoma was based on clinicalhistory physical exam ultrasonography serumbiochemistry and histopathology Surgical therapywas performed without postsurgical complicationsEvolution six months after surgery was alsoappropriate However prognosis is guarded
Rey words Hypoglycemia Insulinoma Dog
Clan excesiva por las ceacutelulas ~ neoplaacutesicas Lahipoglucemia es la responsable en gran medidade la sintomatologiacutea que manifiestan los perroscon insulinoma debido a la dependencia que tie-nen algunos tejidos de ella Los principales siacutento-mas son neuroloacutegicos y en segundo lugar tambieacutenpodemos observar siacutentomas renales hepaacuteticos ycardiacuteacos1 2 3
No obstante debemos tener en cuenta que elinsulinoma no es la uacutenica causa de hipoglucemiasEn perros de edad adulta la hipoglucemia puedeestar producida por distintos procesos entre losque destacan (Tabla I)
- Errores laboratoacuteriales (hipoglucemia espuacuterea)- Insulinoma- Hipoglucemia paraneoplaacutesica (neoplasia extra-
pancreaacutetica en la que se estariacutean produciendootros factores hipoglucemiantes como el factor decrecimiento afiacuten a la insulina [IGF] I y lI)
- Insuficiencia hepaacutetica- Hipoadrenocorticismo- Procesos intestinales o pancreaacuteticos que cur-
sen con malabsorcioacutenDe todas estas causas el insulinoma y la hipo-
glucemia paraneoplaacutesica son las maacutes frecuentes
r5
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla I Diagnoacutestico diferencial de hipoglucemia
Cachorrosbull Hipoglucemia neonatalbull Hipoglucemia juvenil transitoriabull Anomalias portosisteacutemicasbull Enfermedades del almacenamiento de glucoacutegeno
Adultosbull Hipoglucemia del perro de caza (de esfuerzo)bull Insulinomabull Hipoglucemia paraneoplaacutesicabull Insuficiencia hepaacuteticabull Caquexia
Todosbull Septicemiabull Hipoadrenocorticismobull Enanismo hipoiacuteisanobull Hipoglucemia espuacutereabull Medicamentos
InsulinaEtilenglicolEtanolSalicilatosSulfonilureas
Tabla Il Resultados del hemograma
Muestra ReferenciaEritrocitos 66 x 106111 55-85 106111Hemoglobina 137 gdi 12-18 gdIValor hematocrito 40 37-55 VCM 606 fl 60-77 nCCMH 342 gdi 32-36 gdiHCM 193 pg 195-245 pgLeucocitos 9900111 6000-17000111Linfocitos 891111 720-5100111Monocitos 792111 180-1 700111Cayados 297111 lt 510111Segmentados 6831111 3600-13090111Eosinoacutefilos 1089111 120-1700111Basoacutefilos - lt 170111Plaquetas 220000111 200000-500000111
una vez descartado el error laboratorial Parapoder distinguir entre estos dos procesos esnecesario determinar si la hipoglucemia estaacute pro-ducida por una hiperinsulinemia o bien por unaproduccioacuten excesiva de IGF I o IGF n Esta dife-renciacioacuten se puede realizar mediante la determi-nacioacuten de insulina seacuterica calculando la proporcioacuteninsulinaglucosa corregida En condiciones nor-males el valor de esta proporcioacuten debe ser inferiora 30 microunidades de insulina por mg de gluco-sa2 3 Cuando este valor es superior indica que lacantidad de insulina en relacioacuten a la cantidad deglucosa seacuterica es maacutes alta de lo normal se estaacuteproduciendo maacutes insulina de la que el organismonecesita y el paacutencreas no estaacute respondiendo a laretroalimentacioacuten negativa que en condicionesnormales se produce al disminuir la glucosa seacuteri-ca Estos hechos sugieren la existencia de un insu-linoma
Tabla III Resultados de la bioquiacutemica seacuterica
Muestra ReferenciaGlucosa 45 mgdi 60-115 mgdiColesterol 186 mgdi 140-290 mgdiProteiacutenas totales 76 gdi 65-8 gdICalcio 11 mgdi 89-133 mgdiFoacutesforo 24 mgdI 25-5 mgdiFosfatasa alcalina 54 UI 35-150 UICK 165 UI 30-200 UISodio 151 mEql 141-160 mEqlPotasio 42 mEql 4-54 mEq1Cloruro 96 mEql 96-122 mEql
Por el contrario si el valor de la proporcioacuten estaacutedentro de la normalidad se puede realizar unadeterminacioacuten de IGF I para confirmar o descar-tar la presencia de una neoplasia extrapancreaacuteti-ca Por el momento soacutelo es posible determinar elvalor de IGF-I y no de IGF-n
Finalmente para confirmar el- diagnoacutestico ysiempre que sea posible es aconsejable realizar elestudio histopatoloacutegico de la masa
CASO CLIacuteNICOEl paciente del caso cliacutenico que nos ocupa es
una perra de raza Pastor alemaacuten de 9 antildeos deedad con una historia cliacutenica anterior de leishma-niosis desde los cuatro antildeos de edad En elmomento de su visita al Hospital Cliacutenico Veteri-nario de la UAB habiacutea sido tratada con N-metil-glucosamina y se le seguiacutea administrando alopuri-noI Los propietarios advierten que desde hace unantildeo la perra ha adelgazado considerablementeaunque su apetito parece haberse incrementado
En el examen fiacutesico se observa una peacuterdida depeso de un 20 depresioacuten debilidad y ataxia Serealiza un hemograma y una bioquiacutemica seacuterica Eluacutenico valor alterado es la concentracioacuten de gluco-sa que resultoacute ser inferior al rango de normalidad(Tablas n y III)
Para la confirmacioacuten de esta posible hipogluce-mia se decide hospitalizar a la perra y se realizancinco determinaciones de glucosa seriadas cada 2horas En todas las determinaciones realizadas elnivel de glucosa seacuterica se mantiene entre 38 y 45mgdi (muy por debajo de los 60 mgdi) por loque pudimos confirmar la hipoglucemia de ayunopersistente
Con los resultados obtenidos se establecioacute undiagnoacutestico diferencial de insulinoma o hipogluce-mia paraneoplaacutesica (ocasionada por una neopla-
amp6
Gama dealimentos Hills
Science PlanCanine en seco
lkgNuevo tamantildeo de
prueba de 1 kg
3 kgTamantildeo de 3 kg a un
mejor precio(coste por diacutea)
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Fig 1 Ecografiacutea de la masa en corte transversal Masa redondeada (23 x 22cm) hipoecogeacutenica en la rama izquierda del paacutencreas
Fig 3 Aspecto macroscoacutepico de la porcioacuten del paacutencreas afectado por la neo-plasia una vez se ha extraiacutedo quiruacutergicamente
sia extrapancreaacutetica) Para diferenciar entre estosdos procesos y poder llegar a un diagnoacutestico defi-nitivo se optoacute por la realizacioacuten de una ecografiacuteaabdominal determinacioacuten de la proporcioacuten IGcorregida y por la realizacioacuten de una laparotomiacuteaexploratoria para poder de esta forma localizarextirpar y realizar el estudio histopatoloacutegico de lamasa
En la ecografiacutea abdominal no se observaron alte-raciones ecograacuteficas en bazo rintildeones ni hiacutegadoSe observoacute el tracto gastrointestinal con gas y unamasa hipoecogeacutenica con un tamantildeo en corte lon-gitudinal de 41 x 22 cm y de 23 x 22 en cortetransversal en la rama izquierda del paacutencreascompatible con una neoplasia pancreaacutetica (Fig 1)
La proporcioacuten IG corregida dio un valor de15875 compatible con un diagnoacutestico de insuli-noma
En la laparotomiacutea exploratoria para mantenerla normoglucemia se instauroacute una fluidoterapiacon dextrosa al 5 y glucosalino isotoacutenico reali-zando controles de glucemia cada 30-60 minutosUna vez estabilizada la perra fue anestesiadasiguiendo un protocolo habitual consistente en la
Fig 2 Localizacioacuten de la masa neoplaacutesica en el paacutencreas
Fig 4 Citologia realizada mediante impronta de la masa neoplaacutesica Diff-QuiklOOOx
premedicacioacuten con diacepam y buprenorfinainduccioacuten con tiopental y halotano para el man-tenimiento
La laparotomiacutea exploratoria se realizoacute de formaconvencional Se localizoacute el noacutedulo en la ramaizquierda del paacutencreas tal y como se habiacutea deter-minado en la ecografiacutea (Fig 2) No se detectaronotros noacutedulos ni en el paacutencreas ni en el resto deoacuterganos abdominales Asiacute mismo los gangliosregionales presentaban un aspecto normal Laexeacuteresis del noacutedulo se realizoacute mediante una pan-createctomiacutea parcial (Fig 3)
Durante el postoperatorio se mantuvo a la perraen ayuno completo (NPO) durante 72 horas paraprevenir una pancreatits postquiruacutergica Duranteeste tiempo se instauroacute una fluidoterapia y anti-bioterapia viacutea sisteacutemica y se realizaron controlesde la glucemia para comprobar que evolucionabacorrectamente La paciente fue dada de alta al ter-cer diacutea de la cirugiacutea presentando una evolucioacutenfavorable La fluidoterapia y la medicacioacuten IV sesustituyoacute por medicacioacuten oral (amoxicilina y cime-tidina) y una dieta rica en fibra (wd)
La citologiacutea de la impronta y el estudio histopa-
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Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
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Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
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fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
Oil PET eARE AUO NUTRmON
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Av E PALooo
xxxv CONGRESO NACIONALMADRID
PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
12-15 de Octubre- del 2000
ASOCIAClON DE VETERINARIOS ESPANtildeOLES ESPECIALISTASEN PEQUENtildeOS ANIMALES
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DIGESTIVOMike WiIlard College Station Texas (USA)
NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
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IMAGEN Y EMERGENCIASPim Wolwekamp Utrecht University
(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
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Oftalmologiacutea - Reproduccioacuten - Exoacuteticos - Neurologiacutea - Anestesia
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EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
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HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
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bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
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bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
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bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla I Diagnoacutestico diferencial de hipoglucemia
Cachorrosbull Hipoglucemia neonatalbull Hipoglucemia juvenil transitoriabull Anomalias portosisteacutemicasbull Enfermedades del almacenamiento de glucoacutegeno
Adultosbull Hipoglucemia del perro de caza (de esfuerzo)bull Insulinomabull Hipoglucemia paraneoplaacutesicabull Insuficiencia hepaacuteticabull Caquexia
Todosbull Septicemiabull Hipoadrenocorticismobull Enanismo hipoiacuteisanobull Hipoglucemia espuacutereabull Medicamentos
InsulinaEtilenglicolEtanolSalicilatosSulfonilureas
Tabla Il Resultados del hemograma
Muestra ReferenciaEritrocitos 66 x 106111 55-85 106111Hemoglobina 137 gdi 12-18 gdIValor hematocrito 40 37-55 VCM 606 fl 60-77 nCCMH 342 gdi 32-36 gdiHCM 193 pg 195-245 pgLeucocitos 9900111 6000-17000111Linfocitos 891111 720-5100111Monocitos 792111 180-1 700111Cayados 297111 lt 510111Segmentados 6831111 3600-13090111Eosinoacutefilos 1089111 120-1700111Basoacutefilos - lt 170111Plaquetas 220000111 200000-500000111
una vez descartado el error laboratorial Parapoder distinguir entre estos dos procesos esnecesario determinar si la hipoglucemia estaacute pro-ducida por una hiperinsulinemia o bien por unaproduccioacuten excesiva de IGF I o IGF n Esta dife-renciacioacuten se puede realizar mediante la determi-nacioacuten de insulina seacuterica calculando la proporcioacuteninsulinaglucosa corregida En condiciones nor-males el valor de esta proporcioacuten debe ser inferiora 30 microunidades de insulina por mg de gluco-sa2 3 Cuando este valor es superior indica que lacantidad de insulina en relacioacuten a la cantidad deglucosa seacuterica es maacutes alta de lo normal se estaacuteproduciendo maacutes insulina de la que el organismonecesita y el paacutencreas no estaacute respondiendo a laretroalimentacioacuten negativa que en condicionesnormales se produce al disminuir la glucosa seacuteri-ca Estos hechos sugieren la existencia de un insu-linoma
Tabla III Resultados de la bioquiacutemica seacuterica
Muestra ReferenciaGlucosa 45 mgdi 60-115 mgdiColesterol 186 mgdi 140-290 mgdiProteiacutenas totales 76 gdi 65-8 gdICalcio 11 mgdi 89-133 mgdiFoacutesforo 24 mgdI 25-5 mgdiFosfatasa alcalina 54 UI 35-150 UICK 165 UI 30-200 UISodio 151 mEql 141-160 mEqlPotasio 42 mEql 4-54 mEq1Cloruro 96 mEql 96-122 mEql
Por el contrario si el valor de la proporcioacuten estaacutedentro de la normalidad se puede realizar unadeterminacioacuten de IGF I para confirmar o descar-tar la presencia de una neoplasia extrapancreaacuteti-ca Por el momento soacutelo es posible determinar elvalor de IGF-I y no de IGF-n
Finalmente para confirmar el- diagnoacutestico ysiempre que sea posible es aconsejable realizar elestudio histopatoloacutegico de la masa
CASO CLIacuteNICOEl paciente del caso cliacutenico que nos ocupa es
una perra de raza Pastor alemaacuten de 9 antildeos deedad con una historia cliacutenica anterior de leishma-niosis desde los cuatro antildeos de edad En elmomento de su visita al Hospital Cliacutenico Veteri-nario de la UAB habiacutea sido tratada con N-metil-glucosamina y se le seguiacutea administrando alopuri-noI Los propietarios advierten que desde hace unantildeo la perra ha adelgazado considerablementeaunque su apetito parece haberse incrementado
En el examen fiacutesico se observa una peacuterdida depeso de un 20 depresioacuten debilidad y ataxia Serealiza un hemograma y una bioquiacutemica seacuterica Eluacutenico valor alterado es la concentracioacuten de gluco-sa que resultoacute ser inferior al rango de normalidad(Tablas n y III)
Para la confirmacioacuten de esta posible hipogluce-mia se decide hospitalizar a la perra y se realizancinco determinaciones de glucosa seriadas cada 2horas En todas las determinaciones realizadas elnivel de glucosa seacuterica se mantiene entre 38 y 45mgdi (muy por debajo de los 60 mgdi) por loque pudimos confirmar la hipoglucemia de ayunopersistente
Con los resultados obtenidos se establecioacute undiagnoacutestico diferencial de insulinoma o hipogluce-mia paraneoplaacutesica (ocasionada por una neopla-
amp6
Gama dealimentos Hills
Science PlanCanine en seco
lkgNuevo tamantildeo de
prueba de 1 kg
3 kgTamantildeo de 3 kg a un
mejor precio(coste por diacutea)
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Fig 1 Ecografiacutea de la masa en corte transversal Masa redondeada (23 x 22cm) hipoecogeacutenica en la rama izquierda del paacutencreas
Fig 3 Aspecto macroscoacutepico de la porcioacuten del paacutencreas afectado por la neo-plasia una vez se ha extraiacutedo quiruacutergicamente
sia extrapancreaacutetica) Para diferenciar entre estosdos procesos y poder llegar a un diagnoacutestico defi-nitivo se optoacute por la realizacioacuten de una ecografiacuteaabdominal determinacioacuten de la proporcioacuten IGcorregida y por la realizacioacuten de una laparotomiacuteaexploratoria para poder de esta forma localizarextirpar y realizar el estudio histopatoloacutegico de lamasa
En la ecografiacutea abdominal no se observaron alte-raciones ecograacuteficas en bazo rintildeones ni hiacutegadoSe observoacute el tracto gastrointestinal con gas y unamasa hipoecogeacutenica con un tamantildeo en corte lon-gitudinal de 41 x 22 cm y de 23 x 22 en cortetransversal en la rama izquierda del paacutencreascompatible con una neoplasia pancreaacutetica (Fig 1)
La proporcioacuten IG corregida dio un valor de15875 compatible con un diagnoacutestico de insuli-noma
En la laparotomiacutea exploratoria para mantenerla normoglucemia se instauroacute una fluidoterapiacon dextrosa al 5 y glucosalino isotoacutenico reali-zando controles de glucemia cada 30-60 minutosUna vez estabilizada la perra fue anestesiadasiguiendo un protocolo habitual consistente en la
Fig 2 Localizacioacuten de la masa neoplaacutesica en el paacutencreas
Fig 4 Citologia realizada mediante impronta de la masa neoplaacutesica Diff-QuiklOOOx
premedicacioacuten con diacepam y buprenorfinainduccioacuten con tiopental y halotano para el man-tenimiento
La laparotomiacutea exploratoria se realizoacute de formaconvencional Se localizoacute el noacutedulo en la ramaizquierda del paacutencreas tal y como se habiacutea deter-minado en la ecografiacutea (Fig 2) No se detectaronotros noacutedulos ni en el paacutencreas ni en el resto deoacuterganos abdominales Asiacute mismo los gangliosregionales presentaban un aspecto normal Laexeacuteresis del noacutedulo se realizoacute mediante una pan-createctomiacutea parcial (Fig 3)
Durante el postoperatorio se mantuvo a la perraen ayuno completo (NPO) durante 72 horas paraprevenir una pancreatits postquiruacutergica Duranteeste tiempo se instauroacute una fluidoterapia y anti-bioterapia viacutea sisteacutemica y se realizaron controlesde la glucemia para comprobar que evolucionabacorrectamente La paciente fue dada de alta al ter-cer diacutea de la cirugiacutea presentando una evolucioacutenfavorable La fluidoterapia y la medicacioacuten IV sesustituyoacute por medicacioacuten oral (amoxicilina y cime-tidina) y una dieta rica en fibra (wd)
La citologiacutea de la impronta y el estudio histopa-
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Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
9
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
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Av E PALooo
xxxv CONGRESO NACIONALMADRID
PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
12-15 de Octubre- del 2000
ASOCIAClON DE VETERINARIOS ESPANtildeOLES ESPECIALISTASEN PEQUENtildeOS ANIMALES
PONENTES EXTRANJEROS
DIGESTIVOMike WiIlard College Station Texas (USA)
NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
Todd R Tams Santa Moacutenica(California - USA)
ONCOLOGIacuteAGregory Ogilive Colorado State University (USA)
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(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
PONENTES NACIONALES
Miguel Ruiz Peacuterez Cliacutenica Veterinaria Mediterraacuteneo (Madrid)Guadalupe Miro Facultad Veterinaria de MadridFernando Rodriacuteguez Franco Facultad de Vererinaria de Madrid
SESIONES INTERACTIVAS SOBRE CASOS CLIacuteNICOS (2 HORAS CADA UNA) DE
Oftalmologiacutea - Reproduccioacuten - Exoacuteticos - Neurologiacutea - Anestesia
ACTIVIDADES DEL CONGRESO
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FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
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EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
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AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
32
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
34
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
37
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Gama dealimentos Hills
Science PlanCanine en seco
lkgNuevo tamantildeo de
prueba de 1 kg
3 kgTamantildeo de 3 kg a un
mejor precio(coste por diacutea)
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Fig 1 Ecografiacutea de la masa en corte transversal Masa redondeada (23 x 22cm) hipoecogeacutenica en la rama izquierda del paacutencreas
Fig 3 Aspecto macroscoacutepico de la porcioacuten del paacutencreas afectado por la neo-plasia una vez se ha extraiacutedo quiruacutergicamente
sia extrapancreaacutetica) Para diferenciar entre estosdos procesos y poder llegar a un diagnoacutestico defi-nitivo se optoacute por la realizacioacuten de una ecografiacuteaabdominal determinacioacuten de la proporcioacuten IGcorregida y por la realizacioacuten de una laparotomiacuteaexploratoria para poder de esta forma localizarextirpar y realizar el estudio histopatoloacutegico de lamasa
En la ecografiacutea abdominal no se observaron alte-raciones ecograacuteficas en bazo rintildeones ni hiacutegadoSe observoacute el tracto gastrointestinal con gas y unamasa hipoecogeacutenica con un tamantildeo en corte lon-gitudinal de 41 x 22 cm y de 23 x 22 en cortetransversal en la rama izquierda del paacutencreascompatible con una neoplasia pancreaacutetica (Fig 1)
La proporcioacuten IG corregida dio un valor de15875 compatible con un diagnoacutestico de insuli-noma
En la laparotomiacutea exploratoria para mantenerla normoglucemia se instauroacute una fluidoterapiacon dextrosa al 5 y glucosalino isotoacutenico reali-zando controles de glucemia cada 30-60 minutosUna vez estabilizada la perra fue anestesiadasiguiendo un protocolo habitual consistente en la
Fig 2 Localizacioacuten de la masa neoplaacutesica en el paacutencreas
Fig 4 Citologia realizada mediante impronta de la masa neoplaacutesica Diff-QuiklOOOx
premedicacioacuten con diacepam y buprenorfinainduccioacuten con tiopental y halotano para el man-tenimiento
La laparotomiacutea exploratoria se realizoacute de formaconvencional Se localizoacute el noacutedulo en la ramaizquierda del paacutencreas tal y como se habiacutea deter-minado en la ecografiacutea (Fig 2) No se detectaronotros noacutedulos ni en el paacutencreas ni en el resto deoacuterganos abdominales Asiacute mismo los gangliosregionales presentaban un aspecto normal Laexeacuteresis del noacutedulo se realizoacute mediante una pan-createctomiacutea parcial (Fig 3)
Durante el postoperatorio se mantuvo a la perraen ayuno completo (NPO) durante 72 horas paraprevenir una pancreatits postquiruacutergica Duranteeste tiempo se instauroacute una fluidoterapia y anti-bioterapia viacutea sisteacutemica y se realizaron controlesde la glucemia para comprobar que evolucionabacorrectamente La paciente fue dada de alta al ter-cer diacutea de la cirugiacutea presentando una evolucioacutenfavorable La fluidoterapia y la medicacioacuten IV sesustituyoacute por medicacioacuten oral (amoxicilina y cime-tidina) y una dieta rica en fibra (wd)
La citologiacutea de la impronta y el estudio histopa-
r8
Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
9
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
Oil PET eARE AUO NUTRmON
-~--- ---- ~-- ~
Av E PALooo
xxxv CONGRESO NACIONALMADRID
PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
12-15 de Octubre- del 2000
ASOCIAClON DE VETERINARIOS ESPANtildeOLES ESPECIALISTASEN PEQUENtildeOS ANIMALES
PONENTES EXTRANJEROS
DIGESTIVOMike WiIlard College Station Texas (USA)
NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
Todd R Tams Santa Moacutenica(California - USA)
ONCOLOGIacuteAGregory Ogilive Colorado State University (USA)
IMAGEN Y EMERGENCIASPim Wolwekamp Utrecht University
(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
PONENTES NACIONALES
Miguel Ruiz Peacuterez Cliacutenica Veterinaria Mediterraacuteneo (Madrid)Guadalupe Miro Facultad Veterinaria de MadridFernando Rodriacuteguez Franco Facultad de Vererinaria de Madrid
SESIONES INTERACTIVAS SOBRE CASOS CLIacuteNICOS (2 HORAS CADA UNA) DE
Oftalmologiacutea - Reproduccioacuten - Exoacuteticos - Neurologiacutea - Anestesia
ACTIVIDADES DEL CONGRESO
bull Jornada de Grupos de Trabajo de AVEPA 12 de Octubre del 2000bull Jornada de ATV 14 de Octubre de12000bull Casos Cliacutenicos y Comunicaciones Libresbull Talleres Praacutecticosbull Temas Generales del Congreso Digestivo - Neurologiacutea - Endocrino - Oncologiacutea - Medicina Interna
Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
INFORMACIOacuteN GENERAL
FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
15
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
r17
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Fig 1 Ecografiacutea de la masa en corte transversal Masa redondeada (23 x 22cm) hipoecogeacutenica en la rama izquierda del paacutencreas
Fig 3 Aspecto macroscoacutepico de la porcioacuten del paacutencreas afectado por la neo-plasia una vez se ha extraiacutedo quiruacutergicamente
sia extrapancreaacutetica) Para diferenciar entre estosdos procesos y poder llegar a un diagnoacutestico defi-nitivo se optoacute por la realizacioacuten de una ecografiacuteaabdominal determinacioacuten de la proporcioacuten IGcorregida y por la realizacioacuten de una laparotomiacuteaexploratoria para poder de esta forma localizarextirpar y realizar el estudio histopatoloacutegico de lamasa
En la ecografiacutea abdominal no se observaron alte-raciones ecograacuteficas en bazo rintildeones ni hiacutegadoSe observoacute el tracto gastrointestinal con gas y unamasa hipoecogeacutenica con un tamantildeo en corte lon-gitudinal de 41 x 22 cm y de 23 x 22 en cortetransversal en la rama izquierda del paacutencreascompatible con una neoplasia pancreaacutetica (Fig 1)
La proporcioacuten IG corregida dio un valor de15875 compatible con un diagnoacutestico de insuli-noma
En la laparotomiacutea exploratoria para mantenerla normoglucemia se instauroacute una fluidoterapiacon dextrosa al 5 y glucosalino isotoacutenico reali-zando controles de glucemia cada 30-60 minutosUna vez estabilizada la perra fue anestesiadasiguiendo un protocolo habitual consistente en la
Fig 2 Localizacioacuten de la masa neoplaacutesica en el paacutencreas
Fig 4 Citologia realizada mediante impronta de la masa neoplaacutesica Diff-QuiklOOOx
premedicacioacuten con diacepam y buprenorfinainduccioacuten con tiopental y halotano para el man-tenimiento
La laparotomiacutea exploratoria se realizoacute de formaconvencional Se localizoacute el noacutedulo en la ramaizquierda del paacutencreas tal y como se habiacutea deter-minado en la ecografiacutea (Fig 2) No se detectaronotros noacutedulos ni en el paacutencreas ni en el resto deoacuterganos abdominales Asiacute mismo los gangliosregionales presentaban un aspecto normal Laexeacuteresis del noacutedulo se realizoacute mediante una pan-createctomiacutea parcial (Fig 3)
Durante el postoperatorio se mantuvo a la perraen ayuno completo (NPO) durante 72 horas paraprevenir una pancreatits postquiruacutergica Duranteeste tiempo se instauroacute una fluidoterapia y anti-bioterapia viacutea sisteacutemica y se realizaron controlesde la glucemia para comprobar que evolucionabacorrectamente La paciente fue dada de alta al ter-cer diacutea de la cirugiacutea presentando una evolucioacutenfavorable La fluidoterapia y la medicacioacuten IV sesustituyoacute por medicacioacuten oral (amoxicilina y cime-tidina) y una dieta rica en fibra (wd)
La citologiacutea de la impronta y el estudio histopa-
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Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
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Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
Oil PET eARE AUO NUTRmON
-~--- ---- ~-- ~
Av E PALooo
xxxv CONGRESO NACIONALMADRID
PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
12-15 de Octubre- del 2000
ASOCIAClON DE VETERINARIOS ESPANtildeOLES ESPECIALISTASEN PEQUENtildeOS ANIMALES
PONENTES EXTRANJEROS
DIGESTIVOMike WiIlard College Station Texas (USA)
NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
Todd R Tams Santa Moacutenica(California - USA)
ONCOLOGIacuteAGregory Ogilive Colorado State University (USA)
IMAGEN Y EMERGENCIASPim Wolwekamp Utrecht University
(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
PONENTES NACIONALES
Miguel Ruiz Peacuterez Cliacutenica Veterinaria Mediterraacuteneo (Madrid)Guadalupe Miro Facultad Veterinaria de MadridFernando Rodriacuteguez Franco Facultad de Vererinaria de Madrid
SESIONES INTERACTIVAS SOBRE CASOS CLIacuteNICOS (2 HORAS CADA UNA) DE
Oftalmologiacutea - Reproduccioacuten - Exoacuteticos - Neurologiacutea - Anestesia
ACTIVIDADES DEL CONGRESO
bull Jornada de Grupos de Trabajo de AVEPA 12 de Octubre del 2000bull Jornada de ATV 14 de Octubre de12000bull Casos Cliacutenicos y Comunicaciones Libresbull Talleres Praacutecticosbull Temas Generales del Congreso Digestivo - Neurologiacutea - Endocrino - Oncologiacutea - Medicina Interna
Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
INFORMACIOacuteN GENERAL
FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
ili45
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
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bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Insuliacutenorna en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
toloacutegico de la masa confirmaron la presencia deinsulinoma (Fig 4)
A los diez diacuteas de la cirugiacutea se retiraron los pun-tos de la sutura cutaacutenea En este momento elpropietario informoacute de la evolucioacuten favorable desu perra
En la uacuteltima revisioacuten realizada un mes despueacutesde la cirugiacutea la perra habiacutea continuado mejoran-do El control de la glucemia evaluado mediante ladeterminacioacuten de la fructosamina aportoacute un valordentro del rango de la normalidad (201 mrnoll)
DISCUSIOacuteNLa hipoglucemia de ayuno persistente acompa-
ntildeado de hiperinsulinemia con una proporcioacutenelevada de insulinaglucosa sugieren la presenciade insulinoma
Para evaluar la presencia y extensioacuten de tumorde ceacutelulas p del paacutencreas se han utilizado diversosmedios de diagnoacutestico por imagen Si bien laradiologiacutea toraacutecica y abdominal no es uacutetil paraeste fin siacute lo es para descartar otras causas dehiperinsulinismo La ecografiacutea facilita la deteccioacutende tumor pancreaacutetico pero tiene poca sensibili-dad para detectar lesiones muy pequentildeas o infil-trativas difusas La presencia de gas abundanteperros de toacuterax profundo y el jadeo dificultantodaviacutea maacutes la exploracioacuten ecoqraacutefica
Otra alternativa diagnoacutestica se basa en la grancantidad de receptores con alta afinidad a lasomatostatina que tienen algunos tumores endo-crinos pancreaacuteticos La escintigrafiacutea con recepto-res de somatostatina utilizando 111-pentetreotidoindico permite evidenciar la acumulacioacuten elevadade radiofaacutermaco en la neoplasia pancreaacuteticagt
La resolucioacuten quiruacutergica siempre que sea posi-ble es la terapia de eleccioacuten 3 8 Se ha compro-bado que el tiempo de supervivencia es superioren perros a los que se ha practicado una pancrea-tectomiacutea parcial que en los tratados soacutelo meacutedica-mente No obstante hay que tener en cuenta quedespueacutes de la cirugiacutea pueden aparecer complica-ciones ya sean por la propia teacutecnica quiruacutergica obien por factores relacionados con el procesoneoplaacutesico 3 4 8 Para realizar una pancreatecto-miacutea sin la aparicioacuten de complicaciones postqui-ruacutergicas como pancreatitis por ej es de vitalimportancia manipular el paacutencreas con sumo cui-dado Tambieacuten es importante recordar la disposi-cioacuten anatoacutemica de todas aquellas estructuras quepuedan estar relacionadas con el paacutencreas En
concreto hay que tener especial cuidado con lavascularizacioacuten La rama izquierda del paacutencreasestaacute irrigada principalmente por la arteria espleacuteni-ca mientras que la rama derecha del paacutencreas porla arteria gastroduodenal Estas dos arterias irri-gan tambieacuten al bazo y al duodeno respectivamen-te durante la cirugiacutea soacutelo deben ligarse las ramasque se dirigen al paacutencreas Si se ligan otras ramasde forma equivocada se puede producir la necro-sis de oacuterganos adyacentes con el riesgo que ellocomporta
Entre las complicaciones maacutes frecuentes sedeben destacar la aparicioacuten de pancreatitis lapersistencia del estado de hipoglucemia y poruacuteltimo la deteccioacuten de hiperqlucernla- 4 8
La aparicioacuten de pancreatitis a consecuencia dela cirugiacutea se debe a una manipulacioacuten excesiva obrusca del paacutencreas durante la intervencioacuten Por
ello recordar una manipulacioacuten suave durante lacirugiacutea y como cuidados postquiruacutergicos ayunodurante 72 horas y fluidoterapia apropiada
Cuando despueacutes de la cirugiacutea persiste el estadode hipoglucemia debe considerarse la eliminacioacutenincompleta del noacutedulo primario o bien la existen-cia de metaacutestasis en otros oacuterganos que no hansido detectadas en la ecografiacutea ni en la laparoto-miacutea exploratoria
Por uacuteltimo la deteccioacuten de una hiperglucemiapostquiruacutergica se debe a la supresioacuten continuadaque las ceacutelulas b no neoplaacutesicas del paacutencreas hanexperimentado durante el periodo en que el ani-mal ha permanecido en hipoglucemia Las ceacutelulasp normales al contrario de las tumorales han res-pondido a la retroalimentacioacuten negativa que seproduce sobre ellas al disminuir la glucemia Alextirpar por completo la neoplasia se eliminaaunque soacutelo temporalmente la fuente de insulinaEsta situacioacuten suele ser transitoria ya que pocodespueacutes de la cirugiacutea las ceacutelulas responden a lanormalizacioacuten de la glucemia Soacutelo en algunoscasos el animal desarrolla una diabetes mellitus yrequiere la administracioacuten de insulina
Cuando la cirugiacutea no es posible o cuando des-pueacutes de eacutesta persiste la sintomatologiacutea se debeinstaurar una terapia megravediacuteca-- 3 8 Esta terapia nose aconseja cuando el paciente mantiene su nivelde glucemia normal La hipoglucemia se comba-te usando tres tipos de estrategias dieta antiinsu-liacutenicos y quimioteraacutepicos En primer lugar seestablece una dieta rica en proteiacutenas de elevadovalor bioloacutegico rica en azuacutecares complejos y bajaen azuacutecares simples Debe administrarse enpequentildeas cantidades repartidas en 4-6 tomas al
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Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
Oil PET eARE AUO NUTRmON
-~--- ---- ~-- ~
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xxxv CONGRESO NACIONALMADRID
PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
12-15 de Octubre- del 2000
ASOCIAClON DE VETERINARIOS ESPANtildeOLES ESPECIALISTASEN PEQUENtildeOS ANIMALES
PONENTES EXTRANJEROS
DIGESTIVOMike WiIlard College Station Texas (USA)
NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
Todd R Tams Santa Moacutenica(California - USA)
ONCOLOGIacuteAGregory Ogilive Colorado State University (USA)
IMAGEN Y EMERGENCIASPim Wolwekamp Utrecht University
(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
PONENTES NACIONALES
Miguel Ruiz Peacuterez Cliacutenica Veterinaria Mediterraacuteneo (Madrid)Guadalupe Miro Facultad Veterinaria de MadridFernando Rodriacuteguez Franco Facultad de Vererinaria de Madrid
SESIONES INTERACTIVAS SOBRE CASOS CLIacuteNICOS (2 HORAS CADA UNA) DE
Oftalmologiacutea - Reproduccioacuten - Exoacuteticos - Neurologiacutea - Anestesia
ACTIVIDADES DEL CONGRESO
bull Jornada de Grupos de Trabajo de AVEPA 12 de Octubre del 2000bull Jornada de ATV 14 de Octubre de12000bull Casos Cliacutenicos y Comunicaciones Libresbull Talleres Praacutecticosbull Temas Generales del Congreso Digestivo - Neurologiacutea - Endocrino - Oncologiacutea - Medicina Interna
Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
INFORMACIOacuteN GENERAL
FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
16
Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
r17
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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~16~ 14e 12
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
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05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Insulinoma en una hembra adulta de Pastor alemaacuten A Andaluz et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
diacutea con el fin de aportar una fuente continua deglucosa y paliar la produccioacuten excesiva de insuli-na Cuando la dieta no es suficiente para podermantener la normoglucemia se pueden adminis-trar drogas antiinsuIiacutenicas como los glucocorticoi-des Los corticoides tienen un efecto antagonistaa la insulina ya que estimulan la glucogenolisis ypromueven la gluconeogeacutenesis hepaacutetica La dosispuede variar entre los 05-6 mgkg q24horas deprednisona viacutea oral en funcioacuten de la persistenciade los sintomas Los glucocorticoides puedenadministrarse solos o junto con una benzodiatiazi-da la diazoxida que tiene una accioacuten hipergluce-miante Este producto permite disminuir la dosisde glucocorticoides evitando asiacute la aparicioacuten desus efectos secundarios No obstante este faacuterma-co tambieacuten puede producir por siacute mismo efectossecundarios importantes (bradicardia diabetesmellitus voacutemito y diarrea) Finalmente cuando
BIBLIOGRAFIacuteA1 Dunn JK et al lnsulin secreting tumors of the canine pancreas dinical
and pathological features of 11 cases Joumal oi Small Animal Practice 199334 325-331
2 Oyer R Hypoglycemia a common melabolic manifeslation of cancerVeterinary Medicine 1992 87 42-47
3 Finqarn RB Surgical diseases of the endocrine pancreas En Slatter (ed)Textbook of small animal surgery 2 ed WB Saunders Filadelfia PE1993
4 Fossum TW Surgery of the endocrine system En Fossum TW (ed) SmallAnimal Surgery Mosby StLouis Mo 1997
todas estas actuaciones no han sido suficientespara poder mantener al paciente en un estado denormoglucemia se deben emplear faacutermacos anti-neoplaacutesicos Estas sustancias no se consideran deeleccioacuten dada su nefrotoxicidad Los antineoplaacutesi-cos disponibles para el tratamiento del insulinomason el alloxan y la estreptozocinaegrave 3 8
En los uacuteltimos antildeos se estaacute probando la eficaciade un anaacutelogo de la somatostatina (octreotido) enel diagnoacutestico y tratamiento de tumores pancreaacute-ticos endocrinos aunque las dosis terapeacuteuticas noestaacuten todaviacutea bien estableciacutedasv 7
El pronoacutestico para los pacientes que sufren estetipo de proceso neoplaacutesico es reservado estable-cieacutendose una supervivencia de 12-15 meses enaquellos animales que han sido tratados con unaterapia quiacuteruacuterqiacuteca - 3 8 La recurrencia indepen-dientemente de que se hayan detectado metaacutesta-sis durante la cirugiacutea es muy elevada
5 Lester NV et al Scintigraphic diagnosis of insulinoma in a dogo Vet Radamp Ultrasound 1999 40 174-178
6 Margan RV (ed) Handbook of Small AimaJ Practice 3 ed WB SaundersFiladelfia PE 1997 pp 761-771
7 Robben et al In vitro and in uivo detection of functiacuteonal somatostatinreceptors in canine insulinomas J Nuc1 Med 199738 1036-1042
8 Steinner JM et al Canine insulinoma Compendium of Continuing Edu-cation for the Practicing Veterinarian 1996 18 13-24
9 Tobin RL et al Outcome of surgicaJ versus medical trealment of dogswith beta cell neoplasia 39 cases (1990-1997) J Am Vet Med Assoc199915 226-230
10
fiWALTHAMTHE VlORLD S LEADING AUTHORfTY
Oil PET eARE AUO NUTRmON
-~--- ---- ~-- ~
Av E PALooo
xxxv CONGRESO NACIONALMADRID
PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS
12-15 de Octubre- del 2000
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PONENTES EXTRANJEROS
DIGESTIVOMike WiIlard College Station Texas (USA)
NEUROLOGIacuteARichard Lecouteur Davis (California - USA)
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ONCOLOGIacuteAGregory Ogilive Colorado State University (USA)
IMAGEN Y EMERGENCIASPim Wolwekamp Utrecht University
(Holanda)ENDROCRINOLOGIacuteARichard Nelson Davis (California USA)
PONENTES NACIONALES
Miguel Ruiz Peacuterez Cliacutenica Veterinaria Mediterraacuteneo (Madrid)Guadalupe Miro Facultad Veterinaria de MadridFernando Rodriacuteguez Franco Facultad de Vererinaria de Madrid
SESIONES INTERACTIVAS SOBRE CASOS CLIacuteNICOS (2 HORAS CADA UNA) DE
Oftalmologiacutea - Reproduccioacuten - Exoacuteticos - Neurologiacutea - Anestesia
ACTIVIDADES DEL CONGRESO
bull Jornada de Grupos de Trabajo de AVEPA 12 de Octubre del 2000bull Jornada de ATV 14 de Octubre de12000bull Casos Cliacutenicos y Comunicaciones Libresbull Talleres Praacutecticosbull Temas Generales del Congreso Digestivo - Neurologiacutea - Endocrino - Oncologiacutea - Medicina Interna
Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
INFORMACIOacuteN GENERAL
FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
16
Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
r17
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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~16~ 14e 12
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
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05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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12-15 de Octubre- del 2000
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Emergencias - Dermatologiacutea - Imagen - Cirugiacutea
INFORMACIOacuteN GENERAL
FECHAS 12 13 14 Y 15 de Octubre de12000
SEDE Palacio Municipal de Congresos de MadridAv de la Capital de Espantildea sn 28042 MADRIDTel 91-722-04-00 Fax 91-721-06-07
SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
EXPOSICIOacuteN COMERCIALDurante los diacuteas del Congreso se celebraraacute paralelamente una exposicioacuten teacutecnica y comercial de empresasy laboratorios relacionados con la especialidad
IDIOMA OFICIAL Y TRADUCCIOacuteN SIMULTAacuteNEAEl idioma oficial del Congreso es el castellano Habraacute traduccioacuten simultaacutenea del ingleacutes al castellano duran-te las sesiones que lo precisen
Toda esta informacioacuten la podraacutes ir encontrando debidamente actualizada en la web de AVEPA(httpwwwavepaes)
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
r17
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
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bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
ili45
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
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Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
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HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
ili45
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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SECRETARIacuteA TEacuteCNICA INFORMACIOacuteN E INSCRIPCIONESInter-CongreacutesMaignoacuten 50 bajos 08024 BARCELONATel 93-213-44-47 Fax 93-210-66-98E-mail intercongresbcnservicomes
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Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
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Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
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HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
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bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
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bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Dotacioacuten del premio
1000000 pisun milloacuten de pesetas
Elimporte del premio se veraacute aFectado por la correspondiente retencioacuten deHacienda que en este caso por tratarse de un premio en metaacutelico equivaldraacute a un
25 del importe total
Seconvoca la tercera Edicioacuten del Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA
sobre artiacuteculos publicados en la revista oficial de Avepa Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales Las bases son las siguientes
1 Podraacuten optar alIII Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA todos losartiacuteculos publicados en la revista oficial de AVEPA Cliacutenica Veterinaria de
Pequentildeos Animales en los nuacutemeros comprendidos entre el Vol 19 nordm 211999 Yel Vol 20 nordm12000
2 Losartiacuteculos de revisioacuten no podraacuten optar al premio3 Laeleccioacuten del ganador del premio se realizaraacute por medio de votacioacuten de los
socios de Avepa y corresponderaacute al trabajo que seconsidere maacutes interesantey que maacutes aporte a su praacutectica cliacutenica diaria
4 Con una antelacioacuten de aproximadamente 2 meses a la celebracioacuten del 35Congreso Nacional de Avepa en Madrid ( 12-15 de Octubre de 2000 ) seenviaraacute a todos los socios de Avepa la lista de trabajos publicados en larevista que opten al III Premio Cientiacutefico AVEPA - MIGUEL LUERA asiacutecomo la documentacioacuten para que puedan proceder a la votacioacuten En estadocumentacioacuten se informaraacute de la fecha liacutemite para la recepcioacuten de lasvotaciones en la Secretaria de Avepa
5 El Director Cientiacutefico de Avepa actuaraacute como Secretario del Premio6 La lectura del tiacutetulo ganador y entrega del premio se realizaraacute durante la
celebracioacuten del acto inagural del 35 Congreso Nacional de Avepa en Madrid( 12-15 de Octubre de 2000 )
podraacutes encontrar maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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Firma
AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
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Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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convencidos de que esta nueva imagen se reflejaraacute en todos los aacutembitos de nuestro
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4-AKZONOBEl Laboratorios lnte rvet SAbull Poliacutegono El Montalvo SN Apartado 3006 bull 37080 Salamanca
Teleacutefono 923 1903 4S bull Fax 923 1903 27 bull E-mail informacionintervetcom bull wwwintervetcom
Purina redefine lanutricioacuten en dermatologiacutea
CNMDermatology Management System
Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
HERNIA HIATAL TRAUMAacuteTICA EN UNA GATA
G Riera Palou Aragoacute Cliacutenica VeterinagraveriaC Cirerer 2b07008 Ciutat de Mallorca (Balears)
RESUMEN
Este caso cliacutenico describe la presentacioacuten de una gatadisneacuteica tras haber caiacutedo desde una altura de seismetros La exploracioacuten radioloacutegica demostroacute lapresencia de oacuterganos abdominales en toacuterax y lalaparotomiacutea reveloacute la presencia de una hernia dehiato El tratamiento elegido fue plicacioacuten del hiatoesofaacutegico esofagopexia y gastropexia El resultadofinal fue satisfactorio
Palabras clave Gato Hernia de hiatoEsofagopexia Gastropexia
INTRODUCCIOacuteN
Las hernias hiatales son raras en los animales decompantildeia Son clasificadas mayoritariamentecomo tipo I o deslizante y tipo II paraesofaqicasTanto en perros como en gatos la mayoriacutea de her-nias se diagnostican en animales de menos de 1antildeo y son del tipo 1 El diagnoacutestico puede sospe-charse en las radiografiacuteas y puede confirmarsecon radiografiacuteas de contraste o fluoroscopia Lossiacutentomas cliacutenicos suelen estar asociados a la pre-sencia de esofagitis de reflujo siendo hipersaliva-cioacuten regurgitacioacuten voacutemitos peacuterdida croacutenica depeso y hematemesis Otros siacutentomas puedenestar relacionados con la motilidad esofaacutegicaanormal dando disfagia y disneas 6 s
Las hernias de hiato pueden ser tratadas medi-camente tratando la esofagitis de reflujo El tra-tamiento quiruacutergico en pacientes humanos estaacuterecomendado en aquellos casos que no respon-den al tratamiento meacutedico si hay complicacionesdebido a neumoniacutea por aspiracioacuten y en aquellashernias que por su tamantildeo interfieran con la fun-cioacuten cardiorespiratoria 10 Il
En el presente artiacuteculo describimos el tratamientoquiruacutergicode una hernia hiatal traumaacutetica en un gato
ABSTRACT
This is a clinical case of a cat with asevere dyspnoea48h after falling from a height of six metresRadiografie studies showed the presence ofabdominal organs in the thorax and celiotomyrevealed a hiatal hernia The surgical techniqueinvolved hiatal plication oesophagopexy and leftfundic gastropexy The results are good 6 monthspostop
Key words Cat Hyatal hernia OesophagopexyGastropexy
CASO CLIacuteNICO
Una gata siamesa de 35 kg de peso fue remiti-do a ACV (Aragoacute Cliacutenica Veterinaria) tras habercaiacutedo desde un segundo piso 48 horas antes En elexamen cliacutenico se encontroacute una temperatura de378 C buena condicioacuten fiacutesica el animal presen-taba una disnea inspiratoria con una frecuenciarespiratoria de 62 inspiracionesmino La ausculta-cioacuten toraacutecica reveloacute una disminucioacuten de los ruidospulmonares maacutes marcada en el lado izquierdo Elresto del examen cliacutenico se consideroacute normal
En el examen radioloacutegico en la proyeccioacuten late-rolateral (Fig 1) se observa la presencia de aireen el aspecto caudal del toacuterax delimitado por lapresencia de una linea radiopaca La silueta car-diacuteaca es faacutecilmente identificable al estar rodeadapor aire a nivel abdominal se detectoacute el hiacutegado enel cuadrante craneal del abdomen ambos rintildeo-nes el coloacuten y recto llenos de aire En la proyec-cioacuten dorsoventral (Fig 2) la presencia de aireenglobado en una cavidad se observa en la zonacaudal izquierda del toacuterax
La administracioacuten de sulfato de bario (Bario DifRovi) reveloacute la presencia de megaesoacutefago en eltercio craneal del toacuterax y la presencia de todo el
15
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
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Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
34
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Fig 1 Projeccioacutenlatero lateral deltoacuterax y abdomenSe observa la pre-sencia de gas en elaspecto caudal deltoacuterax rodeado poruna linea radiacuteopa-ca Noacutetese la pre-sencia abdominaldel hiacutegado y la apa-rente integridad deldiafragma
estoacutemago en la cavidad toraacutecica (Fig 3 y Fig 4)Para obtener estas imaacutegenes se realizaron radio-grafiacuteas a los siguientes tiempos 1 min 15 min30 min 60 min 90 mino Ante la presencia delestoacutemago en toacuterax se decidioacute intervenir
El animal fueacute premedicado con amoxicilina-cla-vulaacutenico 20mgkg (Synulox Pfizer) y carprofeno4 mgkg (Zenercap C-vet) El agente inductorfue propofol 6 mgkg (Diprivan Zeneca Farma)IV El gato fue intubado y mantenido con unamezcla de oxigeno y halotano (Fluothane ZenecaFarma) Durante la intervencioacuten y el postoperato-rio inmediato al animal le fueacute agravedministrado endo-venosamente Ringer Lactato (Ringer lactatoBraun) a una velocidad de infusioacuten de 20mlkgh
El animal fueacute posicionado en decuacutebito dorsal Lazona ventral del toacuterax y abdomen fue preparadaquiruacutergicamente La incisioacuten cutaacutenea se realizoacutedesde la seacuteptima esternebra hasta el tercio caudaldel abdomen La incisioacuten en la liacutenea alba se exten-diacutea desde cartiacutelago xifoides hasta la zona umbili-cal Al entrar en la cavidad abdominal se empezoacutecon la ventilacioacuten asistida con presioacuten positiva
La exploracioacuten del abdomen reveloacute la existenciade una hernia hiatal El estoacutemago bazo epiploacuteny parte del duodeno se hallaban desplazados era-nealmente en el toacuterax Mediante traccioacuten manuallos oacuterganos herniados fueron resituados en el
Fig 2 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomenLa posicioacuten radio-graacutefica estaacute ligera-mente rotada haciael lado izquierdo Seobserva una acumu-lacioacuten deaire en elaspecto caudal deltoacuterax maacutes marcadoen el lado izquierdo
abdomen La inspeccioacuten macroscoacutepica de losmismos reveloacute una vesiacutecula biliar muy llena aun-que no se observoacute ninguna obstruccioacuten en el con-ducto biliar comuacuten y en el resto de los oacuterganosno se evidencioacute ninguna anormalidad Para poderexaminar el diafragma los oacuterganos fueron retraiacute-dos caudalmente con la ayuda de esponjas quiruacuter-gicas mojadas con suero fisioloacutegico Ningundefecto fue hallado en el diafragma aparte de unhiato esofaacutegico dilatado siendo capaces de pasartres dedos a traves de dicho hiato
Se procedioacute a realizar una plicacioacuten del hiato con4 suturas simples interrumpidas usando 3-0 poli-propileno (Prolene Ethicon) evitando no dantildear eltronco vagal ventral Dicho procedimiento redujoel hiato esofaacutegico considerablemente A continua-cioacuten se realizoacute una esofagopexia con 5 suturassimples interrumpidas atravesando la capa muscu-lar del esoacutefago y pars museuaris del diafragmaCon el fin de evitar la recurrencia de la hernia secreo una gastropexia entre el fundus gaacutestrico y lapared abdominal incidiendo en el peritoneo y laserosa gaacutestrica y suturando ambas museuaris con3-0 polipropileno (Prolene Ethicon)
Antes de cerrar la laparotomiacutea se procedioacute a lareinstauracioacuten de la presioacuten toraacutecica negativausando transdiafragmaacuteticamente una cateterendovenosa y una llave de 3 pasos Unos 15 mIde aire fueron extraiacutedos de la cavidad toraacutecica
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Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
r17
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
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bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Hernia bierel traumaacutetica en una gata G Riera Pelou Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 3 Projeccioacutenlaterolateral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario Acumulacionde bario en la zonacervico-toracica delesofago y en el fun-dus y antro piloacuterico
Una vez retiradas y contadas las esponjas qui-ruacutergicas se procedioacute a cerrar el abdomen con unasutura continua de 3-0 polidioxanona ((POS11Ethi-con) El tejido subcutaacuteneo fue suturado con 3-0poliglactin-910 (VicrylEthicon) Una sutura intra-deacutermica contiacutenua del mismo material se uso en lapiel
Durante la recuperacioacuten de la anestesia no seobservoacute ninguna complicacioacuten En el posta pera-torio immediata se observoacute la resolucioacuten de la dis-nea Tras las primeras 24 h el paciente ingiacuterioacuteuna dieta semisoacutelida desde una posicioacuten elevadaEl paciente fue dado de alta el 2 del diacutea postope-ratorio con la siguiente medicacioacuten amoxicilina-clavulaacutenico (Synulox 50 Pfizer) 14 mgkg POcada 12 h durante 5 diacuteas y cimetidina (TagametSmith Kline French) a la dosis de 7 mgkg cada12 h durante 10 diacuteasEn la primera reexaminacioacuten 3 diacuteas despues de
la operacioacuten el paciente respiraba con normali-dad y teniacutea buen apetito Una segunda reexami-nacioacuten tuvo lugar a los 7 diacuteas postcirugiacutea sin nin-guna anormalidad A las tres semanas de laoperacioacuten se le reexaminoacute debido al pobre apeti-to y voacutemitos Se sospechoacute de esofagitis de reflujoy se medicoacute el paciente con cisaprida (PrepulsidJanssen-Cilag) a la dosis de 8 mgkg durante 15diacuteas
Trascurridos 6 meses desde la intervencioacuten qui-
Fig 4 Projeccioacutendorsoventral deltoacuterax y abdomen alos 30 min de laadministracioacuten delbario
ruacutergica no ha habido ninguna otra complicacioacutensiendo el resultado de la cirugiacutea satisfactorio
DISCUSIOacuteNEste casocliacutenico combina unos aspectos relacio-
nados con las hernias diafragmaacuteticas y otros maacutesligados a las hernias hiatales
Hasta la celiotomiacutea se sospechoacute de una herniadiafragmaacutetica traumaacutetica debido a la etiologiacutea elcuadro cliacutenico y el examen radioloacutegico
En las hernias diafragmaacuteticas la mortalidad de laintervencioacuten quiruacutergica es maacutes elevada en las pri-meras 24 h postrauma y en aquellas hernias cuyaduracioacuten es de mas de 1 antildeo l En la literatura serecomienda la reparacioacuten de la hernia diafragmaacute-tica tan pronto como el paciente este estableeacutePara la estabilizacioacuten del paciente tratamiento dela hipovolemia reposo en ambiente tranquilo ysuplementacioacuten con oxiacutegeno estaacuten recomendados
Se decidioacute intervenir quiruacutergicamente tan pron-to se obtuvoacute el diagnoacutestico debido a la presenciadel estoacutemago en la cavidad toraacutecica Dicha pre-sencia puede empeorar la disnea muy raacutepidamen-te debido a la dilatacioacuten del estoacutemago y es reco-nocida como una de la pocas emergencias enhernia diafraqrnaacuteticas- siendo otra de ellas hemo-rragia iacutenterna
r17
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
27
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
34
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Hernia hiacuteatal traumaacutetica en una gata G Riera Palau Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
El manejo anesteacutesico de estos pacientes es cru-cial para la supervivencia del paciente Se evitoacute eluso de sustancias que sean depresoras del sistemarespiratorio en la premedicacioacuten El protoacutexido denitroacutegeno no fue usado porque reduce el volumentidal y puede difundir dentro del estoacutemago y intes-tinos provocando la distensioacuten de dichos oacuterga-nos
La hernia de hiato es definida como la protusioacutende contenidos abdominales a traves del hiato eso-faacutegico del diafragmas Las teacutecnicas quiruacutergicasque eran usadas en veterinaria han sido adopta-das de cirugiacutea humana Debido a la asociacioacuten dehernia hiatal e incompetencia primaria del esfiacuten-ter esofaacutegico inferior hallada en los pacienteshumanos las teacutecnicas quiruacutergicas antireflujo gas-troesofaacutegico fueron aplicadas rutiacutenariamentef- 6
tales como la teacutecnica transtoraacutecica de Belsey o lafunduplicatura de Nissen
El eacutexito del tratamiento en hernias hiatales variasegun los autores y tratamientos- 6 7 8 Entre lascomplicaciones hallamos recidiva de la herniaque estaacute descrita en la literatura 8 semanas post-cirugiacutea en dicho caso la teacutecnica seleccionada fueplicacioacuten del hiato con nylon esofagopexia y gas-tropexia circuncostal con catqut Otras teacutecnicascomo las de antirreflujo cuentan con una altamorbilidad y mortaliacutedad La dilatacioacuten de estoacute-mago transitoria es una de las mayores complica-ciones encontradas en estas teacutecnicas debido a laacumulacioacuten de gas o liacutequido en el estoacutemago debiacute-
BIBLIOGRAFIA1 Boudrieau SJ Muir WW Pathophysiology o(Traumatic Diaphragmatic
Hernia in Dogs Compendium Continuous Education Ior Practising Vete-rinarian 1987 9 379-383
2 Johnson KA Diaphragmatic and Hiatal Hernias En Slalter et al Text-book ol Small Animal Surgery Second Edition WB Saunders Corn-pany Philadelphia 1993 455-470
3 Garson HL et al Diaphragmatic hernia Analysis of lifty-six cases indogs and cats Journal o] Small Animal Practice 1980 21 469-472
4 McKelvey D Hollingshead KW Anaesthetic Agents and Techniques enSmall Animal Anaesthesia Mosby Saint Louis 1989 299-303
5 Prymark C Saunders HM Washabau RJ Hiatal Hernia Repair by Res-toration and Stabilization of Normal Anatomy Vet Sur 1989 18 5386-391
do a la peacuterdida de la capacidad de eruptar y vomi-tar para evitar esta complicacioacuten la funduplica-tura se realiza con un pliege suelto de fundus de3600 alrederor de los 5 cm distales del esoacutefago yel uso de una sonda oro gaacutestrica durante la inter-vencioacuten para evitar una oclusioacuten excesiva delesfiacutenter esofaacutegico caudal
En perros y gatos no ha sido demostrada unaasociacioacuten entre incompetencia primaria delesfiacutenter esofaacutegico caudal y hernia hiatales lo quenos permite tratar las hernias hiatales sin usar teacutec-nicas antireflujo La teacutecnica realizada en el pacien-te cuenta con una menor morbilidad y mortalidadque la funduplicatura de Nissen siendo a la vezmaacutes simple de realiacutezar- 5
En este caso cliacutenico la gastropexia incisional fueusada con el objetivo de crear una adherencia per-manente entre el fundus gaacutestrico y la pared abdo-minal en lugar del tubo de gastrostomia en unintento de reducir el periodo de hospitalizacioacuten yun manejo postoperatorio maacutes sencillo En la teacutec-nica quiruacutergica original descrita por Prymark sealimentaba al paciente por medio del tubo de gas-trostomia que aceleraba la recuperacioacuten de la eso-fagitis
AGRADECIMIENTOSAgradecemos aD Vicente Busquets su ayuda
durante la intervencioacuten y el cuidado postoperatorio
6 Ellison GW Lewis DO Phillips L Tarvin GB Esophageal Hiatal Herniain Small Animal literature Review and Modilied Surgical Technique JAm Ani Hos Assoc 1987 23 391-399
7 Peterson SL Esophageal Hiatal Hernia in a Cat JAVMA 1983 183 3325-326
8 Waldron OR Moon M Leib MS Barber D Asbury Mays K Oesophage-al Hiatal Hernia in two cats JSAP 1990 1 259-263
9 Strombeck OR Guillord WG Diseases of Swallowing En StrombeckOR Guillord WG (Ed) Small Animal Gastroenterology (2 edition)Wolle London 1991 159-162
10 HiIl LO An effeetive operation Ior hiatal Hernia an eight year apraisalAnn Surg 1967 166 4 681-692
11 De Meester TR Bonavina L Albertucci M Niessen fundoplication Iorgastresophageal reflux disease Ann Surg 1986 204 1 9-20
18
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
ili45
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
ili46
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
ili47
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
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bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
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bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
CALENDARIO FORMACiOacuteN CONTINUADAAVEPA 2000 2001
Vocalia 1 Vocaliacutea 2 Vocalia 3 Vocalia 4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocalla 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragoacuten Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
Urinario Anestesia 11 Etologia Neurologia Endocrinologia Dermetologla 11Valencia Madrid Sevilla Oviedo Bilbao Las Palmas29 - 30 15 -16 29 - 30 29 - 30 29 - 30 29 - 30
Endocrinologiacutea Laboratorio Digestivo 11 Dermatologia 11Barcelona Zaragoza Santiago Palma Mallorca
5-6 5-6 5-6 5-6Laboratorio Digestiva 11 Neurologia Dermatologia 11 Etologia Urinario EndocrinologiaBarcelona Valencia Madrid Maacutelaga Oviedo Bilbao Palma Mallorca
4-5 25 - 26 11- 12 4-5 4-5 11 -12 25 - 26Dermatologia 11 Anestesia 11 Endocrinologia Etologia Urinario
Zaragoza Alicanle Sevilla Santiago Las Palmas8-9 29 - 30 8-9 8-9 29 - 30
Dermatologia 11 Neurologia Urinario Digestiva 11 Laboratorio Neurologia LaboratorioBarcelona Zaragoza Sevilla Oviedo Santiago Bilbao Palma Mallorca
6-7 20 - 21 27 - 28 20 - 21 20 - 21 20 -21 27 - 28
Enero2000
EtologiaZaragoza25 - 26
Febrero2000
Marzo2000
Abril2000
Mayo2000
Junio2000
Digestiva 11Las Palmas
16 -17
Agosto2000
Septiembre2000
Julio2000
Octubre2000
EtologiaAlicante16 -17
LaboratorioOviedo16-17
UrinarioSantiago16 -17
Anestesia 11Bilbao16 -17
12 bull 15 OCTUBRE CONGRESO NACIONAL AVEPA 2000PALACIO MUNICIPAL DE CONGRESOS MADRID
Noviembre2000
UrinarioBarcelona
25 - 26
NeurologiaMaacutelaga25 - 26
Anestesia 11Palma Mallorca
4-5
Diciembre
7000
EndocrinologiaLas Palmas
25 - 26
Vocalia 1 Vocalia 2 Vocaloa 3 Vocaloa4 Vocalia 5 Vocalia 6 Vocaloa7 Vocalia 8 Vocaloa 9 Vocalia 10Cataluntildea Aragon Levante Madrid Andalucia Norte Galicia Pais Vasco Baleares Canarias
UrinarioOvieda19 - 20
Enero Neuroiogia Urinario Digestiva 11 Urinario Anestesia 112001 Barcelona Zaragoza Madrid Palma Mallorca Las Palmas
20 -21 20-21 13 -14 13 -14 20 - 21
Febrero Laboratorio Dermatologia 11 Laboratorio Endocrinologia Anestesia 11 Etologia2001 Valencia Madrid Sevilla Oviedo Santiago Bilbao
10 -11 11 -12 24 - 25 10 -11 3-4 10 -11
Mano Etologia Endocrinologiacutea Denmatologia 11 Etologia Digestiva 11 Anestesia II Neurologia Digestiva 11 Neurologia Laboratorio2001 Barcelona Zaragoza Valencia Madrid Maacutelaga Gviado Santiago Bilbao Palma Mallorca Las Palmas
3-4 17 -18 24 -25 10 - 11 17 -18 10 -11 3-4 10 -11 30 - 31 3-4
Abril Endocrinologia2001 Madrid
7-8
Mayo Anestesia 112001 Barcelona
5-6Junio2001Julio2001
Agosto2001
Septiembre2001
Octubre2001
Noviembre Digestiva 112001 Barcelona
24 - 25
Diciembre2001
Digestiva 11Zaragoza26 - 27
NeurologiacuteaAlicanle19 -20
LaboratorioMadrid19 -20
Anestesia 11Sevilla26 - 27
Endocrinologia Dermatologia 11Santiago Bilbao26 - 27 26 - 27
EtologiaPalma Mallorca
19 - 20
NeurologiaLas Palmas
26-27
Anestesia 11Zaragoza22 - 23
CONGRESO NACIONAL AVEPA 2001
EndocrinologiaAlicante22 - 23
UrinarioMadrid15 -16
Dermatologia 11Oviedo22 - 23
LaboratorioBilbao22 - 23
Digestiva 11Palma Mallorca
15 -16
EtologiaLas Palmas
24 - 25
Esta informacioacuten seraacute actualizada periodicamente en la web de AVEPA
Dermatologia 11Santiago24 - 25
httpwwwavepaes
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
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AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
37
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
INSTRUCCIONES PARA LA PUBLICACIOacuteN DE ARTIacuteCULOS
La revista Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales tiene como objetivo publicar artiacuteculos cientiacuteficos queversen sobre medicina y cirugiacutea de los animales de compantildeiacutea y tengan un caraacutecter praacutectico y aplicativo
Oacuteptimamente el contenido de un artiacuteculo debe ser novedoso verdadero importante y comprensible Sonespecialmente bienvenidos aquellos artiacuteculos que describen nuevas teacutecnicas de diagnoacutestico o tratamiento de lasenfermedades de los animales domeacutesticos Sin embargo la decisioacuten de si un determinado trabajo resulta de inte-reacutes para la revista o no la toma el director de la misma asesorado por el Comiteacute Cientiacutefico Para ser aceptado apublicacioacuten un artiacuteculo debe reunir ademaacutes del intereacutes una serie de condiciones de forma y estructura que a con-tinuacioacuten detallamos Se ruega a los autores que se cintildean al maacuteximo a estas normas a fin de evitar largas corree-ciones y en consecuencia dilaciones en la publicacioacuten del artiacuteculo
El artiacuteculo deberaacute ser original y no haberse publicado en ninguna otra revista nacional ya sea en parte o ensu totalidad
ASPECTOS FORMALES
Los artiacuteculos se enviaraacuten mecanografiados a dobleespacio con unos maacutergenes miacutenimos de 3 cm Deberemitirse el original una copia y dos juegos de fotogra-fiacuteas y figuras asiacute como un disquette informaacutetico con elarchivo de texto correspondiente Se recomienda que elautor retenga una copia del trabajo completo Las foto-grafiacuteas se incluiraacuten sueltas) no incluidas en el texto ytambieacuten en hoja aparte se redactaraacuten los pies de fotoTodas las tablas dibujos y fotos deben citarse en eltexto Todas las paacuteginas iraacuten numeradas aunque nodebe hacerse referencia alguna a esta numeracioacuten en eltexto dado que la paginacioacuten en el original publicado esotra En caso necesario puede hacerse referencia a unaseccioacuten determinada no a una paacutegina Es preferibleenviar diapositivas a copias en par el En cualquier casoes preciso sentildealar la orientacioacuten de la fotografiacutea Lostrabajos se remitiraacuten al Bibliotecario de Avepa (Av RepArgentina 21-25 -08023 Barcelona) Los artiacuteculos nopublicados seraacuten devueltos al autor No se realizaraacute nin-guna correccioacuten o modificacioacuten sin el consentimiento delos autores
ESTRUCTURA DEL TRABAJO
La primera pagina del trabajo llevaraacute el Tiacutetulo ladireccioacuten de los autores y en su caso la cliacutenica o insti-tucioacuten en la que ejercen la profesioacuten Un buen tiacutetulo esel menor nuacutemero de palabras que describan adecuada-mente el contenido del trabajo Deben evitarse tiacutetulosexcesivamente largos y tiacutetulos que no reflejen con exac-titud el contenido del artiacuteculo
A continuacioacuten debe aparecer un Resumen del tra-bajo su traduccioacuten al ingleacutes Asimismo se incluiraacutentres palabras clave en castellano y en ingleacutes El resumendebe indicar los objetivos del trabajo la metodologiacuteautilizada y los principales resultados y conclusiones Enel resumen no debe aparecer ninguna informacioacuten oconclusiones que no deriven de las propias investiga-ciones En ninguacuten caso deben aparecer referenciasbibliograacuteficas El formato del trabajo es flexible perodebe comenzar con una Introduccioacuten y terminar conuna Discusioacuten La parte central puede constar de Mate-rial y Meacutetodos y Resultados o de Casos Cliacutenicos
El objetivo de la Introduccioacuten es plantear el pro-blema investigado en el trabajo aportar al lector lainformacioacuten necesaria para comprender el artiacuteculo yevaluar los resultados sin necesidad de recurrir a biblio-grafiacutea adicional En la Introduccioacuten se citan los princi-pales trabajos concernientes al tema investigado en elartiacuteculo
En la seccioacuten de Material y Meacutetodos se describendetalladamente las teacutecnicas utilizadas Un buen aparta-do de Material 9 Meacutetodos debe permitir a un cliacutenico oinvestigador competente repetir las experiencias delautor Esta seccioacuten no debe incluir resultados ni discu-tirlos
La seccioacuten de Resultados es la maacutes importante deltrabajo y debe ser breve y objetiva carente de toda retoacute-rica Hay que evitar tambieacuten la redundancia de infor-macioacuten los resultados que se presentan en graacuteficas nodeben describirse de nuevo y viceversa
En las ciencias meacutedicas es frecuente substituir los apar-tados de Material y Meacutetodos y Resultados por una uacutenicaseccioacuten de Casos Cliacutenicos En esta seccioacuten se descri-ben de forma ordenada y objetiva los casos cliacutenicos y suevolucioacuten sin discusioacuten o valoracioacuten de los mismos
La Discusioacuten es una seccioacuten imprescindible en todoartiacuteculo cientiacutefico En ella el autor interpreta sus resul-tados o sus casos cliacutenicos y extrae de ellos las conclu-siones Ademaacutes compara y confronta sus resultadoscon los de otros autores
Cualquier afirmacioacuten que se haga en el artiacuteculo y queno se desprenda de los resultados del mismo debe iracompantildeada de su correspondiente Cita Bibliograacute-fica En el texto se incluiraacute un nuacutemero y al final delartiacuteculo se escribiraacute la referencia completa Los antiacutecu-los se citan en la revista de la siguiente forma
2 Bielfelt SW Redman H Mc Clellan RO Sex rela-ted differences in rates of epileptiform seizures Am JVet Res 1970 32 2032-2048
En el caso de citas de librosWalton D Canine epidermetropi lymphoma En
Kirk R (Ed) Current veterinary therapy (IX)SaundersPhiladelphia 1986 609-611
Eacutetica La direccioacuten de la revista se reserva el derechode rechazar cualquier artiacuteculo en base a motivos eacuteticosen especial cuando los experimentos descritos hayanproducido sufrimientos de elevada intensidad a animales
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
21
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
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Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
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un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
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AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
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del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
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Madrid el 13 de Octubre del 2000
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
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O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
37
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
LUPUS ERITEMATOSO SISTEacuteMICO EN UN GATO
J Loacutepez Peacuterez A Loacutepez PajuelaM Aranda Luque
RESUMEN
Describimos el caso cliacutenico de un gato macho de dosantildeos de edad con un historial de gingivoestomatitisulcerativa Los anaacutelisis realizados revelan fallo renalcon proteinuria trombocitopenia e hipoalbuminemiaTras el diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutease procede a realizar un anaacutelisis de anticuerposantinucleares obtenieacutendose un resultado positivo Serealiza el diagnoacutestico de lupus eritematoso sisteacutemicobasaacutendonos en la presencia de cuatro de los criteriosestablecidos por la Asociacioacuten Americana deReumatismo para el diagnoacutestico de lupus enhumanos
Palabras clave Lupus eritematosoTrombocitopenia Proteinuria Gato
INTRODUCCIOacuteNEl lupus eritematoso sisteacutemico (LES) es una
enfermedad auto inmune multisisteacutemica del hom-bre y de los animales caracterizada por la pro-duccioacuten de autoanticuerpos con la consiguienteformacioacuten de complejos inmunes y el depoacutesito deeacutestos en las membranas basales vasculares y deacuter-micas Esto causa activacioacuten del complemento einfiltracioacuten por ceacutelulas inflamatorias lo cual juntocon un efecto directo citotoacutexico de los autoanti-cuerpos produce el dantildeo tisuiar 7 9
La causa de esta enfermedad sigue sin conocer-se
Hospital Veterinario VillablancaAvda Los BolichesEd Don Luis b-729640 Fuengirola (Maacutelaga)Tfno 952 58 37 26
ABSTRACT
This report describes the case of a two-year-old malecat with a history of ulcerative gingivostomatitis Theanalysis showed renal failure with proteinuriathrombocytopenia and hypoalbuminemia After adifferential diagnosis of glomerulonephropathy wasdone we carried out an antinuclear antibody testwhich resulted positive We diagnosed systemic lupuserythematosus based on the presence of four of thecriteria established by the American RheumatismAssociation for the diagnosis of lupus in humans
Key words Lupus erythematosusThrombocytopenia Proteinuria Cat
En el gato la frecuencia de presentacioacuten es muybaja alrededor del 006 de todas las visitas a lacliacutenica No parece haber predileccioacuten por sexo yla edad de presentacioacuten va de 1 a 12 antildeos Lossiameses persas e himalayos parecen estar pre-dispuestos- 7
En el gato los signos cliacutenicos incluyen fiebredesoacuterdenes hematoloacutegicos linfadenopatiacutea poliar-tritis miopatiacutea estomatitis ulcerativa conjuntivi-tis fallo renal desoacuterdenes neuroloacutegicos y enfer-medad pulmonar subcliacutenica 7
El inicio de los signos puede ser agudo o insi-dioso y es frecuente que el propietario relate laexistencia de signos inespeciacuteficos como malestar
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
ili22
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
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AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pecircrez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Tabla I Criterios diagnoacutesticos de LES
1 Eritema malar2 Lesiones discoides3 Fotosensibilidad4 Uacutelceras orales y nasofariacutengeas5 Artritis no erosiva (en dos o maacutes articulaciones)6 Serositis (pleuritis o pericarditis)7 Proteinuria o cilindros celulares8 Convulsiones o psicosis9 Una de las siguientes
- anemia hemolitica- leucopenia- Iinfopenia- trombocitopenia
10 Alteraciones inmunoloacutegicas- ceacutelulas LE- antiDNA nativo- antiacute-Srn- VDRL falso positivo (test seroloacutegico para siacutefilis falso (+))
LlAnticuerpos antinucleares
Tabla Il
Signos mayores Signos menores
PoliartritisPolimiositisDermatitisProteinuriaAnemia hemoliticaTrombocitopeniaLeucopenia
Fiebre de origen desconocidoUlceracioacuten oralPleuritisMiocarditisPericarditisLinfadenopatiacutea perifeacutericaAtaques
Tabla 3 Primer anaacutelisis del animal
HCT 222 (24-45)Hb 64 gdi (8-15)MCHC 288 gdi (30-37)GB 203 x 10911GRANS 142 x 10911GRANS 70L1NFMON 61 x 10911LM 30PLT 75 x 10911
(175-500)
DENSIDAD URINARIA 1018PROTEIacuteNAS EN ORINA ++Resto paraacutemetros urinariosnormales
VLFEVIF NegativoPIF Negativo
ALBALTFAAMJLBUNCaCREAGGTGLUCGLOB
224 gdi (26-39)35 Ull18 Ull628 Ullgt 130 mgdi (16-36)897 mgdi673 mgdi (08-24)24 Ull1608 mgdi563 gdi (28-51)
LIPA 494 UllTBIL 000 mgdiTP 787Na 1557 rnmoll
KCI
47 mrnoll1229 mmolll
anorexia y debilidad que sufren altibajos a lolargo del tiempo
La Asociacioacuten Americana de Reumatologiacutea(AAR)establecioacute en 19828 un sistema de criteriosque aparecen frecuentemente en el lupus (tabla1) Mediante caacutelculos estadiacutesticos se comproboacuteque si un paciente presentaba 4 oacute maacutes de estoscriterios de forma simultaacutenea o a lo largo deltiempo la posibilidad de que padeciera un lupusera muy alta
A pesar de que es muy difiacutecil establecer una rela-cioacuten entre el LES humano y el felino sobre todo
Fig 1 Gingivoestomatitis ulcerativa
por el escaso nuacutemero de casos documentados enesta especie Pedersen y Barlough describen 11gatos sospechosos de padecer LES dos de loscuales cumpliacutean 4 criterios AAR asiacute como tam-bieacuten hace Viacutetale- con otro gato De igual formael gato que describimos en el presente trabajotambieacuten cumple cuatro de estos criterios (trombo-citopenia proteinuria uacutelceras orales y ANA posi-tivo)
Paralelamente para el diagnoacutestico del LES nospodemos ayudar de los llamados signos mayoresy menores en que son divididos los hallazgos cliacute-nicos del LES (Tabla 11)9
Se hace un diagnoacutestico de LES si existen dossignos mayores y un test seroloacutegico positivo o siexiste un signo mayor dos menores y un testseroloacutegico positivo
CASO CLIacuteNICOEs remitido a nuestro hospital un gato siameacutes de
dos antildeos de edad con una historia de apatiacutea ano-rexia voacutemitos y gingivoestomatitis El pacienteestaba vacunado contra leucemia panleucopeniarinotraqueiacutetis y calicivirosis La estomatitis lapadeciacutea desde los diez meses de edad y los anaacuteli-sis de leucemia e inmunodeficiencia felinas(VLFeVIF) habiacutean sido negativos El veterinarioreferente lo habiacutea tratado en varias ocasiones conantibioterapia y corticoesteroides despueacutes de locual el gato volviacutea a recaer
Aparte de su problema oral la apatiacutea y anorexiatambieacuten eran recurrentes y en otro par de oca-siones habiacutea padecido conjuntivitis y problemasde viacuteas respiratorias superiores asiacute como voacutemitosy diarrea
De su exploracioacuten fiacutesica podemos destacar una
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Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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CNMDermatology Management System
Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Dotacioacuten de los premios
Categoriacutea Medicina y Cirugialer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica o similar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Categoriacutea Oftalmologiacutealer PremioCaacutemara digital Sony MVC-FC91 Mavica asimilar
2QPremioCaacutemara digital Sony MVC-FC7173 Mavica o similar
3er PremioInscripcioacuten XXXVII Congreso Nacional Avepa 2001
Se convoca la seacuteptima Edicioacuten del Premio de Fotografiacutea
Cientiacutefica AVEPA Las bases son las siguientes
1 QUIEacuteNES PUEDEN PARTICIPAR
Este premio estaacute abierto a todos los socios de AVEPA y estu-
diantes suscriptores de la revista de AVEPA
Se excluyen los miembros del jurado y colaboradores di-
rectos del mismo
2 CATEGORiacuteAS
Hay dos categoriacuteas Medicina - Cirugiacutea y Oftalmologiacutea
Se concederaacuten 3 premios por cada categoriacutea
3 TEMA A ESCOGER
Podraacuten presentarse sobre cualquier tema cientiacutefico relaciona-
do con la medicina y la cirugiacutea de animales de compantildeiacutea
Cada fotografiacutea se englobaraacute en la categoriacutea correspondiente
( Oftalmologiacutea o Medicina - Cirugiacutea )
4 NUacuteMERO DE FOTOGRAFiacuteAS
El nuacutemero de fotografiacuteas por participante que pueden
enviarse es ilimitado siempre que sean ineacuteditas aunque un
mismo autor soacutelo podraacute recibir un premio
5 ENViacuteo DE MATERIAL
Las fotografiacuteas deb raacuten s r nviadas por rr a
VII PREMIO DE FOTOGRAFIA CIENTFICA DE AVEPA
Secretariacutea de AvepaAvda Repuacuteblica Argentina 21-25
08023 BARCELONA
( El sobre conteniendo las fotografiacuteas deberaacute tener como
maacuteximo fecha de franqueo de correo el diacutea 15 de Sep-
tiembre del 2000 )
Uacutenicamente se admitiraacuten fotografiacuteas en soporte papel Por
cada fotografiacutea deberaacuten mandarse dos copias tamantildeo 10 x
15 cm con un lema en el reverso incluyendo en el enviacuteo
un sobre cerrado con el lema visible para su identificacioacuten
en el que deberaacuten incluirse los datos del autores direc-
cioacuten teleacutefono fecha y condiciones teacutecnicas de realizacioacuten
asiacute como una breve resentildea del motivo fotografiado (animal
raza sexo edad cuadro cliacutenico diagnoacutestico etc )
6 COMPOSICiOacuteN DEL JURADO
Eljurado estaraacute compuesto por los miembros de la junta de
AVEPA dos miembros del Comiteacute Cientiacutefico y un profesio-
nal de la fotografiacutea
7 CRITERIOS DE SELECCIOacuteN
El jurado valoraraacute el caraacutecter cientiacutefico de la fotografiacutea la
originalidad la dificultad del tema y por supuesto la cali-
dad fotograacutefica
8 PUBLICACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
El fallo del jurado seraacute inapelable y los resultados seraacuten
publicados en la revista AVEPA Actualidad Las copias de
las fotografiacuteas quedaraacuten en propiedad de la Asociacioacuten
AVEPA se reserva el derecho de publicar las fotografiacuteas yo
el nombre de los autores en sus publicaciones
9 CONDICIONES GENERALES
Todo concursante se aviene a aceptar las presentes Bases
del Premio
Los premios seraacuten entregados en el acto inaugural del Con-
greso Nacional de Avepa del 2000 que se celebraraacute en
Madrid el 13 de Octubre del 2000
maacutes informacioacuten en la web de AVEPA
httpwwwavepaes
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
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Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
34
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Pegraverez et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Tabla 4 Evolucioacuten de la analiacutetica durante el tratamiento
Diacutea 1 Diacutea3 Diacutea 7 Diacutea 9 Diacutea 20 Diacutea SO Diacutea 140HCT) 222 216 27 283 31 34 369Hb (gdI) 64 62 74 76 73 103 116PLT (por I) 75 x 109 73 x 109 82 x 109 118 x 109 160 x 109 175 x 109 294 x 109
BUN (mgdi) gt 130 95 709 285 144 - 21CREA (mgdi) 673 492 342 254 12 - 179ALB (gdi) 224 - - - 232 - -GLOB (gdi) 563 - - - 49 - -
Diacutea 5 Inicio de tratamiento con prednisolona
Fotografiacutea 2 Hiperecogenicidad de la corteza renal
gingivoestomatitis ulcerativa (Fig 1) (enciacuteas y maacuter-genes gingivales ulcerados y sangrantes) una tem-peratura de 405 C y ligera deshidratacioacuten
Realizamos una bioquiacutemica general hemogra-ma ionograma urianaacutelisis test VLFelVIF (SnapCombo Plus de IODO() y test de peritonitis infec-ciosa felina (Test Oiasystems Celisa-Fip de IODO()cuyos resultados resumimos en la Tabla III
La ausencia de signos de enfermedad del tractourinario inferior junto con la densidad urinariaobtenida y la presencia de hipoalbuminernia noshicieron pensar en un origen renal de la protei-nuria Eacutesta fue evaluada de nuevo doce horasmaacutes tarde volvieacutendose a obtener un resultado de2+ El examen microscoacutepico reveloacute un sedimentourinario inactivo y la densidad obtenida porrefractometriacutea fue similar a la de la primera medi-cioacuten
Teniendo presente el diagnoacutestico diferencial deglomerulonefropatiacutea felina (Tabla V) y tras iniciarun tratamiento a base de fluidoterapia metoclo-pramida ranitidina y enrofloxacina procedimos arealizar dos radiografiacuteas laterolaterales toraacutecica yabdominal asiacute como una ecografiacutea abdominalsiendo el uacutenico hallazgo relevante una hiperecoge-nicidad de las cortezas renales (Fig 2) lo cual apo-yaba la existencia de una glomerulonefritis
Dos diacuteas despueacutes del inicio del tratamiento sin-
Tabla V Diagnoacutestico diferencial de glomerulonefropatiacutea en el gato
- Amiloidosis (muy rara en felinos excepto abisinios)- Glomerulonefritis
VLFeVIFPIFPancreatiacutetiacutes
Poliartritiacutes micoplasmalLESNeoplasiasDiabetes mellilusFamiliarldiopaacutetica
tomaacutetico los valores renales habiacutean descendidopero seguiacutean siendo altos y la proteinuria era per-sistente asiacute tras haber descartado las principalescausas de glomerulonefritis felina (tabla 5) y apo-yaacutendonos en los hallazgos c1inicopatoloacutegicosdecidimos realizar un anaacutelisis de anticuerpos anti-nucleares (ANA)
El test ANA resultoacute 1320 (meacutetodo IFI negativosi lt 140 para nuestro laboratorio)
El paciente cumpliacutea 4 de los criterios estableci-dos por la AAR (trombocitopenia fallo renaluacutelceras orales y ANA +) asiacute como 2 signos mayo-res 2 menores y un test ANA (+)
Al quinto diacutea de su ingreso en el hospital trasrecibir el resultado de ANA se comenzoacute un trata-miento con prednisolona a dosis de 4 mgkg SIDPO
Los cambios de la analiacutetica en los controles pos-teriores quedan reflejados en la Tabla IV
Nueve diacuteas tras su ingreso en el hospital el gatofue dado de alta
Quince diacuteas tras el inicio del tratamiento conprednisolona la estomatitis habiacutea mejorado sus-tancialmente el gato ya no estaba decaiacutedo elhematoacutecrito era del 31 y las plaquetas habiacuteanaumentado a 160x 109L Se redujo la dosis deprednisolona a 2 mgkg SID
Un mes despueacutes el hemograma era normal ynuestro paciente se encontraba bien por lo que
ili24
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
amp25
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
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AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Lupus eritematoso sisteacutemico en un gato J Loacutepez Peacuterez et al Clinica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla VI Causas de tiacutetulo ANA positivo en perros y gatos
- LES- Desoacuterdenes deacutermicos
Peacutenfigo eritematoso (raras veces peacutenfigo vulgar)Lupus discoideDemodicosis generalizadaHipersensibilidad picadura pulgasPododermatitis de ceacutelulas plasmaacuteticas
- Desoacuterdenes hematoloacutegicosAnemia hemolitica inmunomediadaTrombocitopenia inmunomediada
- Desoacuterdenes cardiopulmonaresEndocarditis bacterianaDirofilariosis
- OtrosColangiohepatitisVLFePlFArtritis reumatoideTiroiditis IinfociacuteticaNeoplasias
Tiacutetulos moderados a altos Tiacutetulos moderados TiacutetulosANA(+) en desoacuterdenes sin o suelen ser bajos
se disminuyoacute la dosis a 1 mgkg SID Una sema-na maacutes tarde el gato volvioacute al hospital aquejado dedolor bucal y ligera apatiacutea observaacutendose una levegingivitis Se decidioacute por ello aumentar la dosis deprednisolona a 15 mgkg SID
El paciente volvioacute tres meses despueacutes para con-trol y la exploracioacuten y analiacutetica resultaron norma-les A partir de aquiacute su veterinario habitual conti-nuoacute realizando los controles los cuales han sidosatisfactorios seguacuten hemos sido informados
DISCUSIOacuteNNo siempre debemos esperar signos cutaacuteneos al
enfrentarnos a enfermedades autoinmunes comoel LES De hecho soacutelo alrededor del 20 de losgatos con LEs5 7 padecen sintomatologiacutea cutaacutenea(uacutelceras eritema costras alopecia exudados quepueden afectar a cualquier parte del cuerpo deforma simeacutetrica o focal) En nuestro caso el diag-noacutestico se hizo basaacutendonos en la presencia detrombocitopenia fallo renal (proteinuria azote-mia junta con hipoalbuminemia e hiperglobuline-mia) uacutelceras orales y ANA (+) cuatro de los oncecriterios del LES establecidos por la AAR
La analiacutetica renal nos indicaba una glomerulo-nefropatiacutea ante la cual es importante hacer undiagnoacutestico diferencial (Tabla V)
La mayoriacutea de las glomerulopatiacuteas caninas y feli-nas estaacuten relacionadas con mecanismos inmuno-mediados La presencia de inmunocomplejos enla pared glomerular suele iniciar el estado de glo-merulonefritis
El historial exploracioacuten fiacutesica y analiacutetica nospermitieron descartar VLFe VIF PIF pancreati-tis poliartritis y diabetes mellitus no encontran-do ninguna evidencia de neoplasia
El fallo renal con hipoalbuminemia hiperglobu-linemia proteinuria junto con trombocitopeniaanemia no regenerativa y uacutelceras orales eran alta-mente sospechosos de enfermedad inmune
Al diagnoacutestico de LES contribuyoacute de maneramuy importante un alto resultado de ANA Losonce gatos descritos por Petersen y Barlough pre-sentaban los siguientes tiacutetulos 140 (cuatro gatos)180 (un gato) 1100 (un gato) 1180 (dos gatos)1320 (dos gatos) 11280 (un gato) El gato des-crito por Vitale teniacutea un tiacutetulo de 1160
Un tiacutetulo ANA (+) puede ocurrir en un grannuacutemero de patologias- infecciosas inflamatoriaso neoplaacutesicas (Tabla VI) sin embargo no son tiacutetu-los muy elevados Un tiacutetulo ANA (+) es el criteriomaacutes importante para el diagnoacutestico de LES siem-pre que se den a la vez otros criterios de la enfer-medad y descartemos otros procesos que puedandar ANA (+)12
Con respecto al test de ceacutelulas de lupus eritema-toso (LE) la mayoriacutea de los inmunoacutelogos estaacuten deacuerdo en que el test ANA es superior para eldiagnoacutestico de LES9 12
Aunque son muchas las causas de estomatitisfelinasb asiacute como de estomatitis ulcerativa dehaber sido permitida por los duentildeos una biopsiade la mucosa oral habriacutea ayudado a complemen-tar el diagnoacutestico de LES ya que las lesiones his-toloacutegicas habriacutean podido ser indicativas de laenfermedad
La anemia hemoliacutetica asociada al LES es pococomuacuten en humana perro y qato 10 Suele sercomuacuten la anemia leve a moderada no regenera-tiva ni hemoliacutetica secundaria a enfermedad croacute-nica Asimismo la trombocitopenia severalaquo100x109L) es tambieacuten un raro hallazgo tantoen humanos como en qatos- La trombocitope-nia que nuestro paciente padeciacutea era probable-mente el resultado de una destruccioacuten inmuno-mediada de las plaquetas basaacutendonos en lapresencia de anticuerpos antinucleares y en unaclara mejoriacutea con un tratamiento inmunosupresor
Nuestro paciente mejoroacute soacutelo con el tratamien-to a base de prednisolona aunque no siempresucede asiacute En los casos en los que no podemoslograr una clara mejoriacutea con la prednisolona esnecesario el uso de otras sustancias como el clo-rambucilo soacutelo o en combinacioacuten con predniso-lona71O
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BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
34
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
BIBLIOGRAFIA1 Angarano DW Erosive and ulcerative skin disease lupus erythematosus
The Veterinary Clinics of North America Saunders 1995 25 4 871-885
2 Barber PJ Proteinuria En Bainbridge J Elliott J Manual of Canineand Feline Nephrology and Urology BSAVA 1996 75-84
3 Grauer GE Glomerulonefropatiacuteas En Nelson RW Couto CG Pilares deMedicina Interna en Animales Pequentildeos Intermeacutedica 1995 447-452
4 Heise SC Smith RS Lupus erythematosus with hemolytic anemia in acat Feline Praclice 1973 3 14-19
5 Pedersen NC Barlough JE Systemic lupus erythematosus in the cat Fei-ne Practice 1991 19 3 5-13
6 Rosenkrantz WS Estomatitis felina En Griffin CE Kwochka KW Mac-Donald JM Enfermedades dermatoloacutegicas del perro y el gato Inlermeacute-dica 1994 385-391
7 Scott DW Miller WH Griffin CE Immunologic skin diseases Systemiclupus erythematosus En Muller and Kirks Small Animal Dermatology5 ed Saunders 1995 579-584
8 Tan EM Cohen AJ Fries JE el al The 1982 revised criteria for the clas-sification of systemic lupus erythematosus Arthritis and Reumatism1982 25 1271-77
9 Thompson JD Enfermedades inmunoloacutegicas Lupus eritematoso sisteacutemi-co En Ettinger SJ Feldman Ee Tratado de Medicina Interna Veterina-ria 4 ed Intermeacutedica 1998 2437-40
10 Vitale CB Ihrke PJ Gross TL Werner LL Systemic lupus erythematosusin a cat fulfillment of the American Rheumatism Associacuteation criteria withsupportive skin histopathology Veterinary Dermatology Blackwell Scien-ce 1997 8 2 133-38
11 Werner LL Gorman NT Immune-mediated disorders of cats The Veteri-nary Clinics of North America 1984 14 1039-64
12 Werner LL Turnwald GH Immunologic and plasma protein diacutesordersAntinuclear Antibody En Willard MD Tvedten H Turnwald GH SmallAnimal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods 3 ed Saunders1999 257-59
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
34
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
EVALUACIOacuteN DE TIROXINA TOTAL Y HORMONAESTIMULANTE DEL TIROIDES EN PERROS SANOSY ENFERMOS
MC Marca A Loste I OrdenJM GonzaacutelezJA Marsellaacute
RESUMEN
Hemos analizado los niveles de tiroxina total (TI 4) Yde hormona estimulante del tiroides (TSH) en perrossanos y enfermos (hipotiroideos y enfermos notiroideos) En el anaacutelisis de TSH se han utilizado lostres procedimientos actualmente disponiblesradioinmunoensayo enzimoinmunoensayo yquimioluminiscencia En los perros hipotiroideos losniveles de TI 4 estuvieron por debajo del liacutemitenormal al igual que en algunos animales afectadospor otras enfermedades Se comprobaron pequentildeasdiferencias entre los resultados de TSH con los tresmeacutetodos analiacuteticos ensayados pero en general losvalores maacutes elevados se obtuvieron en los perroshipotiroideos Sin embargo altas concentraciones deesta hormona tambieacuten se observaron en algunosanimales con enfermedades no tiroideas o incluso enanimales sanos
Palabras clave Perro Tiroxina Hormonaestimulante del tiroides
INTRODUCCIOacuteN
Aunque no se conoce su incidencia real lamayoriacutea de los autores coinciden en sentildealar alhipotiroidismo como una de las endocrinopatiacuteasmaacutes frecuentes en la especie canina siendo latiroiditis linfociacutetica y la atrofia idiopaacutetica las prin-cipales causas del mismo- Existen ademaacutesmuchos otros factores fisioloacutegicos o no que pue-den inducir un hipotiroidismo funcional enten-diendo por tal aquella situacioacuten en la que el tiroi-des se adapta a alguacuten cambio que interaccionacon su normal funcionamiento
Departamento de Patologiacutea Animal Facultadde Veterinariac Miguel Servet 177S0013 ZaragozaLaboratorio de Bioquiacutemica HormonalHospital Cliacutenico UniversitarioAvda San Juan Bosco lSS0009 ZaragozaServiciode BioquiacutemicaHospital Universitario Miguel ServetPordm Isabel La Catoacutelica 1S0009 Zaragoza
ABSTRACT
Total thyroxine (TI4) and thyroid-stimulatinghormone (TSH) concentrations have been evaluatedin healthy and unhealthy dogs (hypothyroidism andother diseases have been included) Three analyticalprocedures have been used for assaying TSHradioimmunoassay enzymoimmunoassay andquimioluminiscence Hypothyroid dogs shown TI4
results lower normal range and in sorne groups ofunhealthy dogs could also been reported low resultsfor TI 4 Small differences between TSH levelsobtained by the three analytical procedures have beenappreciated and the highest results have beenreported in hypothyroid dogs However highconcentrations of this hormone have been obtainedin sorne animals affected by non-thyroiacutedal diseases oreven in healthy dogs
Key words Dog Thyroxine Thyroid-stimulatinghormone
Cliacutenicamente se presenta como una enfermedadmultisisteacutemica a veces muy inespeciacutefica lo quedificulta considerablemente el diagnoacutestico yrequiere la participacioacuten del laboratorio para suconfirmacioacuten A nivellaboratorial son muchas lasmodificaciones con que nos podemos encontrar yse recomienda ademaacutes del anaacutelisis hematoloacutegicoy perfil bioquiacutemico general realizar un anaacutelisishormonal A las ya claacutesicas pruebas hormonalespara el diagnoacutestico del hipotiroidismo canino havenido a unirse una nueva el anaacutelisis de la tiro-tropina (TSH) en sangre No obstante desde unpunto de vista praacutectico no podemos realizar todas
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
29
bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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AutoresDr E Saloacute (coordinador)Dr J Aruacutes - Dr J Cairoacute - Dr LI Ferrer -Dra C Fraile - Dr JL Gonzaacutelez -Dra C Larrazabal - Dra A Riacuteos -Dra P Sagredo - Dr PJ Sancho -Dra M Verde
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618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
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Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
las pruebas disponibles por lo que resulta nece-sario elegir aquella o aquellas que nos permitanobtener resultados fiables en un plazo de tiemporelativamente corto y con un coste econoacutemicoasequible
Se pensaba que el anaacutelisis de los niveles de TSHcanina en sangre permitiriacutea mejorar considerable-mente la fiabililidad en el diagnoacutestico del hipoti-roidismo ya que en medicina humana la evalua-cioacuten conjunta de tiroxina y TSH es el meacutetodo deeleccioacuten para el diagnoacutestico de la enfermedadgtSin embargo los resultados en medicina veterina-ria parecen no estar tan claros y existen discre-pancias en cuanto a su fiabilidad diagnoacutestica entrelos distintos autorcsecirc 11 13
No obstante sigue recomendaacutendose el anaacutelisisde TSH como prueba a incluir en el panel diag-noacutestico de los perros sospechosos de hipotiroidis-mo y se ha demostrado que la valoracioacuten conjun-ta de la tiroxina total (TI 4) o libre (Ff4) Y la TSHpermite mejorar considerablemente la especifici-dad diaqnoacutestica 10 14
En este estudio presentamos los resultados obte-nidos en el anaacutelisis de TI 4 YTSH en perros sanosy en perros afectados de distintas enfermedadesevaluando las diferencias que existen en ambosparaacutemetros entre los distintos grupos de animalesincluidos en la experiencia La evaluacioacuten de TSHcanina se ha llevado a cabo con los tres procedi-mientos analiacuteticos actualmente comercializadosen veterinaria (radioinmunoensayo enzimoinmu-noensayo y quimioluminiscencia)
MATERIAL Y MEacuteTODOSAnimalesLos perros utilizados en el estudio proceden del
Servicio de Medicina Interna de la Facultad deVeterinaria de la Universidad de Zaragoza e inclu-yen animales de ambos sexos y de distintas eda-des y razas algunos de ellos sanos y otros afecta-dos de distintos procesos patoloacutegicos
Las muestras se obtuvieron a primera hora de lamantildeana tras un periodo de 12 horas de ayunopor puncioacuten en las venas yugular o cefaacutelica Lasangre se recogiacutea en tubos vaciacuteos y tras su coagu-lacioacuten se centrifugaba (3000 rpm 10 minutos)repartieacutendose el suero obtenido en aliacutecuotas quese congelaban a -20 C hasta su anaacutelisis
Metodologiacutea analiacutetica- Tiroxina total (TI4) Su valoracioacuten la hicimos
con un kit comercial para la cuantificacioacuten de TI 4
en muestras caninas (Coat-A-Count Canine T4
TKC41 DPC) Se trata de un radioinmunoen-sayo en fase soacutelida que utiliza tubos cubiertos conanticuerpos y como trazador T4 marcada con 1125
- Hormona tirotropa (TSH) Esta hormona esespeciacutefica de especie por lo que requiere reacti-vos preparados exclusivamente para su utilizacioacutencon muestras caninas Actualmente existencomercializados 3 procedimientos para su anaacutelisisy los tres fueron evaluados en nuestro estudio
Meacutetodo radioinmunomeacutetrico (TSH-IRMA)(Coat-ACount Canine TSH IRMA IK9TlDPC) Ensayo en fase soacutelida que utiliza dos anti-cuerpos uno policlonal marcado con p25 y otromonoclonal inmovilizado en la pared de los tubosde reaccioacuten Tanto en este meacutetodo como en elusado para analizar TI 4 las lecturas finales serealizaron en un contador de centelleo GammaLKB
Enzimoinmunoensayo (TSH-Milenia) (MileniaCanine TSH MKVCTl DPC) Meacutetodo enmicroplaca cuyos pocillos estaacuten recubiertos conun anticuerpo anti-TSH canina y sobre los que seincorpora la enzima marcada con anticuerpospoliclonales anti-TSH canina Es un procedimien-to faacutecilmente automatizable y la lectura final serealizoacute a 450 nm en un lector de placas ELISALabsystem Multiskan RC
Quimioluminiscencia (TSH-Immulite) (ImmuliteCanine TSH LK9Tl DPC) Ensayo en fasesoacutelida inmunomeacutetrico quimioluminiscente secuen-cial de dos puntos que utiliza tambieacuten dos anti-cuerpos anti-TSH canina uno monoclonalligadoa la fase soacutelida y otro policlonal marcado con fos-fatasa alcalina Las lecturas se llevaron a cabo enun equipo de quimioluminiscencia Immulite
Los anaacutelisis de TI4 y TSH cualquiera que fuerael meacutetodo analiacutetico utilizado se realizaron siem-pre por duplicado incluyendo en cada caso loscorrespondientes sueros control (Control TiroidesCanina RIA K9TCM DPC)
Intervalo de referencia en los perrossanosLo establecimos a partir de los resultados obte-
nidos en 30 perros de ambos sexos y de distintasedades y razas Los animales se consideraronsanos una vez comprobado que tanto su explora-cioacuten fiacutesica como sus resultados analiacuteticos baacutesicos(hematologiacutea perfil bioquiacutemico general y urianaacuteli-sis) eran normales Tras el anaacutelisis de las muestrasse calcularon la media (x) y la desviacioacuten tiacutepica
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
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bd1N~~~~-~~t
AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
Formato 18 x 24 cms212 paacuteginas Gran nuacutemero de fotosgraacuteficos e ilustraciones
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~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
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Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
ili36
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
Tabla I Intervalo de referencia (li plusmn 250) para 1T4 y T5H enperros sanos
n Xo SO X plusmn 2S0
1T4 (lgdl) 28 191 063 065-317T5H-IRMA (mgdi) 31 015 011 000-037T5H-Milenia (ngdl) 23 016 011 000-038T5H-Immulite (ngdl) 26 012 009 000-030
(SD) y tras comprobar que los datos obtenidosseguiacutean una distribucioacuten normal se establecioacute elcorrespondiente intervalo (x plusmn 2 SD)
Estudio en los animales enfermosEn este apartado englobamos tanto perros hipo-
tiroideos (tratados y no tratados) como animaleseutiroideos con enfermedades extra tiroideas yperros sanos En total se incluyeron 62 animalesdistribuidos en los siguientes grupos
- Grupo 1 (control) Animales sanos (n = 23)- Grupo 2 Hipotiroideos no tratados (n = 4)- Grupo 3 Hipotiroideos tratados (n = 8)- Grupo 4 Oermatopatiacuteas (n = 11)- Grupo 5 Alteraciones del comportamiento
(n = 9)- Grupo 6 Parasitosis (n = 7)Tras analizar todas las muestras se aplicoacute el
corresponsiente anaacutelisis de varianza (ANOVA)para evaluar la aparicioacuten de diferencias estadiacutesti-camente significativas entre los grupos
RESULTADOSEn la Tabla I se presenta el intervalo de referen-
cia (x plusmn 2 SD) obtenido para la TI4 y TSH con
Tabla Il Resultados (li plusmn SO) de 1T4 y TSH en animales sanos y enfermos-o
cada uno de los procedimientos analiacuteticos utiliza-dos en el estudio
Los resultados de TI 4 Y TSH obtenidos en losanimales sanos y en los afectados de distintaspatologiacuteas pueden verse resumidos en la Tabla 2en la que figuran tambieacuten las diferencias estadiacutesti-camente significativas obtenidas en cada casoEstos resultados pueden compararse maacutes faacutecil-mente si nos fijamos en sus representaciones graacute-ficas (Figs 1 - 4)
DISCUSIOacuteNEl valor medio de TI 4 en el conjunto de los
perros sanos incluidos en el estudio es de 191Ilgdl con un intervalo que oscila entre 065 y317 Ilg di (Tabla 1) Estos resultados concuerdancon los previamente establecidos en nuestro labo-ratorio asiacute como con los publicados por distintosautores 10 14 Algo similar ocurre con los resulta-dos obtenidos en el anaacutelisis de TSH (Tabla 1) Losvalores oscilan entre O y 04 ngml cualquiera quesea el procedimiento analiacutetico utilizado si bien seregistran leves diferencias entre ellos En cualquiercaso los resultados coinciden con los indicados enlos kits diagnoacutesticos utilizados en el estudio (00 -05 ngml) y tambieacuten con los registrados previa-mente por otros autores- 10 14
En el estudio realizado en perros afectados dedistintas enfermedades (Tabla II) podemos vercomo los resultados de TI 4 entran dentro delintervalo de referencia en todos los gruposexcepto en el Grupo 2 (perros hipotiroideos notratados) cuyos resultados se encuentran en sumayoriacutea por debajo del liacutemite inferior de referen-
TSH-Immulit(ngml)
Grupo 1Grupo 2Grupo 3Grupo 4Grupo 5Grupo 6
167 plusmn 065a
052 plusmn 019b
233 plusmn 087c
115 plusmn 043d
217 plusmn 065e
098 plusmn 055
TSH-IRMA(ngml)
TSH-Milenia(ngmI)
021 plusmn 013f
089 plusmn 0599
052 plusmn 067h
023 plusmn 014006 plusmn 006030 plusmn 030
016 plusmn 009f
060 plusmn 063i062 plusmn 070i016plusmn012005 plusmn 004014 plusmn 012
017 plusmn 016f
093 plusmn 0659
051 plusmn 068k
015 plusmn 008005 plusmn 001027 plusmn 033
Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroideos tratados Grupo 4 Oermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones delcomportamiento Grupo 6 Parasitorisa Dif significativa (p lt 005) entre el grupo 1 y todos los demaacutesb Dif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 y 2-5e Diiacute significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-6d Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 4-5e Dif significativa (p lt 001) entre grupos 5-6f Diacutef significativa (p lt 001) entre grupos 1-2 y 1-3
g Oif significativa (p lt 005) entre grupos 2-3 2-4 2-5 Y 2-6h Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-5i Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 2-4 2-5 Y 2-6j Diacutef significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 3-5 3-6k Dif significativa (p lt 005) entre grupos 3-4 y 3-5
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AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
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~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
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~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
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AutorDrVicente Aige GilProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad Autoacutenomade Barcelona
Texto revisado porDr Miguel Gimeno DomiacutenguezProfesor Titular de AnatomiacuteaFacultad de Veterinariade la Universidad de Zaragoza
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
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O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
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06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
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bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
618lt
~16~ 14e 12
Vi 1i- 08
060402i-iexcl-=~-_~_-------
O
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca er dl Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
6 4ltrn O335 Oltjiexcl 3 O
25
2
15
1
05
OGrupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 1 Resultados de TT4 (I-g di) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
~ 2~18~ 16~ 14E 12I ~ 1
080604021- --
O
02L------~--_r_-----r---_--__-Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 3 Resultados de TSH Milenia (ng mI) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatias Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
cia (Fig 1) Asiacute mismo algunos animales del gru-pos 6 presentan tambieacuten valores de TI 4 inferio-res a los normales al igual que uno de los perrosincluidos en el Grupo 4
Como puede verse en la Tabla 11los resultadosde TI 4 presentan diferencias estadiacutesticamentesignificativas entre los distintos grupos ahorabien consideramos que las uacutenicas que presentanintereacutes desde el punto de vista cliacutenico son aque-llas que se establecen entre el grupo de perroshipotiroideos no tratados (Grupo 2) y el resto yaque eacuteste es el uacutenico grupo que se sale mayorita-riamente de la normalidad La existencia de algu-nos individuos de los grupos 4 y 6 con valores deTI 4 por debajo de lo normal viene a corroborarel hecho repetidamente demostrado de queniveles basales bajos de estas hormonas por siacutesolos no permiten diagnosticar un hipotiroidis-mo ya que existen multitud de factores extrati-roideos fisioloacutegicos o no que pueden inducirtales descensosecirc 2
Por lo que respecta a la TSH podemos decir
O
O
021---------------------------Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 2 Resultados de TSH IRMA (ng mi) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
618agraveS 16
~14J Eecirc 12
Vi 1i-
08
06
04 J-~-----fo~02
O L----__ -r-t- __ -t-r- __ ---1r--_-==rft=__-r-_
O
Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5 Grupo 6
Fig 4 Resultados de TSH Immulite (ng rnl) en animales sanos y enfermosbull Grupo 1 Sanos Grupo 2 Hipotiroideos no tratados Grupo 3 Hipotiroide-os tratados Grupo 4 Dermopatiacuteas Grupo 5 Alteraciones del comporta-miento Grupo 6 Parasitosis
que los Grupos 2 (hipotiroideos no tratados) y 3(hipotiroideos tratados) son los que registran losvalores maacutes altos cualquiera que sea el procedi-miento utilizado para su evaluacioacuten (Tabla 11)Sinos fijamos en las representaciones graacuteficascuando el anaacutelisis de TSH se realiza por los meacuteto-dos de radioinmunoensayo (Fig 2) o quimiolumi-niscencia (Fig 4) todos los animales del Grupo 2presentan valores claramente superiores a la nor-malidad sin embargo con el enzimonmunoensa-yo (Fig 3) parte de los resultados de este grupocaen dentro del intervalo de normalidad Induda-blemente esta discrepancia es debida a la teacutecnicaanaliacutetica utilizada ya que los resultados con enzi-moinmunoensayo son siempre ligeramente infe-riores y presentan una mayor variabilidad Noobstante estos resultados deben tomarse con pre-caucioacuten dado el escaso nuacutemero de animalesincluidos en este grupo (n = 4)
Los perros hipotiroideos ya tratados (Grupo 3)presentan valores de TSH dentro del rango denormalidad o por encima del mismo cualquiera
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Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
r33
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
42
DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Evaluacioacuten de tiroxina total y hormona estimulante del tiroides en perros sanos y enfermos MC Marca et al Cliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
que sea el procedimiento analiacutetico empleado (Figs2-4) Esto podriacutea explicarse porque no todos losanimales incluidos en este grupo habiacutean recibidotratamiento durante suficiente tiempo como paraque se normalizaran sus valores de TSH o bienporque la TSH no recupera su normaliadad peseal tratamiento del hipotiroidismo y por tanto noseriacutea un paraacutemetro de utilidad en el control de losperros hipotiroideos en tratamiento
En los restantes grupos la mayoriacutea de los ani-males presentan valores dentro de la normalidadaunque tanto en los perros sanos como en los delgrupo 4 se observan algunos individuos con valo-res por encima del liacutemite superior (Figs 2-4) Enninguno de estos casos hemos tenido conoci-miento de que se desarrollara posteriormente uncuadro de hipotiroidismo
BIBLIOGRAFIA1 Feldman EC Nelson RW Canine and leline endocrinology Saunders
Philadelphia 1996 68-1172 Ferguson DC Update on the diagnosis of canine hypothyroidism
VetC1inNorth Am Small Anim Pract 1994 28 515-5403 Ferguson DC Peterson ME Serurn Iree and total iodothyronine concen-
trations in dogs with hyperadrenocorticism Am J Vet Res 1992 531636-1640
4 Heripret D Diagnostic biologique de Ihypotyroiumldie canine Prat MedChir Anim Comp 1997 32 31-42
5 Jensen AL [versen L Hoier R Kristensen F Henriksen P Evaluation ofan immunoradiometric assay Ior thyrotropin in serurn and plasma sarn-pIes of dogs with primary hypothyroidism J Com Pathol 1996 114339-346
6 Marca MC Loste A Sanz MC Saez T Verde MT Ramos JJ Hipotiroi-dismo canino Revisioacuten y actualizacioacuten de su diagnoacutestico Clin Vet PeqAnim 1996 16 111-117
7 Nelson RW Use of baseline thyroid hormone concentrations Ior diagno-sing canine hypothyroidism Can Pract 1997 22 39-40
8 Panciera DL Thyroid-Iunction testing is the luture here Vet Med 199750-57
9 Peterosn ME Melian C Nichols R Measurement of serum total thyroxi-ne triiodothyronine free thyroxine and thyrotropin concentrations fordiagnosis of hypothyroidism in dogs JAVMA 1997 211 1396-1402
Nuestros resultados concuerdan con los publica-dos previamente por otros autores observaacutendoseun cierto solapamiento entre los valores de TSHobtenidos en perros sanos hipotiroideos y euti-roideos con enfermedades extratiroideas 10 8 12
Sin embargo se considera que el ensayo de TSHes de ayuda en el diagnoacutestico y puede resultar deutilidad para la valoracioacuten de la funcioacuten tiroideaen perro sobre todo si se evaluacutea conjuntamentecon TT417 914
No obstante consideramos que estos resultadosconstituyen tan soacutelo una evaluacioacuten inicial quedemuestra la necesidad de profundizar maacutes enestos estudios incrementando el nuacutemero de ani-males en cada grupo antes de poder establecerconclusiones definitivas
10 Ramsey lK Evans H Herrtage ME Thyroid stimulating hormone andtotal thyroxine concentrations in euthyroid sick euthyroid and hypothy-roid dogs J Small Anim Pract 1997 38 540-545
11 Ramsey [K Herrtage M Distinguishing normal sick and hypothyroiddogs using total thyroxine and thyrotropin concentrations Can Pract1997 22 43-44
12 Rodoacuten J Diagnoacutestico del hipotiroidismo canino Can et Fel 1999 3847-63
13 Scott-Moncrieff JC Serum canine thyrotropin concentrations in experi-mental and spontaneous canine hypothyroidism Can Pract 1997 2241-42
14 Scott-Moncrieff JC Nelson RW Sruner JM WiIliams DA Comparisonof serum concentrations of TSH in healthy dogs hypothyroid dogs andeuthyroid dogs with concurrent disease JAVMA 1998 213 1435-1439
15 Surks Ml American Thyroid Association Guidelines Ior use of laboralorytests in thyroid disorders JAVMA 1990 263 1529-1532
16 Tacker EL Etiology of adult-onset canine auloimmune hypothyroidismCan Pract 1997 22 12-13
17 Williams DA Scott-Moncrieff JC Sruner J Validation of an immunoas-say for canine thyroid stimulating hormone and changes in serum con-centration following induction of hypothyroidism in dogs JAVMA 1996209 1730-1732
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ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
ili45
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
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bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
ESTUDIO EXPERIMENTAL EN EL PERROACERCA DE LOS EFECTOS NOCIVOSDE LOS ULTRASONIDOSSOBRE LA VITALIDAD PULPAR
JL Veacuterez-Fraguela MA Vives ValleacutesLJ Ezquerra Calvo
RESUMEN
En el presente trabajo se plantea el estudio de lasposibles lesiones pulpa res inducidas comoconsecuencia de la aplicacioacuten de un destartarador deultrasonidos de 29 KHz de frecuencia utilizadocomuacutenmente en odontologiacutea cliacutenica veterinariaComo hipoacutetesis inicial y a partir de la revisioacutenbibliograacutefica se considera que la aplicacioacuten de maacutes dequince segundos y con la mayor refrigeracioacuten (sprayde agua) hay un riesgo de lesionar la pulpa dentalcomo consecuencia de la elevacioacuten de temperaturaque produce la vibracioacuten del extremo de la sondaultrasoacutenicaLa metodologiacutea aplicada consistioacute en una serie demediciones previas sobre animales deexperimentacioacuten y finalmente un grupo de seisanimales y un animal controlEn cada animal se utilizaron exclusivamente lospremolares maxilares y mandibulares a los cuales seles aplicoacute un tiempo duplo cuaacutedruplo o seacutextuplo delrecomendado y sin refrigeracioacuten Paralelamente setomaron medidas de la temperatura delcanal pulpar(en incisivos no tratados) temperatura ambiental delcarrillo del surco gingival y de la propia dentina deldiente afectado a traveacutes de una sonda con termistoracoplada a un medidor de resitividad y acoplado enel espesor de la dentina a una profundidad de 1miliacutemetroIgualmente se tomaron otros datos referidos al grosorde la dentina y caacutemara pulpar (por estudioradiograacutefico) Tras la toma de los datos referidos a la temperaturamaacutes alta generada se aguardoacute un periacuteodo de esperade dos semanas tras el cual se extrajo una muestrasignificativa de piezas dentales para su estudiohistoloacutegicoEn el animal control se elevoacute la temperatura hasta unliacutemite de 45 y 47degC tras lo cual se extrajeron todoslos premolares para su estudio histoloacutegicoLos resultados obtenidos nos hacen concluir que la
Hospital Cliacutenico Veterinario UltramarFerrol A CoruntildeaCaacutetedra de CirugiacuteaFacultad de Veterinaria de CaacuteceresJoseacute Luis Veacuterez-FraguelaCI Nueva 167 B15404 Ferrol A CoruntildeaTelf 981 37 02 24 - 981 33 00 67email ultramarmx3redestbes
aplicacioacuten de un destartarador de ultrsonidos de 29KHz durante 90 segundos seguidos sobre lasuperficie dental y sin refrigeracioacuten no eleva latemperatura del diente pero siacute puede provocarlesiones compatibles con pulpitis agudas comoconsecuencia del efecto soacutenico provocado y muysimilares a las producidas por el calor aplicado en elanimal control
Palabras clave Ultrasonidos Perro Pulpa dental
ABSTRACT
In the present investigation we proposed the study ofpossible pulp damage produced as a result of theapplication of an ultrasound scaler with 29 KHzoutput commonly used in clinical veterinaryodontologyAs an initial hypothesis and based on bibliographicresearch we considered that an application of morethan 15 seconds with maximun coolant (waterspray) meant a risk of dental pulp damage as aconsequence of the rise in temperature produced bythe vibration of the end of the ultrasound probeThe applied method consisted of a series of previousmeasurements on experimental animals and fiacutenally ona group of six animals and one control animalOn each animal we used exclusively maxillary andmandibular premolars to which was applied doublefour times and six times the recommended timewithout the use of a coolant At the same timetemperatures were taken of the pulp canal (onuntreated incisives) the ambient temperature thecheek the gingival canal and the dentine of theaffected tooth using a probe with a thermistorattachcd to a resistivity meter and inserted in thedentine to a depth of 1 mmOther data was also obtained on the thickness of thedentine and pulp cavity (by x-ray study)Once the collection of data referring to the highest
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
temperatures generated was complete a waitingperiod of 2 weeks followed after which a significantsample of dental pieces was removed for ahistological studyIn the control animal the temperature was raised to alimit of between 45 C and 47 oc Following this allthe premolars were removed for a histological studyThe obtained results make us conclude that theapplication of a ultrasound scaler of 29 KHz during90 seconds of continuous use on the dental surfacewithout coolant does not increase the toothtemperature However it can provoke damagecomparable with acute pulpitis as a consequece ofthe sonic effect caused very similar to the effectsproduced by the heat applied in the control animal
Key words Dog Dental pulp Scaler
INTRODUCCIOacuteNLa amplia utilizacioacuten de destartaradores ultrasoacute-
nicos en la cliacutenica humana y veterinaria asiacute comosu faacutecil empleo ha hecho de este sistema de lim-pieza de la superficie dental un aliado indispensa-ble de la odontoestomatologiacutea actual
Ademaacutes de la accioacuten de limpieza de los ultras0-
nidos hay muchas otras aplicaciones de los mis-mos en odontologiacutea sin embargo soacutelo en los uacutelti-mos tiempos se han racionalizado y comprendidolas aplicaciones y efectos de sus propiedades fiacutesi-cas
Teacutecnicamente los ultrasonidos pueden ser gene-rados por magnetostriccioacuten o piezoelectricidad (10maacutes utilizado) Su accioacuten se basa en la oscilacioacutenprovocada por un campo electromagneacutetico creadopor la corriente eleacutectrica Su frecuencia oscilatoriapuede ir desde los 20000 a los 40000 ciclos porseacutegundo seguacuten el aparato utilizado- 18 24 27 29
La interaccioacuten de los ultrasonidos con los tejidosvivos estaacute causada por accioacuten mecaacutenica (cavitacioacutensobre esfuerzos o presioacuten) o por accioacuten teacutermicall12 13 36 38 Yes necesario una mejor comprensioacutende la efectividad limites de seguridad y uso racionalde los ultrasonidos para su empleo en cliacutenica pues-to que sabemos de forma geneacuterica que la limpiezadental con destartaradores de ultrasonidos eleva latemperatura de las estructuras dentales de formaque se puede originar una necrosis pulpar si bienno se ha cuantificado exactamente cuaacutento tiempoy cuaacutenta temperatura se requiere para esta accioacutenpatoloacuteqiacutecal- 2 3 910202135
Maacutes concretamente en medicina veterinariadebido a la anestesia general a que es precisosometer al paciente el cliacutenico pierde la referencia
que proporciona un paciente despierto y con sen-sibilidad lo que unido a problemas de sarro maacutesgraves que en medicina humana lleva a prolon-gar el tiempo de actuacioacuten sobre el diente maacutesallaacute de lo que en principio se prodriacutea considerarrazonable-S 1935
Esta accioacuten de calentamiento indeseada pero encualquier caso inevitable depende seguacuten todos losautores consultados del tiempo de contacto con eldiente del grosor de la dentina y del propio siste-ma de refrigeracioacuten del aparato y a su juiciopuede tener como consecuencia la necrosis pulpary posterior desvitalizacioacuten del diente la 20 21 35
A pesar de todo ello consideramos que el cono-cimiento de estos efectos no se ha indagado losuficiente No hemos encontrado en la bibliogra-fiacutea estudios experimentales que determinen elalcance del problema que cuantifiquen que es loque pasa realmente en la pulpa
Persuadidos que el calor criacutetico que puede llegara lesionar la pulpa es muy difiacutecil que se produzcacon la accioacuten normal de los distintos tipos de des-tartaradores y pensando que no es ajustada la teo-riacutea actual de que por encima de los 15 segundosde aplicacioacuten ya pueden causar dantildeo pulpar comoafirman diversos autores la 20 21 35 entre otrosPretendemos cuantificar el posible dantildeo provoca-do por el calor de manera experimental para quesirva en el empleo cliacutenico cotidiano
Para todo ello como objetivos del trabajo nosproponemos en primer lugar comprobar lashipoteacuteticas lesiones sobre la pulpa y la vitalidadpulpar como consecuencia del empleo de destar-taradores de ultrasonidos y la elevacioacuten de tem-peratura que se produce
Pretendemos ademaacutes establecer la patogenia delproceso si se produce un estado patoloacutegico en lapulpa mediante el estudio histopatoloacutegico de laslesiones pulpares provocadas asiacute como el reflejocliacutenico macroscoacutepico en el aspecto del diente
Tambieacuten se trata de determinar el tiempo maacutexi-mo de exposicioacuten a los ultrasonidos que un dien-te sano puede soportar en general o bien espe-ciacuteficamente seguacuten paraacutemetros tales comotamantildeo del diente edad tamantildeo de la caacutemarapulpar etc
MATERIAL Y MEacuteTODOPara el desarrollo del trabajo de investigacioacuten se
utilizoacute un disentildeo experimental que consistioacute en laeleccioacuten del perro como animal de experimenta-
r35
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n l 2000
Fig 1 Aparato de ultrasonidos utilizado en el trabajo
Fig 3 Radiografiacutea de proyeccioacuten oblicua para la medicioacuten de la dentina y delespesor deia pulpa
cioacuten con una edad en torno a los 4 antildeos y con-cretamente a realizarlos en los dientes premolaresmaxilares y mandibulares
La fuente de ultrasonidos era una aparato de loshabitualmente utilizados en odontologiacutea veterina-ria con una frecuencia de salida de 29 KHz Elsitema de medicioacuten de temperatura consitioacute enuna sonda de 1 mm dotada de un terrnistor y aco-plado a un lector de resistividad previamente cali-brada Figs 1 y 2
Inicialmente empleamos un animal para realizarlos ajustes necesarios en los cuales modificamos elplanteamiento inicial en los siguientes puntos
- Los tiempos de aplicacioacuten que recomendabanno pasar de 15 segundos debiacutean ser maacutes prolon-gados por lo que se multiplicaron por 2 4 y 6es decir tiempos de 30 60 y 90 segundos
- La refrigeracioacuten utilizada todaviacutea disminuiacutea latemperatura del diente maacutes que al inicio por locual suprimirla reforzariacutea de producirse las lesio-nes pulpares
- La medida de la temperatura de la pulpa direc- tamente en el canal pulpar originaba forzosamen-
Fig 2 Sistema de mediccioacuten con el medidor de resistividad -Testel 12Sreg- alque se le acopla la sonda de mediccioacuten termomeacutetrica -YSIreg serie SOO nordmS14 constante de tiempo 022 seg rango -S a +SOordmC-
Fig 4 Pulpotomiacutea en un tercer incisivo superior para la medicioacuten de la tem-peratura en la caacutemara pulpar
te problemas de contaminacioacuten bacteriana y lesio-nes pulpa res que podriacutea interferir el estudio histo-patoloacutegico Esto no era asiacute si se tomaba la tem-peratura en el grosor de la dentina
A partir de aquiacute elaboramos el meacutetodo definitivoque aplicariacuteamos a todos los animales
Anestesiado el animal intubado y conectado a lamaacutequina anesteacutesica se coloca en decuacutebito dorsalradiografiando en primer lugar los premolarespara realizar una medicioacuten del espesor de la den-tina y de la pulpa para disponer de estos datospara su posterior correlacioacuten si procediacutea Fig 3
Tomamos tambieacuten la temperatura ambiente latemperatura del perro en el carrillo y en el surcogingival del cuarto premolar superior mediante lamisma sonda termomeacutetrica que utilizamos a lolargo de la experiencia
Al objeto de conocer cual era la temperaturanormal de la pulpa dental se utilizoacute el tercer inci-sivo maxilar izquierdo o derecho indistintamentecuyo esmalte y dentina se perforaron con unafresa de diamante de 1 mm acoplada a la turbinarefrigerada por agua hasta llegar a la caacutemara pul-
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL VeacuterezmiddotFraguela et oCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 na l 2000
Fig 5 Posicioacuten de la sonda para la toma de temperatura en la superficie den-tal
par en cuyo momento se aplicaba la sonda en elorificio practicado obteniendo asiacute la correspon-diente cifra que era anotada en la ficha individualFig4
A continuacioacuten preparamos el orificio para lamedicioacuten de la temperatura la teacutecnica consistiacuteaen la apertura de un lecho con una fresa acopla-da a la turbina y refrigerada por agua Dicha fresateniacutea un grosor de 1mm coincidiendo asiacute con eldiaacutemetro de la sonda termomeacutetrica La excava-cioacuten teniacutea aproximadamente un miliacutemetro de pro-fundidad y el lugar de perforacioacuten era indistinta-mente las caras lingual o labial al objeto depermitir la correcta insercioacuten de la sonda en el ori-ficio sin que contactara con otras estructuras (len-gua carrillo paladar etc) que pudieran alterar latoma de temperatura Fig 5
De esta forma como ya se ha indicado evitaacute-bamos la interferencia que supondriacutea para el estu-dio la entrada en la caacutemara pulpar y su maacutes queposible contaminacioacuten anulando su incidenciaen los estudios histopatoloacutegicos Por el contrarioel efecto del aumento de temperatura se transmi-tiriacutea a toda la dentina (lugar de la toma de datos)y a la pulpa en virtud de los movimientos de lim-pieza
Con el diente ya preparado se coloca la sondatermomeacutetrica en posicioacuten y se comienza la apli-cacioacuten del destartarador de ultrasonidos
La aplicacioacuten de los ultrasonidos sobre la super-ficie dental y observacioacuten de las variaciones detemperatura se realiza aplicando los ultrasonidosen tiempo creciente de tal forma que en los pri-meros premolares superiores y en los segundospremolares inferiores aplicamos los ultrasonidosdurante 30 segundos En los segundos premola-res superiores y terceros premolares inferiores losaplicamos durante 60 segundos En los terceros
premolares superiores y cuartos premolares infe-riores los aplicamos durante 90 segundos
Asiacute pueacutes durante la aplicacioacuten de los ultrasoni-dos el tiempo asignado a cada diente se observa-ba el valor de resistividad maacutes bajo que indicaba elmedidor de resistividad en ohmnios que secorrespondiacutea con valores determinados en gradoscentiacutegrados hasta mileacutesimas de grado Siempre seanotoacute el valor maacutes bajo obtenido correspondiente
a la temperatura maacutes elevadaPor uacuteltimo al animal control se le realizoacute una
teacutecnica encaminada a la aplicacioacuten de calor exter-no a traveacutes del contacto con un soldador eleacutectricode punta fina hasta alcanzar registros en torno alos 45 C para la arcada derecha y entorno a los47 C en la arcada izquierda momento en el cualcesaba el contacto con la fuente de calor
Posteriormente a este animal se le extrajerontodos los premolares tratados y se le practicoacuteacto seguido la eutanasia mediante barbituacutericos
En este animal todas las piezas dentales extraiacute-das se estudiaron histoloacutegicamente al objeto dedisponer de datos de referencia inexistentes en laliteratura para temperaturas concretas
A los animales del 1 al 6 se les extrajeron diver-sas piezas dentales aleatoriamente para su estudiohistopatoloacutegico
RESULTADOSEl hallazgo maacutes significativo es que en ninguacuten
caso se han observado elevaciones de temperatu-ra superiores a 30 C siendo la maacutexima tempera-tura registrada la de 2948 C ni siquiera tras laaplicacioacuten de los ultrasonidos durante 90 segun-dos
Todos los resultados obtenidos se refieren en elCuadro 1
DISCUSIOacuteNAl respecto y con los resultados obtenidos cen-
traremos la discusioacuten en los siguientes apartados- Calor generado por el destartarador de ultra-
sonidos y su efecto sobre la vitalidad pulpar- Lesiones producidas por el uso de destartara-
dores de ultrasonidos- Relacioacuten entre el tamantildeo del diente el tiempo
aplicado y las lesiones observadas
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n 1 2000
Cuadro I Resultados obtenidos
perro 1 perro 2 perro 3 perro 4 perro 5 perro 6 control
Peso 318 2265 2115 178 423 252 246
Edad 25 35 25 4 4 2 55
Sexo H M H H H M H
Espes Den-pul mm
105205 15-0514-03 13-1014-10 16-0615-05 15-0514-03 16-0716-08 12-1014-16 14-0612-2
106206 15-0415-05 21-1221-11 23-1521-13 15-0415-05 20-0819-07 21-1221-11 15-0514-03
107207 16-0615-05 24-1123-10 13-1014-10 17-0213-05 23-0919-08 16-0615-05 17-0213-05
108208 23-1521-13 23-0919-08 16-0615-05 20-1622-09 15-0514-03 23-1521-13 20-1622-09
406306 13-1014-10 16-0615-05 12-1014-16 12-1014-16 15-0415-05 14-1014-10 12-1014-16
407307 21-1221-11 20-0819-07 17-0213-05 21-1221-11 16-0615-05 12-1014-16 22-1120-09
408308 24-1123-10 23-0919-08 20-1622-09 24-1123-10 23-1521-13 21-1221-11 23-1224-11
Temperatura en C
Ambiente 2151 2105 2072 2085 2033 2115 2031
Surco gingival 3406 2683 2717 2872 2982 2999 2666
Canal pulpar 2697 2784 2999 2841 2903 2619 2837
Carrillo 3521 3256 3329 3416 3396 3354 3047P ultrasonido en -c105-205 (3O) 2644-2700 2948-2833 2593-2828 2785-2717 2714-2835 2638-2687 4487-4644106-206 (6O) 2647-2672 2853-2915 2640-2788 2671-2672 2687-2850 2684-2825 4487-4644107-207 (9O) 2585-2785 2676-2785 2595-2612 2890-2818 2533-2781 2580-2860 4487-4644108-208 (9O) 2367-2785 2813-2659 2671-2702 2694-2684 2795-2819 2507-2892 4487-4644406-306 (3O) 2476-2771 2890-2926 2526-2858 2667-2675 2684-2592 2603-2620 4487-4644407-307 (6O) 2626-2814 2710-2855 2580-2709 2694-2844 2667-2712 2592-2587 4487-4644408-308 (9O) 2581-2635 2604-2921 2588-2513 2814-2919 2727-2685 2717-2658 4487-4644
Calor generado por el destartarador deultrasonidos y su efecto sobre la vitalidadpulpar
Como se ha puesto de manifiesto en la revisioacutenbibliograacutefica diversos autores estaacute descrita unaelevacioacuten de la temperatura en el tejido pulparcomo consecuencia de la aplicacioacuten de ultrasoni-dos en distintas circunstancias como en la lim-pieza periodontal en la preparacioacuten del canal pul-par o en la profilaxis dental (limpieza de depoacutesitosde taacutertarol- 2 3 91011121721222326323940
Por lo que a nosotros respecta no hemosencontrado en la bibliografiacutea un modelo experi-mental como el utilizado por nosotros y en virtuddel cual hemos encontrado que tras la aplicacioacutenreiterada del instrumento de ultrasonidos muypor encima de las recomendanciones resentildeadaspor los diferentes autores aludidos y ademaacutes espe-ciacuteficamente sin refrigeracioacuten no se aprecia unasignificativa elevacioacuten de la temperatura quepudiera afectar a la pulpa dental producieacutendolelesiones observables histoloacutegicamente
Como se puede apreciar en el cuadro de resul-tados uacutenicamente se observoacute un incremento de
temperatura hasta los 2948 C teniendo encuenta que la medidas de la temperatura pulparobtenida en los incisivos osciloacute entre 2619 C y1999 C muy por debajo de la temperatura cen-tral estimada en 385 C plusmn 05 oc para el perro
Ademaacutes como refieren entre otros Goodis ycoll7 el diente dispone de un sistema de disper-sioacuten del calor externo a traveacutes de los tuacutebulos dedentina (con escasa conductividad teacutermica debidoa su composicioacuten) de forma centriacutepeta hacia lapulpa donde es transmitida a la red vascular ytrasladado hacia el resto del organismo lo queinduce a pensar en una determinada capacidad deresistir variaciones teacutermicas por encima de lasencontradas en nuestro estudio
Todo ello nos lleva a considerar que la aplicacioacutende un aparato de ultrasonidos como el empleadopor nosotros incluso desprovisto de refrigeracioacutenno actuacutea elevando la temperatura de la caacutemarapulpar del diente tratado originando lesiones pul-pares por maacutes que el tiempo de aplicacioacuten sobreuna pieza dental se alargue excesivamente inclusohasta los 90 segundos Maacutes auacuten el empleo derefrigeracioacuten parece disminuir la temperatura del
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
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bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
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bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
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bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pul par JL Vegraverez-Fraquela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepal Vol 20 n 1 2000
Fig 6 Imagen histoloacutegica de las lesiones por calor en el animal control a los15 dias de haber sido producidas Pulpa dentaria foco de hemorragia y edemaHE x 400
Fig 8 Resultados histoloacutegicos tras la aplicacioacuten de los ultrasonidos durante60 segundos Pulpa dentaria congestioacuten vascular y caacuteculos en la pulpa HIEx 400
diente tal y como encontramos en los estudiospreliminares antes mencionados si bien nohemos intentado cuantificar este extremo
Asiacute pueacutes si no se producen elevaciones de latemperatura en el interior de la caacutemara pulpar nopueden producirse lesiones pulpares por efectoteacutermico
En todo caso hemos utilizado el animal controlal cual se le provocoacute un incremento notable detemperatura del diente hasta temperaturas maacutexi-mas resultando que en estos casos encontramoslesiones pulpares claras mucho maacutes extensas queen los demaacutes dientes y compatibles con las des-critas por los diferentes autores consultados querefieren lesiones pulpares producidas por calorcomo hemorragias diseminadas hiperemia y dila-tacioacuten capilar migracioacuten odontoblaacutestica edemaetc222830 31 33
De esta forma hemos podido constatar los efec-tos directos del calor sobre la pulpa dental y suestadiacutea evolutivo a los 15 diacuteas de haber sido pro-ducidos y en todas las piezas dentales sometidas aelevacioacuten de temperatura Fig 6
Fig 7 Resultados histoloacutegicos en los dientes sometidos a 30 segundos inin-terrumpidos de ultrasonidos Odontoblastos predentina y dentina Azul detoluidina x 400
Lesiones producidas por el uso de desper-tadores de ultrasonidos
Creemos haber puesto de manifiesto que al nohaber elevacioacuten de temperatura capaz de causarlesiones pulpares no puede haber lesiones causa-das por calor en los dientes estudiados Sinembargo el estudio histoloacutegico ha puesto demanifiesto la existencia de algunas lesiones pro-gresivamente maacutes manifiestas cuanto mas dilata-do era el tiempo de aplicacioacuten de los ultrasonidos
De esta forma y a tenor de los hallazgos histo-patoloacutegicos hemos observado una discreta dilata-cioacuten de los vasos sanguiacuteneos pulpa res en aquellosdientes sometidos a 30 segundos de ultrasonidossiempre los primeros o segundos premolares(superiores e inferiores respectivamente) que nodescartamos que en parte dicha dilatacioacuten pudie-ra ser consecuencia del proceso de la extracioacuten taly como pone de manifiesto Lasala24 al explicar losmecanismos de produccioacuten de las pulpitis comoconsecuencia de traumas con lesioacuten vascular en elcaso de luxaciones subluxaciones y avulsionesademaacutes de por la accioacuten de la extraccioacuten en laque se recrean estos fenoacutemenos Fig 7
En cuanto a los dientes a los que se aplicarontiempos de ultrasonidos de 60 segundos loshallazgos histopatoloacutegicos muestran una hipere-mia evidente de los vasos pulpares como mayorhallazgo Fig 8
No apreciamos pueacutes la reaccioacuten odontoblaacutesticay las lesiones pulpares con vacuolizacioacuten queMorrant Peyton- y Zach caracterizaroncomo lesiones tiacutepicas originadas por la accioacuten delos ultrasonidos sobre la pulpa dental
En este caso ademaacutes de tener en cuenta laaccioacuten directa de los procesos de exodoncia reali-zados maacutes complicados largos y traumaacuteticos amedida que el tamantildeo del diente asiacute lo requeriacutea
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
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bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alClInica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol20 n 1 2000
Fig 9 Resultdos histoloacute-gicos tras la aplicacioacuten delos ultrasonidos durante90 segundos Pulpa denta-ria congestioacuten vasculardiscreto infiltrado inflama-torio y hemorragias suben-doblaacutesticas HIE x400
cabe achacar una reaccioacuten tisular inflamatoria demuy bajo nivel (a tenor de los cambios histoloacuteqi-cos observados quince diacuteas despueacutes) a la accioacutende los ultrasonidos basaacutendonos en que los resul-tados obtenidos en aquellos dientes tratados con90 segundos de aplicacioacuten de ultrasonidos mani-fiestan una progresioacuten evidente en las lesionespulpares
En efecto cuando se aplican tiempos de 90segundos ademaacutes de persistir la congestioacuten vas-cular ya se encuentran pequentildeas hemorragiassubodontoblaacutesticas en el centro de la cavidad pul-par con fenoacutemenos de marginacioacuten-pavimenta-cioacuten de neutroacutefilos polimorfonucleares claramen-te indicativa de una pulpitis en fase precoz 81315Figs 9 y 10
Por lo tanto como vemos hay una- progresioacutenevidente desde la casi ausencia de lesiones cuan-do se aplican 30 segundos de ultrasonidos hastala evidencia de una pulpitis en su estadiacutea inicialSin embargo esta pulpitis como ya se ha dichono estaacute causada por elevacioacuten teacutermica y tampocopor la propia extraccioacuten del diente Afirmamosesto sin descontar una cierta interferencia origi-nada por estos procesos de extraccioacuten dentaria yacomentados debido a que la reaccioacuten inflamato-ria inespeciacutefica actuacutea durante el momento de laextraccioacuten pudiendo ser claramente responsablede efectos de congestioacuten e hiperemia pero no asiacutede lesiones maacutes avanzadas que requieran maacutestiempo (hemorragias subodontoblaacutesticas porejemplo)
Fig 10 AI igual que en lafotografia anterior obser-vamos los resultados histo-loacutegicos obtenidos trassometer el diente a 90segundos ininterrumpidosde ultrasonidos Azul deToluidina x 400
Por todo ello en nuestra opinioacuten dichas lesio-nes deben ser achacadas a la accioacuten de los ultra-sonidos en virtud de las ondas de choque soacutenicas(resonancia) puestas de manifiesto por diferentesautores desde los antildeos sesenta si bien no defini-tivamente caracterizadas de modo peculiar puestoque presentan similitudes muy claras con las lesio-nes producidas por calor estas si bien estudiadasBaacutesicamente en ambas se encuentran procesoshipereacutemicos hasta hemorragias locales o disemi-nadas vacuolizacioacuten odontoblaacutestica degenera-cioacuten nuclear odontoblaacutestica edema y hasta necro-sis1626293740
Siguiendo a los diferentes autores cuando setrata de pulpas intactas la pulpitis aguda yatrogeacute-nica producida por el uso de los ultrasonidos contiempos muy alargados produce un estado infla-matorio agudo que puede desembocar en una pul-pitis croacutenica que evolucionaraacute positiva o negativa-mente seguacuten factores como la capacidadregenerativa edad lesiones concomitantes (cariesfracturas periodontopatiacuteas etc)831331825
Finalmente y por lo que respecta a este aparta-do cabe concluir que nos parece incuestionableque la aplicacioacuten de destartaradores de ultrasoni-dos durante tiempos prolongados superiores alos 60 segundos ya sea con o sin refrigeracioacutenproduciraacute una lesioacuten pulpar inflamatoria agudaque puede evolucionar a la cronicidad a la repa-racioacuten o a la necrosis y que es debida al efectoresonante de los ultrasonidos sobre la dotacioacutencelular de la pulpa dentaria
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
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en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 nOl 2000
Queremos dejar constancia aquiacute que no hemosestudiado la evolucioacuten a largo plazo de las pulpitisagudas observables estudio que deberiacutea suceder aeste al igual que los efectos observables seguacuten lavariacioacuten en las frecuencias de vibracioacuten de losultrasonidos que indudablemente han de tenerefectos diferentes en cuanto a sus diferencias enla capacidad resonante
Relacioacuten entre el tamantildeo del diente eltiempo aplicado y las lesiones observadas
Como sabemos la estructura anatoacutemica deldiente consta de una parte mineralizada (esmaltey dentina) capaz de conferir al diente las propie-dades necesarias para cumplir su funcioacuten mecaacuteni-ca y una parte interna de naturaleza celular quepor ello precisa de un aporte vascular y nerviosopara mantener su viacutetaliacutedad 6
Sabemos tambieacuten que el grosor del esmalte novariacutea con la edad (excepcioacuten hecha del desgastenatural por abrasioacuten) mientras que el grosor de ladentina se incremena gradualmente con la edad aexpensas del espacio de la caacutemara pulpar y trasun proceso de esclerosis pulpar progresiva Deeste modo los animales joacutevenes tienen maacutes pulpadentaria y estaacute menos protegida del exterior por-que el grosor de la dentina es menor-v 20 34 35
De esta forma se puede deducir faacutecilmente quelas lesiones pulpares producidas por los ultrasoni-dos seraacuten maacutes intensas con menos tiempo deaplicacioacuten en animales joacutevenes y paulatinamentemenos intensas a medida que la edad aumenta
Con respecto a los primeros premolares maxila-res las medidas del grosor de la dentina obteni-das radiograacutefica mente oscilaron entre un miacutenimode 12 miliacutemetros y un maacuteximo de 16 miliacuteme-tros Para los segundos premolares mandibulareslas medidas oscilaron entre 12 miliacutemetros y 16miliacutemetros En todos los casos se aplicaron tiem-pos de ultrasonidos de 30 segundos sin encontrarpraacutecticamente lesiones histoloacutegicas detectables
Con respecto a los dientes a los que se aplicoacute eldestartarador de ultrasonidos durante 60 segun-dos las medidas obtenidas oscilaron para lossegundos premolares maxilares entre 14 miliacuteme-tros y 23 miliacutemetros y para los terceros premo-lares mandibulares entre 15 miliacutemetros y 22miliacutemetros Los resultados anatomopatoloacutegicos yaponen de manifiesto que duplicando el tiempo ycon unos incrementos del grosor de la dentina dealrededor del 30 se empiezan a observar lesio-nes
Finalmente en los terceros premolares maxila-
res asiacute como en los cuartos premolares mandibu-lares encontramos grosores que oscilaron entrelos 13 miliacutemetros miacutenimos y 24 miliacutemetrosmaacuteximos En el primer molar maxilar osciloacute entre19 miliacutemetros y 24 miliacutemetros
Con respecto a los cuartos premolares maxilaresel grosor osciloacute entre 14 miliacutemetros miacutenimo y23 miliacutemetros maacuteximo
Si dado que en estas piezas dentales el tiempoaplicado se multiplicoacute por tres y sin embargo elgrosor es muy similar al de los dientes sometidosa 60 segundos parece evidente que las lesioneshan de ser maacutes graves que en el caso anterior
Todo ello por supuesto refirieacutendonos a fre-cuencias oscilatorias constantes de 29 kHz
Por lo tanto podriacuteamos concluir este apartadorefirieacutendonos a la necesidad de no mantener lapunta vibratoria del aparato de ultrasonidos sobreel diente a tratar por maacutes de 30 segundos segui-dos tiempo maacutes que suficiente ya que raramen-te se precisan 60 (y mucho menos 90) segundosseguidos para desincrustar los caacutelculos dentales enun diente determinado
CONCLUSIONESConcluimos en primer lugar que la accioacuten de un
destartarador de ultrasonidos de 29 kHz de fre-cuencia de salida utilizado sin la ayuda de un refri-gerante no produce una elevacioacuten de la tempe-ratura pulpar ni siquiera aplicado durante 90segundos en dientes cuyo grosor (entendido comodistancia esmalte-caacutemara pulpar) sea superior a13 miliacutemetrosTambieacuten se concluye en este trabajo que la
accioacuten patoacutegena de los destartaradores de ultra-sonidos se realiza en virtud de la accioacuten de reso-nancia que producen en el componente celular dela pulpa dental y no como consecuencia de la ele-vacioacuten de la temperatura del diente por lo tantola refrigeracioacuten por spray de agua no disminuiraacutedicha accioacuten patoacutegena que se manifiesta enforma de pulpitis aguda inespeciacutefica
Finalmente los estudios realizados nos permitenafirmar tambieacuten que la accioacuten de un destartaradorde ultrasonidos de 29 kHz de frecuencia de salidaprovocaraacute pulpitis agudas en el plazo de quincediacuteas desde su aplicacioacuten en aquellos dientes quesean tratados durante maacutes de treinta segundosininterrumpidamente aunque el grosor parietal(esmalte-dentina) del diente sea superior a los 2miliacutemetros
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Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Estudio experimental en el perro acerca los efectos nocivos de los ultrasonidos sobre la vitalidad pulpar JL Veacuterez-Fraguela et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
AGRADECIMIENTOSEste trabajo es un extracto de la Tesis Doctoral
titulada Efectos de los destartaradores de ultra-
BIBLIOGRAFIA1 Abrams H Saghy E Temperature changes in the pulp chamber produ-
ced by ultrasonic instrumentation Gen Dent 1979 27 (5) 62-652 Agrestini F Staffolani N Ricerche sulle variazioni delia temperatura pul-
pare nel corso de tratamento paradontale con ultrasuoni Ann Stomat1963 12 927-932
3 Ahmad M Measurements of temperature generated by ultrasonic file invitro Endod Dent Traumato 1990 6 230-338
4 Armitage GC Selected lectures in periodontology University ol Caliacutefor-nia San Francisco 1974
5 Arwil T Ultraestructure ol nerves in dentinal pulp border zone ActaOdontol Scand 1973 31 273-277
6 Arwill T Studies on the ultraestructure ol dental tissues Odontol Revy1967 18 191-196
7 Baume LJ Fiacuteore-Donno G Vues nouvelles sur le diagnostic differentialdes pulpopathies Med et Hyg 1962 20 1330-1334
8 Berhenholtz G Effect ol bacterial products on inflamatory reactions inthe dental pulp Scan J Dent Res 1977 85 122-124
9 Blumenthal NM Ewen SJ A short term evaluation ol ultrasonically deli-verd medications in the treatment ol moderate periodontal disease DenJ 1986 55 12-14
10 Carson J Riacuteder T Nash D A thermographic study ol heat distributionduring ultra speed cavity preparation J Den Res 1979 14 406-409
11 Carstensen EL Biological effects of acoustic cavitacion Ultrasound MedBiol 1986 12 103-106
12 Clark SM Grupe HE Mahler DB The effect ol ultrasonic instrumenta-tion on root surlaces J Periodontol 1968 39 135-137
13 Clarke P Hill C Physical and chemical aspects ol ultrasonic disruption olcells J Acoust soc Am 1970 57 649-653
14 Emily P Clinical Periodontology Vet Focus 1990 2 (1) 23-2815 Fawcett MD Tratado de Histologia Interamericana Nueva York 199516 Gankerseer EJ Walmsley AD Preliminary investigation into the perfor-
mance ol a sonic scalers J Periodontol 1987 58 790-79517 Goodis HE Schein B Stauffer P Temperature changes measured in vivo
at the dentinoenamel junction and pulpodentinjunction during cavity pre-paration in the Maccaca lacicularis monkey J Endod 1988 14 336-342
18 Green GH Sanderson AD Ultrasonics and periodontal Therapy-a reviewol c1inicaland biologic effects J Periodontol 1965 36 232-238
19 Harvey CE Treatment planning Ior periodontal disease in dogs JAAHA1991 27 592-596
20 Harvey CE Periodontal Disease In Emily P amp Harvey CE Small Ani-mal Dentistry Mosby Philadelphia 1993
21 Hoffman DR Aumento termico nella cavita polpare durante la Iimaturadun dente J Mich Dent Ass 1960 58 221-225
sonidos sobre la vitalidad pulpar en los dientesdel perro Estudio experimental que ha obteni-do el Premio Nacional de Investigacioacuten de la RealSociedad Canina de Espantildea
22 Langeland K Histologic evaluation ol pulp reactions to operative proce-dures O Surg O Med amp O Path 1959 12 (10) 1235-1241
23 Langeland K Tissue changes incident to cavity preparation Act OdontScand 1961 19 397-403
24 Lasala A Endodoncia Masson Barcelona 199225 Laos B Kiger R Egelberg J Ultrasonic instrumentation in periodontal
therapy J Periodontol 1987 45 263-26626 Morrant GA Kramer IRU The response ol the human pulp to cavity pre-
parations using turbine handpiece Brit Dent J 1963 115 99-10527 Nyborg WL Braacutenstrom M Physical mechanisms lar biological affects ol
u1trasound In Sarles FB ed Rockville MD HEW Publication 197718-23
28 Ogilvie AL Histology ol the dental pulp In Ingle JL Endodontics Leaamp Febiger Philadelphia 1965 265-269
29 Peyton FA Marrant GA High speed and other instruments Ior cavitypreparation Int Dent J 1959 9 309-312
30 Pheulpin JL Les inflamations pulpaires leurs diagnostiques c1inique elhistopathologique Schweiz Mschr Zahnheilk 1967 77 701-707
31 Seltzer S Bender lB Ziont M Histology changes in dental pulps ol dogsand monkeys lollowing application ol presure drug and microorganismon prepared cavities O Surg O Med O Path 1961 14 327-331
32 Seltzer S Bender IB The dental pulp Biologic considerations in dentalprocedures J B Lippincott Co Philadelphia 1965
33 Seltzer S Bender lB Differential diagnosis ol pulp conditions Oral Surg1965 19 383-388
34 Stinson AW Calhoun ML Sistema digestivo En Dieter Dellman H His-tologiacutea veterinaria Acribia Zaragoza 1993
35 Tholen M Emily P Periodontal Therapy In Bojrab M amp Tholen MSmall Animal Oral Medicine and Surgery Lea amp Febiger Philadelphia1990 121-125
36 Walmsley AD Acoustic absorption within human teeth during ultrasonicdescaling JDent 1986 14 2-6
37 Walmsley AD Wiliams AR Displacement amplitude as a measure ol theacoustic output of u1trasonic scalers Dent Mater 1986 2 97-103
38 Walmsley AD Wiliams AR Investigation into patients hearing lollowingultrasonic scaling Br Dent J 1987 162 221-225
39 Walter HG Leineweber G Messungen mit Thermoelementen im Pul-penkavum extrahieter Zaacutehne bei Airotor-Praparation Schweiz MschrZahnheilk 1960 70 (5) 415-419
40 Zach C The biology ol high-speed rotary operative dental proceduresCorrelation ol tooth volume removed and pulpal pathology J Dent Res1960 70 60-65
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DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
DIAGNOacuteSTICO DE LEISHMANIOSIS CANINAMEDIANTE LA TEacuteCNICA DE REACCIOacuteNEN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)UN PROCEDIMIENTO SIMPLE PARA USOEN LA CLIacuteNICA
P Zaragoza I Martin-Burriel- R Osta-M Gascoacuten-
RESUMEN
Para detectar la presencia de Leishmania ssp endistintas muestras cliacutenicas de perros sospechosos depadecer esta enfermedad se ha utilizado la teacutecnicaPCR amplificando para ello un fragmento del genSSU rRNA repetido maacutes de 100 veces en el genomadel paraacutesito El meacutetodo se ha optimizado parautilizarlo como meacutetodo de rutina en la cliacutenicaEl procesado de las muestras es raacutepido y simple Eldiagnoacutestico se ha realizado por presenciaausenciadel paraacutesito utilizando para ello muestras de sangremeacutedula oacutesea y ganglio linfaacutetico principalmente En elcaso de existir el paraacutesito en el hueacutesped se visualizauna banda niacutetida de un tamantildeo de 603 bp y en elcaso de que el paraacutesito esteacute ausente no se detecta lapresencia de esta banda Los mejores resultados seobtuvieron cuando la muestra de partida fue meacutedula oganglio linfaacutetico El meacutetodo presenta la ventajaadicional de detectar portadores asintomaacuteticosincluidos los titulas de IFI dudosos La teacutecnica PCR sepresenta como test de diagnoacutestico rutinario siendomaacutes raacutepida eficaz y econoacutemica que los meacutetodos dediagnoacutestico claacutesicos
Palabras clave
INTRODUCCIOacuteNLas enfermedades endeacutemicas son un riesgo para
la calidad de vida y significan un riesgo de morbi-lidad debilidad y mortalidad para la poblacioacuten
La salud de la poblacioacuten es un factor muy impor-tante a tener en cuenta en un paiacutes y por supues-to regioacuten pues produce un fuerte impacto tanto
lLaboratotio de Geneacutetica Bioquiacutemica y GruposSanguiacuteneosFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza2Departamento de Patologiacutea AnimalFacultad de Veterinaria50013 Zaragoza
ABSTRACT
The technique PCR has been used in arder to detectthe presence of Leishmania ssp in different clinicexamples of dogs that might suffer from this illnessThe technique was performed by amplifying afragment of the gene SSU rRNA that is repeatedmore than a hundred times in the parasiacutetcs genomeThis method has been optimized to use it as a routinemethod in the clinic since the processing of thespecimen is quick and simpleThe diagnostic was carried out by checking thepresenceabsence of the parasite using mainly bloodsamples bone marrow and lymphatic gland In thecase that the parasite existed in the host a clear bandwith a dimension of 603 bp can be visualized On thecontrary if the parasite is absent no clear band canbe visualizedThe best results were obtained when the usedsamples were lymphatic gland or bone marrow Thismethod shows the additional benefit of detecting theasymptomatic carriers including the doubtful IFIThe PCR technique shows to be a faster moreefficient and more economic diagnosis than theclassic methods
Key words
econoacutemico como social Las enfermedades endeacute-micas disminuyen la calidad de vida de una zonasiendo por tanto muy importante poder diagnos-ticar de forma precoz estas enfermedades y loca-lizar a sus portadores
Los protozoos del genero Leishmania son ungrupo de paraacutesitos de morfologiacutea similar que cau-san enfermedades en el hombre y en el perro
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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trabajo en todos nuestros segmentos de mercado y en el nuevo aspecto de nuestra empresa dinaacutemica
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la pclimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et aCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n L 2000
siendo esta uacuteltima una zoonosis que produce lamuerte en los individuos en los que no se realizaun diagnoacutestico claro y temprano Concretamente la leishmaniosis es una enfermedad endeacutemica enAragoacuten y de amplio intereacutes en la actualidad yaque estaacute considerada por la OMS como indicado-ra de SIDA
Esta enfermedad es de difiacutecil diagnoacutestico ya quepueden existir pocos paraacutesitos incluso en indivi-duos con aparente cliacutenica y ademaacutes su localiza-cioacuten suele ser bastante erraacutetica y en forma de gra-nulomas no visibles a simple vista
Las teacutecnicas claacutesicas de diagnoacutestico de leishma-niosis canina se han basado principalmente en laobservacioacuten microscoacutepica del paraacutesito en exten-siones de aspirado de noacutedulo linfaacutetico y meacutedulaoacutesea y en meacutetodos seroloacutegicos como IFI ( Inmu-nofluorescencia Indirecta) (prueba de referenciade la OMS) El desarrollo de la teacutecnica de PCRpara la deteccioacuten de distintos paraacutesitos (Mathis yDeplazes 1995) ha proporcionado una herra-mienta raacutepida y eficaz para el diagnoacutestico de estaenfermedad Osman y cols (1997) evaluaron laeficacia de esta teacutecnica frente a meacutetodos claacutesicospara la deteccioacuten de leishmanias en personas quesufriacutean la enfermedad y en pacientes sospechososde padecerla encontrando una mayor sensibilidadde la PCR frente a la microscopiacutea
La PCR es una teacutecnica sensible y especiacutefica parael diagnoacutestico de varias infecciones consideraacuten-dose ademaacutes altamente eficaz si los cebadores uti-lizados para el diagnoacutestico acotan una zona delgenoma del paraacutesito que corresponde a secuen-cias de maacutes de una copia por ceacutelula En el caso dela leishmania estas zonas pueden estar en el kine-toplasto (pequentildeos ciacuterculos de DNA)en los que seincluyen genes muchas veces repetidos
De las secuencias pertenecientes a este grupo degenes multicopia podemos indicar seguacuten labibliografiacutea consultada una serie de secuenciascandidatas SSUrRNA y 18SrRNA Estas zonasson bien conocidas ya que han sido secuenciadaspara maacutes de 100 especies incluyendo Leishma-nia donovani Trypanosoma brucei Trypanoso-ma cruzi Crithidia [asciculata
Conocer una zona candidata que nos permitadiferenciar con claridad al paraacutesito del hospeda-dor y del vector permitiraacute proponer un nuevomeacutetodo de diagnoacutestico La comparacioacuten de lassecuencias antes indicadas entre humano y perro(hospedador) artroacutepodos (vector) y Kinetoplasto(paraacutesito) las hacen idoacuteneas para su posible utili-zacioacuten (Eys y cols 1995)
El uso de la PCR como meacutetodo de diagnoacutesticopermite descartar en zonas endeacutemicas individuosque auacuten con titulacioacuten de anticuerpos aparenteno sean ya portadores del agente Esto loacutegica-mente solo es posible con el diagnoacutestico directodel agente causal y en la actualidad el meacutetodo maacutesraacutepido econoacutemico sensible y eficaz es la PCRPor todas estas razones el presente artiacuteculo pre-tende demostrar la eficacia de la geneacutetica mole-cular como herramienta de diagnoacutestico y asiacutepoder reemplazar otras teacutecnicas hoy utilizadas ydesde nuestro punto de vista menos fiables
MATERIAL Y MEacuteTODOSObtencioacuten de muestras y grupos de animalesA partir de animales afectados de leishmaniosis
procedentes principalmente de perros sospecho-sos de ser portadores de leishmania que acuden ala Consulta de Medicina Interna de Pequentildeos Ani-males (SMIPA) de la Facultad de Veterinaria deZaragoza se han obtenido las siguientes mues-tras
- Aspirado de ganglio linfaacutetico (25 a 100 mIdisueltos en 100 ]JITE pH8)
- Aspirado de meacutedula oacutesea (25 a 100 ]JIdisuel-tos en 250 mI TE pH8)
- Sangre basta con 500 ]JIEntre las muestras recibidas en nuestro servicio
se eligieron animales afectados de leishmaniosiscorrespondientes a los siguientes grupos
1 Animales asintomaacuteticos con tiacutetuto de IFIdudoso (160 oacute menor) (20 perros)
2 Una camada de cinco cachorros hijos de unaperra portadora de leishmania todos positivosseroloacutegicamente (IFIpositiva a diluciones mayoresde 1160)
3 Animales tratados de leishmania en este casose realizaron controles a los 3 meses y al antildeo pos-tratamiento (10 casos)
4 Animales con cuadros cliacutenicos inespecificosinclusive no compatibles con el cuadro claacutesico deleishmaniosis donde se descarta leishmania den-tro de un protocolo maacutes amplio Concretamenteen este grupo se incluyen dos casos con soacutelo siacuten-tomas de colitis croacutenica sin responder evidente-mente a ninguacuten tratamiento y sin encontrar otracausa despueacutes de realizar todo el protocolo diag-noacutestico y con tiacutetulos IFI dudosos para Leishmania(positivo a dilucioacuten 160)
Otro grupo lo constituiriacutea el de los animales cla-ramente positivos por IFIy por visualizacioacuten direc-
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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su perfil desde la integracioacuten con Hoechst Roussel Vet Ahora somos una
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trabajo en todos nuestros segmentos de mercado y en el nuevo aspecto de nuestra empresa dinaacutemica
abierta y comprometida a la vez Este nuevo logotipo refleja claramente los valores de Intervet como uno de los
mejores aliados comerciales en el sector de la sanidad animal
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4-AKZONOBEl Laboratorios lnte rvet SAbull Poliacutegono El Montalvo SN Apartado 3006 bull 37080 Salamanca
Teleacutefono 923 1903 4S bull Fax 923 1903 27 bull E-mail informacionintervetcom bull wwwintervetcom
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Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
ta de leishmania en aspirados de meacutedula oacutesea enestos casos el cliacutenico utiliza menos la PCR ya quelas otras teacutecnicas son maacutes asequibles para su cliacute-nica Evidentemente en estos casos los quehemos recibido en nuestro servicio para contras-tar las dos teacutecnicas siempre hubo correlacioacuten dela IFI visualizacioacuten directa y resultados de la PCREn los grupos descritos maacutes arriba las muestrasfueron remitidas por que no se observaron formasde leishmanias en los aspirados de meacutedula oacutesea
Obtencioacuten de DNA a partir de sangre exuda-do de ganglio linfaacutetico y meacutedula oacutesea
El ONA se extrae mediante una teacutecnica raacutepida (4horas) basada en la digestioacuten con proteinasa K yel detergente Tritoacuten X-lOO El proceso es elsiguiente
1ordm Disolucioacuten de 200 ul de muestra en un mIde NE (CINa 0585 gr EDTA 3725 gr hasta 11de H20 pH 75)
2ordm Agitar y centrifugar a 13000 rpm duranteun minuto y retirar el sobrenadante (repetir tresveces) El precipitado obtenido se agita eneacutergica-mente
3ordm Antildeadir al precipitado 400 mi de una solu-cioacuten que contiene Proteinasa K (2x10-3 grml)
4ordm Mantener a 62 C durante 1h 30 m5ordm Antildeadir un volumen de Fenal-Cloroformo
isoamiacutelico Agitar y centrifugar a 13000 rpmdurante 10 m
6ordm Recoger la fase acuosa y antildeadir un 10 deAcNA 3M y 2 voluacutemenes de etanol absolutoMantener a -70 C durante 5 m
7ordm Centrifugar a 13000 rpm durante 5 m ytras retirar el sobrenadante lavar con etanol al70 centrifugando un minuto
8ordm Secar la muestra (normalmente con SpeedVac) y restaurar en distintas cantidades de TE(1208 gr de Tris ClH 0372 gr EDTA en 11deH20 Ph 8)
9ordm Conservar congelado a -30 ocBuacutesqueda de secuencias de los distintos genes
candidatos en las bases de datosPara la buacutesqueda de las posibles secuencias de
ONA que permitan su utilizacioacuten para el diag-noacutestico de Leishmaniosis canina se ha comenza-do el estudio de aquellas que presentan un mayorgrado de homologiacutea entre las distintas especies deLeishmania
El estudio se realizoacute en las bases de datos EMBy Gen Bank cuya direccioacuten en internet eshttpwwwncbinlmnihgovindexhtml
Disentildeo de los primersA partir de las secuencias obtenidas en las bases
de datos y la informacioacuten obtenida en la biblio-grafiacutea (Mathis y Deplazes 1995) se eligioacute laamplificacioacuten de una zona del gen que codifica lasubunidad pequentildea del RNAr (SSUrRN) Los pri-mers elegidos fueron
Pr22l GGT TCC TTT CCT GAT TIA CGPr332 GGC CGG TAA AGG CCG AAT AG
Amplificacioacuten del DNA con los primers dise-ntildeados
La reaccioacuten de amplificacioacuten fue llevada a cabomediante un termociclador 9600 Perkin Elmer Elvolumen de la muestra empleado fue de 15 mIComo paraacutemetros maacutes importantes se buscaraacutenlas condiciones de tiempo y temperatura que nospermita la obtencioacuten de bandas niacutetidas e intensasSe utilizaron 35 ciclos para realizar la amplifica-cioacuten
94 degC__5
94 degC__l60 degC__l72 degC__l
35 ciclos
72 degC__lO4 degC_ hasta recoger la muestra
Anaacutelisis de los fragmentos amplificadosA partir de un volumen de 15 mi de producto
amplificado se realizoacute electroforesis horizontal engel de agarosa al 2 y tincioacuten con bromuro de eti-dio para la visualizacioacuten posterior con UVA de losfragmentos obtenidos
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNPara detectar la presencia de Leishmania spp
en distintas muestras cliacutenicas de perros sospecho-sos de padecer esta enfermedad se ha utilizado lateacutecnica PCR amplificando para ello un fragmen-to del gen SSU rRNA repetido maacutes de 100 vecesen el genoma del paraacutesito (Uliana y cols 1991Van Eys y cols 1992) Concretamente el frag-mento obtenido en el caso de detectar la presen-cia del paraacutesito en el hueacutesped fueacute de un tamantildeode 603 bp (veacutease Fig 1)
Es necesario indicar que paralelamente y parasaber si el fragmento amplificado de 603bp se
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
ili46
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
sensibilidad de la teacutecnica se propone como meacuteto-do de diagnoacutestico de leishmaniosis canina elmeacutetodo PCR a partir de exudado de ganglio lin-faacutetico o biopsia de meacutedula oacutesea sin descartar elposible uso de otras muestras como piel hastaahora no analizadas Las muestras de sangre peri-feacuterica no son adecuadas para este tipo de testHemos presentado diferentes supuestos en losque la inclusioacuten de la PCR en el diagnoacutestico deleishmaniasis permite al cliacutenico ganar tiempo parainstaurar un tratamiento maacutes precoz hacer elseguimiento del animal antes durante y despueacutesdel mismo y evitar en otros casos errores diag-noacutesticos y asiacute situaciones embarazosas
7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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con nosotros para mejorar la salud animal Llevamos maacutes de 50 antildeos dedicados
a ello pero los nuevos mercados y la expansioacuten mundial exigen cada vez
maacutes investigacioacuten en vacunas de calidad antiparasitarios antibioacuteticos
productos endocrinos y otras especialidades todo ello siempre
respaldado por un servicio oacuteptimo Intervet ha cambiado radicalmente
su perfil desde la integracioacuten con Hoechst Roussel Vet Ahora somos una
de las primeras empresas mundiales en el campo de la sanidad animal Estamos
convencidos de que esta nueva imagen se reflejaraacute en todos los aacutembitos de nuestro
trabajo en todos nuestros segmentos de mercado y en el nuevo aspecto de nuestra empresa dinaacutemica
abierta y comprometida a la vez Este nuevo logotipo refleja claramente los valores de Intervet como uno de los
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4-AKZONOBEl Laboratorios lnte rvet SAbull Poliacutegono El Montalvo SN Apartado 3006 bull 37080 Salamanca
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LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza er alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
4- 603 bp
123 4 5 6 7Fig 1 Dianoacutestico por peR de Leishmaniosis canina Deteccioacuten de pro-ductos amplificados despueacutes de una electroforesis horizontal en gel de agarosay tincioacuten con Bromuro de etidio El fragmento de 603 bp corresponde al ONAamplificado de Leishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2Control interno positivo (animal enfermo) Liacutenea 3 Muestra 1 (positiva a Leish-mania) Liacutenea 4 Muestra 2 (negativa a Leishmania) Liacutenea 5 Muestra 3 (posi-tiva a Leishmania) Liacutenea 6 Control interno negativo (animal sano) Liacutenea 7Muestra sin ONA
corresponde realmente con fragmentos de Leish-mania se realizoacute digestioacuten del mismo con distin-tas enzimas de restriccioacuten analizando los distintosmodelos obtenidos y comparaacutendolos con labibliografiacutea existente Concretamente cuando sedigiere con la enzima de restriccioacuten Hae3 el frag-mento de 603bp se digiere en 6 fragmentos detallas 281bp 24bp 211bp 4bp 71bp y 13bpLogicamente en un gel de agarosa solamente losfragmentos maacutes grandes se pueden visualizar(veacutease Fig 2) Tras comprobar que la banda obte-nida corresponde especiacuteficamente a Leishmania ypara evitar falsos positivos en cada diagnoacutestico seincluyoacute el anaacutelisis de un animal sano y un controlnegativo (muestra sin ONA) asiacute como un controlpositivo de amplificacioacuten (animal enfermo) Entodas la muestras negativas (ausencia del paraacutesito)se realizoacute la comprobacioacuten de existencia de ONAcomo meacutetodo de contro
La menor sensibilidad de la teacutecnica se observoacutecuando la muestra es sangre perifeacuterica tal vez porel limitado tiempo de permanencia del paraacutesito ensangre Ello nos indica que esta muestra no esadecuada para el diagnoacutestico esta observacioacuten esvaacutelida para todos los grupos
En todos los casos en los que se utilizoacute comomaterial bioloacutegico meacutedula oacutesea y siempre que elanaacutelisis microscoacutepico fue positivo el diagnoacutesticopor PCR tambieacuten lo fue Igualmente en maacutes deun 95 de los casos de animales sospechosos depadecer la enfermedad asiacute coacutemo en animales tra-tados previamente frente a leishmaniosis el diag-noacutestico por PCR determinoacute la presencia del paraacute-sito a pesar de que el bajo grado de parasitosishabiacutea impedido la visualizacioacuten de Leishmanias
~71bp
1 2 3 4 5
Fig 2 Prueba de que el fragmento de 603 bp coresponte con el genSSU rRNA de Leishmania Patrones de restriccioacuten obtenidos con la enzimaHae 3 tras la amplificacioacuten de fragmento de 603 bp del gen SSU rRNA deLeishmania Liacutenea 1 marcador de talla BRL 1Kb Liacutenea 2 fragmento ampli-ficado sin digerir (talla 603 bp) Liacutenea 34 y 5 Amplificacioacuten digerida con Hae(fragmentos de 281 bp 211 bp y 71 bp)
en el caso de frotis medular Esta circunstancia esfrecuente encontrarla en el grupo C animales tra-tados en los que tras el tratamiento si el cliacutenicose deja llevar por los resultados de la IFIy la visua-lizacioacuten directa de leishmania en muestras demeacutedula oacutesea puede dar al animal como curadoal encontrar tiacutetulos bajos y no observar Leishma-nias en la meacutedula varios de los casos analizadosde este grupo presentaron esta circunstancia y encambio dieron positivos en el PCR de muestrasmedulares No obstante hemos encontrado ani-males tratados que llegan a ser PCR negativosunos meses despueacutes del tratamiento iquestCurados oacuteportadores asintomaacuteticos iquestDepende del protoco-lo utilizadoiquestEstaacute en relacioacuten con la respuestainmunitaria de cada animal y en funcioacuten del esta-diacutea evolutivo de la enfermedad en el momento deiniciar el tratamiento iquestPuede ocurrir que en zonasendeacutemicas el animal se reinfeste Estas son pre-guntas cuya respuesta no es faacutecil la opinioacuten delos cliacutenicos estaacute dividida y que requiere el segui-miento a largo plazo de un mayor nuacutemero decasos De los 10 casos estudiados 7 dieron nega-tivos por PCR a los 3 meses y en 4 de estos 7casos la PCR volvioacute a ser positiva al antildeo de habersuprimido el tratamiento
En muestras con tiacutetulos seroloacutegicos de 160(grupo A) se obtuvieron diagnoacutesticos positivos porPCR (8 animales) y tambieacuten negativos (12 anima-les) Los casos que incluimos en este grupo fueronaquellos casos en los que la ausencia de siacutentomaspodiacutea inclinar al cliacutenico hacia la negatividad oacutebien al propietario se le habiacutea ofrecido el iniciarun protocolo de tratamiento en base a una posi-ble positividad En ambos supuestos se decidioacute en
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Diagnoacutestico de leishmaniosis canina mediante la teacutecnica de reaccioacuten en cadena de la polimerasa (peR) Un procedimiento simple para uso en la cliacutenica P Zaragoza et alCliacutenica Veterinaria de Pequentildeos Animales (Avepa) Vol 20 n l 2000
todos los casos contrastar con la PCR para ase-gurar el diagnoacutestico Otra alternativa seriacutea esperarun periodo de tiempo y volver a repetir la serolo-giacutea no sugerimos esta opcioacuten pues en nuestrasapreciaciones personales hemos visto como enalgunos casos en el periodo de espera cuadrosviscerales sin siacutentomas deacutermicos han avanzado losuficiente como para sugerir la eutanasia del ani-mal (por desarrollo principalmente de insuficien-cias renales graves) Tanto en un supuesto comoen otro la PCR resuelve las dudas en cuestioacuten dehoras evitando errores lamentables
En el grupo S los cachorros teniacutean tiacutetulo scro-loacutegico alto pero fueron descartados de padecer laenfermedad tras el diagnoacutestico por PCR que fuenegativo en todos ellos Este resultado es debidoa la presencia de anticuerpos provenientes de lamadre en el cachorro sin existir el agente etioloacute-gico en los mismos La combinacioacuten de IFI - PCRen este caso diferencia si el animal es portador delagente etioloacutegico y tiene anticuerpos oacute como enlos cachorros estudiados hay anticuerpos pero noagente etioloacutegico
Se esta realizando en este momento el estudiode la especificidad y sensibilidad de la teacutecnica PCRcomparada con el resto de meacutetodos de diagnoacutesti-co utilizados de forma habitual Para ello se pro-
BIBLIOGRAFIA1 Ashlord DA Bozza M Freire M Miranda JC Sherlock I Eulalia C Lopes
U Fremamdes O Degrave W Barker RH Badaro R David JR Compa-rison ol the polymerase chain reaction and serology lar the detection olcanine visceralleishmaniasis Am J] Trop Med Hyg 1995 53 251-255
2 Blackwell JM Leishmaniasis epidemiology all down to the DNA Parasi-tology 1992 104 supp S19-34
3 Brujin MHI Labrada LA Smyth AJ Santrich C Barker DC A compa-rative study ol diagnosis by the polymerase chain reaction and by currentc1inical methods using biopsias iacuterom Colombian patients with suspectedleishmaniasis Tropi Med Parasitol 1993 44 201-207
4 Degrade W Fernandes O Campbell D Bozza M Lopes U Use of mole-cular probes and PCR Ior detection and typing ol Leishmania - a minireview Men lnst Oswaldo Cruz 1994 89 463-469
5 Laskay T Miko TL Negesse Y Solbach W Rollingholf MY Frommel DDetection of cutaneous Leishmania inlection in paralfin-embedded skinbiopsies using the polymerase chain reaction Trons R Soc Trop MedHyg 1995 89 273-275
6 Mathis A Deplazes P PCR and in vitro cultivation for detection ol Leishmiddotmania spp in diagnostic samples Irom humans and dogs Joumal o cli-nicol microbiology 1995 3 1145-1149
cesaraacuten los sueros por Inmunofluorescencia Indi-recta (IFI)y Aglutinacioacuten Directa (AD) y una vezanalizadas las biopsias de noacutedulo linfaacutetico y meacutedu-la oacutesea ademaacutes de la sangre se analizaraacute estadiacutes-ticamente la concordancia de los resultados decada una de estas pruebas con los resultados de laPCR
CONCLUSIOacuteN FINALPor la simplicidad economiacutea tiempo rapidez
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7 Osman FO Oskan LM Zijlstra ED Kroon MM Schoones GJM Tahlr EKhalil AG Hassan AM Kager PA Evaluation of PCR for diagnosis of vis-ceral Leishmaniasiacutes Joumal o clinical microbiology 1997 35 2454-2457
8 Ouellette M Papadopoulou B Olivier M Nouveaux aspects moleacuteculaires etceUulairesdu parasite Leishmania MeacutedecinltiScience 1997 13 934-941
9 Piarroux R Gambarelli F Dumon H Fontes M Dunan S Mary CH TogaB Quilici M Comparison ol PCR with direct examination lo bone marrow aspiacuteratiacuteon myeloculture and serology lar diagnosis ol visceralleishmaniasi in immunocompromised patients Joumal o clinical micro-biology 1994 32 746-749
10 Pague GP Lee NS Koul S Dwyer DM Nakhasi HL Identilication ol dil-ferentially expresed Leishmania donovani genes using arbitrarily primedpolymerase chain reactions J Gene 1995 165 31-38
11 Uliana SR Alfonso MHT Camaro EP F1oete-Winte LM Leishmaniagenus identification base on a specific sequence ol the 18S ribosomalRNA sequence Exp Parasito 1991 72 157-163
12 Van Eys GJJ Schoone GJ Kroom NCM Ebeling SB Sequence analysisof small subunit ribosomal RNA genes and its use for detection and iden- tification lo Leishmania parasites Molecular and Biochemical Parasimiddottology 1992 51 133-142
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de las primeras empresas mundiales en el campo de la sanidad animal Estamos
convencidos de que esta nueva imagen se reflejaraacute en todos los aacutembitos de nuestro
trabajo en todos nuestros segmentos de mercado y en el nuevo aspecto de nuestra empresa dinaacutemica
abierta y comprometida a la vez Este nuevo logotipo refleja claramente los valores de Intervet como uno de los
mejores aliados comerciales en el sector de la sanidad animal
----~Ve[
4-AKZONOBEl Laboratorios lnte rvet SAbull Poliacutegono El Montalvo SN Apartado 3006 bull 37080 Salamanca
Teleacutefono 923 1903 4S bull Fax 923 1903 27 bull E-mail informacionintervetcom bull wwwintervetcom
Purina redefine lanutricioacuten en dermatologiacutea
CNMDermatology Management System
Evolucioacuten
LA-FORMULAdieta con limitacioacuten de antiacutegenosMaacutes de 1000 mg de aacutecidos grasos omega-3
en cada cuarto de kilo de LA-FORMULA
bull LA-FORMULAcontiene fuente de proteiacutena novel que no encontramosnormalmente en las dietas caninas Formulado con harina de salmoacutentrucha y harina de colza
bull Niveles altos de aacutecidos grasos omega-3 pueden ser beneficiosos en elmanejo de dermatitis aleacutergicas y otras inflamaciones de la piel
bull Dieta oacuteptima para el tratamiento de perros con alergias alimentarias alas proteiacutenas maacutes comunes
HA-FORMULAuna dieta hipoalergeacutenicaLa Proteiacutena modificada hace deRA-FORMULA
una verdadera dieta bipoalergeacutenica
bull HA-FORMULA representa un acercamiento revolucionario altratamiento de alergias alimentarias
bull Los alergenos alimentarios maacutes comunes son las proteiacutenas con unpeso molecular entre 18000 y 36000 daltons
bull La fuente proteica en HA-FORMULAes mucho maacutes pequentildea que lamedia del peso molecular por debajo los 12200 daltons
bull Demasiado pequentildea para inducir una respuesta aleacutergica
bull Su uso como herramienta de diagnoacutestico para confirmar sospechasde alergias alimentarias y dieta de tratamiento para perros aleacutergicos
~ P 11 D T 11 AIiexcl--- ---bull ~Redefining the Possibliquest
Revolucioacuten
Nos complace presentarnuest D nuevo logotipo
-lntervet
iquestA quieacuten le importa
A nosotros y tambieacuten a usted que constantemente se preocupa y trabaja
con nosotros para mejorar la salud animal Llevamos maacutes de 50 antildeos dedicados
a ello pero los nuevos mercados y la expansioacuten mundial exigen cada vez
maacutes investigacioacuten en vacunas de calidad antiparasitarios antibioacuteticos
productos endocrinos y otras especialidades todo ello siempre
respaldado por un servicio oacuteptimo Intervet ha cambiado radicalmente
su perfil desde la integracioacuten con Hoechst Roussel Vet Ahora somos una
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