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GENÉTICA FORENSE VSGENÉTICA MÉDICA

MÓDULO 4: APLICACIONES DE LA GENÉTICA Y LA GENÓMICA ENMEDICINA

TÍTULO DE EXPERTO UNIVERSITARIO EN MEDICINA GENÉTICA Y GENÓMICA 2019

Material didáctico: Módulo 4 – Clase 5

Material didáctico creado por Mar Benito, MSc https://www.linkedin.com/in/marbeni to/

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GENÉTICA FORENSE VS GENÉTICA MÉDICA


MÓDULO 4: APLICACIONES DE LA GENÉTICA Y LA GENÓMICA EN MEDICINA

4.5- GENÉTICA FORENSE VS. GENÉTICA MÉDICA

Dra. Mercedes Aler Gay

1. CONTEXTO DISICPLINAR...............................................................................................1

2. TÉCNICAS DE ANÁLISIS..................................................................................................1

3. FUENTES DE ADN..........................................................................................................2

4. IDENTIFICACIÓN GENÉTICA..........................................................................................3

4.1 Tipos de ADN..................................................................................................................... 3

4.2 Tipos de polimorfismos..................................................................................................... 4

5. APLICACIONES..............................................................................................................4

6. DOCUMENTACIÓN......................................................................................................10

7. COMUNICACIÓN.........................................................................................................11

8. FUTURO......................................................................................................................12

ANEXO I. Preguntas.........................................................................................................15

Título de Experto Universitario en Medicina Genética y Genómica 2019 Página 0



1. CONTEXTO DISICPLINAR

El genetista forense se enfrenta a un indicio, no a un paciente. El indicio es aquello que nos llega a pericia. También nos podemos enfrentar a individuos que el juez pide que sean identificados, bien porque han cometido un delito (derecho penal) o porque se necesita saber si son descendientes de una pareja concreta (derecho civil). La genética forense busca los cambios que hacen que un individuo sea diferente de otro y que nos permiten asignarle una rastro que ha dejado detrás de sí.

Ciencias Forenses: Aplicación de las prácticas científicas en el proceso legal para poder aportar pruebas concluyentes a los tribunales mediante el estudio de los indicios.

Genética Forense: Aplicación de la biotecnología en el proceso legal para poder aportar elementos probatorios a los tribunales mediante el análisis genético del indicio.

Genética Médica: Aplicación de la biotecnología en el proceso de salud para poder aportar elementos diagnósticos a los pacientes mediante el análisis genético del genoma.

La genética forense se nutre del indicio, del vestigio o de la huella, que es el rastro que se ha dejado al cometer un delito. Se parte del principio de intercambio de Locard, que fue un criminalista. Cuando hay un intercambio entre dos personas o dos superficies, según la violencia de ese contacto, se va a producir una transferencia de algo. Por ejemplo, si tocamos una mesa, de forma no violenta, dejamos trazas, como nuestra huella o nuestro ADN.

En la genética médica, lo que queremos ver es si un individuo es portador, enfermo o sano. En la genética forense se establece una identificación del vestigio o del resto del individuo mediante un perfil genético. Lo que pretendemos es ayudar al juez a establecer una sentencia, lo que está en juego es la libertad de un individuo o la paternidad. En genética médica se pone en juego la salud de un individuo. Jeffreys acuñó el término de huella genética, en el que se dice que cada individuo es único y exclusivo. En genética forense se utiliza esta huella genética para establecer un contexto de coherencia de la ocurrencia de un suceso. Se tiene que trabajar con datos de herencia mendeliana simple.

DIAPOSITIVAS 4 Y 5

2. TÉCNICAS DE ANÁLISIS

La extracción y cuantificación del ADN se hace de las piezas de convicción, en las que haymuy poco y seguramente estará degradado. Se tiene que preservar parte de la pieza parauna contrapericia o preservar parte del ADN para poder hacer una réplica del producto




amplificado. En genética forense se suelen analizar intrones, mientras que en genéticamédica lo que interesan son exones o todo el genoma.

Se llevan a cabo PCRs multiplex, muchos marcadores genéticos en una sola reacción,porque el ADN es escaso y suele estar degradado. Hay kits para analizar de 17 a 26marcadores. Después de la PCR se hace una electroforesis capilar. También se puedenanalizar fragmentos (STRs, estudios de microsatélites), y utilizar la secuenciación, se estáempezando a aplicar el NGS en paralelo y el GWAS. En 5 o 10 años todo esto va a quedarobsoleto, porque ya se está validando el análisis de secuencias de ADN mitocondrial ynuclear. Aunque todavía no hay bases de datos activas. Con estos análisis vamos a saber elfragmento de un microsatélite y su secuencia interna, vamos a tener más información.

Cuando se empezó con la genética forense se marcó la premisa de no obtener ningún tipode información médica del individuo que se sometía a examen. No interesa si el individuova a tener un cáncer o si es diabético, etc. Solo queremos saber si el individuo estáimplicado en un hecho, por eso se utilizan regiones no codificantes.

DIAPOSITIVA 7

3. FUENTES DE ADN

Vestigio o pieza de convicción: indicio por donde se infiere la verdad de algo o se sigue la averiguación de ello. Sería el objeto que nos llega, en el que está depositado el indicio (en la diapositiva 9 es la camiseta). Muchas veces es difícil encontrar el indicio en la pieza de convicción.

Indicio: fenómeno que permite conocer o inferir la existencia de otro no percibido. El indicio en la diapositiva 9 es la mancha.

Prueba: justificación de la verdad de los hechos controvertidos en un juicio, hecha por los medios que autoriza y reconoce por eficaces la ley. En este caso la prueba científica sería lagenética forense.

En la genética forense, el diagnóstico que hacemos va a establecer la libertad o la carencia de esta en un individuo. En la genética médica vamos a establecer la causa de la presencia de un mal estar o la ausencia de un bienestar, veremos si hay un fondo genético detrás. El concepto de salud y el de libertad son completamente distintos, pero los dos afectan al individuo en su parte más íntima.

En las diapositivas 9, 10 y 11 se muestran fuentes de ADN en genética forense. No son muestras perfectas como en genética médica, son vestigios.

En el caso de agresiones sexuales normalmente se encuentra ADN de la víctima y del agresor mezclados, en genética médica es muy raro que nos encontremos dos ADNs diferentes juntos.




Cuando nos llega una pieza tenemos que convencer de que tiene un valor probatorio, piezas de convicción. Hay que trabajarlas completamente en busca de algo. El preservativo de la diapositiva 8 proviene de un caso de agresión sexual, en este caso hay que recoger muestras de dentro y de fuera. Las muestras de fuera tienen que ser de la víctima, para quetenga un valor probatorio. Los forenses trabajan con las piezas de convicción que se encuentran sobre la víctima o sobre el agresor, lo demás corresponde a la policía científica o a la Guardia Civil. Estas dos entidades del ministerio del Interior y de Justicia trabajan sobre un mismo escenario en distintas zonas. La policía puede cometer un error, el sesgo de querer encontrar al culpable. Si se trae como muestra un preservativo, se tiene que ubicar con una foto, se tiene que decir al forense si la víctima estaba en alguna fase de su periodo menstrual o si había heridas. El forense solo ve a las personas cuando llega al tribunal, el resto del tiempo está con las piezas.

En la diapositiva 10 se ven otras muestras con las que se trabaja en genética forense. En lasprendas de microfibra es difícil ver las manchas. Para ver una mancha en un fondo negro se utiliza una luz negra, las partículas de microfibra emiten fluorescencia y se marca todo. Hay que saber seleccionar.

En la diapositiva 11 se muestran las pruebas para una identificación. En genética forense también se puede identificar de qué paciente es una muestra si ha habido un fallo en el hospital.

Una persona tiene derecho a oponerse a que se le saque sangre, pero si el daño que ha cometido es mayor que la pérdida de su intimidad, el juez lo ordena y tiene que obedecer. En genética forense se puede también trabajar con laminillas y piezas biópsicas.

DIAPOSITIVAS 9-11

4. IDENTIFICACIÓN GENÉTICA

Se trabaja con el ADN nuclear y el mitocondrial, y se buscan polimorfismos.

4.1 Tipos de ADN

Los dos tipos de ADN tienen aplicaciones muy específicas y muy distintas.

En el ADN nuclear, a nivel autosómico se analizan los cromosomas autosómicos y a nivelgonósmico los sexuales. Se analizan microsatéliltes, SNPs e indels. En microsatélites eindels se trabaja con la misma sistemática y los mismos aparatos.

Se trabaja siempre con microsatélites de 4 bases, que son los más estables, los másconocidos, sabemos la tasa de mutación, los utilizan todos los laboratorios. Tambiénpermiten trabajar con poco ADN aunque esté degradado. De esta manera se puedenestablecer relaciones de parentesco o identificaciones entre una muestra y un individuo. Silas relaciones de parentesco con muy lejanas los microsatélites ya no dan información. Sitrabajamos con pocos marcadores genéticos pueden que coincidan en individuos que no




son familiares. En estos casos los indels dan mucha más información, nos permitenanalizar fragmentos de ADN muy cortos, en el caso de que esté degradado.

En el ADN mitocondrial se utilizan las secuencias de las regiones hipervariables 1, 2 y 3,para identificar individuos. También se pueden estudiar SNPs o el genoma mitocondrialcompleto. El ADN nuclear se degrada fácilmente porque solo hay dos copias, delmitocondrial hay muchas más copias.

El ADN mitocondrial permite identificar la línea materna, pero no permite establecer larelación de identidad completa entre el individuo y el indicio.Por ejemplo, si tenemos un cabello solo lo podemos estudiar morfológicamente, a no serque tengamos el bulbo, del que se puede extraer ADN nuclear. El ADN mitocondrial nospuede ayudar en los casos difíciles, pero si cogemos un cabello solo podemos decir que esdel individuo o de alguien de su familia por vía materna.

4.2 Tipos de polimorfismos

Se estudian polimorfismos de longitud y de secuencia. Normalmente se utilizan kitscomerciales, que están estandarizados y validados, además permiten reproducirexperimentos en diferentes laboratorios y compartir los resultados entre ellos. Se hanelegido los marcadores más variables en la población y con mayor número de alelos, y sehan puesto en una reacción multiplex. Los resultados van a unas bases de datos nacionales.

En la diapositiva 14 se muestran algunos polimorfismos que se pueden estudiar:

- TPOX: es muy poco variable porque solo hay 5 alelos, y además hay 2 que son muyfrecuentes en la población. Pero es un microsatélite muy estandarizado y todavía hay kitsque lo incorporan. En poblaciones asiáticas y amerindias uno de los marcadores aparececon un triplete, lo que era fuente de errores.- SE33: se encuentra en el cromosoma 6. Es uno de los más polimórficos que existe. Seincluyó hace 3 años en los kits comerciales. Tiene 23 alelos, y la frecuencia del alelomayoritario es 1.2% de la población. Tiene mucha potencia.-DS81179: está en el cromosoma 8.Con 15 marcadores en una reacción, obtenemos información de 15 situaciones genéticasdistintas, pero tienen que ser bastante polimórficos, porque si no dan poca información.Ahora se están utilizando 17-21 marcadores. Si los marcadores están en el mismocromosoma se procura que estén lejos para que no haya errores

DIAPOSITIVAS 12-14

5. APLICACIONES

1) Derecho

• IBP Investigación biológica de la paternidad

Un varón puede impugnar la paternidad y decir que una persona no es su hijo/a, o hacer una reclamación de paternidad y decir que alguien es su hijo/a. Para ello se utilizan




marcadores únicos, fijos e irrepetibles, con una tasa de mutación conocida, y normalmente dominantes. Un individuo tiene un perfil concreto que ha sido heredado al 50% de cada progenitor. La ley marca que el médico que atiende en un parto tiene que firmar un certificado de nacimiento para que el recién nacido pueda ser inscrito en el registro civil. Cada niño sale asignado a su madre, para evitar el robo de niños.

Si se tiene que buscar al padre, y hay una coincidencia de heterocigosis entre la madre y el niño, la prueba pierde potencia. Cuando hay una situación de homocigosis o heterocigosis incompatible entre padre e hijo, tenemos que tener en cuenta que se puede haber dado una mutación. El perito forense tiene que calcular la probabilidad de que ese señor sea el padre frente a que lo sea otro cualquiera de la población, teniendo hasta 4 situaciones de discrepancia, porque la naturaleza puede producir esa situación.

Si por ejemplo, tenemos un trio madre-hijo-padre. Sabemos que el niño es hijo de la madreporque tenemos un certificado y porque no son incompatibles genéticamente. Entre el padre y el niño encontramos 3 situaciones de incompatibilidad, en que no comparten los alelos que tendrían que compartir. Calculamos la probabilidad y nos dará un valor bajo, pero no lo podemos excluir como padre. Puede ser que se haya dado un proceso mutacional o que el padre esté muy cercano al supuesto.

Si nos sale incompatibilidad entre el padre y el hijo se tiene que repetir la prueba con un técnico distinto y comparar los resultados.

• Delitos contra la libertad sexual

• Identificación de restos

Esto va asociado a desaparecidos en catástrofes o guerras civiles. En el accidente de German Wings, el problema fue el fraccionamiento de los cuerpos de las víctimas. Es importante en estos casos saber el número de fallecidos que hay, para poder asignar lo quees de cada cuerpo. Esto se hace mediante perfiles genéticos.

2) Médico

• Trasplantes: Quimeras

Sabremos que el trasplante evoluciona favorablemente si hay un cambio del ADN del receptor al del donante. Se pueden utilizar los microsatélites de forense u otros kits parecidos. También se pueden estudiar inserciones/deleciones mediante análisis de fragmentos. El perfil genético que se encuentra los primeros días después del trasplante esel mismo que si hubiera una mezcla de fluidos.

• Diagnóstico genético,…

3) Social

• Desaparecidos (catástrofes, guerras civiles)

Por ejemplo, en un accidente de avión tenemos una lista de individuos y podemos saber el parentesco que hay entre ellos. Nos pueden ayudar las imágenes, la ropa, las señales físicasde los individuos, los ontogramas, etc. Es un escenario cerrado. Es diferente cuando nos




encontramos con un escenario abierto como un barco encallado. En un barco puede haber polizones no declarados en la lista oficial. En el atentado de las Torres Gemelas también se dio un escenario abierto. Había muchas víctimas y no se sabía la gente que estaba dentro.

• Especies vegetales/animales protegidas

Por ejemplo si se encuentran restos de que se ha cazado un animal, y se prueba que es una especie protegida, puede causar una condena de cárcel o una multa. Se dio el caso de un cazador al que se le encontró con una cabeza de cabra montesa protegida en su coche. Él decía que se había encontrado al animal muerto y con la cabeza cortada. Cuando se encontró el cuerpo de la cabra, la prueba de balísitca demostró que se había disparado con una arma que estaba a su nombre. Además el hombre tenía manchas de sangre en la ropa ydecía que era suya porque se había caído. Se pudo probar mediante análisis de ADN mitocondrial que parte de la sangre era suya, pero había otras manchas que no eran de sangre humana. Existen indels para detectar ADN de 10 animales domésticos.

4) Histórico• Romanov (ADNmt, SNPs). Se hizo un estudio de ADN mitocondrial que luego se verificó mediante SNPs. El ADN mitocondrial del Zar tenía una hetroplasmia, y eso sirvió para demostrar que todos los que estaban enterrados con él eran familia, porque tenían los antecedentes de las monarquías europeas. Este informe ya no está en la red por el tema de protección de datos de los miembros de la realeza vivos.

• Tomas Jefferson (CromosomaY). Se estudió el cromosoma Y para determinar la paternidad de Jefferson de los hijos de una esclava. El cromosoma Y es un conjunto de datos que se transmite en bloque, es decir que siempre se mantiene por la vía paterna. Lo que habían estudiado de Tomas Jefferson daba información genética de muchas ramas familiares. Por la privacidad de los descendientes vivos, el artículo también se quitó de la red.

• Josef Menguele (ADNn, ADNmt). Era un médico nazi que experimentaba con personas en el campo de concentración de Auschwitz. Huyó a Brasil, e hizo tres simulaciones de su muerte. Se quería saber si un individuo fallecido era realmente Josef Menguele.Además de los datos genéticos en la identificación de una persona también se pueden utilizar la ficha odontológica, datos morfológicos antropométricos, datos morfológicos óseos, restos de fracturas, heridas, tatuajes, etc. El individuo a analizar tenía una herida en una pierna que se vio mediante una radiografía, que concordaba con Josef Menguele. Además se hizo una identificación indirecta con su mujer y su hijo. Se hizo un estudio genético del hijo sabiendo lo que había heredado de la madre, para ver si el fallecido podía ser el padre.

• Pablo Neruda. Se dijo que había muerto por un proceso oncológico, pero su chófer decía que habían atentado contra él. Se hizo un estudio forense de causa de la muerte y de parte de los tejidos. Se ha encontrado mediante el análisis del microbioma que hay un patógeno que no tendría porque estar allí. Se piensa que puede haber sido una contaminación del sitio en el que estaba enterrado, o que se le inyectó algo que le causó la muerte.

5)Museístico




• Luis XIV (ADNmt, Cromosoma Y)

•Monarquías europeas

• Especies animales extinguidas. Se ha podido reconstruir todo el genoma del lobo de Tasmania que ya está extinguido.

DIAPOSITIVAS 19 Y 20

Para las salas de trabajo tiene que haber una área prePCR y una postPCR. - sala de observación macroscópica de las piezas que llegan. Las piezas de la víctima tienenque estar separadas de las del presunto agresor. Si no es así hay que informarlo, porquepuede haber habido una transferencia de ADN de una pieza a otra. Esto fue un gran fallo enla caso italiano de Sollecito y Knox, en el que finalmente se exoneró a una pareja que habíasido implicada en un crimen por el autor de este. Este caso tuvo muchos fallos y se publicóun artículo muy interesante (diapositiva 49).- sala de extracción de ADN (prePCR)- sala de amplificación- sala de identificación (postPCR)Cada vez que se cambia de sala se cambia también de equipo para evitar la transferenciade ADN

Necesitamos siempre una muestra de referencia para cotejo, tenemos que tener unsospechoso, si no el análisis de la muestra no sirve de nada. En este caso el perfil genéticoiría a la base de datos de perfiles anónimos o de casos sin resolver.También hay una base de datos de perfiles de convictos nacionales, en relación conInterpol. Si en un caso no hay sospechoso, podemos comparar el perfil con esta base dedatos, con permiso del juez. Si encontramos alguien que coincida, la policía tiene queprobar luego que es culpable.Ahora para entrar en China se tiene que dar el perfil genético y este va a pasar a formarparte de una base de datos de ADN. En el Reino Unido se han estado cogiendo muestras delas personas que cometían una infracción aunque fuera leve, y se almacenaban en una basede datos de población. Se pueden comparar los datos de esta base con los de delitoscometidos en otros países.En Estados Unidos cuando se encuentra un perfil genético de un posible agresor, pero nohay sospechoso, se puede mirar una serie de marcadores en la base de datos de convictos.Si hay más de 12 ó 13 marcadores que coinciden con el ADN de un convicto, se puedepensar que un familiar directo de esta persona puede ser el culpable.

Hay otra base de datos de desparecidos, con información de los familiares de lasvíctimas. Cuando encuentran un desaparecido cruzan los datos para saber de quién setrata. Cuando hay una catástrofe en masa se hace lo mismo. Esta prohibido que esta basese cruce con la de convictos y con la de anónimos.

Se dio el caso de que exhumaron los cuerpos de 178 personas en Sudamérica, al hacerlo semezclaron los restos. Se tuvieron que hacer perfiles genéticos para poder reasignar a cada




individuo completo sus restos. Después hubo personas que dijeron que sus descendienteshabían ido a parar a esa fosa común. Cuanto más lejano es el pariente, más difícil esreconstruir la identidad genética de un individuo.

Los estudios poblacionales son importantes para conocer nuevos marcadores y sudistribución, también para saber en qué áreas geográficas son más polimórficos. Se estánhaciendo estudios multicéntricos en el grupo de genética forense de habla española-portuguesa, para ver cómo se distribuyen los marcadores en la población de estudio. Setiene que tener en cuenta la población de origen de los implicados en un delito, porque lasfrecuencias polimórficas son diferentes.

En la diapositiva 20 se muestran las pruebas secuenciales que se pueden ir haciendo parauna determinación de la paternidad. Lo que se expresa al final es la probabilidad de que elperfil de una madre y su hijo se de, si el padre biológico es el que se plantea. Con lainformación genética de la madre sabemos lo que el hijo ha heredado de ella, falta saber loque ha heredado del padre. Si no se tiene la información de la madre el resultado tienemenos peso. En los hospitales hay registros de los individuos que han nacido y siempre sesabe quién es la madre.

Para hacer las pruebas de ADN normalmente se toman muestras bucales pero si no hayuna higiene adecuada puede haber interferencias, además la sangre da mejores resultados.También se pueden coger muestras de sangre de la oreja, bastan 5 ó 6 gotas para poderhacer un perfil. Antiguamente se medía el tiempo de hemorragia pinchando en la oreja, y sipasaba más de dos minutos sangrando significaba que la persona tenía algún problema decoagulación. Mejor no coger sangre del dedo, porque con las manos tocamos muchas cosas,y además es doloroso. En la diapositiva 25 se muestran los perfiles que se obtienen con 16marcadores.

DIAPOSITVAS 22-25

En la diapositiva 21 se muestra un caso de un padre que dice que un hijo no es suyo. En lospaíses en que está permitida la poligamia puede ser difícil establecer las relaciones deparentesco.En los casos criminales primero se hace un estudio preliminar y luego el estudio sobre laspiezas de convicción. En la diapositiva 22 se muestran todas las técnicas de análisismolecular que se pueden llevar a cabo. Se pueden hacer pruebas de microsatélites (STR),SNPs, indels, o ADN mitocondrial:

- Los STR son las pruebas de primera elección, pero el ADN que tenemos es único, dañadoy escaso, y puede que no obtengamos resultados. Con los STR se puede determinar el sexoy la identificación de una persona.- Los SNPs dan datos biogeográficos y fenotípicos.- Los indels también dan el origen biogeográfico y el grupo étnico de la persona.




La información sin un individuo para cotejar no sirve de nada.En el caso de Eva Blanco que fue violada y asesinada hace más de 20 años, se encontraronrestos que daban un perfil genético, pero no se tenía ningún sospechoso. Los delitos enEspaña prescriben a los 20 años, y en este caso faltaba poco para que venciese este plazo.La Guardia Civil pidió ayuda y se utilizaron marcadores de origen geográfico, desarrolladosen 2103, y también para determinar el fenotipo del sospechoso. Esto se hace mediante unsoftware que compara muchos datos y nos da una probabilidad de cómo es el individuo. Sepudo averiguar que los restos de semen encontrados sobre la víctima pertenecían aalguien de origen subsahariano, y se pudo determinar también el color de pelo y piel. Estecaso tuvo mucha repercusión porque el juez pidió a toda la población masculina de la zonadonde se había cometido el delito que se sometiera a un análisis de ADN. Uno de losindividuos no coincidía exactamente con el perfil del semen, pero estaba muy próximo, portanto debía haber algún parentesco. Así, pudieron pedir la extradición del posiblesospechoso, y al hacerle la prueba se vio un cruce completo de su perfil con el obtenidosobre la víctima.En estos casos puede ocurrir que se desvelen relaciones de parentesco que los propiosindividuos no conocían, y esto atenta contra la intimidad de las personas. Cuandoencontramos un perfil con más de 8 marcadores en homocigosis es porque ha habidoconsanguinidad. Esto se da mucho en población del este de Europa.

En las piezas de convicción hay que ver si hay material biológico, y si lo tienen ver si eshumano o no. También tenemos que tener en cuenta si hay manchas superpuestas, y ver sihay sangre o solo ADN. En la diapositiva 24 se muestran los kits que se utilizan paradeterminar si hay sangre (glicoforina a). Se analiza el líquido del macerado de la pieza.Tiene que haber un control positivo y uno negativo, el control negativo es por ejemplo, lamisma tela sin sangre, y también tiene que haber un control negativo del reactivo solo.

Para determinar los restos de saliva se hacía la prueba de la amilasa, ahora también sehace con kits. La amilasa también se encuentra en jugo pancreático (vómito) y en la lechematerna. La determinación de semen se hace mediante la detección de antígeno específico depróstata o de semenogenina. Hay que tener en cuenta que las mujeres de más de 50 añoscon una neo de mama pueden presentar niveles detectables de este antígeno en su suero.Si el escenario es una mujer con estas características tenemos que ser cautos, no podemosdecir que un líquido mezclado con sangre sea semen.

Esto son pruebas de certeza o de orientación dependiendo del escenario. Si el escenario esun domicilio en el que no hay animales y encontramos sangre, podemos decir que eshumana y seguir investigándola para obtener el perfil genético, que se identifica con uncódigo de barras. Si la sangre se encuentra en el zoológico tenemos que verificar que seahumana. La sangre de los primates nos daría un falso positivo. También hay animalesexóticos como el urón que pueden dar falsos positivos.

En la diapositiva 25 se muestra una mancha que dio positivo para saliva y semen. Se miróel tejido claro con luz negra. En el perfil genético se ve un desbalance en los marcadoresgonosómicos. Se ven varias trisomías, es un perfil mezclado. Si hay 3 alelos es que almenos participan 2 individuos, si hay 4 alelos pueden haber participado más de 2individuos.




A veces se preparan ejercicios para ver la eficacia del trabajo. El grupo español y portuguésde genética forense es una filial de la Sociedad Internacional de Genética Forense, y es muybueno a la hora de hacer controles de calidad, tanto a nivel civil como penal.

DIAPOSITIVAS 21-26

Siempre hay que probar que hay sangre, si se hace un perfil y no era de sangre, ya no tienetanto poder probatorio en un delito de sangre. El soporte donde aparece el fluido biológicotambién es muy importante, cada soporte da un problema distinto a nivel técnico. Lostejidos sintéticos son más difíciles para trabajar. Hay que tener en cuenta el efecto gancho(hook), cuando tenemos un exceso en una solución de uno de los productos la reacción sesatura y obtenemos un falso negativo, esto se arregla diluyendo el producto.

Se plantean dos hipótesis mutuamente excluyentes:- hipótesis 1: el perfil procede del sospechoso.-hipótesis 2: el perfil procede de una persona elegida al azar no relacionada genéticamentecon el sospechoso.Si se cumple la hipótesis 1 nos sale un valor, si se cumple la hipótesis 2 el valor es 0. Lacerteza no es nunca del 100% porque toda prueba tiene un error.

También nos pueden pedir autentificaciones clínicas, es decir, que identifiquemos unapieza biópsica. Se quiere saber si ha habido un error al rotular las muestras. En ladiapositiva 29 se muestra un caso en que teníamos la muestra biópsica y las laminillas. Sehabía diagnosticado un cáncer a la persona y se había tratado, se quería demostrar que lasmuestras biópsicas eran de esa persona. Esto tiene que verlo también un patólogo, porquecuando hay un proceso tumoral el ADN cambia y nos podemos encontrar con artefactosque pueden dificultar el análisis. Hay que seleccionar las células más adecuadas.

Se dio el caso de una desaparecida en el que se obtuvo un perfil de una mancha en unasábana. El perfil era femenino. Para demostrar que la sangre era de la desaparecida sepidió la historia clínica de esta. Le habían hecho una biopsia de útero, se pudo comparar elperfil de la pieza con el de la sangre y determinar que la sangre era de la desaparecida.

DIAPOSITIVAS 27-29

6. DOCUMENTACIÓN

En las filiaciones o investigación biológica de la paternidad, se tiene que identificar a unindividuo con un nombre y apellidos, y como miembro de una unidad familiar. Tiene quehaber toda una documentación. Es muy importante:




- cadena de custodia: las pruebas que se hacen fuera de los juzgados no tienen validez parael juez.- solicitud adecuada por parte del perito- identidad comprobada, si no no se les pueden tomar muestras. También hay que haceruna fotografía, y esto puede ser un problema si son menores. Esta información no seaporta en el juicio, pero el juez puede disponer de ella si lo requiere, para que no se de unausurpación de personalidad.- información aportada- pregunta realizada. Es diferente decir que se duda del padre y de la madre o quesolamente se duda del padre.- respuesta esperada- informe emitido

DIAPOSITIVA 31

7. COMUNICACIÓN

Muchas veces el motivo por el que no se implantan las pruebas médicas es porque no hayuna comunicación eficaz entre el usuario y el que las tiene que realizar.

La comunicación puede ser entre:

- el tribunal y las partes- el tribunal y los peritos- el tribunal y el laboratorio

Casuística

- casos simples. En penal cuando hay una coincidencia completa del perfil, en paternidadcuando se tiene el trío completo.- casos complejos

perfiles mezcla, dos o más individuos participantes árbol genealógico, en casos de inmigrantes o de investigación de paternidad anónimo: búsqueda familiar

- Importancia de la recogida de vestigios- Marcadores de origen biogeográfico- Marcadores fenotípico: apariencia física-fenotipo, color cabellos, ojos y piel.- Naturaleza de la mancha, fecha de la mancha, es importante saber cuándo se ha hecho.- Bases de datos genealógicas: perfiles anónimos- Nuevas tecnologías: genómica- Bases de datos de perfiles estatales

Convictos (867.000 perfiles) Anónimos (326.000 perfiles) Desaparecidos (familiares)

DIAPOSITIVAS 33 Y 34




8. FUTURO

Se ha pasado de la huella de ADN (sondas multilocus) a trabajar con sondas de locus único,para acabar con NGS. Lo primero que se utilizó fueron las proteínas, luego los RFLPs, losminisatélites que eran demasiado grandes, los microsatélites, secuenciación del ADNmitocondrial, microsatélites de cromosoma Y y después los de cromosoma X. Latransmisión del cromosoma Y es en bloque, se podía utilizar en un perfil mezcla. Se estáinvestigando como se transmiten ciertos rasgos de tipo indel desde el X del padre y desdeel X de la madre.

Ahora se utilizan las inserciones/deleciones, que se analizan como fragmentos. Son unaherramienta muy potente porque con un mismo equipo dan mucha información. El estudiode marcadores autosómicos y marcadores de ancestralidad en ADN nuclear sirven paraidentificar individuos cuando los restos están muy degradados. En el estudio demicrosatélites se miran STRs autosómicos, del cromosoma Y y del cromosoma X. Tambiénse miran los indels en cromosomas sexuales. Es más fácil amplificar indels de menortamaño que los STRs. Se utilizan las técnicas clásicas de electroforesis; los arrays, el NGS yotras nuevas tecnologías solo se usan en investigación, no en el día a día de la genéticaforense.

Las PCR multiplex de ancestralidad o de origen biográfico se suelen hacer para 38 ó 46marcadores seleccionados de la población, así de puede asignar una muestra anónima auna zona geográfica concreta, como en el caso de Eva Blanco. También se puededeterminar la apariencia física de una persona mediante determinados marcadores, paraorientarnos hacia una población concreta. Se utilizan SNPs e indels.

Hay casos en que se puede encontrar un perfil con mezcla de humano y animal. En un casose encontró un cadáver en una nave industrial y se pensaba que era el vigilante, pero noestaba claro, ya que el rostro había sido destruido por los perros que vigilaban la nave. Nose sabía si realmente habían sido los perros o que se había ocultado el rostrointencionadamente. Se encontraron pelos sobre la víctima que se vio que eran de losanimales que había allí. Después se supo que el vigilante murió por una patología quetenía, y al quedarse encerrados los perros recurrieron a la fuente de nutrientes máscercana. En este caso se hizo un estudio de la queratina de los pelos, pero también sepodría haber hecho un estudio de inserciones/deleciones en zonas específicas animales,que permitirían ver mezclas humano/animal.

Hay un kit patentado que permite encontrar perfiles mezclados de varios animales conhumano. El encontrar un perfil animal también nos puede servir en las mezclas dealimentos.

DIAPOSITIVAS 36- 40




El juez pide que le digamos si un individuo es culpable o no. El perito forense solo puededeterminar la probabilidad de ocurrencia de un suceso. Ocurre lo mismo en los casos depaternidad, solo se puede determinar la probabilidad de que un señor sea o no el padre.

En la diapositiva 42 se muestran varios artículos del 2016 en los que se empezaron adesarrollar métodos para estudiar poblaciones mediante marcadores biogeográficos. En el2017 se empezó con la NGS y con los marcadores tipo ARN. En 2017 también se validaronalgunos marcadores específicos de tejidos, pero tienen muchos problemas.

En estos momentos se están realizando guías, porque se han dado muchos fallos en lainterpretación de los resultados, y muchos problemas de cómo se le da el valor a unaprueba.

En el caso de Sally Clark (diapositiva 45), sus dos hijos murieron presuntamente por elsíndrome de la muerte súbita del lactante, pero se sospechaba que era ella que los habíamatado. Según un médico experto, la probabilidad de que los dos bebés hubiesen padecidomuerte súbita era de 1/73 millones, y por ello fue condenada. Se cometió la falacia delfiscal, es decir hubo un sesgo a favor de condenarla. No se calculó mediante el teorema deBayes la probabilidad de ocurrencia del suceso. La mujer fue finalmente absuelta.

En 2018 salió una guía sobre cómo hacer una base de datos poblacional con genomascompletos. También hay una para la utilización de NGS en diagnóstico de enfermedadesgerminales.

En el proyecto Inocente en USA, se están revisando casos de personas que están en elcorredor de la muerte, debido a pericias que no están del todo claras. Por ello se hizo unaguía de la calidad que tienen que tener los análisis forenses para poder condenar a unapersona. En Reino Unido también se han dado condenas injustas en los últimos añosdebido a errores forenses, allí también han sacado recomendaciones y guías para losexpertos y para los técnicos no expertos.

DIAPOSITIVAS 42-47

En la diapositiva 48 se muestra el artículo del caso de Amanda Knox. Amanda Knox y sunovio Raffaele Sollecito fueron acusados de la muerte de la compañera de piso de Amandajunto con otro individuo, porque encontraron sus restos en la escena del crimen. Hubo unamala interpretación de las pruebas y un sesgo para declararlos culpables. A la tercera loshan absuelto.

En las diapositivas 50 y 51 se muestra el caso de la violación de dos mujeres en Taiwán en2009. En la ropa interior de una de ellas aparece una mezcla de tres perfiles de varones. Secondenó a los tres sospechosos. En los tres sospechosos coinciden 17 marcadores, al hacerun análisis de 23 marcadores el tercer implicado fue excluido porque no coincidían el resto




de marcadores (estos marcadores del Y-STR se heredan todos en bloque). Se tiene que darla probabilidad de ocurrencia de que hayan sido los sospechosos.

Las bases de datos familiares se están utilizando para tratar de resolver casos fríos (quehan pasado hace tiempo). En 2018 salió el caso de un asesino múltiple al que se condenómucho tiempo después, gracias al estudio genealógico de bases de datos privadas. Elespecialista determinó que un familiar del individuo que había cometido el delito estabaen esa base de datos. Localizaron al familiar y se le pudo pedir la muestra al sospechoso.

Los informes pueden ser falsificados, exagerados o malinterpretados. En el año 2003apareció el cuerpo descuartizado de una prostituta taiwanesa en China. Se culpó a los 5miembros de la familia que vivía en la casa donde se encontró el cuerpo. En el baño de lacasa se encontraron tres cabellos, dos de los cuales se determinó, mediante el análisis deADN mitocondrial, que 2 eran de la víctima. No se dieron los datos de los análisis, lasecuencia que habían analizado, la población, etc., solo la probabilidad del 99%. No hayque dar probabilidades en %, sino razones de verosimilitud, ratios. Lo que se tiene quesaber es la probabilidad de ocurrencia de un suceso.En este caso Freeman y Hampikian consiguieron parte de la muestra y revisaron el caso.Utilizando una base de datos adecuada, concluyeron que los pelos hallados en el baño noeran de la víctima, por tanto la prueba no inculpaba a la familia (diapositiva 52).En China se están haciendo muchos análisis y muy baratos, pero hay un problema con lainterpretación de los resultados que provoca fallos.

En 2015 empezó a preocupar la contaminación/transferencia de ADN desde la escena delcrimen al laboratorio. En un caso de un asesino múltiple, el perfil del sospechoso era unamujer, y esto no casaba con el tipo de violencia de los crímenes. Los delitos eran muydiferentes unos de otros. El perfil de mujer asignado aparecía en Europa, Rusia y EstadosUnidos. Esto era porque todos los laboratorios compraban a la misma empresa losbastoncillos de algodón. El perfil era de la persona que trabajaba en la fábrica de losbastoncillos. Cuando se va a un laboratorio de genómica forense hay que dar el perfilgenómico por si a caso aparece poder descartarlo. Si algún trabajador de los laboratoriosforenses no quiere dar su ADN para que se guarden sus datos en la base de datos dedescarte y aparece su perfil en una prueba, pasará a formar parte de la base de datosanónimos.

DIAPOSITIVAS 48-53

En el 2015 se firmó el tratado de Prüm que permite intercambiar perfiles entre paíseseuropeos.

En el 2011 se empezó con los marcadores biogeográficos.

En la diapositiva 55 se muestra un artículo de Ángel Carracedo y Lourdes Prieto, donde sevaloró cómo comprenden los tribunales la prueba de ADN en España.




Para estimar la edad de un individuo hay que tener en cuenta de que población viene. Lapoblación subsahariana madura antes que la europea. Podemos estimar la edad por eldesarrollo de los cartílagos de crecimiento teniendo en cuenta la población. Ahora tambiénhay sistemas por medio de análisis de metilación. Los estudios de metilación también seutilizan para determinar la naturaleza de la mancha y el origen tisular.

En la diapositiva 57 se muestran varias guías forenses.

En mayo del 2018 hubo un problema. Al permitir trabajar con los perfiles biogeográficos ode ancestralidad se puede establecer que el individuo que buscamos vienen de una zonadeterminada. En ciertas poblaciones como Alemania, esto da que pensar. En este país haymucha población musulmana y turca, y el perfil biogeográfico puede ser mal utilizado. Enla diapositiva 58 se muestra un artículo para reflexionar sobre las consecuencias sociales yéticas. La Ley va por detrás de los avances técnicos y tendría que ser al revés.

La Ley establece que las bases de datos de convictos y de asuntos sin resolver tienen unasnormas. La búsqueda de familiares en estas bases es arriesgada, se puede hacer porqueexiste un hueco legal y se dice que siempre se va a obtener un beneficio. Esto escuestionable.

Cuando secuenciamos nuestro genoma, este deja de ser nuestro, porque está en una basede datos. Por otra parte se están mandando los genomas para secuenciar a países con unatecnología mucho más barata que la nuestra. Ellos nos mandan una información perotambién se la quedan.

En la diapositiva 60 se muestra un documento de 2016 sobre bioética y edición genómicaen humanos.

Últimamente se está avanzando mucho en el análisis del microbioma. Esto va a permitirdiferenciar a gemelos monocigotos. Todavía se tienen que establecer estándares, bases dedatos y validaciones

DIAPOSITIVAS 54-61

ANEXO I. Preguntas

P. ¿Se está haciendo alguna cosa para ver si hay gente inocente que está cumpliendocondena debido a fallos de genética forense?

R . En Estados Unidos existe el programa Inocente. En España se prima la investigaciónclínica porque es en favor del bienestar de la sociedad, la genética forense prima la libertadde un solo individuo.En el caso de Rocío Wanninkhof se culpó a la pareja de su madre de la muerte de la chica.Más tarde se vio que el culpable era un individuo fichado ya por la policía de Reino Unido.




Con el tratado de Prüm se empezaron a compartir las bases de datos policiales entrepaíses. Se hacen cotejos, por orden del juez, de los perfiles anónimos de agresiones con lasbases de datos de sospechosos o convictos de otros países. En muchos casos de encuentrancoincidencias con individuos fichados por delitos menores.En Kuwait se incluía en una base de datos el perfil de ADN de cualquier persona quecometiese una infracción, esto va en contra de la intimidad de las personas, tiene quehaber ciertas restricciones.


genÉtica forense vs genÉtica mÉdica - genotipia.com©tica-forense-2019.pdf · genÉtica forense...

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