flujo de informaciÓn genÉtica 4/1/2015mg. q.f. jéssica n. bardales valdivia1 nivel intracelular...

FLUJO DE INFORMACIÓN GENÉTICAFLUJO DE INFORMACIÓN GENÉTICA

04/11/23 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia 1

NIVEL INTRACELULAR• Replicación• Transcripción• Traducción

NIVEL INTERCELULAR• Conjugación• Transformación• Transducción

NIVEL INTRACELULAR• Replicación• Transcripción• Traducción

NIVEL INTERCELULAR• Conjugación• Transformación• Transducción

FLUJO DE INFORMACIÓN GENÉTICAFLUJO DE INFORMACIÓN GENÉTICA


MECANISMO DE REPLICACIÓN DEL ADN

MECANISMO DE REPLICACIÓN DEL ADN

ReplicaciónReplicación


• La replicación es un fenómeno esencial, preliminar a la reproducción y está coordinada con el ciclo de crecimiento y división celular.

• Se realiza por un mecanismo semiconservador que se lleva a cabo por las ADN polimerasas, que utilizan como molde el ADN existente.

• La replicación es un fenómeno esencial, preliminar a la reproducción y está coordinada con el ciclo de crecimiento y división celular.

• Se realiza por un mecanismo semiconservador que se lleva a cabo por las ADN polimerasas, que utilizan como molde el ADN existente.

REPLICACIÓN DEL ADNREPLICACIÓN DEL ADN

REPLICACIÓN DEL ADNREPLICACIÓN DEL ADN

TRANSCRIPCIÓNTRANSCRIPCIÓN• Proceso a través del cual se forma el ARNm a partir de la

información del ADN con la finalidad de sintetizar proteínas.

• El ADN, como sabemos, presenta dos cadenas de polinucleótidos.

• En la síntesis o transcripción del ADN participa una de sus cadenas, que recibe el nombre de cadena molde, mientras que la otra cadena se le denomina complementaria.

• Proceso a través del cual se forma el ARNm a partir de la información del ADN con la finalidad de sintetizar proteínas.

• El ADN, como sabemos, presenta dos cadenas de polinucleótidos.

• En la síntesis o transcripción del ADN participa una de sus cadenas, que recibe el nombre de cadena molde, mientras que la otra cadena se le denomina complementaria.

TRANSCRIPCIÓNTRANSCRIPCIÓN• Se inicia cuando el ADN se abre por efecto de la enzima

ARN polimerasa (ARNpol) dejando libre al ADN molde e iniciando el proceso de alargamiento del ARNm, mediante la complementariedad con la cadena molde del ADN:

- Donde va la “A” se coloca la “T”,- Donde va la “T” se coloca la “U”, - Donde va la “G” se coloca la “C” y - Donde va la “C” se coloca la “G”.

• En el ADN existen secuencias específicas que indican al ARNpol donde termina la lectura del gen y provocan la culminación de la síntesis del ARNm

• Se inicia cuando el ADN se abre por efecto de la enzima ARN polimerasa (ARNpol) dejando libre al ADN molde e iniciando el proceso de alargamiento del ARNm, mediante la complementariedad con la cadena molde del ADN:

- Donde va la “A” se coloca la “T”,- Donde va la “T” se coloca la “U”, - Donde va la “G” se coloca la “C” y - Donde va la “C” se coloca la “G”.

• En el ADN existen secuencias específicas que indican al ARNpol donde termina la lectura del gen y provocan la culminación de la síntesis del ARNm

TRANSCRIPCIÓNTRANSCRIPCIÓN

• El primer triplete de bases del ADN que codifica el primer aminoácido del GEN (esto lo realiza en el siguiente paso denominado TRADUCCIÓN) es TAC, por lo que el primer codón del ARNm es AUG.

• Los tripletes de bases de terminación presentes al final de cada gen son ATT, ATC ó ACT, que en la secuencia del ARNm se transcribirán como:

• El primer triplete de bases del ADN que codifica el primer aminoácido del GEN (esto lo realiza en el siguiente paso denominado TRADUCCIÓN) es TAC, por lo que el primer codón del ARNm es AUG.

• Los tripletes de bases de terminación presentes al final de cada gen son ATT, ATC ó ACT, que en la secuencia del ARNm se transcribirán como:

TRANSCRIPCIÓNTRANSCRIPCIÓN

• En los procariontas, una vez formada la molécula de ARN o incluso antes de finalizar su síntesis, empieza a ser traducida en proteínas.

• En cambio, en las eucariontas, antes de transformarse en ARNm, ARNt, y ARNr, y traducirse en proteínas, tiene que pasar por un proceso de maduración.

• La maduración del ARN primario, se realiza en el núcleo de la célula, los ARN que resulten serán más cortos que el primario.

• Existen segmentos que se mantienen en el ARN maduro, a éstos se les llama EXONES, mientras que los que son descartados se llaman INTRONES.

• Al madurar el ARN adopta dos formas: ARNm y ARNt, éstos se convierten en los verdaderos ejecutores de las órdenes dadas por el ADN para la SÍNTESIS DE PROTEÍNAS.

• En los procariontas, una vez formada la molécula de ARN o incluso antes de finalizar su síntesis, empieza a ser traducida en proteínas.

• En cambio, en las eucariontas, antes de transformarse en ARNm, ARNt, y ARNr, y traducirse en proteínas, tiene que pasar por un proceso de maduración.

• La maduración del ARN primario, se realiza en el núcleo de la célula, los ARN que resulten serán más cortos que el primario.

• Existen segmentos que se mantienen en el ARN maduro, a éstos se les llama EXONES, mientras que los que son descartados se llaman INTRONES.

• Al madurar el ARN adopta dos formas: ARNm y ARNt, éstos se convierten en los verdaderos ejecutores de las órdenes dadas por el ADN para la SÍNTESIS DE PROTEÍNAS.

P

P

P

LA TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTES

Movimiento de la enzima

nun

-10

5´

La subunidad (σ ) se disocia del promotor

a) INICIACIÓN

¡-35

¡-10

+ 1

5’ 3´

b) ELONGACIÓN

OJAL DE LA TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTES

Movimiento de la enzima

Cadena que codifica al DNA

Punto de desenrollamiento

Cadena molde de ADN

Híbrido RNA-DNASitio de unión al RNA

Punto de enrollamiento

5´ 3´

Burbuja de Transcripción en la RNA polimerasa

Movimiento de la polimerasa

La cadena de RNA crece

ELONGACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTES

5´ 3´

ASAS DE TERMINACIÓN DE LA TRASCRIPCIÓN EN PROCARIOTES

Estructura secundaria

Región de unión de doble hélice

Unión en forma de asa Unión en forma de pinza de cabello

TRANSCRIPCIÓN DEL DNATRANSCRIPCIÓN DEL DNA

citoplasma

Núcleo

DNA Exón intrón

RNA Transcripción

Empalme RNA

RNAm

Traducción

Proteína

EUCARIOTAS

DNA

Transcripción

Traducción ARNm

Proteína

PROCARIOTAS

TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTASTRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS

Transcripción

Clivaje inicial

3´

3´

polirribonucleotidil adenosin sintetasa

Procesamiento

7mG Nucleasas

7mG

5´cap

ADN

5´

5´

5´

ARNhn inicial

Transcrito (ARNhn)

ARNhn - Poly A

Fragmento 5´ + ARNhn - Poly A

ARNm - Poly A con Cap +Fragmentos 5´degradados

GEN INTERRUMPIDO

Es una secuencia de “palabras” y sus “silencios” o “espacios conectores”; escritas con un alfabeto de solo cuatro letras A, T, C, y G y con los cuales se “escribe” el mensaje cifrado de nuestra herencia. Así, a cada palabra le llamamos EXON (E) y a cada silencio le llamamos INTRON (I)

GEN

E I E I E I E

Los procariotas no tienen intrones

QUÉ ES UN GEN?

ATCTCGGTTAAATGCGG

A LA

E I E I E I E

TACAGGTATAGGACAG

VAMOS A LA CASA

BARAJAMIENTO (SPLICING) DIFERENCIAL DE EXONES

E1 I E2 I E3 I E4

E2 E3 E4

E1 E2 E3

E2 E4

E1 E3

VAMOS A LA CASA

VAMOS A LA

A LA CASA

A CASA

VAMOS LA

TRADUCCIÓNTRADUCCIÓN

• Es la última etapa de la síntesis de las proteínas. En esta etapa los codones sintetizarán las proteínas a partir de la información que es presentada por el ARNm al ARNt.

• Es la última etapa de la síntesis de las proteínas. En esta etapa los codones sintetizarán las proteínas a partir de la información que es presentada por el ARNm al ARNt.

PROCESO DE TRADUCCIÓNPROCESO DE TRADUCCIÓN

La traducción del ARNm tiene lugar en 4 etapas

1. Activación 2. Iniciación3. Elongación4. Terminación

•Al final del proceso tiene lugar la maduración de la proteína formada

La traducción del ARNm tiene lugar en 4 etapas

1. Activación 2. Iniciación3. Elongación4. Terminación

•Al final del proceso tiene lugar la maduración de la proteína formada

ETAPAS DE LA TRADUCCIÓNETAPAS DE LA TRADUCCIÓN

1. ACTIVACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS

La activación de los aminoácidos para formar los complejos de transferencia tiene lugar en el citoplasma y es el paso previo necesario para que pueda comenzar la traducción.

Consiste en la unión de cada aminoácido a su ARNt específico mediante la intervención de un enzima, la aminoacil-ARN-t sintetasa y el aporte de energía del ATP.

aa1 + ARNt1 + ATP ----→ ARN t1-aa1 + AMP + PPi

La unión del aminoácido al ARN-t tiene lugar por el extremo 3' del ARN-t. Todos los ARN-t en su extremo 3' contienen la secuencia 3' ACC 5'. Las aminoacil-ARN-t-sintetasas tienen tres zonas distintas:

- Una para el reconocimiento del aminoácido- Otra para el ARNt - Otra para el ATP.

Debe existir al menos una aminoacil-ARN-t-sintetasa diferente por cada ARN-t distinto. El ARNt se une a la aminoacil-ARN-t-sintetasa a través del lazo dihirouracilo (DHU).

1. ACTIVACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS

La activación de los aminoácidos para formar los complejos de transferencia tiene lugar en el citoplasma y es el paso previo necesario para que pueda comenzar la traducción.

Consiste en la unión de cada aminoácido a su ARNt específico mediante la intervención de un enzima, la aminoacil-ARN-t sintetasa y el aporte de energía del ATP.

aa1 + ARNt1 + ATP ----→ ARN t1-aa1 + AMP + PPi

La unión del aminoácido al ARN-t tiene lugar por el extremo 3' del ARN-t. Todos los ARN-t en su extremo 3' contienen la secuencia 3' ACC 5'. Las aminoacil-ARN-t-sintetasas tienen tres zonas distintas:

- Una para el reconocimiento del aminoácido- Otra para el ARNt - Otra para el ATP.

Debe existir al menos una aminoacil-ARN-t-sintetasa diferente por cada ARN-t distinto. El ARNt se une a la aminoacil-ARN-t-sintetasa a través del lazo dihirouracilo (DHU).

TraducciónTraducción


Estructura del ARNt: En esta se observa, que tiene forma de “una mano de 4 dedos”, en la cual se observa hacia el lado 3’, la secuencia AACCA, la cual es reconocida por la RNA sintetasa que colabora para que este RNA porte alli el aminoácido. Del mismo modo, observamos los “dedos de esta mano transportadora” que están formados por la complementariedad que ocurre entre las bases que las componen.. Estos reciben el nombre de Asa D, Asa Tψ CG y el Asa Anticodón. Las dos primeras asas, parece que permiten una estabilidad a la estructura del ARNt al igual que el asa pequeña no complementaria; y la tercera Asa es la que tiene el papel específico de realizar la traducción exacta de la tripleta o Codón del código genético (en el ARNm) y por esto a esta Asa se le llama Anticodón.

Estructura del ARNt: En esta se observa, que tiene forma de “una mano de 4 dedos”, en la cual se observa hacia el lado 3’, la secuencia AACCA, la cual es reconocida por la RNA sintetasa que colabora para que este RNA porte alli el aminoácido. Del mismo modo, observamos los “dedos de esta mano transportadora” que están formados por la complementariedad que ocurre entre las bases que las componen.. Estos reciben el nombre de Asa D, Asa Tψ CG y el Asa Anticodón. Las dos primeras asas, parece que permiten una estabilidad a la estructura del ARNt al igual que el asa pequeña no complementaria; y la tercera Asa es la que tiene el papel específico de realizar la traducción exacta de la tripleta o Codón del código genético (en el ARNm) y por esto a esta Asa se le llama Anticodón.


TRADUCCIÓN A PROTEÍNASTRADUCCIÓN A PROTEÍNAS

INICIACIÓNINICIACIÓN• La iniciación de la replicación comienza siempre

en una secuencia específica de nucleótidos conocida como origen de la replicación, en el que hay un gran contenido de Adenina y Timina.

• Requiere una serie de proteínas iniciadoras especiales (proteínas desestabilizadoras de la hélice) y enzimas conocidas como helicasas, que rompen los puentes de hidrógeno abriendo la hélice, formándose las horquillas de replicación, una a cada lado de la burbuja a que da lugar la separación de las ramas del ADN.

• La iniciación de la replicación comienza siempre en una secuencia específica de nucleótidos conocida como origen de la replicación, en el que hay un gran contenido de Adenina y Timina.

• Requiere una serie de proteínas iniciadoras especiales (proteínas desestabilizadoras de la hélice) y enzimas conocidas como helicasas, que rompen los puentes de hidrógeno abriendo la hélice, formándose las horquillas de replicación, una a cada lado de la burbuja a que da lugar la separación de las ramas del ADN.

INICIACIÓNINICIACIÓN

• Una vez abierta la cadena de ADN se unen otras proteínas y enzimas adicionales:

Proteína SSB (proteínas de unión a cadena): no permiten que el ADN se vuelva a naturalizar o formen estructuras secundarias.

Las enzimas Topoisomerasas: evitan que se retuerzan y formen superenrollamientos cortando una o más hebras del ADN aliviándolos

• Una vez abierta la cadena de ADN se unen otras proteínas y enzimas adicionales:

Proteína SSB (proteínas de unión a cadena): no permiten que el ADN se vuelva a naturalizar o formen estructuras secundarias.

Las enzimas Topoisomerasas: evitan que se retuerzan y formen superenrollamientos cortando una o más hebras del ADN aliviándolos

2. INICIACIÓNEl RNAm llega hasta el ribosoma que está separado en sus dos subunidades y se une a la subunidad mayor; a continuación se une la subunidad menor. En los ribosomas existen dos lugares en los que pueden caber transferentes, el llamado Sitio-P (= peptidil) y el Sitio-A (= aminoacil). El RNAm se une de tal forma que el primer codón se coloca en el sitio P.

Fig.Iniciación de la traducción (Tomada de http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Traduccion/)


LA TRADUCCION A PROTEINAS. Este proceso, que se lleva a cabo ahora en el citoplasma, se da básicamente en 3 fases. En la diapositiva, observamos los componentes actuantes en el proceso de la traducción:a. La secuencia del ARNm que se va a traducir a proteínas en forma de tripletas: Cada tripleta de ribonucleótidos corresponde a un aminoácido específico. “El código genético se lee en forma de tripletas”b. El ribosoma, con su subunidad grande y la pequeña, en la cual se observan los sitios aminoacil (donde entra el aminoácido) y peptidil (en donde va creciendo la cadena de aminoácidos).c. ARNt o de transferencia con y sin el aminoácido. Este es el transportador del aminoácido.d. Cadena de aminoácidos o polipeptídica. Gráfico inferior: La fase de iniciación, se da cuando el ribosoma se adhiere a la cadena de ARNm en la primera tripleta llamada o codón AUG y al mismo tiempo, el ARNt, con su secuencia anticodón (UAG), asigna el primer aminoácido de la cadena de aminoácidos que será sintetizada. Nota: Las fases de la traducción a proteínas, responden a unos codones o tripletas específicas, para demarcar cada una tal como se definen a continuación: Iniciación: AUGElongación: Todas las tripletas que codifican para aminoácidos específicos.Terminación: UAG , UAA y UGA

ELONGACIÓNELONGACIÓN

• Durante la iniciación de la replicación, la doble hélice de ADN se abre por acción de una helicasa.

• A continuación, una molécula de ADN polimerasa se une a una de las hebras de ADN (catalizan la síntesis real de las nuevas cadenas)

• Se mueve recorriendo la hebra usándola como molde para ir sintetizando la cadena líder, añadiendo nucleótidos y recomponiendo la doble hélice.

• Sólo es capaz de sintetizar nuevo ADN en sentido 5` 3` partiendo de un ARN corto específico (ARN cebador)

• Durante la iniciación de la replicación, la doble hélice de ADN se abre por acción de una helicasa.

• A continuación, una molécula de ADN polimerasa se une a una de las hebras de ADN (catalizan la síntesis real de las nuevas cadenas)

• Se mueve recorriendo la hebra usándola como molde para ir sintetizando la cadena líder, añadiendo nucleótidos y recomponiendo la doble hélice.

• Sólo es capaz de sintetizar nuevo ADN en sentido 5` 3` partiendo de un ARN corto específico (ARN cebador)

ELONGACIÓNELONGACIÓN

• El ARN cebador es una molécula formada por nucleótidos de ARN catalizados por enzimas ARN primasas.

• Durante la síntesis, en cada horquilla de replicación se van formando dos copias nuevas, sobre cada una de las dos hebras de ADN que se separaron en la fase de iniciación.

• El ARN cebador es una molécula formada por nucleótidos de ARN catalizados por enzimas ARN primasas.

• Durante la síntesis, en cada horquilla de replicación se van formando dos copias nuevas, sobre cada una de las dos hebras de ADN que se separaron en la fase de iniciación.

TRADUCCIÓN A PROTEÍNAS

ELONGACIÓN

A

AGA. GCU. UGA.

FCN

AUG CGU

UAC

BFCN RCN

AUGCGU

UAC GCA

AGA. GCU. UGA

La fase de elongación se da en tres pasos: Paso No. 1 de elongación: En la grafica A, se observa al ribosoma recorriendo la cadena de ARNm. El sitio aminoacil ya ha recibido el aminoácido y trasladado el mismo al sitio peptidíl para que se comience el primer “eslabón” en la cadena de aminoácidos que formaran la proteína completa. En la grafica B, se observa que el ARNt (anticodón GCA) ya ha reconocido la segunda tripleta en el ARNm (codón CGU).

a) Formación de una horquilla de replicación b) Síntesis por la DNA-polimerasa de la hebra conductora (izquierda) y de la hebra seguidora en fragmentos de Okazaki(derecha)c) Unión de todos los fragmentos por la DNA-ligasa

a) Formación de una horquilla de replicación b) Síntesis por la DNA-polimerasa de la hebra conductora (izquierda) y de la hebra seguidora en fragmentos de Okazaki(derecha)c) Unión de todos los fragmentos por la DNA-ligasa

Terminación de la Traducción: Este proceso termina cuando el complejo ribosoma-ARNt y moléculas accesorias, encuentra en la cadena de ARNm una tripleta o codón de parada, como UAA, UAG y UGA. En la gráfica se muestra el momento en el cual el ribosoma encuentra la tripleta o codón de parada UGA, determinando así el fin de la traducción.

Terminación de la Traducción: Este proceso termina cuando el complejo ribosoma-ARNt y moléculas accesorias, encuentra en la cadena de ARNm una tripleta o codón de parada, como UAA, UAG y UGA. En la gráfica se muestra el momento en el cual el ribosoma encuentra la tripleta o codón de parada UGA, determinando así el fin de la traducción.


TERMINACIÓNTERMINACIÓN


• Cuando una ADN polimerasa hace contacto con el extremo del otro fragmento de Okazaki contiguo el ARN cebador de este es eliminado y otra enzima, la ADN ligasa, conecta los dos fragmentos de Okazaki de ADN recién sintetizado, catalizando las reacciones de condensación que unen los grupos fosfatos y azúcar de los nucleótidos contiguos, y así una vez unidos todos los fragmentos de Okazaki se completa la doble hélice de ADN

• La ADN polimerasa III no puede empezar de cero, necesita un extremo OH libre en donde unir el primer nucleótido, por eso se requiere un primer ARN primasa.

• Lectura: 3` 5`

• Síntesis: 5` 3`

• Entonces hay una hebra líder y una hebra retrasada.

• Cuando una ADN polimerasa hace contacto con el extremo del otro fragmento de Okazaki contiguo el ARN cebador de este es eliminado y otra enzima, la ADN ligasa, conecta los dos fragmentos de Okazaki de ADN recién sintetizado, catalizando las reacciones de condensación que unen los grupos fosfatos y azúcar de los nucleótidos contiguos, y así una vez unidos todos los fragmentos de Okazaki se completa la doble hélice de ADN

• La ADN polimerasa III no puede empezar de cero, necesita un extremo OH libre en donde unir el primer nucleótido, por eso se requiere un primer ARN primasa.

• Lectura: 3` 5`

• Síntesis: 5` 3`

• Entonces hay una hebra líder y una hebra retrasada.


• Una vez terminada la copia de ADN, deben remover los pedazos de ARN (ADN polimerasa I) y unir toda la cadena (ligasa).

• En la copia puede haber errores (mutaciones) que en general son corregidas simultáneamente por LA ADN polimerasa III

• Una vez terminada la copia de ADN, deben remover los pedazos de ARN (ADN polimerasa I) y unir toda la cadena (ligasa).

• En la copia puede haber errores (mutaciones) que en general son corregidas simultáneamente por LA ADN polimerasa III

Transferencia genética extracelular

Transferencia genética extracelular

• Transducción• Transducción


Tipos de transducciónTipos de transducción

• Lítica (destrucción celular)

• Lisogénica (no hay destrucción celular)

• Lítica (destrucción celular)

• Lisogénica (no hay destrucción celular)


ConjugaciónConjugación


TransformaciónTransformación


Técnicas utilizadasTécnicas utilizadas


Enzimas utilizadas en la tecnología del DNA recombinante

Enzimas utilizadas en la tecnología del DNA recombinante


Existen más de 90 enzimas de restricción purificadas ycaracterizadas.Nombre: abreviatura tres letras que se refiere alorganismo, seguida de un número romano

• EcoRI Escherichia coli• HindIII Haemophilus influenzae• HaeIII Haemophilus aegyptius

FRAGMENTO DE RESTRICCIÓN: Fragmentos de ADNgenerados por una determinada enzima de restricción.

Mapa derestricción

Existen más de 90 enzimas de restricción purificadas ycaracterizadas.Nombre: abreviatura tres letras que se refiere alorganismo, seguida de un número romano

• EcoRI Escherichia coli• HindIII Haemophilus influenzae• HaeIII Haemophilus aegyptius

FRAGMENTO DE RESTRICCIÓN: Fragmentos de ADNgenerados por una determinada enzima de restricción.

Mapa derestricción


Endonucleasas de restricción tipo IIEndonucleasas de restricción tipo II


ROTURA DE MOLÉCULAS DE DNA EN FRAGMENTOSREPRODUCIBLES MEDIANTE ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN

ROTURA DE MOLÉCULAS DE DNA EN FRAGMENTOSREPRODUCIBLES MEDIANTE ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN


Las enzimas de restricción sólo reconocen y cortan secuencias específicas.Generan extremos cohesivos (con monocadenas) o extremos romos.La rotura del DNA produce una serie característica de fragmentos, y estos se pueden ligar a otros DNA, como el vector de clonación cortado (plásmido). La reacción de ligación está facilitada por el apareamiento de extremos cohesivoscomplementarios, y los fragmentos de DNA con extremos cohesivos diferentes (no complementarios) no suelen ligarse.

POLICONECTORPOLICONECTOR


Separación de DNA de diferentes tamaños

Separación de DNA de diferentes tamaños

Electroforesis en gel• Poliacrilamida fragmentos menores de 500 pb• Diluciones diluidas agarosa• Electroforesis en gel de campo pulsante

Visualización• Colorante bromuro de etidio• Marcaje radiactivo (32P) antes de electroforesis

Electroforesis en gel• Poliacrilamida fragmentos menores de 500 pb• Diluciones diluidas agarosa• Electroforesis en gel de campo pulsante

Visualización• Colorante bromuro de etidio• Marcaje radiactivo (32P) antes de electroforesis


Determinación de la secuenciaexacta de un ácido nucleico

• A. Maxam y W. Gilber Por hidrólisis química específica

Hebra de DNA marcada en el extremo 5’ con 32P

Determinación de la secuenciaexacta de un ácido nucleico

• A. Maxam y W. Gilber Por hidrólisis química específica

Hebra de DNA marcada en el extremo 5’ con 32P


Secuenciación del DNASecuenciación del DNA’

5’-32P-GCTACGTA-3’

Secuenciación DNA método Sanger

Secuenciación DNA método Sanger


Hibridación de ácidos nucleicos

Hibridación de ácidos nucleicos


Método de transferencia Southern aplicado a la determinación de la huella dactilar de DNAMétodo de transferencia Southern aplicado a la determinación de la huella dactilar de DNA


Clonación de DNAClonación de DNA


Tipos de vectores de clonación utilizados en E. coli

Tipos de vectores de clonación utilizados en E. coli


PlásmidosPlásmidos

Moléculas de DNA circular que se replican aparte del

cromosoma bacteriano

Moléculas de DNA circular que se replican aparte del

cromosoma bacteriano


El plásmido es una molécula circular de DNA que tiene una existencia independiente en la célula.

Los plásmidos son muy abundantes en las bacterias, y mas escasos en las células eucariotas.

Llevan en su seno varios genes, a menudo responsables de características útiles para la célula. Por ejemplo, la capacidad para soportar concentraciones tóxicas de un antibiótico, como el cloranfenicol o la ampicilina.

ConjugaciónConjugación


Los plásmidos se pueden clasificar en dos grupos: conjugativos y no conjugativos.Los conjugativos tienen la capacidad de promover la conjugación.El plásmido F de E. coli es capaz de integrarse en el cromosoma. Cuando la conjugación tiene lugar en esta situación, parte del cromosoma se transfiere a la cepa F-.Solo los plásmidos conjugativos tienen la capacidad de ser transferidos en la conjugación. A veces, en presencia de un plásmido conjugativo, otro plásmido puede transferirse.

Plásmido pBR322Plásmido pBR322


Clonación de un DNA foráneo en E. coli con pBR322

Clonación de un DNA foráneo en E. coli con pBR322


Vectores de clonación del bacteriófago λVectores de clonación del bacteriófago λ


Clonación con cósmidosClonación con cósmidos


GLOSARIO GLOSARIO • Bacteriófago: Virus que infecta a

Bacterias. También llamado fago.• Cebador o primer: Molécula de ácido

nucleico, de cadena simple, que hibrida a una hebra molde de tal manera que su extremo 3’ queda disponible para servir como inicio de la síntesis de la nueva hebra de ADN complementario al molde. Es necesario para la síntesis de ADN por las enzimas polimerasas.

• Codón: Triplete de bases que específica un aminoácido.

• Codón de iniciación: Codón en el ARN mensajero que indica al ribosoma el lugar donde debe comenzar la síntesis de la proteína. Comúnmente es 5’ AUG 3’.

• Codón de terminación: Uno de los tres codones en el ARN mensajero que causa una terminación de la síntesis de proteínas.

• Bacteriófago: Virus que infecta a Bacterias. También llamado fago.

• Cebador o primer: Molécula de ácido nucleico, de cadena simple, que hibrida a una hebra molde de tal manera que su extremo 3’ queda disponible para servir como inicio de la síntesis de la nueva hebra de ADN complementario al molde. Es necesario para la síntesis de ADN por las enzimas polimerasas.

• Codón: Triplete de bases que específica un aminoácido.

• Codón de iniciación: Codón en el ARN mensajero que indica al ribosoma el lugar donde debe comenzar la síntesis de la proteína. Comúnmente es 5’ AUG 3’.

• Codón de terminación: Uno de los tres codones en el ARN mensajero que causa una terminación de la síntesis de proteínas.


• Conjugación: Transferencia de material genético de una bacteria a otra mediante contacto físico entre las células. En Escherichia coli, el contacto ocurre mediante una estructructura especial denominada pilus.

• Cromosomas: Componentes de las células que contienen la información genética. Cada cromosoma tiene numerosos genes. Siempre se presentan en pares, uno proviene del padre y el otro de la madre. Los cromosomas de pares diferentes son a menudo visiblemente distintos entre ellos.

• Conjugación: Transferencia de material genético de una bacteria a otra mediante contacto físico entre las células. En Escherichia coli, el contacto ocurre mediante una estructructura especial denominada pilus.

• Cromosomas: Componentes de las células que contienen la información genética. Cada cromosoma tiene numerosos genes. Siempre se presentan en pares, uno proviene del padre y el otro de la madre. Los cromosomas de pares diferentes son a menudo visiblemente distintos entre ellos.


• Electroforesis en gel: Proceso para separar moléculas forzándolas a migrar a través de un material semisólido (gel) bajo la influencia de un campo eléctrico.

• Electroporación: Técnica que emplea una corriente eléctrica para crear poros transitorios en una menbrana celular por los cuales puede introducirse el ADN.

• Endonucleasa: Enzima que rompe un ácido nucleico en una unión fosfodiéster no terminal. Un tipo de endonucleasas, las enzimas de restricción, reconocen secuencias específicas de bases a lo largo de una molécula de ADN y la rompen después del reconocimiento.

• Electroforesis en gel: Proceso para separar moléculas forzándolas a migrar a través de un material semisólido (gel) bajo la influencia de un campo eléctrico.

• Electroporación: Técnica que emplea una corriente eléctrica para crear poros transitorios en una menbrana celular por los cuales puede introducirse el ADN.

• Endonucleasa: Enzima que rompe un ácido nucleico en una unión fosfodiéster no terminal. Un tipo de endonucleasas, las enzimas de restricción, reconocen secuencias específicas de bases a lo largo de una molécula de ADN y la rompen después del reconocimiento.


• Enzima: Proteína que acelera la velocidad de una reacción química. Las enzimas son catalizadores que promueven reacciones repetidamente sin sufrir ningún cambio.

• Enzimas de restricción: Enzima que reconoce una secuencia específica de bases en el ADN y rompe la molécula en esa secuencia o en un sitio cercano a ella. La secuencia de reconocimiento se denomina sitio de restricción. Diferentes enzimas de restricción reconocen diferentes sitios de restricción. Se denominan también endonucleasas de restricción.

• Enzimas reparadoras de ADN: Proteínas que reconocen y reparan anormalidades en el ADN.

• Enzima: Proteína que acelera la velocidad de una reacción química. Las enzimas son catalizadores que promueven reacciones repetidamente sin sufrir ningún cambio.

• Enzimas de restricción: Enzima que reconoce una secuencia específica de bases en el ADN y rompe la molécula en esa secuencia o en un sitio cercano a ella. La secuencia de reconocimiento se denomina sitio de restricción. Diferentes enzimas de restricción reconocen diferentes sitios de restricción. Se denominan también endonucleasas de restricción.

• Enzimas reparadoras de ADN: Proteínas que reconocen y reparan anormalidades en el ADN.


• Gen: Unidad de información hereditaria. Sección de una molécula de ADN que especifica la producción de una proteína particular.

• Genoma: El total del material hereditario de una célula.

• Gen: Unidad de información hereditaria. Sección de una molécula de ADN que especifica la producción de una proteína particular.

• Genoma: El total del material hereditario de una célula.


GRACIASGRACIAS


flujo de informaciÓn genÉtica 4/1/2015mg. q.f. jéssica n. bardales valdivia1 nivel intracelular...

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