Contenido1.Antecedentes22.Justificacin33.Planteamiento del problema34.Marco Terico35.Marco Legal36.Hiptesis37.Variables48.Objetivos49.Metodologa410. Recursos511. Materiales, equipos y presupuesto.512.Cronograma513.Financiamiento6

1. AntecedentesEn el ao 2005, en Brasil, se realiz la investigacin: Estudio del efecto del extracto de Nasturtium officinale R. Br en el control del crecimiento de microorganismos presentes en la cavidad bucal y placa dentaria in vitro, como tesis doctoral en agronoma y produccin vegetal en la Universidade Federal do Parana (UFPR). En ella se comparo la eficacia en el control de la placa dental de diferentes soluciones obtenidas a partir del extracto puro de Nasturtium officinale con la eficacia de una solucin de digluconato de clorexidina a 0.2% (antisptico y bactericida utilizado en la higiene bucal). Para ello las muestras de placa de bacteriana fueron inoculadas en un medio BHI con agar. Sobre la superficie del medio se realizaron excavaciones y se adiciono de las distintas soluciones y luego del periodo de incubacin se observaron y midieron los halos de inhibicin. Se obtuvo que, efectivamente, las soluciones de Nasturtium officinale inhiben el crecimiento de diferentes microorganismos presentes en la cavidad bucal, no obstante el digluconato de clorexidina a 0.2% presenta mayor eficacia antibitica.En 2008, en Arabia Saudita, una investigacin in vivo: Efectos del aceite de berro sobre quemaduras trmicas y qumicas en conejos, fue realizada por Osama A. Abu-Zinadah, PhD, en el Departamento de Ciencias Biolgicas de la Facultad de Ciencias de la Universidad King Abdulaziz. En este trabajo se realiz un estudio histolgico de la cicatrizacin y epitelizacin de las quemaduras de conejos por el efecto de la aplicacin de ungento baneocin, aceite de berro puro y solucin de aceite de berro y Nigella sativa (1:1). Las quemaduras fueron realizadas con cido clorhdrico concentrado y una vara de vidrio a . Se concluy que el aceite de berro actu como agente antimicrobiano, anti-inflamatorio e iniciador de la epitelizacin desde la periferia de las heridas, este resultado fue independiente del tipo de quemadura. Sin embargo, la solucin de aceite de berro y Nigella sativa (1:1) no tuvo efectos curativos en esos tipos de quemaduras bajo las condiciones del estudio.En 2009, se public en la edicin 32 de la Revista Internacional de Refrigeracin, un artculo bajo el ttulo de Comportamiento de Enterococcus faecalis y Pseudomonas aeruginosa en berro congelado (Nasturtium officinale) sometido a abusos de temperatura. En este estudio el berro fue contaminado artificialmente con Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 y Enterococcus faecalis ATCC 29212. El cultivo de estas bacterias se realiz en medio PCA a , luego una pelcula de cada microorganismo fue transferido a 250 mL de caldo BHI y se incub a por 16 horas, posteriormente se procedi al contaminado del berros. La supervivencia fue evaluada luego de hervir, almacenar por congelamiento y variar la temperatura del producto congelado. Se observ que P. aeruginosa es ms sensible a los abusos de temperatura que E. faecalis. Se concluy que los distintos ciclos de congelamiento y deshielo utilizados en el berro llevaron a la muerte o dao irreparable de los microorganismos. Si bien este estudio no evala la caracterstica antibacteriana del berro, nos otorga informacin sobre el comportamiento de P. aeruginosa en l.En 2011, la investigacin: Actividad antibacterial del extracto de doce plantas medicinales comunes de las Filipinas, realizada por Gerard L. Penecilla y Celia P. Magno, del Departamento de Ciencias Biolgicas de la West Visayas State University. En este estudio, se observ la actividad antibacterial de soluciones de n-hexano, acetona, diclorometano, etanol y extractos acuosos de doce plantas medicinales: Guava, eucalipto, mango indio, berros, pimienta, moringa, te salvaje, limn, naranja, pltano, ajos y cebolla. Los microorganismos evaluados fueron: Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, y Pseudomonas aeruginosa. Un estudio preliminar fitoqumico revel la presencia de flavonoides, taninos, alcaloides, glucosidos, saponinas y terpenos. Los resultados obtenidos sugieren que los diferentes extractos de plantas contienen constituyentes bioactivos con una fuerte actividad antibacteriana, validando as el uso etnomedico en el tratamiento de enfermedades bacteriales de la piel y otras formas de infeccin bacteriana. Para los ensayos biolgicos de P. aeruginosa con Nasturtium officinale, se utiliz el mtodo de difusin de Agar en disco. El control positivo se realiz con la droga antibacterial Cloxacillin. El resultado fue un halo ms grande para la solucin de n-hexano con extracto de berro.En 2012, en Portugal, la investigacin: Estudio del efecto antimicrobiano de extractos de berros (Nasturtium officinale R. Br.) y de isotiocianatos en isolados de origen humano y animal, como tesis de maestra en biologa clnica laboratorial en la Universidad de tras-os-montes e alto douro, evala las propiedades microbianas del 2-feniletilisotiocianato, un compuesto presente naturalmente, en altas concentraciones, en el berros. La actividad antimicrobial fue evaluada frente a 10 cepas de E. coli con el mtodo de difusin de disco slido y determinacin de la concentracin mnima inhibitoria. Los resultados mostraron que el berro podra ser una fuente importante de compuestos bioactivos, y que la actividad antimicrobial del 2-feniletilisotiocianato tiene una eficacia moderada, siendo su concentracin mnima inhibitoria de 0.125 a 1.0 mg/mL. As mismo, el estudio revel que el efecto combinado de gentamicina con extractos de 2-feniletilisotiocianato incremento el potencial antimicrobiano del antibitico.2. JustificacinTanto Streptococcus pyogenes como Pseudomonas aeruginosa son microorganismos bastante frecuentes que se encuentran distribuidos mundialmente en suelos, agua, plantas y animales, o en muy pequeas cantidades en nuestros alimentos. Adems son responsables de un amplio espectro de enfermedades, desde infecciones tpicas externas leves hasta internas muy severas cmo fiebre reumtica o glomerulomefritis aguda por S. pyogenes, o neumona y endocarditis por P. aeruginosa. Debido al contacto frecuente que se tiene con estas dos bacterias oportunistas (atacan cuando las defensas del individuo disminuye) es recomendable preveer su accin patgena, para este objetivo hace su aparicin el berro (Nasturtium officinale), un vegetal acutico de uso muy comn en la preparacin de ensaladas, cuyo consumo podra inhibir el crecimiento de las bacterias anteriormente mencionadas y funcionar como un agente preventivo a diversas enfermedades. Adems, la fcil obtencin de esta planta permitira la produccin futura de un medicamento de bajo costo, o sino la potenciacin de algn antibitico ya existente. A esto se le agrega la caracterstica de que su consumo podra ser un tratamiento alternativo a diversas infecciones, ya que los efectos secundarios del berro podran ser mucho menores que de los antibiticos usuales. 3. Planteamiento del problemaEs eficiente el Nasturtium officinale (Berro) como antibitico sobre Pseudomonas aeruginosa y Streptococcus pyogenes?4. Marco Terico5. Marco Legal

MARCO LEGAL DE LAS PLANTAS NATURALES EN EL PER Constitucin Poltica del Per del 1993. Cdigo del Medio Ambiente y los Recursos Naturales D.L. N 613PLANTAS MEDICINALES Y DERIVADOS D.S. N 002 -92-SA Creacin del Instituto de Medicina Tradicional (INMETRA) Ley General de Salud Ley N 26842 (20.07.97). D.S. 010-97 Reglamento para el Registro, Control y Vigilancia Sanitaria de Productos Farmacuticos y afines. Ley de Aprovechamiento sostenible de las Plantas Medicinales Ley N 27300. Ley de promocin de los complementos nutricionales para el desarrollo alternativo Ley N 27821 (17.08.02).6. Hiptesis

El uso de Nasturtium officinale (Berro) ser eficaz antibiticamente sobre las bacterias Pseudomona aeruginosa y Streptococcus pyogenes.7. Variables

VARIABLE DEPENDIENTE: Inhibicin de las bacterias Pseudomona aeruginosa y Streptococcus pyogenes.VARIABLE INDEPENDIENTE: Capacidad antibitica del Nasturtium officinale (Berro).VARIABLES INTERVINIENTES: La temperatura de cultivo. La concentracin del inhibidor. El PH del medio. 8. Objetivos

OBJETIVO GENERAL:Determinar la eficacia antibitica del Nasturtium officinale sobre Pseudomona aeruginosa y Streptococcus pyogenes.OBJETIVOS ESPECFICOS:9. Metodologa Para evaluar la sensibilidad de las bacterias en estudio se utiliz la tcnica deKirbyBauerPreparacin del medio de cultivo:El agarMueller-Hintondebe se prepara a partir del reactivo comercial deshidratado y de acuerdo a las instrucciones del fabricante.Inmediatamente despus deautoclavardejar enfriar en un bao de agua a 4550C.Se vierte el preparado fresco y tibio a una placapetride vidrio, con un fondo uniforme de aproximadamente4mm.El medio de agar se deja enfriar a temperatura ambiente, y a menos que la placa se use el mismo da, debe guardarse en refrigerador (2 - 8 C).(Las placas deberan usarse en un lapso de 7 das despus de la preparacin)Preparacin del inculoSe selecciona 4 o 5 colonias del microorganismo en estudio. Se transfiere estas colonias, simplemente tocando la parte superior de cada una con asa bacteriolgica a un tubo que contenga de 4 o 5 ml de caldo estril deMueller-Hinton.Incubar este cultivo a35Cpor un tiempo prudencial de2 a6 horas hasta que se produzca un crecimiento moderado.Se diluye el cultivo con solucin salina estril o caldo estril hasta obtener una turbidez equivalente al tubo 0.5 de la escala deMcFarlandlo cual corresponde aproximadamente a 10 a la 8 microorganismos viables por ml.Siembra de la muestraSe procede a sumergir un hisopo estril, dentro de la suspensin del microorganismo en estudio. Colocando el aplicador por encima del nivel del contenido del tubo y rotar contra las paredes del mismo para remover el exceso del inculo.Se inocula la superficie de una placa de agarMueller-Hintonpor esparcimiento con el hisopo sobre toda la superficie. Este procedimiento es repetido rayando dos o ms veces, rotando la placa aproximadamente 60 C cada vez para asegurar una distribucin constante del inculo.Permitir que la superficie del medio sembrado se seque durante 5-20 minutos, manteniendo las placas con la tapa cerrada.Aplicacin de los discosLos discos con diferentes concentraciones de extracto de berro se dispensan sobre la superficie del agar. Cada disco debe ser presionado para asegurar contacto pleno con la superficie del agar. Ya sea que el disco se ponga individualmente o con un dispensador, deben ser distribuidos en forma constante y no debe quedar a menos de24 mmde distancia entre centros, el disco no debe ser relocalizado una vez que haya tomado contacto con la superficie del agar.Las placas son invertidas y puestas en unincubadora 35C en el lapso de 15 minutos despus de aplicados los discos.Como antibitico de control se usara penicilina.La lectura de placas se realiza despus de 16-24 horas de incubacin mediante la medicin con un vernier de los halos de inhibicin.10. Recursos

RECURSOS HUMANOSPersonal a realizar el trabajo: 5 estudiantes integrantes del grupo del Proyecto de Investigacin, personal para la destilacin y personas otras, con conocimientos en:Microbiologa bsica:-Preparacin de medios de cultivo.-Mtodos de sembrado, mtodos de sembrado en diferentes medios.Otros:-Manipulacin de materiales diversos como autoclave, incubadora, etc11. Materiales, equipos y presupuesto.

DESCRIPCIN DE LOS MATERIALESCOMPRA, PRSTAMO O ALQUILER DEL MATERIALCOSTO (S/.)

Cepa de Streptococcus pyogenes y Pseudomona aeruginosa.Donacin.

Laboratorio 20 de la Facultad de Ing. Ambiental de la Universidad Nacional de Ingeniera (FIA-UNI).Prstamo.

Autoclave. Modelo: HL47AEMx. presin: 1.9Kg/cm2Electric Power: 4Kw.Voltaje: 220 V 30-60MGhz.Hirayama Manufacturing Corporation Made in Japan.Prstamo.Facilitado por el laboratorio 20 de la Facultad de Ing. Ambiental de la Universidad Nacional de Ingeniera (FIA-UNI).

Incubadora.Precisin: PSScientific CO. Thelco 110V.Prstamo.Facilitado por el laboratorio 20 de la Facultad de Ing. Ambiental de la Universidad Nacional de Ingeniera (FIA-UNI).

Medio de cultivo Muelle- Hinton Agar y CaldoCompra10 soles por 10g.

Extracto de la planta Berro.Compra 40 soles aprox.

Placas Petri, asa de siembra, utensilios otros.Prstamo.Facilitado por el laboratorio 20 de la Facultad de Ing. Ambiental de la Universidad Nacional de Ingeniera (FIA-UNI).

12. Cronograma

MesCaptulos contenidosFechasSemanas programadas%Programado%AlcanzadoSituacin

MarzoSeleccin del tema, delimitacin de la problemtica y recopilacin de antecedentes.20 al 2717.69%7.69%Ejecutada

MarzoAbrilEl problema y la justificacin27 al10215.38%23.07%Ejecutada

AbrilMarco terico(revisin preliminar de la bibliografa)Planteamientos de la hiptesis, objetivos y variables.10 al 23215.38%38.45%Ejecutada

AbrilMayoMarco metodolgicoDescripcin de los recursos.23 al 7215.38%53.83%Ejecutada

MayoRealizacin del presupuesto, financiamiento y recopilacin fe fuentes de informacin.Entrega del proyecto de investigacin.7 al 1417.69%61.52%Ejecutada

MayoProceso experimental.19 al 2617.69%

MayoAnlisis de datos.26 al 3117.69%

JunioRedaccin del borrador del informe.2 al 817.69%

JunioRevisin y correccin del borrador.9 al 1517.69%

JunioPresentacin del informe y exposicin.16 al 2117.69%

Total13 semanas100%

13. Financiamiento Los costos del medio de cultivo Mueller- Hinton Agar as como del transporte de la cepa y otros costos corrern por parte de los mismos integrantes del grupo del Proyecto de Investigacin, los materiales utilizados como autoclave, incubadora y otros sern facilitados por el laboratorio 20 de la Facultad de Ing. Ambiental de la Universidad Nacional de Ingeniera (FIA-UNI) y por los encargados de la misma, la cepa del Streptococcus pyogenes y Pseudomona aeruginosa sern suministrados por.