TEMA 3.3.- CINETICA ENZIMÁTICA. Contenido: ! Ecuación de Michaelis-Menten y sus transformaciones. ! Cinética en reacciones con dos o más sustratos. ! Determinación cuantitativa de la actividad enzimática. ! Unidades de actividad enzimática.

Lehninger

Rawn

Variación de la velocidad de reacción de una reacción de primer orden

Rawn

Determinación de la constante de velocidad

Rawn

Avance de reacción en una reacción enzimática monosustrato

Rawn

E + S ES E + P k1

k2

k3

[ET] = [E] + [ES] k3 comparable a k2

[ET] << [S] Vo = k3[ES]

Condiciones

Vf = k1[E][S] Vd = k2[ES] + k3[ES] = (k2 + k3)[ES]

Estado estacionario [ES] constante entre t1 y t2

Vf = Vd

k1[E][S] = (k2 + k3)[ES]

k1[E][S] = (k2 + k3)[ES]

[ES] = k1[E][S]

(k2 + k3) =

[E][S]

(k2 + k3)/k1 =

[E][S]

KM

[E] = [ET] - [ES]

([ET] - [ES])[S]

KM [ES] =

[ES] = [ET][S]

KM + [S]

Vo = k3[ES] = k3[ET][S]

KM + [S]

Vmax[S]

KM + [S] Vo =

Vmax[S]

KM + [S] Vo =

[S] Vo = Vmax

[S] = KM Vo = 1/2Vmax

Vmax

KM [S] Vo = [S]

Vmax[S]

KM + [S] Vo =

[S] Vo = Vmax

[S] = KM Vo = 1/2Vmax

Vmax

KM [S] Vo = [S]

Vmax[S]

KM + [S] Vo =

Ecuación de Lineweaber - Burk

Linearización ecuación de Michaelis Menten

1/Vo = KM + [S] Vmax[S]

1/Vo = KM

Vmax 1 [S]

+ 1 Vmax

Significado de KM

Vmax[S]

KM + [S] Vo =

[S]

KM + [S]

Vo

Vmax = Fracción de centros ocupados fES =

[S] fES = 1

[S] = KM fES = 0.5

1

KM [S] fES = [S]

Significado de KM

k2 + k3 k1

KM =

k2 >> k3 k2 k1

KM = = 1 Keq

= KD

KM KD Afinidad baja

KM KD Afinidad alta

Reacciones con dos sustratos

Reacciones con dos sustratos

Devlin