actividad antimicrobiana del aceite de eucalipto en infecciones urinarias by jesÚs

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Farmacia y Bioquímica

“actividad antibacteriana del aceite esencial de eucalipto

(eucaliptus globulus labill) sobre los principales patógenos

del sistema urinario”

CURSO: Proyecto de Investigación

DOCENTE: Q.F Juan José Changllio Roas

ESTUDIANTE: Jesús Mamani Borda

CODIGO: 2009 - 34257

AÑO: 4to año

TACNA – PERU

i

Universidad nacional Jorge

Basadre GrohmannBasadre Grohman

Proyecto de investigación ESFB/FACS

2013

ÍNDICE

INTRODUCIÓN...................................................................................................................viii

CAPÍTULO I..........................................................................................................................1

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.................................................................................1

1.1 Descripción de la realidad problemática.-..............................................................1

1.2 Delimitación de la investigación.-................................................................................1

1.2.1 Delimitación espacial............................................................................................1

1.2.2 Delimitación temporal..........................................................................................2

1.2.3 Delimitación social...............................................................................................2

1.3 Formulación del problema.-.........................................................................................2

1.3.1 Problema Principal................................................................................................2

1.4 Objetivo de la investigación.-......................................................................................2

1.4.1 Objetivo general:...................................................................................................2

1.4.2 Objetivos específicos:...........................................................................................3

1.5 Hipótesis de la investigación.-.....................................................................................3

1.6 Justificación e importancia de la investigación.-.........................................................4

1.6.1 Justificación..........................................................................................................4

1.6.2 Importancia...........................................................................................................4

CAPÍTULO II.........................................................................................................................5

MARCO TEÓRICO...............................................................................................................5

2.1 Antecedentes de la investigación.-..............................................................................5

2.2 Bases teóricas.-......................................................................................................7

A. Infección Urinaria.-..................................................................................................7

B. Principales microorganismos asociados a infección urinaria.-.............................10

C. Otros microorganismos patógenos.-....................................................................14

D. Eucalyptus globulus Labill.-..................................................................................15

E.- Aceite esencial de eucalipto.-................................................................................20

F. Metodos para determinar la actividad antibacteriana..........................................30

ii


G. Farmacología experimental del aceite esencial de eucalipto.-...............................32

G. Toxicología del aceite esencial de eucalipto.-........................................................40

CAPÍTULO III......................................................................................................................42

METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN........................................................................42

3.1 Diseño de la investigación.-......................................................................................42

3.1.1 Tipo de investigación:.........................................................................................42

3.1.2 Método:...............................................................................................................42

3.2 Población y muestreo de la investigación.-...............................................................42

3.3 Variables e indicadores.-.......................................................................................42

3.4 Técnicas e instrumentos de recolección de datos.-..............................................43

Referencia bibliográfica.-……….………………………………………………………..…44

iii


INTRODUCIÓN

El Eucalyptus globulus Labill, usualmente conocido como eucalipto común o blanco; es la

especie más frecuentemente usada de este género, a nivel mundial. Aparece de forma

natural en el sur de Australia, además es cultivado en el sur de Europa y en América del

sur.

En el Perú, el ritmo de las plantaciones de eucalipto ha ido creciendo en los últimos años,

siendo ésta una especie forestal con un enorme potencial en la actualidad (Álvarez et al.,

2000). El eucalipto tiene glándulas que segregan aceites esenciales en sus hojas, los

cuales producen su característico olor y poseen componentes que pueden ser

diferenciados en productos químicos de valor terapéutico. (Álvarez et al., 2000)

Es conocido el uso del aceite esencial para tratar enfermedades respiratorias debido a su

efecto expectorante y antiinflamatorio (Gisbert 1993) sin embargo el aceite esencial de

este recurso natural vegetal también posee propiedades antibióticas, antisépticas,

bactericidas y bacteriostáticas sobre agentes que causan infecciones de las vías urinarias.

El objetivo de la presente investigación es compilar información acerca de la actividad

antibacteriana del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill ¨eucalipto¨ y su acción

sobre los principales patógenos del sistema urinario.

iv

CAPÍTULO IPLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1 Descripción de la realidad problemática.-

La infección del tracto urinario es una de las infecciones más prevalentes en nuestro

medio.

Se estima que las infecciones urinarias son causa de aproximadamente 7 millones de

visitas a los médicos, 1 millón de visitas al departamento de emergencia y

aproximadamente 100 000 hospitalizaciones al año. Sumado a esto la prevalencia de

uropatógenos resistentes a antibióticos, en pacientes con infección urinaria ha

aumentado en los últimos años tanto en las adquiridas en la comunidad como en las

nosocomiales. 1

Es así que al presente se hace necesaria la búsqueda de nuevos agentes antibacterianos

y que mejor que los recursos naturales presentes en la biodiversidad peruana, que

poseen propiedades medicinales y ya han sido utilizados por los antiguos pobladores.

Tal es el caso del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill “Eucalipto”; que es usado

para tratar enfermedades respiratorias, sin embargo es poco conocida la actividad

antibacteriana del aceite de eucalipto sobre bacterias que colonizan las vías urinarias.

Es por esta razón que la presente investigación busca indagar acerca de la actividad

antibacteriana del aceite esencial de eucalipto sobre patógenos del sistema urinario.

1.2 Delimitación de la investigación.-

1.2.1 Delimitación espacial

La presente investigación se llevó a cabo en la ciudad de Lima - Perú.

1


1.2.2 Delimitación temporal

El trabajo se realizó durante el periodo comprendido entre los meses de Julio a

Octubre del 2012.

1.2.3 Delimitación social

El trabajo está dirigido a toda la población peruana y mundial que se interese por

conocer sobre la actividad antimicrobiana del aceite esencial de Eucalyptus

globulus Labill “eucalipto” y su aplicación en enfermedades del sistema urinario.

1.3 Formulación del problema.-

1.3.1 Problema Principal

¿El aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill “eucalipto” tiene actividad

antibacteriana sobre los principales patógenos del sistema urinario?

1.4 Objetivo de la investigación.-

1.4.1 Objetivo general:

Demostrar la actividad antibacteriana del aceite esencial del Eucalyptus

globulus Labill “eucalipto” sobre los principales patógenos del sistema

urinario, como son: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Klebsiella, y

Staphylococcus aureus.

2


1.4.2 Objetivos específicos:

Definir la concentración mínima inhibitoria (CMI) y concentración mínima

bactericida (CMB) del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill “eucalipto”

sobre: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Klebsiella, y Staphylococcus aureus.

Establecer una Concentración mínima inhibitoria Alternativa y una

Concentración mínima bactericida Alternativa para cada microorganismo

motivo del estudio.

1.5 Hipótesis de la investigación.-

Hipótesis general:

El aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill. “eucalipto” podría tener

actividad antibacteriana sobre los principales patógenos de las vías urinarias,

como son: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Klebsiella, y Staphylococcus

aureus.

Hipótesis específicas:

El aceite de Eucalyptus globulus Labill. “eucalipto” tendría efecto

antibacteriano al presentar una concentración mínima inhibitoria (CMI) y una

concentración mínima bactericida (CMB) sobre: Escherichia coli, Proteus

mirabilis, Klebsiella, y Staphylococcus aureus.

Se conseguiría establecer una concentración mínima inhibitoria alternativa y

una concentración mínima bactericida alternativa en base a los estudios de

investigación revisados

3


1.6 Justificación e importancia de la investigación.-

1.6.1 Justificación

Uno de los problemas que actualmente enfrentan los tratamientos médicos es la

resistencia bacteriana ocasionada por el uso indiscriminado de antimicrobianos, para lo

cual los productos de origen vegetal podrían proporcionar una alternativa eficaz frente a

este problema.

Además es necesario informar a la población acerca de la capacidad antimicrobiana del

aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill “eucalipto” sobre los principales agentes

infecciosos de las vías urinarias, de manera que perciban a este aceite como una

alternativa antimicrobiana económica y factible para el tratamiento de patologías

urinarias.

1.6.2 Importancia

Como futuros profesionales farmacéuticos es nuestra obligación dar a conocer las

bondades del aceite esencial de Eucaliptus globulus L. a la población en general, de

manera que estén advertidos acerca de sus propiedades antibacterianas sobre los

principales patógenos de las vías urinarias, así como las precauciones que deben tener

presentes en cuanto a su dosificación y puedan hacer un uso racional y adecuado de

dicho aceite para tratar las afecciones urinarias.

4


CAPÍTULO IIMARCO TEÓRICO

2.1 Antecedentes de la investigación.-

Título: Medicina tradicional en el Perú: Actividad antimicrobiana in vitro de los aceites

esenciales extraídos de algunas plantas aromáticas.

Autor: Libertad Alzamora, Liliana Morales, Lourdes Armas, Gilma Fernández.

Resumen:

En la presente investigación se evaluó la actividad antimicrobiana de los aceites

esenciales de 5 plantas usadas en la medicina tradicional peruana entre ellas el

Eucaliptus globulus Labilll. El aceite esencial obtenido por destilación por arrastre de

vapor, se enfrentó a Pseudomona aeruginosa, Staphylococcus aureus y Candida

albicans.

La determinación de la actividad antibacteriana se evaluó por el método de aromatograma

de Durafourd, que consiste en introducir discos con la solución impregnada de los

aceites esenciales sobre el inóculo de las bacterias y medir el tamaño de inhibición de

crecimiento bacteriano considerándose como actividad nula si el halo de inhibición era

menor o igual a 8 mm. Sensibilidad límite de 9 a 14 mm, media de 15 a 19 mm y

sumamente sensible si era igual o superior a 20mm.

Encontrándose que el aceite de Eucalipto tiene una sensibilidad límite sobre la muestras

de Staphylococcus aureus ya que el halo de inhibición de crecimiento del

microorganismo era de 13 mm; y en el caso de Candida albicans se encontró en 14 mm. 2

Por lo descrito en el presente estudio podemos inferir que el aceite esencial de Eucalipto

puede ser usado para tratar infecciones urinarias causados por Staphylococcus y

también causadas por hongos como es el caso de la Candida albicans.

5


Titulo: Evaluación de la Actividad Antibacteriana in vitro de los Extractos de Caesalpinia

spinosa “tara” y Eucalyptus sp. “eucalipto”

Autor: Liu B. Humberto; Lengua V., Luis Alberto; León M., Gladis; La Torre D., Carla;

Huapaya Y., José; Chauca, José.

Resumen:

En el presente estudio se evaluó in vitro la actividad antibacteriana de extractos de

Caesalpinia spinosa "tara" y Eucalyptus sp. "eucalipto" utilizando cepas bacterianas de

Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Klebsiella sp. y Shigella flexneri.

Se utilizó como solvente de extracción una mezcla de alcohol-acetona (1:1) y la actividad

biológica de los extractos obtenidos se evaluó mediante la técnica de difusión en disco.

Para evaluar la actividad antimicrobiana de los extractos vegetales, las cepas bacterianas

antes de su utilización fueron sembradas previamente en agar Tripticasa de Soya (24

horas antes). Luego se inocularon las cepas en tubos conteniendo 3mI de caldo Tripticasa

de Soya, por 2 horas. La densidad bacteriana fue ajustada aproximadamente a 1.5 x 108

bacteria/mI usando el tubo N° 1 de la escala de Mac Farland (0,5)

Usando un hisopo estéril se inocularon placas de agar Muller-Hinton con cada cepa

evaluada. Simultáneamente se prepararon discos de papel de filtro (Whatman 351)

estériles a los cuales se les adicionó 15mI de los extractos. Todas las pruebas se hicieron

por duplicado.

Después, utilizando pinzas estériles se colocaron los discos en la superficie de la placa.

Las placas fueron incubadas a 37° C por 22 horas. Luego de ello fueron examinadas para

determinar la formación de halos de inhibición.

El extracto de Eucalyptus sp. "eucalipto" produjo un halo de inhibición de 10.5 mm sobre

Staphylococcus aureus y un halo de 13mm sobre bacillus subtilis. 3

En base a la presente investigación se asume que el eucalipto presenta actividad

antimicrobiana contra Staphylococcus aureus bacteria gran positiva que causa

enfermedades de las vías urinarias.

6


2.2 Bases teóricas.-

A. Infección Urinaria.-

a.1 Definición:

La infección urinaria, infección de orina, o infección del tracto urinario (ITU), es la

existencia de gérmenes patógenos en la orina por infección de la uretra, la vejiga, el

riñón o la próstata. Los síntomas que acompañan a una infección de orina son los que

componen el síndrome miccional, teniendo en cuenta que las infecciones de orina

también pueden ser asintomáticas.

Desde el punto de vista microbiológico, cuando se detecta un crecimiento de 10.000

unidades formadoras de colonia por mililitro (ufc/ml) en una muestra de orina bien

recogida, puede existir una infección urinaria. 4

La gravedad de la infección variará de acuerdo a la agresividad que ostente el

microorganismo intruso y por supuesto del estado inmunológico del huésped, aunque

claro también es plausible que el nivel de agresión de la especie exterior que invade

sea tan importante que ni siquiera un buen sistema inmunológico pueda combatirlo.

Existen una enorme cantidad de infecciones que afectarán particularmente a cada

parte del organismo de un ser humano, en tanto, una de las infecciones bacterianas

más comunes y por las cuales la gente más consulta y se somete a tratamiento es la

infección urinaria. Gran parte de las bacterias que la ocasionan vienen del intestino

grueso, ingresando en la vejiga de manera ascendente tras un paso inicial por la

uretra, colonizando de este modo tanto la región uretral como la peri uretral.

Si bien el aparato urinario posee determinados mecanismos propios como ser el flujo

constante de orina que actúa por arrastre, para combatir la acción de las bacterias que

ingresan, en algunas circunstancias, las bacterias pueden vencer estas duras barreras

provocando la inflamación de la zona, la cual de acuerdo a la magnitud y localización

que ostente se materializará en los siguientes casos clínicos: prostatitis, bacteriuria

asintomática, cistitis aguda y pielonefritis aguda.

Entre las principales causas de este tipo de infección se cuentan algún tipo de

obstrucción, tales como tumores, cálculos o quistes, que dificultan el flujo normal de la

7


orina, la edad, siendo las personas mayores adultas las que más propensas se

muestran a la misma, la predisposición genética y la diabetes.

En tanto, para una mejor detección y diagnóstico de la misma, los médicos solicitarán

al paciente que presente la sintomatología, que se someta a un examen que se

denomina urocultivo y que consiste en la toma de una muestra de orina en

condiciones especialmente estériles, siendo la mejor la orina de la mañana, previa

higiene de los genitales. 5

a.2 Clasificación de las infecciones urinarias.-

Se clasifican según el nivel de compromiso clínico y anatómico en: asintomática

(bacteriuria asintomático) y sintomática (cistitis y pielonefritis), siendo también

denominadas como altas y bajas. 6

a.2.1 Infecciones urinarias asintomáticas.-

Se habla de ella cuando existe la presencia de más de 100.000 colonias de bacterias

por milímetro de orina (urocultivo) en ausencia de signos y síntomas de infección

urinaria. Las bacterias aisladas tienden a ser de baja patogenicidad y son fácilmente

eliminadas por los antibióticos; sin embargo, su tratamiento puede condicionar un alto

nivel de recurrencia y recolonización por cepas más virulentas que, al eliminar a la

flora protectora, incrementarían la oportunidad de adherencias bacterianas como

evento preliminar al desarrollo de la infección urinaria (IU).

Al adherirse las bacterias al tracto urinario se provoca la infección. La presencia de

cepas bacterianas en la vía urinaria no siempre daña el uroepitelio e incluso podrían

prevenir la invasión de otros gérmenes, al funcionar como una forma de profilaxis

natural.6

a.2.2 Infección urinaria sintomática.-

8


Es la presencia de más de 100.000 colonias de bacterias en 1 ml de orina asociado a

síntomas de compromiso del tracto urinario bajo o alto.

Es diagnosticada por cualquiera de los siguientes criterios

Presencia de uno de los siguientes signos o síntomas:

a) Fiebre (> 38ºC)

b) Tenesmo

c) Polaquiuria

d) Disuria o dolor suprapúbico

e) Cultivo de orina con >= 105 UFC/mL con no más de dos especies de organismos.

f) PIURIA > 10 leucocitos/mL.

g) Visualización de microorganismos en la tinción de Gram.

h) Dos urocultivos con > 103 UFC/mL del mismo germen.

Las infecciones sintomáticas las podemos clasificar en dos grupos: infecciones

urinarias bajas (cistitis aguda) e infecciones urinarias altas (pielonefritis aguda).

a.2.3 Cistitis.-

Cuando la vejiga, órgano del aparato urinario en forma de globo que sirve para

almacenar y eliminar la orina producida en los riñones, se inflama aparece la cistitis

siendo entonces la inflamación de la vejiga urinaria, causada casi siempre por una

infección producida por gérmenes procedentes del aparato digestivo (recto) cuando se

ponen en contacto con el aparato urinario.

La mayoría de las veces, el cuerpo puede deshacerse de estas bacterias cuando se

micciona. Sin embargo, algunas veces, las bacterias pueden adherirse a la pared de la

uretra o la vejiga o multiplicarse tan rápido que algunas de ellas permanecen en la

vejiga.

9


Se caracteriza por la presencia de síndrome miccional: micción frecuente

(polaquiruria), urgente y dolorosa (disuria), sensación permanente de ganas de orinar

(tenesmo) y eliminación de una pequeña cantidad de orina turbia.

a.2.4. Pielonefritis.-

O infección urinaria alta es una infección de las vías urinarias que ha alcanzado la

pelvis renal, los cálices y el parénquima renal.

B. Principales microorganismos asociados a infección urinaria.-

Los microorganismos implicados en la infección urinaria no han cambiado de forma

significativa en los últimas dos décadas, permaneciendo la E. Coli como el principal

patógeno.

Más del 95% de las infecciones del tracto urinario son causadas por una única especie

bacteriana.

Los microorganismos responsables de la infección urinaria sintomática y asintomática

son los mismos. La Escherichia coli se encuentra en el 80% de los casos, seguido en

frecuencia por el Proteus mirabilis (4%), Klebsiella (4%), Enterobacter (3%),

Staphylococcus saprophyticus (2%) y Streptococcos del grupo B (1%). Algunas

bacterias gram positivas también han sido asociadas con patología del tracto urinario,

aunque de forma menos frecuente, como el Staphylococcus aureus 6

b.1 Escherichia Coli.-

10


Escherichia coli es el patógeno oportunista aislado con más frecuencia en las

infecciones del tracto urinario, forma parte de la familia Enterobacteriaceae , está

integrada por bacilos Gram negativos no esporulados, móviles con flagelos perítricos

o inmóviles, aerobios-anaerobios facultativos, capaces de crecer en agar MacConkey

y en medios simples con o sin agregado de NaCl, fermentadores y oxidativos en

medios con glucosa u otros carbohidratos, catalasa positivos, oxidasa negativos,

reductores de nitratos a nitritos, y poseedores de una proporción G+C de 39 a 59% en

su DNA.

La E. coli posee características que la hacen muy virulenta para el tracto urinario,

como son la presencia de pilio fimbrias tipo I que se unen a la manosa de las células

epiteliales y que favorece su adherencia al uroepitelio, antígeno K que protege a las

bacterias de la fagocitosis por los leucocitos, hemolisina que favorece la invasión

tisular y daña el epitelio tubular, la resistencia antimicrobiana a la actividad bactericida

del suero y aerobactina que permite a la bacteria acumular hierro para su replicación.7

Figura n°1 Escherichia Coli.

b.2 Proteus Mirabilis -

11


Proteus mirabilis es una bacteria Gram-negativa, facultativamente anaeróbico. Proteus

mirabilis causa el 90% de todas las infecciones por Proteus. 8

Es una bacteria rodeada de flagelos en todo su cuerpo (peritrica) por lo que es

extremadamente móvil y por lo tanto capaz de diseminarse rápidamente por todo

el árbol urinario. Es además intensamente ureásica, forma amonio de urea a alta

velocidad, en 2 horas un inoculo de 10 UFC/ml de Proteus puede elevar el pH urinario

a un valor cercano a 8.0, ello ocasiona en la vía urinaria precipitación de estruvita

(fosfato amónico magnésico) y de apatita (fosfato cálcico) y de ahí la pronta

aparición de litiasis, que ocurre en vejiga, próstata y riñón.Posee además, fimbrias

de adherencia y tiene tendencia a adherirse mejor a las células renales . Otros

factores de virulencia son la hemolisina (la mayor parte de aislados de pielonefritis

son hemolíticos. La hemolisina Hpm A de Proteus ha sido postulada como el

factor citotóxico que facilita la invasión renal de Proteus.

.

Figura n°2 Proteus mirabilis

Finalmente, Proteus produce una metalo proteasa que reconoce y activa la

inmunoglobulina A1 y A2. Por estos motivos Proteus mirabilis es más frecuente en

infecciones hospitalarias. En infecciones comunitarias, por motivos que

desconocemos pero atribuimos a su adherencia al prepucio, es más frecuente en

lactantes varones.

12


Esta bacteria al ser sembrada en un agar para identificación microbiana, sus colonias

toman forma de ondas, que son fáciles de identificar. 8

b.3. Klebsiella.-

Se la aísla frecuentemente de materias fecales del hombre y los animales, pero

también de aguas, vegetales y alimentos. Son bacilos Gram negativos inmóviles, a

menudo capsulados. La cápsula es de naturaleza polisacárida. Se trata de patógenos

oportunistas, que pueden provocar diversos cuadros clínicos en el hombre:

infecciones urinarias, bacteriemias, neumonías, infecciones hepatobiliares, etc. Un

porcentaje elevado de aislamientos de Klebsiella, particularmente aquellos de

infecciones nosocomiales, contienen plásmidos de resistencia a los antibióticos.

Puede ser resistencia a betalactámicos, aminoglucósidos, etc.

Klebsiella expresa su virulencia urinaria por sus fimbrias de tipo 1 .Se asume que

hasta el 75% de Klebsiellas urinarias expresan esta propiedad . 7

Figura n°3 Klebsiella sp.

La presencia de cápsula es sin embargo, el factor más importante de virulencia

Presenta diferentes variantes químicos del polisacárido capsular que permiten

distinguir hasta 70 serotipos . De los factores de virulencia que se le atribuyen a

13


Klebsiella , el polisacárido capsular es de los más importantes ya que impide la

acción de los anticuerpos (anti-O), importante mecanismo defensivo de la infección

urinaria por bacilos gram negativos.8

b.5Staphylococcus aureus.-

Las infecciones urinarias por Staphylococcus aureus son poco habituales en la

población general y con frecuencia son secundarias a bacteriemias originadas en

focos distantes (como la endocarditis). No obstante, los pacientes con sondas

permanentes pueden presentar infecciones ascendentes del tracto urinario por S.

aureus. 7

Figura n° 4: Staphylococcus

aureus.

C. Otros microorganismos patógenos.-

Los hongos son una parte de la población microbiana que puede contribuir como

uropatógenos fúngicos en las ITU. En los últimos decenios las IU fúngicas

por Candida levadura género ha aumentado considerablemente.

La salud del tracto urinario es estéril así, la presencia de levaduras del

género Candida en la orina implica una variedad de situaciones clínicas). Candiduria

se puede demostrar como IU sintomáticas o asintomáticas, la incidencia de las

infecciones del tracto urinario causadas por levaduras es cuatro veces más común en

mujeres que en hombres. Además, los resultados de diferentes estudios han indicado

que las IU en las mujeres son muy comunes 9

14


D. Eucalyptus globulus Labill.-

d.1 Clasificación taxonómica.- 10

El Eucalyptus globulus Labill presenta la siguiente clasificación taxonómica según

Adolph Engler modificado por Soukoup J.

Reino: Vegetal

División: Angiospermae

Clase: Dycotyledoneae

Sub-clase: Archyclamideae

Orden: Myrtales

Familia: Myrtaceae

Género: Eucalyptus

Especie: Eucalyptus globulus

Nombre científico: Eucalyptus globulus Labill.

Nombre común: Eucalipto blanco, Eucalipto común o

eucalipto azul

15


Figura n° 5 Eucalyptus globulus L.

d.2 Descripción botánica.-

d.2.1Tronco:

Derecho, pero poco redondo, muy grueso, hasta más de 2m de diámetro, y con

tendencia a experimentar una torsión espiral.

d.2.2 Corteza:

Primero de color blanquecina, plateado azulado - pruinosa, lisa, luego, de color gris o

pardo grisácea, lisa, que se desprende en grandes tiras longitudinales, retorcidas y

deflecadas, que se mantienen colgando algún tiempo en los árboles.

d.2.3 Raíz:

El sistema radical está constituido por una raíz pivotante, que en terrenos sueltos

puede alcanzar los 50 cm. de profundidad, en el primer año ,creciendo después más

lentamente. Las raíces laterales, que en un principio son poco desarrolladas, después

16


se extienden superficialmente, a veces a grandes distancias de su fuste. En suelos

poco profundos todas las raíces, se adaptan haciéndose someras.

d.2.4 Hojas:

Las hojas juveniles son opuestas, sésiles, de base cordada, de color gris-azulado, de

8-15 cm de longitud y 4-8 cm de anchura.

Las adultas alternas, pecioladas, con la base cuneada, linear-lanceoladas, de 15-25

cm de longitud, con el ápice acuminado. La textura es algo coriácea y son de color

verde oscuro, con la nerviación marcada 11

Las hojas adultas contiene aceite esencial en una concentración entre 1,5 - 3,5% en

caso de Eucalyptus globulus.

Este aceite se encuentra ubicado en los espacios o cavidades esquizógenos , los

cuales se forman gracias a que las células se separan por disolución de la laminilla

media y por dilatación de los espacios intercelulares. Esta secreción es merocrina. 11

Figura N° 6 Espacios o

cavidades esquizogenas que contienen aceite esencial de Eucalipto.

17


Figura N° 7 Imagen por Micrografía de electrones de la cavidad secretora de la hoja

de Eucalipto

El contenido de aceite esencial tiene un pico máximo en las hojas basales de los

brotes, mientras que el contenido cineol aumenta con la edad de las hojas y alcanza

su máximo en las hojas adultas de tallos ya lignificados. 12

d.2.5 Flores:

Flores axilares, solitarias o en grupos de 2-3, de hasta 3 cm de diámetro, con

numerosos estambres de color blanco. Florece en Septiembre-Octubre.

d.2.6 Fruto:

Fruto en cápsula campaniforme de color glauco y cubierta de un polvo blanquecino, de

1.4-2.4 cm de diámetro. Las semillas del eucalipto goma azul son relativamente

grandes para un eucalipto. Hay entre 18 y 320 semillas por gramo de semillas y hollejo

o alrededor de 460 semillas limpias por gramo. Las cápsulas liberan las semillas

inmediatamente al alcanzar la madurez y las semillas son dispersadas por el viento.

La distancia de dispersión calculada en base a una altura de 40 m con unos vientos de

10 km por hora, fue de solamente 20 m 3

18


d.3 Origen.-

Sus masas naturales, están limitadas, a la costa meridional de Australia: en los

Estados de Nueva Gales del Sur y Victoria (en las zonas más frías, viviendo entre los

37º y los 39º de latitud), principalmente en los montes Otways y Gippsland; y costas

oriental y meridional de Tasmania, entre los 41º y 43º de latitud Sur. 11

d.4 Habitad.-

El Eucalyptus globulus Labill viene a conformar una fuente de riqueza forestal debido

a su crecimiento precoz y a su adaptación a toda clase de suelo y clima en especial a

la serranía del país

En el Perú actualmente se cuenta con 536,530 hectáreas de eucalipto. Se estima que

existe actualmente 150,000 hectáreas de estas plantaciones que están en edad de

explotación, de las cuales 51,000 se encuentran ubicadas en Cusco, 28,000 en

Apurímac y 27,000 en Junín.13

Para lograr un desarrollo óptimo requiere de:

Altitud: 500-1500 m.s.n.m

Régimen de lluvias: invierno o verano

Estación seca: 3 meses no rigurosa

Temperatura:

Media máxima del mes más cálido: 18-23 C °

Media minina del mes de frio: 4-12 C°

Se desarrolla en un suelo areno- arcilloso

d.5 Metodología de colecta.-

19


El mejor momento es por la mañana, antes del mediodía y en día siempre soleado. Si lo

hacemos muy temprano por la mañana el rocío puede llegar a estropear las plantas

debido a la humedad, factor muy desfavorable para su conservación .Además por la

mañana temprano observaremos tienen las flores caídas, en estado de letargo , no

estando sus propiedades al 100 % .Tampoco es recomendable recolectarlas al medio

día , especialmente con plantas aromáticas ya que a esa hora el calor es excesivo y

muchos de los aceites esenciales se volatilizan. Tampoco es aconsejable recolectarlas en

la tarde o a la caída del sol ya que las plantas están adormecidas quedando inhibida su

actividad productora.

Podemos pues resumir que la mejor hora para recolectar en general las plantas

medicinales es entre las 10 y las 11 de la mañana y en día soleado, hora en que

encontraremos con toda probabilidad las plantas al 100%.Si recolectamos en día nublado

las propiedades son menores, tardando mas en secarse y teniendo más humedad.

E.- Aceite esencial de eucalipto.-

e.1 Métodos de obtención del aceite esencial de eucalipto.-

Los aceites esenciales pueden extraerse mediante varios métodos: expresión,

destilación con vapor de agua, extracción con solventes volátiles, enflorado y con

fluidos supercríticos 14

La técnica de obtención por arrastre de vapor se utiliza a nivel industrial debido a su

alto rendimiento, la pureza del aceite obtenido y porque no requiere tecnología

sofisticada (Martínez, 2001).

e.2 Destilación por arrastre de vapor.-

Es una técnica que sirve fundamentalmente para separar sustancias insolubles en

agua y literalmente volátiles, de otros productos no volátiles mezclados con ellas. El

comportamiento de la destilación de un sistema de dos fases miscibles, donde cada

líquido ejerce su propia presión de vapor y la suma de ambas es de la presión de

operación, y son independientes de las cantidades relativas de la mezcla. Estos

20


hechos constituyen la base para la purificación de sustancias por el arrastre de una

corriente de vapor. Existen varios compuestos orgánicos de punto de ebullición

relativamente alto que con agua co-destilan en una cantidad en peso lo

suficientemente grande para ser destilados con cierta rapidez por debajo del punto de

ebullición del agua.

Esto se debe a sus pesos moleculares relativamente elevados comparados con las del

agua. 11

Figura 8. Esquema del equipo de extracción

e.2.1 Descripción del proceso:

A continuación se describirá el proceso al que debe ser sometido la droga antes de

colocarla en el aparato de destilación.

e.2.1.1 Recolección

21


Las plantas destinadas a la obtención de aceites esenciales, se recolectan en

primavera, entre las 10 y 11 de la mañana y en día soleado.

e.2.1.2. Recepción e Inspección

Las plantas deben ser revisadas morfológicamente, de tal modo que no se

encuentre otro tipo eucalipto.

e.2.1.3. Pesado

Luego de la inspección se pesa el material vegetal

e.2.1.4. Oreado

Con la finalidad de eliminar el agua presente en las plantas cortadas y así

aumentar la eficiencia de la operación de destilación; se realiza un oreado de las

mismas a la sombra, sobre catres con tejido de polipropileno, preferentemente

bajo techo en lugares ventilados.

Las plantas no se deben dejar en arrumes por que se generan hongos, los que

transfieren un olor terroso, mohoso al aceite.

e.2.1.5 Pesado 2

Luego del oreado se pesa la matera prima para calcular el rendimiento de

extracción y pérdida de agua con el oreado.

e.2.1.6. Destilación

Se introduce en el destilador la cantidad requerida de material vegetal teniendo la

precaución de que el material no quede muy suelto por que aumenta el consumo

de energía, ni tampoco muy apretado por que disminuye el rendimiento del aceite.

Luego se hace pasar por medio de la masa vegetal vapor de agua, que va

llevando con sigo los compuestos volátiles que conforman los aceites esenciales,

a la salida del sistema de destilación se encuentra un serpentín refrigerante que

hace que la mezcla de vapor de agua y aceite esencial pasen de estado gaseoso

a líquido.

22


Luego de esto se encuentra un separador de las dos fracciones, y por medio de la

diferencia de densidad, estas se separan en el hidrolato y el aceite esencial. Con

este procedimiento se obtienen lo que se conoce como aceite esencial crudo.

e.2.5. Refinamiento

Para limpiar el aceite de impurezas se vierte el destilado poco a poco, utilizando

un embudo provisto de filtro de papel. Cuando el producto obtenido no reúne toda

la finura requerida, es necesario refinar o depurar el aceite. Para ello hay que re-

destilar el producto al vacío utilizando álcali para eliminar aldehídos y alcohol de

baja concentración para eliminar terpenos, compuestos que le otorgan olor o sabor

desagradable al aceite esencial. Este proceso a la vez concentra el contenido de

componentes importantes como el mentol y el cineol.

Bruneton J. menciona que con el refinamiento del aceite esencial de eucalipto, el

contenido de limoneno y p-cimeno pueden doblarse; y el aromadendreno, el

globulol, el transpinocarveol y aldehídos desaparecen en los aceites rectificados,

perdiéndose un 6% del aceite crudo. Las fracciones eliminadas pueden ser

vendidas a otras industrias que consumen estos productos. 11

e.3. Métodos Fundamentales de Análisis de Aceites Esenciales 11

e.3.1. Determinaciones Físicas

Aspecto

Color

Olor

Índice de refracción

Desviación óptica (poder rotatorio)

Solubilidad en mezclas alcohol-agua (alcoholes rebajados)

e.3.2. Determinaciones Químicas

23


Índices de saponificación : 8.9 - 20

Índice de yodo: menor a 0,7 Técnicas cromatografías: cromatografía liquida TLC, cromatografía

Líquida de alta resolución HPLC

Métodos espectroscópicos: ultravioleta UV,infrarojo IR, cromatografía de

gases asociado a masas GC-MS

E.2 Composición Fisicoquímica del Aceite.-

Formula: C10H18O

Peso molecular: 154.24 g/mol

Densidad: 0.910 – 0.93 g/ml

Solubilidad en agua: insoluble

Solubilidad en etanol: 1:8 a 20ºC

Temperatura de ebullición aproximada: 177ºC

Color: amarillo claro

Olor: penetrante

Rotación óptica: +5º a -9º

Índice de refracción: 1.463- 1.466

E.3 Composición química.-

a) 1,8 cineol (eucaliptol) Es el constituyente principal del aceite esencial, con una

proporción de 70 - 95%.

El eucaliptol (1,8 - Cineol), es un aceite blanco, olor, alcanforado, monoterpenoide

monociclico, peso molecular 154, densidad 0.921-0.923, ebulle a 176 ºC, índice de

refracción 1.456, insoluble en agua, soluble en alcohol, cloroformo, éter; es irritante,

expectorante, antiséptico y antibiótico contra, E. coli y S. aureus 15

24


Figura n° 9 Estructura del 1,8 cineol

Figura n°10 Estructura tridimensional de 1,8 cineol

b) Pineno:

25


Es un terpeno, de dos isómeros de pineno. Se encuentra aproximadamente 7.16 %

de α–pineno en el aceite esencial de la hoja de Eucalyptus globulus Labill y 1.10 % de

b-pineno. El α-pineno es líquido, punto de ebullición 155ºC, densidad 0.8592, índice

de refracción 1.4664, insoluble en agua, soluble en alcohol, cloroformo.15

Figura n°11 Estructura de α- Pineno:

c) Terpinenos:

Los terpinenos son un grupo de isómeros de hidrocarburos que se clasifican como

terpenos.El aceite de eucalipto contiene aproximadamente 0.11 % de α-Terpineno y

1.16 % de γ-Terpineno

Figura n°12 Estructura de isómeros de terpineno

d) α-Terpinol:

26


Se encuentra en una concentración aproximada de 0.14%

Figura n°13 Estructura de α-Terpinol

e) Mirceno:

Mirceno o β-mirceno, es un compuesto orgánico oleofínico natural. Se clasifica como

un hidrocarburo, pero con más precisión como un monoterpeno .Se encuentra en una

concentración de 1,25%

Figura n°14 Estructura de Mirceno

f) Butiraldehido:

27


Sustancia oxigenada 16

Figura n°15 Estructura de Butiraldehido

g) Valeraldehido:

Sustancia oxigenada 16

Figura n°16 Estructura de Valeraldehido

Las principales exigencias en el mercado medicinal son un elevado contenido de

cineol y la ausencia de cantidades apreciables de felandreno y aldehídos.9

E.4.-Propiedades atribuidas al aceite esencial.

28

CH3-CH2-CH2-CHO

CH3

-CH2

-CH2

-CH2

-CHO


Entre las propiedades del aceite de Eucalipto se encuentran: Analgésico,

antirreumático, antiinflamatorio, antiséptico, antiespasmódico, antiviral, bactericida,

cicatrizante, descongestivo, desodorante, depurativo, diurético, expectorante,

febrífugo, hipoglucémico, insecticida, rubefaciente, estimulante y vermífugo.17

Particularmente eficaz con la gripe, infecciones de garganta, tos, condiciones

catarrales, sinusitis, asma y tuberculosis. El aceite esencial podría ser antiséptico

respiratorio, antihelmíntico, balsámico, expectorante e hipoglicémico.

Puede menguar los efectos dolorosos de las migrañas y se dice que es útil en el

tratamiento de la escarlatina, la disentería, las fiebres tifoideas, la difteria y la malaria,

así como con la varicela. Actúa bien en el sistema genito-urinario; útil con problemas

tales como cistitis y la diarrea. Parece disolver los cálculos biliares, y se ha empleado

en el tratamiento de la nefritis, la gonorrea y la diabetes. Se dice que es eficaz contra

las hemorragias. Puede causar algún alivio al reumatismo, y se ha afirmado su

eficiencia a este efecto en combinación con limón y junípero.

Es posible que también resulte útil en trastornos y molestias musculares de carácter

general y con las neuralgias (dolores nerviosos), así como con la piorrea.

Aparentemente útil en erupciones cono el herpes y eficaz con las quemaduras, se dice

que previene el desarrollo bacteriano y la subsiguiente formación de pus,

contribuyendo a la formación de un nuevo tejido. También parece obrar bien ante

cortes, heridas, ulceras y condiciones inflamatorias

Parece disolver los cálculos biliares, y se ha empleado en el tratamiento de la nefritis,

la gonorrea y la diabetes. Se dice que es eficaz contra las hemorragias. Puede causar

algún alivio al reumatismo, y se ha afirmado su eficiencia a este efecto en

combinación con limón y junípero. 17

e.5 Actividad antibacteriana.-

29


Se ha postulado que la actividad antibacteriana se debe a que en el interior de la

célula microbiana, el aceite esencial oxida gradualmente el oxígeno proveniente del

medio ambiente, produciéndose metabolitos tóxicos tales como el ión superóxido y el

peróxido de hidrógeno los cuales desnaturalizan la membrana citoplasmática,

aminoácidos y proteínas causando letalidad de los microorganismos (Villar, 1999 y

Fife et al, 1998).

El 1,8 cineol es capaz de inducir la producción de compuestos tóxicos de O2 actúa

sobre la membrana citoplasmática, específicamente a nivel de la coenzima a, uniendo

los grupos sulfidrilos libres entre coenzimas formando enlaces disulfuros, que impiden

su normal funcionamiento en los procesos de óxido reducción y en la producción de

energía requerida para el transporte activo de nutrientes hacia el interior de la célula

(Valsecia, 1999) 18

F. Métodos para determinar la actividad antibacteriana

La actividad de los antimicrobianos (antibióticos y quimioterápicos) debe ser evaluada

“in vitro ” para obtener la información que permitirá decir si un microorganismo es

susceptible o resistente a determinado producto.

Dos son los procedimientos empleados para conocer ésta información, el método del

tubo dilución y el del disco difusión en agar, a éste último se le denomina:

antibiograma.

La actividad antimicrobiana in vitro determina

a. La potencia de un agente antibacteriano en solución

b. Su concentración en los líquidos del cuerpo o en los tejidos

c. La sensibilidad de un microorganismo a concentraciones conocidas del

medicamento 19

F.1 Medición de la actividad antimicrobiana

30


Esta se determina mediante los métodos de dilución o difusión, utilizando un

microorganismo estándar y una cantidad conocida del antimicrobiano.

Para ello se utilizan las pruebas de dilución en tubos y el método de difusión.

Prueba de dilución: En éste ensayo se incorporan cantidades conocidas de

antimicrobianos en medios líquidos, se inoculan después con las bacterias en

prueba y se incuban. El punto final se toma cuando la cantidad de sustancias

antimicrobiana es capaz de inhibir el crecimiento o de matar a las bacterias en

prueba.

Se obtiene un resultado cuantitativo, destacando dos características importantes:▪

- La Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) que se define como la mínima

concentración de antimicrobiano (en μg/mL) que inhibe el crecimiento visible de un

microorganismo después de 24 horas de incubación a 37°C. La CMI se ha

establecido como "gold Standard" frente a otros métodos que evalúan

susceptibilidad antimicrobiana; además de confirmar resistencias inusuales, da

respuestas definitivas cuando el resultado obtenido por otros métodos es

indeterminado.

- La Concentración Mínima Bactericida (CMB), se define como la mínima

concentración de antimicrobiano que elimina a más del 99,9% de los microorganismos

viables después de un tiempo determinado de incubación (generalmente 24 horas)

Método de difusión▪ Preparación del inóculo. La técnica del antibiograma

sólo es aplicable a especies bacterianas en cultivo puro. Por ello

previamente se procederá, si es preciso, a hacer un aislamiento en placa. 19

G. Farmacología experimental del aceite esencial de eucalipto.-

31


G.1 Estudio de la Universidad Católica de Santa María- 2005: 10

Un estudio llevado a cabo en la universidad Católica de Santa María, evaluó el

efecto in vitro del Eucalyptus globulus Labill (eucalipto) sobre Staphylococcus

aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri ,Proteus vulgaris

Pseudomona aeruginosa.

Para el presente estudio se utilizaron hojas de Eucalyptus globulus Labill

(eucalipto), las cuales fueron recolectadas manualmente (3.600 gramos) , a las 9 am

en las tierras de cultivo de la avenida paisajista Socabaya, en el departamento de

Arequipa.

Luego se procedió a colocarlas en una bolsa de papel para evitar su deterioro y para

una mejor conservación, se les limpio adecuadamente para desechar impurezas;

luego las hojas se trasladaron a una habitación con buena ventilación y temperatura

ambiente sin exponerlas a la luz directa, y se procedió a colocarlas sobe un papel sin

sobreponerlas, este método se desarrolla hasta la sequedad completa de la hoja.

El material desecado se procedió a triturar en un mortero, seguidamente se peso las

hojas, para la posterior extracción del aceite (500 gramos)

El material vegetal se sometió al método de destilación por arrastre de vapor,

obteniéndose un rendimiento de 0,55 %.

El aceite esencial obtenido se almaceno en frasco de vidrio ámbar, para el respectivo

análisis físico químico.

Para el análisis microbiológico las cepas estándar ATCC fueron: Staphylococcus

aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 , Klebsiella pneumoniae ATCC

10031 ,Proteus vulgaris ATCC 13315 ,Shigella flexneri ATCC 12022 y

Pseudomona aeruginosa ATCC 27853, las cuales se obtuvieron en el Hospital

Goyeneche en la ciudad de Arequipa

Determinación de la concentración mínima inhibitoria:

32


Se realizo por el método de dilución en caldo. En primer lugar se preparo el diluyente

al 1%, para lo cual se agrego 4,950 ul de agua destilada y se les agrega 50 ul del

dimetil sulfoxido (diluyente puro).

A continuación se prepara la solución madre, utilizando como diluyente del aceite de

eucalipto al dimetilsulfoxido al 1%. Se obtiene la solución madre en una proporción

de 1:4, es decir 1 ml de aceite esencial y 4ml de diluyente al 1%, después se enrasa

con agua destilada a 10 ml en una fiola y se procede a enrasar.

Se toma separadamente las colonias anteriormente incubadas en placas petri , para

posteriormente ser diluidas en 5ml de caldo peptonado hasta alcanzar la turbidez

equivalente a 0.5 de Mac Farland, si la turbidez es mayor se le agrega mas caldo y si

la turbidez es menor se le agrega mas colonias hasta que se equivalente a la escala

de Mac Farland (Tubo n°5)

A continuación se prepara 6 series de 12 tubos estériles , y se les agrega a todos los

tubos 1ml de caldo peptona , al primer tubo de cada serie se le agrega 1,0 ml de

solución madre del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill, se agita bien el

tubo y seguidamente se extrae 1,0 ml para luego ser agregado al segundo tubo,

agitar bien y así sucesivamente a los demás tubos hasta el tubo n ° 10 del que se

desecha 1,0 ml, luego se agregan 0,1 ml del inoculo a cada tubo. Inóculo de cada

bacteria.

El tubo n°11 se tomo como control positivo y n°12 el control negativo. Todas las

series se incuban a 37 °C por 24 horas .Transcurrido el tiempo de incubación se

apreciara la turbidez del contenido de los tubo para así poder observar el punto de

ruptura, que es el tubo lipidiado y el tubo turbio. Se considera la CIM a la cantidad

que se encuentra en el tubo que no presenta turbidez.

Luego de determinar la concentración mínima inhibitoria se procedió a sembrar a

todos los tubos que no presentaron turbidez en Agar Muller Hilton, seguidamente se

lleva a la estufa a una temperatura de 37° por 48 horas, pasado el tiempo se

observará en cuál de los tubos sembrados no hubo crecimiento siendo la cantidad

mínima bactericida (CMB) entre el tubo que no hubo crecimiento y en el que si hubo

crecimiento.

33


Figura n° 17: Determinación de la concentración mínima inhibitoria y concentración

mínima bactericida para cada cepa en estudio

TABLA N°1

34


Actividad antimicrobiana del aceite esencial de E. globulus expresada como Concentración mínima inhibitoria (CMI) y concentración mínima bactericida

(CMB)

Fuente: Gutierrez Valdivia Ranulfo .Mamani Romaní Wilmar. Efecto in vitro del

Eucaliptus globulus Labill (eucalipto) sobre Sthapylococcus aureus, Escherichia coli,

Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Shigella flexneri y Pseudomona

aeruginosa , Universidad Católica Santa María . Arequipa-2005

F.2 Estudio de la Universidad de Montenegro-2011:

35

MICROORGANISMO

ACEITE DE EUCALIPTO (mg/ml)

CMI CMB

E. coli ATCC 25922 5,81 6,25

Proteus mirabilis

ATCC 13315

5,81 6,25

Klebsiella pneumonia

ATCC 10031

5,81 6,25

S. aureus ATCC 25923 2,91 3,13


Un estudio llevado a cabo en la Universidad de Montenegro-Serbia evaluó la

actividad antimicrobiana del aceite esencial de Eucalyptus Globulus Labil contra 17

microorganismos, incluyendo bacterias que causan intoxicación alimentaria y

deterioro humano.

En un principio las hojas fueron recogidas desde un punto único. Las hojas fueron

secadas al aire en la sombra a temperatura ambiente y se almacenaron en bolsas de

papel de doble capa en una habitación, protegido de la luz directa, hasta análisis

adicional. La identidad de la planta de especímenes fue confirmada en el

Departamento de Biología, de la Universidad de Montenegro

El agua inicial contenido en las hojas de hierba se encontró que era de 12,7% (w / w

el material vegetal se molió en un molino de café y, después permanecieron en una

bolsa de polipropileno con cierre hermético y se almacenó a 8 ° C durante un

máximo de 3 días antes de utilizarse, con el fin de evitar las pérdidas de los

compuestos volátiles.

Luego el material vegetal (20 g) se sometió a hidrodestilación en un aparato

Clevenger durante 2 h según la Farmacopea IV Yugoslava.

El aceite obtenido se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se midió y se vertió en

recipientes herméticamente cerrados de vidrio oscuro, luego se almacenó en un

congelador a -4 ° C hasta que se analizaron por Cromatografía de gases-acoplada a

espectroscopia de masas (GC-MS)

Con el fin de evaluar la actividad antimicrobiana del aceite esencial de E. globulus,

se utilizaron: como cepas de referencia Staphylococcus aureus ATCC

5923, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC , y Candida

albicans ATCC ; además el aislado de, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella

pneumoniae, Proteus mirabilis, Streptococcus pyogenes, Morganella morganii,

Providencia stuartii, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Citrobacter

freundii,y Salmonella infantis

36


Determinación de la CMI y CMB.-

Para determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) y la mínima bactericida

concentración (CMB) se utilizó el método de micro dilución en caldo Yu et al. (2004).

Todas las pruebas se realizaron en caldo Mueller Hinton suplementado con Tween

80 a una concentración final de 0,5% (v / v).

Brevemente, diluciones dobles seriadas del aceite se prepararon en una placa de

microtitulación de 96 pocillos que osciló entre 0,09 mg / ml a 25,00 mg / ml. Se

añadieron para cada pocillo10 uL de solución indicadora resazurina (preparada por

disolución de un comprimido de 270-mg en 40 ml de agua destilada estéril) y 30 uL

de caldo Mueller Hinton

Finalmente, 10 uL de suspensión bacteriana (10 6UFC / ml) se añadió a cada pocillo

para lograr una concentración de 10 4 CFU / ml.

Dos columnas en cada placa se utilizaron como controles: una columna con un

antibiótico de amplio espectro como control positivo (amykacine), y una columna

que contiene metanol como un control negativo.

Las placas fueron envueltas sin apretar con papel film para que las bacterias no se

deshidraten. El plateado se prepararon por triplicado, y luego fueron colocados en

una incubadora a 37 ° C durante 18-24 horas.

El cambio de color se evaluó entonces visualmente. La concentración más baja a la

que el cambio de color ocurrió fue tomada como el valor CMI. El promedio de 3

valores se calculó para proporcionar el CMI y CMB.

37


La CMI se define como la concentración más baja del aceite esencial en que el

microorganismo no demuestra el crecimiento visible. El crecimiento de

microorganismos se indica mediante turbidez. La CMB se definió como la

concentración más baja del aceite esencial en que el microorganismo se incubó

completamente muerto.

Para evaluar la actividad antimicrobiana de Candida Albicans, se prepararon

soluciones madre en agua para nistatina y en metanol para aceite. La dilución final

fue preparado en medio RPMI 1640, ajustado a pH 7,0 con 0.165M

morpholenepropane-tampón de ácido sulfónico, en el intervalo de 0,09 mg / ml a 25

mg / ml y el tamaño del inóculo de 10 3 CFU / ml. La Bandejas de microdilución se

incubaron en el aire ambiente a 35 ° C.

La CMI se determino visualmente después de 48 h de incubación, como la

concentración más baja del medicamento que no causó ningún crecimiento

detectable. Finalmente se hallo el promedio de 3 valores y se logro calcular el CMI

y la CMB para el aceite de prueba.

38


TABLA N°2

Actividad antimicrobiana del aceite esencial de E. globulus expresada como Concentración mínima inhibitoria (CMI) y concentración mínima bactericida

(CMB)

Fuente: Damjanovic-Vratnica, B. Efecto antimicrobiano de los aceites esenciales aislados de

Eucalyptus globulus Labill. desde Montenegro. En: Revista Checa de Ciencias de la

Alimentación – UZEI. República Checa. Biblioteca Agrícola y Alimentaria, Instituto de

Economía Agrícola y de la Información. Volumen 28 (3)

Podemos apreciar que la concentración mínima inhibitoria CMI osciló entre 0,09

mg / ml y 1,57 mg / ml, con la menor actividad para klebsiella pneumoniae (1,57 mg /

ml), mientras que la actividad más alta se observó contra S. aureus, E.

coli, y S. pyogenes (0,09 mg / ml). El CBM más bajo fue de 0,09 mg / ml

39

|

MICROORGANISMO

ACEITE DE EUCALIPTO (mg/ml)

CMI CMB

E. coli ATCC 25922 0.09 0.09

Proteus mirabilis 0.36 1.57

klebsiella pneumoniae 1.57 6.25

Staphylococcus aureus

ATCC 25923

0.09 0.18

C. albicans ATCC 10231 0.36 0.36

Enterobacteria 0.72 0.72


para E. coli y S. pyogenes, mientras k. pneumoniae tuvo el mayor MBC de 6,25 mg /

ml.

Estos resultados confirman el uso potencial del aceite esencial del Eucalyptus

globulus L. en la industria farmacéutica, el cual puede ser útil como agente

antimicrobiano natural para el tratamiento de numerosas las enfermedades

infecciosas. 20

G. Toxicología del aceite esencial de eucalipto.-

El aceite esencial no es tóxico. Sin embargo, altas dosis del aceite son irritantes

producen convulsión, delirio, dificultad respiratoria, gastroenteritis y hematuria

Los datos sobre las muertes causadas por el consumo de aceite de eucalipto en

los seres humanos no son compatibles, se ha producido casos de muerte después

de el consumo de tan sólo 4-5 ml, mientras que otras personas se han enfermado y

se han recuperado después de consumir 120-220 ml de aceite.

Basado en estudios con roedores, la administración oral DL50 (la dosis por vía oral

consumida que es letal para el 50% de los animales) para el aceite de eucalipto es

muy alta 4.44g/kg por kilogramo de peso (BW) para ratas y la DL50 es menor

cuando sólo se utiliza 1,8-cineol 2.48g/kg (BW) para las ratas. La DL50 por vía

cutánea para los conejos es mayor que 5g/kg BW.

El aceite por vía subcutánea en ratones hembras gestantes (135 mg/kg) durante la

organogénesis (6-15 días) no provoca embriotoxicidad ni fetotoxicidad. 21

El aceite de eucalipto no se cree que es teratogénico o que pueda a contaminar la

leche. Sin embargo, algunos estudios han indicado que el citronelal y felandreno,

que se puede encontrar en algunos Eucalyptus spp. , son débiles mutagenicos .

La. Food and Drug Administration de los EE.UU ha aprobado el uso de aceite de

eucalipto y 1,8-cineol (eucaliptol) para el consumo humano. El Consejo de Europa

también ha aprobado el uso del aceite como aditivo para la alimentación humana (a

un nivel de 15 ppm).

40


En Francia, las infusiones de E. globulus hojas pueden ser registrados como

productos para el tratamiento de afecciones bronquiales benignas humanos sin

estudios toxicológicos.22

2.3 Definición de términos básicos

Inoculación: La inoculación o siembra es poner en contacto los

microorganismos o la muestra Bacteriológica con los medios de cultivo.

Urocultivo: Siembra de un medio de cultivo con una pequeña cantidad de

orina extraída asépticamente.

Tenesmo: deseo continuo, doloroso e ineficaz de orinar

Polaquiuria: Frecuencia exagerada de las micciones que no coincide

necesariamente con el aumento del volumen total de orina

Disuria: Expulsión difícil, dolorosa e incompleta de la orina.

Fimbrias: Conjunto de filamentos o apéndices filiformes cortos que rodean

algunas bacterias gramnegativas.

Actividad ureásica: Capacidad de aumentar el PH

Citotóxico: Que posee la capacidad de destruir células, como la que

poseen los macrófagos o los linfocitos K.

Febrífugo: Propiedad de una sustancia o planta medicinal que sirve para

hacer bajar la fiebre.

Rubefaciente: Que provoca el enrojecimiento de la piel o de las mucosas

con las que entra en contacto, en especial a través de la dilatación de los

capilares.

Antihelmíntico: Dícese del fármaco que es capaz de expulsar o matar los

gusanos intestinales. También se denomina vermífugo.

41


CAPÍTULO IIIMETODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

3.1 Diseño de la investigación.-

3.1.1 Tipo de investigación:

Este trabajo es una investigación Pura ya que parte de un marco teórico y

permanece en él, su finalidad es formular nuevas teorías mediante la recolección de

información.

Es del tipo Descriptiva, porque está orientada a evaluar los efectos del aceite

esencial sobre un determinado grupo de bacterias y describir la concentración

inhibitoria y bactericida.

3.1.2 Método:

Inductivo, recolección de información

3.2 Población y muestreo de la investigación.- Marco poblacional: Planta de Eucalyptus globulus Labill “Eucalipto”

3.3 Variables e indicadores.-

Variable independiente:

Variable n° 1: Concentración mínima inhibitoria (CMI)

Variable n° 2: Concentración mínima bactericida (CMB)

Indicadores: mg/ml

42


3.4 Técnicas e instrumentos de recolección de datos.-

3.4.1 Técnicas: Recopilación de datos.

3.4.2 Instrumentos:

Compilación y revisión de fuentes primarias de información: tesis, monografías; para

establecer posteriores conclusiones.

43


Referencias Bibliográficas:

1.- Carranza Marco A. R., Rodríguez H Diana., Díaz F Jesús. Etiología y resistencia

bacteriana de las infecciones urinarias. Revista Sociedad Peruana Medicina Interna

2003.Volumen 16(04) .Pág. 6 - 10

2.- Libertad Alzamora, Liliana Morales, Lourdes Armas, Gilma Fernández .Medicina

tradicional en el Perú: Actividad antimicrobiana in vitro de los aceites esenciales extraídos

de algunas plantas aromáticas. Revista: Anales de la facultad de Medicina. Universidad

Mayor de San Marcos. Volumen 62(02) Pág. 156-161

3.-Valdevenito S. Juan Pablo. Infección urinaria recurrente en la mujer. Rev. Chilena

Infectologia. 2008; Volumen 25(4): Pag.268-276.

4.- Muder RR, Brennen C, Rihs JD et al. Isolation of Staphylococcus Aureus from the

Urinary Tract: Association of Isolation with Symptomatic Urinary Tract Infection and

Subsequent Staphylococcal Bacteremia. Clinical Infectious Diseases 2006 Volumen

42(1).Pag.46-50.

5.- Gutierrez Valdivia Ranulfo .Mamani Romaní Wilmar. Efecto in vitro del Eucaliptus

globulus Labill (eucalipto) sobre Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella

pneumoniae, Proteus vulgaris, Shigella flexneri y Pseudomona aeruginosa, Universidad

Católica Santa María. Arequipa-2005

6.- CIDEU .Centro de investigación y documentación del eucalipto. Universidad de Huelva

.2006

7.- Rolando Quert Álvarez. Aceites Esenciales De Eucalipto. Revista Cubana Farmacia

Volumen 35 (1)2009. Pag.29-35.

8.- Damjanovic-Vratnica, B. Efecto antimicrobiano de los aceites esenciales aislados de

Eucalyptus globulus Labill. desde Montenegro. En: Revista Checa de Ciencias de la

Alimentación – UZEI. República Checa. Biblioteca Agrícola y Alimentaria, Instituto de

Economía Agrícola y de la Información. Volumen 28 (3) Pag. 277-284.

44

actividad antimicrobiana del aceite de eucalipto en infecciones urinarias by jesÚs

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