PLATELIA™ CANDIDA AB/AC/AK96 PRUEBAS 62799

PLATELIA™ CÁNDIDA AB/AC/AK ES UN ENSAYOINMUNOENZIMÁTICO INDIRECTO REALIZADO ENMICROPLACA PARA LA DETECCIÓN DEANTICUERPOS ANTIMANANO DE CÁNDIDAEN SUERO.

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1- USO PREVISTO Platelia™ Cándida Ab/Ac/Ak es un ensayo inmunoenzimático indirectorealizado en microplaca para la detección cuantitativa de anticuerposantimanano de Cándida en muestras de suero.

2- INDICACIONES DE USO El diagnóstico de candidiasis invasiva debe basarse en una combinación deesta prueba de anticuerpos antimanano y una prueba de antígeno circulantemanano (Platelia™ Cándida Ag, código 62798). La combinación de estas dospruebas permite un diagnóstico más temprano y mejora la sensibilidad deldiagnóstico como parte de un método diagnóstico completo que integradatos clínicos y micológicos además de la evaluación de los factores deriesgo intrínsecos e iatrogénicos 13. Este uso combinado también formaparte de un sistema de seguimiento clínico y en laboratorio del pacientecomo ayuda a la toma de decisiones sobre el tratamiento.

3- RESUMEN Y EXPLICACIÓN Las infecciones por Cándida son la forma más frecuente de infecciónfúngica nosocomial 1. Las formas invasivas representan las infecciones másgraves, con tasas de mortalidad que varían entre el 30 % y el 70 % en losindividuos inmunodeprimidos 11. El diagnóstico de infecciones invasivas porCándida es difícil de establecer debido a que los síntomas clínicos son pocoespecíficos y a que los cultivos son poco sensibles, a pesar de losimportantes avances conseguidos recientemente en este campo. Eldiagnóstico de candidiasis invasiva, que conduce al inicio del tratamientoadecuado, suele basarse en una combinación de consideraciones clínicas,micológicas y de factores de riesgo 8. El diagnóstico de laboratorio resultaespecialmente importante en este contexto y el control serológico de losanticuerpos contra la Cándida ayuda a guiar o confirmar el diagnósticoclínico de forma complementaria a los resultados micológicos. Platelia™ Cándida Ab/Ac/Ak detecta los anticuerpos dirigidos contra elantígeno manano de Cándida, el principal componente de la pared celularde las levaduras pertenecientes al género Cándida 2. El manano, unindicador de candidiasis 3, 4, es un polisacárido altamente inmunógeno 2.

4- PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO Platelia™ Cándida Ab/Ac/Ak es un ensayo inmunoenzimático indirecto dedos fases realizado en microplaca que permite la detección cuantitativa deanticuerpos antimanano en suero humano.

Composant Contenu Quantité

R1 MicrowellStripPlate

Placa de tiras de micropocillos :- 96 pocillos (12 tiras de 8 pocillos cada una)

recubiertos con antígeno manano purificadode C. albicans

1 placa/ 12 x 8 pocillos

R2 ConcentratedWashing

Solution (10x)

Solución de lavado concentrada (10x) :- Tampón Tris-NaCl (pH 7,4)- 1 % Tween® 20- Conservante: 0,01 % timerosal

1 x 100 mL

R3 NegativeControlSerum

Suero de control negativo :- Suero humano negativo en anticuerpos

antimanano- Negativo en anticuerpos antiVIH-1, antiVIH-2

y antiVHC, así como en antígeno HBs - Conservante: < 0,1 % azida sódica

1 x 0,250 mL

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Las muestras de suero diluidas se añaden a los pocillos recubiertos conantígeno manano purificado de C. albicans y se incuban. Las tiras se lavanpara eliminar todo el material que no se haya ligado. Se añade el conjugadoa cada pocillo y se incuba. Se forma un complejo manano– anticuerpohumano antimanano– anticuerpo de cabra anti-Ig humana/ peroxidasa enpresencia del antígeno manano. Las tiras se lavan para eliminar todo elmaterial que no se haya ligado. A continuación se añade la solución desustrato, que reaccionará con los complejos ligados al pocillo y dará lugar auna reacción de color azul. La reacción enzimática se para al añadir ácido,que cambia el color de azul a amarillo. La absorbancia (densidad óptica) delas muestras, controles y puntos de rango se determina con unespectrofotómetro configurado a una longitud de onda de 450 y 620 nm.

5- REACTIVOS Platelia™ Cándida Ab/Ac/Ak: nº de producto 62799 (96 pruebas) Almacene el kit entre +2ºC y +8ºC. Antes de usarlos, deje que todos losreactivos alcancen la temperatura ambiente (entre +18ºC y +25ºC).Después del uso, vuelva a poner todos los reactivos a una temperaturaentre +2ºC y +8ºC. Vuelva a poner las tiras o placas no usadas en la bolsay ciérrela. No saque el desecante. Las tiras deberían usarse en un plazode 5 semanas después de abrir y volver a cerrar la bolsa. Una vez diluida,la solución de lavado puede guardarse durante 14 días entre +2ºC y +8ºC. Los demás reactivos son estables hasta la fecha de caducidad,incluso una vez abiertos. Se suministra suficiente cantidad de reactivospara realizar 96 pruebas en un máximo de 6 tandas.

Componente Contenidos Cantidad

R4 CalibratorSerum

Suero calibrador :- Solución con anticuerpos humanos

antimanano derivada de un suero negativo enanticuerpos antiVIH-1, antiVIH-2 y antiVHC,así como en antígeno HBs. Se usa para lapreparación de los puntos de rango (véase elapartado 10, “Procedimiento”)

- Conservante: < 0,1 % azida sódica

1 x 0,250 mL

R5 PositiveControlSerum

Suero de control positivo :- Suero humano con anticuerpos antimanano- Negativo en anticuerpos antiVIH-1, antiVIH-2 y

antiVHC, así como en antígeno HBs- Conservante: < 0,1 % azida sódica

1 x 0,250 mL

R6 Conjugate Conjugado (listo para usar): - Anticuerpo de cabra anti-Ig humana/

marcado con peroxidasa - Conservante: 0,01 % timerosal

1 x 12 mL

R7 SampleDiluent

Diluyente de muestras (listo para usar): - Conservante: 0,01 % timerosal

2 x 100 mL

R8 TMB Substrate

Buffer

Tampón sustrato TMB (listo para usar): - Solución de ácido cítrico y acetato sódico con

pH 5,2 - 0,009 % de peróxido de hidrógeno - 4 % de dimetilsulfóxido (DMSO)

1 x 60 mL

R9 Chromogen:TMB

Solution

Solución cromógena de TMB (concentrada): - Solución al 90 % de dimetilsulfóxido (DMSO)

con 0,6 % de tetrametilbencidina (TMB)*

1 x 1 mL

R10 StoppingSolution

Solución de interrupción (lista para usar) : - Ácido sulfúrico (H2SO4) 1,5 N

1 x 12 mL

Plate sealers Tapas para placa :- Láminas adhesivas para microplacas

1 x 4 láminas

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* Nota: La TMB (tetrametilbencidina) es un cromógeno no carcinógeno y nomutágeno para la peroxidasa.

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6- DVERTENCIAS PARA EL USUARIO 1. Para uso diagnóstico in vitro. 2. Para uso profesional exclusivamente. 3. No se recomienda utilizar este kit con muestras que no sean de suero

humano. 4. Mediante pruebas homologadas en Francia se ha analizado el material

de origen humano utilizado en la preparación de los reactivos,resultando negativo en anticuerpos antiVIH 1, antiVIH 2 y antiVHC, asícomo en antígeno HBs. Sin embargo, dado que ningún método puedegarantizar por completo la ausencia de agentes infecciosos, losreactivos de origen humano y todas las muestras de pacientes deberánconsiderarse como potencialmente infecciosos y deberán manipularsecon las precauciones habituales.

5. Utilice ropa protectora y guantes desechables cuando manipule reactivosdel kit y muestras de pacientes. Lávese las manos a conciencia despuésde realizar la prueba.

6. No pipetee con la boca. 7. No fume, beba ni coma en zonas donde se manipulen muestras o

reactivos del kit. 8. Evite las salpicaduras de muestras o de soluciones que las contengan. 9. Los derrames biológicos que no contengan ácido deberán limpiarse a

fondo con un desinfectante eficaz. Pueden usarse desinfectantescomo: solución de lejía al 10 % (solución al 0,5 % de hipocloritosódico), etanol al 70 % o Wescodyne™ al 0,5 % (lista no exhaustiva).Los derrames que contengan ácido deberán limpiarse o neutralizarsecon bicarbonato sódico antes de limpiarlos con un desinfectantequímico. Los materiales usados para limpiar derrames deberándesecharse como residuos biopeligrosos.

ATENCIÓN : No introduzca soluciones con lejía en el autoclave.

10. Deseche todas las muestras y materiales utilizados para realizar la pruebacomo si tuvieran un agente infeccioso. Deberán cumplirse todos losrequisitos vigentes sobre desecho de residuos.

11. Algunos reactivos contienen azida sódica como conservante. La azidasódica puede formar azidas de plomo o cúpricas en las cañerías dellaboratorio. Estas azidas son explosivas. Para evitar la acumulación deazidas, aclare abundantemente las cañerías con agua cuando desechepor el desagüe soluciones que contengan azida, previa inactivación deéstas.

Xi-irritante

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12. ATENCIÓN : Ácido sulfúrico (H2SO4) 1,5N y DMSO (dimetilsulfóxido) al 90 %R36/38: Irrita los ojos y la piel.S2-26-30: Manténgase fuera del alcance de los niños. Encaso de contacto con los ojos, lávense inmediata yabundantemente con agua y acúdase a un médico. No añadirnunca agua a este producto.

13. Evite el contacto del tampón sustrato, el cromógeno y la solución deinterrupción con los ojos, la piel y las mucosas (riesgo de intoxicación,irritación y quemaduras).

14. Ficha de seguridad del material disponible previa petición.

7- PRECAUCIONES PARA EL USUARIO 1. LAS MUESTRAS DE SUERO CONGELADAS QUE HAYAN ESTADO

ALMACENADAS EN CONDICIONES DESCONOCIDAS PUEDEN OFRECERRESULTADOS POSITIVOS FALSOS DEBIDO A LA CONTAMINACIÓN CONHONGOS O BACTERIAS.

2. No use el kit ni ninguno de sus reactivos después de la fecha decaducidad indicada.

3. Con la excepción de la solución de lavado 10x (R2) y de la solución deinterrupción (R10), no mezcle reactivos de otros kits que tengannúmeros de lote distintos.

4. Antes de usar los reactivos, deje que se ajusten a la temperaturaambiente durante 15 minutos.

5. Mezcle bien mientras reconstituye los reactivos, con cuidado de evitarla contaminación microbiana.

6. No lleve a cabo la prueba en presencia de vapores reactivos (ácidos,álcalis, aldehídos) o polvo, que podrían alterar la actividad enzimáticadel conjugado.

7. Utilice recipientes de polipropileno limpios y desechables para prepararla solución sustrato cromógena de reacción. Si tuvieran que usarseartículos de vidrio, éstos deberán lavarse primero en ácido clorhídrico1 N, aclararse con agua destilada y secarse.

8. Para el pipeteado manual de controles y muestras, utilice puntas depipeta individuales para evitar arrastrar las muestras.

9. Para asegurarse de que los pocillos se han lavado bien, respete elnúmero recomendado de ciclos de lavado y asegúrese de que lospocillos se llenen y vacíen completamente. No deberá hacerse el lavadomanualmente con un bote blando.

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10. No permita que la microplaca se seque entre el final del ciclo de lavadoy la adición de los reactivos.

11. No utilice el mismo envase para las soluciones de conjugado y desustrato.

12. No permita que la solución de conjugado o la solución sustratocromógena de reacción entren en contacto con metal o con ionesmetálicos.

13. Evite la exposición de la solución cromógena o de la solución sustratocromógena de reacción a una luz fuerte durante el almacenamiento o laincubación. No permita que las soluciones cromógenas entren encontacto con un agente oxidante.

14. Evite el contacto de la solución de interrupción con todo agenteoxidante. No permita que la solución de interrupción entre en contactocon metal o con iones metálicos.

15. Limite la exposición de las soluciones (sueros, solución de tratamiento,conjugado) o de los recipientes abiertos (placas, tubos, pipetas) al aire.

16. No devuelva el conjugado no usado a su recipiente original. 17. La solución sustrato cromógena de reacción debe ser incolora. La

aparición del color azul después de la dilución indica que el reactivoestá contaminado y no debe usarse. Deséchelo y prepare un reactivonuevo.

8- PREPARACIÓN Y ALMACENAMIENTO DE LOS REACTIVOS

Placa de tiras de micropocillos (R1)Una vez abierta la bolsa de la placa, las tiras de micropocillos sonestables durante 5 semanas si se almacenan entre +2ºC y +8ºC en subolsa original cuidadosamente cerrada y con el desecante dentro.

Solución de lavado (R2)Prepare la solución de lavado funcional según sea necesario añadiendouna parte de solución de lavado concentrada a 9 partes de agua estérildestilada. Prepare una cantidad suficiente de solución de lavado funcionalpara completar la prueba (80 mL para una tira = 8 mL de R2 + 72 mL deagua destilada). La solución de lavado funcional puede almacenarse entre +2ºC y +8ºCdurante 14 días. Una vez abierta, la solución de lavado concentrada esestable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta si sealmacena entre +2ºC y +25ºC y no se produce contaminación.

Solución sustrato cromógena de reacción (R8+R9)Prepare la solución de reacción del sustrato y el cromógeno añadiendouna parte de cromógeno-solución TMB (R9) a 50 partes de tampónsustrato TMB (R8). Prepare 2 mL de solución de reacción del sustrato y elcromógeno por tira: 40 µL de R9 + 2 mL de R8. La solución es estable durante 6 horas si se almacena en un lugar oscuroy a temperatura ambiente (entre +18ºC y +25ºC). Una vez abiertos, losreactivos R8 y R9 son estables hasta la fecha de caducidad indicada en laetiqueta si se almacenan entre +2ºC y +8ºC y no se producecontaminación.

Suero de control negativo (R3), calibrador (R4), suero de controlpositivo (R5), conjugado (R6), diluyente de muestras (R7) y soluciónde interrupción (R10)Una vez abiertos, los reactivos R3, R4, R5, R6 y R10 son estables hasta lafecha de caducidad indicada en la etiqueta si se almacenan entre +2ºC y+8ºC y no se produce contaminación.

9- RECOGIDA DE MUESTRAS Extraiga las muestras de sangre según los procedimientos estándar delaboratorio. La prueba se realiza a muestras de suero recogidas en tubossecos. Las muestras de suero no deberán estar contaminadas poresporas fúngicas ni bacterias. Transporte y almacene las muestras entubos sellados y sin contacto con el aire. Una vez abiertas, las muestraspueden almacenarse entre +2ºC y +8ºC durante 24 horas antes de realizarla prueba. Para un almacenamiento más prolongado, almacene el suero a-70ºC. Las muestras de suero pueden someterse a un único ciclo de congelacióny descongelación. Las muestras previamente congeladas deben mezclarse bien después dela descongelación y antes de la prueba.No caliente las muestras.No se han realizado pruebas sobre las interferencias con albúmina,bilirrubina, lípidos ni hemoglobina.No descomplemente los sueros.

10-PROCEDIMIENTO

Materiales suministrados Véase el apartado REACTIVOS.

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Materiales necesarios pero no suministrados 1. Agua estéril destilada o desionizada para diluir la solución de lavado

concentrada. 2. Papel absorbente. 3. Guantes desechables. 4. Gafas protectoras. 5. Hipoclorito sódico (lejía) y bicarbonato sódico. 6. Pipetas o multipipetas, ajustables o fijas, para medir y dispensar 2 µL,

100 µL y 400 µL. 7. Tubos para la dilución de las muestras de suero.8. Agitador vórtex. 9. Incubadora para microplacas a 37ºC ±1ºC

10. Lavadora para microplacas semiautomática o automática. 11. Lector de microplacas equipado con filtros de 450 nm y 620 nm. 12. Recipiente para residuos contaminados.

Comentarios sobre el procedimiento Para validar los resultados de la prueba, deberán analizarse los controlesnegativos y positivos y los puntos de rango con cada ejecución.

Preparación de los puntos de rango Las concentraciones de anticuerpos antimanano se expresan en UA/mL(unidades arbitrarias/mL) :• punto de 20 UA/mL: dilución 1/441 de suero calibrador R4 en diluyente de

muestras R7; dos diluciones 1/21 consecutivas (40 µL R4 + 800 µL R7).• Punto de 10 UA/mL: dilución 1/2 del punto de 20 UA/mL en diluyente de

muestras R7 (200 µL + 200 µL R7).• Punto de 5 UA/mL: dilución 1/4 del punto de 20 UA/mL en diluyente de

muestras R7 (100 µL + 300 µL R7).• Punto de 2,5 UA/mL: dilución 1/8 del punto de 20 UA/mL en diluyente de

muestras R7 (50 µL + 350 µL R7).

Preparación de las muestras y de los sueros de control• dos diluciones 1/81 consecutivas (10 µL de suero + 800 µL R7).

Procedimiento de ensayo inmunoenzimático Siga estrictamente el protocolo propuesto.Cumpla las buenas prácticas de laboratorio.1. Antes de usar los reactivos, deje que se ajusten a la temperatura

ambiente (entre +18ºC y +25ºC) durante 15 minutos.

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2. Prepare la solución de lavado funcional, la solución sustrato cromógenade reacción, las muestras, los controles negativo y positivo y los puntosde rango.

3. Prepare un diagrama para la identificación de los sueros de control, lospuntos de rango y las muestras en la microplaca. Los sueros de control y los puntos de rango (2,5, 5, 10 y 20 UA/mL)pueden colocarse según este plan :- A1: suero de control negativo (R3)- B1: punto de rango de 2,5 UA/mL- C1: punto de rango de 5 UA/mL- D1: punto de rango de 10 UA/mL - E1: punto de rango de 20 UA/mL (R4)- F1: suero de control positivo (R5)- G1: suero de control positivo (R5)

4. Saque el soporte de placas y las tiras de micropocillos (R1) de la bolsade la placa. Vuelva a meter las tiras que no vayan a usarse en la bolsacon el desecante y cierre la bolsa.

5. Dispense 100 µL de suero diluido por pocillo, incluidos los sueros decontrol y los puntos de rango.

6. Cubra la placa con una tapa para placas (o de alguna otra forma queimpida la evaporación) asegurándose de que toda la superficie quedecubierta y hermética.

7. Incube la microplaca en una incubadora para microplacas en secodurante 60 ± 5 minutos a 37ºC (±1 ºC).

8. Quite la tapa para placas. Aspire el contenido de todos los pocillos a uncontenedor para residuos que contenga hipoclorito sódico. Lave laplaca 4 veces. Después del último lavado, ponga la microplaca bocaabajo y golpéela suavemente sobre papel absorbente para eliminar ellíquido restante.

9. Mezcle el contenido del frasco de conjugado (R6) poniéndolo bocaabajo antes de usarlo.

10. Añada 100 µl de conjugado (R6) a cada pocillo. 11. Cubra la placa con una tapa para placas (o de alguna otra forma que

impida la evaporación) asegurándose de que toda la superficie quedecubierta y hermética.

12. Incube la microplaca en una incubadora para microplacas en secodurante 60 ± 5 minutos a 37ºC (± 1ºC).

13. Quite la tapa para placas. Aspire el contenido de todos los pocillos a uncontenedor para residuos que contenga hipoclorito sódico. Lave laplaca 4 veces. Después del último lavado, ponga la microplaca bocaabajo y golpéela suavemente sobre papel absorbente para eliminar ellíquido restante.

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14. Añada rápidamente 200 µL de solución sustrato cromógena dereacción (R8 + R9) a cada pocillo, evitando la exposición a la luz fuerte.

15. Incube la microplaca en la oscuridad durante 30 ± 5 minutos atemperatura ambiente (entre +18ºC y +30ºC). No utilice películaadhesiva durante esta fase de incubación.

16. Añada 100 µl de solución de interrupción (R10) a cada pocillo,siguiendo el mismo orden que cuando añadió la solución sustratocromógena de reacción. Mezcle bien.

17. Seque completamente la base de cada placa. 18. Lea la densidad óptica de cada pocillo a 450 nm (filtro de referencia de

620 nm). Las microplacas deberán leerse en un plazo de 30 minutosdespués de añadir la solución de interrupción.

11-CONTROL DE CALIDAD (CRITERIOS DE VALIDEZ) Deberán cumplirse los siguientes criterios para validar el procedimiento dela prueba :

• Valores de densidad óptica :0,400 < DO del punto de rango de 5 UA/mL < 1,200

• Relaciones :DO (punto de rango de 20 UA/mL) / DO (punto de rango de 5 UA/mL) > 2DO (punto de rango de 10 UA/mL) / DO (punto de rango de 5 UA/mL) > 1,4DO (punto de rango de 2,5 UA/mL) / DO (punto de rango de 5 UA/mL) < 0,8

• Concentración de anticuerpos antimanano :Concentración de R3 < 2,5 UA/mL.Concentración de R5 igual a la concentración indicada en el vial± 2,5 UA/mL.

12- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Establecimiento de la curva estándar

La curva estándar se representa con 4 puntos de rango (2,5, 5, 10 y20 UA/mL) preparados a partir del suero calibrador R4. Los controlespositivo (R5) y negativo (R3) no se incluyen en la curva.Para lograr mayor precisión, trace una curva sigmoidea con extrapolaciónrepresentando la concentración en UA/mL en el eje x (escala logarítmica) yla densidad óptica en el eje y (escala lineal).Si el lector de placas no permite este tipo de representación, trace unacurva que conecte los distintos puntos de rango.

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Determinación de la concentración (UA/mL) de anticuerposantimanano en los sueros analizados

Puede usarse la curva de calibración para determinar la concentración deanticuerpos antimanano (en UA/mL) para cada muestra analizada.

Interpretación de los resultados

• Los sueros con una concentración de anticuerpos antimananoinferior a 5 UA/mL (C < 5) se consideran “negativos” en presencia deanticuerpos antimanano.

• Los sueros con una concentración de anticuerpos antimanano entre5 y 10 UA/mL (5 ≤ C ≤ 10) se consideran “intermedios” en presenciade anticuerpos antimanano.

• Los sueros con una concentración de anticuerpos antimanano igual osuperior a 10 UA/mL (C ≥ 10) se consideran “positivos” en presenciade anticuerpos antimanano.

• Los puntos de rango usados para trazar la curva de calibración nopermiten determinar de forma precisa las concentraciones superiores a20 UA/mL. La prueba deberá repetirse después de diluir el suero a 1/4en diluyente de muestras (R7) antes de realizar la dilución indicada enlas instrucciones (véase el apartado 10, “Procedimiento”) para obteneruna determinación más precisa de la concentración de los suerosfuertemente positivos: la concentración obtenida en esta prueba deberámultiplicarse por 4.

La determinación del nivel de anticuerpos antimanano del suero es unelemento importante para definir la situación inmune del paciente frente a laCándida. Los anticuerpos antimanano indican la presencia de levaduraspertenecientes al género Cándida en el huésped y deben interpretarsecomo un factor de riesgo adicional para la candidiasis invasiva en pacientesque ya tienen un riesgo elevado de padecerla 5, 13. Una variación brusca delos niveles de anticuerpos puede ser una señal de avance hacia unainfección activa, aunque deberá interpretarse en el contexto de los datosclínicos del paciente.Para el diagnóstico de la candidiasis invasiva debe combinarse elseguimiento de los niveles de anticuerpos con la determinación de losniveles de antígeno manano circulante.Un control serológico regular resulta más informativo que un único resultadoy permite el seguimiento de los pacientes de alto riesgo 7, 12.Se recomienda realizar pruebas diagnósticas regulares a pacientes de altoriesgo para aumentar la sensibilidad y la positividad temprana de la prueba.

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13-LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO1. Una prueba con resultado negativo no puede descartar el diagnóstico de

candidiasis invasiva. En pacientes con un sistema inmunológicodebilitado resulta difícil interpretar la ausencia de anticuerpos.

2. Una prueba negativa en anticuerpos antimanano deberá interpretarsetambién junto con los resultados de pruebas de detección de antígenomanano: incluso en el caso de la candidiasis invasiva, es más difícildetectar el antígeno en pacientes que han dado positivo en anticuerposantimanano (véase el apartado 14, “Características específicas derendimiento”).

3. Deben seguirse el procedimiento de Platelia™ Cándida Ab/Ac/Ak y suinterpretación de resultados cuando se analice la presencia deanticuerpos antimanano en muestras. Se recomienda al usuario del kitque lea el prospecto atentamente antes de realizar la prueba. Enespecial, deberá seguirse el procedimiento de la prueba atentamenteen lo referente al pipeteado de muestras y reactivos, el lavado deplacas y los tiempos de las fases de incubación.

4. De no añadirse las muestras o reactivos según se especifica en elprocedimiento podría obtenerse un resultado negativo falso. Deberíanconsiderarse la posibilidad de repetir las pruebas con muestrasadicionales cuando se produzca un error de procedimiento.

5. Es posible que los pocillos con muestras de pacientes negativas secontaminen con pocillos con muestras de pacientes positivas si elcontenido de un pocillo pasa a otro debido a una manipulación bruscade la microplaca o a una mala técnica de pipeteado al añadir losreactivos.

14-CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DE RENDIMIENTO

14.1 Estudios de reproducibilidad

Los coeficientes de variación calculados a partir de los estudiosintraensayo (treinta repeticiones) e interensayo (cinco días distintos)confirman la buena reproducibilidad de la prueba (coeficientes devariación (UA/mL) < 10 % para muestras positivas en estudios intraensayoy coeficientes de variación < 17,5 % para muestras positivas en estudiosinterensayo).

• Variabilidad intraensayo :Se analizaron cuatro sueros (uno negativo, dos intermedios conconcentraciones de 8,5 UA/mL y 9,7 UA/mL, y uno positivo con unaconcentración de 14,4 UA/mL) en 30 repeticiones. Los coeficientes devariación fueron del 3,6 %, 4,8 %, 6,9 % y 5,4%, respectivamente.

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• Variabilidad interensayo :Se analizaron cuatro sueros negativos, un suero intermedio y dos suerospositivos en cinco series realizadas en días distintos. Los coeficientes devariación fueron < 17,5% para las concentraciones de los sueros positivose intermedios.

14.2 Pruebas clínicas

ESPECIFICIDAD Se realizaron pruebas clínicas a muestras de suero de 700 pacienteshospitalizados para evaluar la especificidad de Platelia™ CándidaAb/Ac/Ak. Existía una correlación del 83 % (coeficiente de Spearman) conla detección inmunofluorescente de anticuerpos 10.Los resultados obtenidos con las distintas poblaciones se resumen en lasiguiente tabla :Concentraciones de anticuerpos antimanano obtenidas con Platelia™

Cándida Ab/Ac/Ak en las distintas poblaciones de pacientes analizadas :

SENSIBILIDADSe realizaron pruebas clínicas en cuatro hospitales universitarios deFrancia para evaluar la sensibilidad de Platelia™ Cándida Ab/Ac/Ak. Elestudio se realizó de manera retrospectiva usando un total de377 muestras de suero extraídas a 117 pacientes de distintas unidadesdel hospital: quirófano, hematología, cuidados intensivos, quemados...Se aislaron levaduras de Cándida de cultivos de sangre o muestrasprofundas de estos pacientes 6, 9, 10.

Concentración (UA/mL)

Categoría de paciente

Número depacientes

(nº desueros)

C < 2,5 2,5 ≤ C< 5

5 ≤ C < 10

10 ≤ C < 20

C ≥ 20

No seleccionado 173 (173)82,1% (142)

11% (19)

4,6% (8)

1,7% (3)

0,6% (1)

Hospitalizado nocolonizado

33 (62)84,9%

(28)9,1%

(3)3,0%

(1)3,0%

(1)

Hospitalizado,colonizado por Candida

102 (221)20,6%

(21)11,8%

(12)31,4%

(32)22,5%

(23)13,7%

(14)

Candidiasis invasiva 117 (384)25,6%

(30)8,5% (10)

20,5% (24)

16,2% (19)

29,2% (34)

Especie de Cándidaaislada

Número depacientes

(nº de sueros)

Sensibilidad

C ≥ 10C ≥ 10 y

5 ≤ C < 10

C. tropicalis 10 (72) 66,7 % 76,7 %

C. glabrata 12 (31) 30,0 % 46,7 %

C. albicans 75 (219) 71,0 % 88,3 %

C. kefyr 2 (5) 50,0 % 50,0 %

C. parapsilosis 10 (29) 25,0 % 45,0 %

C. krusei 8 (21) 42,9 % 62,9 %

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En esta población de pacientes, la sensibilidad general de Platelia™

Cándida Ab/Ac/Ak fue del 60% (excepto en el 16 % de los pacientes,cuyos sueros tenían una concentración de anticuerpos antimanano entre5 y 10 /mL y se consideran como intermedios en presencia de anticuerposantimanano). Dependiendo de la especie de Cándida aislada, la sensibilidad varía de lasiguiente forma :

Estos estudios clínicos demostraron también la utilidad de combinar ladetección de los anticuerpos antimanano con Platelia™ Cándida Ab/Ac/Ak ydel antígeno manano con Platelia™ Cándida Ag.La detección serológica combinada del antígeno manano y de los anticuerposantimanano en 106 pacientes con candidiasis invasiva 9, 10 consigue unasensibilidad del 84,8 % (exceptuando el 6,6 % de los pacientes con unarespuesta intermedia).No sólo se demostró que estas pruebas son complementarias dentro de lapoblación de alto riesgo, sino que se observa un equilibrio de positividad deambas pruebas en el mismo paciente durante el mismo episodio de infecciónpor Cándida, posiblemente correlacionado con la prognosis de la infección 14.

15-CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTETodos los reactivos que fabricamos se preparan siguiendo nuestrosistema de calidad, que comienza en el momento de la recepción de lamateria prima y va hasta la comercialización final del producto.Cada lote es sometido a un control de calidad y únicamente sale almercado si cumple con los criterios de aceptación. En nuestra compañía se mantienen los registros relacionados con laproducción y control de todos y cada uno de los lotes.

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