Platelia SARS-CoV-2 Total Ab 1 placa – 96 72710 El ensayo Platelia SARS-CoV-2 Total Ab es una prueba de diagnóstico in vitro semi-cuantitativa, en un formato de captura de antígeno en un solo paso, para la detección de anticuerpos de IgM/IgA/IgG contra el SARS-CoV-2 en muestras humanas de suero y plasma (EDTA, heparina, ACD o citrato).

16008267 – 2020/04

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Índice

1 USO PREVISTO ......................................................................................................... 3

2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA ........................................................... 3

3 PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO........................................................................... 4

4 REACTIVOS ............................................................................................................... 4

5 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES ....................................................................... 5

6 MUESTRAS ................................................................................................................ 7

7 PROCEDIMIENTO ...................................................................................................... 8

8 LIMITACIÓN DE LA PRUEBA .................................................................................. 10

9 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO .............................................................. 10

10 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................................... 13

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1 USO PREVISTO

El ensayo Platelia SARS-CoV-2 Total Ab es una prueba de diagnóstico in vitro semi-cuantitativa, en un formato de captura de antígeno en un solo paso, para la detección de anticuerpos de IgM/IgA/IgG contra el SARS-CoV-2 en muestras humanas de suero y plasma (EDTA, heparina, ACD o citrato). Esta prueba supone una ayuda para el diagnóstico de pacientes con síntomas que sugieren una infección causada por SARS-CoV-2. En combinación con el cuadro clínico inicial y las pruebas mediante otros métodos (RT-PCR, TAC, detección específica para anticuerpos anti-SARS-CoV-2 IgM/IgA/IgG), Platelia SARS-CoV-2 Total Ab puede servir para ayudar a diagnosticar la COVID-19. Esta prueba también se puede utilizar como herramienta de cribado para detectar la presencia de anticuerpos totales anti-SARS-CoV-2 y determinar el estado inmunitario de los individuos respecto a la exposición al SARS-CoV-2. Platelia SARS-CoV-2 Total Ab se puede usar con sistemas manuales o automatizados.

2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

El coronavirus (CoV) es un virus encapsulado que contiene ARN de una sola hebra de sentido positivo. El SARS-CoV-2, conocido anteriormente como 2019-nCoV, es un coronavirus de reciente aparición que afecta principalmente a las vías respiratorias y que puede provocar el síndrome respiratorio agudo severo (SARS). La enfermedad subyacente causada por este virus es la COVID-19. Los coronavirus han sido responsables de varios brotes en el mundo en las dos últimas décadas. En 2003 y 2014, hubo brotes de coronavirus principalmente en Asia (SARS-CoV) y en Oriente Medio (MERS-CoV) respectivamente. Antes de la nueva aparición del SARS-CoV-2, se sabía de seis coronavirus que afectan a los seres humanos (SARS-CoV, MERC-CoV y de otros cuatro coronavirus que causan síndromes respiratorios leves de las vías altas y bajas). El SARS-CoV-2 se identificó por primera vez en diciembre de 2019, en la ciudad china de Wuhan, en la provincia de Hubei, después de que varios pacientes desarrollaran una neumonía grave similar a la causada por el SARS-CoV. Desde entonces, el virus se ha propagado rápidamente por todo el mundo y en marzo de 2020, la OMS calificó oficialmente la COVID-19 de pandemia. La transmisión del virus entre personas supuso una rápida propagación de la COVID-19 y un gran número de pacientes que requerían cuidados intensivos, lo que llevó a las autoridades de todo el mundo a establecer medidas de confinamiento. El periodo de incubación oscila entre 2 y 14 días. El virus se ha detectado en secreciones respiratorias, que se consideran el principal medio de transmisión. Una vez que las partículas víricas entran en las vías respiratorias, el virus se adhiere a las células pulmonares a través de los receptores ECA-2,a lo que le sigue la endocitosis. El SARS-CoV-2 también se puede transmitir por vía fecal. Los pacientes positivos para SARS-CoV-2 y que presentan síntomas son diagnosticados con COVID-19. Los síntomas pueden variar drásticamente y en particular incluyen fiebre, tos seca, anosmia, producción de esputos, cefaleas, disnea, fatiga, náuseas y diarrea. Aunque algunos casos pueden ser asintomáticos, otros pueden provocar un síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS, por sus siglas en inglés) e incluso la muerte. El diagnóstico suele basarse en pruebas de la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa en tiempo real (RT-PCR) de muestras respiratorias. No obstante, las pruebas RT-PCR pueden dar falsos negativos por una baja carga viral o por una recogida, manipulación y conservación inadecuadas de las muestras (orofaríngeas o nasofaríngeas), o por fallos durante el proceso de reacción. También pueden llevarse a cabo técnicas de captación de imágenes como la tomografía computarizada (TAC) y mostrar las opacidades en vidrio esmerilado multilobares, bilaterales, para ayudar con el diagnóstico. Platelia SARS-CoV-2 Total Ab detecta anticuerpos IgM, IgA e IgG contra el SARS-CoV-2. En combinación con otras pruebas de diagnóstico, se puede utilizar para determinar si un paciente ha estado expuesto al SARS-CoV-2.

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3 PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO Platelia SARS-CoV-2 Total Ab es una prueba de diagnóstico in vitro semi-cuantitativa, en un formato de captura de antígeno en un solo paso, para la detección de anticuerpos (IgM / IgA / IgG) en muestras humanas de suero o plasma.

▪ El estudio utiliza una proteína recombinante de la nucleocápside del SARS en un ensayo con un formato de captura de antígeno en un solo paso.

▪ Las muestras de suero o plasma y los controles se diluyen previamente. Se añade el conjugado (proteína recombinante de la nucleocápsidedel SARS acoplada con peroxidasa) a cada muestra y después la mezcla se incuba una hora a 37 °Cen pocillos recubiertos con proteína recombinante de la nucleocápside del SARS. Durante esta incubación, si hay anticuerpos IgM y/o IgG y/o IgA presentes en la muestra, forman un complejo entre la proteína recombinante de la nucleocápside del SARS en los pocillos y la proteína recombinante de la nucleocápside del SARS acoplada con peroxidasa.

▪ Tras la fase de lavado, la presencia de un complejo inmunitario (proteína de nucleocápside del SARS/anticuerpos de nucleocápside anti-SARS / proteína de nucleocápside del SARS etiquetada con POD) se demuestra mediante la distribución de una solución cromogénica que inicia una reacción de revelado del color.

▪ Tras 30 minutos de incubación a temperatura ambiente, la reacción enzimática se detiene añadiendo una solución ácida. La lectura de la densidad óptica obtenida con un espectrofotómetro configurado a 450/620 nm es proporcional a la cantidad de anticuerpos presentes en la muestra. La presencia de anticuerpos de nucleocápside anti-SARS-CoV-2 en una muestra individual se determina comparando la lectura de la densidad óptica de la muestra con la densidad óptica del suero de control del valor umbral.

4 REACTIVOS

4.1 Descripción

Identificación en la etiqueta Descripción Presentación/

Preparación

R1 Microplate

Microplaca - 96 pocillos (12 tiras de 8 pocillos cada una)

sensibilizadas con proteína recombinante de la nucleocápside de SARS CoV.

- - Número de ID específico = 19

1 placa Listo para su uso

R2 Concentrated

washing solution (20X)

Solución de lavado concentrada (20X) - - Tampón TRIS-NaCl (pH 7,4) - - Conservante: 0,04% ProClin 300

1 vial 70 ml

Para dilución

R3 Negative Control

Control negativo - Tampón TRIS-NaCl (pH 8 ± 0,1), albúmina

de suero bovino, glicerol - - Conservante: 0,1% ProClin 300

1 vial 1.0 ml

Listo para su uso

R4 Cut-off Control

Control del valor umbral - Tampón TRIS-NaCl (pH 8 ± 0,1), albúmina

de suero bovino, glicerol - Nucleocápside anti-SARS con anticuerpos

policlonales de conejo - Conservante: 0,1% ProClin 300

1 vial 0,8 mL

Listo para su uso

R5 Positive Control

Control positivo - Tampón TRIS-NaCl (pH 8 ± 0,1), albúmina

de suero bovino, glicerol - Nucleocápside anti-SARS con anticuerpos

policlonales de conejo - Conservante: 0,1% ProClin 300

1 vial 0,7 mL

Listo para su uso

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R6 Conjugate

Conjugado - Proteína recombinante de la nucleocápside

acoplada con peroxidasa de rábano picante - Tampón TRIS-NaCl (pH 8 ± 0,1), rojo de

fenol - Conservante: 0,5% ProClin 300

1 vial 9 mL

Listo para su uso

R7 Sample Diluent

Diluyente de la muestra - Tampón TRIS-NaCl (pH 8 ± 0,1), rojo de

fenol - Conservante: 0,5% ProClin 300

1 vial 12 mL

Listo para su uso

R8 Substrate buffer

Tampón de substrato Solución de ácido cítrico y acetato de sodio, pH 4,0, que contiene H2O2 (0,015 %) y dimetilsulfóxido (DMSO) (4 %)

1 vial 60 mL Para

reconstitución

R9 Chromogen: TMB solution

(11X)

Cromógeno: Solución TMB Solución que contiene 3,3’ , 5,5’ de tetrametilbenzidina (TMB)

1 vial 5 mL Para

reconstitución

R10 Stopping solution

Solución de bloqueo Solución de ácido sulfúrico (H2SO4 1N)

1 vial 28 mL

Listo para su uso 4.2 Requisitos de conservación y manipulación

Este kit debe conservarse a +2-8 °C. Los reactivos abiertos deben conservarse siguiendo las instrucciones a continuación.

Identificación Conservación

R1 Una vez abierta la bolsa sellada al vacío, conserve las tiras de micropocillos a +2-8 °C durante un máximo de 4 semanas, en su bolsa original, con desecante y vuelto a sellar con cinta adhesiva

R2

La solución de lavado diluida se puede conservar a +2-30 °C durante 2 semanas. La solución de lavado concentrada (R2) se puede conservar a +2-30 °C hasta la fecha de caducidad. Una vez abierta, la solución de lavado concentrada (R2) se puede conservar a +2-8°C hasta la fecha de caducidad, en ausencia de contaminación.

R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9

Una vez abiertos, estos reactivos conservados a +2-8 °C son estables durante 4 semanas, en ausencia de contaminación.

R8 + R9 Una vez diluida, la solución es estable durante un máximo de 6 horas en la oscuridad, a +18-30 °C.

R10 Este reactivo conservado a +2-8 °C, una vez abierto, será estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, si no hay contaminación.

5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para el diagnóstico in vitro, ha de ser utilizado por un profesional en un entorno de laboratorio únicamente. 5.1 Precauciones sobre salud y seguridad El kit de análisis solo puede manipularlo el personal cualificado formado en procedimientos de laboratorio y familiarizado con sus peligros potenciales. Se debe utilizar ropa de protección apropiada, guantes y protección ocular/facial y manipular de forma correcta según las buenas prácticas de laboratorio.

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Ningún método de análisis conocido puede ofrecer la garantía absoluta de ausencia de agentes infecciosos. Por lo tanto, todos los derivados de la sangre humana, reactivos y muestras humanas deben manipularse como si pudieran transmitir una enfermedad infecciosa, siguiendo las precauciones universales recomendadas para patógenos de origen sanguíneo, según lo definido en las normativas locales, regionales y nacionales. Derrames biológicos: Los derrames de materiales de origen humano deben tratarse como potencialmente infecciosos. Los derrames que no contengan ácido deben descontaminarse inmediatamente, incluyendo el área de derrame, los materiales y cualquier superficie o equipo contaminados, con un desinfectante químico apropiado que sea efectivo para los potenciales peligros biológicos relacionados con las muestras implicadas (normalmente una dilución 1:10 de lejía doméstica, 70-80 % etanol o isopropanol, un iodóforono como Wescodyne™ Plus al 0,5 % , etc.), y se deben secar con un paño. Los derrames que contengan ácido deben absorberse de forma apropiada (con un paño) o neutralizarse, el área debe enjuagarse con agua y secarse con un paño; los materiales utilizados para absorber el derrame podrían tener que desecharse como residuos biopeligrosos. La zona deberá, entonces, descontaminarse con uno de los desinfectantes químicos. COMENTARIO: No coloque soluciones que contengan hipoclorito sódico en la autoclave Deseche todas las muestras y el material utilizado para realizar la prueba como si contuvieran un agente infeccioso. Los residuos de laboratorio, químicos o biopeligrosos, deben manipularse y desecharse de conformidad con todas las normativas locales, regionales y nacionales. Para conocer las recomendaciones sobre peligros y precauciones relacionadas con algunos componentes químicos de este kit de análisis, consulte los pictogramas en las etiquetas y la información suministrada al final de las instrucciones de uso. La ficha de datos sobre seguridad está disponible en www.bio-rad.com. 5.2. Precauciones relacionadas con el procedimiento

5.2.1.Preparing ● NO USE el kit si el envase de los componentes está dañado. ● NO USE reactivos que hayan caducado. ● NO USE el kit si la bolsa de la microplaca no contiene desecante. ● Antes de su uso, espere 30 minutos a que los reactivos se estabilicen a temperatura ambiente (18-30 °C). ● Reconstituya cuidadosamente los reactivos evitando cualquier contaminación. ● Se recomienda el uso de material desechable para la preparación de los reactivos. Si utiliza objetos de

cristal, lávelos bien y aclárelos con agua desionizada. ● No mezcle ni asocie reactivos de diferentes lotes dentro de una misma serie analítica. ● No deje que la microplaca se seque entre el final del proceso de lavado y la distribución del reactivo. ● El nombre de la prueba, además del número de identificación específico, aparecen en el marco de cada

microplaca. El número de identificación específico aparece también en cada tira. Platelia SARS-CoV Total Ab: Número de ID específico = 19 Verifique el número de identificación específico antes del uso. No utilice la tira si falta el número de identificación o es distinto del número indicado correspondiente al ensayo a analizar.

● No mezcle reactivos de otros kits que tengan números de lote diferentes, con la excepción de la solución de lavado (R2, identificación*: 20x de color verde), el tampón de substrato de peroxidasa (R8, identificación*: tampón TMB, de color azul), el cromógeno (R9, identificación*: TMB 11X de color morado) y la solución de bloqueo (R10, identificación*:1N de color rojo), siempre que estos reactivos sean estrictamente equivalentes y se use el mismo número de lote dentro de cada serie analítica.

COMENTARIO: La Solución de lavado (R2, identificada* en color verde como 20X) no debe mezclarse con la solución de lavado (R2 identificada* en color azul como 10X) suministrada en los kits de reactivos Bio-Rad. *en la etiqueta del vial

● La solución de revelado o la solución de trabajo de conjugado debe prepararse en una bandeja de plástico

o en un recipiente de vidrio limpios. Se recomienda utilizar recipientes de plástico de un solo uso. Si se

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utilizan recipientes de plástico reutilizables, pueden limpiarse sumergiéndolos durante la noche en agua destilada o una solución de lavado. Si se utilizan recipientes de vidrio, pueden lavarse con 1N HCI y aclararse bien con agua destilada y secarse.

● La solución de revelado debe conservarse en la oscuridad. ● La solución de revelado (tampón de substrato + cromógeno) debe ser de color rosa. La modificación de

este color rosa unos minutos después de la reconstitución indica que el reactivo no puede utilizarse y que debe ser sustituido. La preparación de la solución de revelado se puede realizar en una bandeja de plástico desechable, limpia, de un solo uso o un recipiente de vidrio que se haya lavado previamente con 1N HCI y aclarado bien con agua destilada, y secado. Este reactivo debe conservarse en la oscuridad.

● La distribución de la muestra debe comenzar inmediatamente después de la distribución del conjugado. El tiempo de espera entre el proceso de dispensar el conjugado y las muestras no debe exceder los 30 minutos.

● La reacción de la enzima es muy sensible a los iones metálicos. En consecuencia, no deje que ningún elemento de metal entre en contacto con las distintas soluciones de conjugado o substrato.

● Nunca use el mismo recipiente para distribuir solución de conjugado y revelado.

5.2.2.Procesamiento ● No cambie el procedimiento del ensayo. ● Cada serie de este ensayo debe completarse sin interrupción una vez iniciado. Se puede aceptar una

demora de menos de 5 minutos entre dos pasos. ● Compruebe las pipetas y el resto del equipamiento para asegurarse de que funcionan correctamente y

con precisión. ● No lleve a cabo la prueba en presencia de vapores reactivos (vapores ácidos, alcalinos, aldehído) o

polvo que pudiera alterar la actividad enzimática del conjugado. ● Utilice una punta de distribución nueva para cada muestra. ● El lavado de la microplaca es un paso crucial en este procedimiento: siga el número recomendado de

ciclos de lavado y asegúrese de que los pocillos están completamente llenos y de que después se vacían completamente. Un lavado incorrecto puede generar resultados imprecisos.

● Siga cuidadosamente los procedimientos de lavado descritos para obtener el máximo rendimiento de la prueba. Con algún instrumento, podría ser necesario optimizar el procedimiento de lavado (aumentar el número de ciclos de la fase de lavado y/o el volumen del tampón de lavado para cada ciclo) para obtener un nivel aceptable de ruido de fondo de DO para las muestras negativas.

● Póngase en contacto con su comercial local para las adaptaciones y los procedimientos especiales.

6 MUESTRAS 1. La prueba se realiza en muestras de suero o plasma recogidas en anticoagulantes EDTA, heparina, ACD

o citrato. 2. Cumpla con las siguientes pautas de manipulación, procesamiento y conservación de las muestras de

sangre: ● Tome la muestra de sangre siguiendo los procedimientos de laboratorio habituales. En cuanto al

suero, deje que las muestras se coagulen completamente antes de centrifugarlas. ● Mantenga los tubos sellados en todo momento. ● Tras el centrifugado, extraiga el suero o el plasma y consérvelo en un tubo sellado. ● Las muestras se pueden conservar a +2-8 °C si las muestras se realizan antes de 4 días. ● Si la prueba no se puede realizar antes de 4 días, congele las muestras a -20 °C (o -80 °C.) ● Las muestras de suero o plasma se pueden someter, como máximo, a 1 ciclo de

congelación/descongelación. Las muestras que han sido congeladas, deben mezclarse bien después de descongelarlas para realizar la prueba.

3. Los resultados no se ven afectados por muestras proteinémicas que contengan 90 g/l de albúmina, muestras ictéricas que contengan 100 mg/l de bilirrubina, muestras lipémicas que contengan el equivalente de36 g/l de trioleína (triglicérido) y muestras hemolizadas que contengan hasta 10 g/l de hemoglobina.

4. No caliente las muestras.

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7 PROCEDIMIENTO

7.1 Materiales necesarios que no se suministran 1. Agua estéril destilada o desmineralizada para diluir la solución de lavado concentrada. 2. Hipoclorito de sodio (lejía doméstica) y bicarbonato de sodio. 3. Papel absorbente 4. Cinta adhesiva 5. Gafas de protección 6. Tubos desechables 7. Pipetas o multipipetas automáticas o semiautomáticas, ajustables o preconfiguradas para medir y

dispensar de 10 µl a 1000 µl, 1 ml, 2 ml y 10 ml. 8. Probetas graduadas de 25 ml, 50 ml, 100 ml y 1000 ml de capacidad. Vórtex. 9. Sistema de lavado de microplacas manual, baño de María o incubadora de microplacas equivalente,

configurado termostáticamente a 37 °C ± 1°C (*). 10. Lector de microplacas o sistema totalmente automatizado equipado con filtros de 450 nm y 620 nm

(*). 11. Recipiente para residuos biopeligrosos

(*) Consúltenos para obtener información detallada sobre el equipamiento recomendado por nuestro departamento técnico.

7.2 Preparación de reactivos

7.2.1 Reactivos listos para su uso Reactivo 1 (R1): Microplaca Cada soporte con 12 tiras va envuelto en una bolsa sellada. Corte la bolsa con unas tijeras a 0,5-1 cm por encima del sellado. Abra la bolsa y saque el marco. Vuelva a guardar en la bolsa las tiras sin usar con desecante. Cierre bien la bolsa y vuelva a guardarla a +2-8 °C Reactivo 3 (R3): Control negativo, Reactivo 4 (R4): Control del valor umbral, Reactivo 5 (R5): Control positivo, Reactivo 6 (R6): Conjugado, Reactivo 7 (R7): Diluyente de la muestra Estos reactivos están listos para usar.

7.2.2 Reactivos para reconstitución Reactivo 2 (R2): Solución de lavado concentrada (20X) Prepare la solución de lavado de trabajo diluyendo la solución de lavado concentrada 1:20 en agua destilada: 50 ml de R2 en 950 ml de agua destilada. Use 800 ml de solución de lavado de trabajo para una microplaca completa de 12 tiras, excluyendo el volumen muerto por el equipo utilizado. Reactivo 8 (R8) + Reactivo 9 (R9): Solución de revelado enzimático Diluir 1:11 el cromógeno (R9) en el tampón de substrato (R8) (p. ej. 1 ml de reactivo R9 + 10 ml de reactivo R8) teniendo en cuenta que 10 ml son la cantidad necesaria y suficiente para 12 tiras. Homogeneizar.

7.3 Procedimiento del ensayo

Siga rigurosamente el procedimiento y las buenas prácticas de laboratorio.

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7.3.1 Procedimiento EIA 1. Deje los reactivos a temperatura ambiente (+18-25 °C) durante al menos 30 minutos antes de

usarlos. 2. Use los controles negativo y positivo con cada serie para validar los resultados. 3. Configure cuidadosamente el plan para distribuir e identificar los controles y las muestras de pacientes.

4. Prepare la dilución de la solución de lavado (R2) (Consulte la sección 7.2) 5. En una microplaca inerte, de dilución previa, diluya los controles R3, R4, R5 y las muestras para análisis

E1, E2, en R7 para lograr una dilución 1:5: ● Distribuya 60 µl de R7, después añada 15 µl de muestra en cada pocillo. ● Añada 75 µl de solución de conjugado (R6) a todos los pocillos de la microplaca de dilución previa ● Mezcle aspirando y expulsando una vez, después transfiera inmediatamente 100µl de los controles

y las muestras de dilución previa a los pocillos de la microplaca de reacción (R1). 6. Cubra la microplaca de reacción con un sellante adhesivo para placas, presionando firmemente sobre

la placa para garantizar estanqueidad. Incube la microplaca en un baño María controlado con termostato o una incubadora de microplacas durante 60 minutos (+/- 5 min) a 37 °C (+/- 2°C).

7. Prepare solución de revelado enzimático (R8 + R9) (Consulte la sección 7.2) 8. Una vez finalizado el periodo de incubación, retire el sellante adhesivo de la placa. Aspire el contenido

de todos los pocillos en un recipiente para residuos biopeligrosos (que contenga hipoclorito de sodio). Lave la placa 5 veces con un limpiador para microplacas (usando 800 μl de solución de lavado de trabajo). Invierta la microplaca y elimine los restos de líquido con toques suaves con papel absorbente.

9. Distribuya rápidamente en cada pocillo 200 µl de la solución de revelado (R8+R9). Deje que la reacción se desarrolle en la oscuridad durante 30 minutos (+/- 4 min) a temperatura ambiente (+18-30 °C). No use un sellante adhesivo para placas durante esta fase de incubación.

10. Añada 100 µl de solución de bloqueo (R10) a cada pocillo, usando el mismo orden y la misma proporción que para añadir la solución de revelado. Mezcle bien.

11. Limpie con cuidado el fondo de la placa. 12. Lea la densidad óptica de cada pocillo a 450 nm (filtro de referencia a 620 nm) antes de 30 minutos

tras añadir la solución de bloqueo (las tiras deben mantenerse siempre lejos de la luz antes de su lectura). 13. Antes de documentar los resultados, compruebe la coincidencia entre la lectura y el plan de distribución

de las placas.

7.4 Control de calidad Use los controles en cada microplaca cada vez que realice la prueba.

7.5 Criterios de validación de la prueba Calcule el valor medio de absorbencia medida (OD) del control del valor umbral R4: DOM.

Criterios de validación

R4 La DOM R4 debe ser: 0,5 < DOM R4 < 1,4

R3 / R4 El cociente (DO R3 / DOM R4) debe ser ≤ 0,25

R5 / R4 El cociente (DO R5 / DOM R4) debe ser ≥ 1,1

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7.6 Cálculo/Interpretación de los resultados

El valor umbral DOMR4 se corresponde con el valor medio de las densidades ópticas del control del valor umbral R4. Los resultados de la muestra se expresan mediante un cociente usando la siguiente fórmula: Cociente de la muestra = DO de la muestra / DOMR4. Interpretación de los resultados ● Un cociente de la muestra inferior a 0,8 se considera "negativo" para la presencia de anticuerpos anti-

SARS-CoV-2. ● Un cociente de la muestra entre 0,8 y 1,0 se considera "dudoso" para la presencia de anticuerpos anti-

SARS-CoV-2. Debe volver a analizarse por duplicado antes de la interpretación final. Si el resultado repetido es dudoso, deberá recogerse otra muestra y probarse unos días más tarde.

● Un cociente de la muestra superior o igual a 1,0 se considera "positivo" para la presencia de anticuerpos anti-SARS-CoV-2.

Cociente de la muestra Resultado

R < 0,8 Negativo

0,8 ≤ R < 1,0 Dudoso

R ≥ 1,0 Positivo

8 LIMITACIÓN DE LA PRUEBA 1. El diagnóstico clínico de COVID-19 no se debe emitir basándose en el resultado de una única prueba.

Deben tenerse en cuenta pruebas de seguimiento y complementarias, además de otros datos clínicos y de laboratorio.

2. La detección de anticuerpos anti-SARS-CoV-2 en suero o plasma está vinculada a la frecuencia de las pruebas realizadas a los pacientes. Para incrementar la sensibilidad y la precocidad de la positividad de la prueba, debe realizarse un seguimiento regular de los pacientes sospechosos de haber sido infectados por SARS-CoV-2.

3. La detección de anticuerpos anti-SARS-CoV-2 depende de la presencia del analito en la muestra. Se puede producir un resultado negativo o no reactivo si la cantidad de anticuerpos para el virus SARS-CoV-2 presente en la muestra está por debajo del límite de detección del ensayo. Durante la fase aguda de la infección y/o en el caso de pacientes inmunodeprimidos, los anticuerpos anti-SARS-CoV-2 podrían no ser detectables mientras el individuo esté infectado de SARS-CoV-2. Por tanto, un resultado negativo no demuestra la ausencia de infección por COVID-19.

4. No se han evaluado las características de rendimiento de la prueba Platelia SARS-CoV-2 Total Ab con muestras de suero o plasma de recién nacidos o pacientes pediátricos.

5. El ensayo Platelia SARS-CoV-2 Total Ab puede detectar anticuerpos totales específicos para SARS-CoV-1 y para SARS-CoV-2 sin ninguna diferenciación. Además, son posibles las reacciones cruzadas con MERS-CoV.

9 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Los rendimientos indicados a continuación se han obtenido durante las evaluaciones con el ensayo Platelia SARS-CoV-2 Total Ab. Los resultados obtenidos en el laboratorio pueden ser diferentes a estos.

9.1 Características del rendimiento analítico Todos los estudios analíticos fueron llevados a cabo en el laboratorio de I+D de Bio-Rad.

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9.1.1 Medición de precisión Se analizaron 3 muestras positivas y 1 muestra negativa 30 veces en la misma serie. Intraserial CV es inferior al 10% para la muestra negativa e inferior al 5% para todas las muestras positivas. Repetibilidad El panel de cuatro miembros se analizó en 30 réplicas. Se calcularon las medias de cociente, las desviaciones estándar (DE) y los coeficientes de variación (CV).

ID de la muestra N Cociente medio DE CV% Negativo 30 0,05 0,004 7,1% Positiva baja 30 1,15 0,038 3,3% Positiva media 30 1,54 0,055 3,6% Positiva alta 30 2,36 0,095 4,0%

Precisión intermedia Las mismas muestras se analizaron en 10 análisis separados durante 6 días. Se usó el sistema ANOVA anidado para estimar la precisión intraserial, interserial, interdiaria y total. Interserial CV es inferior al 30% para la muestra negativa e inferior al 10% para todas las muestras positivas.

ID de la muestra N

Cociente medio

Repetibilidad Interserial Interdiaria Intralaboratorio

DE CV% DE CV% DE CV% DE CV%

Negativo 20 0,05 0,005 10,9% 0,005 11,7% 0,009 20,0% 0,012 25,6% Positiva baja 20 1,26 0,046 3,6% 0,026 2,0% 0,040 3,2% 0,066 5,3% Positiva media 20 1,77 0,053 3,0% 0* NA 0,122 6,9% 0.133 7,5% Positiva alta 20 2,52 0.065 2,6% 0* NA 0.089 3,5% 0.110 4,4%

Note: (*) El valor de varianza negativa se estima en 0.

9.1.2 Especificidad analítica/Reactividad cruzada

La reactividad cruzada se ha evaluado analizando muestras seronegativas de SARS-CoV-2 de pacientes con anticuerpos contra otros coronavirus o afecciones médicas. No se observó reactividad cruzada (resultados falsos positivos) con el ensayo Platelia SARS-CoV-2 Total Ab en ninguna de las muestras que se analizaron.

Analito Cantidad de muestras No reactivas Reactivas

anti-229E (alpha coronavirus) 6 6 0 anti-NL63 (alpha coronavirus) 3 3 0 anti-OC43 (beta coronavirus) 13 13 0 anti-HKU1 (beta coronavirus) 71 71 0 Vacuna antigripal 15 15 0 anti-Mycoplasma pneumoniae 4 4 0 anti-VZV 5 5 0 anti-HSV 9 9 0 anti-EBV 4 4 0 Factor reumatoide 5 5 0 Infección por influenza A 11 11 0 Infección por RSV 11 11 0

1 Un paciente fue coinfectado con CovHKU1 + INF A y un paciente fue coinfectado con CoVHKU1 + RSV

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9.1.3 Efecto gancho Una muestra positiva con alto título de anti-coronavirus Ab se diluyó en serie y se analizó solo y diluido con el ensayo Platelia SARS-CoV-2 Total Ab. No se observaron resultados negativos en la muestra limpia. Se observó una disminución de la señal con la prueba de muestras diluidas. No se observa ningún efecto de gancho en el ensayo Platelia SARS-CoV-2 Total Ab con la prueba de una muestra altamente positiva.

9.2 Características del rendimiento clínico Los rendimientos clínicos del ensayo Platelia SARS-CoV-2 Total Ab se evaluaron durante una evaluación múltiple con muestras obtenidas de una población general asintomática de individuos antes de la epidemia (donantes de sangre, pacientes hospitalizados) y de pacientes con síntomas clínicos de coronavirus COVID-19 que dieron positivo en una prueba RT-PCR. Se realizaron estudios prospectivos y retrospectivos con población asintomática y con pacientes infectados seleccionados.

9.2.1 Especificidad diagnóstica Se analizaron un total de 687 muestras (620 de donantes de sangre y 67 de pacientes asintomáticos hospitalizados, recolectadas antes del brote de la pandemia COVID-19). La especificidad fue del 99.56% (684/687) (intervalo de confianza del 95% de 98.72-99.85%).

9.2.2 Sensibilidad diagnóstica Se realizó un estudio longitudinal en 51 pacientes (133 muestras) en la unidad de cuidados intensivos de 3 hospitales con síntomas clínicos de COVID-19 y con un resultado positivo de PCR. Se recogieron entre 2 y 5 muestras por paciente de 2 a 42 días después del inicio de los síntomas clínicos. Cuando se recolectaron muestras> 8 días después del inicio de los síntomas, 39 pacientes en el estudio longitudinal demostraron un resultado positivo con el ensayo Platelia SARS-CoV-2 para una o más muestras que se analizaron. Para cada paciente que tuvo un resultado positivo, la siguiente tabla resume cuándo se observó el primer resultado positivo.

Días entre el inicio de los síntomas y la recolección

de muestras Primer resultado

positivo Paciente no

reactivo Total %

<8 dias 8 31 11 73% 9-10 dias 6 0 6 100%

11-20 dias 30 12 31 97% 21-42 dias 3 0 3 100%

Total 47 4 51 1 No hubo muestras adicionales después de 8 días disponibles para seguir la respuesta inmune de estos pacientes. 2 No hubo muestras adicionales después de 18 días disponibles para seguir la respuesta inmune de este paciente. El setenta y tres (73)% de los pacientes fueron positivos menos de 8 días después del inicio de los síntomas, y el 97% fueron positivos cuando las muestras se recolectaron más de 8 días después del inicio de los síntomas. Los 3 pacientes que fueron negativos a los ≤8 días y el paciente que fue negativo a los 18 días no se analizaron más para evaluar una respuesta inmune. Se espera que la respuesta inmune aumente a> 7 días (Zhao et al., 2020) 7. En este estudio, 39/40 pacientes dieron positivo> 8 y ≤42 días después del inicio de los síntomas. La sensibilidad para pacientes con PCR positiva examinada a> 8 días es del 97,5% (39/40) con un IC del 95% [86,8% -99,9%].

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8. Zhou P, Yang XL, Wang XG, et al. A pneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin. Nature. 2020, Mar 579 (7798): 270-273. doi: 10.1038/s41586-020-2012-7

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