Obtención de ComponentesSanguíneos: Fraccionamiento

JUAN CARLOS CALDERON M. D.

MAYO 2010

Ca. 1786 Bellevue Hospital, NY

1892. Adler J, “Transfusión de sangre de cabra”, detalle. (Simon Bernheim"Transfusion de sang de chevre et tuberculose pulmonaire")

Dr. Lewisohn, 1915

Dr. Durán, 1937

Botella para Colecta de sangre 1945

Bolsa de sangre de Baxter, 1954

Transfusión sanguínea en una ambulancia

Hemoterapia

• Los progresos en la obtención y conservación de los diferentescomponentes sanguíneos han hechoposible la administración separada de las distintas fracciones hemáticas.

Hemoterapia Moderna

Hemoterapia

Colecta de donante

Aferesis de plaquetas

Plasmaferesis

Densidad de los componentes sanguíneos

Importante conocerla en el banco de sangre moderno para una adecuada separación de los componentes sanguíneos

SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES DE LA SANGRE POR GRADIENTE DE CENTRIFUGACIÓN SEGÚN SUS

DENSIDADES ESPECÍFICAS.

SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES DE LA SANGRE POR GRADIENTE DE CENTRIFUGACIÓN SEGÚN SUS

DENSIDADES ESPECÍFICAS.

AUTOMATIZACION DEL BANCO DE SANGRE

• Distintas configuraciones bolsas de extracción:

– “Arriba-Abajo”

– “Arriba-Arriba”

– “Bioseguras”

• Filtración prealmacenamiento

• Fraccionadores automáticos

CLP: Capa Leucoplaquetaria, CHPL: Concentrado Hematies, Leucocitos y plaquetas

Conservación

Como consecuencia de fraccionar la donación de sangre total.

Los componentes sanguíneos obtenidos precisan condiciones diferentes para su conservación.

Condiciones óptimas deAlmacenamiento

En el caso de componentes celulares (hematíes y plaquetas) el almacenamiento debe asegurar no solo la FUNCIÓN sino también suVIABILIDAD.

En el caso del plasma y sus derivados, deben conservar la función de las proteínas, especialmente de los factores de coagulación. (Termodependientes).

Hematíes o Glóbulos Rojos

Almacenamiento de los hematíes

OBJETIVO:• Mantenimiento de la viabilidad

celular:– Supervivencia de los hematíes a las

24 horas de la transfusión (≥75%).

• Mantenimiento de su función celular:– Capacidad de las células

transfundidas para transportar normalmente el oxígeno a los tejidos.

• Refrigerados entre 2º C a 6º C

Almacenamiento de los hematíes

Produce una serie de alteraciones:

• “Lesión de almacenamiento”:

– 1. Cambios bioquímicos

– 2. Cambios biomecánicos

– 3. Cambios Oxidativos

Metabolismo

Bioquímico

Lactato

Depleción del sustrato

El glutatión reducido (GSH) es un tripéptido que se encuentra

presente en elevadas concentraciones dentro del eritrocito (2 mM).

La HbNO transfiere el NO a los grupos tiol (-SH) de ß93Cys

para formar S-NitrosoHb (SNO-Hb). SNO-Hb ↓

LESIÓN POR ALMACENAMIENTO

Oxidativos

SNO-Hb ↓

LESIÓN POR ALMACENAMIENTO

Biomecánicos

Hemólisis

Morfología

Vesiculación

Area de Membrana

Area/Volumen

Deformabilidad

Fosfatidil – Serina

Volumen

Gradiente Na/K

Biomecánicos

LESIÓN POR ALMACENAMIENTO

Oxidativos

Oxidación de la Hemoglobina

Desnaturalización de la Hemoglobina

Peroxidación de los Lípidos

Antígenos anti Bd3

Sustancias liberadoras bioactivas

Daños en el citoesqueleto

Metabolismo del Hematíe

• Dos fosfatos orgánicosdesempeñan un papelfundamental:

– 2, 3 -difosfoglicerato (2,3-DPG)

– Adenosintrifosfato (ATP)

Metabolismo del Hematíe

• 2,3-DPG hace que la hemoglobina tenga una mayor afinidad

por el O2 cesión menor del mismo a los tejidos.

Metabolismo del Hematíe

Grupos S-nitrosotioles – S nitrosohemoglobina

Acción sobre arteriolas y capilares incremento del

flujo sanguíneo

1. Cambios bioquímicos

a) Descenso progresivo en los niveles de 2,3-DPG.

b) Progresivo descenso en la concentración de ATP y cambios morfológicos en los hematíes.

c) Cambios metabólicos:• Preferencia vía glicólisis anaerobia frente a

la pentosa fosfato, perdiendo poderreductor volviéndose más sensible a ataques oxidativos.

• Los niveles de 2,3-DPG disminuyen linealmente las dos primeras semanas durante el almacenamiento.

• Recuperación rápida de la mitad de los niveles de 2,3-DPG a las 12 horas de transfundidos.

• A las 24 horas niveles normalesde 2,3-DPG.

1. Cambios bioquímicos: 2,3-DPG

Metabolismo Hematíe

90% vía Glucólisis anaerobia

• Energía: ATP

• NADH: Mantiene el hierro reducido (ferroso).

• 2,3-Difosfoglicerato: Regula afinidad de la hemoglobina por el oxígeno

Soluciones de almacenamiento

• ACD: Acido-Citrato-Dextrosa

• CPD: Citrato-Fosfato-Dextrosa

Retrasa la pérdida de 2,3-DPG, mejorando la función y ligeramente la supervivenciaal incrementar el pH.

• CPD-A: Citrato-Fosfato-Dextrosa-Adenina.

Adenina se desamina en inosina rápidamente → niveles aceptables de ATP.

2.Cambios biomecánicos

a) Pérdida de fosfolípidos de la membrana eritrocitariay una distribución anómala de los mismos:

– Equinocitos y esferocitos

b) Aumento de la fragilidad osmótica:

– Hemólisis de los hematíes

Soluciones aditivas

• CPDA-1; CPDA-2– Incremento cantidad de glucosa

• SAG-M:– Manitol como protector de la membrana

eritrocitaria.

• ADSOL:– Incremento dosis de adenina 27 mg/dL– Mayor cantidad de Manitol (750 mg)– Solución salina Isotónica (0.9gr/dL)

• OPTISOL (AS-5):– Buena dosis de adenina 30 mg/dL– Menor cantidad de Manitol que todas las

del mercado (525 mg)– Cantidad de NaCl, levemente menor que

la del plasma (0.877 gr/dL)

Viabilidad de los hematíesRefrigerados

• ACD ó CPD: 21 días

• CPDA: 35 días

• Soluciones aditivas:

• SAG-M [Salina, adenina, glucosa, manitol]: 42 días.

• ADSOL: 42 días. (45?)

• OPTISOL: 42 días.

A FUTURO

• Estandarización de los concentrados de hematíes

• Disminución riesgotransfusional por infección

• Concentrados de hematíesuniversales

• Alargamiento de caducidadactual:– EAS-61 Para almacenamiento

hasta por 9 semanas– EAS-64 Para almacenamiento

hasta por 10 semanas– EAS-76 Para almacenamiento

hasta por 11 semanas

A FUTURO• Alargamiento de caducidad

actual (Cont.)

– Estas soluciones cumplen con los estándares de la FDA (hemólisis <1%; Sobrevida de GR >75% al final del tiempo de preservación de cada uno).

– Otras soluciones están en estudio y son diseñadas para recuperar y aumentar los niveles de ATP y 2,3 DPG en los GR almacenados por varias semanas

Plaquetas

Ciclo de preparación

Ciclo de preparación

Almacenamiento de plaquetas

• El almacenamiento debe asegurar

no sólo la FUNCIÓN si no también

su VIABILIDAD.

• No contienen ADN ni ARN

activación y liberación de sus

gránulos incapaces de

resintetizarlos.

• Particularmente susceptibles a

dañarse si se almacenan de manera

incorrecta.

Plaquetas: Cambios Morfológicospor Activación

Puntos críticos en la conservaciónde las plaquetas

• Temperatura

• pH

• Intercambio gaseoso

Proceso de reparación de una herida 1

Conservación de Plaquetas

• Temperatura:– Frío produce DAÑO

PLAQUETARIO las plaquetas cambian su forma DISCOIDAL por ESFÉRICA.

• 18-24ºC• Observación del fenómeno del

remolino u “ondas muaré” (“Swirling”)

Proceso de reparación de una herida 2

ACTIVACION PLAQUETARIA

Puntos Críticos en Consevación Plaquetaria

• Temperatura

• pH

• Intercambio Gaseoso (CO2 O2)

Conservación Plaquetaria

• Temperatura

– Frío produce daño plaquetario las plaquetascambian su forma discoidal por esférica

– 18° a 24° C

– Observación del fenómeno de “Swirling”(remolino u ondas Muaré) Fenómeno causado porla diferente refractariedad de la luz por lasplaquetas.

Swirling plaquetario

Swirling Plaquetario

Plaquetas normales de forma discoide

Plaquetas normales de forma discoide

Refracción de la Luz = “Swirling”

Swirling Plaquetario

pH bajo o alteración metabólica alteran la forma plaquetaria y

pierden su forma discoide, como resultado no hay refracción de

la luz = No “Swirling”

Conservación Plaquetaria

• pH

– Pérdida rápida de Glucógeno plaquetario, hay aumento del lactato pH

– pH de 6.2 a 6.8 = Cambios reversibles

– pH < 6.2 = Cambios irreversibles en la plaqueta

• Proceso es Irreversible cuando:– Hinchazón o pérdida de la forma discoide

– Aglutinación

– Lisis

– pH limites = 6.4 a 7.4

Conservación Plaquetaria

Intercambio Gaseoso:• Bolsa de conservación debe ser

gas permeable– Oxigenación adecuada– Eliminación del CO2 resultante del metabolismo

del ácido Láctico

• Mantener la agitación continua– Facilitar el intercambio gaseoso a través de la

pared de PVC de la bolsa– 24 Hrs sin agitación, los daños son reversibles.

Conservación Plaquetaria

• Viabilidad Plaquetaria = 7 días

• Periodo Máximo de conservación = 5 días

– Riesgo aumentado de sepsis en receptores por contaminación bacteriana

Conservación Plaquetaria

• RD 1088/2005 hasta 7 días si

se emplean métodos de

detección o reducción de la

contaminación bacteriana

– Azul de Metileno (Theraflex)

– Intercept – Cereus (Amotosalem)

– Mirasol – Caridian BCT (este usa

Riboflavina e iluminación)

El problema

Estafilococo spp

Estreptococo spp

El problema: CONTAMINACION

Causas más probables: A- Limpieza del área de venopunción deficiente o inadecuada

B- Set de donación abierto

C- Bacteremia asintomática del donante (E. Coli)

D- Defectos de manufactura del set

PLASMA FRESCO CONGELADO

Volumen: 200 a 250 ml

Proteínas: 12 grs (albúmina)

Contiene:Agua

Sodio

Todos los factores de coagulación lábiles y estables

PLASMA FRESCO CONGELADO

1 ml de PFC x Kgr de peso del paciente, eleva la mayoría de los factores de coagulación en +/- 1% de su actividad

NO DEBE USARSE COMO EXPANSOR PLASMÁTICO DE ELECCIÓN.

PLASMA FRESCO CONGELADO

INDICACIONES:

Hemorragia por defecto de factores de coagulación sin terapia específica

Intoxicación por cumarínicos y PT mayor 16 sg

PTT mayor de 55 sg (No por heparina)

PT y PTT mayor de 1,5 del promedio normal en pacientes prequirúrgicos ó INR de 1.6

PLASMA FRESCO CONGELADO

INDICACIONES:

Deficiencias de factores II, V, VII, IX, X, XI

CID en fase hemorrágica

Transfusión masiva

Deficiencia de antitrombina III, proteína C y S

Hemofilia B

Tratamiento de la PTT con plasmaféresis

CRIOPRECIPITADO

Volumen: 10 a 20 ml

Fibrinógeno: 300 a 350 mg.

Factor VIIIC: 80 a 100 UI

F. Von Willebrand: 70%

Factor XIII

Trombina

Fibronectina

CRIOPRECIPITADO

INDICACIONES:

• Hemofilia A: deficiencia de factor VIIIC

• Enfermedad de Von Willebrand

• Hipofibrinogenemia

• Disfibrinogenemia con hemorragia

• Aporte de fibronectina tisular

DOSIS: 2 U por 10 Kg de peso

Parámetros previos al fraccionamiento a tener en cuenta

• Extracción: 450 mL +/- 50 mL (405 a 495 mL) + anticoagulante: 63 mL de CPDA-1 o 63 mLCPD + 100 mL SAG/Manitol (Optisol = AS5)

• Temperatura de conservación:– Refrigerada entre +20° C y +24°C en placas de

1,4 Butanodiol (desde +37°C hasta 22°C)

– Hasta un máximo de 18 a 24 horasprefraccionamiento (depende de la temperaturamedioambiantal) con un mínimo de 2 horas antes del fraccionamiento

Cadena continua de producción

Donante de

sangre

Paciente

La calidad en todos los aspectos del trabajo en banco de sangre

MUCHAS GRACIAS!

SIEMPRE ES UN PLACER TRABAJAR PARA UN GRUPO SELECTO COMO ES EL DE USTEDES!!!