Lo que debo recordar sobre Inmunohistoquimica y ELISA

Inmunohistoquimica

Es un método de localización específica de antígenos presentes (in-situ) en tejidos fijados y embebidos en parafina mediante una interacción antígeno-anticuerpo.

El complejo antígeno-anticuerpo se visualiza en microscopio mediante una señal colorimétrica, una de las ventajas de la inmunocitoquimica es que puede observase no solo el perfil de expresión sino también la morfología del tejido

Los resultados de la expresión son semicuantitativos y tienen importancia en el diagnóstico y la prognosis de ciertas patologías como: tumores, linfomas y detección de microrganismos.

Recordar que debido a que es una técnica en donde la presencia de la proteína a analizar depende de una señal colorimétrica, a mayor señal que se observe mayor será la presencia de la proteína que se esta estudiando, a continuación un ejemplo:

ELISA

El principio fundamental: inmovilización del antígeno o anticuerpo de captura especifico en una superficie. Existen diferentes tipos de ELISA, cada una de ellas han sido desarrolladas de acuerdo a las características inmunogenicas y abundancia de la molécula que se detectara

Solo por si no recuerdan bien, estos son los esquemas de los tipos de ELISA basándonos el tipo de detección del antígeno puede ser directa o indirecta.

ELISA directo

ELISA indirecto (VIH, VCH)

Amplificación de la señal de detección

ELISA sándwich (Marcadores tumorales, Hormonas, HGC o prueba de embarazo)

Como lo explicamos en la clase el ELISA directo, indirecto o sándwich es positivo cuando al realizar la reacción enzimática se observa la presencia de color, la intensidad del color es proporcional a la presencia del analito. En todos estos tipos de ELISA se detecta un analito en la muestra por medio de la captura del mismo en las placas del ensayo, el método de revelado es lo que da los diversos tipos de ELISA. Cabe mencionar que el ELISA directo tiene menor capacidad de detección que el directo debido a la amplificación de la señal, mientras que el ELISA sándwich es más sensible, mas especifica (ya que los dos anticuerpos utilizados pueden reconocer diferentes epitopes “sitios” del analito) y su nivel de detección es mayor por la amplificación de la señal.

ELISA competitivo (Testosterona)

En el caso de la ELISA competitiva la ausencia de color marca positividad, en este tipo de ELISA la muestra que contiene el analito se pone en contacto con anticuerpos específicos para su reconocimiento, por lo que si existe analito todos se conjugaran con los anticuerpos, al colocarlos en una placa que contiene unido el analito que se esta buscando en la muestra, los anticuerpos libres se unirán a este formando un conjugado que al final se visualizara como presencia de color (negatividad), los que están unidos con analito proveniente de la muestra no se podrán unir a la placa impidiendo la formación de conjugados impidiendo que se formen los complejos que ayudan a que se lleve a cabo la reacción enzimática que se visualizara como ausencia de color (positividad)

Recuerden que existen nuevas tecnologías que detectan varios analitos en un solo ensayo como lo son los ensayos ELISA multiplex (que se miden por medio de tecnología Luminex o por citometría de flujo), Elispot que se basa en la presencia de anticuerpos que se encuentran fijos en una placa y que detectan citocinas de células que han sido estimuladas para producirlas y el ensayo de ELISA-PCR en donde el sustrato en lugar de tener unido un sustrato enzimático tiene unido una secuencia de oligonucleótidos que puede ser amplificado (esta técnica tiene un gran nivel de detección se puede usar para muestras que tengan poco analito).