universidad central del ecuador … · a mi tutor dr. fernando novillo por todo su tiempo y...
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE QUÍMICA FARMACÉUTICA
“ESTUDIO FARMACOGNÓSICO DE PRODUCTOS NATURALES
PROCESADOS DE USO MEDICINAL Y DEL EXTRACTO VEGETAL DE Artemisia
absinthium (AJENJO)”
Trabajo de investigación previo a la obtención del título de Química Farmacéutica.
Autor: María Gabriela Daza Macías
Tutor: Novillo Logroño Fernando Augusto
DMQ, mayo 2018
ii
DEDICATORIA
“Empieza haciendo lo necesario, después lo posible, y de repente te encontrarás haciendo lo
imposible.” San Francisco de Asís.
Mente positiva, resultados positivos….
La presente investigación es dedicada a Dios, a mis padres por su apoyo, amor y
confianza que han sido los detonantes de mi felicidad, y los principales autores de cada uno de
mis logros.
iii
AGRADECIMIENTO
A la Universidad Central del Ecuador, y la Facultad de Ciencias Químicas
especialmente a mis profesores de la carrera Química Farmacéutica por compartir sus
conocimientos y ser los partícipes principales de este logro.
A mi tutor Dr. Fernando Novillo por todo su tiempo y conocimiento impartido en esta
investigación y con su guía hizo posible la culminación de mi carrera.
A mi hermano David, por todo su apoyo que me ha brindado por ayudarme a estudiar
y ser esa persona que mira mis triunfos como un ejemplo, porque tus sigues mis pasos.
A mis entrañables amigos de la carrera que a lo largo de esta etapa hemos compartido
experiencias incomparables me llevo de ustedes lo mejor, gracias Sofy por siempre haber
estado junto a mí por ser más que mi amiga mi hermana, Alex Xavier gracias por enseñarme a
ver la vida de una diferente manera.
Cristian, gracias por tu amor incondicional, tu apoyo ha sido fundamental en este reto
has estado conmigo incluso en los momentos más turbulentos, quiero que sigas siendo mi
compañero de fórmula en cada una de las facetas de mi vida que están por venir.
iv
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORIA INTELECTUAL
Yo, Daza Macías María Gabriela en calidad de autora del trabajo de investigación: “Estudio
farmacognósico de Productos Naturales procesados de uso medicinal y del extracto vegetal de
Artemisia absinthium (ajenjo)”, a hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o parte
de los que contiene esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autora me corresponden, con excepción de la presente autorización,
seguirán vigentes a mi/nuestro favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6,
8; 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.
También, autorizo a la Universidad Central del Ecuador a realizar la digitalización y
publicación de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad a lo
dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.
Quito, 15 de mayo del 2018.
v
CONSTANCIA DE APROBACIÓN DEL TUTOR
Yo, Fernando Novillo Logroño en calidad de tutor del trabajo de investigación titulado:
“Estudio farmacognósico de Productos Naturales procesados de uso medicinal y del
extracto vegetal de Artemisia absinthium (ajenjo)”, elaborado por la señorita estudiante
María Gabriela Daza Macías de la Carrera de Química Farmacéutica, Facultad de Ciencias
Químicas de la Universidad Central del Ecuador, considero que el mismo reúne los requisitos
y méritos necesarios en el campo metodológico y en el campo epistemológico, de manera que
APRUEBO su ejecución, a fin de que sea sometido a la evaluación por parte del tribunal
calificador que se designe.
En la ciudad de Quito, a día 15 del mes de mayo del 2018.
vi
CONSTANCIA DE APROBACIÓN DEL TRABAJO FINAL POR
TRIBUNAL
El Tribunal constituido por: MSc. Dayana Borja, Dra. Liliana Naranjo, Dr. Fernando Novillo
luego revisar el trabajo de investigación titulado: “Estudio farmacognósico de Productos
Naturales procesados de uso medicinal y del extracto vegetal de Artemisia absinthium
(ajenjo)”, previo a la obtención del título (o grado académico) de previo a la obtención del
título de Química Farmacéutica presentado por la señorita María Gabriela Daza Macías
APRUEBA el trabajo presentado.
Para constancia de lo actuado firman:
vii
Índice de contenidos
Índice de contenidos .......................................................................................................... vii
Índice de anexos .................................................................................................................. x
Índice de figuras ................................................................................................................. xi
Índice de tablas ................................................................................................................. xiii
Resumen .......................................................................................................................... xvii
Abstract .......................................................................................................................... xviii
Capítulo I ............................................................................................................................. 2
El Problema ......................................................................................................................... 2
Planteamiento del Problema ............................................................................................ 2
Formulación del problema ............................................................................................... 3
Objetivos de la Investigación .......................................................................................... 4
Objetivo General. ......................................................................................................... 4
Objetivos Específicos. ................................................................................................. 4
Justificación e importancia. ............................................................................................. 4
Capítulo II ........................................................................................................................... 6
Marco Teórico ..................................................................................................................... 6
Antecedentes de la investigación..................................................................................... 6
Fundamentación teórica .................................................................................................. 7
Planta Medicinal. ......................................................................................................... 8
Extracción del material vegetal. ................................................................................ 19
Producto natural procesado de uso medicinal. .......................................................... 21
Marco Legal .................................................................................................................. 26
Constitución de la República del Ecuador ................................................................. 26
Normativa sanitaria para la obtención del Registro sanitario .................................... 26
Hipótesis ........................................................................................................................ 27
Conceptualización de las variables ................................................................................ 28
Capítulo III ........................................................................................................................ 29
Marco Metodológico ......................................................................................................... 29
Diseño de Investigación ................................................................................................ 29
viii
Población y muestra ...................................................................................................... 29
Materiales y Métodos .................................................................................................... 29
Materiales. ..................................................................................................................... 29
Matriz de Operacionalización de las Variables. ............................................................ 32
Métodos ......................................................................................................................... 32
Primera Etapa: Caracterización Fitoquímica de la especie vegetal. .............................. 32
Segunda Etapa: Ensayos Químicos del extracto vegetal y de Productos Naturales
procesados de uso medicinal de Artemisia absinthium. ............................................... 35
Tercera Etapa – Ensayos físicos de Productos Naturales procesados de uso medicinal de
Artemisia absinthium. ................................................................................................... 40
Técnicas de procesamiento y análisis de datos.............................................................. 43
Capitulo IV ........................................................................................................................ 44
Análisis y discusión de resultados..................................................................................... 44
Primera Etapa: Extracción y Análisis fitoquímico de la especie vegetal. ..................... 44
Segunda Etapa: Ensayos Químicos del extracto vegetal y de Productos Naturales
procesados de uso medicinal de Artemisia absinthium. ............................................... 47
Tercera Etapa: Ensayos físicos de Productos Naturales procesados de uso medicinal de
Artemisia absinthium. ................................................................................................... 51
Capítulo V ......................................................................................................................... 54
Conclusiones y Recomendaciones .................................................................................... 54
Conclusiones ................................................................................................................. 54
Recomendaciones. ......................................................................................................... 55
Bibliografía ....................................................................................................................... 56
Anexos .............................................................................................................................. 60
Anexo 1: Esquema Causa-Efecto .................................................................................. 60
Anexo 2: Categorización de Variables .......................................................................... 62
Anexo 3: Tamizaje Fitoquímico .................................................................................... 63
Anexo 4: Diagramas Flujo ............................................................................................ 64
Anexo 5: Identificación de la especie vegetal ............................................................... 65
Anexo 6: Curvas de Calibración para la Cuantificación de Fenoles totales y Flavonoides.
...................................................................................................................................... 66
Anexo 7: Fotografías de la metodología experimental.................................................. 68
ix
Anexo 8: Informe Técnico de Espectrofotómetro Fisher Scientific Modelo: SP-
2100UVPC.................................................................................................................... 77
x
Índice de anexos
Anexo 1: Esquema Causa-Efecto ................................................................................... 60
Anexo 2: Categorización de Variables ........................................................................... 62
Anexo 3: Tamizaje Fitoquímico ..................................................................................... 63
Anexo 4: Diagramas Flujo .............................................................................................. 64
Anexo 5: Identificación de la especie vegetal ................................................................ 65
Anexo 6: Curvas de Calibración para la Cuantificación de Fenoles totales y Flavonoides.
........................................................................................................................................ 66
Anexo 7: Fotografías de la metodología experimental ................................................... 68
Anexo 8: Informe Técnico de Espectrofotómetro Fisher Scientific Modelo: SP-
2100UVPC ...................................................................................................................... 77
xi
Índice de figuras
Figura 1. La farmacognosia estudia los principios activos de origen natural. .................... 7
Figura 2. Hojas de la especie vegetal Artemisia absinthium. ............................................ 10
Figura 3. Parroquias urbanas del cantón Riobamba – Provincia de Chimborazo. ............ 12
Figura 4 Representación gráfica de las medias del contenido de fenoles totales en el
extracto vegetal y Productos Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia
absinthium. ........................................................................................................................ 48
Figura 5. Representación gráfica de las medias de la cuantificación de flavonoides en el
extracto vegetal y Productos Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia
absinthium. ........................................................................................................................ 50
Figura 6. Perfil cromatográfico para la identificación de absintina. ................................. 51
Figura 7. Curva de calibración de Ácido gálico para la cuantificación de fenoles totales.66
Figura 8. Curva de calibración de quercetina para la cuantificación de flavonoides. ...... 66
Figura 9 Muestra vegetal adquirida en Jambi Kiwa.......................................................... 68
Figura 10 Lavado con Solución de Agua y solución de hipoclorito de sodio al 5% ........ 68
Figura 11 Proceso de secado de la muestra vegetal. ......................................................... 68
Figura 12 Filtración al vacío ............................................................................................. 68
Figura 13 Rotavapor utilizado para concentrar el extracto etanólico de hojas de Artemisia
absinthium. ........................................................................................................................ 68
Figura 14 Determinación de Cenizas totales ..................................................................... 69
Figura 15 Extracción para el tamizaje fitoquímico ........................................................... 69
Figura 16 Identificación de cardiotónicos ......................................................................... 69
Figura 17 Identificación de alcaloides .............................................................................. 70
Figura 18 Identificación de flavonoides-Reacción de Shinoda ......................................... 70
Figura 19 Identificación de taninos ................................................................................... 70
Figura 20 Identificación de esteroles ................................................................................ 71
Figura 21 Elaboración de la curva de calibración de flavonoides para su cuantificación 71
Figura 22 Elaboración de la curva de calibración de fenoles totales para su cuantificación
........................................................................................................................................... 71
Figura 23 Cromatografía de capa fina ............................................................................... 72
Figura 24 Ensayo de Identidad de extracto vegetal y de productos naturales procesados de
uso medicinal. ................................................................................................................... 72
Figura 25 Análisis microbiológico de tabletas de Artemisia absinthium .......................... 72
Figura 26 Análisis microbiológico del jarabe de Artemisia absinthium ........................... 73
Figura 27 Trituración de las tabletas de Artemisia absinthium ......................................... 73
Figura 28 Obtención del extracto de tabletas de Artemisia absinthium. .......................... 73
Figura 29 Jarabe de Artemisia absinthium. ....................................................................... 74
Figura 30 Extracción de columna para jarabe de Artemisia absinthium ........................... 74
Figura 31 Determinación de friabilidad de tabletas de Artemisia absinthium ................. 74
xii
Figura 32 Determinación de desintegración de tabletas de Artemisia absinthium .......... 75
Figura 33 Determinación de dureza de tabletas de Artemisia absinthium ........................ 75
Figura 34 Determinación de pH del jarabe de Artemisia absinthium .............................. 75
Figura 35 Determinación de densidad del jarabe de Artemisia absinthium ...................... 76
Figura 36 Determinación de viscosidad del jarabe de Artemisia absinthium ................... 76
xiii
Índice de tablas
Tabla 1 Taxonomía de Artemisia absinthium.................................................................... 10
Tabla 2 Características macro morfológicas de las hojas de Artemisia absinthium. ...... 12
Tabla 3 Parámetros de Control de Calidad de productos vegetales. ............................... 14
Tabla 4 Dimensiones e indicadores de las variables ........................................................ 32
Tabla 5 Preparación de la curva de calibración para la cuantificación de Fenoles totales.
........................................................................................................................................... 36
Tabla 6 Preparación de la curva de calibración para la cuantificación de Flavonoides. 37
Tabla 7 Datos informativos de jarabe y tabletas de Artemisia absinthium. ..................... 40
Tabla 8 Resultados de la caracterización de las hojas de Artemisia absinthium. ............ 45
Tabla 9 Resultados del análisis fitoquímico de hojas de Artemisia absinthium. .............. 46
Tabla 10 Resultados obtenidos en la Cuantificación de Fenoles totales en extracto vegetal
y Productos Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia absinthium. .............. 47
Tabla 11 Resultados obtenidos en la cuantificación de flavonoides del extracto de
Artemisia absinthium y de sus Productos Naturales procesados de uso medicinal. ........ 49
Tabla 12 Envase primario declarado en el ARCSA para productos naturales procesados
de uso medicinal que contienen Artemisia absinthium. .................................................... 51
Tabla 13 Resultados obtenidos para ensayos físicos de jarabe con Artemisia absinthium.
........................................................................................................................................... 52
Tabla 14 Resultados obtenidos para ensayos físicos de tabletas con Artemisia absinthium.
........................................................................................................................................... 53
xiv
Lista de Abreviaturas
ARCSA: Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria
BPM: Buenas Prácticas de Manufactura
BPA: Buenas Prácticas de Agricultura
OMS: Organización Mundial de la Salud
USP-NF: The United States Pharmacopea and The National Formulary
Título: “Estudio farmacognósico de Productos Naturales procesados de uso medicinal y del
extracto vegetal de Artemisia absinthium (ajenjo)”
Autor: María Gabriela Daza Macías
Tutor: Novillo Logroño Fernando Augusto
Resumen
La presente investigación se basó en verificar la presencia del metabolito secundario en el extracto
vegetal y su posterior comparación con sus Productos Naturales procesados de uso medicinal.
Primeramente, la especie vegetal fue identificada taxonómicamente, posteriormente, se verificò la
identidad de la droga cruda como: porcentaje de humedad 6,49%, cenizas totales 0,1140%, cenizas
solubles en agua 0,9126%, cenizas insolubles en ácido 0,0684%. Una vez preparados los extractos
se realizó el tamizaje fitoquímico en donde se evidenció la presencia de alcaloides, flavonoides,
taninos, triterpenos y esteroles en los extractos de las hojas, jarabe y tabletas de Artemisia
absinthium. A continuación, se realizaron los ensayos químicos para los tres extractos donde se
determinó el contenido de fenoles totales para las hojas, jarabe y tabletas cuyos valores
respectivamente fueron: 42,618 mg GA/g ET; 31,063 mg GA/g ET; y 25,082 mg GA/g ET y en la
cuantificación de flavonoides se obtuvo: 9,6287 mg QE/g ET; 6,2697 mg QE/g ET; y 5,8217 mg
QE/g ET para hojas, jarabe y tableta respectivamente. Consecutivamente, se comparó el perfil
cromatográfico de la muestra vegetal con los extractos de los productos naturales procesados de
uso medicinal identificando la absintina la fase móvil fue acetona/ácido acético
glacial/tolueno/diclorometano (1:0,5:3:5) obteniendo un Rf de 0,39 para la absintina. Finalmente,
la última etapa consistió en el control de parámetros físicos para jarabe y tabletas mediante los
criterios establecidos en la Farmacopea Estados Unidos (USP 39 NF34).
Palabras Clave: ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO, PRODUCTOS NATURALES
PROCESADOS DE USO MEDICINAL, Artemisia absinthium, ABSINTINA.
xviii
Title: "Pharmacognostic study of processed natural products for medicinal use and plant
extract of Artemisia absinthium (ajenjo)".
Author: Maria Gabriela Daza Macias
Tutor: Logroño Fernando Augusto
Abstract
The present investigation was based on check for the presence of secondary metabolite in the plant
extract and its subsequent comparison with its Natural Products processed for medicinal use. First,
the plant species was identified taxonomically, subsequently verified the identity of the raw drug
such as: moisture percentage of 6.49%, total ashes 0.1140%, ashes soluble in water 0.9126%, acid
insoluble ash 0.0684%. Once prepared extracts were carried out the phytochemical screening
where it showed the presence of alkaloids, flavonoids, tannins, triterpenes and sterols in the
extracts of the leaves, syrup and tablets from Artemisia absinthium. Then there were the chemical
tests for the three extracts where it was determined the total phenol content for sheets, syrup and
tablets whose values respectively were: 42.618 mg GA/g ET; 31.063 mg GA/g ET; and 25.082 mg
GA/g ET and in the quantification of flavonoids was obtained: 9.6287 mg QE/g ET; 6.2697 mg
QE/g ET; and 5.8217 mg QE/g ET to leaves, syrup and tablet respectively. Consecutively,
compared the chromatographic profile of the vegetable sample with the extracts of natural products
processed in medicinal use by identifying the absintina the mobile phase was glacial acetic
acid/acetone/Toluene/dichloromethane (1:3:5:0.5) obtaining a Rf of 0.39 for the Absintina.
Finally, the last stage consisted in the control of physical parameters for syrup and tablets using
the criteria established in the United States Pharmacopoeia (USP 39 NF34).
Key words: PROCESSED NATURAL PRODUCTS OF MEDICINAL USE, Artemisia
absinthium, ABSINTINA.
1
Introducción
En Ecuador, las plantas medicinales se usan de manera cotidiana debido al
conocimiento tradicional que se tiene desde hace muchos años atrás. Es común, que las personas
utilicen estas especies vegetales mediante las distintas formas farmacéuticas o formas de
preparación que se encuentren disponibles para su consumo.
Existen ciertas dificultades durante la preparación de los Productos Naturales
procesados de uso medicinal, ya que no se garantiza la presencia del metabolito secundario
responsable de la actividad biológica, así como también, de la cuantificación del mismo, con el
propósito de manejar una dosis recomendada para un determinado tratamiento. Se debe
mencionar, que la administración en dosis inadecuadas pueden causar problemas hepatotóxicos
en el organismo como es el caso de la absintina que está presente en Artemisia absinthium.
El siguiente trabajo consta de 5 capítulos: el problema, marco teórico, marco
metodológico, análisis y discusiones de resultados y conclusiones.
En el capítulo I “El problema” se describe el planteamiento del problema donde se
evidencia la cantidad de productos naturales procesados de uso medicinal a través de plantas
medicinales como lo es Artemisia absinthium, además de la formulación del problema y la
justificación, mostrando la finalidad y los objetivos de la investigación.
En el capítulo II “Marco Teórico”, donde se detallan investigaciones realizadas
anteriormente sobre extractos vegetales de Artemisia absinthium de diferentes países. A su vez
se expone la respectiva revisión bibliografía y el marco legal que sustenta está investigación
además se enuncian las hipótesis, concluyendo con la conceptualización de las variables.
En el capítulo III “Marco metodológico”, se describen el diseño, tipo y nivel que
requerirá esta investigación, además de los procesos realizados para la obtención del extracto
vegetal de Artemisia absinthium y su posterior tratamiento de los productos naturales
procesados de uso medicinal. En este capítulo se menciona los métodos y materiales que se
utilizó, así como la operacionalización de variables, las técnicas de recolección de datos y el
análisis de los mismos.
En el capítulo IV “Análisis y discusiones de resultados”, se detalla los resultados de la
investigación.
2
Capítulo I
El Problema
Planteamiento del Problema
Desde la antigüedad, las plantas con atributos medicinales fueron las primeras
medicinas utilizadas de forma empírica para la cura de diversas patologías que padecía el
hombre. El uso de plantas ha transcendido durante muchos años, este conocimiento ha
sido transmitido de varias maneras, una de estas es la comunicación oral, es decir, la
información que va pasando de una persona a otra, o de padres a hijos; todo esto conlleva
a aspectos negativos ya que la información al pasar de persona a persona está sujeta a
numerosas variaciones. Está es una de las causas principales por la que la población se
automedica con ellas, alegando que son inocuas y más seguras, por el simple hecho de ser
naturales, pero lo realizan sin una previa información etnofarmacológica. (Ochoa,
González, & Viso, 2006).
Muchas veces las plantas medicinales contienen más de un principio activo que
si bien son los responsables de las propiedades terapéuticas que se les atribuye, también
son los causantes de las intoxicaciones y reacciones adversas (Ochoa, González, & Viso,
2006); debido a que la mayoría de las personas utilizan de forma arbitraria estas especies
vegetales, lo cual puede ocasionar un daño a su organismo, cuando son ingeridas en dosis
inadecuadas o por períodos prolongados, todo esto va de la mano a una percepción errónea
con respecto a las cantidades y elementos presentes en las plantas medicinales.
La contaminación inadvertida por agentes microbianos o químicos durante
cualquiera de las etapas de la producción, puede también comprometer la inocuidad y la
calidad por factores, como su localización geográfica, cultivo, fertilizantes utilizados, el
pH del suelo, condiciones de secado y preparación del extracto, todos estos elementos
deben ser considerados al momento de elaborar un Producto Natural procesado de uso
medicinal.
Actualmente, los productos elaborados a base de plantas, se han convertido en
una alternativa que los fármacos de síntesis, como consecuencia los lugares de expendio
han proliferado a nivel nacional. De acuerdo con datos del Instituto Nacional de
Estadística y Censos (INEC), 276 establecimientos son especializados en medicina
natural. Según el INEC, 1959 personas están ocupadas en esta actividad (El Comercio,
2012).
Las plantas medicinales se han usado para el tratamiento de muchas
enfermedades, cuyos conocimientos remontan desde la antigüedad, como lo es Artemisia
3
absinthium L., comúnmente conocido como (ajenjo) es una planta perenne de flor
amarilla distribuida en varias partes del mundo (Abad, Bedoya, Apaza, & Bermejo, 2012),
que presenta propiedades de carácter vermífugo, emenagogo, colerético y antiséptico.
(Ashok & Upadhyaya, 2013). En Ecuador, sus usos medicinales son para el dolor gástrico,
falta de apetito, también como antihelmíntico, febrífugo (Ministerio de Salud Pública ,
2008) . La especie vegetal Artemisia absinthium de acuerdo con el listado de plantas
medicinales proporcionado por el ARCSA (Agencia Nacional de Regulación, Control y
Vigilancia Sanitaria, 2015), esta especie se encuentran en la provincia de Imbabura a una
altitud de 2000-2500 msnm.
La mayoría de las especies del género Artemisia están conformadas por altas
concentraciones de volátiles, especialmente de terpenos que se encuentran en hojas y
flores de la planta. Estos compuestos, serían los responsables de la neurotoxicidad
manifestada por convulsiones epileptiformes en animales de experimentación (Bach, y
otros, 2016).
Para el caso especial del ajenjo (Artemisia absinthium), la mayor parte de
información demuestra que esta planta contiene dos metabolitos sumamente importantes
como son la tujona y la absintina. Estas sustancias en cierta medida son capaces de
explicar la farmacología y toxicología de esta planta, sin embargo, también existen otros
metabolitos de cierto interés fitoquímico, dentro de los más comunes están los alcaloides,
esteroides, diterpenos, lactonas sesquiterpénicas, flavonoides, cumarinas y quinonas.
(Chonate & Figueroa, 2011).
Los países en vía de desarrollo tienen problemas en el control y regulación en el
expendio de productos naturales procesados de uso medicinal; ya que muchas veces
existen a la venta productos que no cuentan con registro sanitario, y peor aún que cumplan
con los parámetros que garanticen un producto de calidad. La Organización Mundial de
la Salud, ha establecido los métodos para el control de calidad de los materiales vegetales,
un factor de gran importancia para garantizar la seguridad, eficacia e inocuidad del
producto final obtenido. (Organización Mundial de la Salud, 1998).
Formulación del problema
El interés de esta investigación radica en realizar el estudio farmacognósico de
la especie Artemisia absinthium con la finalidad de comparar el principio activo del
extracto con el de los Productos Naturales procesados de uso medicinal.
¿Existe la presencia del principio activo en los Productos Naturales procesados
de uso medicinal de Artemisia absinthium?
4
Objetivos de la Investigación
Objetivo General.
Realizar el estudio farmacognósico de Productos Naturales procesados de uso
medicinal y del extracto vegetal de Artemisia absinthium (ajenjo).
Objetivos Específicos.
Recolectar la especie vegetal con su posterior identificación taxonómica de
Artemisia absinthium.
Obtener el extracto vegetal de las hojas de Artemisia absinthium mediante
maceración.
Realizar la caracterización fitoquímica del extracto vegetal de Artemisia
absinthium.
Comparar el perfil cromatográfico del extracto vegetal de Artemisia absinthium
con los Productos Naturales procesados de uso medicinal.
Evaluar los parámetros de control físico, químico y microbiológico de los
productos naturales procesados de uso medicinal que contienen Artemisia absinthium.
Justificación e importancia.
La población conoce el uso tradicional de las plantas, como la utilización de
alguna parte de la especie (tallos, hojas, flores, raíces) o su preparación (infusión,
molienda, maceración, cocción), cuándo y dónde cultivarla (clima y fecha) y la forma de
administración (ingerirla, untarla o inhalarla); debido a estos conocimientos ancestrales
es que existe productos elaborados a base de plantas. Como consecuencia, Ecuador no
está exento a que las personas piensen que estos productos son una alternativa natural
debido a que su consumo y uso están en aumento cada día.
Existe infinidad de Productos Naturales procesados de uso medicinal en el
mercado para diversas patologías, pero se requiere saber si estos productos cuentan con
un control de calidad, ya que es un proceso múltiple que se debe cubrir todas las etapas,
desde el cultivo del material vegetal hasta el control del producto terminado incluso
cuando este ya está en comercialización, de tal manera que proporcione al consumidor un
producto de calidad.
En la actualidad, el control posregistro se lo realiza a los productos naturales
procesados de uso medicinal por la entidad reguladora ARCSA de tal manera que este
análisis permite corroborar la seguridad de estos productos hacia el consumidor.
5
La característica fundamental de los Productos Naturales procesados de uso
medicinal es la complejidad de sus mezclas y por lo tanto, una presencia considerable de
metabolitos secundarios. Estos metabolitos, pueden contribuir de una manera individual
o a través de interacciones con otros para generar el efecto farmacológico final. Es por
esta razón, que es necesario realizar el estudio químico de las diferentes especies
vegetales, con el propósito de asegurar la confiabilidad y la precisión de las
investigaciones farmacológicas y los posibles efectos colaterales de los compuestos
activos presentes.
Es importante considerar que muchas de las actividades farmacológicas que
presentan las diversas especies vegetales, dependen de la naturaleza del extracto
preparado ya sea acuoso o etanólico, de la composición de los metabolitos secundarios
presentes en la planta, y de la dosis utilizada (E.V.N Beshay, 2017).
Por otra parte, en cuanto a su alcance, en esta investigación se comprobó la
identidad y presencia del principio activo de la especie vegetal, para lo cual
adicionalmente se realizaron reacciones de identificación de los diferentes grupos de
Productos Naturales y del perfil cromatográfico aplicando la técnica de cromatografía de
capa fina para el extracto vegetal y de las formas farmacéuticas que se comercializan de
Artemisia absinthium. Adicionalmente, se evaluó los parámetros de calidad de estos
productos mediante controles físicos, químicos y microbiológicos.
6
Capítulo II
Marco Teórico
Antecedentes de la investigación
Ashok & Upadhyaya, (2013) realizaron estudios fitoquímicos de los extractos
hexánico y alcohólicos de Artemisia absinthium y Artemisia annua, reportando la
presencia de hidratos de carbono, saponinas, fitosterol, proteínas y aminoácidos, taninos,
compuestos fenólicos y flavonoides.
Guerra y col. (2001), evaluaron la actividad antimicrobiana y antigiardiásica de
los extractos fluidos de Artemisia absinthium L., Stachitarpheta jamaicensis L., Teloxis
ambrosioides L. Solo se menciona que la presencia de monoterpenos y sesquiterpenos en
las distintas especies de Artemisia serían los responsables de la aplicación etnobotánica.
Habibipour & Rajabi (2015), demostraron que Artemisia absinthium, Arctium
lappa, tienen actividad frente a bacterias y virus se encontró que el extracto
hidroalcohólico (70%) obtenido mediante maceración de Artemisia absinthium, mostró
un efecto inhibitorio frente Haemophilus influenza y Pseudomonas aeruginosa. Además,
se comprobó que el extracto de Artemisia absinthium presentó mejor efecto con respecto
al medicamento ofloxacina. Estos autores mencionan en su investigación la necesidad de
realizar más estudios para establecer el uso efectivo y seguro de estos extractos de plantas.
En un reciente estudio de la Universidad de Cambridge por Beshay (2017),
evaluaron los efectos terapéuticos del extracto acuoso y etanólico de la hierba medicinal
Artemisia absinthium en comparación con el medicamento de elección praziquantel para
Hymenolepis nana, comprobando que la especie vegetal presenta una actividad
anticestodal tanto in vitro como in vivo. Además, Ferreira et al. (2011) documentaron que
a una concentración de 2 mg / mL el extracto etanólico, fue eficaz contra Schistosoma.
mansoni y Fasciola hepatica adultos in vitro.
En un estudio del Consejo Superior de Investigaciones Científicas por Bailén
(2008), se reporta la presencia de flavonas como la artemetina y casticina que fueron
aisladas a partir del extracto acetónico de las partes aéreas de Artemisia absinthium.
Adicionalmente, se cuantificó estás flavonas determinándose que la artemetina (23,2 %)
fue el compuesto mayoritario y en menor cantidad la casticina (6,08 %). Sin embargo, en
la investigación de Chonate et al. (2011) de la Universidad Nacional de Trujillo se realizó
la cuantificación de flavonoides totales de Artemisia absinthium expresados como
quercetina mediante el método espectrofotométrico a una longitud de onda de 258 nm
7
obteniendo una concentración de flavonoides del extracto de Artemisia absinthium de
3,78 %.
Durante los últimos años no se ha realizado investigaciones sobre el control
posregistro de los Productos Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia
absinthium. En investigaciones recientes, Venegas (2016) realizó el estudio de la
utilización de perfiles cromatográficos en la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad
Central del Ecuador con fines de control posregistro en formas farmacéuticas sólidas de
fitomedicamentos con actividad gastroprotectora, en donde se menciona que es indispensable
realizar un análisis de control de las especies vegetales, proporcionadas por los proveedores,
de tal manera, que exista un control de calidad desde el cultivo hasta la elaboración del
producto.
Fundamentación teórica
Farmacognosia.
“Etimológicamente la palabra farmacognosia significa “conocimiento de los
remedios” y proviene del griego pharmakon (remedio) y gnosis (conocimiento)”
(Delgado & Romo, 2015).
Figura 1. La farmacognosia estudia los principios activos de origen natural.
(Cortez, y otros, 2004).
8
La farmacognosia estudia los principios activos de origen natural que pueden
poseer un potencial terapéutico o aplicación en la industria. Por lo tanto, son de
importancia en el desarrollo de la industria farmacéutica con repercusiones en las ciencias
médicas. Además, los estudios derivados de esta ciencia también tienen relevancia en el
progreso de la industria alimenticia, cosmética y textil, entre otras (Cortez, y otros, 2004).
La importancia fundamental del estudio de la Farmacognosia radica, en la
contribución que ofrecen los remedios de la naturaleza tanto en la terapéutica
convencional (alópatica), como en la tradicional. (Cortez, y otros, 2004).
.
Campos de acción de la farmacognosia.
La farmacognosia se ocupa de diferentes aspectos relacionados como la historia,
procedencia biológica (nombre botánico) y distribución geográfica de la especie vegetal;
así como, de establecer la composición química de la droga, tanto cualitativa como
cuantitativa. (Delgado & Romo, 2015).
Sin embargo, la farmacognosia interviene en el control de calidad de las especies
vegetales, es decir, en buscar métodos para comprobar los contenidos requeridos del
principio activo, de tal manera que permita asegurar la ausencia de ciertos productos
tóxicos y evitar adulteraciones y falsificaciones (Delgado & Romo, 2015).
Planta Medicinal.
Las plantas medicinales son vegetales que contienen principios activos
(metabolitos secundarios), conjuntamente con una actividad benéfica o perjudicial sobre
el organismo (Olaya & Mendez, 2003). Las plantas medicinales permiten disminuir o
aliviar las enfermedades y permiten recuperar la salud parcial o totalmente en el
organismo (Olaya & Mendez, 2003). Según la OMS, una planta medicinal “es aquella
que, en uno o más de sus órganos, contiene sustancias que pueden ser utilizadas con fines
terapéuticos o preventivos o que son precursores para la semisíntesis” (OMS, 1996).
Las plantas medicinales deben cosecharse durante la temporada o período
óptimos para garantizar la obtención de materias vegetales medicinales y productos
herbarios acabados de la mejor calidad posible. La época de cosecha depende de la parte
de la planta que vaya a usarse. (Organización Mundial de la Salud, 2003). Las materias
vegetales medicinales recolectadas deben protegerse de insectos, roedores, aves y demás
plagas, así como de los animales de granja y domésticos.
Buenas prácticas de recolección de plantas medicinales.
9
Los planes de gestión de la recolección deben contemplar un sistema para
establecer niveles de explotación sostenibles y describir las prácticas de recolección
idóneas en función de las especies y de las partes de la planta utilizadas (raíces, hojas,
frutos, etc.). (Organización Mundial de la Salud, 2003).
El mejor momento para la recolección (la temporada u horas del día óptimas)
debe determinarse basándose en la calidad y la cantidad de los componentes con actividad
biológica y no el rendimiento total en materia vegetal de las partes de las plantas
medicinales de interés. (Organización Mundial de la Salud, 2003).
Los utensilios de recolección, como machetes, tijeras, sierras e instrumentos
mecánicos, deben mantenerse limpios y en condiciones adecuadas. Las piezas que entran
en contacto directo con las materias vegetales medicinales recolectadas no deben tener
lubricante en exceso ni otros contaminantes. (Organización Mundial de la Salud, 2003).
Generalidades sobre el género Artemisia.
El género Artemisia pertenece a la familia Asteraceae, incluye un gran número
de especies, aproximadamente 400, la mayoría de los representantes son hierbas o
arbustos aromáticos, entre las que se destaca, Artemisia absinthium, por su importancia
como fuente de nuevas y efectivas drogas y de empleo conocido en la medicina herbaria
tradicional china (Luz & Castro, 2009).
10
Taxonomía.
Tabla 1 Taxonomía de Artemisia absinthium.
Taxonomía
Reino Plantae
División Magnoliophyta
Clase Magnoliopsida
Subclase Asteridae
Orden Asterales
Familia Asteraceae
Subfamilia Asteroideae
Género Artemisia
Especie Artemisia absinthium
Nombre común Ajenjo, artemisa amarga
Nota: Tomada de (Corchado, 1995).
El ajenjo (Artemisia absinthium) es una planta herbácea y vivaz, de tallos
ramosos, vellosos, de matiz grisáceo, que alcanzan alturas que llegan a superar un metro
de altura. Sus hojas son pecioladas, alternas, pinnatisectas, vellosas, de matiz verde
grisáceo por el haz y grisáceo por el envés. Sus flores son de color amarillo pediculares,
reunidas en capítulos globulosos y formando racimos. Están distribuidas a lo largo de los
tallos, presentando un olor característico. (Llorens, Castell, & Pascual, 2008).
Figura 2. Hojas de la especie vegetal Artemisia absinthium.
Nota: Tomada de (Tramil, 2017).
El origen del nombre es incierto y se remonta de varias fuentes históricas.
Algunos mencionan que se deriva de Artemisia, reina de Caria y esposa de Mausolo,
11
mientras que otros de la diosa de la caza, Artemis y del griego artemes, que significa
amargo (Editrice, 2014).
Descripción botánica.
Planta perenne, muy ramificada, tallos erectos, con ramas herbáceas, flexibles,
de olor muy fuerte característico y agradable para muchas personas; toda la planta está
recubierta de una fina pubescencia verde grisácea (Arango, 2006).
Descripción geográfica.
La muestra vegetal de A. absinthium, se recolectó en la “Asociación de
Productores de plantas medicinales de Chimborazo JAMBI KIWA”.
Provincia: Chimborazo
Cantón: Riobamba
Parroquia: Yaruquiés.
Barrio: Santa Cruz
Longitud: 1°41'26.4"S 78°39'09.9"W
Altitud: 2750 msnm
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Figura 3. Parroquias urbanas del cantón Riobamba – Provincia de Chimborazo.
Nota: Tomada de (INEC, 2018).
En la presente investigación se utilizó las hojas de Artemisia absinthium por lo
que se mencionan a continuación sus características macro morfológicas:
Tabla 2 Características macro morfológicas de las hojas de Artemisia absinthium.
Nota: Tomada de (Pelaez & Santos, 2016).
Elaborado por Daza Gabriela.
Composición química de Artemisia absinthium.
Aceite volátil: Presenta altos niveles de tujona responsable de los efectos
alucinógenos de la planta; cis-epoxi transabinil acetato o crisantenil acetato, cimeno
felandreno, cadimeno y azuleno (le confiere color azul). El 76% del aceite esencial se
compone de alcoholes libres como el tujol (Arango, 2006).
Forma
Limbo Biternada
Borde Dentado
Ápice Redondeado
Base Caulinares (sobre el tallo)
Peciolo Largo
Dimensiones Largo 5,78 cm
Ancho 1,8 cm
Aspecto
Color Verde grisáceo
Olor Herbáceo muy intenso
Sabor amargo
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Principios amargos fuertes, químicamente lactosas sesquitérpenicas del grupo de
los guayanólidos, conocidos como, anabsintina, artamarinina y anabsintia. taninos,
carotenoides, fitosterol, ácidos nicotínico y palmítico, quebrachitol y pequeñas cantidades
de vitamina C (Arango, 2006).
En extractos se tiene componentes mayoritarios como absintina, artemetina y
casticina estas flavonas producen efectos sinérgicos, además, lactonas sesquiterpénicas
los compuestos aislados son hidroxipelenólido, cetopelenólido, diihidrocostunolida,
absilactona (Bailén, 2008).
Lignanos: sieversol, asantina, sesamina, kobusina obtenidos con el extracto
crudo de ajenjo. La sesamina y la asantina presentan propiedades sinérgicas con
insecticidas de tipo piretroide (Bailén, 2008).
Usos de ajenjo (Artemisia absinthium) en la medicina tradicional.
Se emplea en el tratamiento de trastornos gástricos y biliares. Se usa como
digestivo, estimulante del apetito, contra los cólicos y parásitos intestinales; estimulante
cardiaco, antiséptico, carminativo, emenagogo, colagogo, antiespasmódico, para curar
resfriados, estimulante uterino y calma el dolor durante el parto. (Luz & Castro, 2009).
Uso medicinal aprobado por la Comisión Revisora de Productos Farmacéuticos
del Invima: Estimulante del apetito (Fonnegra & Luz, 2007).
En Ecuador en las afecciones que se utiliza esta especie son para problemas
digestivos inflamatorios (Cerón, 2006), además sirve para el alivio de dolores de parto,
diabetes, cefalea y es usado para controlar el exceso de colesterol en la sangre. (Ministerio
de Salud Pública , 2008). La infusión concentrada de hojas de ajenjo es muy eficiente
para la eliminación de lombrices intestinales (Instituto Nacional Autónomo de
Investigaciones Agropecuarias, 1997).
De acuerdo, a las Normas Farmacológicas del Ministerio Salud Pública para
Productos Naturales se menciona que el extracto acuoso de las partes aéreas de Artemisia
absinthium, se recomienda no administrar en el embarazo, lactancia en casos de epilepsia,
evitando su uso prolongado (Ministerio de Salud Pública, 2016).
14
Advertencias y contraindicaciones
Epilepsia y embarazo. Evitar su uso prolongado. Por su contenido de tujona, el
aceite esencial puede provocar convulsiones. Además, es tóxica con propiedades
alucinógenas y adictivas porque compite con el receptor tetrahidrocannabinol (principio
activo de la marihuana). El uso prolongado del ajenjo produce insomnio, mareos, dolor
de cabeza, calambres, pérdida del conocimiento, y trastornos nerviosos que pueden ser
irreversibles. Está contraindicado en el embarazo por ser estimulante uterino, además, la
tujona puede pasar al bebé en la leche materna (Fonnegra & Luz, 2007).
Control de Calidad del Material Vegetal.
Tabla 3 Parámetros de Control de Calidad de productos vegetales.
1. Definición clara y científica
2. Identidad:
Características macro y microscópicas.
Características organolépticas.
Perfil cromatográfico.
Reacciones de Identificación.
3. Pureza:
Humedad.
Constantes físicas.
Metales pesados.
Cenizas.
Materia Extraña
Contaminación
microbiana.
4. Valoración: Contenido en principios activos
Contenido en principios activos o marcadores.
Nota: Tomada de (Delgado & Romo, 2015).
15
Ensayos de Identidad.
Las pruebas indicadas no están destinadas a proporcionar una confirmación
completa de la estructura química o composición de la sustancia; su objeto es confirmar
con un grado de seguridad aceptable.
Evaluación macroscópica
Los caracteres macroscópicos incluyen: presentación, conformación, tamaño,
textura, marcas externas, fractura, superficie externa e interna de la especie vegetal a
analizar. Este ensayo es importante ya que permite diferenciar sustituyentes muy similares
macroscópicamente, pero debe complementarse con los análisis microscópicos y/o
fisicoquímicos. (Ferraro, Martino, Bandoni, & Nadinic, 2015).
Evaluación microscópica
La evaluación microscópica de los materiales vegetales medicinales es
indispensable la identificación de materiales rotos o en polvo; el espécimen puede ser
tratado con reactivos químicos. Un examen microscópico por sí solo no puede
identificación completa. (Organización Mundial de la Salud, 1998).
Las preparaciones pueden realizarse con especies vegetales enteras,
fragmentadas o en polvo como también con cortes histológicos. Estos ensayos sirven para
identificar y calificar la pureza o calidad del material vegetal. También es importante la
comparación con un espécimen auténtico que revelará estructuras no detalladas en la
monografía que podrían ser consideradas como materia extraña. (Migadalia & Cuellar,
2011).
Ensayo de caracterización de grupos fitoquímicos.
La identidad de una especie vegetal está dada por la presencia de los
constituyentes químicos característicos de esta especie. Las reacciones químicas permiten
verificar la presencia de grupos de Productos Naturales como flavonoides, alcaloides,
terpenos, entre otros, y se basan en métodos simples, rápidos y de bajo costo. (Miranda,
2014)
Generalmente estas reacciones son inespecíficas y ocurren con grupos
funcionales o estructuras comunes a varias sustancias. También existen las reacciones
consideradas específicas que son las que transcurren con algunas estructuras típicas de
una única clase de sustancias. Las reacciones coloreadas se basan en reacciones de color
16
propias de los compuestos activos o de algunas sustancias características de la planta. Por
otro lado, se utilizan las reacciones de precipitación, sobre todo para aquellas especies
vegetales que contienen alcaloides. (Ferraro, Martino, Bandoni, & Nadinic, 2015).
17
Perfil Cromatográfico.
Cromatografía de Capa fina
La cromatografía en capa fina es un método analítico de separación. Se basa en
la preparación de una capa, uniforme de un adsorbente mantenido sobre una placa de
vidrio u otro soporte. La fase estacionaria será un componente polar y la fase móvil
(eluyente) será por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los
componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.
(Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos, 2013).
Los siguientes parámetros deben determinarse con base en las monografías de
las Farmacopea o establecidas experimentalmente por el análisis del material vegetal:
El tipo de adsorbente y método de activación.
El método de preparación y concentración de la solución de
prueba y la solución de referencia.
El volumen de la solución que se aplicará en la placa.
La fase móvil y distancia de migración.
Las condiciones de secado, la temperatura y el método de
detección.
Fluorescencia y color.
Detección bajo lámpara de luz UV (254nm o 365nm) o visible.
(Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos,
2013).
Revelado
La localización de las manchas de interés se hace por visualización directa bajo
una lámpara de luz ultravioleta, se emplea un reactivo revelador el mismo que se aplica
con un atomizador. (Sharapin, 2000).
El coeficiente de reparto, se define como la razón entre la distancia recorrida de
la mancha, entre la distancia recorrida por el solvente. El Rf se utiliza para la
identificación de diferentes sustancias químicas. (Sharapin, 2000).
Contaminación microbiana.
Las especies vegetales normalmente llevan un gran número de bacterias
mohos y levaduras, a menudo originados en el suelo. Mientras que una gran variedad
de hongos forma la microflora natural de las hierbas, las bacterias aeróbicas
18
formadoras de esporas frecuentemente son las que mayormente predominan. “Las
prácticas actuales de cosecha, manipulación y producción pueden causar
contaminación adicional y crecimiento microbiano”. (Organización Mundial de la
Salud, 1998). La determinación de Escherichia coli y moho puede indicar la calidad
de las prácticas de producción y cosecha.
Además, la presencia de aflatoxinas en material vegetal puede ser peligrosa
para la salud si se absorbe incluso en cantidades muy pequeñas. Por lo tanto, deben
determinarse después de utilizar un procedimiento de limpieza adecuado.
(Organización Mundial de la Salud, 1998).
Prueba de microorganismos específicos.
Las condiciones de la prueba de contaminación microbiana están diseñadas
para minimizar la contaminación accidental del material que se está examinando; las
precauciones tomadas no deben afectar adversamente a ningún microorganismo que
pueda ser revelado. (Organización Mundial de la Salud, 1998).
Recuento total de microorganismos aeróbicos.
El recuento aeróbico total viable del material que se está examinando se
determina, según se especifica en el procedimiento de ensayo, para el material vegetal
en cuestión utilizando uno de los métodos siguientes: filtración por membrana, conteo
en placa o dilución en serie. (Organización Mundial de la Salud, 1998).
Ensayos de pureza
Determinación de cenizas totales.
Se basa en la diferencia de pesos que se obtiene después de una calcinación de
la droga vegetal. La determinación de cenizas totales es un parámetro que nos indica
alteración en la calidad de la droga cruda ya sea adulteración, contaminación o
substitución de la misma. Las cenizas que quedan después de la calcinación de los
materiales procedentes de plantas medicinales, según (Farmacopea Herbolaria de los
Estados Unidos Mexicanos, 2013, pág. 31).
Determinación de cenizas insolubles en ácido.
Las cenizas insolubles en ácido se hayan formadas por minerales no digestibles
como la sílice, o bien por minerales que se encuentran formando compuestos muy estables
19
que no pueden ser liberados por el medio predominante en el aparato digestivo. (Vilca,
2015).
Determinación de humedad
Se basa en la diferencia de pesos que se obtiene después de calentar la muestra
en una estufa de 100-105°C. La presencia de agua facilita el rápido crecimiento de
microorganismos, hongos que causan deterioro de la planta y contaminación por las
sustancias liberadas por estos microorganismos. (Ferraro, Martino, Bandoni, & Nadinic,
2015).
Extracción del material vegetal.
La extracción es el proceso de separación de los principios solubles de las
materias primas de origen natural, mediante la acción de un disolvente, utilizando un
método adecuado. De manera que la selección y el disolvente adecuado para la extracción
todo en base a las propiedades fisicoquímicas de los principios activos. (Farmacopea de
los Estados Unidos de América, 2013).
El proceso de extracción implica la extracción de los componentes deseados de
la materia de origen vegetal con disolventes adecuados, la evaporación de todo o casi todo
el disolvente y el ajuste de los líquidos, masas o polvos residuales a los estándares
prescritos. (Farmacopea de los Estados Unidos de América, 2013).
Métodos de Extracción.
Maceración.
Consiste en poner en contacto el material vegetal utilizado como patrón de
referencia con el solvente durante varios días. Como resultado se obtiene un equilibrio de
concentración entre los componentes del material vegetal y el solvente, dependiendo de
factores como su naturaleza, tamaño de partícula, contenido de humedad. El hinchamiento
del material vegetal es un factor importante que permite la extracción de los componentes
ya que aumenta la permeabilidad de la pared celular y la difusión del solvente. (Sharapin,
2000).
Extractos.
Los extractos se pueden definir como preparaciones de consistencia líquida,
semisólida o sólida. Los productos obtenidos mediante extracción pueden ser
20
comercializados como extractos líquidos, extractos en polvo, extractos semisólidos y
tinturas. (Sharapin, 2000).
Tipos de Extractos
Extractos líquidos.
Los extractos líquidos son preparaciones de materia de origen vegetal que
contienen alcohol como disolvente o como conservante, o ambos, y están hechos de forma
que cada mL contiene los componentes extraídos de 1 g del material crudo que representa,
a menos que se especifique algo diferente en la monografía individual. Se pueden preparar
a partir de extractos adecuados y pueden contener conservantes antimicrobianos o de otro
tipo que sean adecuados. (Farmacopea de los Estados Unidos de América, 2013).
Extractos semisólidos.
También conocidos como extractos blandos o extractos pilulares, son
preparaciones que tienen una consistencia entre la de los extractos líquidos y la de los
extractos en polvo y se obtienen por evaporación parcial del disolvente, agua, alcohol o
mezclas hidroalcohólicas usadas como disolventes de extracción. (Farmacopea de los
Estados Unidos de América, 2013).
Extractos sólidos.
Son preparaciones sólidas que tienen una consistencia pulverulenta obtenida por
evaporación del disolvente usado para la extracción. Pueden contener sustancias
adecuadas agregadas, como por ejemplo excipientes, estabilizantes y conservantes.
(Farmacopea de los Estados Unidos de América, 2013).
Fundamento del Tamizaje Fitoquímico.
El tamizaje fitoquímico es una de las etapas iniciales que permite
cualitativamente identificar los metabolitos secundarios que están presentes en una planta
(Sharapin, 2000). Consiste en la extracción de los metabolitos secundarios de la planta a
través de pruebas de identificación que requieren solventes apropiados y a su vez de
reacciones de coloración existentes que son sensibles, reproducibles y de bajo costo.
(Arroyo, Bonilla, Tomàs, & Huamàn, 2011).
21
Cuantificación de Fenoles totales.
Los compuestos fenólicos son responsables del buen funcionamiento de las
plantas y, son utilizados para tratar desordenes cardiovasculares y prevenir algunos
cánceres. Poseen una estructura química especialmente adecuada para ejercer una acción
antioxidante actuando como captores de radicales libres neutralizando peligrosas especies
reactivas de oxígeno y iones metálicos quelantes (Singh, Verma, & Singh, 2012).
Cuantificación de Flavonoides.
Los flavonoides existen ampliamente en el reino vegetal y están presentes en
hojas, tejidos florales y polen. Los flavonoides son una parte importante de la dieta debido
a sus efectos en la nutrición de los seres humanos, algunas propiedades conocidas como:
eliminación de radicales libres, actividad antioxidante, acción inflamatoria e inhibición
de enzimas hidrolíticas y oxidativas (Gracia, 2007).
Producto natural procesado de uso medicinal.
Es el producto medicinal terminado y etiquetado cuyos ingredientes activos están
formados por cualquier parte de los recursos naturales de uso medicinal o sus
combinaciones, como droga cruda, extracto estandarizado o en una forma farmacéutica
reconocida, que se utiliza con fines terapéuticos (Agencia Nacional de Regulación,
Control y Vigilancia Sanitaria, 2016).
Categorías de los Productos Naturales procesados de uso medicinal.
Productos Naturales Procesados de Uso Medicinal Demostrado Clínicamente:
“Son aquellos productos que han demostrado su seguridad y eficacia en seres humanos
mediante estudios preclínicos y ensayos clínicos” (Agencia Nacional de Regulación,
Control y Vigilancia Sanitaria, 2016).
Productos Naturales Procesados de Uso Medicinal Demostrado Preclínicamente:
“Son los productos cuya eficacia no ha sido demostrada mediante ensayos clínicos y que
han presentado estudios preclínicos, etnofarmacológicos, o etnobotánicos para indicar
una actividad terapéutica”. (Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia
Sanitaria, 2016).
Formas farmacéuticas de Productos Naturales procesados de uso
medicinal.
22
Presentación física de un medicamento a la que se adaptan los principios activos
y excipientes para facilitar la administración de estos. En la formulación de
fitomedicamentos no se debe tomar en cuenta solo las características del principio activo,
sino también de los componentes secundarios del extracto (Sharapin, 2000).
Las formas farmacéuticas se dividen de la siguiente manera:
Sólidos: Grageas, tabletas, cápsulas, polvos
Semi-sólidos: cremas, ungüentos, supositorios, óvulos
Líquidos: jarabes, suspensiones, gotas. (Garcés, Gutiérrez, Wilson, &
Saravia, 2009).
Control de calidad de Productos Naturales procesados de uso medicinal.
Para que una planta medicinal llegue a convertirse en medicamento, lo primero
que debe demostrar es que presenta calidad farmacéutica; para esto, como para el resto de
los principios activos que constituyen otros medicamentos, hay que llevar a cabo los
controles descritos en las Farmacopeas que son los libros de referencia en cuanto a
descripción de métodos analíticos.
Control de calidad de formas farmacéuticas líquidas.
Para las formas farmacéuticas líquidas como los jarabes existen varios ensayos
físicos que pueden garantizar su calidad. A continuación, se describen dichas pruebas:
pH de jarabes.
El pH es un índice numérico que se emplea para expresar el grado de acidez o
alcalinidad de una solución. La determinación del pH se realiza empleando un medidor
del pH, calibrado y capaz de reproducir valores de pH con variaciones menores a 0,02
unidades de pH, empleando un electrodo indicador sensible a la actividad del ion
hidrógeno, como el electrodo de vidrio, y un electrodo de referencia apropiado, como por
ej., calomel o cloruro de plata (Farmacopea de los Estados Unidos, 2016).
Viscosidad de jarabes.
La viscosidad es una propiedad de los líquidos íntimamente vinculada con la
resistencia al flujo. Se define como la fuerza requerida para mover en forma continua una
superficie plana sobre otra, bajo condiciones específicas constantes, cuando el espacio
entre ambas está ocupado por un líquido. (Farmacopea Argentina, 2003).
23
Densidad de jarabes.
La densidad de un jarabe deber ser de 1,32 g/mL a temperatura de 20°C y de
1,26 g/mL en ebullición (Sharapin, 2000).
Control de calidad de formas farmacéuticas sólidas.
Para las formas farmacéuticas sólidas tales como las tabletas existen varias
pruebas de control de calidad, esto con el fin de garantizar que no existen variaciones. A
continuación, se describen dichas pruebas.
Diámetro y espesor.
El diámetro y espesor de una tableta son propiedades que se utilizan para evaluar
los comprimidos en apariencia idéntica, además permiten asegurar que cada lote de
producción pueda envasarse de manera adecuada en los recipientes (Farmacopea
Argentina, 2003).
En el diámetro y espesor de los comprimidos puede haber cierto tipo de
variaciones sin que se presenten cambios en el peso de la tableta, esto puede deberse a
diferencias en la densidad de la granulación, presión y la velocidad aplicada en la
compresión de las tabletas, las cuales conducen a una modificación en los tiempos de
desintegración y de disolución (Farmacopea de los Estados Unidos, 2016).
Peso.
El peso de una tableta se determina con base a la geometría de la matriz y del
punzón utilizado. La variación de peso se debe principalmente a problemas de
dosificación en la máquina tableteadora y de granulación tales como:
Llenados discontinuos en las matrices.
La utilización de tan solo planta molida con un ningún tratamiento previo
a la especie vegetal.
Granulados de tamaño grande influyen negativamente en el llenado de las
matrices.
Tamaño y forma irregular del granulado (Farmacopea Argentina, 2003).
Friabilidad
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Este ensayo se emplea para determinar que los comprimidos no recubiertos,
cuando se someten a estrés mecánico, no se dañen y/o muestren evidencias de laminación
o ruptura.
Aparato - Emplear un tambor transparente con un diámetro interno de 286 mm
y una profundidad aproximada de 39 mm, con superficies internas pulidas. Una de las
caras del tambor permite introducir los comprimidos a ensayar. El tambor se fija, a través
de su eje horizontal, a un dispositivo que le imprime un movimiento rotatorio de
aproximadamente 25 rpm. De este modo, en cada vuelta de tambor, los comprimidos
ruedan o se deslizan y caen desde una altura de aproximadamente 130 mm (Farmacopea
Argentina, 2003).
Dureza.
Este ensayo se emplea para determinar la dureza de los comprimidos medida por
la fuerza necesaria para producir la ruptura de los mismos.
Aparato - El aparato consta de dos brazos enfrentados uno con otro, uno de los
cuales se mueve en dirección al otro. Las superficies de los brazos, donde se produce la
ruptura, son planas, perpendiculares a la dirección del movimiento y mayores que la
superficie de contacto del comprimido. El aparato se calibra con la ayuda de un sistema
cuya precisión es de 1 newton (Farmacopea Argentina, 2003).
Desintegración de comprimidos.
La prueba mide el tiempo necesario para que una tableta se desintegre en un
medio líquido bajo condiciones de operación determinados, esto con el fin originar
gránulos que finalmente se disolverán. La desintegración de una tableta no asegura que el
principio activo se encuentre completamente disuelto (Farmacopea Argentina, 2003).
Se coloca una tableta en cada cilindro y la canasta se sumerge en un base de 1
litro con agua simulando el fluido gástrico o intestinal a una temperatura de 37 ± 2°C con
el fin de evitar que las tabletas floten se utilizan discos de un material plástico transparente
(Farmacopea Argentina, 2003).
Control posregistro.
Es el conjunto de actividades técnicas y sanitarias que se realizan en todas las
etapas desde la producción hasta la utilización de los productos naturales procesados de
uso medicinal, verificando que los establecimientos que los producen, almacenan,
distribuyen, importan, exportan, comercializan y expenden cumplen con los requisitos
25
técnicos y legales establecidos en la normativa vigente, con el fin de precautelar que los
productos naturales procesados de uso medicinal mantengan las condiciones de calidad,
seguridad y eficacia en base a las cuales la autoridad sanitaria nacional le otorgó el
Registro Sanitario (Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria,
2016).
Control microbiológico.
a) Métodos para el recuento total de microorganismos aerobios totales
(RTMA) y el recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras
(RTML).
Existen tres métodos para el recuento microbiano de microrganismos aerobios,
para la elección de uno de estos métodos se considera la naturaleza del producto y el límite
de microorganismos que debe cumplir. El método que se escoja debe permitir el análisis
de un tamaño de muestra significativo para juzgar el cumplimiento con la especificación
(Farmacopea de los Estados Unidos, 2016).
Métodos para el recuento total de microorganismo aerobios totales:
Método de extensión en superficie.
En este método se coloca en el medio solidificado 0,1 mL del inóculo y se
extiende uniformemente con el asa de Digralsky sobre la superficie del Agar Digerido de
Caseína Soja para recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) y sobre el Agar
Sabouraud Dextrosa para recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras
(RTL). Esta técnica permite el crecimiento de las colonias sobre la superficie del medio.
Los cultivos se incuban y se realiza el conteo (Farmacopea de los Estados Unidos, 2016).
a) Microorganismos Específicos.
Un microorganismo objetable es aquel que no puede estar presente en un
producto ya que puede degradarlo y causar infecciones al paciente. La Administración de
Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA, por sus siglas en inglés) afirma que "se
deben establecer procedimientos escritos apropiados diseñados para prevenir
microorganismos objetables en productos farmacéuticos no estériles (Administration
Food and Drug,, 2016)".
En el caso de los jarabes y tabletas, el microorganismo objetable es Escherichia
coli. Es una bacteria presente frecuentemente, en el intestino distal de los organismos de
sangre caliente. Es un bacilo corto Gram negativo fermentador de lactosa, anaerobio
26
facultativo, catalasa positiva y oxidasa negativa. (Sánchez, Rodriguez, Marfil, & Jodral,
2009).
Determinación de Escherichia coli en formas farmacéuticas sólidas y líquidas.
La detección de Escherichia coli como un microrganismo específico para formas
farmacéuticas no estériles acuosas, es un proceso de varias etapas: la revitalización de la
muestra, selección y subcultivo.
Marco Legal
El presente estudio se basa en la en la siguiente reglamentación:
Constitución de la República del Ecuador
Título VII
RÉGIMEN DEL BUEN VIVIR
Sección segunda de salud
Art. 363.- El Estado será responsable de:
Garantizar la disponibilidad y acceso a medicamentos de calidad, seguros y
eficaces, regular su comercialización y promover la producción nacional y la utilización
de medicamentos genéricos que respondan a las necesidades epidemiológicas de la
población. En el acceso a medicamentos, los intereses de la salud pública prevalecerán
sobre los económicos y comerciales (Asamblea Nacional Constituyente del Ecuador,
2008, p. 166).
Normativa sanitaria para la obtención del Registro sanitario
Capitulo III
Del registro sanitario
Art 4. Los Productos Naturales Procesados de Uso Medicinal, previo a su
fabricación, importación, almacenamiento, distribución y comercialización, deberán
27
obtener obligatoriamente el correspondiente Registro Sanitario, otorgado por la Agencia
Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria - ARCSA. (Agencia Nacional de
Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria, 2016).
Capitulo XI
De la comercialización y promoción
Art. 45.- Determinación de la modalidad de venta. - Durante el proceso de
otorgamiento de Registro Sanitario se determinará la modalidad de venta del producto
natural procesado de uso medicinal, es decir si es de venta libre, bajo prescripción médica,
con receta especial (productos naturales procesados de uso medicinal que contengan
sustancias catalogadas sujetas a fiscalización), o cualquier otra modalidad que la
Autoridad Sanitaria determine. (Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia
Sanitaria, 2016).
Capitulo XIII
De la vigilancia y control
Art. 54.- Las acciones de vigilancia y control posregistro en los establecimientos
donde se fabrican, almacenan, distribuyen y comercializan Productos Naturales
Procesados de Uso Medicinal, se ejecutarán periódicamente con el objeto de verificar el
cumplimiento de las especificaciones técnicas del producto con las cuales se otorgó el
Registro Sanitario, así como ante denuncias presentadas al ARCSA y alertas sanitarias.
(Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria, 2016).
Art. 55.- El muestreo para el análisis de control de calidad posregistro estará a
cargo de la Comisión Inspectora que la Agencia Nacional de Regulación, Control y
Vigilancia Sanitaria-ARCSA designe, conformada por profesionales farmacéuticos,
quienes actuarán de acuerdo con el procedimiento que se establezca y con las garantías
dispuestas en la Ley Orgánica de Salud. (Agencia Nacional de Regulación, Control y
Vigilancia Sanitaria, 2016).
Hipótesis
Hi.: Los Productos Naturales procesados de uso medicinal tienen el perfil
cromatográfico igual que el extracto vegetal de Artemisia absinthium.
H0. Los Productos Naturales procesados de uso medicinal no tienen el perfil
cromatográfico igual que el extracto vegetal de Artemisia absinthium.
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Hi.: Los Productos Naturales procesados de uso medicinal que contienen
Artemisia absinthium cumplen con las especificaciones establecidas en la bibliografía
para controles físicos, químicos y microbiológicos.
H0. Los Productos Naturales procesados de uso medicinal que contienen
Artemisia absinthium no cumplen con las especificaciones establecidas en la bibliografía
para controles físicos, químicos y microbiológicos.
Conceptualización de las variables
Variable dependiente:
Forma farmacéutica sólida: Perfil cromatográfico.
Forma farmacéutica líquida: Perfil cromatográfico, pH, viscosidad,
densidad.
Variable independiente:
Productos Naturales procesados de uso medicinal y extracto vegetal de Artemisia
absinthium.
29
Capítulo III
Marco Metodológico
Diseño de Investigación
Esta investigación tiene un enfoque o paradigma cuantitativo (Peréz, 1994), ya
que se realizó una observación sistemática de los perfiles cromatográficos entre los
productos naturales procesados de uso medicinal y el extracto vegetal de Artemisia
absinthium de tal manera que será orientado a los resultados aportados además es de nivel
descriptivo y experimental, el cual tiene como finalidad estudiar la farmacognosia de
diferentes productos naturales procesados de uso medicinal a partir de Artemisia
absinthium con el propósito de realizar el control de calidad del producto mediante
análisis físicos, químicos y microbiológicos de jarabe, tabletas y de la droga vegetal.
Población y muestra
Población.
La población en la presente investigación son las formas farmacéuticas sólidas y
líquidas de productos naturales procesados de uso medicinal, que se expenden en Ecuador
y la especie vegetal Artemisia absinthium. (Tabla 7)
Muestra.
La muestra son dos productos naturales procesados de uso medicinal: 1 forma
farmacéutica líquida (jarabe) y 1 forma farmacéutica sólida (tabletas) adquiridos en la
ciudad de Quito y la especie vegetal Artemisia absinthium se adquirió en la Asociación
de Productores de plantas medicinales de Chimborazo JAMBI KIWA”, y posteriormente
fue identificada en el Herbario Alfredo Paredes (QAP). (Anexo 5).
Materiales y Métodos
Materiales.
Agitadores
Balones aforados 10, 25, 50, 100 mL
Cajas Petri
Crisoles
Desecador
30
Embudos
Embudos de separación
Espátula
Frascos ámbar
Matraz Erlenmeyer
Micropipetas
Papel empaque
Papel aluminio
Papel filtro
Papel film
Pera de succión
Pipetas
Placa de porcelana
Placas de sílica gel
Refrigerantes
Soportes
Varilla de agitación
Vasos de precipitación
Tubos de ensayo
Jarabe a base de Artemisia absinthium.
Tabletas a base de Artemisia absinthium.
Equipos
Analizador de humedad Metler Toledo modelo HX 204
Autoclave
Balanza analítica Mettler modelo PJ360 DeltaRange
Bomba de vacío
Desintegrador Pharma Test modelo PTZ – S
Durómetro Key. HT-300
Espectrofotómetro Fisher Scientific modelo SP-2100UVPC
Estufa GCA Precision Scientific modelo 6
Friabilizador Erweka modelo TA9
Incubadora
Molino
Mufla
Potenciómetro Mettler Toledo modelo Seven Compact S220
Rotavapor modelo Büchi B-490
Viscosímetro Brookfield modelo DV-II + Pro
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Reactivos.
Acetato de plomo 1%
Ácido acético glacial
Ácido clorhídrico
Ácido gálico
Ácido sulfúrico
Agua destilada
Anhídrido acético
Cloroformo
Diclorometano
Etanol 96°
Éter de petróleo
Hexano
Hidróxido de Sodio 10%
Metanol
Resorcinol
Rojo de metilo
Sulfato de sodio
Xileno
Tolueno
Diseño Experimental
La presente investigación consta de tres etapas:
Primera Etapa: Se realizó la recolección del material vegetal e identificación
taxonómica de Artemisia absinthium, luego se sometió a procesos de: secado y molienda
y posteriormente se obtuvo el extracto de la muestra vegetal y con este se realizó el
tamizaje fitoquímico.
Segunda Etapa: Se realizó el ensayo químico de los productos naturales
procesados de uso medicinal y a su vez del extracto vegetal de Artemisia absinthium.
Tercera Etapa: Se realizó los parámetros de control de calidad para las formas
farmacéuticas líquidas y sólidas de Artemisia absinthium.
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Matriz de Operacionalización de las Variables.
Tabla 4 Dimensiones e indicadores de las variables
Variable Dimensiones Indicadores
Ensayos
Físicos
Jarabe
Densidad
pH
viscosidad
1,3-1,5 g/ml
3-5
100-120 cp
Tabletas
Dureza
Desintegración
Friabilidad
>5 kgf
≤30 min
<0.8 %
Ensayo
Microbiológico
Jarabe
RTMA
RTML
Microorganismo específico
102 ufc/mL
101 ufc/mL
Ausencia de Escherichia coli
Tabletas
RTMA
RTML
Microorganismo específico
103 ufc/mL
102 ufc/mL
Ausencia de Escherichia coli
RTMA: Recuento total de microorganismos aerobios, RTML: Recuento total de mohos y
levaduras.
Elaborado por Daza Gabriela.
Métodos
Primera Etapa: Caracterización Fitoquímica de la especie vegetal.
Muestra vegetal.
Hojas de Artemisia absinthium, fueron compradas en la “Asociación de
Productores de plantas medicinales de Chimborazo JAMBI KIWA”, ubicada en el barrio
Santa Cruz de la parroquia de Yaruquíes, perteneciente al Cantón Riobamba, Provincia
de Chimborazo.
Tratamiento de la muestra vegetal.
Las hojas frescas de la especie vegetal que se compró, se lavaron con agua y a
continuación con una solución de hipoclorito de sodio al 5%. El material vegetal así
tratado se secó a temperatura ambiente y se trituró la muestra. Finalmente, se pesó y se
almacenó en fundas herméticas para los posteriores análisis.
33
Ensayos de pureza.
Determinación de Cenizas totales de la muestra vegetal.
En un crisol, que previamente se lo taró, se colocó 2.36 g de hojas secas y se
colocó en una mufla a una temperatura inicial de 500°C durante 30 minutos y finalmente
se dejó a 600°C por 90 minutos. El crisol, con los residuos totalmente blancos, se colocó
en un desecador y una vez frio se lo pesó. (Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos
Mexicanos, 2013). Para el cálculo del porcentaje de cenizas totales, se aplicó la siguiente
fórmula:
%𝑐𝑒𝑛𝑖𝑧𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠: [𝑚2 − 𝑚
𝑚1 − 𝑚] ∗ 100
Donde:
m: masa del crisol vacío.
m1: masa del crisol con la muestra vegetal.
m2: masa del crisol con la ceniza.
Determinación de Cenizas insolubles en ácido.
Se calentó a ebullición las cenizas obtenidas en Cenizas totales, con 25 mL de
ácido clorhídrico 3 M durante 5 minutos. Se recolectó el material insoluble en un crisol
previamente se taró, posteriormente, se llevó a temperatura de calcinación y se pesó. Se
determinó el porcentaje de cenizas insolubles en ácido a partir del peso de la droga
empleada. (Farmacopea Argentina, 2003).
Determinación de Humedad de la muestra vegetal
Se colocó 0,5 g de la muestra vegetal, previamente desecada y triturada, se realizó en
un Analizador de Humedad Metler Toledo HX 204. Este instrumento posee una lámpara de
luz infrarroja para secar y una balanza sensible para pesar el total de muestra al final de la
determinación.
34
Ensayo de Identidad.
Tamizaje Fitoquímico para la determinación de metabolitos secundarios
presentes en hojas de Artemisia absinthium.
Extracto de Artemisia absinthium.
Se pesó 30 g de hojas secas y trituradas de Artemisia absinthium, posteriormente
se colocó en un frasco ámbar de boca ancha y se agregó cantidad suficiente de etanol 96°
hasta cubrir el material vegetal. Se dejó macerar por 24 horas. Posteriormente, las
muestras se filtran y el filtrado se procede a concentrar en un rotavapor. El extracto para
realizar los análisis fitoquímicos. (Extracto ET).
Reacciones de identificación:
Identificación de alcaloides.
Se tomó 9 g del extracto de Artemisia absinthium, se añadió una solución de HCl
al 5% hasta obtener un pH ácido (2-3). Luego se adiciona una solución de NaOH al 20%
hasta alcanzar un pH básico (10-12). Posteriormente, se realizó la extracción por partición
con cloroformo realizando lavados continuos. Una vez juntadas las respectivas fases
orgánicas se concentra en el rotavapor (Extracto A).
Con el extracto obtenido (extracto A), se realizó la identificación con los
reactivos Draggendorff, Mayer y Wagner.
Identificación de esteroles, flavonoides, antocianinas, antraquinonas,
taninos y saponinas.
Esteroles
Se tomó 9 g del extracto de Artemisia absinthium, posteriormente, se realiza una
extracción con éter de petróleo en un embudo de separación, el extracto etéreo se
concentra en el rotavapor (Extracto B). En la fracción acuosa se realizó la extracción de
flavonoides, taninos, saponinas, y antraquinonas (Extracto C).
Al extracto C obtenido del proceso de partición, se realizó la identificación
mediante las reacciones de Liebermann-Burchard y Zack.
35
Flavonoides
Se tomó una alícuota del extracto C, y se realizó la identificación mediante la
reacción de Shinoda, y en medio básico.
Antocianinas
Se tomó una alícuota del extracto C, y se realizó la identificación mediante la
adición de gotas de HCl(c).
Antraquinonas
Se tomó una alícuota del extracto C, la identificación se realizó con la reacción
de Borntrager.
Taninos
Se tomó una alícuota del extracto C, se realizó las pruebas de identificación con
FeCl3 y gelatina salada.
Saponinas
Se tomó una alícuota del Extracto C, se adicionó agua y se agitó.
Identificación de cardiotónicos.
Se tomó 1 mL de muestra y se evaporó a sequedad. Se disolvió en 1 mL de
alcohol y se añadió 0,5 mL del reactivo de Kedde.
Segunda Etapa: Ensayos Químicos del extracto vegetal y de Productos
Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia absinthium.
Cuantificación de Metabolitos Secundarios.
Cuantificación del contenido total de fenoles.
Para la determinación de fenoles totales se utilizó el método descrito por (Singh
et al 2012). La concentración de fenoles totales en el extracto etanólico de hojas de
Artemisia absinthium y sus Productos Naturales, fue medida mediante
36
espectrofotometría, la misma que se basa en una reacción de óxido-reducción. Se utilizó
el reactivo de Folin-Ciocalteu el mismo que actúa como agente oxidante.
Preparación de la Curva de Calibración: Se preparó 10 mL de soluciones de
ácido gálico a diferentes concentraciones, como se describe en la Tabla 5.
Se dejó reposar los tubos de ensayos preparados en oscuridad y a temperatura
ambiente por un tiempo de dos horas y posteriormente en el espectrofotómetro se dio
lectura a una longitud de onda de 765nm. A continuación, se realizó el mismo
procedimiento antes mencionado, pero con las muestras (jarabe, tableta, extracto
etanólico), todas tuvieron un factor de dilución del volumen de muestra ocupado fue
100µL.
Tabla 5 Preparación de la curva de calibración para la cuantificación de Fenoles totales.
Muestra
Concentración de
ácido gálico
(mg/mL)
Volumen de
ácido gálico
(mL)
Volumen
de agua
(mL)
Reactivo de
Folin Ciocalteu
(mL)
Blanco ------- ------ 9,5 0,5
1 0,05 0,1 9,4 0,5
2 0,04 0,1 9,4 0,5
3 0,03 0,1 9,4 0,5
4 0,02 0,1 9,4 0,5
5 0,01 0,1 9,4 0,5
Elaborado por Daza Gabriela.
Los resultados se expresaron en términos de miligramos equivalente de ácido
gálico por miligramo de muestra (GAE/g de extracto).
Cuantificación del contenido total de flavonoides.
Para la cuantificación de flavonoides se utilizó el método descrito por (Zhinshen,
Mengcheng, & Jianming, 1999), expresándose como mg de quercetina/mg de extracto. El
extracto etanólico de hojas de Artemisia absinthium presentó un color verde intenso
debido a la clorofila que presenta la muestra vegetal. Para eliminar la interferencia de la
clorofila en la cuantificación de los flavonoides, se adicionó una solución de acetato de
plomo al 1 % al extracto y posteriormente se filtró; en el filtrado así obtenido se realizaron
las respectivas determinaciones.
37
Procedimiento:
Se colocó 1 mL de extracto en un matraz, se agregó 4 mL de agua destilada,
posteriormente se añadieron 300 L de NaNO2 al 1 %, se deja reposar por 6 min. A
continuación, se añadió 300L de AlCl3 al 10% seguidamente se adicionó 2,0 mL de
NaOH al 1%. Inmediatamente se homogenizó la solución y se midió la absorbancia a una
longitud de onda de 510 nm en el espectrofotómetro Fisher Scientific. Para preparar la
curva de calibración se utilizó como estándar la quercetina y se prepararon soluciones a
diferentes concentraciones como se muestra Tabla 6 y los resultados fueron expresados
como mg quercetina/g de extracto.
Tabla 6 Preparación de la curva de calibración para la cuantificación de
Flavonoides.
Concentración
de Quercetina
NaNO2 1%
(L)
AlCl3 10%
(L)
NaOH 1%
(mL)
Volumen de H2O
(mL)
0,002 0,05 0,1 2,0 4,0
0,004 0,04 0,1 2,0 4,0
0,008 0,03 0,1 2,0 4,0
0,0156 0,02 0,1 2,0 4,0
0,03125 0,01 0,1 2,0 4,0
Elaborado por Daza Gabriela.
Perfil cromatográfico de extracto de hojas Artemisia absinthium y de sus
Productos Naturales procesados de uso medicinal.
Identificación de absintina.
La determinación de la identidad de un principio activo se efectúa mediante
técnicas cromatográficas, en las que se compara la sustancia de prueba con la de
referencia.
Soporte: Rollo de aluminio de Gel de sílice 60 F254, Merck.
Fase móvil: Mezcla de acetona: ácido acético glacial: tolueno: CH2Cl2
(1:0.5:3:5).
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Preparación de referencia.
Se disolvió 2.0 mg de rojo de metilo y 2.0 mg de resorcinol en 10 mL de metanol.
Preparación de la muestra vegetal.
En un matraz se colocó 2.0 g de la droga vegetal en 50 mL de agua en ebullición
y se dejó reposar durante 5 min, agitando ocasionalmente. Se enfrío y se agregó 5.0 mL
de una solución de acetato de plomo al 1%; se mezcló y filtró. Posteriormente, se lavó el
matraz y el residuo del filtro con 20 mL de agua. Con el filtrado se realizó una extracción
por partición con 50 mL de cloruro de metileno. Se separó la fase orgánica, se secó con
sulfato de sodio anhidro, se filtró y evaporó el filtrado a sequedad en un baño de agua.
Finalmente, se disolvió el residuo en 0,5 mL de etanol.
Preparación del extracto de tabletas de ajenjo.
Se pesó 20 tabletas de ajenjo las mismas que corresponden a un peso de 9,86 g,
se colocaron en un mortero de tal manera que se permita disminuir su tamaño
posteriormente el polvo de las tabletas se colocó en un frasco ámbar de boca ancha y se
añadió 150 mL de etanol 96° y se dejó macerando por 24 horas. A continuación, el
extracto obtenido se concentró en el rotavapor hasta la mitad del volumen, se guardó en
frasco ámbar bien cerrado y en condiciones de refrigeración.
Preparación del extracto de jarabe de ajenjo.
Se realizó en una columna en donde se colocó al inicio una pequeña cantidad de
lana de vidrio posteriormente, 10 g de sílica gel (70-230 mesh ASTM) a la vez se colocó
2 g de jarabe de Artemisia absinthium previamente tratado con una cantidad pequeña de
sílica gel hasta que se forme una pasta. A continuación, se colocan 10 mL mezcla de
Acetato de etilo-Hexano (90:10); la primera cantidad que se extraiga es el volumen
muerto y de esta manera se recoge hasta que la muestra del jarabe recorra toda la columna
y permita extraer todos los metabolitos posibles presentes en la muestra.
Revelador: SR de anhídrido acético-ácido sulfúrico.
Se mezcló cuidadosamente 5.0 mL de anhídrido acético con 5.0 mL de ácido
sulfúrico. Se agregó gota a gota con enfriamiento a 50 mL de etanol absoluto.
Procedimiento para detección: Se aplicó por separado en bandas, 10µL de la
preparación de la muestra. Se desarrolló la cromatoplaca, dejar que el frente del eluyente
recorra el 90 por ciento de la longitud de la placa. Se dejó secar la placa al aire, rociar el
39
revelador y se examinó a la luz del día. Se calentó a 105°C durante 5 min y se examinó a
la luz del día.
40
Tercera Etapa – Ensayos físicos de Productos Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia absinthium.
Datos informativos de productos naturales procesados de uso medicinal.
Tabla 7 Datos informativos de jarabe y tabletas de Artemisia absinthium.
Características Información
Nombre del Producto Jarabe Apeti MAX kids Tabletas de Ajenjo
Composición Extracto fluido (1:1) de
Artemisia absinthium 2,0 g
Flavonoides 3,0 %
Vitamina C 0,26 %
Vitamina A 0,02 mg
Ácido Nicotínico 1,5 %
Excipientes csp
Cada tableta contiene:
Polvo micropulverizado de Hojas de ajenjo (Artemisia
absinthium) 500 mg
Estearato de magnesio csp
Propiedades terapéuticas Artemisia absinthium ajenjo está indicado en casos de
inapetencia (falta de apetito), por sus componentes
activos, que incrementen la tonicidad estomacal.
Coadyuvante en el tratamiento de afecciones del sistema
digestivo.
Indicaciones Según la Escop y Comisión E, se emplea en: Pérdida
de apetito, anorexia, dispepsia.
No específica
Dosis Mayores de 10 años: 2 cucharaditas antes de
desayuno y almuerzo. Adultos: 2 cucharadas antes de
desayuno y almuerzo.
Adultos: Tomar dos tabletas después de cada comida.
Precauciones No específica Manténgase fuera del alcance de los niños. No usar si el sello
de seguridad está roto o no lo tiene. Consérvese en un lugar
seco a temperatura no mayor de 30°C.
Contraindicaciones No específica “Se recomienda no administrar en el embarazo, en la
lactancia y en niños”
Lote 01032016-APFJ-001 0006
Fecha de elaboración 03/2016 02/2015
Fecha de Expiración 03/2018 02/2018
Registro Sanitario 65-PNN-1015 911-MNN-03-13
Forma de venta Libre Libre
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Análisis microbiológico de Jarabe y tabletas de Artemisia absinthium.
Recuento total de microrganismos aerobios y Mohos-levaduras.
Para la técnica de extensión se colocó 0,1 mL de la muestra diluida en la caja Petri que
contiene TSA para el recuento total de microorganismos aerobios y en SAB para el recuento
total de mohos y levaduras posteriormente, se extendió uniformemente. Los medios se
incubaron para microorganismos aerobios a una temperatura entre 30º y 35º C por 24 horas y
una temperatura entre 20º y 25º C durante un período de 5 a 7 días para mohos y levaduras.
Finalmente se contó las unidades formadoras de colonia y se calculó las ufc/mL o ufc/g del
producto.
Determinación de Escherichia coli como microorganismo específico para formas
farmacéuticas no estériles acuosas.
Preparación de la muestra y revitalización.
Se realizó siguiendo los lineamientos de la USP 39 NF34 en el que se diluyó la muestra
(1 en 9 mL en Caldo Digerido de Caseína y Soja), se mezcló e incubó a una temperatura de 30º
a 35º durante un período de 18 a 24 horas (Farmacopea de los Estados Unidos, 2016).
Selección y subcultivo.
Se agitó el tubo que fue revitalizado, se tomó un 1 mL de la dilución (1 en 10) del
producto previamente incubado, luego se añadió el 1 mL a 100 mL de Caldo MacConkey y
posteriormente se incubó a una temperatura 44-45ºC durante un período de 24 a 48 horas. Si se
observa un cambio de coloración amarilla y precipitado se subcultiva en una caja petri de Agar
MacConkey se incuba a una temperatura de 30º a 35º C durante un período de 18 a 72 horas.
(Farmacopea de los Estados Unidos, 2016).
Control de calidad para jarabe de Artemisia absinthium.
Determinación de pH.
En la detección del pH, se utilizó el potenciómetro Mettler Toledo, modelo Seven
Compact S220. Se colocó el jarabe en un vaso de precipitación posteriormente se sumergió el
electrodo de medición y se procedió a la lectura del pH. Finalmente, se lavó con agua destilada
al electrodo.
42
Determinación de Densidad Relativa.
Se pesó el picnómetro vacío, el mismo que previamente estuvo limpio y seco. Se
coloca el jarabe en el picnómetro, evitando que haya burbujas en su interior y exceso de la
muestra en la parte exterior, se mantiene a una temperatura de 25°C durante 15 minutos, y se
procedió nuevamente a pesar. Se repitió la operación antes mencionada con agua destilada
(Farmacopea Argentina, 2003).
La densidad relativa a 25°C se calcula mediante la siguiente fórmula:
𝜌 =𝑚1 − 𝑚
𝑚2 − 𝑚
Donde:
m: masa del picnómetro vacío (g).
m1: masa del picnómetro con el jarabe (g).
m2: masa del picnómetro con el agua (g).
Control de calidad para Tabletas de Artemisia absinthium.
Determinación de peso promedio.
Se pesaron individualmente 10 tabletas enteras y se calculó el peso promedio. Los
requisitos se cumplen si el peso no difiere del peso promedio en más del porcentaje (𝑥 ± 5%)
USP 39 - NF 34 (Farmacopea de los Estados Unidos, 2016).
Determinación de Dureza.
Se determinó este parámetro de 10 tabletas del producto natural procesado de uso
medicinal de Artemisia absinthium con el Durómetro modelo Key HT-300, mediante lo descrito
USP 39 – NF 34 Volumen I (Farmacopea de los Estados Unidos, 2016), acerca de la Fuerza de
ruptura de las tabletas.
Determinación de Friabilidad.
Se pesó tres tabletas en la balanza analítica se colocaron en el Friabilizador modelo
Erweka TA9 y se llevó a cabo la medición después de tres minutos de rotación. Transcurrido el
tiempo, se retiraron las tabletas del tambor y se eliminó el polvo de la superficie de estas, las
mismas que se pesaron nuevamente. Finalmente, se determinó la diferencia en peso y se calculó
el porcentaje de pérdida de peso. Se calculó la friabilidad, considerando que no debe ser mayor
al 1%.
43
Determinación de Desintegración.
Se realizó este parámetro de acuerdo con lo descrito en la USP 39 - NF 34 (Farmacopea
de los Estados Unidos, 2016). Se colocó una tableta en cada una de las 6 canastillas, y se
sumergieron en un baño maría a una temperatura de 37 ± 2°C. A continuación, se registró el
tiempo en que las seis tabletas se disgregaron.
Técnicas de procesamiento y análisis de datos
El instrumento que se utilizó en la investigación fue una guía de observación de las
actividades que se desarrollaron en el laboratorio, ya que toda la investigación fue de carácter
científico. El tratamiento estadístico de la información que se obtuvo se realizó mediante
cálculos de la media y desviación estándar.
44
Capitulo IV
Análisis y discusión de resultados
Primera Etapa: Extracción y Análisis fitoquímico de la especie vegetal.
Las hojas de Artemisia absinthium se recolectaron en el cantón Riobamba (Jambi Kiwa),
provincia de Chimborazo. El material vegetal fue debidamente identificado en el Herbario Alfredo
Paredes (QAP) (Anexo 5).
Tratamiento de la muestra.
Las hojas de Artemisia absinthium en buen estado se separaron manualmente de las
hojas que se encontraban deterioradas, manchadas o dañadas. Posteriormente, a las hojas que
se eligieron se lavaron y desinfectaron con solución de hipoclorito de sodio al 5 % según
Sharapin (2000), con el propósito de reducir la carga bacteriana.
Ensayos de pureza de la muestra vegetal.
La determinación de humedad en el material vegetal se realizó por triplicado
obteniéndose un valor promedio de 6,49 % ± 0,3504. Se debe considerar la humedad como un
parámetro importante para el almacenamiento de la muestra vegetal, no solamente aumenta el
peso de la droga vegetal, sino que también favorece la actividad enzimática y el desarrollo de
bacterias y hongos; reduciendo así la actividad de los principios activos presentes. Es importante
considerar que el proceso de secado es imprescindible para que la droga vegetal no sufra un
deterioro en la calidad del material. Un estudio de Pelaez, et al (2016) reporta un valor similar
de humedad residual de 8,48 % ± 0,205.
Se realizó la determinación de cenizas totales de las hojas de Artemisia absinthium, el
valor obtenido tal y como se observa en la Tabla 8 fue de 0,1140% este valor nos indica el
contenido en sales minerales de la propia planta o derivada de materia extraña, principalmente
suelo o materia inorgánica que se ha adherido a la superficie de la droga además, que permite
descubrir las falsificaciones de la droga. Sin embargo, es importante considerar este valor ya
que en cierta medida nos proporciona el cuidado que se ha tenido en la preparación de la droga.
En la Tabla 8 se resumen los resultados obtenidos por triplicado de cada uno de los ensayos de
pureza de las hojas de Artemisia absinthium.
45
Tabla 8 Resultados de la caracterización de las hojas de Artemisia absinthium.
Nombre del ensayo Resultados
R1 R2 R3 �̅� ± 𝑫𝑬
%Humedad 6,47 6,85 6,15 6,49±0,35
% Cenizas totales 0,1141 0,1124 0,1156 0,1140±0,0016
% Cenizas solubles en agua 0,9210 0,9045 0,9123 0,9126±0,0082
% Cenizas insolubles en ácido 0,0678 0,0697 0,0676 0,0684±0,0015
(1,2,3 = # de repeticiones). Los valores representan la media de tres repeticiones ± la desviación
estándar (DE).
Elaborado por Daza Gabriela.
Tamizaje Fitoquímico de las hojas y productos naturales procesados de uso medicinal
de Artemisia absinthium.
A partir de 100 g de hojas de Artemisia absinthium mediante maceración (Anexo 4)
se obtuvo 57 mL de extracto etanólico. El tamizaje fitoquímico del extracto etanólico de las
hojas de Artemisia absinthium se realizó de acuerdo con el procedimiento que se detalla en el
Anexo 3. En la Tabla 9 se resumen los resultados obtenidos en el tamizaje fitoquímico: En
primer lugar, existen alcaloides debido a la presencia de un abundante precipitado rojo ladrillo
con el reactivo de Draggendorff, con el reactivo de Mayer un precipitado de color blanco
amarillento, y finalmente, un precipitado café con el reactivo de Wagner.
Para el caso de la identificación de esteroles, se evidencia de forma moderada un anillo
de color azul para la reacción de Lieberman Bouchard; sin embargo, en los extractos del jarabe
y tabletas no se evidencia dicha reacción. Se observó el aparecimiento de una coloración roja
para la reacción de Shinoda que evidencia la presencia de flavonoides en los tres extractos.
Se realizó la identificación de taninos mediante la reacción de cloruro férrico al 5 %,
donde se observó una coloración verde lo que comprueba la existencia de taninos no
hidrolizables para el extracto de hojas de Artemisia absinthium, sin embargo, para los extractos
del jarabe y tabletas su coloración fue escasa. Para la identificación de glucósidos cardiotónicos,
se observó una coloración roja-anaranjada propia de la reacción de Baljet para el extracto de
hojas de A. absinthium. A continuación, las reacciones que fueron negativas para el extracto de
las hojas, jarabe y tabletas de Artemisia absinthium son las siguientes reacciones: Zack, en
medio ácido para antocianinas, Borntrager, Kedde. Los resultados obtenidos se contrastan con
la investigación de Chonate, et al (2011) en donde se realizó el tamizaje fitoquímico de extracto
etanólico de hojas de A. absinthium obteniendo resultados positivos para alcaloides,
flavonoides, esteroides y taninos.
46
Tabla 9 Resultados del análisis fitoquímico de hojas de Artemisia absinthium.
Reacciones Hojas Jarabe Tabletas
Alcaloides
Draggendorff +++ + +
Mayer ++ + +
Wagner + +/- +/-
Esteroles
Lieberman-
Bouchard + - -
Zack - - -
Flavonoides Shinoda + + +
Antocianinas HCl - - -
Antraquinonas Prueba
Borntrager - - -
Taninos
FeCl3 5% ++ +/- +
Gelatina
Salada - - -
Saponinas H2O - - -
Glucósidos
cardiotónicos
Baljet + - -
Kedde - - -
Interpretación
(++) abundante
(+) moderado
(+/-) escaso
(-) ausencia
Elaborado por Daza Gabriela.
Análisis microbiológico de productos naturales procesados de uso medicinal.
Las plantas medicinales, con la que se elaboran productos naturales procesados de uso
medicinal, pueden en alguna parte del proceso de producción contener o adquirir algún tipo de
contaminación microbiológica, que en lugar de sanar al paciente podrían complicar aún más su
estado de salud. Los productos naturales procesados de uso medicinal al no ser estériles son
susceptibles de contaminarse con microorganismos como bacterias, mohos o levaduras durante
los procesos de manufactura o durante su uso, podrían causar una reducción en su actividad
terapéutica.
En la determinación del recuento total de microorganismos, mediante el método de
extensión, no hubo la presencia de Escherichia coli, así como también no hubo crecimiento de
mohos y levaduras, por lo que cumple con lo establecido en la USP 39 NF 34.
47
Segunda Etapa: Ensayos Químicos del extracto vegetal y de Productos Naturales
procesados de uso medicinal de Artemisia absinthium.
Cuantificación de Metabolitos Secundarios.
Cuantificación de Fenoles Totales en hojas de Artemisia absinthium y en sus
Productos Naturales procesados de uso medicinal.
Mediante el análisis de regresión lineal de la absorbancia en función de la
concentración de los estándares, se determinó la ecuación y= 0,4904x+0,0001 con un
coeficiente de correlación de 0,9997 (Anexo 6). A partir de la ecuación de ajuste lineal se
calculó los mg de ácido gálico/ g de extracto presentes en las muestras.
[𝑭𝒆𝒏𝒐𝒍𝒆𝒔 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍𝒆𝒔] =𝟎, 𝟎𝟐𝟐𝟓 − 𝟎, 𝟎𝟎𝟎𝟏
𝟎, 𝟒𝟗𝟎𝟒
[𝑭𝒆𝒏𝒐𝒍𝒆𝒔 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍𝒆𝒔] = 𝟎, 𝟎𝟒𝟔 [𝒎𝒈
𝒎𝑳 ]
En la Tabla 10 se resumen los valores obtenidos de la cuantificación de fenoles totales
en los extractos tanto de la muestra vegetal como del jarabe y las tabletas con su respectiva
media y desviación estándar. Los compuestos antioxidantes generalmente contienen grupos
fenólicos. Debido a esto, se comparó el contenido de compuestos fenólicos en cada uno de los
extractos para obtener más información acerca de la posible capacidad antioxidante de cada uno
de ellos.
Tabla 10 Resultados obtenidos en la Cuantificación de Fenoles totales en extracto vegetal y
Productos Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia absinthium.
Muestras Absorbancia Concentración
[𝒎𝒈
𝒎𝑳 ]
[𝒎𝒈 𝑮𝑨𝑬
𝒈 𝒆𝒙𝒕𝒓𝒂𝒄𝒕𝒐 ]
Contenido de Fenoles
totales ± DE mg GAE/g
E1 0,0225 0,046 45,677
42,618 ± 3,058
E2 0,0210 0,043 42,618
E3 0,0195 0,040 39,560
J1 0,0170 0,034 34,462
31,063 ± 3,115
J2 0,0140 0,028 28,344
J3 0,0150 0,030 30,383
T1 0,0127 0,026 25,693
25,082 ± 2,603 T2 0,0135 0,027 27,325
T3 0,0110 0,022 22,227 Elaborado por Daza Gabriela.
48
En la Figura 4, se representa la media de la concentración de fenoles totales del extracto
etanólico de las hojas y de los Productos Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia
absinthium, en donde se puede observar que la concentración del jarabe y tabletas disminuye
en comparación con la muestra del extracto vegetal. Además, se evidencia que existe un mayor
contenido de fenoles en el jarabe que en las tabletas. Se puede observar que existe una
desviación significativa en los datos obtenidos, sin embargo esto se pudo deber a que el reactivo
de Folin Ciocalteu reacciona rápidamente en la cuantificación de fenoles totales. El valor
obtenido de fenoles totales en el presente estudio es similar al obtenido por Singh, et al. (2012),
donde se reportó un valor de 43,04 mg GAE/g extracto.
Figura 4 Representación gráfica de las medias del contenido de fenoles totales en el extracto vegetal y
Productos Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia absinthium.
Elaborado por Daza Gabriela.
Cuantificación de Flavonoides de las hojas de Artemisia absinthium y sus
Productos Naturales procesados de uso medicinal.
La cuantificación de flavonoides se determinó a partir de la curva de calibración
(Anexo 6) mediante el análisis de regresión lineal de la absorbancia en función de la
concentración de los estándares que se observa en la Figura 8, con la que se obtuvo la ecuación
y=0,5001x + 0,0026 con un coeficiente de correlación de 0,999 a partir de la cual se calculó los
mg de quercetina /g de extracto presentes en las muestras. Empleando la siguiente ecuación se
relacionó la concentración de quercetina con la absorbancia de las distintas muestras.
𝑭𝒍𝒂𝒗𝒐𝒏𝒐𝒊𝒅𝒆𝒔 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍𝒆𝒔 =𝟎, 𝟖𝟐𝟏 − 𝟎, 𝟎𝟎𝟐𝟔
𝟎, 𝟓𝟎𝟎𝟏
42.6183
31.0631
25.0816
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Extracto etanólico Jarabe Tabletas
mg G
AE
/mL
CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
49
𝑭𝒍𝒂𝒗𝒐𝒏𝒐𝒊𝒅𝒆𝒔 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍𝒆𝒔 = 𝟏, 𝟔𝟑𝟔𝟓 [𝒎𝒈
𝒎𝑳 ]
En la Tabla 11, se resumen los resultados obtenidos por triplicado del extracto de las hojas, jarabe
y tabletas de Artemisia absinthium.
Tabla 11 Resultados obtenidos en la cuantificación de flavonoides del extracto de Artemisia
absinthium y de sus Productos Naturales procesados de uso medicinal.
Muestras Absorbancia Concentración
[𝒎𝒈
𝒎𝑳 ]
[𝒎𝒈 𝑸𝑬
𝒈 𝒆𝒙𝒕𝒓𝒂𝒄𝒕𝒐 ]
Contenido de
Flavonoides
totales ± DE
mg QE/g.
E1 0,821 1,636 9,648
9,629±0,017
E2 0,823 1,640 9,625
E3 0,824 1,642 9,613
J1 0,366 0,726 6,262
6,269±0,009
J2 0,365 0,724 6,280
J3 0,363 0,726 6,267
T1 0,777 1,549 5,784
5,821±0,059 T2 0,776 1,547 5,791
T3 0,763 1,521 5,890 Los valores representan la media de tres repeticiones ± la desviación estándar (DE).
Elaborado por Daza Gabriela.
En la Figura 5, se puede evidenciar la media de las tres repeticiones para la
concentración de flavonoides tanto del extracto de las hojas de Artemisia absinthium como de
los Productos Naturales procesados de uso medicinal. En primer lugar, se observa que el
contenido de flavonoides en el extracto vegetal presenta mayor cantidad 9,629 mg QE/g este
valor se contrasta con el valor obtenido en el estudio de Singh, et al (2012) que fue de 10,15mg
quercetina/g extracto; es importante considerar que la concentración de flavonoides también
depende en gran manera de la zona en la cual es cultivada la planta, las condiciones ambientales
en las que se ubica, el tiempo de recolección, el procedimiento de extracción adecuado para su
principio activo. Sin embargo, su cantidad para los dos formas farmacéuticas fue muy similar,
en el caso del extracto del jarabe presenta un valor de 6,269 mg QE/g , el cual difiere con la Tabla
7 de los datos informativos de los productos en donde su composición es de 3,0% de flavonoides
por lo que no cumple con este parámetro, debido a que se observa el doble de la concentración
aproximadamente con respecto al valor determinado, lo anterior puede estar asociado al
tratamiento realizado para la obtención del extracto del jarabe por la mezcla de acetato de etilo-
hexano; en comparación con el extracto de las tabletas que presento menor contenido de
50
flavonoides cuyo valor fue de 5,821 mg quercetina/g extracto, observando la Tabla 7 se puede
notar que las tabletas son realizadas con polvo micropulverizado de hojas de ajenjo.
Figura 5. Representación gráfica de las medias de la cuantificación de flavonoides en el extracto vegetal y
Productos Naturales procesados de uso medicinal de Artemisia absinthium.
Elaborado por Daza Gabriela.
Perfil cromatográfico de extracto de hojas Artemisia absinthium y de sus productos
naturales procesados de uso medicinal.
En la Figura 6, se observa el perfil cromatográfico realizado para la identificación de
la absintina en la especie vegetal Artemisia absinthium, se puede evidenciar que se encuentra
presente en el extracto de las hojas con mayor intensidad con respecto al de las tabletas y al
jarabe debido a la concentración del principio activo. Es importante considerar que para el
jarabe se realizó un procedimiento de extracción diferente (cromatografía en columna) con
respecto a las otras dos muestras, sin embargo, se evidencia la marca de absintina, pero mucho
más tenue que la del extracto vegetal y de las tabletas, lo anterior puede estar asociado la
interferencia del porcentaje de azúcar y combinaciones de vitaminas como la A y la C que
presenta está forma farmacéutica en su formulación. Se utilizó como fase móvil Acetona/ácido
acético glacial/tolueno/ diclorometano (1:0,5:3:5), con un Rf de 0,39 cuya fase estacionaria
sílica Gel 60 F254; todas las sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en
disolventes apolares, debido a esto, es posible su separación.
9.6287
6.26975.8217
0
2
4
6
8
10
12
Extracto etanólico Jarabe Tabletas
mg Q
uer
ceti
na/
g e
xtr
acto
Cuantificación de Flavonoides
51
Figura 6. Perfil cromatográfico para la identificación de absintina. J1,J2,J3 adiferentes concentraciones de
extracto del jarabe.
Tercera Etapa: Ensayos físicos de Productos Naturales procesados de uso medicinal
de Artemisia absinthium.
Tabla 12 Envase primario declarado en el ARCSA para productos naturales procesados de uso
medicinal que contienen Artemisia absinthium.
Formas
Farmacéuticas Envase primario declarado en el ARCSA Prospecto
Jarabe Frasco plástico PEAD (Polietileno de alta densidad) No
Tabletas
Frasco de plástico polietileno tereftalato de color blanco.
Tapa de plástico polietileno de baja densidad de color
amarillo. Algodón hidrófilo de relleno. Liner de plástico
No
Nota: Tomada de (Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia Sanitaria, 2017)
Elaborado por Daza Gabriela
En la Tabla 12, se observa una comparación del envase primario del jarabe y las
tabletas de origen natural declarado en el ARCSA. Como se puede establecer ninguno de los
productos contiene un prospecto a pesar de que es un requisito para la solicitud de Registro
Sanitario. Este prospecto debería estar junto al envase primario en todas las presentaciones de
los productos naturales procesados de uso medicinal. Por lo general, el prospecto contiene la
información necesaria para el usuario, en el cual puede identificar el nombre comercial del
producto, la composición cualitativa de los excipientes y cuantitativa en peso, el nombre
científico de los recursos naturales, la forma farmacéutica, indicaciones, precauciones y otras
que la entidad reguladora especifique para estos productos (Agencia Nacional De Regulación,
52
Control y Vigilancia, 2016). Se debe considerar que ciertos principios activos a dosis altas
pueden ser tóxicos para el sistema nervioso central lo que ocasiona trastornos psíquicos tal es
el caso de la absintina que se presentan problemas hepatotóxicos por ejemplo no se debe exceder
para el extracto fluido, 1:1 (g/ml): 1-2 ml/8 horas y para la droga pulverizada: 1-2 g/8 horas.
Ensayos físicos del jarabe.
En el control organoléptico del jarabe se establece que el sabor es a naranja con una
coloración amarilla y un olor característico. Según se reporta en la literatura la absintina tiene
un sabor amargo por lo que se justifica que la formulación se lo enmascare con el saborizante
de naranja, más aún cuando está indicado para incrementar el apetito en niños.
En la Tabla 13 se muestra la media con su respectiva desviación estándar de las
determinaciones del pH, viscosidad, y densidad realizadas en el jarabe. En primer lugar, se
establece que el pH obtenido es ácido. Este valor se puede justificar debido a que en su
composición se menciona la presencia del 0,26 % de Vitamina C, como se describe en la Tabla
7. La viscosidad en el jarabe es de 251,0 cP, cuyo valor está por encima del rango establecido
por la Farmacopea de los Estados Unidos USP 39-NF34 que es de 100-120 cP. Se debe
considerar que la Farmacopea no específica para productos naturales procesados de uso
medicinal, probablemente por esta razón el fabricante no considera relevante el ajustarse al
rango de la viscosidad establecido en la preparación del jarabe. Con respecto a la densidad se
establece que el jarabe es ligeramente menos denso que el agua (4 °C).
Tabla 13 Resultados obtenidos para ensayos físicos de jarabe con Artemisia absinthium.
Nombre del ensayo Resultados
R1 R2 R3 R±DE
pH 3,70 3,69 3,75 3,71±0,03
Viscosidad (cP) 250,7 252,4 249,8 251,0±1,3
Densidad (g/mL) 0,9993 0,9953 0,9967 0,9971±0,0020
*Viscosidad medida con un Torque: 38,10%-60rpm-24°C. Los valores representan la media de tres repeticiones ±
la desviación estándar (DE).
Elaborado por Daza Gabriela.
Ensayos físicos de las tabletas.
53
Se pesaron 10 tabletas, el peso promedio obtenido fue 487,19 mg el mismo que
equivale a 97,438% de polvo micropulverizado de hojas de Artemisia absitnhium. Asociando
los valores obtenidos difieren de lo mencionado en los datos informativos para las tabletas de
ajenjo en donde existe 500mg de polvo micropulverizado de hojas de ajenjo y no es la cantidad
del principio activo, y el lubricante estearato de magnesio en cantidad suficiente para cada
tableta por lo que la cantidad de cada tableta es mayor a 500mg.
En la Tabla 14, se muestran las determinaciones realizadas para las tabletas de ajenjo como
dureza, friabilidad y desintegración. En primer lugar, se evidencia que la dureza presenta un valor
de 10,3 kgf, lo cual cumple con la especificación de >5kgf, establecido en la Farmacopea, lo que
garantiza que la tableta mantendrá su forma hasta llegar el consumidor, lo cual se complementa
con el valor obtenido de la friabilidad de 0,1085 % (según la Farmacopea es de < 0,8), ya que
existe una relación inversa entre estos dos parámetros físicos. Por otro lado, el tiempo determinado
para la desintegración de la tableta es de 22,9 min, este valor se consideraría un tiempo largo para
que se desintegre en el estómago, a pesar de que cumple con lo especificado <30 min al estar cerca
del límite este es un factor determinante en la liberación del producto.
Tabla 14 Resultados obtenidos para ensayos físicos de tabletas con Artemisia absinthium.
Nombre del
ensayo
Resultados
R1 R2 R3 R±DE
Dureza (kgf) 9,7 10,9 10,4 10,3±0,60
Friabilidad (%) 0,1068 0,1083 0,1105 0,1085±0,0019
Desintegración (min) 21,2 24,1 23,3 22,9±1,5
Los valores representan la media de tres repeticiones ± la desviación estándar (DE). Elaborado por Daza Gabriela.
54
Capítulo V
Conclusiones y Recomendaciones
Conclusiones
Se identificó taxonómicamente a la especie vegetal como Artemisia absinthium, la
misma que fue realizada por el Herbario Alfredo Paredes (QAP) de la Universidad Central del
Ecuador. Esta especie fue adquirida en la “Asociación de Productores de plantas medicinales
de Chimborazo JAMBI KIWA” (Anexo 5).
Las características farmacognósticas evaluadas para la muestra vegetal son las
siguientes: 6,49% de humedad residual, 0,1140% de cenizas totales, 0,9126 % cenizas solubles
en agua y 0,0684 % para cenizas insolubles en ácido.
Mediante el tamizaje fitoquímico de las hojas y de productos naturales procesados de
uso medicinal de Artemisia absinthium se evidenció la presencia de los siguientes compuestos:
alcaloides, triterpenos y esteroides, flavonoides y taninos.
Se realizó la cuantificación de fenoles obteniendo los siguientes resultados: 42,618 mg
GAE1/g extracto para extracto de las hojas de A. absinthium; 31,063 mg GAE/g para el extracto
del jarabe; 25,082 mg GAE/g para el extracto de las tabletas. De igual manera se determinó el
contenido de flavonoides en donde se obtuvo 9,628 mg QE2/g extracto vegetal, 6,269 mg QE/g
extracto de jarabe y 5,8217 mg QE/g extracto de tabletas de ajenjo.
Uno de los aspectos considerados para la determinación de la venta es que los
productos sean utilizados en la prevención, alivio de síntomas o enfermedades de leve
identificación. En caso del jarabe en sus datos informativos Tabla 7 sus indicaciones son para
la anorexia, dispepsia y anorexia por lo que se debe tener un margen de dosificación que no sea
susceptible al consumidor cuando se toma en cuenta la edad del paciente. De igual manera, para
las tabletas al ser utilizado como coadyuvante del sistema digestivo se debería considerar dicho
aspecto.
Al comparar el perfil cromatográfico de las muestras tomando en cuenta lo informado
por la literatura se pudo evidenciar la presencia de absintina en cada una de ellas mediante una
fase móvil de acetona/ácido acético glacial/tolueno/ diclorometano (1:0,5:3:5) consiguiendo un
Rf de 0,39.
1 miligramos equivalentes de ácido gálico (GAE). 2 miligramos equivalentes de quercetina (QE).
55
Se evaluó los controles físicos para los productos naturales procesados de uso
medicinal que contienen Artemisia absinthium obteniendo los siguientes resultados:
Tabletas de ajenjo Jarabe de ajenjo
Dureza kgf 10,3 pH 3,71
Friabilidad % 0,1085 Densidad g/mL 0,9971
Desintegración min 22,9 Viscosidad cP 251,0
Los datos obtenidos para el extracto como para sus productos naturales procesados de
uso medicinal de Artemisia absinthium corresponden a parámetros que permiten determinar la
calidad del producto.
Recomendaciones.
En Ecuador, la venta de Productos Naturales procesados de uso medicinal se realiza
libremente, sin exigir que el producto se someta a algún tipo de análisis que como mínimo pueda
asegurar la autenticidad de la planta, por lo que se sugiere que la entidad reguladora realice una
revisión continua de los productos que se están comercializando actualmente.
En el caso del jarabe y las tabletas su modalidad de venta es libre, sin embargo se
recomienda verificar dicho aspecto ya que el principio activo absintina en dosis erróneas puede
causar daño al consumidor, ya que este principio activo no presenta datos de farmacovigilancia
que permitan demostrar su seguridad y eficacia para enfermedades como pérdida de apetito,
anorexia, dispepsia.
En investigaciones futuras se realice la obtención de absintina pura y esto permitiría
realizar una cuantificación del principio activo en los productos naturales procesados de uso
medicinal lo que garantizaría la dosificación de metabolito en los productos comercializados.
Artemisia absinthium, al presentar varios compuesto activos se recomienda realizar la
caracterización del aceite esencial y su cuantificación para posteriormente evaluar su actividad.
56
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60
Anexos
Anexo 1: Esquema Causa-Efecto
61
62
Anexo 2: Categorización de Variables
63
Anexo 3: Tamizaje Fitoquímico
64
Anexo 4: Diagramas Flujo
65
Anexo 5: Identificación de la especie vegetal
66
Anexo 6: Curvas de Calibración para la Cuantificación de Fenoles totales y Flavonoides.
Figura 7. Curva de calibración de Ácido gálico para la cuantificación de fenoles totales.
Elaborado por Daza Gabriela.
Figura 8. Curva de calibración de quercetina para la cuantificación de flavonoides.
Elaborado por Daza Gabriela.
y = 0.4904x + 0.0001
R² = 0.9997
0
0.005
0.01
0.015
0.02
0.025
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05
Ab
sorb
an
cia
Concentración mg/mL
Curva de Calibración de ácido gálico (GAE)
y = 0.5001x + 0.0026
R² = 0.999
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
0 0.5 1 1.5 2
Ab
sorb
an
cia
Concentración mg/mL
Curva de calibración Quercetina (QE)
67
68
Anexo 7: Fotografías de la metodología experimental
Figura 9 Muestra vegetal
adquirida en Jambi Kiwa
Figura 10 Lavado con Solución
de Agua y solución de
hipoclorito de sodio al 5%
Figura 11 Proceso de secado de
la muestra vegetal.
Figura 12 Filtración al vacío
.
Figura 13 Rotavapor utilizado para concentrar el
extracto etanólico de hojas de Artemisia absinthium.
69
Ensayo de pureza de la muestra vegetal
Figura 14 Determinación de Cenizas totales
Análisis Fitoquímico
Figura 15 Extracción para el tamizaje
fitoquímico
Figura 16 Identificación de cardiotónicos
70
Figura 17 Identificación de alcaloides
Figura 18 Identificación de flavonoides-Reacción de Shinoda
Figura 19 Identificación de taninos
71
Figura 20 Identificación de esteroles
Ensayo Químico del extracto vegetal y de Productos Naturales procesados de uso medicinal
Figura 21 Elaboración de la curva de calibración de flavonoides para su cuantificación
Figura 22 Elaboración de la curva de calibración de fenoles totales para su cuantificación
72
Figura 23 Cromatografía de capa fina
Figura 24 Ensayo de Identidad de extracto vegetal y de productos naturales procesados de uso medicinal.
Control microbiológico de Productos Naturales procesados de uso medicinal
Figura 25 Análisis microbiológico de tabletas de Artemisia absinthium
73
Figura 26 Análisis microbiológico del jarabe de Artemisia absinthium
Ensayos Físicos de Productos Naturales procesados de uso medicinal
Figura 27 Trituración de las tabletas de Artemisia absinthium
Figura 28 Obtención del extracto de tabletas de Artemisia absinthium.
74
Figura 29 Jarabe de Artemisia absinthium.
Figura 30 Extracción de columna para jarabe de Artemisia absinthium
Control de calidad de Productos Naturales procesados de uso medicinal
Figura 31 Determinación de friabilidad de tabletas de Artemisia absinthium
75
Figura 32 Determinación de desintegración de tabletas de Artemisia absinthium
Figura 33 Determinación de dureza de tabletas de Artemisia absinthium
Control de calidad jarabe
Figura 34 Determinación de pH del jarabe de Artemisia absinthium
76
Figura 35 Determinación de densidad del jarabe de Artemisia absinthium
Figura 36 Determinación de viscosidad del jarabe de Artemisia absinthium
77
Anexo 8: Informe Técnico de Espectrofotómetro Fisher Scientific Modelo: SP-2100UVPC
78
79
80