tuberculosis medios

5/13/2018 Tuberculosis Medios - slidepdf.com

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TEMATEMA 2323MICOBACTERIAS. MEDIOS DE CULTIVO EMICOBACTERIAS. MEDIOS DE CULTIVO E

IDENTIFICACIÓN. PATOLOGÍA Y TIPOS DEIDENTIFICACIÓN. PATOLOGÍA Y TIPOS DETUBERCULOSIS: PRUEBAS DE LABORATORIOTUBERCULOSIS: PRUEBAS DE LABORATORIO

Mercedes Rodríguez Buenavida. Técnicos Especialistas de Laboratorio en análisis clínico. EditorialKronos S.A. 1998

Martin Frobisher, Ronald D.Hinsdill, Koby T. Crabtree y Clyde R. Goodheart. Microbiología. Edito-rial Salvat. 1978

Ismael Caballero. Revista EcoHabitar.2004

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BIBLIOGRAFÍA



1. MICOBACTERIAS: MEDIOS DE CULTIVO E IDENTIFICACIÓNLas Micobacterias pertenecen a la familia de las Mycobacteriaceae y el género Mycobacte-

rium, que comprende multitud de especies que podemos encuadrar en tres grupos:

- Complejo tuberculosis: M. tuberculosis, M. africanum y M. bovis.

- Complejo Lepra: M.leprae

- Micobacterias atípicas.

Todas las bacterias del género Mycobacterium, presentan una serie de característicasgenerales:

- Acido alcohol resistencia: capacidad que tienen las micobacterias, una vez teñidaspor determinados colorantes como la fucsina, para resistir la decoloración con una

solución de ácido y alcohol. Esta característica parece deberse a la riqueza en lípidosde la pared de estas bacterias. La técnica de tinción más clásica para demostrar laácido alcohol resistencia es la de "Ziehl Neelsen" aunque también se utiliza mucho la"tinción fluorescente con auramina" por ello se las suele llamar bacilos ácido alcoholresistentes (BAAR).

- Se dividen por fisión binaria y tienen una gruesa pared celular de estructura comple- ja.

- El metabolismo varía mucho entre las distintas especies, desde las de crecimientorápido, que se desarrollan en medios simples, hasta Mycobacterium leprae que no escultivable en medios sin células pasando por Mycobacterium tuberculosis querequiere para cultivarse en el laboratorio más de 15 días en medios sólidos, comple- jos y muy ricos.

Las micobacterias se clasifican según velocidad de crecimiento en:

- De crecimiento rápido, crecen en menos de 7 días.

- De crecimiento lento, tardan más de una semana en crecer.

Según la producción de un pigmento, se clasifican en:

- Escotocromógenas, pigmentan en oscuridad

- Fotocromógenas, pigmentan sólo tras exposición a la luz

1.1 Mycobacterium tuberculosis

Es el agente productor de la tuberculosis, que es una enfermedad transmisible de declara-ción obligatoria.

M. tuberculosis fue descubierto por Koch en 1882 (bacilo de koch).

Aunque menos frecuente, M bovis, micobacteria responsable de la tuberculosis bovina,puede también producir tuberculosis en el huésped humano.

M. tuberculosis es un bacilo delgado y de aspecto filamentos o, que en ocasiones puedepresenta formas cocoides. Es común la tendencia a crecer como largos agregados trenzadosque han sido llamados "cuerdas de serpentina".

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En cuanto a su estructura, la característica más llamativa es la abundancia de lípidos en lapared celular a los que debe su acido alcohol resistencia; entre ellos destaca el "ácido micó-lico" y el denominado "factor Cord" que le confiere la propiedad de crecer encadenadosformando cordones.

M. tuberculosis es un aerobio estricto; su ritmo de crecimiento es particularmente lento (2-3 semanas), se cultiva en medio de Lowenstein-Jensen.

1.2 Mycobacterium leprae

Es el agente causal de la lepra.

M. leprae fue descrito por Hansen en 1837 como agente productor de lepra (bacilo deHansen).

Este microorganismo no es cultivable en medios sin células, lo cual ha limitado su conoci-miento.

El reservorio de la enfermedad es exclusivamente humano.

La vía de transmisión es por medio de aerosoles.

El periodo de incubación es largo, puede variar de 2 a 12 años.

La lepra puede presentar gran variedad de manifestaciones clínicas, en relación al gradode respuesta inmunológica:

- Cuando un individuo es incapaz de desarrollar respuesta inmune, se produce unagran multiplicación de los bacilos: lepra lepromatosa.

- Cuando el individuo es capaz de desarrollar respuesta inmune: lepra tuberculoide.

Entre estos dos cuadros existe una amplia gama de presentaciones.El diagnóstico bacteriológico de M. leprae se basa en la demostración directa de los baci-

los en muestras de lesiones cutáneas, raspado de moco nasal, linfa del lóbulo (en casos deenfermedad activa se agrupa en masas denominadas globis), linfa del glóbulo de la oreja.Para ello se utilizan las tinciones ácido alcohol resistentes de Ziehl-Neelsen y auramina.

La lepromina es una suspensión de bacilos de lepra inactivados que se inyectan vía intra-dérmica; la lectura de la prueba se hace a los 21 días. Los pacientes con lepra lepromatosadan resultado negativo y los pacientes con lepra tuberculoide dan resultado positivo.

1.3 Micobacterias atípicas

No todas las micobacterias atípicas son capaces de producir enfermedad ni todas las quela producen lo hacen con igual virulencia.

Se define micobacteriosis aquellas enfermedades producidas por micobacterias distintasde M. leprae y M. tuberculosis.

Actualmente la infección por micobacterias atípicas más frecuente es la producida promicobacterias del complejo avium-intracellulare.

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Micobacterias: medios de cultivo e identificación

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La patología que producen podría clasificarse en:

- Pulmonar (suele parecerse a la tuberculosis).

- Extrapulmonar (adenitis cervical es la forma mas frecuente).

- Diseminada (se produce en pacientes con inmunodeficiencias).

1.4 Medios de cultivo

A la hora de realizar el cultivo lo primero que debemos hacer es eliminar la máxima canti-dad de microorganismos, que no sean Micobacterias, de la muestra. Esto facilitará el cultivode las mismas. Debemos tener en cuenta que el crecimiento de las Micobacterias es muy lento(20-22 h), mientras que el resto de las bacterias presentes pueden duplicarse en 40-60 minu-tos; si esta duplicación se hiciese efectiva los desperdicios de estas bacterias harían imposibleo muy difícil el crecimiento de las Micobacterias inoculadas.

Para esto utilizaremos la técnica de Tacquet y Tison. Si la descontaminación de la muestrano ha sido efectiva o la muestra estaba muy contaminada utilizaremos técnicas más agresivascomo la de Kubica y Krasnow o la de Petroff y Löwenstein.

Las muestras que son estériles, no necesitan descontaminación.

Una vez descontaminada la muestra, concentraremos y homogenizaremos, y despuésprocederemos a su cultivo, utilizando la mínima cantidad posible y evitando los trozos o ellíquido excesivo.

El cultivo se puede realizar en medios líquidos o sólidos.

Una vez inoculados se incubarán a 37º C en la oscuridad (los medios de cultivo no debenestar expuestos a la luz) y se observará su crecimiento cada pocos días, tiñendo la muestra

con la tinción de Ziehl-Neelsen.Los medios de cultivo líquidos, se componen de glicerina, solución de oligoelementos y

suero de buey.

El desarrollo se inicia en el fondo del tubo, siendo visible a los seis días, y presentará unvelo en su superficie a las tres semanas de la inoculación.

Para demostrar su virulencia el bacilo adoptará formas serpenteantes similares a cuerdas.

Los medios líquidos más empleados son los de Dubos, Youmans y Migit.

Los medios de cultivo sólidos se componen de huevo, soluciones de aminoácidos y mine-rales y verde malaquita.

Los principales medios de cultivo sólidos son:

- Lowenstein-Jensen: podemos observar el crecimiento a las 2-4 semanas, apareciendocolonias rugosas, secas e irregulares. Este medio posee como colorante el verde mala-quita.

- Agar Middlebrook: en este medio las colonias son lisas, siendo su desarrollo másabundante y rápido.

- Lowenstein con piruvato.

- Coletsos: contiene huevo.

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Cuando se observa que en el medio de cultivo han crecido bacterias susceptibles de sermicobacterias, se hace una tinción de Ziehl-Neelsen, antes de la identificación de la colonia.

1.5 Identificación de las Micobacterias

Como en la identificación de cualquier bacteria, ésta se realizará teniendo en cuenta losresultados hallados en las pruebas realizadas.

No todos los laboratorios presentan el material y el personal necesarios para llevar a cabotodo el proceso, en caso de tener que enviar las muestras a otro laboratorio deberemos asegu-ramos que la identificación y la conservación de la muestra en cuestión son correctas.

Existen tablas y procesamiento de pruebas en cualquier manual de laboratorio, por estarazón y como resumen a continuación insertamos una tabla con las principales pruebas y losresultados de las diferentes Micobacterias:

2. PATOLOGÍA Y TIPOS DE TUBERCULOSIS: PRUEBAS DELABORATORIO

2.1 Clasificación de la tuberculosis

La enfermedad tuberculosa tiene múltiples formas de presentación; según sus localizacio-nes puede clasificarse en:

- Tuberculosis pulmonar

- Tuberculosis extrapulmonar

- Tuberculosis diseminada

Una de las formas más importante de tuberculosis es la meningitis tuberculosa que seproduce por la rotura de una granuloma tuberculoso en el espacio subaracnoideo.

M. tuberculosis es parásito intracelular obligado y el hombre es su único reservorio; elmecanismo de transmisión mas importante es por medio de aerosoles, aunque tambiénpuede ser digestivo (leche contaminada) y excepcionalmente cutáneo. Generalmente la infec-ción tuberculosa se inicia con un inóculo bacteriano muy bajo, son suficientes unos pocosbacilos inhalados de los aerosoles producidos por las secreciones respiratorias de unenfermo. Cuando el bacilo tuberculoso es inhalado, llega hasta el alveolo del huésped dondees fagocitado por los macrófagos alveolares y comienza a multiplicarse. Los macrófagosinfectados son transportados por los vasos linfáticos a los ganglios linfáti-cos regionales desde donde pueden diseminarse hasta el resto del orga-nismo. Durante esta primera fase de la infección, la multiplicación intrace-lular del bacilo se produce sin problemas; comienzan a ponerse en marcha

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mecanismos de inmunidad celular con desarrollo de células especializadas, que se organizanen granulomas rodeando a las células infectadas.

Al desarrollarse la respuesta inmunitaria (el test de la tuberculina se hace positivo) de 3 a8 semanas después de la infección, se limita la multiplicación de los bacilos, se destruye lamayoría de ellos y se impide su diseminación, aunque algunos bacilos permanecen viablesdurante años después de la infección inicial. Habitualmente la infección se detiene en esteestadio (primoinfección) y no progresa a enfermedad clínica.

Los pacientes con infección latente presentan habitualmente un test de tuberculina posi-tivo, pero son asintomáticos y no infecciosos.

El bacilo tuberculoso se duplica cada 20 horas aproximadamente, si no es controlado porlas defensas del huésped, puede llegar a provocar necrosis de los tejidos circundantes yformación del llamado caseum; estas zonas necróticas se licúan y se producen las cavernas,

con comunicación a vías aéreas y siembras múltiples en ambos pulmones.

2.2 Pruebas de laboratorio

Para el diagnóstico, la muestra puede ser de casi cualquier lado, siempre que se encuentrealterado por la presencia del M. tuberculosis: sangre, orina, secreciones gástricas, punciones,LCR...

Debemos aseguramos que el paciente no está tomando ninguna medicación antimicro-biana que pudiera alterar los resultados de las pruebas; si fuera así se suspenderá el trata-miento durante los 5 días previos a la toma de la muestra.

La muestra deberá ser recogida en el recipiente adecuado a su naturaleza y en cantidadsuficiente para poder realizar las pruebas pertinentes.

Debido a la eliminación aleatoria de los microorganismos, las muestras deben ser recogi-das de forma secuencial durante varios días y han de ser llevadas en el menor tiempo posibleal laboratorio para su análisis.

- Esputo: recoger a primera hora de la mañana, es preferible tres muestras (una cadadía). La presencia de 3-5 Micobacterias, confirmará una tuberculosis activa. Nospodemos encontrar, M .tuberculosis, M. bovis y M. Kansaii.

- Orina: recoger la primera orina de la mañana, se toma del tramo medio de la micción.La orina de 24 h no es recomendable por poder dañar al M. tuberculosis.

- LCR: la positividad indicaría meningitis tuberculosa.

- Biopsia: machacar en el mortero junto a polvo de alumdum u homogeneizador deteflón e inocular en el medio de cultivo.

- Exudados: inocular directamente.

Cuando nos llegue la muestra al laboratorio realizaremos las pruebas en cabinas de segu-ridad y con personal cualificado.

La luz natural afecta negativamente al procesamiento de la muestra.

Para observar la muestra de forma microscópica realizaremos unatinción de Ziehl-Neelsen o de Kinyoun, dado el carácter ácido-alcoholresistente de estas bacterias la fucsina penetrará en ellas y podremos obser-var los bacilos de color rojo sobre fondo azul.

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También podemos realizar una observación por técnicas de fluorescencia con auramina,'rojo de tiazina o naranja de acridina, observando la muestra bajo luz ultravioleta para poderdistinguir la presencia del M. tuberculosis.

Las visualizaciones deberán ser informadas de forma cuantitativa según la siguiente tabla:

Si hay más de 50 micobacterias en una línea, no es necesario seguir con la observación.

La tinción de Ziehl-Neelsen es muy fácil de realizar y nos ayuda a distinguir de formaclara la presencia de bacterias ácido-alcohol resistentes.

Los pasos a seguir son:

- Preparar la muestra sobre un portaobjetos.

- Verter el colorante (fucsina básica) con fenol al 5% sobre el portaobjetos preparado.

- Calentar el portaobjetos suavemente durante 3-5 minutos. ( Si la tinción se hiciera enfrío, la muestra debe de estar como mínimo una hora sumergida en la fucsina.

- Decolorar con HCl al 3% en etanol.

- Lavar la muestra.- Añadir azul de metileno como contraste de fondo.

Las muestras así preparadas, nos ofrece los bacilos teñidos de rojo sobre un fondoazulado.

Si observamos al microscopio los bacilos tuberculosos, siempre se realizará el cultivo deestos.

Para determinar la presencia del M. tuberculosis podemos utilizar también otro tipo depruebas, el denominado diagnóstico indirecto.

La principal prueba para determinar este diagnóstico es la de la tuberculina, consistenteen inocular al paciente una muestra de tuberculina y esperar los resultados.

La inoculación se realiza por la técnica de Mantoux.

Antes se usaba tuberculina normal, actualmente se usan tuberculinas más purificadas.

Para realizar la técnica de Mantoux elegiremos una zona del brazo libre de lesiones ante-riores o eritemas que puedan dar lugar a equivocaciones en la lectura. La zona elegidanormalmente es la cara anterior del antebrazo.

Una vez elegido el sitio inocularemos de forma intradérmica 0,1 ml detuberculina de 2 unidades y rodearemos el pinchazo con un círculo paradeterminar de forma exacta el lugar de la inoculación.

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Ausencia de bacilos por 100

campos

0

1-9 bacilos por 100 campos Cifra

10-99 bacilos por 100 campos +

1-10 bacilos por 1 campo ++

> 10 bacilos por 1 campo +++



Al paciente se le dirá que no se puede mojar la zona, ni frotar ni rascar, aunque aparez-can picores, ni borrar el círculo pintado.

La lectura se realiza a las 24, 48 Y 72 horas, midiendo el diámetro transverso de la indura-ción, si la hubiera, y se interpreta según la siguiente tabla:

En personas no vacunadas una induración de 6 mm o superior será considerada comopositiva.

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MICROBACTERIAS: MEDIOS DE CULTIVO E IDENTIFICACIÓN

Las Micobacterias pertenecen a la familia de las Mycobacteriaceae y el género

Mycobacterium, que comprende multitud de especies que podemos encuadrar en tres gru-

pos:

- Complejo tuberculosis: M. tuberculosis, M. africanum y M. bovis.

- Complejo Lepra: M.leprae

- Micobacterias atípicas.

Mycobacterium tuberculosisEs el agente productor de la tuberculosis, que es una enfermedad transmisible de declara-

ción obligatoria.

M. tuberculosis fue descubierto por Koch en 1882 (bacilo de koch).

Mycobacterium lepraeEs el agente causal de la lepra.

M. leprae fue descrito por Hansen en 1837 como agente productor de lepra (bacilo de

Hansen).

Este microorganismo no es cultivable en medios sin células, lo cual ha limitado su conoci-

miento.El reservorio de la enfermedad es exclusivamente humano.

La vía de transmisión es por medio de aerosoles.

El periodo de incubación es largo, puede variar de 2 a 12 años.

Micobacterias atípicasNo todas las micobacterias atípicas son capaces de producir enfermedad ni todas las que la

producen lo hacen con igual virulencia.

Se define micobacteriosis aquellas enfermedades producidas por micobacterias distintas de

M. leprae y M. tuberculosis.

Actualmente la infección por micobacterias atípicas más frecuente es la producida pro

micobacterias del complejo avium-intracellulare.

Medios de cultivoA la hora de realizar el cultivo lo primero que debemos hacer es eliminar la máxima canti-

dad de microorganismos, que no sean Micobacterias, de la muestra. Esto facilitará el culti-

vo de las mismas. Debemos tener en cuenta que el crecimiento de las Micobacterias es muy

lento (20-22 h), mientras que el resto de las bacterias presentes pueden

duplicarse en 40-60 minutos; si esta duplicación se hiciese efectiva los des-

perdicios de estas bacterias harían imposible o muy difícil el crecimiento

de las Micobacterias inoculadas.

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Microbacterias: medios de cultivo e identificación

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Los medios de cultivo líquidos, se componen de glicerina, solución de oligoelementos ysuero de buey.

El desarrollo se inicia en el fondo del tubo, siendo visible a los seis días, y presentará un

velo en su superficie a las tres semanas de la inoculación.

Identificación de las MicobacteriasComo en la identificación de cualquier bacteria, ésta se realizará teniendo en cuenta los

resultados hallados en las pruebas realizadas.

No todos los laboratorios presentan el material y el personal necesarios para llevar a cabo

todo el proceso, en caso de tener que enviar las muestras a otro laboratorio deberemos ase-

guramos que la identificación y la conservación de la muestra en cuestión son correctas.

Existen tablas y procesamiento de pruebas en cualquier manual de laboratorio, por esta

razón y como resumen a continuación insertamos una tabla con las principales pruebas ylos resultados de las diferentes Micobacterias:

PATOLOGÍA Y TIPOS DE TUBERCULOSIS: PRUEBAS DE LABORATORIO

Clasificación de la tuberculosisLa enfermedad tuberculosa tiene múltiples formas de presentación; según sus localizacio-

nes puede clasificarse en:

- Tuberculosis pulmonar

- Tuberculosis extrapulmonar

- Tuberculosis diseminada

Pruebas de laboratorioPara el diagnóstico, la muestra puede ser de casi cualquier lado, siempre que se encuentre

alterado por la presencia del M. tuberculosis: sangre, orina, secreciones gástricas, puncio-

nes, LCR...

Debemos aseguramos que el paciente no está tomando ninguna medicación antimicrobia-

na que pudiera alterar los resultados de las pruebas; si fuera así se suspenderá el tratamien-

to durante los 5 días previos a la toma de la muestra.

La muestra deberá ser recogida en el recipiente adecuado a su naturaleza y en cantidad

suficiente para poder realizar las pruebas pertinentes.

Debido a la eliminación aleatoria de los microorganismos, las muestras deben ser recogidas

de forma secuencial durante varios días y han de ser llevadas en el menor tiempo posible

al laboratorio para su análisis.

Cuando nos llegue la muestra al laboratorio realizaremos las pruebas en cabinas de segu-

ridad y con personal cualificado.La luz natural afecta negativamente al procesamiento de

la muestra.

Si observamos al microscopio los bacilos tuberculosos, siempre se realizará el cultivo de

estos.

La principal prueba para determinar este diagnóstico es la de la tubercu-

lina, consistente en inocular al paciente una muestra de tuberculina y

esperar los resultados.

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tuberculosis medios

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