Lic. Edgar Gonzales EscalanteLic. Edgar Gonzales EscalanteTECNÓLOGO MÉDICOTECNÓLOGO MÉDICO

Instituto Nacional de Salud del Instituto Nacional de Salud del NiñoNiño

• Streptococcus pneumoniae: es la bacteria lider en la infección en todo el mundo– Colonización asintomatica

– Infecciones comunes (otitis media, …)

– Infeciones que amenazan la vida (sepsis, meningitis, …)

• A pesar de la introducción de los medicamentos antimicrobianos durante las últimas décadas, sigue siendo una amenaza significativa para la salud

No invasiva otitis (25-50%) sinusitis Bronquitis

recurrente

Invasiva neumonia sepsis meningitis

Neumonia neumocócica

ALTA MORTALIDAD1ra Causa de muerte en enfermedades infeciosas

En 2002: 2,1 millones de muertes por neumonía neumocócica, que 1,5 en niños menores de cinco años de edad

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<2 2-4 5-9 10-14 15-24 25-34 35-44 45-54 55-64 65-74 >75

Age groups (years)

Annual rate of PID per 100,000

• Exclusivamente patógeno humano

• Parte de la flora microbiana normal del tracto respiratorio superior

• Transmisión: por las secreciones de gota

• Patrón temporal: invierno-primavera

Colonización del tracto respiratorio

Replicación en la nasofaringe

Extención a zonas adyacentes

neumonia otitis media sinusitis

meningitisSangre

• Inicialmente fue denominado “microbio septicémico de la saliva” por Pasteur y Micrococcus pasteuri por Sternberg en 1881, año en el cual ambos investigadores lo aislaron por primera vez.

• En 1886, este microorganismo fue denominado neumococo por Fraenkel debido a que causaba enfermedad pulmonar.

• Posteriormente, según sugerencia de Weichselbaum, en 1920, fue denominado Diplococcus pneumoniae debido a su morfología,

• En 1974, en la octava edición del Manual de Bacteriología de Bergey, el neumococo fue denominado Streptococcus pneumoniae (Chester 1901), denominación aún vigente.

• Streptococcaceae: cocos Gram positivos, anaerobios facultativos, catalasa negativa y citocromo-oxidasa negativa.

• Alfa-hemolíticos en sangre de carnero

• Encapsuladas, con morfología de diplococos lanceolados, con 0,5 a 1,25 μm de diámetro, arregladas en pares o en cadenas cortas (división en un plano), inmóviles, no formadores de esporas.

Agar Sangre de Carnero Agar Chocolate

Siembra por dispersión agotamiento

Incubación:◦Temperatura:

35ºC◦Tiempo: 24 -48 h◦Requerimiento :

CO2 5%

• La variante morfológica más frecuentemente aislada en personas infectadas es la forma “lisa” de Griffith, que se presenta encapsulada, con los márgenes lisos y cuyas colonias tienen una apariencia de tipo mucosa.

• Fue precisamente Griffith, quien, en 1928, puso de manifiesto que la cápsula es el principal factor de virulencia. Mediante la inoculación a ratones de neumococos encapsulados (estirpe lisa) y no capsulados (estirpe rugosa), encontró que los animales tratados con la forma encapsulada morían, mientras que la inyección de la estirpe rugosa era inocua.

• Las colonias jóvenes de neumococo y del estreptococo viridans α-hemolítico aparecen levantadas; sin embargo, después de 24 a 48 horas, el centro de las colonias de neumococos se vuelve deprimido, mientras las colonias de estreptococo viridans conservan su apariencia

La optoquina (hidrocloruro de etilhidrocupreína)

susceptible en bajas concentraciones (5μg o menos)

La optoquina puede inhibir otros α-hemolíticos , pero en concentraciones altas.

Incubación 20-24 hs 35°C y 5% CO2

5μg

10mm

6mm

5μg

DISCO 6 mm

S: ≥ 14 mm = S. pn

9-13 mm= P. Solubilidad

DISCO 10mm

S: ≥ 16 mm = S. pn< 16 mm = P. Solubilidad

17 mm

Las sales de bilis (desoxicolato y el taurocolato de sodio) tienen la capacidad de lisar S. pneumoniae, cuando en solución se adicionan a una suspensión de microorganismos (suspensión realizada a partir de un cultivo fresco de S. pneumoniae de 18- 24 horas en agar sangre ovina al 5%).

S. pneumoniae produce enzimas autolíticas que son las responsables de la característica umbilicada de la colonia en cultivos viejos. La adición de la solución de sales de bilis a la suspensión de la bacteria, acelera el proceso de lisis; proceso asociado con la disminución de la tensión superficial entre el medio y la membrana celular bacteriana.

Solubilidad en bilis

0.5 McFarland

0.25 mL

0.25mLSS 0.25 mL desoxicolato sodio 2%

INCUBACIÓN35°C/ 2h

Manual de Laboratorio para la identificacion y prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos. CDC, Atlanta, Georgia.2004

Identificación de S. pneumoniae

Cultivo puro

Identificación de Streptococcus pneumoniae

Solubilidad en bilis

INTERPRETACIÓN

INHIBICIÓN DE LA TURBIDEZ S. pneumoniae

1 gota desoxicolato al 10%

Desaparición de la colonia

10 min

¿Que hacemos si esta con antibióticos? Si es positivo al gram y no crece el cultivo

Por 6 proteínas de unión a penicilina (PBP): Mutaciones del ADN por uso indiscriminado

de ATB Incorporación de genes de S. viridans

(faringe) R a Penicilina: PBPs 2X, 2B, IA R a Cefotaxima: PBPs 2X, IA Operón Mur-MN codifica R a Penicilina

(Tomasz A, Corso A y col.: Drug Resist. 1998)

Alteración sitio blanco (MLS) por metilación del ribosoma (Resistencia a eritromicina, azitromicina, claritromicina, lincosamidas y estreptograminas)

Mecanismo de eflujo (M) (Resistencia a eritromicina, azitromicina y claritromicina)

Modificación en el sitio blanco:

DNA girasa, topoisomerasa

  Total 2007 2008 2009

Sangre 42 13 16 11

Vagina 26 14 5 5

Respiratorios 21 4 8 9

Líquidocefalo-raquideo

14 4 7 3

Orina 9 1 5 2

Total 112 36 41 30

Nombre del antibiótico

Puntos de corte

N° %R %I %S %NS

Cloramfenicol S >= 21 110 18.2 0 81.8  

Eritromicina 16 - 20 114 22.8 4.4 72.8  

Oxacilina S >= 20 109 0 0 52.3 47.7

Trimetoprima/Sulfametoxazol

16 - 18 88 55.7 5.7 38.6  

Vancomicina S >= 17 129 0 0 96.1 3.9

egones_5@hotmail.com