resumen - unibe · como una forma de cromatografía en la que la fase estacionaria es una capa fina...
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Universidad de Iberoamérica
Tibás, San José de Costa Rica
Facultad de Farmacia
Trabajo de investigación para optar por grado de licenciatura en Farmacia.
Tema:
“Evaluación de los principios activos en el Vassluten vencido para evaluar la estabilidad del fármaco y su posible reutilización”
Estudiantes:
Alvarado Mora Katherine – Solórzano Fuentes Lucía
Tutores:
Calvo Pineda MSc. Marco – Rodríguez Yebra Dra. Lissette
Resumen Los desechos farmacéuticos son aquellos medicamentos vencidos, que no han sido utilizados, o que fueron derramados y
contaminados. Según el reglamento de control ambiental del Ministerio de salud se debe hacer una disposición final de estos
medicamentos siendo desechados. El presente trabajo de investigación pretende evaluar la estabilidad de tabletas vencidas y
demostrar que trabajar con fármacos vencidos podría generar una economía extra a la CCSS, y lograr demostrar bajo varios estudios,
que se puede tener un margen terapéutico de un tiempo mayor para alcanzar su fecha de vencimiento, que se estipula para los
medicamentos adquiridos a esta institución. En este estudio, se escogen tabletas de Vassluten en presentación con Irbesartán
simple y en otra presentación combinada con Hidroclorotiazida después de su fecha de expiración y así se valoran en ambas su
estabilidad. Además se utilizó el patrón puro de cada compuesto para así comparar la presencia de cada principio activo en las
tabletas. Para lograr lo planteado se emplearon procedimientos como la extracción de cada principio activo, y así realizar los
estudios requeridos mediante las pruebas de cromatografía de capa fina y cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC).
Según los resultados obtenidos se observa la inexistencia de interacciones y posible estabilidad en ambas moléculas de los principios
activos extraídos, además con la comparación de la literatura existente, se evidencia que son necesarios más estudios para
establecer con mayor seguridad, la estabilidad real de los medicamentos vencidos y su posible reutilización; y así poder reducir el
impacto ambiental y económico que estos mismos desechos producen.
Palabras Claves: medicamentos vencidos, estabilidad, Vassluten, principio activo, extracción, reutilización.
Abstract Pharmaceutical wastes are drugs that have expired, have not been used, or have been spilled and contaminated. According to the
environmental control regulations of the Ministry of Health, a final disposition of these medicines must be made and disposed of.
This research aims to evaluate the stability of expired tablets and to demonstrate that working with overdue drugs could generate
an extra economy to the CCSS and to be able to demonstrate under several studies that a therapeutic margin of a longer time to
reach its date of expiration, which is stipulated for the drugs purchased from this institution. In this study, Vassluten tablets are
chosen in presentation with Irbesartan simple and in another presentation combined with Hydrochlorothiazide after its expiration
date and thus are valued in both their stability. In addition, the pure pattern of each compound was used to compare the presence
of each active ingredient in the tablets.In order to achieve this, procedures such as the extraction of each active ingredient were
used to perform the studies required by thin-layer chromatography and high-performance liquid chromatography (HPLC)
tests.According to the obtained results it is observed the non-existence of interactions and possible stability in both molecules of the
extracted active principles, besides comparing the existing literature, it is evident that more studies are necessary to establish with
greater certainty, the real stability of the medicines And their possible reuse; And thus be able to reduce the environmental and
economic impact that these same wastes produce.
2
Introducción
La estabilidad de los productos farmacéuticos puede
detallarse como la capacidad de una formulación específica,
en un sistema de empaquetamiento determinado, para
permanecer dentro de las descripciones y sus características
físicas, químicas, fisicoquímicas, microbiológicas, terapéuticas
y toxicológicas, cuando estas características cambian y
sobrepasan y sobrepasan sus fechas de expiración, se
generan medicamentos vencidos o desechos
medicamentosos.
Según la Ley General de Salud se entiende por medicamentos
deteriorados, para los efectos legales y reglamentarios, aquel
que por cualquier causa ha perdido o disminuido su
seguridad, potencia o pureza. Se presume de pleno derecho
el deterioro, en aquellos medicamentos que se comercien,
distribuyen y suministren vencidos el plazo de duración que
señala su envase o envoltura. 1 Un mal manejo de los
medicamentos vencidos expone la salud de las personas, el
principal problema del vencimiento de dichos medicamentos
es la compra masiva en medicamentos en cantidades
enormes.
La hipertensión es una de las enfermedades crónicas más
común en Costa Rica, representan alrededor del 8% del total
de causas de consulta y dentro de éstas la hipertensión
arterial ocupa el primer lugar y el 2,2% del total de egresos
anuales en la CCSS. en el año 2012 se registraron 814 muertes
por enfermedad hipertensiva, antes de los 40 años las
defunciones son muy escasas, pero a partir de los 40 años se
empiezan a elevar en forma exponencial. Debido esto se da
un aumento mayor en el consumo de medicamentos
antihipertensivos, lo que con lleva a uno de los principales
problemas, el vencimiento de dichos medicamentos y
exponiendo la salud de las personas por un mal manejo de los
medicamentos vencidos.
El Irbesartán se ha convertido en uno de los medicamentos
con mayor consumo en Costa Rica para el tratamiento de la
hipertensión arterial, algunas personas no tienen adherencia
al tratamiento por lo que generan un incumplimiento del
mismo, provocando que el medicamento quede almacenado
en condiciones no óptimas para el mismo generando que su
efecto terapéutico disminuya o incluso el vencimiento del
mismo, por lo tanto, en este proyecto de investigación se
pretende, comprobar la posibilidad de recuperar el principio
activo de los medicamentos vencidos para lograr reutilizarlos
con fines terapéuticos. 2
Propiedades físicas y químicas de Irbesartán y la
Hidroclorotiazida
Irbesartán
Nombre químico:
2-butil-3-[p-(o-1h-tetrazol-5-ilfenil)benzil]-1,3
diazaspiro[4.4]non-1-3n-4-ona. 19
Estructura química:
Formula molecular:
𝐶25𝐻28𝑁6𝑂
Peso molecular:
428,53 𝑔
𝑚𝑜𝑙⁄
Propiedades físicas: Polvo cristalino blanco o casi blanco.
Prácticamente insoluble en agua; poco soluble en etanol y en
cloruro de metilo16
3
Hidroclorotiazida
Nombre químico:
2H-1,2,4-benzotiadiazina-7-sulfonamida,6-cloro-3,4-dihidro-
,1,1-dióxido. 19
Estructura química:
Formula Molecular:
𝐶7𝐻8𝐶𝐼𝑁3𝑂4𝑆2
Peso molecular:
297,74 𝑔
𝑚𝑜𝑙⁄
Propiedades físicas: polvo cristalino blanco o casi blanco.
Muy poco soluble en agua; bastante soluble en etanol;
soluble en acetona. Se disuelve en soluciones diluidas de
hidróxidos alcalinos16.
Procedimiento metodológico químico
Tipo de estudio
Esta investigación es de tipo analítica experimental, se basa
en la extracción de los principios activos de Irbesartán y el de
Irbesartán con Hidroclorotiazida ambas presentaciones
expiradas, además de eso también se trató de observar la
estabilidad de ambos compuestos para observar en qué
condiciones se encuentran, y así, en determinado caso
reutilizarlas para una nueva formulación. Asimismo observar
si la combinación de ambos principios activos presenta alguna
interacción después de su fecha de vencimiento.
Se usaron distintos métodos de separación para aislar el
principio activo, además de esto también se realizó pruebas
en HPLC como método cualitativo para analizar la estructura
de las sustancias para determinar su identidad y estabilidad.
Descripción de pruebas
Para el desarrollo de esta parte química se utilizó como
parámetro de comparación el antihipertensivo Vassluten que
contiene Irbesartán 150mg, además también se utilizó
Vassluten con Irbesartán 150mg mas Hidroclorotiazida
12.5mg ambas presentaciones en condiciones de expiración,
y se compara cada principio activo con el patrón puro de
cada uno.
Se pretende mostrar igualdades y diferencias si es que
existieran entre los fármacos y el patrón, mediantes las
pruebas de laboratorio respectivas donde se evaluaron
parámetros de estabilidad para comprobar su calidad y
posibilidad de reutilizarlos en determinado momento en una
nueva formulación.
Para la obtención de estos resultados se realizaron las
siguientes pruebas:
La cromatografía de líquidos es la técnica analítica de
separación más ampliamente utilizada. Se pueden desarrollar
separaciones basadas en características tan diversas como la
polaridad de los solutos, su naturaleza iónica, su peso
molecular, su capacidad de partición o su capacidad de para
formar complejos de afinidad.
Cromatografía de capa fina (TLC): Es considerada
como una forma de cromatografía en la que la fase
estacionaria es una capa fina sobre la superficie de
una placa adecuada. La fase móvil es transportada
sobre la superficie por acción capilar. Las ventajas de
seguir este procedimiento son la velocidad y el bajo
costo de los experimentos de exploración de capa
fina.
4
Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC):
Es un tipo de cromatografía en columna utilizada
frecuentemente en bioquímica y química analítica.
Esta prueba se caracteriza por su gran sensibilidad,
su fácil adaptación a las determinaciones
cuantitativas y cualitativas exactas, su capacidad
para la separación de especies no volátiles o
termolábiles. En cromatografía liquido-liquido, la
fase móvil es un líquido que fluye a trasvés de la
columna que contiene la fase estacionaria.
La cromatografía liquida se usa en la actualidad para
referirse a los métodos en los cuales la separación se
produce dentro de na columna empaquetada. El
material de empaque es la fase estacionaria y puede
ser un sólido con capacidades adsorbidas o de
exclusivo o un soporte inerte revestido con una fase
liquida. Se usa una fase liquida móvil como eluyente.
Aunque las cromatografías en capa delgada y en
papel utilizan una fase móvil líquida y una fase
estacionaria sólida, difieren en que las separaciones
tienen lugar en una superficie plana en vez de en
una columna 17.
El procedimiento en el cual se fuerza la fase móvil a
través de la columna empaquetada bajo alta presión.
Este método se denomina cromatografía liquida de
alto rendimiento (HPLC) debido a que se obtienen
eficiencias extremadamente altas ( tanto como
50.000 platos/m) o cromatografía liquida de alta
presión, debido a las altas presiones requeridas
(1.000 a 3.000 psi). En la HPLC, el diámetro típico de
partícula es de 10 μm o menos y como resultado, las
columnas son empaquetadas de manera más
ajustada y desarrollan altas retropresiones que
necesitan bombear la fase móvil a través de la
columna.
La cromatografía de reparto se puede subdividir en
cromatografía líquido – líquido y cromatografía con
fases ligadas químicamente (enlazadas). La
diferencia entre estas técnicas radica en la forma
como se retiene la fase estacionaria sobre las
partículas soporté de relleno.
Procedimientos experimentales
Procesos realizados para la realización de las diferentes
pruebas:
Proceso 1, Extracción
La preparación de las muestras de las tres muestras fue la
misma, con el fin de estandarizar el método de preparación
de las mismas.
La finalidad de la extracción es la de separar el principio
activo de los excipientes, utilizando etanol o metanol,
aprovechando que los principios activos son solubles en
dichas sustancias y sea posible su extracción.
1. Moler los comprimidos en un mortero :
Vassluten:
Irbesartán 150 mg
Irbesartán e hidroclorotiazida 1 50mg y 12.5 mg
respectivamente
2. Disolver en 30 ml de etanol o metanol las tabletas
maceradas tomando en cuenta la solubilidad de los
principios activos.
3. Se utiliza papel de filtro y un embudo para separar
los excipientes del principio activo disuelto.
5
Proceso 2, Cromatografía de capa fina
Una vez extraídos los principios activos, se procede a realizar
las pruebas de cromatografía en capa fina, utilizando dos
fases móviles, la primera se realizó en una proporción 1:1
donde se adicionó 5 ml de acetato de etilo y 5 ml de
hexano; la segunda pase móvil presentaba una proporción
4:1:1 utilizando 12 ml de 1-butanol, 3 ml de ácido acético y 3
ml de agua destilada
Preparación 2.1:
1. Se trazaron dos líneas a 1 cm del extremo superior e
inferior de la placa, se utilizaron 2 placas.
2. Se colocaron 1 muestra de cada principio activo
(irbesartán, hidroclorotiazida, irbesartán con
hidroclorotiazida) y sus respectivos patrones,
utilizando un capilar.
3. Se colocó cada placa en un beaker de 1000 ml,
donde cada beaker contenía 1 de las fases móviles
que se mencionó anteriormente y se procedió a
cerrarlas con papel aluminio para evitar pérdidas del
vapor de las fases móviles.
4. Empieza la elución y se retira la placa cuando la fase
móvil se aproxime a la línea trazada en extremo
superior.
5. Una vez retirada cada placa del recipiente de elución
se usó una lámpara UV como agente revelador de
algún compuesto activo en la UV.
6. Seguidamente se sometió cada placa a vapor de
Yodo como revelador de instauraciones.
Proceso 3, HPLC
Se realizó el análisis del contenido de Vassluten por
cromatografía Líquida de Alta Eficacia (HPLC). utilizando los
patrones correspondientes de cada principio activo, con el fin
de demostrar cualitativamente la presencia de los principios
activos extraídos de las tabletas de Vassluten y poder
comparar los tiempos de retención de cada una de las 6
muestras, para lograr mayor rango de certeza de los
resultados adquiridos.
Preparación 3.1:
1. La preparación de las muestras se inició tomando
300 mg del Vassluten con Irbesartán y en
combinación con hidroclorotiazida.
2. Posteriormente, se pesan las tabletas, se llevaron a
polvo fino y se les extraen los principios activos
utilizando etanol.
3. Luego se les agregan a un balón volumétrico de 100
ml, a este se le adicionaron 40 ml de etanol y con
este mismo se afora después de mezclar bien y
sonicar por 20 minutos.
6
Análisis e interpretación de resultados
A continuación se presentan los resultados de cada
cromatografía de capa fina (CCF) realizada.
Se aplicó una CCF para cada compuesto de forma
independiente, y también en conjunto para analizar el
transporte de cada una.
CCF#1
Fuente Propia
Imagen 1. Cromatografía CF de la primera extracción de
Irbesartan tabletas. Fase móvil: Butanol, Ácido acético y
agua.(4:1:1)
• Se observa el desplazamiento de un solo punto, el
cual corresponde a la molécula del Irbesartán.
CCF#2
Fuente Propia
Imagen 2. Cromatografía CF de la primera extracción de
Irbesartan tabletas. Fase móvil: Acetato de etilo y hexano.
(1:1)
• Se logra observar un solo punto, que corresponde a
la molécula del Irbesartán.
CFF#3
Fuente Propia
Imagen 3. Cromatografía CF de la primera extracción de
Hidroclorotiazida tabletas. Fase móvil: Butanol, Ácido acético
y agua.(4:1:1)
• Se observa el desplazamiento de un solo punto, el
cual corresponde a la molécula de Hidroclorotiazida.
CCF#4
Tabletas Patrón
Fuente Propia
Imagen 4. Cromatografía CF de la primera extracción de
Hidroclorotiazida tabletas. Fase móvil: Acetato de etilo y
hexano. (1:1)
• Se observa en cada una de las placas cromatografícas
el desplazamiento de un solo punto, que corresponde al
compuesto de Irbesartán con Hidroclorotiazida.
7
CCF#5
Fuente propia
Imagen 5. Cromatografía CF de la primera extracción de
Hidroclorotiazida tabletas. Fase móvil: Acetato de etilo y
hexano. (1:1)
• Se observa un solo punto, que corresponde a
la molécula de Hidroclorotiazida.
CCF#6
Fuente propia
Imagen 1. Cromatografía CF de la primera extracción de
Irbesartan e Hidroclorotiazida. Fase móvil: Acetato de etilo y
hexano. (1:1)
• Se observa en la cromatografía de CF diferentes
puntos que indican la presencia de los siguientes principios
activos:
A: Hidroclorotiazida extraído
Ap: Patrón hidroclorotiazida
B: Irbesartán extraído
Bp: patrón Irbesartán
C: Irbesartán mas Hidroclorotiazida extraído en reacción con
reflujo
Cp: patrón Irbesartán con Hidroclorotiazida
CCF#7
Fuente propia
Imagen 7. Cromatografía de la segunda extracción de
Irbesartan e Hidroclorotiazida. En vapor con Yodo.
• Se puede observar que se da una buena separación
CCF#8
Fuente propia
Imagen 8. Cromatografía de la segunda extracción de
Irbesartan e Hidroclorotiazida. Fase móvil: Butanol, Ácido
acético y agua.
• Se logra obserbar una mejor separación con
una distancia reccorida muy alta.
CCF#9
Fuente propia
Imagen 9. Cromatografía de la primera extracción de
Irbesartan e Hidroclorotiazida. En vapor con Yodo.
8
CCF#10
I: Irbesartán patrón.
H: Hidroclorotiazida patrón.
I + H: Irbesartán con Hidroclorotiazida patrón en reacción con
reflujo.
Fuente propia
Imagen 10. Cromatografía de CF de la tercera extracción de
Irbesartan e Hidroclorotiazida patrón. Fase móvil: Acetato de
etilo y hexano. (1:1)
• Se observa diferentes puntos, los cuales
corresponden a la presencia de Irbesartán, Hidroclorotiazida
y la combinación de ambos, logrando ver una separación
entre uno y otro.
CCF#11
Fuente Propia
Imagen 11. Cromatografía de CF de Irbesartán e
Hidroclorotiazida patrón. En vapor con Yodo.
CCF#12
Fuente propia
Imagen 12. Cromatografía de CF de Irbesartán e
Hidroclorotiazida patrón. Fase móvil: Butanol, Ácido acético y
agua.
• Se observa una mejor separación de los
diferentes puntos, que corresponden a la molécula de
Irbesartán, Hidroclorotiazida y la combinación de ambos.
También permite observar una mejor separación entre uno y
otro.
CCF#13
Fuente propia
Imagen 13. Cromatografía de CF de Irbesartán e
Hidroclorotiazida patrón. Fase móvil: Butanol, Ácido acético y
agua. En vapor con Yodo.
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Pruebas con HPLC
Primer prueba
Patrón de Irbesartán
Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.
Condiciones del HPLC:
Columna: C18
Buffer: 𝐻3𝑃𝑂4 al 0.55% con pH 3.0
Flujo: 1.2 ml/min
Informe de Análisis:
Tiempo de retención: 9.404min
Área: 2406866.20
Presencia del punto de retención de la molécula de
Irbesartán puro.
Muestra de Irbesartán extraído en tabletas
Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.
Condiciones del HPLC:
Columna: C18
Buffer: 𝐻3𝑃𝑂4 al 0.55% con pH 3.0
Flujo: 1.2 ml/min
Informe de Análisis
Tiempo de retención: 9.625min
Área: 13785835.99
Se denota la formación del pico que indica el tiempo
de retención del Irbesartán extraído.
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Patrón Irbesartán e Hidroclorotiazida
Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.
Condiciones del HPLC:
Columna: C18
Buffer: 𝐻3𝑃𝑂4 al 0.55% con pH 3.0
Flujo: 1.2 ml/min
Informe de análisis:
Tiempo de retención: 9.594min
Área: 8068914.19 V-s
No se observa un pico definido para la
hidroclorotiazida, pero si hay presencia del pico de
Irbesartán puro.
Muestra de Irbesartán e hidroclorotiazida extraídos de
tabletas.
Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.
Condiciones del HPLC:
Columna: C18
Buffer: 𝐻3𝑃𝑂4 al 0.55% con pH 3.0
Flujo: 1.2 ml/min
Información de análisis:
Tiempo de retención: 9.502min
Área: 53033157.73V-s
No se observa un tiempo de retención para la
hidroclorotiazida, pero si hay presencia del punto de
retención de la molécula de Irbesartán extraído.
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Separación parcial de Hidroclorotiazida
……………………………….
Fuente: Laboratorio Instrumental de la UNIBE.
Condiciones del HPLC:
Columna: C18
Buffer: 𝐻3𝑃𝑂4 al 0.55% con pH 3.0
Flujo: 1.2 ml/min
Información de análisis:
Tiempo de retención:
Hidroclorotiazida: 3.199min
Irbesartán: 4.044
Área:
Hidroclorotiazida: 7534347.26 V-s
Irbesartán: 377859.53 V-s
Se forma una separación de ambos compuestos,
identificando que no hay interacción entre ambos.
Se puede observar cómo se forma claramente el pico
de Irbesartán, pero para el hidroclorotiazida no se
forma un buen pico, esto puede ser por la columna
que se utiliza que no está acorde a la molécula del
hidroclorotiazida.
Analisis de la Hidroclorotiazida
Fuente: Laboratorios Lisan
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Conclusiones
La extracción del Irbesartán simple y en conjunto con
el Hidroclorotiazida en presentaciones vencidas es
posible y aparte de eso se puede realizar un sistema
de reacción a reflujo sin descomposición de cada
compuesto.
Se puede concluir con las pruebas realizadas, que el
Irbesartán con Hidroclorotiazida después de su fecha
de expiración no presentan ninguna interacción
alguna entre ellos.
Existe una gran variedad de análisis que permiten
analizar la composición de una determinada
molécula y poder valorar si el compuesto presenta
cierta pureza y estabilidad, entre estos métodos de
análisis están el HPLC, Cromatografías, análisis
infrarrojo, resonancia magnética, entre otras.
Para las pruebas de HPLC no se logra observar
adecuadamente la formación del pico para el
hidroclorotiazida, esto posiblemente se deba a que
la columna que se utiliza, no está acorde a la
molécula del hidroclorotiazida generando
dificultades para obtener mejores resultados de la
misma.
El trabajar con fármacos vencidos podrían generar
una alta economía; se alcanza a demostrar bajo
varios estudios que se puede tener un margen
terapéutico de tiempo mayor al que estipulan para
los medicamentos.
Recomendaciones
Se recomienda tener más variedades de columnas
para el HPLC para mejores resultados.
Sería necesario que la Universidad cuente con un
HPLC acoplado a masas, para un mejor análisis de la
molécula en estudio.
Contar con un equipo de resonancia magnética
nuclear, es de gran utilidad para así conocer a ciencia
cierta el tipo de molécula que se posee.
Realizar ensayos de estabilidad acelerada para
medicamentos vencidos y determinar cuál es la vida
útil real del principio activo.
Es importante seguir con este tipo de trabajos que
generan un bajo costo para la universidad,
generando un buen trabajo de investigación para los
estudiantes con el apoyo de sus profesores, que
cuentan con un excelente nivel académico.
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