Procedimientos estandarizados para la detección o conteo de microorganismos.
Métodos cualitativos (ISO 16140:2003): Método de análisis cuya respuesta es la presencia o ausencia del analito, detectado de forma directa o indirecta en cierta cantidad de muestra.
Métodos cuantitativos (ISO 16140:2003): Método de análisis cuya respuesta es la cantidad del analito medido de forma directa (enumeración en masa o volumen), o indirecta (color, absorbancia, inmpedancia, etc.) en cierta cantidad de muestra.
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS Los métodos de análisis microbiológicos deben:
Ser adecuados para el propósito. Tener bases sólidas para emitir conceptos sobre inocuidad y seguridad microbiológica. Cumplir con los requerimientos de recuperación del microorganismo target.
- Sensibilidad - Especifidad - Robustez
Normalizados, verificados, validados.
Microbiología Tradicional:
- Microscopía - Recuento en placa - Pruebas de ausencia / presencia - Número más probable - Filtración por membrana
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS
población (grupo de microorganismos o microorganismo específico).
Selección de diluciones Medio de cultivo Conteo de:
- Aerobios mesófilos - Coliformes totales / E. coli - Staphylococcus aureus - Clostridium
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS
Método indirecto de recuento. Manejo de diluciones seriadas. Verificación de crecimiento en cada
tubo de las diferentes series. Basado en probabilidad estadística.
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS
Pruebas de Ausencia / Presencia:
específicos. Identificación bioquímica. Identificación serológica.
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS
• Métodos rápidos o de screening:
Ensayos de reciente desarrollo que sean acordes con los nuevos retos presentados y aceleren los tiempos de respuesta frente a métodos tradicionales.
Pruebas negativas en corto tiempo.
Presuntivos con confirmación tradicional.
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS
- Desarrollo de nuevos productos - Desarrollo de nuevas técnicas de envasado - Aparición de nuevas cepas de microorganismos - Producciones intensivas
E. Coli O 104:H4
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS
Películas o placas rehidratables:
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS
REQUISITOS TECNICAS RAPIDAS Y METODOS DE FISICOQUIMICA
METODOS DE ANALISIS MICROBIOLOGICOS
• Pruebas moleculares (Detección de material genético = Ácidos nucleicos ADN O ARN): PCR (Polimerase chain reaction) LAMP (Loop mediated isothermal amplification)
Métodos “Screening”
• Pueden dar respuestas cualitativas
• Rápidos, robustos y baratos.
Métodos de laboratorio
•Siguen referente normativo.
Métodos rápidos
•Métodos basados en cambio en la turbidez.
•Métodos de comparación con carta de control.
Requisitos métodos rápidos
•Pre acondicionamiento de la muestra. •Extracción con solventes. •Empleo de soluciones acidas. •Conocimiento técnico en el desarrollo del método.
PRETRATAMIENTO DE MUESTRAS
• Fuente: Imagen tomada desde: https://www.ruralcat.net/c/document_library/get_file?uuid=68cec91e-3009-4101- b2a2-095ddf6aea0d&groupId=10136
Métodos de laboratorio
• Cromatograficas (cromatografía de gases y cromatografía líquida, ambas acopladas a espectroscopía de masas )
• Fuente: Imagen tomada desde: https://www.ruralcat.net/c/document_library/get_file?uuid=68cec91e- 3009-4101-b2a2-095ddf6aea0d&groupId=10136
Biosensores
• “La Unión Internacional de Química Pura y Aplicada (IUPAC) define un biosensor como un dispositivo que, a través de las reacciones especficas de enzimas aisladas, sistemas inmunes, tejidos, organelos, o células enteras, sirve para detectar compuestos”
Biosensores
Cromatografía
• “Técnica de separación mediante la interacción del analito de interes, con una fase estacionaria”
CROMATOGRAFIA