UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORESZARAGOZA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA CELULAR Y DE LOS TEJIDOS 1

GRUPO: 2452

EQUIPO: 10

INTEGRANTES:

BARAJAS ROJAS SEBASTIANHERNANDEZ DIAZ ANGEL DE JESUSMORENO PEREZ MARCO ANTONIO

REPORTE: CUANTIFICACION DE PROTEINAS PLASMATICAS PRESENTES EN LA SANGRE HUMANA

OBJETIVOS

Separar albumina y globulina a partir de una muestra de sangre Obtener muestra de sangunea por venopuncion Determinar cuantitativamente por medio de una curva estndar la concentracin de protenas totales, albumina y globulinas presentes en el plasma por el mtodo de biuret

MTODO EJECUTADOI. Obtencin de una muestra sangunea por venopuncion con un sistema Vacutainer usando como anticoagulante (EDTA) a) Se tuvo listo el material: tubos, ligaduras, torundas, jeringas, aguja estril y dispositivo Vacutainer b) Se identific el tubo c) Se coloc adecuadamente el donador d) Se solicit al donador que cerrara el puo para que las venas resultaran mas palpables e) Se seleccion la vena adecuada para la puncin f) Se limpi la zona de la puncin con una torunda humedecida con alcohol. g) Se comenz en el punto de la puncin y se prosigui la limpieza hacia fuera siguiendo un movimiento espiral. h) Se aplic un torniquete a varios centmetros por encima de la zona de puncin. No se dej ms de un minuto. i) Se fij la vena tanto por encima como por debajo del lugar de puncin, con ayuda de los dedos pulgar y medio o ndice y pulgar.

j) Se realiz la venopuncion, se penetro a la piel la aguja formando un ngulo de 15 grados con el brazo y el bisel hacia arriba se sigui la direccin de la vena; se introdujo la aguja con suavidad pero a la vez con rapidez para que se redujeran las molestias. No se enterr la aguja. En cuanto la aguja penetro a la vena se dirigi el tubo todo lo posible hacia delante apoyndose del dispositivo de sujecin. Al mismo tiempo se mantuvo firmemente la aguja en su lugar. Una vez que lleno el tubo, se retir tomando por su extremo y tirando suavemente de l. Se mezcl la sangre con el anticoagulante por inversin suave. k) Cuando la sangre comenz a fluir se liber el torniquete. Una vez que se obtuvo la muestra se le indico al donador que relajara el puo y que no bombeara con la mano. l) Se coloc suavemente una torunda de algodn estril sobre el punto de puncin. Se extrajo la sangre con movimiento rpido y se ejerci presin sobre la zona. No se aplic masaje.

II. Realizacin de curva estndar

Se centrifugo el tubo de la muestra de sangre a 3000 rpm durante 5 minutos y se separ con cuidado el plasma Se coloc el plasma en un tubo adicional con ayuda de una pipeta Pasteur. Se tomaron 0.1 mL de plasma, se depositaron en un tubo de ensaye y se adiciono 4.9 mL de sulfato de sodio al 23 %P/V. se tap por inversin tres veces. Se tom 1mL de la suspensin y se coloc en un tubo. Se etiqueto como protenas totales. Se le agreg 1.5 mL de ter de petrleo al resto de la suspensin, se tap y se mezcl por inversin, no se agito, se centrifugo a 2000rpm durante aproximadamente 10 minutos. Se form un coagulo, por error se adiciono ter de petrleo, as que se volvi a centrifugar para poder retirar el ter incorrecto, se separ el ter de petrleo de la disolucin y ahora si, se aadi 1.5 mL de ter etlico y despus se centrifugo Despus de que se centrifugo, se form 3 capas y se tom 1mL dela capa inferior y se coloc en un tubo, que se etiqueto como albuminas Se prepararon 7 tubos y se enumeraron de 1 al 6 y a otro se nombr como blanco y se agreg cada tubo como lo indica la tabla. Se tom lectura en el espectrofotmetro a 540 nm y se registr los valores.

OBSERVACIONESSe trabaj con una reaccin cromognica, bajo el principio de Lambert-Beer, y se pudo observar el gradiente de concentracin de forma ya cualitativa en los tubos de ensayo en orden creciente con la cantidad de protenas contenidas, siendo ms intensos los ms concentrados. La muestra de la primera sangra realizada sufri una indeseable hemolisis que no permiti trabajar apropiadamente con el plasma, se sabe que la muestra no recibi en ningn momento agitacin indebida al homogeneizarse con el EDTA o alguna vibracin brusca al centrifugarse. Se sospecha que una nfima cantidad de etanol pudo lisar los eritrocitos. A pesar de ello, se volvi a realizar la flebotoma con xito buscando continuar trabajando correctamente y en efecto, se lograron resultados satisfactorios. ANALISIS DE RESULTADOS La concentracin determinada experimentalmente en sta sesin de protenas totales en plasma sanguneo se encuentra dentro de los valores de referencia esperados para un adulto, que van de los 6.6 a 8.3 g/dL. El porcentaje de albmina e inmunoglobulinas tambin se encuentran en una proporcin aceptable, lo que indica que el paciente no sufre ninguna de las complicaciones fisiolgicas que alteraran sus concentraciones, y en general, el paciente se encuentra en condiciones saludables.

Referencias bibliogrficas:Lehninger A. Principios de bioqumica. Barcelona: Omega; 2005. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones clnicas. 3a ed. Madrid: Revert; 2000. Boyer R. Conceptos de bioqumica. Mxico: International Thomson Editores; 2000.