“Año de la consolidación del Mar de Grau”

PRACTICA Nº 4

RECONOCIMIENTO Y DETERMINACION DE CARBOHIDRATOS

CURSO: BIOQUIMICA I

DOCENTE: Q.F MARLON PADILLA HUARI

ALUMNOS: -SOLORZANO ROJAS KATHERIN

-DIAZ CARLOS

-CASTILLO CAÑARI LORENA

CICLO: VI

AULA: 200

SECCIÓN: 1X

TURNO: MAÑANA

AÑO

2016

RECONOCIMIENTO Y DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS

MARCO TEORICO Carbohidrato es el nombre que deriva del hecho que el hidrogeno y el oxígeno están en la misma proporción que en el agua (hidrato); es decir hay 2 hidrógenos por cada oxígeno. El termino carbohidratos, azucares, glúcidos o hidratos de carbono se identifica y designa un grupo de sustancias naturales que cumplen funciones vitales como componentes de los organismos vivos.

Dentro de la clasificación de carbohidratos encontramos:

CLASIFICACION DE CARBOHIDRATOSSimples

Monosacáridos: son las unidades más sencillas de los carbohidratosEjemplo: glucosa y fructosa

Disacáridos: formados por la unión de dos monosacáridos iguales o distintos: lactosa, maltosa, sacarosa, etc. Los disacáridos no se utilizan como tales en el organismo, sino que éste los convierte a glucosa. En este proceso participa una enzima específica para cada disacárido, lo rompen y se producen los monosacáridos que los forman.

Oligosacáridos: polímeros de hasta 20 unidades de monosacáridos.Complejos

Polisacáridos: Están constituidos por un gran número de monosacáridos unidos mediante enlaces glucosídicos,constituyendo largas cadenas. Los polisacáridos pueden ser homopolímeros, cuando la unidad repetitiva es un solo tipo de monosacárido oheteropolímeros, cuando las unidades repetitivas están constituidas al menos por dos monómeros diferentes, (un ejemplo es el ácido hialurónico, formado por los monómeros N- acetil glucosamina y el ácido glucurónico). El ácido hialurónico se encuentra en el tejido conectivo donde actúa como pegamento para mantener unidas las células, es de importancia para el ensamble en el tejido conjuntivo y óseo.Almidón: Este polisacárido está formado por unidades de glucosa, por tanto es un polímero de ésta. Se encuentra en los cereales como maíz, arroz y trigo, también se encuentra en las papas.Celulosa.-La celulosa, al igual que el almidón es un polímero de glucosa. El tipo de enlace que une las moléculas de glucosa en la celulosa, es diferente del enlace que une las del almidón, por esta razón la celulosa no se puede utilizarse por el organismo humano como alimento, ya que carece de las enzimas necesarias para romper ese tipo de enlace, pero tiene un papel importante como fibra en el intestino grueso.Glucógeno: es la reserva de carbohidratos de los animales, y la mayor y primera fuente de disponible de glucosa. Se almacena en hígado y músculo (unos 340 g).

Reacción de Fehling: Esta reacción identifica a carbohidratos reductores en general. Cuando se calienta un carbohidrato reductor en una solución alcalina de cobre, se inestabiliza el doble enlace, por lo que cambia constantemente de posición, dando origen a los llamados Enodioles, los enodioles en algún momento se rompen por el doble enlace, dando fragmentos de gran potencia reductora.Los fragmentos reductores en presencia de iones cúpricos ,se convierten en fragmentos ácidos, a la vez que los iones cúpricos pasan a cuprosos, entonces se combinan con los hidroxilos de la solución para formar hidróxido cuproso de color amarillo, este con el calor se convierte a Oxido cuproso que precipita dando un color rojo ladrillo característico. Esto es lo que identifica a un carbohidrato como reductor.

Reacción de Barfoed: Esta reacción identifica carbohidratos reductores y puede distinguir entre monosacáridos y disacáridos. La reacción utiliza un reactivo oxidante más débil, por lo que las condiciones de la reacción son más

bien acidas que alcalinas.es una reacción un poco más lenta que la de Fehling. El reactivo es acetato cúprico en ácido acético diluido.El carbohidrato reductor, al contacto con el reactivo da el característico precipitado de color rojo ladrillo. Los monosacáridos reductores dan la reacción positiva en poco tiempo (de 2 a 5 minutos), mientras que los disacáridos reductores dan positiva pero mas lentamente (de 5 a 10 minutos).En una mezcla de monosacáridos y disacáridos reductores, bastara filtrar el primer precipitado que aparezca, que corresponderá al monosacáridos y esperar la formación de un nuevo precipitado, que si existe corresponderá al disacárido.

Reacción de Seliwanoff: Esta reacción identifica carbohidratos cetohexosas. Al reaccionar una cetohexosa (fructosa es la más común) con ácido clorhídrico, el carbohidrato pierde moléculas de agua, dando como resultado el 5-hidroximetilfurfural. Esta molécula reacciona con el resorcinol dando un complejo rojo intenso, que será signo de la presencia de la cetohexosa. No es precipitado sino complejo.La reacción es muy rápida en cuanto a la formación del complejo. Lo que varía en cuanto a tiempo es la formación del 5-hidroximetilfurfural. Las cetohexosas lo dan rápidamente, mientras que las aldohexosas lo dan lentamente y débilmente, por lo que esta reacción se considera más bien característica para identificación de cetohexosas y en concreto de fructosa.

Reacción de Bial: Identifica Carbohidratos aldopentosas .Al reaccionar una aldopentosa con acido clorhídrico pierde moléculas de agua y produce la sustancia conocida con el nombre de furfural.El furfural puede reaccionar en medio acido con el orcinol, si en estas condiciones se agrega una pequeña cantidad de cloruro férrico, se formara un complejo verde. Las cetopentosas en estas condiciones dan un complejo de color rojo. Las cetohexosas y las metilpentosas dan un complejo naranja, que al reposar producen un precipitado de color verde oscuro. Las triosas y los ácidos 5-cetoaldonicos dan positiva la reacción, así como los ácidos uronicos , por lo que hay que tener cuidado de que en la mezcla de reacción no existan estos compuestos si es que se requiere demostrar la presencia de las aldopentosas.

OBJETIVOS Demostrar las propiedades reductoras de algunos carbohidratos. Reconocimiento cualitativamente un carbohidrato a partir de reacciones

químicas especificas

Identificar Carbohidratos Reductores en general a partir del Reactivo de Fehling.

Diferenciar entre Monosacáridos y Disacárido a partir del Reactivo de Barfoed.

Identificar las Cetohexosas a partir del reactivo de Seliwanoff. Reconocer las aldopentosas a partir del Reactivo de Bial.

MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales: Tubos de ensayo Una pipeta graduada de 1 ml Una pipeta graduada de 5 ml Un vaso de precipitados de 500 ml Una varilla de vidrio Una placa de calentamiento Una gradilla para tubos de ensayo Una pinza metálica para tubo de ensayo Una espátula Baño maria

Reactivos: Muestras de soluciones de Carbohidratos 0.1M: Solución de glucosa Solución de sacarosa Solución fructosa Solución de maltosa Solución lactosa. Solución xilosa o arabinosa Reactivo de Felhing A Reactivo de Felhing B Reactivo de

Seliwanoff Reactivo de Bial

PROCEDIMIENTO

ENSAYO DE FEHLING: Determinación del Poder Reductor

Colocamos en 6 tubos de ensayo 2.5ml de la muestra problema

2.5ml de glucosa al tubo 1 2.5ml de fructosa al tubo 2 2.5ml de sacarosa al tubo 3 2.5ml de lactosa al tubo 4 2.5ml de maltosa al tubo 5 2.5ml de xilosa al tubo 6

Enjuagamos la pipeta dos veces después de haber pipeteado los carbohidratos.

Adicionamos 15 gotas de Fehling A y 15gotas de Fehling B a los cinco tubos.

Agitamos para homogenizar

RESULTADOS

Introducimos los tubos en un baño previamente calentado (hirviendo) y continúe el calentamiento.

Anotamos el tiempo en que cambia el color

Apareció a unos minutos el precipitado característico de color rojo ladrillo, en la mayoría de los tubos (de uno a tres minutos) sacamos del baño todos los tubos con ayuda de las pinzas y colóquelos en la gradilla. Los tubos con reacción positiva serán los que contienen carbohidratos reductores.

Resultados:

El reactivo Fehling A sulfato de cobreEl reactivo Fehling B solución alcalina

al agregar la solución alcalina ellos rompen el enlace carbonilo esto forma el ENOL esto tiene un poder reductor

El ENOL es un grupo funcional que son altamente reductores (reduce al sulfato de cobre)

El tubo 4 es la sacarosa demora en cambiar porque es un disacárido está compuesto por glucosa y fructuosa están fuerte su estructura que es difícil de romper.

Identifica que todos son carbohidratos

El reactivo de fehling A y fehling B esta este ensayo pone de manifiesto la presencia de azucares reductores (lactosa, sacarosa, manosa.glucosa.fructuosa, xilosa, etc.). Se trata de una reacción redox en la que el grupo aldehído (reductor) de los azúcares es oxidado a grupo ácido por el Cu2+ que se reduce a Cu+. Tanto los monosacáridos como los disacáridos reductores reaccionan con el Cu2+ dando un precipitado rojo de óxido cuproso. La reacción tiene lugar en medio básico por lo que es necesario introducir en la reacción tartrato sódico-potásico para evitar la precipitación del hidróxido cúprico.

REACCION DE BARFOED:

Colocamos en 6 tubos de ensayo 1ml de la muestra problema

1ml de glucosa al tubo 1 1ml de fructosa al tubo 2 1ml de sacarosa al tubo 3 1ml de lactosa al tubo 4 1ml de maltosa al tubo 5 1ml de xilosa al tubo 6

Agregamos 5ml del reactivo de Barfoed ya preparado a cada uno de los 6 tubos.

Coloque los cinco tubos al mismo tiempo en el agua hirviendo y anote el tiempo.

Baño maría:

Esperamos 10 minutos, observando cuidadosamente la aparición de precipitados .El precipitado va a ser un poco menos grueso que en la reacción anterior. Anotamos el tiempo aparición de precipitado.

Resultados:Este ensayo se emplea para diferenciar a los monosacáridos de los disacáridos.

Estos últimos reaccionan más lentamente con el acetato cúprico, debido probablemente al tamaño molecular, aunque también pueden estar implicados otros factores tales como una interacción más compleja con los dos anillos monosacáridos.

El BARFOED identifica más rápido en menor tiempo a los monosacáridos porque están solos (precipitado rojo ladrillo)

El BARFOED identifica más lento en mayor tiempo a los disacáridos porque están unidos.

REACCION DE SELIWANOFF:

a. Colocamos en 6 tubos de ensayo 1ml de la muestra problema

1ml de glucosa al tubo 1 1m de fructosa al tubo 2 1m de sacarosa al tubo 3 1m de lactosa al tubo 4 1m de maltosa al tubo 5 1m de xilosa al tubo 6

b. Agregamos 5ml de Seliwanoff ya preparado a cada uno de los tubos.

c. Colocamos los tres tubos al mismo tiempo en el baño de agua hirviendo.

Observamos la aparición del color y el tiempo en el baño de agua hirviendo.Aquellos tubos que sean positivos serán los que contienen Cetohexosas.

Resultados: La reacción identifica Cetohexosas. Sabemos que de las muestras que tenemos para esta práctica solamente una contiene Cetohexosa por lo que basta probar esa muestra y otras dos como controles negativos.

Esta prueba es específica para las cetosas. Las cetosas se deshidratan más rápidamente que las aldosas, dando furfurales. Estos se condensan con el resorcinol produciendo un complejo coloreado. Si el tiempo de ebullición se prolonga, puede dar también positivo para otros azúcares.

Identifica a los monosacáridos que tiene en su estructura solamente el grupo funcional cetona (fructuosa)

Reacción del furfural e hidroximetil-furfural con resorcinol dando lugar a derivados de color rosa-rojo. Es una prueba específica de hexosas. Las cetosas en medio ácido se deshidratan más rápidamente que las aldosas, por lo que ambos grupos pueden diferenciarse en función del tiempo que tarda en aparecer el producto coloreado.

REACCION DE BIAL:

Colocamos tres tubos de ensayo y enumerado

Se pipeteo 10 gotas de xilosa en el tubo 1,1º gotas de glucosa en el tubo 2,10 gotas de fructuosa en el tubo 3.

Agregamos 5 ml del reactivo de BIAL, ya preparado a cada uno de los tubos enumerados.

Colocamos los tres tubos al mismo tiempo a baño de agua hirviendo.

CONCLUSIONES:

De los tres tubos el que cambio la coloración fue la “XILOSA” con una coloración de amarillo verdoso, por tanto es la que contiene carbohidrato pentosa.

En un tiempo de 23 minutos.

CONCLUSIONES

Con el reactivo de fehling A y fehling B reconocemos carbohidratos reductores en este caso todos dieron positivos demorando más los disacáridos (maltosa y sacarosa)

Con el Barfoed podemos diferenciar monosacáridos y disacáridos, el monosacárido actúa más rápido que el disacárido, controlas el tiempo.

El reactivo de Selivanof reconoce solamente carbohidratos que contengan grupo funcional cetona en este caso la fructuosa dio positivo.

En el reactivo Bial reconoce aldopentosas es decir que contengan grupo aldosa de 5 carbonos, en este caso la xilosa sale positivo un color pardo tubio

BIBLIOGRAFIA

- https://deymerg.files.wordpress.com/2011/03/lab-aldehidos-y-cetonas- udea.pdf

- http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaii/carbohidratos.cfm

- http://danielamartineze.blogspot.pe/2012/09/identificacion-de- carbohidratos.html

- https://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_de_Barfoed