metodos de fraccionamiento

LES INVITO A …….

M. en C. GUILLERMO ESCAMILLA GUERRERO

INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRIA

MÈXICO D.F.

PRINCIPIOS

• FUNCION DE SOLUCION ADITIVA/ANTICOAGULANTE:

»ESTABILIZADOR METABOLICO

»PREVENIR COAGULACION

PRINCIPIOS

• C. E………………. 1 – 6 °C

• C. P……………….. 20 – 24 °C

• PMN………………. 20 – 24 °C

• PFC…………………...< -18 °C

• GAH.………………...< -18 °C

VIDA DE ALMACENAMIENTO

75% DE LOS ERITROCITOS

ORIGINALMENTE TRANSFUNDIDOS

ESTEN EN EL RECEPTOR 24 HORAS

DESPUÉS

CONTROL EN LA RECOLECCIÓN DE SANGRE

La sangre que va a ser donada debe ser colectada

por:» Personal entrenado

» Bajo la supervisión de un médico calificado

» Utilizando un sistema cerrado de bolsa

plásticas

» Métodos asépticos

» Una sola punción venosa limpia.

CONTENEDORES DE PLÁSTICO

RECIPIENTE SEGURO DURANTE LA COLECCIÓN, ALMACENAMIENTO, PROCESAMIENTO, TRANSPORTACIÓN Y ADMINISTRACIÓN DE SU CONTENIDO

NOM-139-SSA1-1995

QUE ESTABLECE LAS ESPECIFICACIONES SANITARIAS

DE LAS BOLSAS PARA RECOLECTAR SANGRE



NOM-140-SSA1-1995

QUE ESTABLECE LAS ESPECIFICACIONES

SANITARIAS DE LAS BOLSAS PARA FRACCIONAR SANGRE

BOLSA PARA FRACCIONAR SANGRE

ARTÍCULO DE USO MÉDICO, ESTÉRIL,

ELABORADO CON MATERIALES PLÁSTICOS,

METÁLICOS Y LÁTEX, ATÓXICO, LIBRE DE

PIRÓGENOS Y NO REACTIVO TISULAR


CONSISTE EN UNA SERIE

DE BOLSAS UNIDAS

ENTRE SÍ, UNA DE LAS

CUALES PUEDE

CONTENER UNA

SOLUCIÓN ADITIVA

MEDIANTE TUBOS DE

DIMENSIONES

APROPIADAS.

LA BOLSA PRINCIPAL

DEBE CONTENER UN

ANTICOAGULANTE Y

ESTAR UNIDA A UN

TUBO EQUIPADO CON

AGUJA.


TUBOS CORTOS

•PIEZAS DE PLÁSTICO FLEXIBLE, TRANSPARENTE O TRANSLÚCIDO.

•ENSAMBLADO A UN TUBO TRANSPORTADOR.

•LOS RESTANTES ESTAN OBTURADOS CON UN DIAFRAGMA DE PLÁSTICO PARA PUNCIÓN.

•NO RESELLABLE, PROVISTO DE PROTECTORES QUE MANTENGAN SU ESTERILIDAD

Descripción:

Protector

Tubo transportad

or

Aguja

Tubos cortos

Anti

coagula

nte


PLÁSTICO GRADO MÉDICO

POLÍMEROS O COPOLÍMEROS, NATURALES O

SINTÉTICOS, LOS CUALES SON PROCESADOS

MEDIANTE FORMULACIONES ESPECÍFICAS

QUE GARANTIZAN LA ATOXICIDAD DEL

PRODUCTO


LÁTEX GRADO MÉDICO

LÁTEX PROCESADO MEDIANTE

FORMULACIONES ESPECÍFICAS QUE

GARANTIZAN LA ATOXICIDAD DEL

PRODUCTO.


DISEÑO

• BOLSA PRIMARIA

• BOLSAS SECUNDARIAS

• TUBO TRANSPORTADOR

• AGUJA

• PROTECTOR DE LA AGUJA

• CONECTORES


•RECIPIENTES HERMÉTICOS

•ELABORADOS A BASE DE CLORURO DE

POLIVINILO O CUALQUIER OTRO PLÁSTICO

•GRADO MÉDICO

•SIN PIGMENTAR

•FLEXIBLE

•TRANSLÚCIDO

•INODORO O CON UN LIGERO OLOR

CARACTERÍSTICO

•DELIMITADO POR UN TERMOSELLADO DOBLE


PLASTIFICADOR

SUSTANCIA QUÍMICA QUE PERMITE

FLEXIBILIDAD EN EL PLÁSTICO,

LOGRANDOSE EL INTERCAMBIO

GASEOSO (ENTRADA DE O2 Y SALIDA DE

CO2)

PLASTIFICADOR

1) DHEP DI(2-ETILEXIL-PTALATO)***

2) TOTM TRI(2ETILEXIL-TIMELITATO),

(CLX), (PL-1240)

3) DnDP DI-n-DECILPTALATO, (X-3315)

4) BTHC BUTIRIL-n-TRIHEXIL CITRATO,

(PL-2209)

5) MEHP MONO(2-ETILEXIL PTALATO)

6) POLEOLEFIN PLASTICO (PL-732) **

POLEOLEFIN PLÁSTICO (PL-732)

•COPOLIMERO DE ETILEN-BUTILEN-

ESTIRENO

•COPOLIMERO DE POLIPROPILEN-ESTIERNO

•COPOLIMERO DE ACETATO DE ETILEN-

VINILO

CLORURO DE POLIVINILO

• El DEHP (ftalato) no se une químicamente al PVC.

• El DEHP (ftalato) puede lixiviar (migrar) desde el PVC al entrar en contacto con los líquidos, lípidos y/o calor.

• El DEHP (ftalato) es un tóxico probado para el aparato reproductivo y para desarrollo en animales de laboratorio.

Health Care Without Harm Fact Sheet “Exposición al DEHP durante el Cuidado Médico de Niños: Una causa para la preocupación”.15 de octubre 2001

CAMBIOS DURANTE EL ALMACENAMIENTO

1) CAMBIO DE COLORACIÓN

2) TURBIDEZ DEL ANTICOAGULANTE/ CONTAMINACIÓN POR BACTERIAS

3) CONTAMINACIÓN POR HONGOS

4) PÉRDIDA DE LA FLEXIBILIDAD

5) PERMEABILIDAD A GASES

SOLUCIONES ANTICOAGULANTES PRESERVADORAS

SOLUCIONES QUE EJERCEN UN DOBLE PAPEL:

• DE PREVENIR LA COAGULACIÓN

• Y DE PRESERVAR Y MANTENER LA FUNCIÓN CELULAR

( ESPECIFICAMENTE LA ERITROCITARIA )

SOLUCIONES ANTICOAGULANTES PRESERVADORAS

FUNCIÓN

UNIR EL CALCIO IONICO,

INHIBIENDO LA COAGULACIÓN

DE LA SANGRE CON LOS OTROS

FACTORES DEL PLASMA

ANTICOAGULANTES

•CITRATO SÓDICO: ACTÚA COMO QUELANTE DEL CALCIO IMPIDIENDO SU COAGULACIÓN

•DEXTROSA: SUBSTRATO ENERGÉTICO PARA LA GENERACIÓN CONTINUA DE ATP POR VÍA GLUCOLÍTICA

•FOSFATOS: MANTIENEN AL 2,3 DPG

•ÁCIDO CÍTRICO: EVITA LA ALCALINIZACIÓN DE LA SANGRE DURANTE SU CONSERVACIÓN A 4°C

HEPARINA

ES UN ANTICOAGULANTE, PERO NO UN CONSERVANTE. LA SANGRE RECOGIDA CON HEPARINA DEBE UTILIZARSE ANTES DE 48 HORAS Y DE PREFERENCIA DENTRO DE LAS PRIMERAS 24 HORAS.

SOLUCIONES ANTICOAGULANTES

Tipo Solución anticoagulant

e

Contenido

I

I´

II

III

ACD FORMULA A

ACD FORMULA B

CPD

CPDA 1

67.5 o 75.0 ml

112.5 o 125 mL

63 o 70 mL

63 o 70 mL

ACD (ácido-citrato-dextrosa)

•CITRATO TRISODICO DIHIDRATADO 22.0 g

•ÁCIDO CITRÍCO MONOHIDRATADO 8.0 g

•DEXTROSA MONOHIDRATADA 24.5 g

•AGUA INYECTABLE cbp 1000 ml

15 ml DE ANTICOAGULANTE ACTUAN SOBRE 100 ml DE SANGRE

TIEMPO DE CONSERVACIÓN 21 DÍAS

CITRATO PRODUCE UNA QUELACIÓN DEL CALCIO ACTUANDO COMO ANTICOAGULANTE.

DEXTROSA PROPORCIONA LA FUENTE DE ENERGÍA.

ÁCIDO CÍTRICO APORTA A LA SOLUCIÓN UN pH CERCANO A 5.

LA MEZCLA DE ACD-PLASMA TIENE UN pH DE 7.1 A TEMPERATURA AMBIENTE Y DE 7.4 A 4° C.

ACD

SOLUCIÓN ESTÁNDAR (1943)

CPD (citrato-fosfato-dextrosa)•CITRATO TRISÓDICO DIHIDRATADO 26.3 g

•ÁCIDO CÍTRICO MONOHIDRATADO 3.27 g


•FOSFATO MONOBÁSICO DE SODIO 2.22 g




CPD

FOSFATO CONTRIBUYE AL DEPÓSITO DE FOSFATO DE ADENOSINA, MEJOR VIABILIDAD DE LOS ERITROCITOS. pH LIGERAMENTE MAS ELEVADO QUE ACD (5.5 SOLO, 7.5 A 4° C, CON SANGRE Y MANTIENE EL NIVEL DE 2,3 DPG DURANTE CERCA DE UNA SEMANA CON MENOR DISMINUCIÓN DEL pH A 4° c.

CPD-A

(citrato-fosfato-dextrosa-adenina)•CITRATO TRISÓDICO DIHIDRATADO 26.3 g

•ÁCIDO CÍTRICO MONOHIDRATADO 3.27 g


•FOSFATO MONOBÁSICO DE SODIO 2.22 g




CPD-A 0.25 milimol / 1 DE ADENINA A LA SOLUCIÓN DE

CPD EN SU ACCIÓN DE CONSERVANTE.

LA ADENINA HACE FALTA PARA LA FORMACIÓN DE ATP, LA CPD-adenina MANTIENE EL NIVEL DE 2,3 DPG.

Presenta el hematócrito deseado, la incidencia de reacciones febriles o urticantes tras su transfusión es muy baja.

CPDA-2 contiene mayores cantidades de glucosa y adenina.

ADSOL

•CITRATO DE SODIO USP 900 mg

•MANITOL USP 750 mg

•DEXTROSA USP 2.2 mg

•ADENINA 27 mg

•AGUA INYECTABLE 100 ml


ADENINA

LA ADENINA ES TOMADA POR EL ERITROCITO E INCORPORADA A LA RESERVA, UTILIZADA PARA MANTENER LA CONCENTRACIÓN DE ATP EN EL MISMO

Solución aditiva

Solución que en conjunto con el anticoagulante protege la vida de los eritrocitos

VENTAJAS DE LAS SOLUCIONES ADITIVAS

•Recuperación máxima de plasma y CE con Hto. 60 %

•Almacenamiento por 42 días a T° 1 - 6 ° C

•Con CPDA-1: Plasma o PRP separado dentro de las primeras 6 u 8 hs.

•Para plaquetas almacenar y transportar la sangre a 20 - 24 ° C

•La solución aditiva deberá mezclarse con los eritrocitos dentro de las 72 hrs, posterior a la extracción.

SOLUCIONES REJUVENECEDORAS

1.- RESTABLECIMIENTO DE LA

VIABILIDAD

2.- RECUPERACIÓN DE LOS NIVELES

2,3 DPG

EXTRACCIÓN

• Punción limpia

• Rápida

• Mezcla continua y suave con el anticoagulante

• Intervalo de sangrado 4 – 10 minutos

• Hasta 15 minutos

TECNICAS GENERALES DE FRACCIONAMIENTO

– Precipitación espontánea

• Reposo 24-48 horas a 4°C

– Interacción diferencial campos fisicos:

• Centrifugación

• electroforesis

– Interacción diferencial con medios sólidos:

• intercambio iónico

• Ultrafiltración

• cromatografía


– Solubilidad diferencial:

• Crioprecipitación (temperaturas menores a –30°C)

• “salting out” con sales neutras

• sistemas de bipartición en mezclas de solvente orgánico /agua


Los métodos de mayor empleo en los bancos de sangre son:

• La centrifugación– Alta revolución y tiempo corto

– Baja revolución y tiempo largo

• Crioprecipitación– Incubación 72 horas a –70°C

– Precipitación con mezclas criogénicas:

» Alcohol/ hielo seco

» Acetona/hielo seco

» Alcohol/acetona/hielo seco

Sangre Total

SISTEMAS DE CENTRIFUGACION

Eritrocitos

Leucocitos

Plaquetas

Centrifugación Suave

}

} Concentrado de GlóbulosRojos

Plasma Rico en Plaquetas

“DOS CAPAS”

Centrifugación Fuerte

Concentrado Globular

} Buffy Coat

} Plasma

“TRES CAPAS”

}

CENTRIFUGAS DE FRACCIONAMIENTO

Fuerza centrífuga relativa (FCR) ó

g=(0.00001118) (r) (r.p.m) 2

LOS PUNTOS CLAVE EN EL CONTROL DE CALIDAD DEL FRACCIONAMIENTO

SON

• Control de las centrífugas refrigeradas: temperatura y r.p.m.

• Tiempo de fraccionamiento y revoluciones para la obtención de

PRP(plasma rico en plaquetas), C.P(concentrado plaquetario) y

Crioprecipitados.

• Número de plaquetas, pH y función plaquetaria en C.P.

• Volúmenes obtenidos basados en lo que establece la NOM

• Actividad del Factor Vlll y factor l en crioprecipitados y/o en plasma

fresco congelado total. En tanto que del factor lX en plasma

desprovisto de factor Vlll.

FACTORES QUE AFECTAN LA CALIDAD DEL PRODUCTO

• Relación de sangre/anticoagulante.

• Recolección de sangre.

• Período entre la recolección y el

fraccionamiento.

• Velocidad de congelación del plasma.

• Condiciones de almacenamiento.

• Condiciones de transporte.

CONCENTRADOS DE ERITROCITOS

UNIDADVOLUMEN

EN mL

TEMP DE CONSERVACI

ON EN 0C

VIGENCIA CARACTERISTICAS

ESPECIALES

CONC. DE ERITROCITOS

180-350 ML 1-6SEGÚN

ANTIOGULANTENINGUNA


POBRE EN LEUCOS

180 A 350 1 A 6SEGÚN EL

ANTICOAGU-LANTE

CONTENIDO MAXIMO DE LEUCOS /

UNIDAD 1X109


LAVADO180 A 350 1 A 6

4 A 24 HORAS A PARTIR DE SU PREPARACION

PLASMA AUSENTE POBRE EN

LEUCOCITOS Y PLAQUETAS

CONCENTRADOS DE LEUCOS Y PLAQUETAS

TIPO DE UNIDAD FUENTE DE OBTENCION VOLUMENTEMP. DE

CONSERVACION EN 0C

MINIMOS EN EL 75% O + DE LAS UNIDADES

VIGENCIA MAXIMA APARTIR DE LA RECOLEC-

CION

CONCENTRA-DO DE LEUCOS ( NEUTROFI-LOS )

POR AFERESIS VARIABLE 20 a 24 horas 1 X 1010 24 horas

CONCENTRA-DO DE PLAQUETAS

POR FRACCIONAMIENTO DE SANGRE TOTAL

45 A 60 mL 20 a 24 horas 5.5 x 1010 24 a 72 horas

POR AFERESIS 200 a 250 mL 20 a 24 horas 3 x 1011 24 horas a 5 dias

PLASMAS Y CRIOPRECIPITADOS

TIPO DE UNIDAD VOLUMEN EN mLMINIMOS EN EL 75% o + DE LAS UNIDAD

TEMP. DE CONSERVA-CION

EN 0C

VIGENCIA MAXIMA A PARTIR DE LA RECOLECCION

PLASMA

FRESCO

150 a 180 por fraccionamiento

450 a 750 por aferesis

Proteina 60 g/ L

Factor VIII 1 U/mL

Fibrinogeno 160 mg/dL

-18 o menor12 meses

6 hrs. Una vez descongelado

PLASMA ENVEJECIDO

150 a 180 por fraccionamiento

450 a 750 por aferesis Proteina 60 g/L

18 o menor 5 años

1 a 6

26 dias con ACD o CPD

40 dias con CPDA

CRIOPRECIPI-TADO 10 a 25 mLFactor VIII : 80 UI -18 o menor

12 meses

6 horas una vez descongelado

“ Lo que no se define no se puede medir,

Lo que no se mide no se puede mejorar,

Y lo que no se mejora se degrada siempre”

Lord Kelvin

DENSIDAD DE PRODUCTOS BIOLOGICOS

Densidad de sangre o de sus fracciones sanguíneas

• Sangre de varón 1.057 g/ml

• Sangre de mujer 1.053 g/ml

• Concentrado eritrocitario 1.093 g/ml

• Plasma 1.028 g/ml

SANGRE FRESCA (TOTAL)

• NOM p.30• Volumen 450 ml ±10 % ( + anticoagulante)• Conservar entre +1ºC y +6ºC• Vigencia máxima (como fresca) después de

la recolección: 6 hrs. Pasado ese lapso se considerará SANGRE TOTAL.(ST)

SANGRE TOTAL, ALTERNATIVAS EN CUANTO A SU VOLUMEN

Volumen (ml) Peso (g)

405 - 495 615 -715

• 300 - 404 ml Usar solo el C E o dar de baja toda la unidad.

• < 300 ml Dar de Baja• Si < 6 hrs se puede fraccionar en 4.

CONCENTRADOS ERITROCITARIOS (C.E.)

• NOM p 31 Requisitos:

• Volumen : 180ml a 350 ml

• Temperatura de conservación : +1ºC a +6ºC

• Vigencia máxima : según el anticoagulante

• Caracteres especiales : ninguno

• Identificación de las unidades (etiqueta) y su inspección física, es igual al de la sangre fresca (total).

• Otras determinaciones que permiten evaluar la calidad del concentrado eritrocitario:

• Cuantificación de Hb total del C.E. g/dl

• Hematocrito (%)

CE LAVADO (por inversión)• NOM p31• Vol. Neto: 180-350 ml• Temp. de conservación: +1ºC-+6ºC• Hematocrito : 68-80 %• Leucocitos eliminados: > 75 %. • Eritrocitos recuperados: > 63% • Vigencia máxima: 4 hrs. a partir de su

preparación• Caracteres especiales: plasma ausente, pobre

en leucocitos y plaquetas

CONCENTRADO PLAQUETARIO

• NOM p 32: obtenidas por fraccionamiento de sangre fresca a temperatura entre +18ºC y 24ºC.

• Volumen: 45 a 60 ml.• Plaquetas/bolsa: 5.5 x 1010 (en el 75% o más de las

unidades al límite de su vigencia).• pH: 6.0 (en el 75% o más de las unidades al límite de

su vigencia).• Temperatura de conservación: +20ºC a +24ºC y en

agitación suave*.• Vigencia máxima a partir de la recolección: 24 a 72

Hrs.

• Identificación de las unidades: igual que para sangre total pero agregando a la fecha de caducidad la hora y en las condiciones de almacenamiento, que éste debe ser de +21ºC a +24ºC y con agitación suave.

• Otros estudios útiles: – Inspección física– Contaminación con eritrocitos y leucocitos– Funcionalidad plaquetaria (retracción de coágulo

agregometría)

CONCENTRADO PLAQUETARIOCONCENTRADO PLAQUETARIO

ALGO PARA LAS PLQS???

18% presentan swirling (a los 5 días)(bertollini: transfusion 1996;36:128-132)

Technical Approaches for Bacterial Detection

•Metabolic substrates/products–Glucose –Lactic acid/Lactate–Carbon Dioxide–pH–Bicarbonate–Plasma Oxygen

•Cell Growth•Culture•% Oxygen in Air

Adapted in part from: Mitchell, Brecher: Transfusion Medicine Reviews 1999; 13:132-44

•Culture•% Oxygen in Air

•Cell Markers–Observations•Clumping/color•Swirling–Gram stain–Wright Stain–Acridine Orange Stain–Antibiotic probes–Antibody probes–Epifluorescence microscopy

•Molecular Biology–PCR–rRNA

CONTAMINACIÓN

PLASMA FRESCO (CONGELADO)

• NOM: p 32:

• Obtenido por centrifugación dentro de las seis primeras horas de su recolección.

• CONGELADO, si se congela dentro de las seis primeras horas de su recolección.

PLASMA FRESCO (CONGELADO)

• NOM: p 32:

• Volumen neto: 150-180 ml

• Proteínas: 60g/dl

• Factor VIII: 1 UI / ml

• Fibrinógeno: 160 mg/dl

• Temp. de conservación: -18ºC o menor

• Vigencia máxima: 12 meses (6 hrs. una vez

descongelado)

• Identificación y aspecto físico igual que ST.

PLASMA ENVEJECIDO (DESPROVISTO DE CRIOPRECIPITADO)

• NOM: p 32:• Volumen: 150-180 ml• Proteínas: 60 g/l

• Temp. de conservación: -18ºC o menor y su vigencia máxima a partir de su recolección será de 5 años. Otra opción:

• Temp. de conservación: +1ºC - +6ºC y su vigencia máxima será: con ACD o CPD: 26 días; con CPDA 40 días

CRIOPRECIPITADO

• NOM: p 33:

• Volumen: 10 a 25 ml

• Factor VIII: 80 UI

• Temp. conservación: -

18ºC o menor

• Vigencia máxima: 12

meses (6 hrs una vez

descongelado)

CRIOPRECIPITADO

• De acuerdo con la NOM se pueden mezclar

tres unidades (reconstituyendo con SSI).

• Requisitos:

• Peso bruto: 46 - 67 g*

• Volumen neto: 31 - 52 ml

• Factor VIII: UI / ml: 4.5 - 8.8 UI

• UI / crio: 191 - 336

• Fibrinógeno (opcional):100 - 350 mg/unidad

• Vigencia máxima: (NOM inciso 9.11) 12

meses (6 hrs una vez descongelado)

M M en C GUILLERMO ESCAMILLA en C GUILLERMO ESCAMILLA GUERREROGUERRERO

BANCO DE SANGREBANCO DE SANGRE

I N P I N P

Con la aplicación de esta fórmula se puede estandarizar el empleo de cualquier marca de centrífuga refrigerada en fraccionamiento.

El control de calidad aplicable a centrífugas refrigeradas es mediante la obtención de porcentajes de recuperación en concentrados plaquetarios, índice de contaminación de glóbulos rojo y blancos. (ver sección de concentrados plaquetarios)

04/12/23

Control de calidad diario de antisueros y células de fenotipo conocido.

Pruebas pre-transfusionales para: Plasma Concentrado plaquetario. Crioprecipitado. Paquete globular. Sangre total. En un orden Social Eficaz,- y laEn un orden Social Eficaz,- y la

empresa debe serlo,- dicho orden empresa debe serlo,- dicho orden

ha de conferir responsabilidades y ha de conferir responsabilidades y

también atribuciones también atribuciones

a todos sus miembrosa todos sus miembros

Drucker, 39Drucker, 39

Volumen sanguíneo obtenido: Obtener el peso promedio de la bolsa con anticoagulante y sin

aguja más las bolsas satélites. Pesar la BOLSA RECOLECTORA con sangre total y restarles el

peso del inciso (1). Relacionar el peso obtenido con la densidad para traducir a

mililitros el volumen sangrado 1.057 gr/ml en varones 1.053 gr/ml en mujeres

Observar si la bolsa presenta: Defectos de fabricación La presencia de aire que no debe ser > 3 cm de diámetro Observar que esté bien sellado el tubo colector Revisar que no exista hemólisis Presencia de coágulos Color rojo característico

Control de las centrífugas refrigeradas: temperatura y revoluciones por minuto.

Tiempo de fraccionamiento y revoluciones para la obtención de Plasma Rico en Plaquetas, Concentrado Plaquetario y Crioprecipitados.

Volúmenes obtenidos en Paquete Globular, Concentrado Plaquetario, Plasma y Crioprecipitado:

Número de plaquetas, pH y función plaquetaria en Concentrados plaquetarios.

Actividad del Factor VIII y Factor I en crioprecipitados y/o en Plasma fresco congelado total, en tanto que del Factor IX en plasma desprovisto de Factor VIII.

Práticas actuales para la manufactura de buenos productos (current Good Manufacturing Practices, GMP) de FDA

ISO 9000 en la Comunidad Europea Asociación Americana de Bancos de Sangre

(AABB) Comité Nacional de Normas de Laboratorio

Clinico (NCCLS) Demming, Juran, ODI, Premio Nacional de

Calidad Malcolm Baldrige Gemba Kaizen

La acción incorrectaejecutadacorrectamente

La acción correctaejecutadacorrectamente

La acción incorrectaejecutadaincorrectamente

La acción correctaejecutadaincorrectamente

Ejecución

Exa

ctit

ud

El problema identificado y corregido en el sitio de trabajo: $1

Identificado y corregido después de que deja el sitio de trabajo, antes de que

alcanza al cliente: $10

Identificado y corregido después de que alcanza al cliente

$100

Sangre es una droga sujeta al cGMP (CFR21, parte 211)

El personal debe ser entrenado y competente (documentado por examen de capacitación) antes de empezar el trabajo

Todos los procesos deben ser validados Mantenimiento preventivo y calibración

de los equipos Calificación del los proveedores

Las etiquetas de sangre deben ser controladas

Todos los procedimientos deben estar reglamentados (Standard Operating Procedures)

Todo debe documentarse por escrito Informes de errores y accidentes deben

ser investigados y rectificados Auditoría periódica de los sistemas Perfeccionamiento continuo

El Departamento de Calidad esta completamente separado del Departamento de Producción

El encargado de Calidad tiene la autoridad de interrumpir producción cuando procesos o productos no están de acuerdo con especificaciones

El producto no puede ser distribuido antes de revisión y aprobación por el departamento de Calidad

Objetivo › Ejemplo: para mejorar el proceso de

colección de muestras de pacientes Estudio y gráfico de flujo del proceso Definición de

› Puntos de control críticos (PCC) › Elementos importantes (EI) que

preceden los PCC › Verificación del sistema (medidas

cuantitativas)

PCC La solicitud La identificación del enfermo Colección y transporte de la

muestra al banco de sangre

Elementos importantes › Nombre y apellido, numero de

identificación, cuarto, cama, etc.. › El tipo y cantidad de muestra › Dia y hora de solicitud y de colección › Firma de la enfermera o médico › Prioridad

Verificación › Análisis de no. y fuente de errores

Elementos importantes › Pregunte el nombre del paciente antes de la

colección › Verifique el apellido y no. en la pulsera del

paciente › Verifique el apellido y no. en la solicitud, los

tubos de ensayo y la pulsera› Use alternativas para identificación si es

necesario (paciente inconsciente) Verificación

› No. de pacientes con identificación inadecuada, pabellón del hospital

› Observación directa de flebotomía

El conjunto de procedimientos que aseguran que un proceso, un procedimiento, un sistema de computación o un instrumento desempeñan conforme especificaciones pre-determinadas

La verificación es realizada por los fabricantes y por los usuarios. Se examina el proceso entero para documentar que los resultados deseados son los resultados obtenidos

Siempre que hay un cambio, los sistemas deben ser revalidados (agujas, computadoras, etiquetas nuevas etc..)

Validación debe incluir situaciones críticas como sobrecarga, apagón de electricidad, ascensores mal funcionando, onda de calor, etc.,

Errores son oportunidades para mejora Deben analizarse errores en detalle

› ¿Cuál fue la causa? ¿Podrían evitarse? › ¿El proceso actual facilita la repetición? › ¿Como evitar la repetición? › ¿Debemos cambiar procedimientos?

¿Entrenamiento? ¿Equipo?

Debemos analizar riesgos potenciales y planear la investigación por adelantado

Por ejemplo, cuando nosotros participamos en los programas de proficiencia› Recibimos muestras para pruebas de

proficiencia regularmente › Nosotros tenemos una norma para recibir

las muestras› Pero...

… en lugar de 100% correctos nosotros somos sólo 40% correctos.

¡Una vergüenza! Sin embargo, la vergüenza no es recibir una mala nota...

Vergüenza es no haber analizado continuamente los datos del laboratorio, los procesos y tendencias para predecir el potencial para un error

¡Vergüenza es no tener un plan escrito para estudiar fracasos en programas de proficiencia antes de que ellos pasen!

El fraccionamiento o separación de los componentes de la sangre se basa en el principio de que los diferentes componentes tienen diferentes pesos específicos:

Plasma : 1.026 gr/dl Plaquetas: 1.058 gr/dl Monocitos: 1.062 gr/dl Linfocitos: 1.070 gr/dl Neutrofilos: 1.082 gr/dl Glóbulos rojos: 1.100 g/ml

NOM p.30 Volumen 450 ml ±10 % ( +

anticoagulante) Conservar entre +1ºC y +6ºC Vigencia máxima (como fresca)

después de la recolección: 6 hrs. Pasado ese lapso se considerará SANGRE TOTAL.(ST)

ANTICOAGULANTE VIGENCIA DENSIDAD

Heparina 48 hrs - - - - -

ACD 21 días 1.02146 gr/dl

CPD 21 días 1.02347 gr/dl

CDPA -1 35 días 1.02610 gr/dl

CPDA con manitol 45 días - - - - - - -

Pesos aproximados de las bolsas transfer (Baxter). Incluyen 5 g del tubo colector, sin aguja y sin anticoagulante.

Bolsa cuádruple 116 g Bolsa triple 91 g Bolsa doble 66 g Bolsa sencilla (primaria) 40 g Bolsa satélite 24 g

Densidad de sangre o de sus fracciones sanguíneas

Sangre de varón 1.057 g/ml

Sangre de mujer 1.053 g/ml

Concentrado eritrocitario 1.093 g/ml Plasma

1.028 g/ml

Bolsa cuádruple (Baxter) = 116 g Con 67.5 ml de ACD. D = P / V P = D X V Peso de 67.5 ml de ACD =(67.5)

(1.02146) = 68.9 g La bolsa de recolección más el

anticoagulante pesa: 116 g + 69 g = 185 g

Si extraemos 405 a 495 ml de sangre: En varones: densidad de 1.057: 428 a 523 gr En mujeres: densidad de 1.053: 426.5 a 521.3

gr El peso bruto: Peso de la sangre+ peso del

anticoagulante + peso de la bolsa vacía. Rangos permitidos: Hombre: 613 a 708 gr Mujer: 611.5 a 700.3 gr

Valores de referencia:450 ml +/- 10 % (405 ml a 495 ml) VNE = PB - ( pb+ pa) / D. de la sangre.Donde: PB: peso bruto

pb: peso de la bolsapa: peso del anticoagulante

Volumen sanguíneo total (VST)= Factor (peso disponente)

Donde: hombre: 70 ml/kg mujer: 65 ml/kg

Peso bruto = 680 g Varón de 75 kg VNE = 680 g - (116 + 69) / 1.057 = 468 ml VST= 70 ml/kg (75 kg) = 5250 Volumen máximo de extracción al disponente:

450ml 10%

Volumen (ml) Peso (g) 405 - 495 615 -715 300 - 404 ml Usar solo el C E o dar de baja

toda la unidad.

< 300 ml Dar de Baja Si < 6 hrs se puede fraccionar en 4.

NOM p 31 Requisitos: Volumen : 180ml a 350 ml Temperatura de conservación : +1ºC a +6ºC Vigencia máxima : según el anticoagulante Caracteres especiales : ninguno Identificación de las unidades (etiqueta) y su

inspección física, es igual al de la sangre fresca (total).

Otras determinaciones que permiten evaluar la calidad del concentrado eritrocitario:

Cuantificación de Hb total del C.E. g/dl Hematocrito (%)

Valores de referencia: 180 ml a 350 ml

VN = (PB - pb p) / Densidad del C.E.

Donde: PB: Peso bruto

pb p: peso de bolsa primaria

Densidad CE: 1.093 gr/dl

Cálculo del # eritrocitos / bolsa. Cálculo de plasma en ml / bolsa. Hemoglobina libre en ml de

plasma (mg / ml)

Hemoglobina libre en bolsa ( mg / bolsa)

Ejemplo: Peso bruto del C.E. = 348 g C.E. Volumen neto = (PB -pb p)/ 1.093 = 348 g - 40 g / 1.093 = 281.8 ml

Hb (gr/dl) Hto (%) Leucocitos / Leucocitos totales= (Leucocitos/)

(1000)(VNCE) Observación de hemolisis en

microhematocrito Control Bacteriológico Coágulos Aire en la bolsa.

Valores de referencia : 35 - 94 mg/dl 100 - 230

mg/bolsa TECNICA Centrifugar el segundo tubo (que ha

permanecido intacto),3 min. a 3500 rpm Medir con una regla el paquete globular y

agregar un volumen igual de sol.salina.

CALCULOS: Hb libre mg/ml = DOprob x conc

Std / DOStd

Hb libre / bolsa =[ (GRT)x[Hb]pmg%]/100

PESO BRUTO (gr) 354 - 457 PESO NETO (gr) 321 - 426 VOL. NETO (ml) 294 - 384 Hb mg% 22.8 - 26.3 Hto % 74.4 - 79.6 GRT ml 227.2 - 394.6 PLASMA ml 63 - 93 Leucocitos/ 5500 - 12 600 Leucocitos totales (109) 1.9 - 4.0 Hb mg% 35 - 94 Hb mg/bolsa 99.8 - 228.8

NOM p31 Vol. Neto: 180-350 ml Temp. de conservación: +1ºC-+6ºC Hematocrito : 68-80 % Leucocitos eliminados: > 75 %. Eritrocitos recuperados: > 63% Vigencia máxima: 4 hrs. a partir de su

preparación Caracteres especiales: plasma ausente,

pobre en leucocitos y plaquetas

Antes: VN= [PB- pb p (40gr)]/1.093

GRT= VN (Hto)/100 GBT= (GB/)(1000)(VN)Después: VN = [PB-pb p(24gr)]/1.093

Hb mg% Hto(%) GBT & GRT

REQUIERE CONDICIONES ESTÉRILES Lavar el CE CON 250-350 ml de SSI, mezclar. Invertida la bolsa, centrifugar a 4ºC por 15

min. a 3500 rpm Transferir únicamente el CE a una bolsa

estéril de 300 ml que contenga 60-70 ml de SSI.

Mezclar el CE perfectamente y ayudados con un rodillo mezclar la sangre del tubo colector con el resto.

%recuperación de eritrocitos:ml GR en CE lavado x 100/ml GR en CE

%de leucocitos en el CE lavado:leucos de CE lavado x 100/leucos en CE

%eliminación de leucocitos:100 - % de leucocitos presentes

PESO BRUTO (gr) VN (ml) Hto% GRT SSI GB/ GBTx109

% GB % GR

RECUPERACION

260 - 340 218 - 286 68.5 - 79.5 162 - 209 47.5 - 87 1063 - 1963 0.42 - 0.52 75.7 - 96.9 635. - 83.7

Volumen neto: 150-180 ml Proteínas: 60g/dl Factor VIII: 1 UI / ml Fibrinógeno: 160 mg/dl Temp. de conservación: -18ºC o menor Vigencia máxima: 12 meses (6 hrs.

una vez descongelado) Identificación y aspecto físico igual

que ST.

NOM: p 32: Volumen: 150-180 ml Proteínas: 60 g/l Temp. de conservación: -18ºC o menor y

su vigencia máxima a partir de su recolección será de 5 años. Otra opción:

Temp. de conservación: +1ºC - +6ºC y su vigencia máxima será: con ACD o CPD: 26 días; con CPDA 40 días

NOM p 32: obtenidas por fraccionamiento de sangre fresca a temperatura entre +18ºC y 24ºC.

Volumen: 45 a 60 ml. Plaquetas/bolsa: 5.5 x 1010 (en el 75% o más

de las unidades al límite de su vigencia). pH: 6.0 (en el 75% o más de las unidades al

límite de su vigencia). Temperatura de conservación: +20ºC a

+24ºC y en agitación suave*. Vigencia máxima a partir de la recolección:

24 a 72 Hrs.*/

Identificación de las unidades: igual que para sangre total pero agregando a la fecha de caducidad la hora y en las condiciones de almacenamiento, que éste debe ser de +21ºC a +24ºC y con agitación suave.

Otros estudios útiles: › Inspección física› Contaminación con eritrocitos y leucocitos› Funcionalidad plaquetaria (retracción de

coágulo agregometría)

CONCENTRADO PLAQUETARIOCONCENTRADO PLAQUETARIO

VOLUMEN NETO =

Peso bruto - Peso de la bolsa (satélite) / 1.028 (densidad del plasma)

Valores de referencia = 45 a 60 ml

USAR MATERIAL DE PLÁSTICO CUENTA DE PLAQUETAS

AUTOMATIZADA Hacer una dilución 1:6 con s.s.i. y

con pipeta automática. El resultado se multiplica por 6 para

tener plaquetas/ml Plaquetas/bolsa = Plaquetas/l x 1000 x vol. neto

Cuenta de plaquetas manual: diluir 1:200 en pipetas para rojos con oxalato de amonio al 1% (0.5 a 101).

Mezclar en agitador mecánico 2 a 3 min. Llenar ambos lados de la cámara de Neubauer. Dejar sedimentar 10 min en cámara húmeda Contar la quinta parte de la cuadrícula central. Tomar el promedio de ambos lados.

Cálculos: Plaquetas/l = plaquetas contadas x 5 x 10 x 200

Plaquetas/bolsa = plaquetas/l x 1000 x vol. neto

Valores de Referencia:› Plaquetas/l: no mnos de 1,000,000› Plaquetas/bolsa: no menos de 5.5 x 1010

CONTAMINACIÓN CON ERITROCITOS: Hacer una dilución 1:10 con SSI (1 a 11) en la

pipeta de blancos. Mezclar Cargar ambos lados de la cámara de Neubauer. Dejar sedimentar 5 min en cámara húmeda. Leer la cuadrícula central y sacar promedio.

Cálculos:› Eritrocitos / l = GR contados x 10 x 10› Eritrocitos / bolsa = GR / l x 1000 x

vol. Neto

Valores de referencia› Eritrocitos / l = menos de 2000› Eritrocitos / bolsa = menos de 0.1 x 109

CONTAMINACIÓN CON LEUCOCITOS Hacer una dilución 1:10 con líquido de Turck

(1 a 11) en la pipeta de blancos. Mezclar Cargar ambos lados de la cámara de

Neubauer. Dejar sedimentar 5 min en cámara húmeda. Leer las cuatro cuadrículas de las esquinas,

sacar promedio de ambos lados.

Cálculos: › leucocitos / l: (céls contadas x 10 x 10) /

4› leucocitos / bolsa = leucocitos / l x 1000

x vol neto

Valores de referencia: › leucocitos / l = menos de 2000› leucocitos / bolsa = menos de 0.2 x 108

RETRACCIÓN DEL COÁGULO: (Usar material de plástico) Tomar un pool de no menos de seis

disponentes varones (0.5 ml de citrato de sodio al 3.8% + 4.5 ml de sangre).

Centrifugar 10 min a 1500 rpm. Separar el plasma rico en plaquetas

(PRP) y hacer una cuenta de plaquetas. Recentrifugar los tubos y obtener plasma

pobre en plaquetas (PPP)

Ajustar las plaquetas del pool y del C.P. en estudio a 50,000 / l con PPP: EJEMPLO:

C.P. = 1,200,000 plaquetas / l (1,200,000 / 50,000) -1 = 23 Para tener cantidades adecuadas podemos diluir 100 l

de C.P. + 2,300 l de PPP o 50 l de C.P. + 1,150 l de PPP.

Pipetear en cada uno de dos tubos de 13 x 100, 4.3 ml de ssi.

Agregar: 0.1 ml de tromboplastina. 0.5 ml plaquetas ajustadas a 50,000 0.1 ml de cloruro de calcio 0.1 M

CONCENTRADOS PLAQUETARIOSCONCENTRADOS PLAQUETARIOS

Mezclar e incubar 5 mins a 37ºC. Cuidadosamente desprender el

coágulo y medirlo (a).Incubar una hora a 37ºC, medir

nuevamente el coágulo (b). Cálculos: b x100 / a = X 100 - X = %

retracción VALOR NORMAL : MAYOR DE 10 %

NOM: p 33: Volumen: 10 a 25 ml Factor VIII: 80 UI Temp. conservación: -18ºC o menor Vigencia máxima: 12 meses (6 hrs una

vez descongelado)

De acuerdo con la NOM se pueden mezclar tres unidades (reconstituyendo con SSI).

Requisitos: Peso bruto: 46 - 67 g* Volumen neto: 31 - 52 ml Factor VIII: UI / ml: 4.5 - 8.8 UI UI / crio: 191 - 336 Fibrinógeno (opcional):100 - 350 mg/unidad Vigencia máxima: (NOM inciso 9.11) 12 meses (6

hrs una vez descongelado)

NOM: p 32:

Obtenido por centrifugación dentro de las seis primeras horas de su recolección.

CONGELADO, si se congela dentro de las seis primeras horas de su recolección.

metodos de fraccionamiento

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