PRACTICA # 1

FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR

¿QUÉ ES EL FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR?

Es la extracción de un homogeneizado de los órganos o tejidos.

Este homogeneizado esta formado por las células rotas de los órganos o tejidos.

El homogeneizado debe ser conservado en una solución que le brinde el medio adecuado para la conservación de los organelos.

METODO:

CENTRIFUGACION DIFERENCIAL:Consiste en someter el homogeneizado a

diferentes velocidades en la centrifuga para lograr separaciones, basadas en la diferencia de densidades y tamaño y peso de los organelos.

Este tipo de centrifugación debe hacerse a una temperatura de 4°C.

MATERIALES:

Hígado de pollo KCl 0.154 M Tijera Jeringa Algodón Placa Petri Vaso de precipitados

Tubos de ensayo Gradilla Licuadora Centrifuga Balanza Embudo

EXTRACCIÓN DE BIOMOLÉCULAS Y ORGANELOS.

1° colocamos el hígado en la placa Petri.

2° inyectar KCl 0.154M hasta que expulse los residuos de sangre hasta quedar de un color claro.

3° en la misma placa, triturar con una tijera.

4° agregarle la misma cantidad de KCl 0.154M y llevarlo a la licuadora para homogeneizar.

5° filtrar el homogeneizado y luego colocarlo en los tubos de ensayo y posteriormente contrapesar para colocarlo en la centrifuga.

6° centrifugar a 1000g durante 10’.

7° retirar de la centrifuga y extraer el sobrenadante en otro tubo de ensayo y conservar el sedimento, donde se encuentran las células y núcleos.

8° colocar el sobrenadante nuevamente en la centrifuga a 10000g durante 30’.

9° retirar nuevamente el centrifugado y extraer el sobrenadante, que en este caso es la Fracción Mitocondrial, donde se encuentran las mitocondrias y lisosomas.

DISCUSIÓN:

El producto obtenido no tuvo un alto porcentaje de rendimiento, debido a que el hígado utilizado no era lo suficientemente fresco, y debido a esto los organelos y células pueden haber muerto y por la temperatura del medio donde nos encontrábamos.

CONCLUSION:

Finalmente se pudo extraer lo suficiente como para identificar en el sedimento las celular y núcleos, en la primera centrifugada, y las mitocondrias y lisosomas, en la segunda centrifugada.