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CAPÍTULO 2.- METODOLOGÍA

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2.1.- SECUENCIAS SEDIMENTARIAS ANALIZADAS 2.1.1.- Secuencia LT-199906 Como ya se comentó en el Capítulo 1, unos de los objetivos principales de esta Tesis Doctoral ha sido el estudio detallado de los 21,86 m superiores del testigo de un sondeo realizado en las cercanías de la Laguna Permanente del Parque Nacional de las Tablas de Daimiel. Desde el punto de vista litológico se diferencian dos grandes tramos (Figura 2.1). El primero de ellos de 8,96 m de potencia corresponde a la parte inferior de la secuencia y representa la parte más compleja del testigo (Foto 2.1). Está constituido por niveles decimétricos de carbonatos blancos con gasterópodos, caráceas y en ocasiones restos vegetales, que alternan con niveles muy oscuros ricos en materia orgánica (turbas). Los niveles de turba contienen restos de gasterópodos fragmentados y se presentan como niveles bien diferenciados o como pequeños lentejones dentro de las otras facies. Hay algunos niveles lutíticos y margosos con nódulos de carbonato.

Foto 2.1.- Algunos de los sedimentos obtenidos en la parte inferior de la secuencia.

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Figura 2.1.- Columna estratigráfica de la secuencia LT-199906.

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La zona superior de la secuencia de 12,90 metros de potencia está formada por una sucesión de niveles carbonáticos con texturas variadas (Foto 2.2). La proporción de niveles endurecidos es relativamente alta en comparación con el tramo inferior. Los carbonatos dominantes son calizas biomicríticas con fragmentos de gasterópodos y caráceas. Intercalados con estos niveles biomicríticos se reconocen canales erosivos, actualmente muy litificados, de intraclastos relativamente gruesos y granos de cuarzo.

Foto 2.2.- Algunos de los sedimentos obtenidos en la parte superior de la secuencia. La descripción completa de los cambios sedimentológicos de los 21,86 m de testigo se muestra en la Tabla 2.1.

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Tabla 2.1.- Descripción litológica de la secuencia LT-199906.

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2.1.2.- Secuencia CC-17 El CC-17 es un depósito higroturboso formado en el cauce del Río Guadiana aguas abajo del Parque Nacional de las Tablas de Daimiel. El testigo CC-17 se obtuvo con una sonda mecánica (Eijkelkamp) alcanzándose una profundidad de 6,81 m. La existencia de un nivel de arenas a dicha profundidad hizo imposible continuar el sondeo. La litología del testigo analizado se describe en la Figura 2.2. Destacan los dos tipos de gasterópodos encontrados en los sedimentos ya que indican características del ambiente acuático diferentes. Los del género Succinea son anfibios, especies de aguas estancadas poco profundas con crecimiento abundante de plantas higrófitas. Los del género Theodoxus son especies de aguas en movimiento que viven principalmente en arroyos y a veces en lagos. Además son especies termófilas características de las fases cálidas del Cuaternario. También es importante en este depósito la abundante presencia de oncolitos. Los oncolitos se forman por la colonización de las algas cianofíceas sobre objetos erráticos. Éstos se localizan sobre los fondos de canal cuando el régimen del flujo es laminar. Para el crecimiento de las algas cianofíceas es necesaria la existencia de luz y que las aguas estén oxigenadas. 2.1.3.- Secuencia DTD Este depósito de 1,50 m de potencia corresponde al complejo de pequeños blowouts y dunas ovoides presentes en el mismo fondo de las Tablas de Daimiel. Se forman a partir de arenas sueltas y son pequeñas acumulaciones, generalmente efímeras, situadas inmediatamente a sotavento de áreas de deflación (Foto 2.3).

Foto 2.3.- Depósito DTD.

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Figura 2.2.- Columna estratigráfica y descripción de la secuencia CC-17.

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2.2.- METODOLOGÍA PALINOLÓGICA 2.2.1.- Toma de muestras La toma de muestras en el testigo LT-199906 se llevó a cabo en el Laboratorio de Palinología de la Universidad de Alcalá, una vez que se hubo levantado la columna estratigráfica del testigo. Se tomaron un total de 194 muestras y el intervalo entre ellas varía en función del tipo de sedimento y de los cambios litológicos (Foto 2.4). En el Apéndice I figura la relación completa de muestras y su profundidad. Con el fin de evitar posibles contaminaciones cada muestra se tomó después de eliminar la capa superficial del testigo y en cantidad suficiente para realizar todos los análisis químicos e isotópicos previstos. Además se marcó cada muestra en el testigo, con una etiqueta con su número correspondiente. La numeración de las muestras comienza en la parte superior del testigo y aumenta con la profundidad.

Foto 2.4. Muestreo realizado en el testigo LT-199906.

El muestreo del testigo CC-17 se realizó en batería de ventanas y los 74 cm más superficiales no se muestrearon ya que podrían estar removidos debido a las

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prácticas agrícolas recientes. En total se tomaron 52 muestras con un intervalo aproximado entre ellas de 10 cm. El muestreo del depósito DTD se realizó en una trinchera excavada en la duna (Foto 2.5) y se recogieron un total de 12 muestras (los 30 cm superiores no se muestrearon)con un intervalo entre ellas de 10 cm.

Foto 2.5.- Muestreo realizado en el depósito DTD.

2.2.2.- Tratamiento químico Las muestras fueron tratadas químicamente en el Laboratorio de Palinología de la Universidad de Alcalá, mediante un protocolo obtenido tras sucesivas modificaciones del inicialmente propuesto por Sittler (1955). Este protocolo se basa en el tratamiento de los sedimentos por medio de ácidos y álcalis para la extracción de los granos de polen; posteriormente, se ha sometido al residuo a técnicas de enriquecimiento. La concentración de los granos de polen se realiza mediante la flotación de éstos en un líquido de alta densidad. El licor denso utilizado ha sido el licor de Thoulet preparado según Girard y Renault-Miskovsky (1969), con una densidad mayor de 2. El protocolo de aislamiento y concentración de los granos de polen en sedimentos que se ha utilizado es el siguiente:

PROCESOS OBJETIVOS Pesar 10 a 20 g de sedimento, según el contenido en detríticos.

Añadir ClH al 35% hasta cubrir la muestra y agitar hasta que pare la reacción

Disolución de los carbonatos que compactan la muestra para una mejor disgregación de la misma.

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Filtrar por una malla de 250 µm Eliminación de material detrítico de tamaño de grano >250 µm

Centrifugar a 2.500 r.p.m. durante 5' y eliminar el sobrenadante

Lavar con agua destilada y volver a centrifugar. Este proceso junto al anterior lo abreviaremos como "Centrifugar y lavar".

Añadir 30-40 ml de NaOH al 10 %. Dejar reaccionar 10-15'.

Digestión de la materia orgánica.

Lavado con agua destilada caliente y centrifugar. Se repite tantas veces como sea necesario hasta que el sobrenadante quede limpio.

Añadir 35 ml de licor denso (Thoulet) y agitar la muestra mediante agitador eléctrico durante 30'.

Disgregación de la muestra y separación de los granos de polen de los restos de sedimentos a los que estén adheridos.

Centrifugación durante 4' a 2.000 r.p.m.

En el licor denso (densidad > 2) los granos de polen, libres en la muestra, son capaces de flotar.

Filtración del sobrenadante a través de filtros de fibra de vidrio, mediante Bomba de Vacío.

Separación de los granos de polen y recuperación del Thoulet para su reutilización.

Añadir FH al 48% y dejarlo actuar 4 h.

Disolución de los filtros de fibra de vidrio y eliminación de los silicatos que puedan quedar en el residuo.

Centrifugar y lavar Añadir ClH al 35%. Dejarlo actuar durante 15'.

Disolución de los fluorosilicatos formados en el paso anterior.

Centrifugar (3.500 r.p.m.) y lavar con agua destilada caliente.

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Lavado con alcohol de 96°.

Deshidratación de los granosde polen.

Añadir glicerina, un volumen igual al residuo obtenido.

Conservación y relleno artificial de los granos de polen.

2.2.3.- Preparación del residuo polínico El residuo polínico, en glicerina, se conserva en tubos eppendorf donde se mide el volumen final obtenido con objeto de poder calcular las frecuencias polínicas absolutas de cada taxón. Para el montaje de las preparaciones se agita bien la muestra obteniéndose así una mezcla homogénea. Se utiliza un volumen de 40 µl que se coloca bien extendido entre el portaobjetos y el cubreobjetos y se sella con glicil. Este tipo de preparación móvil permite observar los granos de polen en distintas posiciones sin variar su ubicación en la preparación, lo que facilita su identificación con respecto a las preparaciones fijas. 2.2.4.- Contaje y determinación El contaje de los granos de polen y su identificación se realizó con un microscopio óptico, Nikon Alphaphot-2 YS2, y un Puente de comparación Laborlux S, utilizando en ambos un objetivo de 10×40. La lectura y contaje del contenido polínico se llevó a cabo según el método de recuento sugerido por Cambón (1981). Este método consiste en la lectura de líneas horizontales tanto en el centro como en la periferia de la preparación palinológica de manera alternativa; las líneas elegidas para leer dependen del número de granos de polen encontrados en la primera línea según el siguiente esquema:

- Si en la 1ª línea el número de granos de polen (x) es mayor o igual a 150 se leen las líneas 1ª, 2ª y 3ª de la Figura 2.2

- Si en la 1ª línea x es inferior a 150 y mayor de 80, se leen las líneas 1ª, 2ª, 3ª, 4ª, 5ª y 6ª.

- Si en la 1ª línea x es inferior a 80, se leen las líneas 1ª, 2ª, 3ª, 4ª, 5ª, 6ª, 7ª, 8ª y 9ª.

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Figura 2.2.- Método de contaje de granos de polen (Cambón, 1981) Para la determinación de los granos de polen se ha utilizado un fichero fotográfico, una colección de referencia y bibliografía especializada sobre morfología polínica (Faegri y Iversen,1975; Moore y Webb, 1978; Moore et al, 1991; Punt y Clarke 1980/1981/1984; Punt, 1976; Punt et al., 1988, 1991; Renault-Mikovsky y Petzold, 1989; Valdés et al, 1987; Martín-Arroyo, 1992). 2.2.5.- Cálculo de las frecuencias polínicas absolutas La concentración de granos de polen se puede calcular tanto por gramo como por volumen de sedimento. En nuestro caso se ha calculado el número de granos de polen por cada gramo de sedimento seco siguiendo el método utilizado por Pérez-Obiol (1987) y Burjachs (1990). Según este método hay que medir el peso de la muestra utilizado en el tratamiento químico (p), el volumen de residuo obtenido tras el tratamiento (V), el volumen de residuo que se monta en la preparación (v), la anchura de campo del microscopio utilizado en el contaje de los granos de polen (c), la anchura del cubreobjetos (l), el número de líneas de la preparación contadas al microscopio (n) y el número total de pólenes contados (x). En base a estos datos la riqueza polínica o número de granos de polen por gramo de sedimento (Q) de cada muestra es:

Q= (l(x(V)/(n(c(v(p) 2.2.6.- Representación gráfica de los datos palinológicos Para la representación gráfica de los datos se han elaborado los diagramas polínicos, utilizando los programas informáticos TILIA-TILIA GRAPH (Grimm, 1992) y TGView 1.6.2 (Grimm, 2004). El diagrama polínico representa gráficamente los porcentajes relativos de todos los taxones identificados en cada una de las

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muestras, proporcionando una imagen espectral de la expresión polínica de la vegetación en cada momento. En abscisas se representa el porcentaje relativo de los taxones presentes en cada muestra y el porcentaje relativo de polen arbóreo frente a los de arbustivo y herbáceo. En ordenadas se representa la profundidad de las muestras. Así, pueden observarse tanto los cambios en la representación de cada taxón a lo largo de todo el registro como la composición cuantitativa y cualitativa de cada muestra. Los taxones polínicos identificados los hemos diferenciado en arbóreos (PA), arbustivos (PAB), herbáceos (PH) y acuáticos (PAC). También se han identificado esporas monoletas y esporas triletas. El cálculo de los porcentajes relativos de los taxones arbóreos, arbustivos y herbáceos, se ha realizado a partir de la Suma Base (arbóreos + arbustivos + herbáceos). El cálculo de los porcentajes relativos de los taxones acuáticos, esporas y otros palinomorfos se ha realizado a partir de la Suma Total (arbóreos + arbustivos + herbáceos + acuáticos + esporas). También en este tipo de representación se incluye una gráfica donde se enfrentan los porcentajes totales de cada uno de los grupos que forman la suma base. Esta gráfica nos muestra la evolución general de la vegetación a lo largo de la secuencia y qué estrato de vegetación es el que domina en cada momento en el paisaje. Otro tipo de representación gráfica que se ha utilizado es el diagrama sintético. En este diagrama se han representado Pinus, Cupressaceae y cinco grupos que acumulan los porcentajes de taxones con exigencias ecológicas similares. Estos grupos son:

- Mesófilos. Taxones que no soportan condiciones extremadamente frías y necesitan una relativa humedad para sobrevivir. Son: Acer, Corylus, Ilex, Juglans, Quercus tipo caducifolio y Ulmus.

- Frescos. Taxones de ambientes frescos y húmedos propios de las montañas pero que no soportan las heladas intensas y tardías: Acer, Betula, Corylus, Ilex, Quercus tipo caducifolio y Rosaceae.

- Termófilos. Plantas que necesitan temperaturas superiores a 0 ºC; no soportan las heladas y mucho menos si son tardías: Buxus, Cistaceae, Olea, Phillyrea, Quercus tipo perennifolio, Ulmus, Ericaceae, Lamiaceae y Rosaceae.

- Xerófilos. Son taxones que soportan un déficit hídrico durante un determinado periodo del año: Buxus, Cistaceae, Ephedra, Olea, Phillyrea, Quercus tipo perennifolio, Chenopodiaceae-Amaranthaceae, Artemisia, Asteraceae, Ericaceae.

- Esteparios. Taxones que soportan largos periodos de sequía; la temperatura en este caso es independiente (actualmente tenemos

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ejemplos de estepas frías y/o templadas): Ephedra, Chenopodiaceae-Amaranthaceae, Artemisia, Asteraceae.

Como se puede observar, hay taxones que se incluyen en dos grupos porque pueden tener distinto significado, que dependerá del contexto en el que se encuentren. Este es un fenómeno normal en los taxones de familia o género, por la diversidad ecológica de las especies que los integran (Burjachs, 1990), y es una de las limitaciones que presentan los estudios paleopalinológicos al ser imposible la determinación a nivel de especie. Pinus y Cupressaceae no se incluyen en ningún grupo porque estos géneros integran especies con exigencias ecológicas muy diferentes, por lo que estos taxones podrían pertenecer a cualquiera de los grupos. En el Diagrama Polínico LT-Tramo I se representa gráficamente la curva de Frecuencia Polínica Absoluta (FPA), que muestra la concentración de granos de polen en cada muestra por gramo de sedimento analizado, ya que los cambios en el número de granos de polen preservados en los depósitos sedimentarios pueden reflejar los cambios en la abundancia de las poblaciones que los produjeron así como la distinta preservación polínica en función del tipo de sedimento. Para todas las representaciones gráficas de los datos palinológicos se ha utilizado una exageración del doble de su valor, que se representa con trama punteada o con color más tenue, para poder apreciar mejor los cambios en las curvas. Por último, en el caso del registro polínico LT se representan, a la derecha de los diagramas polínicos, los dendrogramas resultantes de la zonación palinológica. Esta zonación se realizó mediante análisis de clasificación con vínculo de vecindad, utilizando como coeficiente de similaridad la distancia métrica (chord distance) de Edwards y Cavalli-Sforza (1964), que realiza el programa CONISS, incluido en el paquete estadístico del programa TILIA (Grimm, 1987). 2.3.- ANÁLISIS ISOTÓPICOS EN EL TESTIGO LT-199906 Los análisis isotópicos se han llevado a cabo en el Servicio de Análisis de Isótopos Estables de la Estación Experimental del Zaidín (CSIC-Granada). Este laboratorio está equipado con un espectrómetro de masas de razones isotópicas Finnigan MAT 251 capaz de analizar dióxido de carbono, hidrógeno, dióxido de azufre y nitrógeno. Las muestras geológicas o biológicas se preparan para su posterior análisis isotópico mediante líneas de extracción al vacío o sistemas de flujo continuo. El servicio cuenta, actualmente, con dos líneas de carbonatos, dos de reducción con uranio y zinc, respectivamente, para determinar hidrógeno, otra de equilibración CO2-H2O para determinación de oxígeno en agua, y un Analizador Elemental Fison NA1500 NC para medir C y N en muestras orgánicas.

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2.3.1.- Isótopos en calcita Las rocas, minerales y cementos carbonatados reaccionan con ácido fosfórico ultrapuro (100%), para desprender CO2 que se analiza posteriormente en el espectrómetro de masas para determinar la composición isotópica del oxígeno y del carbono. Se han analizado el *18O y el *13C en calcita de 45 muestras cuyos resultados se muestran en el Apéndice II. Once de esas muestras no proporcionaron resultados debido a que la gran cantidad de materia orgánica que contenían impidió su medición. 2.3.2.- Isótopos en materia orgánica Para este tipo de análisis el laboratorio utiliza un Analizador Elemental (Fison NA1500 NC) cuyo funcionamiento se basa en el método de micro-Dumas. Las muestras biológicas que incluyen cualquier compuesto orgánico sólido o líquido que pueda ser oxidado totalmente, sufren una combustión total e instantánea hasta N2, CO2 y H2O los cuales, tras eliminación del agua y separación cromatográfica de nitrógeno y dióxido de carbono, son introducidos en el espectrómetro de masas para la determinación isotópica. Se han analizado el *13C y el *15N en materia orgánica de 45 muestras. Los resultados se muestran también en el Apéndice II y en este caso todas las muestras proporcionaron resultados. 2.4.- DIFRACCIÓN MINERALÓGICA POR RAYOS X EN EL TESTIGO LT-199906 Se ha realizado la Difracción Mineralógica por Rayos X de 48 muestras. Los resultados se muestran en el Apéndice III. Se utilizó un espectrómetro Philips modelo PW-1710. La determinación mineralógica, tanto de la muestra total, como específicamente de los minerales arcillosos, ha constado de las siguientes etapas:

1) Establecimiento de la mineralogía total mediante difractogramas de polvo total, rodados de 2º a 62º, a una velocidad de 2º/min.

2) La mineralogía de los filosilicatos presentes se obtuvo a partir del estudio

de agregados orientados. Se prepararon tres agregados orientados de cada muestra. El primero se utilizó secado al natural, el segundo se trató durante 24 horas con etilén-glicol a una temperatura de 60 ºC (para identificar las

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esmectitas). Por último, el tercero se calentó a 550 ºC durante 2 h., lo que permitió la identificación de cloritas y/o caolinitas.

2.5.- PETROGRAFÍA CONVENCIONAL DE LÁMINAS DELGADAS EN EL TESTIGO LT-199906 Los estudios de petrografía convencional de láminas delgadas en microscopio petrográfico además de informar sobre la composición mineralógica, permiten ver la textura y la ordenación de los distintos componentes deposicionales (matriz y aloquímicos) y los posibles cementos. Muchas de las muestras son muy blandas y, por tanto, difíciles de estudiar con esta técnica, pero las muestras duras dan mucha información sobre el funcionamiento del régimen fluvio-lacustre y de las posibles etapas de emersión. Concretamente, se han estudiado láminas delgadas de siete muestras (Apéndice I). 2.6.- MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO (SEM) EN EL TESTIGO LT-199906 El estudio de muestras mediante Microscopía Electrónica de Barrido con EDAX, ha permitido ver la microestructura y composición de los sedimentos fluvio-lacustres. Los trabajos llevados a cabo utilizando esta técnica han permitido constatar la presencia de numerosos componentes biogénicos, que hasta el momento no se habían detectado, tales como espículas de esponjas silíceas y diatomeas. El sistema de microanálisis hace que en cada momento podamos obtener datos sobre la composición química de los componentes de las muestras seleccionadas. Estos trabajos se han llevado a cabo en el Centro de Microscopía Electrónica Luis Brú, de la Universidad Complutense de Madrid. El Modelo utilizado es un JEOL 6.400 y se ha trabajado a 20kV. Se han analizado superficies frescas de 23 muestras (Apéndice I), cubiertas con oro para hacerlas conductoras. 2.7.- DATACIONES 2.7.1.- Dataciones radiométricas de 14C Las dataciones radiométricas de 14C se realizaron en el Radiocarbon Dating Service de Beta Analytic Inc. (Florida, U.S.A.).

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En el testigo LT-199906 se realizaron ocho dataciones. Los resultados se muestran en la tabla 2.2. Como se puede observar, las muestras a 13,28 m y a 16,57 m proporcionan como resultado radiocarbon dead, es decir, fuera del rango de medición del 14C .

Tabla 2.2.- Dataciones de 14C del testigo LT-199906.

Número de Referencia

Muestra Profundidad (m) EDAD (años B.P.)

β - 135635 LT-22 3,30 8.500 ± 50

β - 135636 LT-24 3,90 19.010 ± 60

β - 135637 LT-45 6,36 21.120 ± 60

β - 135638 LT-50 6,99 30.980 ± 170

β - 135639 LT-60 8,08 25.160 ± 100

β - 135640 LT-79 12,60 25.280 ± 140

β - 132973 LT-84 13.28 > 44.940 (radiocarbon dead)

β - 132974 LT-124 16,57 > 41.850 (radiocarbon dead)

En el testigo CC-17 se realizaron dos dataciones cuyos resultados se muestran en la tabla 2.3.

Tabla 2.3.- Dataciones de 14C del testigo CC-17. Número de Referencia

Profundidad (cm)

Datación 14C (años BP)

β - 79215

346 – 356

6.150 " 60

β - 79216

635 – 645

9.890 " 180

2.7.2.- Dataciones radiométricas de U/Th en el testigo LT-199906 Dado que a partir del metro 13 del registro la edad de las muestras sobrepasaban el rango de medición del 14C, se realizó una datación radiométrica de U/Th en el laboratorio del Instituto de Ciencias de la Tierra “Jaume Almera” (Barcelona) del CSIC. El procedimiento de separación química del uranio y el torio utilizado en dicho laboratorio se basa en el establecido por J.L. Bischoff en el U.S. Geological Survey de Menlo Park (California). Este procedimiento comporta la disolución total de la

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muestra y la incorporación de un radioisótopo de actividad conocida para determinar los rendimientos del proceso de la separación radioquímica. La determinación de las actividades de los distintos radioisótopos fue realizada en un equipo de espectrometría alfa con detectores de barrera de silicio. El equipo, de la casa ORTEC, cuenta además con el software necesario (Maestro) para la determinación de las energías específicas de cada radioisótopo y su cuantificación. Para el cálculo de la edad el laboratorio utiliza el programa UDATE1 de Rosenbauer (1991). La muestra que se dató fue la LT-86, a 13,42 m de profundidad, y el resultado radiométrico obtenido fue de 180.000 años (com. pers. Ramón Juliá). 2.7.3.- Dataciones por racemización de aminoácidos en el testigo LT-199906 Ante la posibilidad de que la datación por U/Th no fuera muy fiable, debido a que el sistema se hubiera comportado como abierto y por tanto se hubiera perdido uranio por solubilidad, o bien que, por aportes detríticos hubiera habido aporte de torio, se realizaron dataciones por racemización de aminoácidos. Se seleccionaron gasterópodos en cinco niveles (Tabla 2.4) que fueron determinados por el Dr. D. Fernando Robles de la Universidad de Valencia.

Tabla 2.4.- Relación de gasterópodos utilizados para la racemización.

Muestra Profundidad (m) Gasterópodos

LT-105 15,39 Pseudotachea splendida (Draparnaud, 1801)

LT-120 16,30 Planorbarius metidjensis (Forbes, 1838)

LT-130 17,05

Planorbarius metidjensis (Forbes, 1838)

Hydrobia sp.

Stagnicola cf. fuscus (C. Peiffer, 1821)

LT-155 18,35 Planorbarius metidjensis (Forbes, 1838)

LT-188 21,18 Anisus sp.

Los aminoácidos aparecen como dos isómeros idénticos químicamente pero ópticamente diferentes. Estos isómeros se designan como D (dextrógiros) o L (levógiros) dependiendo de hacia dónde hagan girar un haz de luz polarizada, a la derecha o a la izquierda, respectivamente. En los organismos vivos los aminoácidos de las proteínas son casi exclusivamente L y la relación D/L se aproxima a cero. La aplicación potencial a la geocronología nace del hecho de que después de la muerte los isómeros de aminoácidos empiezan a interconvertirse (racemización). Con el tiempo se obtiene una mezcla en equilibrio, donde la relación entre los dos isomeros es igual a 1, por tanto esa relación es una estimación del grado de

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degradación de proteínas y se puede utilizar para medir el tiempo transcurrido desde la muerte del organismo (Figura 2.3).

Figura 2.3.-Aumento de la relación D/L con el tiempo. Los análisis de racemización se realizaron en el laboratorio North East Amino Acid Racemization (NEAAR) de la Universidad de York (Reino Unido). Se realizaron 52 análisis (Apéndice IV) y en todos ellos la mayoría de los aminoácidos habían alcanzado el equilibrio, permitiendo calcular sólo una edad mínima. Basándose en las estimaciones de temperatura para el área de estudio, NEAAR estimó que las muestras analizadas son más antiguas que el estadio isotópico 7.