UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICODE MÉXICO

FES ZARAGOZAFES ZARAGOZA

Inmunología LaboratorioInmunología Laboratorio

Equipo: #3Equipo: #3

IntegrantesIntegrantesMillán Mejia Laura EdithMillán Mejia Laura Edith Fezay Reyes DanielaFezay Reyes Daniela

Díaz Estrada Chairel Ivonne Díaz Estrada Chairel Ivonne

Practica No. 3 Manejo de AnimalesPractica No. 3 Manejo de Animales

IInmunidadnmunidad

EspecificaEspecifica

• INMUNIDADINMUNIDAD

No especificaNo especifica

Características de la Inmunidad Características de la Inmunidad específica.específica.

Característica Significado funcional

Especificidad Respuestas específicas para cada antígeno específico

Diversidad Permite al sistema inmune responder a una larga variedad de antígenos.

Memoria Permite respuestas más eficientes y amplificadas ante la exposición de antígenos ya conocidos.

Especialización Genera respuestas óptimas para la defensa contra diferentes tipos de microorganismos.

Auto limitación Regula la respuesta inmune para que el sistema pueda responder a nuevos antígenos

Tolerancia Previene lesiones al anfitrión durante la respuestas a los antígenos extraños

Comparación de la respuesta inmunitaria Humoral Primaria Comparación de la respuesta inmunitaria Humoral Primaria y Secundariay Secundaria

Parámetro Parámetro Respuesta primariaRespuesta primaria Respuesta Respuesta secundaria secundaria

Linfocito B que Linfocito B que responderesponde

Linfocitos B vírgenesLinfocitos B vírgenes Linfocitos B de Linfocitos B de memoria memoria

Células de Células de presentación de Agpresentación de Ag

Principalmente Principalmente macrófagos macrófagos

Los linfocitos B Los linfocitos B adquieren mas adquieren mas importanciaimportancia

Periodo de latencia Periodo de latencia 5-10 dias5-10 dias 1-3 dias 1-3 dias

Pico de titulo de AbPico de titulo de Ab Relativamente bajoRelativamente bajo Relativamente altoRelativamente alto

ParámetroParámetro Respuesta primariaRespuesta primaria Respuesta Respuesta secundaria secundaria

Persistencia del titulo de Persistencia del titulo de Ab Ab

BreveBreve ProlongadaProlongada

Anticuerpos Anticuerpos predominante predominante

Ig M > Ig G Ig M > Ig G Ig G, Ig AIg G, Ig A

Afinidad de los Ab por el Afinidad de los Ab por el AgAg

Relativamente bajaRelativamente baja Relativamente elevada Relativamente elevada

Inducción de la respuestaInducción de la respuesta Todos los Todos los inmunogenos inmunogenos

Solo Ag proteicos. Por Solo Ag proteicos. Por tanto es T tanto es T dependientedependiente

Dosis de inmunogeno Dosis de inmunogeno necesario para inducir la necesario para inducir la respuesta respuesta

Relativamente Relativamente elevadas se requieres elevadas se requieres de adyuvantesde adyuvantes

Relativamente bajas Relativamente bajas no se requieren no se requieren adyuvantesadyuvantes

Antigeno

Macromoléculas Productos extraños a un

organismo que mediante su contacto provoca una respuesta inmunitaría

Ej. Bacterias,parasitos,e incluso medicamentos

Respuesta inmune primaria y Respuesta inmune primaria y secundaria secundaria AntígenoAntígeno

Primer contacto:Primer contacto: Respuesta primariaRespuesta primaria

Contactos posteriores: Contactos posteriores: Respuesta secundariaRespuesta secundaria

Anticuerpos IgM Anticuerpos IgM Anticuerpos IgG (IgAs en Anticuerpos IgG (IgAs en mucosas) / Cambio de mucosas) / Cambio de isotipo / Mutaciones isotipo / Mutaciones somáticas somáticas

Menor intensidad Menor intensidad Mayor intensidad Mayor intensidad

Producción de células de Producción de células de memoria memoria

Anticuerpos de mayor Anticuerpos de mayor afinidad afinidad

INMUNOGENOINMUNOGENO

Alto peso MolecularAlto peso Molecular

Son de origen orgánicoSon de origen orgánico • Sustancia extraña Pueden ser químicamenteSustancia extraña Pueden ser químicamente

capaz de inducir una inmunogenos capaz de inducir una inmunogenos

respuesta inmune ( Proteínas ,azucares ,ácidosrespuesta inmune ( Proteínas ,azucares ,ácidos

nucleicos, etc.) nucleicos, etc.)

Paratopo Paratopo EpitopeEpitope

INMUNOGENO

InmunizaciónInmunización

• Inducción deliberada de una Inducción deliberada de una respuesta inmunitaria.respuesta inmunitaria.

• Experimentales se llevan Experimentales se llevan

acabo: Inyectando un antígeno acabo: Inyectando un antígeno

a un animala un animal

Factores EN OBTENCION DE SUERO:Factores EN OBTENCION DE SUERO:

• Mayor cantidad de antígenoMayor cantidad de antígeno• Menor grado de contaminación Menor grado de contaminación

con otros componentescon otros componentes• Uso de adyuvantesUso de adyuvantes• Vía de inoculación Vía de inoculación • Especie animalEspecie animal• Capacidad de respuesta Capacidad de respuesta

inmuneinmune

• Los antisueros tempranos tienen Los antisueros tempranos tienen títulos relativamente bajos y títulos relativamente bajos y tienden a cruzar menos con otros tienden a cruzar menos con otros antígenos.antígenos.

• Los antisueros tardíos tienen Los antisueros tardíos tienen títulos elevados, pero tienden a títulos elevados, pero tienden a cruzar con otros antígenos.cruzar con otros antígenos.

• Tiempo en que se sangra al Tiempo en que se sangra al animalanimal

ADYUVANTEADYUVANTE

Sustancia que potencializa la Sustancia que potencializa la respuesta inmunológica respuesta inmunológica

El adyuvante incompleto de Freund El adyuvante incompleto de Freund Detergente + aceite mineral.Detergente + aceite mineral.

El adyuvante completoEl adyuvante completo

Nujol +Twe80+ 1 mg/ml Pared de Nujol +Twe80+ 1 mg/ml Pared de Mycobacteria tuberculosis BCGMycobacteria tuberculosis BCG

TIPO DE ADYUVANTE

EJEMPLO EFECTOS PRINCIPALES

Adyuvante completo (CFA)Fosfato de aluminio, Fosfato de calcio

Liberación lenta del antígeno y granuloma local

BacterianoMycobacteria

Bordetella

Polisacáridos bacterianos

BCG

Bordetella pertussis

Microorganismos gramnegativos

Estimulación de la actividad del macrófago, aumento del número de células productoras de ac.Activación de macrófagos, linfocitos.Activación de linfocitos

QuímicoLabilizantes de lisozima

Polisacáridos de los hongos

Vit. A, sales de berilio, sílicaLentinano

Activación de macrófagos.

Se desconoce.

Manejo de AnimalesManejo de Animales

Bioterio Bioterio Es el lugar físico donde Es el lugar físico donde

se crían, mantienen y/o se crían, mantienen y/o utilizan animales de utilizan animales de laboratorio, que cuentan laboratorio, que cuentan con una calidad genética con una calidad genética y microbiológica definida. y microbiológica definida. Dichos animales son Dichos animales son reactivos biológicos reactivos biológicos generalmente utilizados generalmente utilizados en investigación o para en investigación o para producción. producción.

NOM-062-1999NOM-062-1999

Su objetivo es:Su objetivo es:

Asegurar la procedencia de animales sanos, que Asegurar la procedencia de animales sanos, que muestren respuestas estándar a la manipulación muestren respuestas estándar a la manipulación experimental, con el fin de obtener resultados confiables experimental, con el fin de obtener resultados confiables y reproducibles.y reproducibles.

Requieren de:Requieren de:

Instalaciones.Instalaciones. Jaulas específicas para cada especie.Jaulas específicas para cada especie. Temperatura óptima.Temperatura óptima. LimpiezaLimpieza Seguridad en alimentos y en el agua de consumoSeguridad en alimentos y en el agua de consumo

Clasificación de animales Clasificación de animales

Tipo de animal Tipo de animal CaracterísticasCaracterísticasAxénicoAxénico CesáreaCesárea

Amamantado y criado en condiciones asépticaAmamantado y criado en condiciones aséptica

Mantenidos en un aisladorMantenidos en un aislador

XenobióticoXenobiótico Previamente axénicoPreviamente axénico

No patógena y poca cantidadNo patógena y poca cantidad

Libres de gérmenes, Mantenidos en aisladoresLibres de gérmenes, Mantenidos en aisladores

DefinidoDefinido Previamente axénicoPreviamente axénico

Asociado intencionalmente con uno o más Asociado intencionalmente con uno o más microorganismosmicroorganismos

Mantenido en barrerasMantenido en barreras Monitorear la presencia de m.oMonitorear la presencia de m.o

ConvencionalConvencional Carga microbiana desconocida e incontrolada.Carga microbiana desconocida e incontrolada.

Uso de animales en el LaboratorioUso de animales en el Laboratorio

• Rata de Laboratorio

• Comportamiento bien definido, dócil, sumamente inteligente y relativamente saludable.

• Satisface un amplio rango de procedimientos en investigaciones para el control de enfermedades y su erradicación.

Técnicas de manejoTécnicas de manejo

• Fácil de manejar si está al Fácil de manejar si está al contacto humanocontacto humano

• Poca fuerza Poca fuerza • Sujeción por la cola Sujeción por la cola • Captura en jaulaCaptura en jaula• Sujeción con 2 manosSujeción con 2 manos

Ratón de laboratorioRatón de laboratorio

Animal de laboratorio más utilizado por su:

•Tamaño pequeño•Temprana madurez sexual•Alta posición relativa en la escala evolutiva

Sujeción por cola y transporteSujeción por cola y transporte

• Sujetar al ratón de la región Sujetar al ratón de la región media de la cola con los dedos media de la cola con los dedos índice y pulgar.índice y pulgar.

• Para transportar, Para transportar, generalmente se sujetan de la generalmente se sujetan de la

cola.cola.

Métodos de sujeción y manipulación en el Métodos de sujeción y manipulación en el ratónratón

Sujeción del hámster. Sujeción del hámster.

ConejoConejo

Características :Características :

*Temperamento asustadizo*Temperamento asustadizo

*Propensos al pánico*Propensos al pánico

*Rasguñan con sus miembros *Rasguñan con sus miembros posteriores y algunas veces posteriores y algunas veces llegan a morderllegan a morder

Utilidad en el laboratorio:

Preparación de antisueros

Probar la toxicidad de drogas y productos biológicos

Pruebas de rutina de diagnostico

Técnicas de ManejoTécnicas de Manejo

• Se carga tomándolos con la mano por el lomo.

• Con la mano derecha se suspende de la piel floja de la región del dorso y con la mano izquierda se le sujetan las patas.

Conejos con heridas u otros problemas:Sujetarse con la mano de la piel del cuello y sostener el lomo de modo que el conejo quede boca arriba.

Para su transportación y tomas de sangre colocarlos en la jaula de Para su transportación y tomas de sangre colocarlos en la jaula de

restricción para tomas de sangre.restricción para tomas de sangre.

Vía de administración Vía de administración Características Características

Oral Oral Por sondeo esofágico mediante Por sondeo esofágico mediante sondas sondas

apropiadas.apropiadas.

IntramuscularIntramuscular En los músculos de los miembros En los músculos de los miembros posteriores posteriores

Aguja calibre 22x32Aguja calibre 22x32

SubcutáneaSubcutánea Se realiza debajo de la piel del Se realiza debajo de la piel del cuello; levantar un pliegue de la cuello; levantar un pliegue de la piel laxa de la espalda e introducir piel laxa de la espalda e introducir rápidamente la agujarápidamente la aguja con aguja con aguja calibre 22x32.calibre 22x32.

Vía de administración Vía de administración Características Características

Intraperitoneal Intraperitoneal Parte posterior del abdomen, Parte posterior del abdomen, dirección paramedial. Aguja dirección paramedial. Aguja calibre 25x16. Se pueden calibre 25x16. Se pueden administrar de 15 – 25ml de fluido.administrar de 15 – 25ml de fluido.

IntravenosaIntravenosa Vena lateral de la cola. Vena Vena lateral de la cola. Vena caudal: se localiza a lo largo de la caudal: se localiza a lo largo de la línea media, parte ventral de la línea media, parte ventral de la cola. Aguja calibre 25x16cola. Aguja calibre 25x16

Método de sujeción para inyecciones y Método de sujeción para inyecciones y

movimiento del cobayomovimiento del cobayo

EXTRACCIÓN DE SANGRE EXTRACCIÓN DE SANGRE EN ANIMALES DE EN ANIMALES DE

LABORATORIOLABORATORIO

Toma de muestra de sangre en Toma de muestra de sangre en rata:rata:

• Volumen requeridoVolumen requerido• Frecuencia de la tomaFrecuencia de la toma• Posible uso de agentes Posible uso de agentes

anestésicosanestésicos• El destino para saber si la El destino para saber si la

muestra tiene que ser muestra tiene que ser tomada asépticamente.tomada asépticamente.

• El efecto de la toma de la El efecto de la toma de la muestra en los muestra en los parámetros a evaluar.parámetros a evaluar.

Variables a controlarVariables a controlar

Variable Variable ¿Que afecta? ¿Que afecta?

Estrés y técnica •Parámetros sanguíneos hormonales.

Anestésicos • Balance ácido – base

• Hb

•Volumen de células plaquetarias

•Proteínas plasmática

•Niveles de Ca y Mg

Tamaño de la aguja

•Coagulación de la sangre

•Laceración de la vena. •Hematomas

TECNICAS DE SANGRADO TECNICAS DE SANGRADO Técnica Técnica Características Características

Vena coccígeasVena coccígeas •Venas en la porción dorso lateral (dilatar Venas en la porción dorso lateral (dilatar con frotamiento, calor o uso de xilol - con frotamiento, calor o uso de xilol - etanol).etanol).• Obtención de pequeños volúmenes de Obtención de pequeños volúmenes de sangre (menos de 5mm)sangre (menos de 5mm)

Plexo venoso oftálmicoPlexo venoso oftálmico •Muestras repetidas de pequeños Muestras repetidas de pequeños volúmenes de sangre alternando los ojos.volúmenes de sangre alternando los ojos.•Una pipeta Pasteur en el saco conjuntival Una pipeta Pasteur en el saco conjuntival inferior y se gira la pipeta haciendo en un inferior y se gira la pipeta haciendo en un ángulo de 45° produciendo una hemorragia ángulo de 45° produciendo una hemorragia profusa y sube por capilaridad la sangre al profusa y sube por capilaridad la sangre al tubo.tubo.

Técnica Técnica Características Características

Vena metatarsal dorsal (en Vena metatarsal dorsal (en el cojinete plantar)el cojinete plantar)

ØSe utiliza en toma de muestras para administración de Se utiliza en toma de muestras para administración de medicamentos. medicamentos. ØSe sujeta al animal y se empuña la región metatarsal del Se sujeta al animal y se empuña la región metatarsal del pie, flexionando la 1ª articulación falangeapie, flexionando la 1ª articulación falangeaØLa cantidad obtenida es aproximadamente 0.1 y 0.2 ml.La cantidad obtenida es aproximadamente 0.1 y 0.2 ml.

Corte de vena axilarCorte de vena axilar •El animal se coloca en posición ventral y con un bisturí realice una incisión en el área axilar, y colectar la sangre.

Punción cardiacaPunción cardiaca •Se sujeta a la rata de las extremidades boca arriba sobre la Se sujeta a la rata de las extremidades boca arriba sobre la mesamesa•Se localiza el corazón y se realiza la punción extrayendo la Se localiza el corazón y se realiza la punción extrayendo la sangre lentamente.sangre lentamente.

Animal Animal Técnica Técnica RATONESRATONES IntracardiacaIntracardiaca

Plexo retro-orbitalPlexo retro-orbitalVena de la cola o por corte de la punta de la cola.Vena de la cola o por corte de la punta de la cola.

HAMSTERHAMSTER Plexo retro-orbitalPlexo retro-orbital Punción intracardiaca.Punción intracardiaca.

CuyosCuyos Plexo retro-orbitalPlexo retro-orbitalPunción intracardiaca.Punción intracardiaca.

ConejosConejos Punción intracardiacaPunción intracardiacaCorte de la vena marginal de la orejaCorte de la vena marginal de la oreja

GallinasGallinas Vena branquialVena branquial

La Punción Venosa (volúmenes del orden de 0.1 mL)La Punción Venosa (volúmenes del orden de 0.1 mL)

• Se puede pinchar una vena superficial para obtener sangre Se puede pinchar una vena superficial para obtener sangre destinada a valoraciones hematológicas o químicas que requieran destinada a valoraciones hematológicas o químicas que requieran

el equivalente a 1-4 gotas).el equivalente a 1-4 gotas).

Recolección de las ArteriasRecolección de las Arterias

• La razón principal para extraer sangre de las arterias es que se La razón principal para extraer sangre de las arterias es que se pueden obtener grandes muestras rápidamente y de manera pueden obtener grandes muestras rápidamente y de manera relativamente fácil. relativamente fácil.

• Habitualmente se utiliza la arteria carótida. O bien en los conejos el Habitualmente se utiliza la arteria carótida. O bien en los conejos el sangrado de la arteria central de la oreja.sangrado de la arteria central de la oreja.

Como regla general, usualmente resulta Como regla general, usualmente resulta seguro tomar aproximadamente 0.5 seguro tomar aproximadamente 0.5 mL/Kg. de peso corporal en todas las mL/Kg. de peso corporal en todas las especies. especies.

EutanasiaEutanasia

Aturdimiento con desangrado. Provocar la hemorragia cerebral masiva y depresión de SNC.

Dislocación Cervical. Interrumpir la comunicación entre el cerebro y la médula espinal.

Agentes anestésicos inhalados. Éter o cloroformo

Gases no anestésicos. Monóxido de carbono, Dióxido de Carbono, Nitrógeno o cianuro.

Agentes tranquilizantes. Pentobarbital sódico

BibliografíaBibliografía

• Altamirano B A. “Manual de manejo de animales de laboratorio” Fes Altamirano B A. “Manual de manejo de animales de laboratorio” Fes Zaragoza ,Primera Edición 1994, México Pág.. 3-97Zaragoza ,Primera Edición 1994, México Pág.. 3-97

• http://www.secal.es/word-pdf/sangre.pdf. . Extracción de sangre en mamíferos y animales de laboratorioExtracción de sangre en mamíferos y animales de laboratorio http://cinvestav.mx/upeal/PI-11-02.html

•  Roitt Ivan M, Delves Meter J. Inmunología: Fundamentos. 10ª ed. Argentina (Buenos Aires): Médica Panamericana; 2003.

• Regueiro González J. R, López Larrea C, González Rodríguez S, Martínez Naves E. Inmunología: Biología y Patología del Sistema Inmune. 3ª ed. España: Panamericana; 2003.

Por su atención GraciasPor su atención Gracias