INTRODUCCIÓN

Existen muchos mecanismos utilizados en el proceso de purificación del DNA, en este trabajo mencionaremos algunos que utilizamos durante la práctica en el laboratorio, entre los cuales está la electroforesis, que es una de las técnicas más empleada en biología molecular y celular, usada para separar, y a veces para purificar macromoléculas, especialmente proteínas y ácidos nucleicos.

EXTRACCIÓN SALINA DE ADN DE SANGRE PERIFÉRICA TOTAL

Materiales y Reactivos:

NaCl 6MEtanol absolutoEtanol al 70%SDS 10%

Buffer de Resuspensión Celular

Tris HCl 10 mM pH 8, 2NaCl 400 mMNa2 EDTA 2 mMProteinasa K 1 mg/mL

Buffer de Resuspensión de ADN (TE)Tris HCl 10 mM pH 7,5EDTA 1 mM pH 7,5

1. Se le agrega a un tubo, gotas anticoagulantes (de fooga).

2. Se separa el plasma y la sangre junto con la capa de glóbulos blancos.

3. Después de la separación de la sangre y el plasma, a este último se le agrega una cantidad de buffer de lisis, el cual se encarga de romper las células.

CUESTIONARIO

1. ¿CUÁL ES LA IMPORTANCIA DEL DNA EN LA CÉLULA?

La importancia que tiene el DNA en la célula, es que este es el componente principal del material genético de gran parte de los organismos, junto con el RNA. También es el componente químico primario de los cromosomas y el material en el que los genes están codificados. A partir de el podemos sintetizar las proteínas requeridas para todas las funciones vitales de nuestro cuerpo.

2. ¿QUÉ FUNCIÓN TIENE EL SDS EN EL PROCESO DE PURIFICACIÓN DEL DNA?

La purificación del DNA consiste en homogenizar las células y separar los núcleos de los cuales se extrae el DNA. El medio de extracción de ordinario contiene el SDS, el cual es un detergente que ayuda a romper membranas de las células, sirve para lisar los núcleos y liberar el DNA, y esto aumenta notablemente la viscosidad de la solución.

Este detergente inhibe también cualquier actividad nucleasa en la preparación, forma un complejo con las proteínas y las separa del DNA.

3. ¿CUÁL ES EL OBJETIVO DE AGREGAR NACL 6 MOLAR?

Con este conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina y además nos permite quitar el agua y dejar libres las proteínas.

4. ¿POR QUÉ RAZÓN HAY QUE CENTRIFUGAR EN LOS DIFERENTES PASOS DEL DNA?

Se requiere centrifugar la suspensión en los pasos del DNA para separar las bases, permaneciendo el DNA en la solución dentro de la fase acuosa de arriba y la proteína presente como un precipitado concentrado en la interfase.

5. ¿CUÁL ES EL PAPEL DEL ETANOL EN LA EXTRACCIÓN DEL DNA?

El papel que desempeña el Etanol en la extracción del DNA es que forma una capa arriba de la solución acuosa del DNA, el cual, se enrolla conforme sale de la solución y también se utiliza para precipitar la solución del ADN.

6. PARA LA ELECTROFORESIS DEL DNA, ¿PARA QUÉ SE UTILIZA AGAROSA AL 1%, Y NO MÁS CONCENTRADA?

La electroforesis es el movimiento de partículas eléctricamente cargadas a través de un gel de agarosa como resultado de un campo eléctrico formado entre unos electrodos sumergidos en el medio, este procedimiento permite la separación de moléculas como consecuencia de su diferente movilidad en un campo eléctrico.

No resulta práctico emplear concentraciones superiores de agarosa ya que los geles resultan poco elásticos y difícilmente manejables y se sustituyen con ventaja por los geles de poliacrilamida. Sin embargo, para la electroforesis de ácidos nucleicos los geles de agarosa son absolutamente insustituibles.

7. ¿CUÁL ES EL PAPEL DEL BROMURO DE ETIDIO?

El bromuro de etidio es el reactivo fundamental para la detección por tinción de fluorescencia y observación bajo luz ultravioleta.

8. ¿CUÁLES SON LAS CÉLULAS EN LAS CUALES SE PURIFICA EL DNA?

Las células de las cuales se purifico el ADN, fueron los leucocitos gracias a que estas son una de las células nucleadas de la sangre.

9. INVESTIGUE OTROS MÉTODOS PARA LA PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS.

• Técnica de extracción de DNA de leucocitos (técnica de miller) • Método wizard (promega, usa) • PCR • Ultra centrifugación • Espectrofotometría • Técnica de sedimentación de ácidos nucleicos. • Separación del ADN mediante electroforesis en gel. • Tecnica de millar • Matriz  de sílice • Bioclean columns • Resinas de intercambio inico • Tecnica de millar • Kit de purificación genómica del DNA • Columnas de biolimpieza

CONCLUSION

Con la elaboración de este trabajo hemos aprendido detalles importantes concernientes al ADN, ahora conocemos su importancia y la manera en la cual se analiza. Así también la función de algunas sustancias químicas mencionadas en el trabajo, y la definición de electroforesis, que permite afianzar mucho más nuestros conocimientos.