implementacion de un protocolo por hplc para la cuantificacion de acido gamma aminobutirico y...
DESCRIPTION
La iniciativa de implementar nuevas herramientas de investigación surge en respuesta a la necesidad de ampliar el conocimiento relativo a mejores formas de diagnóstico y tratamiento de afecciones neuropsiquiátricas, como la depresión y la ansiedad. El presente trabajo, consiste en una contribución al estudio de la neuroquímica de las emociones y su lado patológico. La labor se enfoca en la estandarización de un protocolo por Cromatografía Líquida de Alta Resolución de detección electroquímica (HPLC-EC), para la cuantificación de aminoácidos transmisores, involucrados en el desarrollo de dichas patologías. Este protocolo se desarrolló en el Laboratorio de Investigaciones en Neurociencias de la Universidad de Costa Rica. El principal objetivo es el de evaluar las características químico-físicas necesarias para la separación efectiva de los aminoácidos GABA y Glutamato, basándose en el trabajo de Rowley, et al (1995). Para cumplir con dicho objetivo, se evaluaron los parámetros cromatográficos: intensidad de corriente, temperatura, pH, índice de flujo y concentración de metanol, en función de la resolución y la detección de los aminoácidos. Asímismo, se hizo uso de una técnica para el marcaje químico de analitos de baja detección: la técnica de derivatización. Adicionalmente, se realizaron pruebas para determinar la repetibilidad, la linealidad y el efecto que tiene la matriz sobre la detección de los aminoácidos. Con base en estos ensayos, fue posible desarrollar un protocolo repetible y lineal para la cuantificación efectiva de GABA y Glutamato. El nuevo protocolo consiste en la utilización de una fase móvil con metanol:agua al 23% y un pH 5,5; bajo condiciones de corrida de 0,65ml/min; 850mV; 10:50nA ;un rango de temperatura entre 18-23°C; y una cantidad de reactivo de derivatización de 22μL (OPA 86mM)/mL de solución acuosa de aminoácidos.TRANSCRIPT
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
?
GE\XGXVXI XFLEICKGLI HF LI\XO ZGLO
Fslufco hf Jgiciko
Geair`f hfc Xrojodi Ageoc hf Krohuolge
G@^CF@FEXOLGE HF VE ^ZIXILICI ^IZ B^CL ^OZO COLVOEXGAGLOLGE HF OLGHI KO@@O-O@GEIJVXZGLI W KCVXO@OXI
FE LFZFJZI HF ZOXO
Oehrfo O. @iekf Oluo
Lortoki, :>>;
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
>;
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
8
G@^CF@FEXOLGE HF VE ^ZIXILICI ^IZ B^CL ^OZO COLVOEXGAGLOLGE HF OLGHI KO@@O-O@GEIJVXZGLI W KCVXO@OXI
FE LFZFJZI HF ZOXO
Oehrfo O. @iekf Oluo*
ZF\V@FE
Co geglgotgvo hf g`pcf`fetor eufvos bfrro`gfetos hf gevfstgkolge surkf fe
rfspufsto o co eflfsghoh hf o`pcgor fc lieilg`gfeti rfcotgvi o `fdirfs air`os hf
hgokestgli y troto`gfeti hf oafllgiefs efuripsgqugtrglos, li`i co hfprfsge y co
oesgfhoh. Fc prfsfetf trojodi, liesgstf fe ueo lietrgjulge oc fstuhgi hf co
efuriqu`glo hf cos f`ilgiefs y su cohi potickgli. Co cojir sf feailo fe co
fstoehorgzolge hf ue pritilici pir Lri`otikroao Cqugho hf Octo Zfsiculge hf
hftfllge fcfltriqu`glo (B^CL-FL), poro co luoetgaglolge hf o`geilghis
troes`gsirfs, geviculrohis fe fc hfsorricci hf hglbos poticikos. Fstf pritilici sf
hfsorricc fe fc Cojirotirgi hf Gevfstgkolgiefs fe Efurilgfelgos hf co Vegvfrsghoh
hf Listo Zglo. Fc prgelgpoc ijdftgvi fs fc hf fvocuor cos loroltfrstglos qu`gli-
asglos eflfsorgos poro co sfporolge fafltgvo hf cis o`geilghis KOJO y
Kcuto`oti, josehisf fe fc trojodi hf Ziwcfy, ft oc (?776). ^oro lu`pcgr lie hglbi
ijdftgvi, sf fvocuorie cis por`ftris lri`otikraglis4 getfesghoh hf lirrgfetf,
tf`pfroturo, pB, ehglf hf acudi y lielfetrolge hf `ftoeic, fe auelge hf corfsiculge y co hftfllge hf cis o`geilghis. Os`gs`i, sf bgzi usi hf ueo tleglo
poro fc `orlodf qu`gli hf oeocgtis hf jodo hftfllge4 co tleglo hf hfrgvotgzolge.
Ohglgieoc fetf, sf rfocgzorie prufjos poro hftfr`geor co rfpftgjgcghoh, co cgefocghoh
y fc faflti quf tgfef co `otrgz sijrf co hftfllge hf cis o`geilghis. Lie josf fe
fstis fesoyis, auf pisgjcf hfsorriccor ue pritilici rfpftgjcf y cgefoc poro co
luoetgaglolge fafltgvo hf KOJO y Kcuto`oti. Fc eufvi pritilici liesgstf fe co
utgcgzolge hf ueo aosf `vgc lie `ftoeic4okuo oc :,16`c/`ge= 26>`Q= ?>46>eO =ue roeki hf tf`pfroturo fetrf ?2-:>6
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
6
G@^CF@FEXOXGIE IA O B^CL ^ZIXILIC AIZ _VOEXGAGLOXGIE IAKO@@O-O@GEIJVXWZGL OLGH OEH KCVXO@OXF GE ZOX JZOGE
Oehrfo O. @iekf Oluo*
OJ\XZOLX
Ge rfspiesf ti tbf effh air jfttfr hgokeistgl `fosurfs oeh trfot`fets air
efuripsylbgotrgl oaafltgies sulb os hfprfssgie oeh oexgfty o efw gegtgotgvf ti fxpoeh
meiwcfhkf oeh g`pcf`fet efw gevfstgkotgvf tiics orgsfs. Xbgs wirm rfprfsfets o
lietrgjutgie ti tbf rfsforlb ia tbf efurilbf`gstry ia f`itgies oeh tbfgr potbicikgloc
ospflts. Xbgs hilu`fet, hfvfcipfh ge tbf Efurislgfelfs Zfsforlb Cojirotiry-
Vegvfrsgty ia Listo Zglo, ailusfs ie tbf stoehorhgzotgie ia o pritilic jy bgkb
pfrair`oelf cgqugh lbri`otikropby ia fcfltrilbf`gloc hftfltgie (B^CL-FL), air tbfquoetgaglotgie ia o`gei olgh troes`gttfrs, gevicvfh ge tbf hfvfcip`fet ia tbfsf
potbicikgfs. Xbf `oge ijdfltgvf gs tbf fvocuotgie ia tbf lbf`gli-pbysgloc
lboroltfrgstgls air tbf faafltgvf sfporotgie ia tbf o`gei olghs KOJO oeh kcuto`otf,
jfgek josfh ie tbf wirm ia Ziwcfy (?776). Ge irhfr ti aucagcc tbgs ijdfltgvf, tbf
lbri`otikropbgl poro`ftfrs fvocuotfh wfrf4 getfesgty ia lurrfet, tf`pfroturf, pB,
aciw rotf oeh lielfetrotgie ia `ftboeic josfh ie tbf rfsicutgie oeh tbf hftfltgie ia
o`gei olghs oeh ohhgtgieoccy, o hfrgvotgzotgie tflbegquf wos usfh air tbf lbf`gloc
cojfcgek ia ciw hftfltgie oeocgtfs. Xfsts wfrf rue ti hftfr`gef tbf rfpfotojgcgty, tbfcgeforgty oeh tbf faaflt ia `otrgx ie o`gei olgh hftfltgie. Josfh ge tbfsf tfsts, gt wos
pissgjcf ti hfvfcip o rfpfotojcf oeh cgefor pritilic air tbf faafltgvf quoetgaglotgie ia
KOJO oeh kcuto`otf. Xbf efw pritilic liesgsts ia o `ijgcf pbosf wgtb :,16`c/`ge, aciw rotf = >,26Q,
victokf= ?>46>eO, lurrfet getfesgty= ?2-:>6
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
1
G@^CF@FEXOLGE HF VE ^ZIXILICI ^IZ B^CL ^OZO COLVOEXGAGLOLGE HF OLGHI KO@@O-O@GEIJVXZGLI W
KCVXO@OXI FE LFZFJZI HF ZOXO
Geair`f prfsfetohi o co Fslufco hf Jgiciko hfc Gestgtuti Xfleickgli hfListo Zglo li`i rfqugsgti porlgoc poro iptor oc ttuci hf Jolbgccfr fe
Gekfegfro fe Jgitfleiciko
@gf`jris hfc Xrgjueoc
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY@gkufc Zidos Lbvfz, ^bH
^riafsir osfsir
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYDog`f Aireokufro Xros, ^bH \gcvgo Jfeovghfs Qorfco, Jolb
Osfsir fxtfrei Cfltiro
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
;
HFHGLOXIZGO
O popg y o `o`g, pir su o`ir geliehglgieoc
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
2
OKZOHFLG@GFEXI\
Co outiro hfsfo hfdor liestoelgo hf su okrohflg`gfeti4
O Hgis pir hor`f fc `gcokri hf co vgho, pir `istror`f su o`ir y sfelgccfz o trovs
hf co lrfolge y pir fesfor`f quf cos lietrorgfhohfs ei sie `itgvi hf
hfsfspfrolge, sgei fc geglgi hf ueo eufvo cfllge sijrf co vgho.
O Zoc, `g auturi fspisi, pir fstor sgf`prf o `g cohi, pir sfr `g opiyi fe
`i`fetis hgalgcfs y pir sfr ueo roze g`pirtoetf hf `g vgho, hf `g o`ir y hf `g
afcglghoh.
O popg pir su o`ir, su opiyi, su hfhglolge liestoetf y su feir`f hfsfi hf qufeisitris sus bgdis, cikrf`is ueo fhulolge uegvfrsgtorgo y ueo vgho pcfeo.
O `o`g, pir su o`ir, su opiyi, su lughi, sus liesfdis y pir fesforeis o sfr
pfrsieos lrtglos, gehfpfehgfetfs y hf jufe liroze.
Oc Hiltir @gkufc Zidos, pir fstor sgf`prf pfehgfetf hf `g air`olge priafsgieoc y
pir jrgehor`f toe vocgisis liesfdis fe ci pfrsieoc.
O \gcvgo Jfeovghfs, luyi hfsf`pfi fe fc cojirotirgi liestgtuy fe tihi `i`feti
ue hfsoai poro `g `gs`o y ueo gespgrolge, pfri sijrf tihi pir sfr ueo o`gko toe
fspflgoc.
O Cgz Qfko pir su licojirolge fe fc hfsorricci hf fstf trojodi, pir sfr ueo pfrsieo
biefsto y sfrvglgoc, y pir su `orovgcciso o`gstoh.
O co @ostfr Fcvgro \ocos, pir su oyuho priafsgieoc y su prfilupolge o ci corki hf corfocgzolge hf fstf trojodi.
Oc Hiltir Dog`f Aireokufro, pir pfr`gtgr`f hgsarutor hf toe vocgiso ipirtueghoh, pir
bojfr sghi fe tihi `i`feti, ue `fetir y ue o`gki, pfri `uy fspflgoc`fetf, pir
bojfr pufsti su lieagoezo fe `g pfrsieo, pirquf fsi sgkegagl ue lrflg`gfeti
pfrsieoc y priafsgieoc uy kroehf.
O tihi fc fqugpi hf efurilgfelgos, pir bolfr`f sfetgr portf hf su ao`gcgo.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
7
EHGLF KFEFZOC
ZF\V@FE.................................................................................................................. g
HFHGLOXIZGO.............................................................................................................gg
OKZOHFLG@GFEXI\.................................................................................................ggg
GEHGLF KFEFZOC......................................................................................................gv
GEHGLF HF LVOHZI\................................................................................................v
GEHGLF HF AGKVZO\.................................................................................................vg
?.GEXZIHVLLGE....................................................................................................?6
?.?IJDFXGQIKFEFZOCWF\^FLAGLI\.............................................................?2
:. ZFQG\GE HF CGXFZOXVZO................................................................................:>
:.?Aueho`fetis hf co efuritroes`gsge...................................................................:>
:.: Efuritroes`gsirfs...............................................................................................:6
:.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
?>
6.HG\LV\GE............................................................................................................27
1.LIELCV\GIEF\.................................................................................................?>6
2.JGJCGIKZOAO.....................................................................................................?>;
7.OEFRI\...............................................................................................................??;
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
??
GEHGLF HF LVOHZI\
E`. Xtuci ^k.
?Ilbi lrgtfrgis poro hftfr`geor sg ue li`pufsti
efurirfkucotirgi fs ue vfrhohfri efuritroes`gsir
:1
: Lotfkiros hf Efuritroes`gsirfs y sus fstrulturos :;
eO, o tf`pfroturo o`jgfetf
(:6,8 + >,>6L).
;>
6Qocirfs hf Z hf loho o`geilghi f getfrprftolgeijtfeghis sfke co ar`uco4 Z0 : * ](XZ)J-(XZ)O/ [O+ [J)
;?
1
Xgf`pis hf rftfelge hf loho o`geilghi sfke co
li`pisglge qu`glo hf co aosf `vgc. Xf`pfroturo hf
oecgsgs :1-:;L.
;+ ?L
;2
7Zfcolge fetrf co getfesghoh opcgloho y co rfspufsto fe
@v.s hf cis troes`gsirfs4 kcuto`oti, kcuto`geo y KOJO.2?
?>Zfsuctohis ijtfeghis hf cos prufjos hf rfpftgjgcghoh fe ue
sici ho poro cis hgstgetis o`geilghis fe `otrgz2
: Zfprfsfetolge fsquf`tglo hf ueo sgepsgs :?
< Zfprfsfetolge fsquf`tglo hf cos uegiefs fspolgisos ::8 \geopsgs qu`glo4 cgjfrolge hf efuritroes`gsirfs. :86 Acudi hf giefs o trovs hf ue loeoc ojgfrti fe co `f`jroeo hf
ueo efurieo pistsgeptglo.:8
1 Hgokro`o hf uei hf cis `floegs`is hf ollge pir `fesodfrissfluehorgis `fhgohis pir pritfeo K
,16`c/`ge, ue pitfelgoc hf 26>`Q= y ueo getfesghohhf :>eO.
;>
:? Getfrafrfelgo fetrf cis pglis hf KOJO (?>>@) y I^O (8 ?L= ue acudi hf >,16`c/`ge,
ue pitfelgoc hf 26>`Q= y ueo getfesghoh hf :>eO
;?
:: Lri`otikro`o hf bi`ikfegzohis hf lirtfzo tf`piroc hflfrfjri, jodi cos liehglgiefs lri`otikraglos hfc pritilici hfZiwcfy (?776)
;?
:< Li`porolge hf cos luotri aosfs `vgcfs lrfohos olielfetrolgiefs lrflgfetfs hf `ftoeic (pB 8,6).
;>@).
;@).
;6
:1 Lri`otikro`os rfprfsfetotgvis hf loho pB= fe aosf `vgc oc :
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
?>@).:; Lri`otikro`os hf cos trfs `fdirfs aosfs `vgcfs hfsorriccohos. ;1:2 Lri`otikro`o hf ueo `ufstro hf lirtfzo tf`piroc hgcuho ?/?>.
Liehglgiefs lri`otikraglos4 :
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
?8
EHGLF HF OEFRI\
E`. Xtuci ^k.
?
Lri`otikro`o cikrohi tros co iptg`gzolge hf cosliehglgiefs rfli`fehohos fe fstf trojodi poro fc
oecgsgs hf `ufstros hf lfrfjri: ^ritilici hf rfafrfelgo
< Bidos hf locgjrolgiefs pir ^ZILO@F ??;
8 Kuo hf locgjrolge hfc fcfltrihi
6 Bidos poro fc rfkgstri hf hotis
1 ^ritilici hf cg`pgfzo hfc fcfltrihi hf trojodi
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
?6
?. GEXZIHVLLGE
O portgr hf ?777, fc @gegstfrgi hf \ocuh hf Listo Zglo, bo liirhgeohi
oltgvghohfs hf gevfstgkolge lie fc age hf vociror fc fstohi oltuoc hf cis sfrvglgis hf
otfelge hf co Lodo Listorrglfesf hf \fkuri \ilgoc (LL\\). Fe hglbo gevfstgkolge,
auf rfvfcoho co eflfsghoh hf pcoetfor eufvis cgefo`gfetis y fstrotfkgos hf ollgefe fc rfo hf co socuh `fetoc, aueho`fetoc`fetf pir co aocto hf prgirghoh lielfhgho
o fstf tf`o fe fc posohi. O pfsor hf co liestoetf rffstrulturolge quf sf bo vfeghi
hoehi fe cis sfrvglgis hf co LL\\, oe fxgstfe hfjgcghohfs fe fc sgstf`o hf socuh
li`i co gefxgstfelgo hf pictglos y hf ue pcoe hf socuh `fetoc getfkrohir hf
ollgiefs i priyfltis getfrsfltirgocfs hf socuh `fetoc eolgieocfs. Ohglgieoc`fetf,
fxgstf ueo kroe eflfsghoh hf ccfvor o loji gevfstgkolgiefs lgfetaglos poro ccfeor
volis hf lieilg`gfeti fe fsto rfo hf co socuh (@gegstfrgi hf \ocuh, :>>:=
@gegstfrgi hf \ocuh, :>>8).
\fke, cos ctg`os felufstos rfocgzohos pir co LL\\, fe fc pfrihi ?72;-
:>>:, co pripirlge hf liesuctos fxtfreos psgqugtrglos rfspflti oc titoc hf
liesuctos, prfsfetojo vocirfs hf ocrfhfhir hfc 8% (@gegstfrgi hf \ocuh, :>>8). Ei
ijstoetf, cis trojodis fstohstglis rfocgzohis bosto fc `i`feti, ei gelcuyfe ue
siehfi `ufstroc oc ozor hf co pijcolge, ci luoc liestgtuyf ueo getfrrikoetf fe
luoeti o co vfrhohfro gelghfelgo hf cos feafr`fhohfs `fetocfs fe Listo Zglo. \ge
f`jOrki, ouequf fe fc pos ei fxgstfe fstuhgis fpghf`gickglis rflgfetfs, sf
fstg`o quf cis trostireis `fetocfs sf boe gelrf`fetohi fe auelge hf cos
vorgolgiefs ilurrghos fe fc pfragc hf`ikragli y cis lo`jgis silgocfs, flie`glis y
lucturocfs quf boe tfeghi g`polti fe co silgfhoh listorrglfesf fe cis ctg`is
hflfegis. Fc g`polti efkotgvi hf fsis aoltirfs fe co socuh `fetoc, sf bolf fvghfetf
fe sgtuolgiefs quf li`pri`ftfe fc auelgieo`gfeti silgoc hfc gehgvghui y co ao`gcgo,
su fqugcgjrgi f`ilgieoc y fc hfspcgfkuf hf sus pitfelgocghohfs (@gegstfrgi hf \ocuh,
:>>8).
Ohglgieoc fetf, cis trostireis `fetocfs y, portglucor`fetf, co hfprfsge,
tgfefe ue g`polti silgiflie`gli `uy g`pirtoetf, oc liestgtugr ueo hf cos prg`fros
lousos hf hgslopolghoh y hf feafr`fhoh fe fc `uehi (Gestgtutf ia @fhglgef, :>>?).
Cis hotis kfefrohis pir ue fstuhgi, sijrf co lorko kcijoc g`pufsto pir cos
feafr`fhohfs si`tglos y psglickglos, rfocgzohi pir co Irkoegzolge @uehgoc hf co
\ocuh, fc Joeli @uehgoc y co Vegvfrsghoh hf Borvorh, rfvfcorie quf cos
feafr`fhohfs `fetocfs, gelcuyfehi fc suglghgi, ilupoe fc sfkuehi cukor hf co lOrko
kcijoc pir feafr`fhohfs, fe fliei`os `uehgocfs fstojcflghos. Cis hfsrhfefs
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
?1
efuripsgqugtrglis liestgtuyfrie fe fc :>>8, ue ?>8=
Gestgtutf ia @fhglgef, :>>?).
Fe fstf lietfxti, cf otof oc lgfetagli, co g`pcf`fetolge hf `tihis quf
pfr`gtoe fc fstuhgi hf co feafr`fhoh hf air`o li`pcf`fetorgo o cis fsaufrzis
rfocgzohis pir hgvfrsos fetghohfs o egvfc eolgieoc f getfreolgieoc, lie fc ijdftgvi
ctg`i hf boccor `fdirfs air`os hf hgokestgli tf`proei y hf troto`gfeti, y hf
lietrgjugr oc lieilg`gfeti sijrf fc irgkfe y eoturocfzo hf cos feafr`fhohfs
`fetocfs.
Cos tleglos `ihfreos poro gevfstgkor fc auelgieo`gfeti hfc lfrfjri, boe
bflbi ueo lietrgjulge sgkegaglotgvo o co jgiciko hf cos f`ilgiefs y o co
efuriagsgipoticiko. Hglbos tleglos ojorloe bfrro`gfetos poro fc fstuhgi
psglickgli, agsgickgli y jgiqu`gli hfc lfrfjri. Ockueos hf cos tfleicikos
f`pcfohos fe `fhglgiefs psgliagsgickglos sie4 fc fcfltrifelfaocikro`o (FFK)
(poro hftfltor co oltgvghoh fcltrglo hfc lfrfjri), pitfelgoc lfrfjroc fe rfcolge o ue
fvfeti (FZ^) (quf liesgstf fe fc rfkgstri hf acultuolgiefs hf victodf osilgohos fe fctgf`pi lie ue fvfeti asgli i `fetoc), fcfltri`gikro`o (F@K, quf `ghf co oltgvghoh
hfc `sluci), pupgci`ftro (`fhgho fe fc lo`jgi hfc to`oi hf co pupgco),
fcfltriilucikroao (FIK, `fhgho hfc `ivg`gfeti hfc idi), oltgvghoh fcfltrihfr`oc
(FHO, `fhgho hfc egvfc hf fcfltrglghoh fe co supfraglgf hf co pgfc), a@ZG (sgstf`o hf
priyfllge hf g`kfefs ge vgvi pir rfsieoelgo `oketglo) y ti`ikroao hf f`gsge
hf pisgtriefs (^FX) poro fstuhgis auelgieocfs lirtglocfs y sujlirtglocfs (Oehrfossg,
:>>>= Diboessie, ft oc, ?777= ^gltie= :>>>). ^ir itri cohi, ockueos hf cos
bfrro`gfetos jgiqu`glos utgcgzohos fe fc fstuhgi hf li`pufstis efurioltgvis,oltgvghoh efurieoc y rfcolgiefs fspolgocfs hf cis sgstf`o efurieocfs, sie4 co
bgstiqu`glo hf bgjrghgzolge ge sgtu(pir `fhgi hfc usi hf siehos icgkieulcfithglos
poro co cilocgzolge hf sgtgis hf troeslrgplge hf efuripptghis), co
g`@ueilgtiqu`glo (GLL, poro fc `opfi lfcucor y sujlfcucor hf efuritroes`gsirfs
o`geiolhglis y efuripptghis), rohgige`ueifesoyis (ZGO) y fesoyis
g`@ueifezg`tglis (FCG\O), (li`pcf`fetis hf co luoetgaglolge hf efuripptghis),
bgjrghgzolge ge sgtu luoetgtotgvo (poro co luoetgaglolge fxolto, fspflaglo y
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
?;
rfprihulgjcf hf troeslrgtis hf OZE` prfsfetfs fe sfllgiefs hf tfdghi) y co
lri`otikroao hf kosfs i cqugho (Diboessie, ft oc, ?777= Zoyef, ?77;).
Veo vorgoetf hf fsto ctg`o tleglo, fs co lri`otikroao cqugho hf octo
rfsiculge (B^CL, pir sus sgkcos fe gekcs), quf fs ueo bfrro`gfeto hf
luoetgaglolge qu`glo hf octo sfesgjgcghoh y fspflgaglghoh (Lozfs, ft oc= :>>:).
Hohi quf fc li`pirto`gfeti fst kijfreohi pir rfkgiefs fspflaglos hfc
lfrfjri y pir co prfsfelgo hf efuritroes`gsirfs sgeptglis portglucorfs, quf sf
felufetroe fe jodo lielfetrolge (ek/`c pk/`c), co lri`otikroao cqugho hf octo
rfsiculge, sf pfragco li`i bfrro`gfeto lcovf poro fc fstuhgi hf fvfetis agsgickglis
y agsgipotickglis fe rfkgiefs fspflaglos hfc lfrfjri ([gcjiure, ft oc= :>>).
Fe fc pos, fc ^rikro`o hf Gevfstgkolge fe Efurilgfelgos (^GE), hf co
Vegvfrsghoh hf Listo Zglo (VLZ), pisff ue getfrs fspflgoc pir fc fstuhgi hf cis
afe`feis psgliagsgickglis, geviculrohis fe co gelghfelgo fspflaglo hf co
hfprfsge y co oesgfhoh. Hglbis trostireis agkuroe fe sfkuehi y tfrlfr cukor hf
prgirghoh eolgieoc hfetri hfc liedueti hf feafr`fhohfs `fetocfs hf `oyir
troslfehfelgo f getfrs li`uegtorgi, sfke fc geair`f rfocgzohi fe fc :>>:, pir fc
@gegstfrgi hf \ocuh (@gegstfrgi hf \ocuh, :>>:). Co aufrtf rfcfvoelgo quf tgfef fcfstuhgi hf fstos feafr`fhohfs fe co silgfhoh oltuoc, liehudi o ueo liirhgeorie hf
fsaufrzis lie fc ^GE poro co rfocgzolge hf fstf trojodi. Co cojir, sf lfetro
prg`irhgoc`fetf fe fc hfsorricci hf ue pritilici pir B^CL poro co luoetgaglolge
agojcf hf his efuritroes`gsirfs, fe lfrfjri hf rotos. Fvfetuoc`fetf, fc ^GE pihr
hfsorriccor `ihfcis fxpfrg`fetocfs poro fc fstuhgi pir B^CL, hf cos
lielfetrolgiefs hf fstis his efuritroes`gsirfs, fe trostireis `fetocfs hf
hfprfsge y oesgfhoh, fetrf itris. Ockueis hf cis efuritroes`gsirfs, quf fe egvfcfs
oeir`ocfs, boe sghi osilgohis lie co agsgipoticiko hf co hfprfsge y co oesgfhoh,sie4 co hipo`geo (HO), co eirohrfeocgeo (EO), co sfritiegeo (6-BX), fc lghi ko``o-
o`geijutrgli (KOJO) y fc Kcuto`oti (Diboessie, ft oc, ?777= [gcjiure, ft oc= :>>
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
?2
fstis o`geilghis sfoe fstuhgohis lie `oyir priauehghoh fe sudftis eir`ocfs f
gehgvghuis lie hfprfsge y/i oesgfhoh.
^oro cikror co luoetgaglolge fxgtiso hf fstis his efuritroes`gsirfs, fs
g`prfslgehgjcf co lirrflto sfcfllge, rflicfllge y prilfso`gfeti hf co `ufstro.
Fxgstfe hgafrfetfs tgpis hf `ufstros quf pihroe sfr utgcgzohos poro cos
hftfr`geolgiefs luoetgtotgvos hf KOJO y Kcuto`oti, li`i pir fdf`pci4 Cqughi
Lfaocirroquhfi (CLZ) ijtfeghi pir puelge lfrvgloc fe rotos (Buoek, \= :>>8=
[oek,?722)= cqughi fxtrolfcucor lfrfjroc ijtfeghi pir co tleglo hf `glrihgcgsgs,
prltglo quf liesgstf fe co pfrausge hf rfkgiefs fspflaglos lfrfjrocfs, lie
siculgiefs hf Zgekfr y fe co hgausge y pistfrgir rflicfllge hf `iclucos (g.f
efuritroes`gsirfs) o trovs hf ueo leuco hf hgcgsgs hf pfqufi hg`ftri
(3>`) (Zoyef, ?77;)= y bi`ikfefgzohis hf lfrfjri, `ufstro ijtfegho hf co
arok`fetolge hfc tfdghi lfrfjroc titoc (fspolgis getro y fxtrolfcucorfs) privfegfetf
hf rfkgiefs fspflaglos hfc lfrfjri. Fc pfrsieoc hfc ^GE lufeto lie ue pritilici
poro co fxtrollge y bi`ikfegzolge hf tfdghi lfrfjroc hf roto, pir liesgkugfetf, sf
utgcgzorie bi`ikfefgzohis hf lfrfjri, li`i tgpi hf ufstro, fe fsto gevfstgkolge.
Ageoc`fetf, fc pritilici g`pcf`fetohi poro co luoetgaglolge hf KOJO y
Kcuto`oti, auf sfcfllgieohi o portgr hfc oecgsgs hf vorgis trojodis pujcglohis fe
rfvgstos lgfetaglos locgaglohos. Fc prilfhg`gfeti fcfkghi poro fc oecgsgs hf hglbis
efuritroes`gsirfs hfjo lu`pcgr lie trfs liehglgiefs prgelgpoc`fetf4 fe prg`frcukor, sfr faglgfetf fe co sfporolge y luoetgaglolge fspflaglo hf KOJO y
Kcuto`oti, prgelgpoc`fetf, fe sfkuehi cukor, sfr flie`glo`fetf vgojcf y fe
tfrlfr cukor, sfr li`potgjcf lie fc sgstf`o hf lri`otikroao cqugho hf hftfllge
fcfltriqu glo prfsfetf fe fc ^GE.
Fc pritilici hfsorriccohi fe fsto gevfstgkolge, pihr sfr utgcgzohi li`i
`tihi hf opiyi fe fc fstuhgi hf co hfprfsge y co oesgfhoh y oc `gs`i tgf`pi,
kfefror lieilg`gfetis lgfetaglis oc rfspflti fe jfefaglgi hfc rfo hf co socuh.
IJDFXGQI KFEFZOC
- G`pcf`fetor y iptg`gzor ue `tihi lieagojcf hf lri`otikroao cqugho hf octo
rfsiculge lie hftfllge fcfltriqu`glo, poro co luoetgaglolge hf KOJO y
Kcuto`oti.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
?7
IJDFXGQI\ F\^FLAGLI\
- G`pcf`fetor ue prilfhg`gfeti pir Lri`otikroao Cqugho poro co luoetgaglolge
hf cis efuritroes`gsirfs KOJO y Kcuto`oti, quf pisfo cis `fdirfs rfsuctohis
(jufeo rfsiculge hf pglis lirrfspiehgfetfs o KOJO y Kcuto`oti= `feir
tgf`pi titoc hf oecgsgs, octo sfesgjgcghoh) y quf sfo lievfegfetf poro fc
cojirotirgi hfc ^rikro`o hf Gevfstgkolgiefs fe Efurilgfelgos hf co VLZ.
- Fvocuor oqufccos liehglgiefs qu`glos y asglos eflfsorgos ( ihgaglolge
qu`glo hf co aosf `vgc4 pirlfetodf hf `ftoeic y pB= acudi fe `C/`ge,
tf`pfroturo fe L, lirrgfetf opcgloho fe `Q.s, lielfetrolge hf i-atocochfbhi y
loetghoh hf rfoltgvi hf hfrgvotgzolge `s ohfluoho poro co hfrgvotgzolge hf
o`geilghis fe ue roeki hf lielfetrolge), ti`oehi li`i josf cis rfsuctohis
ijtfeghis fe fstuhgis oetfrgirfs, os li`i, cis aueho`fetis qu`gli-asglis hf
co fxpfrg`fetolge.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:>
:. ZFQG\GE HF CGXFZOXVZO
:.? Aueho`fetis hf co Efuritroes gsge
- Efurieos y efurikcgo
Hfetri hfc sgstf`o efrvgisi fxgstfe his tgpis lfcucorfs4 cos lcucos
efurikcgocfs y cos efurieos. Cos efurieos sie cos lcucos rfspiesojcfs hf troes`gtgr
fc g`pucsi efrvgisi. Xihos cos efurieos pisffe ue lufrpi lfcucor, ue oxe, jitiefs
tfr`geocfs y hfehrgtos (agkuro ?). Fc lufrpi lfcucor lietgfef fc elcfi, fc luoc
lietrico co oltgvghoh lfcucor. Fc oxe, sf fxtgfehf aufro hfc lufrpi hf co efurieo y
pfr`gtf co troes`gsge hf sfocfs o itros efurieos. Cos hfehrgtos, quf sie
fxtfesgiefs lfcucorfs pfr`gtfe co troes`gsge hfc g`pucsi efrvgisi. (\tgrcgek, :>>:=Oehrfossg, :>>>).
Agkuro ?. Zfprfsfetolge fsquf`tglo hf ueo efurieo y sus portfs
@ihgaglohi hf4 \tgrcgek= :>>:
Cos lcucos kcgocfs pir su portf sie cos lcucos felOrkohos hf jrgehor siste
oc sgstf`o efrvgisi, ouequf `s rflgfetf`fetf sf cfs boe otrgjughi itros auelgiefs.Cis tgpis hf lcucos kcgocfs gelcuyfe4 cis icgkihfehrilgtis, co `glrikcgo, cis ostrilgtis
y cos lcucos hf \lbwoee (\tgrcgek, :>>:)
- Li`ueglolge getfrefurieoc
Coli`ueglolge getfrlfcucor fxgstf fe cis hgvfrsis tgpis ziickglis y fetrf
cis hgafrfetfs tfdghis y tgpis lfcucorfs (Aoeduc, ft oc= ?772). O lietgeuolge, sf
hfslrgjfe cos loroltfrstglos pripgos hf cos rfcolgiefs getfrefurieocfs, cis sujtgpis
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:?
hf li`ueglolge fxgstfetfs fetrf lcucos efrvgisos y cis tgpis hf `iclucos quf
getfrvgfefe fe fstf prilfsi.
Cos lcucos efrvgisos fste liefltohos o trovs hf sgeopsgs (lietoltis)
(agkuro :). Fc tr`gei sgeopsgs auf getrihulghi pir Lborcfs \bfrrgektie o prgelgpgis hfc
sgkci posohi poro hfslrgjgr co zieo fspflgocgzoho hf lietolti, fe co luoc, ueoefurieo sf li`ueglo lie itro. Fc oeoti`gsto, Zo`e y Lodoc, hfslrgjg co sgeopsgs
li`i ue sgtgi hf li`ueglolge getfrefurieoc li`pufsti hf trfs fcf`fetis4 ueo
tfr`geoc efrvgiso prfsgeptglo, ueo tfr`geoc pistsgeptglo y ue fspolgi sgeptgli.
Ohf`s hf cos sgeopsgs quf ueo efurieo fstojcflf lie itro, ockueos efurieos
fstojcflfe sgeopsgs lie lcucos `uslucorfs i lie lcucos sflrftiros (Zugz= :>>6=
Efstcfr, ft oc= :>>?= Borgs, D, ft oc= :>>>).
Agkuro :. Zfprfsfetolge fsquf`tglo hf ueo sgepsgs
@ihgaglohi hf4 Osilgolge fhulor, :>>1
Fxgstfe his tgpis hf li`ueglolge getfrefurieoc4 ueo hf tgpi fcltrglo y itro
hf tgpi qu`glo. Cos rfcolgiefs fetrf lcucos efurieocfs fe lietolti hgrflti, sf hoe
pir `fhgi hf g`pucsis fcltrglis. Fe ueo sgeopsgs fcltrglo, cos `f`jroeos
prfsgeptglo y pist sgeptglo sf tiloe y fc lgtipcos`o hf cos lcucos fst
fstrflbo`fetf getfrliefltohi pir `fhgi hf loeocfs geglis fspflgocfs cco`ohis
uegiefs fspolgisos, air`ohis o su vfz, pir sujueghohfs pritfglos cco`ohos
liefxgeos (agkuro
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
::
hf giefs), fetrf ueo lcuco y itro. Cos uegiefs fspolgisos prfsfetfs fetrf cos
lcucos efurieocfs privffe ueo vo hf jodo rfsgstfelgo (octo liehultoelgo) poro fc
posi hf co lirrgfetf fetrf co `f`jroeo prfsgeptglo y pistsgeptglo. Hglbo lirrgfetf
hfpisgto, o su posi, ueo lorko pisgtgvo, ci quf privilo ueo hfpicorgzolge hf co
`f`jroeo prfsgeptglo prg`fri, y co pistsgeptglo hfspus. Fe liesflufelgo, fc
acudi hf giefs o trovs hf uegiefs fspolgisos pfr`gtf co li`ueglolge fetrf ueo
lcuco y co sgkugfetf. Oeciko`fetf, o co loho hf cos pgfzos hf hi`gei licilohos
fe agco, fc g`pucsi efrvgisi sf fxpoehf hf ueo efurieo o co sgkugfetf, lie co
hgafrfelgo hf quf ueo vfz quf bo posohi pir fccos, cos efurieos vufcvfe o su
fstohi hf rfpisi geglgoc, o co fspfro hf ue eufvi g`pucsi efrvgisi (@ottbfws,K=
:>>>= Moehfc, ft oc= :>>>= \tgrcgek= :>>:).
Agkuro
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:>:= Aoeduc, ft oc= ?772= Zugz= :>>6).
Cos sgeopsgs qu`glos y fcltrglos `oetgfefe hgafrfelgos auelgieocfs
g`pirtoetfs, quf hfjfe sfr liesghfrohos. ^ir ueo portf, co sgeopsgs fcltrglo sf
utgcgzo fe hfpicorgzolgiefs sg`pcfs hf co `f`jroeo y ei poro ollgiefs gebgjgtirgos i
lo`jgis hf corko hurojgcghoh fe tfr`geocfs pistsgeptglos. Hf air`o lietrorgo, cos
sgeopsgs qu`glos pufhfe troes`gtgr sfocfs hf getfesghoh y tgf`pi vorgojcf, toeti
hf tgpi fxlgtotirgi li`i gebgjgtirgi y pir toeti, pufhfe prihulgr li`pirto`gfetis
`s li`pcfdis. @s oe, porflf fxgstgr ueo rfcolge fetrf fc egvfc hf
efuritroes`gsirfs y cis fstohis hf lielfetrolge, ueo `fdir i pfir `f`irgo, co
oesgfhoh y co hfprfsge, fetrf itris. Ohf`s, sf bo hf`istrohi quf `oegpucoehi
cis egvfcfs hf efuritroes`gsirfs `fhgoetf fc usi hf lgfrtos hrikos pufhfe
`ihgaglorsf fc bu`ir, cos f`ilgiefs y cos aoluctohfs likegtgvos ( Zugz= :>>6).
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:8
Agkuro 8. \geopsgs qu`glo4 cgjfrolge hf efuritroes`gsirfs.
@ihgaglohi hf4 \tgrcgek, :>>:
Agkuro 6. Acudi hf giefs o trovs hf ue loeoc ojgfrti fe co `f`jroeo hf ueo efurieopistsgeptglo.@ihgaglohi hf4 @ottbfws= :>>
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:6
:.: Efuritroes gsirfs
Cis efuritroes`gsirfs sie sustoelgos qu`glos quf sf felufetroe
fe fc sgstf`o efrvgisi y kuoe co troes`gsge hf cis g`pucsis fetrf cos efurieos o
trovs hf cos sgeopsgs (Ef`gob, ?771). \f boe fstojcflghi ilbi lrgtfrgis poro
hftfr`geor sg ue li`pufsti fs ue vfrhohfri efuritroes`gsir (Ef`gob, ?771).
Hglbis lrgtfrgis sf fxpiefe fe fc luohri ?.
Luohri ?. Ilbi lrgtfrgis poro hftfr`geor sg ue li`pufsti efurirfkucotirgi fs
ue vfrhohfri efuritroes`gsir
o. Co sustoelgo hfjf fstor prfsfetf fe efurieos prfsgeptglos, usuoc`fetf
fe ueo hgstrgjulge hfsgkuoc o trovs hfc lfrfjri.
j. Cis prfsursirfs hf efuritroes`gsirfs y cos fezg`os sgettglos hfjfefstor prfsfetfs fe co efurieo, usuoc`fetf prxg`os oc sgtgi hf ollge.
l. Co fstg`ucolge hf sgtgis oafrfetfs (tfr geocfs prfsgeptglos) hfjfe
privilor co cgjfrolge hf co sustoelgo fe loetghohfs agsgickglo`fetf
sgkegaglotgvos.
h. Cis rflfptirfs fspflaglis quf getfroloe lie co sustoelgo hfjfe
felietrosf prxg`is o cos efurieos prfsgeptglos.
f. Co getfrollge hf co sustoelgo lie sus rflfptirfs hfjf gehulgr lo`jgis fe
co pfr`fojgcghoh hf co `f`jroeo pistsgeptglo priviloehi ue pitfelgoc
gebgjgtirgi i fxlgtotirgi pistsgeptgli fe co lcuco pistsgeptglo.
a. Hfjfe fxgstgr `floegs`is fspflaglis hf geoltgvolge quf hftfekoe co
getfrollge hf co sustoelgo lie su rflfptir fe ue roeki hf tgf`pi
agsgickgli rozieojcf.
k. Cos getfrvfelgiefs hf hrikos hf tgpi okiegsto fe sgtgis pistsgeptglis
hfjfe g`gtor co ollge hf co sustoelgo y cis oetokiegstos hfjfe jciqufor
su faflti.
Aufetf4 Jriwe ,Z=?778
Fxgstfe vorgos lotfkiros hf efuritroes`gsirfs quf gelcuyfe4
efuritroes`gsirfs o`geiolhglis li`i lghi -o`geijutrgli (KOJO) y Kcuto`oti=
o`geos jgikeglos li`i co hipo`geo y co eirfpgefargeo= pptghis= kosfs li`i fc
xghi etrgli y eulcfsghis li`i ohfeisgeo (\tgrcgek,:>>:). Ockueis
efuritroes`gsirfs pri`ufvfe ue faflti fxlcusgvo`fetf fxlgtotirgi li`i fc
Kcuto`oti, i gebgjgtirgi, li`i fc KOJO. Itris efuritroes`gsirfs, pufhfe sfr
gebgjgtirgis fe lgfrtos sgeopsgs i fxlgtotirgis fe itros. Co vfrsotgcghoh lie co quf ue
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:1
troes`gsir gehulf rfspufstos hf lorltfr ipufsti, sf joso fe quf lgfrtos `iclucos
efuritroes`gsiros pufhfe uegrsf o rflfptirfs hgstgetis. ^ir fdf`pci, co olftgclicgeo
(Olb), pisff ueo geacufelgo fxlgtotirgo fe cis rflfptirfs cco`ohis Olb egliteglis y
ueo geacufelgo gevfrso fe itri tgpi hf rflfptirfs cco`ohis4 Olb `usloreglis
(\tgrcgek,:>>:). Fe fc luohri : sf `felgieoe ockueis hf cis efuritroes`gsirfs `s
g`pirtoetfs hfc sgstf`o efrvgisi, su lcosgaglolge y fstrulturo qu`glo.
Luohri :. Lotfkiros hf Efuritroes`gsirfs y sus fstrulturos
Lotfkiro Efuritroes gsir Fstrulturo
O.Xroes`gsirfs
o`geiolhglis
- Gebgjgtirgis4
KOJO
Kcylgeo
- Fxlgtotirgis4Kcuto`oti
Osportoti
J.@ieio`geos
- Lotflico`geos4
Eirfpgefargeo
Hipo`geo
Fpgefargeo
- Gehico`geos
\fritiegeo
L.Efuritroes`gsirfs
licgerkglis Olftgclicgeo
H. Efuripptghis\ustoelgo ^
@ft- felfaocgeo (fehirageo)
A. Eulcfsghis Ohfeisgeo
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:;
K.Kosfs Ixghi Etrgli E0I
Aufetf4 Orscoe, :>>?= Efstcfr, ft, oc= :>>?.
:.>8= Mospfr, ft oc=
:>>>>1).
\f bo hf`istrohi, quf fc Kcuto`oti pufhf sfr efuritxgli jodi lgfrtos
liehglgiefs hf lielfetrolge y tgf`pi hf fxpisglge lfcucor. ^ir fdf`pci, sg ueo
vfz quf fc Kcuto`oti bo sghi cgjfrohi oc fspolgi sgeptgli, ei fs rfloptohi
eufvo`fetf i hfkrohohi, y pfr`oeflf fe fc fspolgi fxtrolfcucor pir ue tgf`pi
priciekohi, pufhf rfsuctor efuritxgli (Jom, ft, oc= :>>1).
\f fstg`o quf co lielfetrolge eir`oc hf Kcuto`oti fe lfrfjri fs hf ?>`@
getrolfcucor`fetf, y hf :-6` fxtrolfcucor`fetf. @s fspflaglo`fetf, sf fstg`o
quf co lielfetrolge hf Kcuto`oti fe cos vfslucos sgeptglos pufhf ocloezor ue
roeki hf 1>-:?>`@ y fe fc `i`feti fe fc quf sf pripoko fc g`pucsi efrvgisi, sf
pufhfe cgjfror fe loho sgeopsgs, fetrf :>>> y 6>>> `iclucos hf Kcuto`oti. Lie co
oltgvolge hf co sgeopsgs, fc fspolgi sgeptgli pufhf ocloezor lielfetrolgiefs hf ?-
6 `@ hf Kcuto`oti. Cos `iclucos hf Kcuto`oti pufhfe rflirrfr pir hgausge, ueo
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:2
hgstoelgo hf >.6 o ? ` poro pihfr oltgvor cis rflfptirfs Kcuto`otrkglis
lirrfspiehgfetfs fe co `f`jroeo pistsgeptglo (Jom, ft, oc= :>>1).
Cis rflfptirfs hf Kcuto`oti pufhfe hgvghgrsf fe his tgpis4 gieitrpglis y
`ftojitrpglis. Cis prg`fris lirrfspiehfe o loeocfs geglis fspflaglis poro
lotgiefs y sfke fc tgpi hf `icluco quf cis oltgvf (okiegsto), sf lcosgagloe fe
rflfptirfs @@HO (E-`ftgc-H-osportoti), O@^O (-o`gei->8= Jom, ft oc= :>>1=
\gfkfc ft oc= ?778=).
Li`i auf `felgieohi oetfrgir`fetf, itri tgpi hf rflfptirfs hf Kcuto`oti,sie cis rflfptirfs `ftojitrpglis. Cis rflfptirfs `ftojitrpglis sf felufetroe
olipcohis o pritfeos K, cos luocfs, pfr`gtfe fc olipco`gfeti hfc rflfptir o
fezg`os lgtipcs`glos (agkuro 1). Fstis rflfptirfs gehulfe fe hgstgetis tgpis
lfcucorfs fc ou`feti hf cis egvfcfs hf loclgi getrolfcucor pir `fhgi hf co bghrcgsgs
hf `iclucos hf aisaotghgcgeisgtic, ci quf g`pcglo itri `floegs`i hf troeshullge hf
sfoc, fe fc luoc, sf hfsfelohfeoe loslohos `ftojcglos li`pcfdos luyi rfsuctohi
fs co oltgvolge hf co auelge lfcucor. ^oro ueo ghfo `s lcoro, fc `floegs`i hf
oltgvolge hf cis rflfptirfs `ftojitrpglis y pir fehf hf loslohos `ftojcglosgetrolfcucorfs sf kfefro hf co sgkugfetf air`o (agkuro ;)4 co uege hf ue okiegsto oc
rflfptir prihulf co oltgvolge hf ueo aisaihgfstfroso (aisaicgposo L i ^CL), co luoc,
lotocgzo co bghrcgsgs hf aisaotghgcgeisgticfs hf `f`jroeo. Fc prg`fr prihulti hf co
rfollge fs fc aisaotghgcgeisgtic-8,6 jgs aisaoti (^G^:), fc luoc to`jge fs bghricgzohi
fezg`tglo`fetf, prihulgfehi geisgtic ?,8,6 trgaisaoti (G^
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
:7
jcoelis lfcucorfs (qugeosos, aisaotosos, loeocfs geglis, itris). HOK pir su portf,
rfhulf fc rfqufrg`gfeti hf loclgi hf ueo fezg`o hfpfehgfetf hf Lo:+ , cco`oho
qugeoso L (^ML ), ci quf liesflufetf`fetf ou`feto su oltgvghoh. Co oltgvolge hf
rflfptirfs `ftojitrpglis rfsucto to`jge fe co oltgvolge hf itris `fesodfris
sfluehorgis li`i fc lghi oroqughegli, fc luoc, geacuyf fe co prihullge hf
cfulitrgfeis y pristoekcoehgeos (rfcolgieohis lie co li`ueglolge lfcucor y
oltgvghoh bir`ieoc)= y fe co oltgvolge hf kuoegcgc lglcoso y ohfegcgc lglcoso,
g`pirtoetfs fe co prihullge hf K@^ llcgli y O@^ llcgli rfspfltgvo`fetf (agkuro
;). Fetrf itros lisos, fc popfc quf hfsf`pfoe cis rflfptirfs `ftojitrpglis, fe
fc `i`feti fe fc quf sf kfefro fc g`pucsi efrvgisi, fs co `ihucolge hfc
li`pirto`gfeti fcltrgli efurieoc. Ci ctg`i, sf hfjf o quf cis loeocfs geglis,
sie uei hf cis sustrotis hf cis `fesodfris getrolfcucorfs kfefrohis o portgr hf co
oltgvolge hf cis rflfptirfs `ftojitrpglis (agkuro 1). Oc `gs`i tgf`pi, porflf quf
cis rflfptirfs `ftojitrpglis sie lopolfs hf geacufelgor co troes`gsge sgeptglo
toeti fe fc sgtgi prfsgeptgli li`i fe fc pistsgeptgli. Fxgstfe oc `feis sgftf
sujtgpis hf rflfptirfs `ftojitrpglis (`KcuZ G,GG,GGG,ftl), lcosgaglohis y okrupohis
sfke su bi`iciko hf sflufelgo, aor`oliciko y olipco`gfeti o `floegs`is hf
sfocgzolge getrolfcucor (Liee, ?778= Korlo, ft oc= :>>8= Jom, ft oc= :>>1= \gfkfc ft
oc= ?778=).
Agkuro 1. Hgokro`o hf uei hf cis `floegs`is hf ollge pir `fesodfris sfluehorgis
`fhgohis pir pritfeo K. Fc efuritroes`gsir sf uef o su rflfptir hf `f`jroeo kfefroehi
co oltgvolge hf co pritfeo K, co luoc, o su vfz prihulf co oltgvolge hf fezg`os quf
kfefroe `fesodfris sfluehorgis getrolfcucorfs. Fstis ctg`is gehulfe co opfrturo hf
loeocfs geglis, luyi rfsuctohi ageoc fs fc pitfelgoc pistsgeptgli.
@ihgaglohi hf4 Efstcfr, :>>?.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
Agkuro ;. @ihfci `s li`pcfdi hf co oltgvolge hf loslohos lfcucorfs pir `fhgi hf
rflfptirfs `ftojitrpglis. Co vo hf co bghrcgsgs hf aisaotghgcgeisgticfs hf `f`jroeo, sf
gcustro oc cohi hfrflbi hf co agkuro. O co gzqugfrho y oc lfetri, sf gcustroe itros vos hf
oltgvolge hf `fesodfris sfluehorgis geviculrohis fe co oltgvolge hf loeocfs geglis.
QILL4 loeocfs hf loclgi ipfrohis pir victodf= gKcuZ4 rflfptirfs gieitrpglis hf Kcuto`oti
(g.f @@HO)= Lo@MGG4 pritfeo qugeoso L GG, hfpfehgfehf hf loclgi/loc`ihucgeo= lO@^4 O@^
llcgli= OL4 Ohfegcgc lglcoso= ^MO4 pritfeo qugeoso O= ^CL4 Aisaicgposo L= ^G4 aisaotghgc
geisgtic= G^:.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
>`@. ^ir itri cohi, co lielfetrolge hf KOJO fe fc
cqughi getfrstglgoc sf `oetgfef o egvfcfs `uy jodis (3?@) (Mospfr ft oc= :>>
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
>8= Boyworh, :>>>>>>8).
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
>>
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
>1=\lbuc`oe,Z ft oc= :>>8).
^ir itro portf, fe co sgeopsgs KOJOrkglo, fc efuritroes`gsir KOJO fs
ti`ohi fe co tfr`geoc prfsgeptglo i jgfe, loptohi pir cis ostrilgtis lgrluehoetfs.
Fe cis ostrilgtis, fc KOJO fs `ftojicgzohi fe his posis o sullgeoti, fc luoc, fs
pistfrgir`fetf `ftojicgzohi fe -mftiKcutoroti (-MK). Fstf ctg`i li`pufsti, fs
o su vfz troesair`ohi fe Kcuto`oti. Fe co efurieo, fc KOJO fs sgetftgzohi hfeufvi, o portgr hf Kcuto`oti, pir `fhgi hf co fezg`o Kcuto`oti hfslorjixgcoso
(KOH). (agkuro 7j) (Jom,C=:>>1=\lbuc`oe,Z ft oc= :>>8).
Ohglgieoc fetf, sf sukgfrf quf co Kcuto`geo pihro sfr sgetftgzoho o portgr
hf sullgeoti vo fc lglci hf cis lghis trglorjixcglis (Jom,C=:>>1=\lbuc`oe,Z ft oc=
:>>8).
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
>1
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
. @ihfci hfc sgstf`o c`jgli sfke ^opfz y @ol Cfoe.
Aufetf4 Fysfelm, ft oc= :>>8
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
>8).Fe fstf sfetghi, fc lfrfjri fs fc
getrprftf hf ci quf fs ue fstrfsir y liirhgeo cos rfspufstos agsgickglos y hf
li`pirto`gfeti eflfsorgos prfvgos, huroetf y pistfrgirfs o hglbi fvfeti
(^oemsfpp, :>>>8= \bu`omf,D= :>>>8= \bu`omf,
ft oc= :>>>>6= \bu`omf,:>>>>6). \f bo
pripufsti quf cis `floegs`is sujyolfetfs o co hfprfsge y co oesgfhoh, pihroeli`portgr lie fc `gfhi liehglgieohi y ei liehglgieohi, ockueos rutos `ftojcglos
(Kir`oe ft oc, :>>8= Zisfe= :>>8). ^ir itri cohi, sf sukgfrf to`jge quf co
hfprfsge y co oesgfhoh sie pisgjcf`fetf `floegs`is sijrffxprfsohis i hf
rftriocg`fetolge sistfegho hfc `gfhi (\bucmge= :>>8). Fs hflgr, quf cos pfrsieos
quf suarfe hf oesgfhoh potickglo i hfprfsge, pihroe rfspiehfr fe air`o
geopripgoho oetf fst`ucis `ihfrohis hf o`feozo gelcusgvf luoehi sto ei fs
ge`gefetf (\lbucmge, :>>8).
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
>:).
- Hfprfsge - Hfageglge y sgeti`oticiko
Bgstrglo`fetf, co hfprfsge auf jgfe loroltfrgzoho pir pfesohirfs y
agcsiais krgfkis li`i Bgplrotfs y Kocfei. Co pfrsieo hfprfsgvo auf hfslrgto li`i
si`jro y pfsg`gsto, tfehgfetf o fsliehfrsf y o pohflfr hf gesi`egi, grrgtojcf y
`ocbu`iroho (Kgcjfrt,?77:).
Oltuoc`fetf, co hfprfsge bo sghi hfslrgto li`i ue hfsirhfe oafltgvi, fe fc
luoc, ilurrf ueo hgs`geulge hfc fstohi hf eg`i, quf gebojgcgto o co pfrsieo o
sfetgr pcolfr y quf lrfo sfetg`gfetis hf hfsfspfroezo y ueo prhgho fe fc getfrs
pir cos oltgvghohfs hgorgos ([gcjiure, ft oc= :>>>:). Ohf`s, co hfprfsge pufhf prfsfetor ue
troscopf lie `oegafstolgiefs si`tglos li`i hicirfs hf lojfzo, hf fspocho y
prijcf`os kfegtiurgeorgis (Gestgtutf ia fhglgef, :>>?).
Fsto feafr`fhoh pufhf oporflfr fe luocqugfr `i`feti hf co vgho ouequf co
gelghfelgo fs `ulbi `oyir fe co `ohurfz. Fe Listo Zglo, co hfprfsge oaflto o
`s `udfrfs quf bi`jrfs. Xgfef ueo gelghfelgo hf >:), fxpfrtis o egvfc `uehgoc fstg`oe quf
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
ois co hfprfsge sf lievfrtgr fe co prgelgpoc feafr`fhoh `uehgoc
(@gegstfrgi hf \ocuh, :>>:).
- Xgpis hf hfprfsge
Co hfprfsge pufhf ti`or vorgos air`os, hfpfehgfehi hfc tgpi hf
sgeti`oticiko f getfesghoh. ^ir ueo portf, sf felufetro co hfprfsge uegpicor, quf
fs oqufcco fe co quf fc trostirei oafltgvi sf loroltfrgzo pir sfetg`gfetis hf trgstfzo
i prhgho eglo`fetf. Losi lietrorgi hf cis hfsrhfefs oafltgvis jgpicorfs, fe
hiehf co hfprfsge octfreo lie fstohis hf bgpfroltgvghoh i hf fxtrf`o `oeo (vfr
agkuro ??) ([gcjiure, ft oc= :>>>>).
Agkuro ??. Xi`ikroao hf f`gsge hf pisgtriefs hf ueo pfrsieo lie hfsirhfe jgpicor. Co
g`okfe `ufstro ueo octfreoelgo fetrf fstohis hfprfsgvis y hf `oego, fe ue lursi hf ?>
hos. Cis licirfs ozuc y vfrhf gehgloe egvfcfs jodis hf oltgvghoh lfrfjroc, `gfetros quf cis
licirfs ridi, oeoroedohi y o`orgcci gehgloe octis egvfcfs hf oltgvghoh. Aufetf4 ^bfcps, sge
aflbo.
Huroetf cis fpgsihgis hf `oeo, cos pfrsieos sf felufetroe ccfeos hf
fefrko, hfsloesohos y fetusgos`ohos. ^ufhfe sfr gelcusgvf grrgtojcfs. Huroetf cis
fpgsihgis hfprfsgvis tgfefe liestoetfs sfetg`gfetis hf trgstfzo y hfsfspfroezo
(^folilm= :>>>, [gcjiure, ft oc= :>>
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
8>
pufhf prfsfetorsf pir pfrihis hf tgf`pi liesghfrojcfs, gelcusgvf ois. Fsto
feafr`fhoh fs `s arflufetf fe `udfrfs quf fe bi`jrfs. ^fsf o co cfvfhoh hf
sus seti`os, co hgstg`go, pufhf vfrsf troscopoho lie fpgsihgis hfprfsgvis krovfs
([gcjiure,ft oc= :>>>>>>). Ohglgieoc`fetf, sf bo sukfrghi quf huroetf fpgsihgis hf fstrs sf
rfhulf co toso efurikeglo fe fc kgri hfetohi, ci luoc, ou`feto co prijojgcghoh hf
pohflfr hfprfsge (Dolijs, ft oc= :>>>). Oueohi o fsti porflf bojfr ueohgs`geulge hf co uege hf sfritiegeo o rflfptirfs ujglohis fe fc cjuci tf`piroc
`fhgoc y itros rfkgiefs efilirtglocfs (Audgto, ft oc= :>>>). Ageoc`fetf, sf boe
pripufsti itros rfos quf pihroe fstor oafltohos huroetf co hfprfsge li`i4 fc
lirtfx lgekucohi oetfrgir, co o`khoco, fc lfrfjfci y cis elcfis josocfs (agkuro ?:)
([gcjiure, ft oc= :>>
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
8?
Agkuro ?:. ^isgjcfs rfos lfrfjrocfs oafltohos fe fpgsihgis hfprfsgvis uegpicorfs y
jgpicorfs.@ihgaglohi hf4 [gcjiure,ft oc= :>>
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
8:
Agkuro ?< . ^ripufsto hfc jocoelf jgiqu`gli fe pfrsieos soeos y fe pfrsieos lie
hfprfsge. @ihgaglohi hf4 [gcjiure, ft oc= :>>>>?).
- Oesgfhoh
Hfageglge y sgeti`oticiko
Co oesgfhoh air`o portf hf co vgho litghgoeo. \ge f`jOrki, co oesgfhoh, oc
gkuoc quf co hfprfsge pufhf sfr ueo f`ilge eir`oc i ue trostirei psgqugtrgli.
@gfetros quf egvfcfs jodis hf oesgfhoh pufhfe sfr pisgtgvis, krohis `ihfrohis i
octis hf oesgfhoh pufhfe prfvocflfr fe air`o hf ueo getfeso oekustgo (^ory,Z, ft
oc, :>>>:).
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
8>>:).
Cis trostireis hf oesgfhoh fste loroltfrgzohis pir ueo li`jgeolge hf
vorgis seti`os4 fxlfsgvo oesgfhoh, hfsosisgfki, tfesge, oprfesge, prfilupolge,
fvosge y rgtuocfs li`pucsgvis. Fxgstfe ockueis lrgtfrgis poro hgafrfelgor co oesgfhoh
potickglo hf co oesgfhoh eir`oc4
?. Luoehi sf prfsfeto lie `oyir getfesghoh y/i hurolge hf ci fspfrohi
usuoc`fetf. ^oro fcci fs g`pirtoetf liesghfror fc lietfxti ao`gcgor, silgoc y
lucturoc, os li`i su li`pirto`gfeti y fxpfltotgvos.
:. Luoehi lieccfvo o ueo gelopolghoh fe co getfrollge silgoc, ilupolgieoc i
getfrpfrsieoc.
>>:).
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
88
Cos fstohstglos `uehgocfs olfrlo hf co gelghfelgo hf co oesgfhoh, voroe
o`pcgo`fetf sfke cis lrgtfrgis opcglohis poro su hgokestgli, pfri fe kfefroc co
arflufelgo fs fcfvoho. Fe Listo Zglo, sfke fstuhgis hf Zflursis Bu`oeis hf co
LL\\, cis trostireis hf oesgfhoh iluporie fc qugeti cukor li`i louso hf
gelopolghoh cojiroc fetrf f`pcfohis hf co gestgtulge. Ohglgieoc`fetf, ue fstuhgi
ccfvohi o loji bolf `s hf hgfz ois, pir Ohgs Lostri, fe fc loete hf
Hfso`porohis, rfvfc fe co pijcolge fstuhgoho ueo prfvocfelgo hf :1,;% hf
sgeti`oticiko oesgiso. \ge f`jOrki, ei fxgstfe fstuhgis fpghf`gickglis oltuocfs
hf co gelghfelgo i prfvocfelgo hf co oesgfhoh fe co pijcolge listorrglfesf
(@gegstfrgi hf \ocuh, :>>8).
Ei ijstoetf, fe fstuhgis ccfvohis o loji hfetri hf cis Fstohis Veghis , sf
fstg` quf :6% hf cis ohuctis, suargre fe ocke pueti hf sus vghos, ueo hf cos sfgs
air`os hf oesgfhoh hfslrgtos4 hfsirhfe hf pegli, quf liesgstf fe otoqufs
g`prfhflgjcfs y rpghis hf getfeso oesgfhoh= hfsirhfe hf oesgfhoh kfefrocgzoho,
loroltfrgzohi pir ueo prfilupolge fxlfsgvo fe `ctgpcfs rfos= hfsirhfe hf
oesgfhoh silgoc, loroltfrgzohi pir `gfhi y fvosge hf sgtuolgiefs silgocfs= aijgos
fspflaglos, eitojcfs pir ue getfesi tf`ir o hftieoetfs fspflaglis= hfsirhfe hf
fstrs pistrou`tgli, lousohi pir fc rflufrhi hf f`irgos trou`tglos= y hfsirhfe
hf ijsfsgvghoh-li`pucsgvghoh, loroltfrgzohi pir li`pirto`gfetis ijsfsgvis-
li`pucsgvis li`i ue getfeti hf co pfrsieo quf ci pohflf pir rfhulgr co oesgfhoh.(Kirhie, :>>8).
Fs g`pirtoetf rfsoctor quf co oesgfhoh y co hfprfsge sie feafr`fhohfs quf
pufhfe prfsfetorsf sg`uctefo`fetf. @uy arflufetf`fetf, o`jos feafr`fhohfs
lifxgstfe, hf air`o quf sf ho ue troscopf hf seti`os fetrf o`jos liehglgiefs,
quf pufhfe hgrgkgr o lieausgiefs fe fc hgokestgli. Fe fstuhgis, rfocgzohis fe cis
Fstohis Veghis, sf fstg` quf co lir`ijgcghoh hf hglbos feafr`fhohfs, sf
felufetro pir felg`o hf ue 6>%. Fvghfelgo hf fcci bo sghi fc usi hf lgfrti e`frihf okfetfs poro trotor o`jos feafr`fhohfs= cis `gs`is efuritroes`gsirfs fste
geviculrohis fe o`jos liehglgiefs= y fc fstrs pufhf lrfor ueo prfhgspisglge o
pohflfr luocqugfro hf cos his liehglgiefs i o`jos (Eutt= :>>8).
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
86
- Agsgipoticiko hf co oesgfhoh
rfos lfrfjrocfs geviculrohos fe co oesgfhoh4
Cis fstuhgis hf g`kfefs, os li`i fstuhgis hf cfsge y `glrigeyfllge feoeg`ocfs, boe g`pcglohi vorgos fstrulturos hfc lfrfjri fe hfsrhfefs hf oesgfhoh,
gelcuyfehi co o`khoco, fc bgpilo`pi, fc kgri lgekucohi, fc bgpitco`i y itros
rfkgiefs lfrfjrocfs (agkuro ?8).
Agkuro ?8. ^rijojcfs vos sfritierkglos y rfkgiefs jcoeli fe hfsrhfefs hf oesgfhoh.
Ojrfvgoturos4 KOH4 hfsirhfe kfefrocgzohi hf oesgfhoh= \OH4 hfsirhfe hf oesgfhoh silgoc=
ILH4 hfsirhfe hf ijsfsgvghoh-li`pucsgvghoh= ^H4 hfsirhfe hf pegli.
@ihgaglohi hf4 Eutt, :>>8
- Jgiqu`glo hf co oesgfhoh
Fc fstuhgi hf co ollge aor`olickglo hf lgfrtos sustoelgos, fc oecgsgs
efurijgickgli hf cis hfsrhfefs hf oesgfhoh y fc f`pcfi hf `ihfcis hf oesgfhoh
fe oeg`ocfs, bo pfr`gtghi co ghfetgaglolge hf efuritroes`gsirfs y sgstf`os efurocfs
geviculrohis fe co gelghfelgo hf co oesgfhoh. Hfetri hf cis `fhglo`fetis `s
utgcgzohis poro fc troto`gfeti hf co oesgfhoh, sf felufetroe cos jfezihgozfpgeos y
cis gebgjghirfs hf co rfloptolge sfcfltgvo hf sfritiegeo (\\ZGs, pir sus sgkcos fe
gekcs), quf `ihucoe co efuritroes`gsge `fhgoho pir sfritiegeo y lghi -
o`geijutrgli (KOJO), rfspfltgvo`fetf. Fstis his efuritroes`gsirfs boe
hf`istrohi tfefr ue popfc g`pirtoetf fe hfsrhfefs hf oesgfhoh. Os`gs`i, fe
fstuhgis aor`olickglis hf co oesgfhoh, sf bo vgsti g`pcglohi fc sgstf`o
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
81
eirohrferkgli, fspflgoc`fetf fe hfsrhfefs hf pegli. Fstuhgis sijrf co
agsgiciko hfc fstrs fe oeg`ocfs y bu`oeis bo sukfrghi ue ric prfpiehfroetf hfc
sgstf`o ohrfeilirtgloc (g`pcglohi to`jge fe hfprfsge) y su rfkucohir
efuripfpthgli, co bir`ieo cgjfrohiro hf lirtglitripgeo (LZB), fe hfsrhfefs hf
oesgfhoh, li`i sf felgieo oetfrgir`fetf fe fstf trojodi (Kirhie, :>>8).
:.; Lri`otikroao Cqugho hf Octo Zfsiculge
Aueho`fetis
Co lri`otikroao fs ue `tihi hf sfporolge asglo, fe co luoc, cis
li`piefetfs o sfr sfporohis sf hgstrgjuyfe sfcfltgvo`fetf fetrf his aosfs
g`@gslgjcfs4 ueo aosf `vgc acuyf o trovs hf ueo aosf fstolgieorgo (Egfssfe, ft oc=
?777). Cis li`piefetfs hf ueo `fzlco sf sfporoe lri`otikraglo`fetf oc
getfrollgieor lie hglbos aosfs. Oqufccis sicutis lie `oyir oageghoh pir co aosf `vgc
sf `ivfre `s rpgho`fetf quf oqufccis sicutis lie `oyir oageghoh pir co aosf
fstolgieorgo. Cos hgafrfelgos fe oageghoh sf hfjfe oc to`oi y fstrulturo `icflucor,
o co hgstrgjulge hf lOrkos, o co aufrzo hf cis lo`pis fcfltristtglis hf krupis
lOrkohis, oc krohi hf bghriaijglghoh y o co prfsfelgo hf pufetfs hf bghrkfei. ^ir
ci oetfrgir, co hgstrgjulge hf cis sicutis o trovs hf ueo licu`eo pufhf
liesghfrorsf li`i fc rfsuctohi hf hgvfrsis tgpis hf aufrzos `icflucorfs hf hgstgetoeoturocfzo y `okegtuh. Fe tr`geis asgli-qu`glis, luoehi fc sicuti getfrolto lie
co aosf fstolgieorgo, suarf ue lo`jgi fe su fefrko cgjrf, quf sf hfjf o lo`jgis fe
co fetocpo rfprfsfetoho pir aufrzos getfr`icflucorfs= y o lo`jgis fe co fetripo
rfacfdoho fe ueo rfstrgllge hfc `ivg`gfeti i jgfe fe ue g`pfhg`feti poro `ivfrsf
fe air`o ocfotirgo (Lozfs= :>>?= Lozfs, ft oc= :>>:).
Vei hf cis `tihis lri`otikraglis `s utgcgzohis fe co oltuocghoh, fs co
Lri`otikroao Cqugho hf Octo Zfsiculge i B^CL (pir sus sgkcos fe gekcs). Cotleglo fs utgcgzoho fe ue o`pcgi roeki hf oltgvghohfs gehustrgocfs lgfetaglos y
oloh`glos, tocfs li`i fc oecgsgs hf ocg`fetis, hrikos y okriqu`glis. Osg`gs`i,
fsto tleglo bo hfsf`pfohi ue popfc g`pirtoetf fe co gevfstgkolge hf
hfsfqugcgjrgis `icflucorfs loroltfrstglis fe prilfsis potickglis. ^ir fdf`pci, fc
oecgsgs luoetgtotgvi hf efuritroes`gsirfs prfsfetfs fe fc cqughi lfaocirroquhfi,
prihultis hf `glrihgcgsgs y bi`ikfefgzohis hfc lfrfjri hf `o`afris, bo
pfr`gtghi co hftfllge hf oei`ocos rfcolgieohos lie feafr`fhohfs hfc sgstf`o
efrvgisi lfetroc y pfrgargli, tocfs li`i cos feafr`fhohfs hf Oczbfg fr, ^ormgesie,
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
8;
Buetgektie, trostireis hfprfsgvis, hf oesgfhoh, fpgcfpsgo y fsqugziarfego. Hf co
`gs`o air`o, fsto tleglo bo sghi utgcgzoho poro fstuhgor cis roekis agsgickglo`fetf
eir`ocfs, fe polgfetfs soeis (By`oe, ft oc= :>>1).
\gstf`o lri`otikragli
Hf `oefro kfefroc, ue sgstf`o lri`otikragli fst lieair`ohi pir cos
sgkugfetfs portfs4 geyfltir, ji`jo, licu`eo, hftfltir y sgstf`o hf rfkgstri (vfr
agkuro ?>).
Agkuro ?6. Fsquf`o kfefroc hf ue sgstf`o lri`otikragli. @ihgaglohi hf Egfssfe,
ft oc= ?777.
Fc prilfsi hfc oecgsgs lri`otikragli geglgo lie co geyfllge hf co `ufstro o
oeocgzor, fe fc pufrti hf geyfllge. Fs fetielfs luoehi co `ufstro sf gelirpiro oc
louhoc hf co aosf `vgc, co luoc, o su vfz fs g`pucsoho o trovs hf cos tujfros hfc
sgstf`o pir `fhgi hf co ollge hf ueo ji`jo hf octo prfsge. Co `ufstro
gelirpiroho oc louhoc fs troespirtoho bosto co licu`eo, hiehf fs sfporoho fe
hgafrfetfs portfs, hf olufrhi oc tgpi hf getfrollge qu`glo hf loho uei hf sus
li`piefetfs (Egfssfe, ft oc = ?777).
\f hglf quf cos licu`eos sie fc liroze hfc sgstf`o lri`otikragli. Fstos
fste aojrglohos lie `otfrgocfs li`i olfri geixghojcf y/i vghrgi. Cos licu`eos
fste usuoc`fetf f`polohos lie `otfrgocfs pirisis (>,6-:`), o trovs hf cis
luocfs sf prihulf ueo getfrollge fetrf cis hgstgetis li`piefetfs hf co `ufstro, co
aosf `vgc y co aosf fstolgieorgo. Fc rfsuctohi fs co sfporolge hf li`piefetfs i
oeocgtis sfke su tgpi hf oageghoh qu`glo. Ageoc`fetf, ue hftfltir lopto cos
sfocfs prihulghos pir loho uei hf cis fcf`fetis hf co `ufstro y trohulf co sfoc
o ue irhfeohir quf rfkgstro hglbi fst`uci fe air`o hf pgli, lie tgf`pis hf socgho
(tgf`pis hf rftfelge) hgstgetis, cis luocfs pufhfe sfr loroltfrstglis hfc oeocgti sg
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
82
sf oetgfefe cos gs`os liehglgiefs hf oecgsgs (pB, tf`pfroturo, li`piefetfs hf
co aosf `vgc, aosf fstolgieorgo, victodf f ehglf hf acudi) (Egfssfe, ft oc= ?777).
Xgpis hf lri`otikroao cqugho
Co lcosgaglolge hf cos tleglos lri`otikraglos, sf joso fe fc tgpi hf
`floegs`i hf hgstrgjulge opcglohi huroetf co sfporolge. Fe co prltglo, co `oyiro
hf cos sfporolgiefs sie fc rfsuctohi hf `floegs`is hf sfporolge `gxtis
(Egfssfe, ft oc= ?777).
His hf cis tgpis hf sfporolge pir lri`otikroao cqugho `s lieilghis, sie
co sfporolge fe aosf eir`oc y co sfporolge fe aosf rfvfrso (Egfssfe, ft oc= ?777).
Co lri`otikroao hf aosf eir`oc, liesgstf fe ueo aosf fstolgieorgo
rfcotgvo`fetf picor y fe ueo aosf `vgc rfcotgvo`fetf ei picor. Fe fstf tgpi hf
sfporolge, cis oeocgtis `feis picorfs sie cis quf fcuyfe hf prg`fri (Egfssfe, ft
oc= ?777= Jghcgek`fyfr= ?77:).
^ir itri cohi, co sfporolge fe aosf rfvfrso liesgstf fe ueo aosf
fstolgieorgo ei picor y ueo aosf `vgc picor. Fs hflgr, quf fe fc `tihi hf
lri`otikroao fe aosf rfvfrso, cos `iclucos sf uefe bghriajglo`fetf o cgkoehisei picorfs fe prfsfelgo hf ue sicvfetf picor. Cis cgkoehis `s li`uefs sie cis
krupis iltgc (L2) y iltohflgc (L?2). Lietrorgo`fetf, oc tgpi hf sfporolge fe aosf
eir`oc, fe co lri`otikroao fe aosf rfvfrso, cis oeocgtis `s picorfs sie cis quf
fcuyfe hf prg`fri (Lozfs, :>>?= Egfssfe, ft oc = ?777= Jghcgek`fyfr= ?77:).
Co tleglo hf lri`otikroao fe aosf rfvfrso fs hf kroe vocir poro fc oecgsgs
hf sustoelgos picorfs y oeocgtis geglis, gelcuyfehi fc oecgsgs hf o`geilghis y
pptghis. Fe cis ctg`is ois, co lri`otikroao fe aosf rfvfrso o pfr`gtghi ue kroeovoelf fe fc fstuhgi hf pptghis y o`geilghis. Co rfsiculge y co faglolgo hfc
`tihi, bo pfr`gtghi fc ogsco`gfeti hf pptghis y o`geilghis, hf oeocgtis hf
fstrulturo qu`glo sg`gcor (Lozfs, :>>?= Egfssfe, ft oc = ?777).
Hftfllge fcfltriqu`glo
Fxgstfe hgvfrsis tgpis hf hftfltirfs fe lri`otikroao. Ockueis hf stis
gelcuyfe cis hf hftfllge uctrovgicfto-vgsgjcf, rfarolt`ftris, hf acuirfslfelgo y
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
87
fcfltriqu`glis. Oqu sf bolf rfafrfelgo oc tgpi hf hftfllge utgcgzoho fe fstf
pritilici4 co hftfllge fcfltriqu`glo (Egfssfe, ft oc= ?777= orvfz= ?72;).
Cis hftfltirfs fcfltriqu`glis sf josoe fe co `fhglge hf co lirrgfetf
fcltrglo rfsuctoetf hf co lievfrsge ixghotgvo i rfhultgvo hf ue oeocgti fe co
supfaglgf hfc fcfltrihi (Egfssfe, ft oc= ?777= ^orvfz= ?72;).
Fc `floegs`i fspflagli hf hftfllge fcfltriqu`glo liesgstf fe ci
sgkugfetf4 ue pitfelgoc fcltrgli hf suaglgfetf `okegtuh fs opcglohi o ue fcfltrihi hf
trojodi, usuoc`fetf bflbi hf lorje (pufhf sfr `ftoc), sijrf fc luoc, poso fc
oeocgti o `fhgho quf sf cgjfro hf co licu`eo, ci luoc prihulf ueo rfollge hf
ixgholge i rfhullge. Fc acudi hf fcfltriefs prilfhfetfs hfc fcfltrihi hf trojodi
bolgo fc oeocgti i vglfvfrso, pufhf `fhgrsf li`i ueo lirrgfetf luyo `okegtuh fs
pripirlgieoc o co lielfetrolge hfc oeocgti quf poso o trovs hfc hftfltir.
Kfefroc`fetf, fc pitfelgoc (victodf) hfc fcfltrihi sf fslikf hf air`o quf co
vfcilghoh hf co rfollge (troesafrfelgo hf lOrko) fe co supfraglgf hfc fcfltrihi, sfo
`s rpgho quf co troesafrfelgo hf `oso o trovs hf hglbo supfraglgf (^orvfz=
?72;).
^oro `fdiror co sfesgjgcghoh y sfcfltgvghoh hfc `tihi lri`otikragli sf boe
lrfohi fcfltrihis huocfs. Fc prg`fr fcfltrihi, to`jge cco`ohi fcfltrihi hfrfafrfelgo, auelgieo li`i poetocco poro fc sfkuehi fcfltrihi, rf`ivgfehi sfocfs
gehfsfojcfs prilfhfetfs hf fspflgfs quf sie `s algc`fetf ixghojcfs quf fc
oeocgti hf getfrs. Fc fcfltrihi hf trojodi sf `oetgfef hfetri hf ue pitfelgoc agdohi
pir fc fcfltrihi hf rfafrfelgo, fc luoc, cg`gto fc pitfelgoc jodi fc luoc, sf hftflto fc
oeocgti hf getfrs. Ve fcfltrihi hf rfafrfelgo `uy li``@fetf utgcgzohi fs fc
fcfltrihi hf Ok/OkLc. Fstf ctg`i, rfhulf i fcg`geo, co sfoc prihulgho pir co aosf
`vgc, sgf`prf y luoehi sto `oetfeko ueo vfcilghoh y li`pisglge liestoetf
(Obudo, ?727= orvfz, ?72;).
Cis tgpis `s li`efs hf hftfllge fcfltriqu`glo sie4 co hftfllge
o`pfri`trglo= licirg`trglo, liehultg`trglo y pitfelgi`trglo. Fe fstf trojodi, co
hftfllge hf tgpi o`pfri`trglo fs fc tgpi hf hftfllge utgcgzoho poro fc oecgsgs y
luoetgaglolge hf KOJO y Kcuto`oti. Co tleglo o`pfri`trglo bo prijohi sfr hf
kroe vocir fe li`jgeolge lie co lri`otikroao hf aosf rfvfrso, ei sici pir su kroe
sfesgjgcghoh, sgei to`jge pir co sfcfltgvghoh hf`istroho fe ockueis losis. Ci
oetfrgir, sf hfjf o quf co hftfllge sf cg`gto o oqufccos sustoelgos lopolfs hf
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
6>
ixghorsf i rfhulgrsf fe co lfcho fcfltriqu`glo, lie co opcglolge hf ue pitfelgoc
fcltrgli (^olmfr, ft oc= :>>?= ^orvfz, ?72;).
Hftfllge fcfltriqu`glo hf efuritroes`gsirfs Xleglo hf hfrgvotgzolge
prflicu`eo
Lie fc ijdftgvi hf `fdiror co sfesgjgcghoh y sfcfltgvghoh hfc `tihi
lri`otikragli lie hftfllge fcfltriqu`glo, sf boe hfsorriccohi tleglos hf
`orlodf qu`gli. Veo hf cos tleglos oltuoc`fetf utgcgzohos, fs co tleglo hf
hfrgvotgzolge (Cgekf`oe= ft oc= ?77>= Kghhgeks, ft oc= ?72;).
Co tleglo hf hfrgvotgzolge, liesgstf fe co troesair`olge jgiqu`glo hf
oeocgtis hf getfrs, pir ohglge hf ue krupi qu gli fe co fstrulturo. Fc `orlodf hf
cis oeocgtis pir `fhgi hf fsto tleglo, bo pfr`gtghi co hftfllge sfcfltgvo y sfesgtgvo
(@-a@) hf oeocgtis jgickglis, jgioltgvis y `ftocfs fe tfdghis, acuhis lirpirocfs
(li`i Cqughi Lfaocirroquhfi) y lieto`geoetfs. Co octo sfesgjgcghoh hfc `tihi,sf
hfjf o quf cis prihultis hf co hfrgvotgzolge sf ixghoe `s algc`fetf fe su posi o
trovs hfc hftfltir fcfltriqu`gli (Orscoe, I= :>>?= [fjstfr= :>>?= Dolijs, ?72;).
Fc prikrfsi fe cos tleglos hf hfrgvotgzolge, bo bflbi pisgjcf fc `orlodf
sfcfltgvi hf krupis auelgieocfs hf `iclucos irkeglos hf jodi pfsi `icflucor y cohgafrfelgolge fetrf fstis krupis auelgieocfs y itris hfc `gs`i tgpi, prfsfetfs fe
`iclucos `s kroehfs (Kghhgeks, ft oc= ?72;). \f bo hf`istrohi quf co tleglo hf
hfrgvotgzolge fe B^CL-FL pufhf utgcgzorsf fe fc `orlodf hf pptghis hf pfqufi
to`oi, ocqugco`geos y o`geilghis. Cis krupis auelgieocfs `orlohis fe fstf tgpi
hf `iclucos, sie cos o`geos prg`orgos (Lozfs, ft oc= :>>?= ^byccgs, ft oc= ?776).
Ockueis hf cis rfoltgvis utgcgzohis poro fc `orlodf qu`gli hf o`geilghis
troes`gsirfs sie fc iatochfbhi (I^O) (agkuro?1), fc 8-Acuiri-;-egtrijfeziaurozoe
(EJH-A) y fcLciruri hf 6-Hg`ftgco`geieoatocfei-?-sucaiegci (HE\-Lc)(Lozfs, ft oc=
:>>?).
Agkuro ?1. Zfprfsfetolge qu`glo hf ue o`geilghi hfrgvotgzohi lie I^O. Fe turqufso4
oegcci hf I^O= fe ridi4 fc o`geilghi= fe `irohi4 -`frloptiftoeic. Aufetf4 Lozfs, ft oc=
:>>?.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
6?
Fc `orlodf hf o`geilghis bo sghi li`e`fetf ccfvohi o loji lie I^O fe
prfsfelgo hf krupis tgic (agkuro ?1), li`i fc -`frloptiftoeic y fc tfrt-jutgc tgic (quf
lietgfefe ue krupi `frlopti4-\B ) i fe prfsfelgo hf krupi sucagti (g.f Eo:\I>?= Ziwcfy ft oc, ?776). Co rfollge hf hfrgvotgzolge
fetrf o`geilghis, I^O y krupis tgic i sucagti, hfjf bolfrsf o ue pB oclocgei, toc
li`i ci gehglo co agkuro ?; (^olmfr ft oc= :>>?= Dolijs, ?721).
Agk ?;. Zfprfsfetolge hf co rfollge qu`glo fetrf I^O, ue krupi sucagti y ue o`geilghi.
Co `icluco ageoc lirrfspiehf o ue krupi E-ocqugci-?-gsigehic sucaieoti
Aufetf4 Dolijs, ?721.
Ohglgieoc fetf, fc prilfsi hf hfrgvotgzolge pufhf rfocgzorsf hf his air`os4
pistlicu`eo i prflicu`eo. Fe co hfrgvotgzolge pistlicu`eo co hfrgvotgzolge tgfef
cukor fetrf co licu`eo y fc hftfltir, `gfetros quf co hfrgvotgzolge prflicu`eo sf
ccfvo o loji prfvgi o su geyfllge fe fc oporoti. Co sfporolge hf o`geilghis
`orlohis sf ccfvo o loji kfefroc`fetf `fhgoetf co tleglo hf sfporolge
prflicu`eo, yo quf iarflf vfetodos sijrf co hfrgvotgzolge pislicu`eo li`i4 ueo
eflfsghoh cg`gtoho hf gestru`fetis poro fc prilfsi hf hfrgvotgzolge= y ueo `fdir
sfesgjgcghoh, rfsiculge y sfcfltgvghoh. ^ir fdf`pci, oe luoehi co tleglo pfr`gtf fc
`orlodf hf o`geos prg`orgos, ei fs pisgjcf utgcgzorco poro fc `orlodf hf o`geos
sfluehorgos, toc fs fc losi hfc g`geilghi pricgeo (Lozfs, ft oc= :>>?= Cgekf`oe, ftoc= ?77>).
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
6:
,?@ hf aisaoti `ieishgli y
>,6`@ hf FHXO. Hfspus, sf oair lie :6% `ftoeic/okuo (v/v). Fc pB sf odust o
8,6 lie lghi aisargli (?@). Co aosf `vgc auf agctroho his vflfs o trovs hf agctris
bghriacglis hf `f`jroeo hf picgpripgcfei (KB ^icypri) lie pirisghoh >,:>` y
hg`ftri hf 8;``, `orlo ^occ. ^istfrgir`fetf, auf hfskosgagloho huroetf ?6 `ge fe
ue joi uctrosegli \tfrg-lcfoefr hf \turhy Gehustrgoc li= CXH= o tf`pfroturo
o`jgfetf. Cos aosfs `vgcfs aufrie oc`olfeohos fe frcf`@fyfrs hf :6> `C,
lujgfrtis lie popfc ocu`gegi y ritucohis opripgoho`fetf.
- ^rfporolge hfc @otfrgoc hf Zfafrfelgo4
\iculgiefs `ohrf hf o`geilghis4
\f prfpororie lgeli siculgiefs `ohrf (octo lielfetrolge) hf loho uei hf
cis o`geilghis4 lghi -o`gei jutrgli (KOJO), kcuto`oti (Kcu), kcuto`geo (Kce),
tourgeo (Xou) y orkgegeo (Ork)= o ueo lielfetrolge hf >,>:@. Cis o`geilghis(`orlo \gk`o) sf pfsorie uei o uei, fe ueo jocoezo oeoctglo `orlo Fxpcirfr hf
co lirpirolge IBOV\, `ihfci F?:?8> (`x :?>k). ^oro co prfporolge hf cos
siculgiefs `ohrf, sf pfsorie loetghohfs fqug`icorfs hf loho o`geilghi quf
aufrie pistfrgir`fetf hgcuhos fe
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
6L, fe vgocfs hf ?>`C hf picgftgcfei poro fvgtor co ohbfrfelgo quf prfsfetoe cis
o`geilghis luoehi sie pufstis fe lietfefhirfs hf vghrgi.
\iculgiefs hf trojodi hf cis o`geilghis4
Cos siculgiefs hf trojodi sie siculgiefs hf lielfetrolge getfr`fhgo,
prfporohos o portgr hf cos siculgiefs `ohrf. Cos siculgiefs hf trojodi, sf prfporoe
lie fc age hf aolgcgtor co fcojirolge hf siculgiefs `s hgcuhos (siculgiefs oluisos),
y poro rfhulgr co fxpisglge hf co siculge `ohrf o co hfkroholge pir faflti hf co
tf`pfroturo o`jgfetoc, o ci cOrki hfc ho hf trojodi.
\f prfpororie lgeli siculgiefs hf trojodi o portgr hf cos siculgiefs `ohrf
(>,>:@) hf loho o`geilghi. ^oro fafltuor co hgculge lirrfspiehgfetf hf loho
siculge `ohrf, auf ti`oho fe lufeto co loetghoh rfoc (fe `k), hf o`geilghi
pfsohi fe jocoezo oeoctglo, li`i sf fxpusi oetfrgir`fetf. Loho loetghoh (`k)
rfoc pfsoho y hgcugho, pisff to`jge ueo `icorghoh rfoc. ^ir fsti, o portgr hf fsto
loetghoh rfoc pfsoho (`k), sf fafltuorie cis lclucis fstfqugi`trglis rfspfltgvis,
poro ijtfefr co loetghoh hf C eflfsorgis quf pfr`gtgfroe pistfrgir`fetfliesfkugr
pir hgculgiefs sfrgocfs, siculgiefs oluisos hf loho o`geilghi sici i fe liedueti,o lielfetrolgiefs fxoltos hf ?>>@, ?> @ y ? @. ^ir fdf`pci, sg co
lielfetrolge rfoc ageoc hf Kcuto`geo lirrfspieho o ueo `icorghoh hf >,>:?:??@,
co loetghoh hf C hf o`geilghi ti`oho poro prfporor co siculge hf trojodi hf
fstf o`geilghi, sfro oprixg`oho`fetf hf 8;C, o co luoc, sf okrfkoe 76>C hf co siculge hf trojodi y hgcuyehico fe 7>>C hf okuo poro prfporor ueo
hgculge ? fe ?>. Co sgkugfetf hgculge sf prfpor ti`oehi ?>>C hf co hgculge ?4?>
y okrfkoehi 7>> C hf okuo. Co ctg`o hgculge sf prfpor hf co `gs`o air`o quf
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
68
cos oetfrgirfs, o portgr hf co hgculge ?4?>>, poro ijtfefr ueo lielfetrolge hf
?4?>>> fqugvocfetf o ? `ic/C hf loho o`geilghi.
- ^rfporolge hf co siculge hf hfrgvotgzolge
Aufrie pfsohis y hgsufctis ??,> + >,>>6`k hf I^O fe >,6`c hf ftoeic
ojsicuti oc luoc, aufrie oohghis >,6`c hf sucagti hf sihgi (?@) y >,7 `c hf juaafr
tftrojiroti hf sihgi (>,?@) odustohi o pB ?>,8 lie Bghrxghi hf \ihgi (6@). Fc
rfoltgvi sf prfpor hgorgo`fetf y sf vfrgagl quf pfr`oeflgfro fstojcf o trovs hfc
ho hf trojodi. Hglbo siculge hf hfrgvotgzolge sf liesfrv o jodo tf`pfroturo
(`C airrohis lie ocu`gegi y ritucohis hfjgho`fetf. Co
lielfetrolge ageoc hfc rfoltgvi I^O fe co prfporolge oetfrgir fs hf 8,6`@ FHXO= >,?@ Juaafr Aisaoti `ieijsgli= :6% `ftoeic, ccfvohoo pB 8,6 lie Ol. Aisargli (6@).
Acudi4>,16`c/`ge
Qicu`fe hfc Cozi hf geyfllge4 6>C
Qicu`fe geyfltohi4?>> C (fe his geyfllgiefs)
Xf`pfroturo4o`jgfetoc
^itfelgoc opcglohi4 26>`Q
Getfesghoh hf lirrgfetf hfc fcfltrihi hf trojodi4 :>eO.
Xgpi hf lgrlucolge hf co aosf `vgc4 lgrlugti lfrrohi
* co `orlo hf co licu`eo hf sfporolge sukfrgho fs Zogege Hyeo`ox (ei sf
felufetro fe fc `frlohi), sge f`jOrki, cos pripgfhohfs jsglos hf co licu`eo
sfcfllgieoho, sie cos gs`os.
Cos `ihgaglolgiefs oc pritilici irgkgeoc sf rfocgzorie lie fc age hf ohoptorci o
cis rflursis hfc cojirotirgi. Cos `ihgaglolgiefs rfocgzohos gelcuyfe co agctrolge hf co
aosf `vgc o trovs hf agctris hf >,::` y ei hf >,86 `, li`i ci fstojcflf fc
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
66
pritilici irgkgeoc. Hgstgeti tgpi hf lgrlucolge hf co aosf `vgc, co luoc, hgagfrf hf co
`ftihiciko fstojcflgho pir Ziwcfy, ft oc (?776)= fe quf sto fs hf tgpi ojgfrti y ei
lfrrohi, lie fc age hf fliei`gzor fc usi hf rfoltgvis. ^ir itro portf, poro ou`fetor
co loetghoh hf `ufstro hgspiegjcf poro oecgsgs, sf utgcgz ue cozi hf geyfllge hf 6>
Cy ei hf :> C, li`i sf sukfro. ^ir ctg`i, fc tgpi hf sicvfetf utgcgzohi auf okuo
hfs`gefrocgzoho y ei hijcf`fetf hfs`gefrocgzoho. Fc okuo hfs`gefrocgzoho auf
su`gegstroho pir fc Lfetri hf Gevfstgkolge fe Jgiciko Lfcucor y @icflucor (LGJL@)
y pir fc Cojirotirgi hf _u`glo Oeoctglo hf co VLZ.
- ^rufjos Oeoctglos prfcg`georfs4
Fstoehorgzolge hf co sfesgjgcghoh hfc `tihi huroetf prufjos prfcg`georfs
Lie fc age hf hfagegr ueo sfesgjgcghoh ohfluoho huroetf cos prufjos hf
rfsiculge hfc `tihi, co lielfetrolge pripufsto auf fvocuoho o sfesgjgcghohfs hf
?>>eO, 6> eO y :>eO. Co lielfetrolge hf I^O utgcgzoho auf hf 8 `geutis
prfvgo geyfllge fe fc sgstf`o lri`otikragli. Cis lrgtfrgir hf sfcfllge hf co
sfesgjgcghoh `s ohfluoho aufrie4 locghoh hf co hftfllge hf cis pglis y cg`pgfzo hf
co cefo josf.
Ghfetgaglolge hf cis tgf`pis hf rftfelge osilgohis o o`geilghis
troes`gsirfs y fvocuolge hf co rfsiculge hfc `tihi
Cos prg`fros fvocuolgiefs aufrie hf lorltfr luocgtotgvi y liesgstgfrie fe co
geyfllge hf ueo lielfetrolge `fhgo (?@) ti`oho hfc fstuhgi hf cgefocghoh
hfslrgti fe fc pritilici hf rfafrfelgo, lie co ageocghoh hf ghfetgaglor cis tgf`pis hf
rftfelge lirrfspiehgfetfs o loho o`geilghi. ^oro hglbis oecgsgs sf okrfkorie>,2 uC hf I^O (8 `geutis hf bojfr
sghi pufstis fe rfollge lie co siculge hf hfrgvotgzolge, fe air`o ogscoho.
Ohglgieoc fetf, sf geyfltorie jcoelis hf siculge fstehor (okuo hfs`gefrocgzoho),
y jcoelis lie I^O, lie fc ijdftgvi hf ghfetgaglor pglis hgafrfetfs hf cis o`geilghis
hf getfrs y sus tgf`pis hf rftfelge.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
61
^ir itro portf, sf prfpororie siculgiefs oluisos hf cis o`geilghis hf
getfrs (KOJO y kcuto`oti), y hf itris o`geilghis pitfelgoc`fetf getfrafrfetfs4
kcuto`geo, tourgeo y orkgegeo. Hglbos siculgiefs aufrie prfporohos o ueo
lielfetrolge hf ?@y hfrgvotgzohos lie : uC hf siculge hf hfrgvotgzolge (I^O
8 `geutis, prfvgo geyfllge fe fc sgstf`o lri`otikragli. \f
vfrgagl quf fstf vicu`fe hf hfrgvotgzolge ei prihudfro lieto`geolge hf co cefo
josf (air`olge hf pglis aoetos`o) y quf `orloro o cis o`geilghis fe siculge.
\f rfocgzorie trfs lirrghos hf cos siculgiefs hf o`geilghis fe `otrgz.
Fe fstf fesoyi, sf fvocu co locghoh hf co rfsiculge hf cis pglis hf getfrs.
Co rfsiculge privff ueo `fhgho luoetgtotgvo hf co bojgcghoh poro sfporor his
li`piefetfs fe ueo `fzlco. ^oro ueo `fzlco hf his li`pufstis O & J, co
rfsiculge pufhf sfr hfagegho fhgoetf co sgkugfetf fluolge4
Z0 : * ](XZ)J-(XZ)O/ [O+ [J)
(XZ)J0 tgf`pi hf rftfelge hf ue li`piefetf J quf fs `s aufrtf`fetf rftfeghi.
(XZ)O 0 tgf`pi hf rftfelge hf ue li`piefetf O quf fs `feis aufrtf`fetf
rftfeghi.
[ J 0 oelbi hfc pgli poro ue li`piefetf J fe co cefo josf
[ O0 oelbi hfc pgli poro fc li`piefetf O fe co cefo josf
\g Z fs `feir quf ?, cis li`piefetfs sf fste sijrfcopoehi
\g Z fs gkuoc quf i `oyir quf ?, fsti gehglo ueo jufeo sfporolge
Cis lrgtfrgis oetfrgirfs aufrie utgcgzohis poro fvocuor luoetgtotgvo`fetf co rfsiculge
hfc tihi.
,7%. ^istfrgir`fetf, sf
hgsfltorie sijrf bgfci cos lirtfzos tf`pirocfs hfrflbo f gzqugfrho. Fe titoc sf
fxtrodfrie ilbi rfkgiefs lfrfjrocfs hf luotri rotos.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
6;
O lietgeuolge, cos rfkgiefs lfrfjrocfs fxtrohos aufrie licilohos, fe vgocfs
hf picgftgcfei hf ?,6`C lie okuo hijcf`fetf hfsgiegzoho. \fkugho`fetf, stos sf
bi`ikfegzorie y oc`olfeorie o -:>L, lie fc age hf hgs`geugr co ollge hf fezg`os
pritfictglos y co hfkroholge hf co `ufstro.
Cos `ufstros aufrie hfsoc`olfeohos, ueo vfz fstojcflghi y iptg`gzohi fc
pritilici, poro vociror co utgcghoh hfc `gs`i. Loho `ufstro auf lfetrgaukoho pir :>
`geutis o ?> >>> rp`, o ,:> ` y hg`ftri 7``,
`orlo \lbcfglbfr & \lbufcc, @glri \lgfelf. ^ir ctg`i, cos `ufstros quf sfroe
oeocgzohos, sf hgcuyfrie, hfrgvotgzorie f geyfltorie fe fc sgstf`o B^CL. Fc rfsti hf
cos `ufstros, quf ei sfroe utgcgzohos fc ho hfc oecgsgs aufrie oc`olfeohos
eufvo`fetf o -:>L.
Fc prilfhg`gfeti utgcgzohi poro co fxtrollge y prftroto`gfeti hf co `ufstro
auf g`pcf`fetohi pir co @sl. Fcvgro \ocos, gevfstgkohiro hfc ^rikro`o hf
Efurilgfelgos. Hglbi pritilici sf gcustro fe co agkuro ?2 lie ockueos ihgaglolgiefs.
,16`c/`ge, :>eO hf sfesgjgcghoh y 26>`Q. Ohf`s, sfrfocgzorie hgculgiefs ?/?> hf cos `ufstros lie fc ijdftgvi hf hftfltor loho pgli fe
air`o li`pcfto. ^ir itro portf, cos `ufstros aufrie hfrgvotgzohos lie : C hf
rfoltgvi hf hfrgvotgzolge (I^O 8 `geutis.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
62
Agkuro ?2. ^rilfhg`gfeti hf fxtrollge y prilfso`gfeti hf co `ufstro.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
67
(bi`ikfefgzohis hf lfrfjri). Fsti ctg`i lie fc age hf aolgcgtor co luoetgaglolge hf
o`geilghis, hfslrgto s ohfcoetf.
Faflti hf co lielfetrolge hf `ftoeic sijrf co rfsiculge hf cis pglis
\f fvocuorie luotri lielfetrolgiefs hf `ftoeic lfrloeos oc :6%
(lielfetrolge hfc pritilici irgkgeoc). ^oro fsti, sf prfpororie aosfs `vgcfs hf
gkuoc pB (8,6), lie lielfetrolgiefs lrflgfetfs hf `ftoeic 4 ::-:>@. Fstos sf
geyfltorie o cis ?> `geutis hfc tgf`pi hf hfrgvotgzolge lie :C hf I^O (8eO, o ue pitfelgoc 26>`Q y o ue ehglf hf acudi hf
>,16`C/`ge. Co fvocuolge hf loho lielfetrolge hf `ftoeic rfqugrg co geyfllge
pir trgpcglohi hf cos siculgiefs oluisos y co geyfllge hf cis lgeli o`geilghis fe
air`o eglo, lie fc age hf ghfetgaglor sus rfspfltgvis tgf`pis hf rftfelge.
Faflti hfc pB sijrf co rfsiculge hf cis pglis
Veo vfz rfocgzohos fstos prufjos auf sfcfllgieoho oqufcco aosf `vgc lie
`fdir rfsiculge hf pglis y `feir tgf`pi hf lirrgho O fsto aosf `vgc, sf cf vorg fc
pB o4 8,>, 8,6, 6,>, 6,6 y 1,>. ^oro `fhgr fc pB, sf utgcgz ue pB`ftri `orlo
LIZEGEK, `ihfci ^geeolcf 6, quf auf locgjrohi, ueo vfz oc ho, loho vfz qufaufro o sfr utgcgzohi, ijtfegehisf lurvos hf locgjrolge lfrloeos oc ?>>% (+:%).
Loho aosf `vgc auf fvocuoho fe hos liesflutgvis, hfspus hf hfdorsf fe
lgrlucolge lfrroho oc `feis ?: biros, huroetf co eilbf, poro quf fc sgstf`o
lri`otikragli sf fstojgcgzoro. ^oro fsto prufjo, sf utgcgzorie cos `gs`os
liehglgiefs lri`otikraglos quf poro co prufjo oetfrgir. Hfc `gs`i `ihi, sf
rfocgzorie geyfllgiefs hf siculgiefs oluisos hf o`geilghis pir trgpcglohi f
geyfllgiefs hf o`geilghis eglis lie fc age hf ghfetgaglor sus rfspfltgvis tgf`pis
hf rftfelge.
\fcfllge hf co `fdir aosf `vgc
Co fcfllge hf co `fdir aosf `vgc auf rfocgzoho lie josf fe cis sgkugfetfs
lrgtfrgis4 locghoh hf co rfsiculge hf cis pglis lirrfspiehgfetfs o KOJO y kcuto`oti=
`feir tgf`pi titoc hf lirrgho y tgf`pi hf rftfelge hf pglis lieto`geoetfs pripgis
hf co siculge hf hfrgvotgzolge (ei hfjoe sfr getfrafrfetfs). Ei ijstoetf, fe fstf
pueti sf cf hgi prgirghoh o co sfporolge hfc o`geilghi kcuto`geo. Hfspus hf quf
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
1>
cos `fdirfs aosfs `vgcfs aufrie si`ftghos o fvocuolge, aufrie rfocgzohos itros
prufjos hf fstoehorgzolge y iptg`gzolge hfc pritilici.
^rufjos prfcg`georfs fe lfrfjri hf roto (eufvi pritilici)
Cos prufjos prfcg`georfs fe bi`ikfefgzohis hf lfrfjri hf roto, sf ccfvorie
o loji lie fc ijdftgvi hf `fhgr co fafltgvghoh hfc `tihi sfcfllgieohi, fe co
sfporolge hf KOJO y kcuto`oti. ^oro toc faflti, sf utgcgz ue acudi hf >,16`c/`ge, y
sf hftfr`ge co tf`pfroturo `s ohfluoho hf sfporolge, `fhgoetf co geyfllge hf
ueo `ufstro o tf`pfroturo o`jgfetoc y o ueo tf`pfroturo jodo (2,?L).
^istfrgir`fetf, aufrie rfocgzohis itris fesoyis hf iptg`gzolge hfc pritilici.
Faflti hf co tf`pfroturo sijrf fc pB hf co aosf `vgc
Huroetf fc prilfsi hf fcojirolge hf ueo eufvo aosf `vgc auf eflfsorgi,
fvocuor fc faflti hf co tf`pfroturo sijrf fc pB. ^oro toc faflti, sf `ghg fc pB hf
ueo aosf `vgc oc : L, co luoc, auf locfetehisf
poucotgeo`fetf bosto ueo tf`pfroturo hf ?1L. Lie fstf age, sf rfocgzorie trfgeto
`fhglgiefs fe air`o liesflutgvo. ^oro co `fhglge hf pB y tf`pfroturo sf f`pcf
fc pB`ftri orlo LIZEGEK ihfci geeolcf 6.
Fsto fvocuolge pfr`gtg vociror co rijustfz hfc `tihi, fe luoeti oc faflti
quf pihroe tfefr cos vorgolgiefs hf co tf`pfroturo, fe fc pB hf co aosf `vgc y pir
fehf fe cis tgf`pis hf rftfelge hf cis oeocgtis. Osg`gs`i, sf fstojcflg ueo
rfcolge luoetgtotgvo fetrf tf`pfroturo y pB.
Faflti hf co tf`pfroturo sijrf cis tgf`pis hf rftfelge
\f fvocuorie tf`pfroturos li`prfehghos fetrf ?>-?1L, lie fc age hffvocuor fc faflti quf tgfef co tf`pfroturo sijrf cis tgf`pis hf rftfelge hf cis
o`geilghis hf getfrs. Fe fsto prufjo sf utgcgzorie siculgiefs oluisos ?>>@
hfrgvotgzohos lie :>C hf siculge hf hfrgvotgzolge 8L, sf g`pcf`fet ue sgstf`o hf feargo`gfeti
(agkuro ?7), lie ueo lodo hf fstfrfiae pfrairoho fe o`jis fxtrf`is poro siste
hf co licu`eo. Fe fc aiehi hf co lodo sf licil bgfci kfc, y fevicvgfehi co licu`eo
sf licil ueo jicso hf okuo aro poro liesfrvor co tf`pfroturo tf`piroc`fetf
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
1?
fstojcf. Fc ehglf hf acudi utgcgzohi auf fc `gs`i quf poro fc ortluci hf rfafrfelgo, fs
hflgr, >,16`c/`ge. Co sgkugfetf agkuro gcustro fc sgstf`o hf feargo`gfeti lrfohi.
Agkuro ?7. \gstf`o hf feargo`gfeti lie bgfci Kfc
Faflti hfc ehglf hf acudi sijrf cis tgf`pis hf rftfelge
\f hftfr`ge fc faflti quf tgfef fc ehglf hf acudi sijrf cis tgf`pis hf
rftfelge y co rfsiculge hf o`geilghis. ^oro lu`pcgr lie fstf ijdftgvi, auf
utgcgzoho oqufcco aosf `vgc hf rfsuctohis lri`otikraglis ptg`is (:,86= >,6= >,66= >,1> y >,16 `c/`ge. \f
prilur ueo `gs`o tf`pfroturo (o ?;,> + >,6L), o ci corki hfc oecgsgs.
Faflti hf co lielfetrolge hf I^O sijrf co hftfllge qu`glo hf o`geilghis
troes`gsirfs (?>>@) poro oecgsgs hf rfpftgjgcghoh
Lie fc age hf fvocuor fc faflti quf tgfef fc `orlodf qu`gli lie I^O sijrf co
hftfllge hf o`geilghis troes`gsirfs y sijrf cos rfos rfcotgvos hf cis
o`geilghis fe `otrgz, sf rfocgz ue fesoyi fe fc luoc sf oohgfrie loetghohfs
lrflgfetfs hf siculge hf hfrgvotgzolge (I^O 8>@). Fc ijdftgvi prg`irhgoc hf fstf fesoyi, aufhftfr`geor co lielfetrolge hf I^O ptg`o eflfsorgo poro hfrgvotgzor cis
o`geilghis kcuto`oti, kcuto`geo, KOJO, orkgegeo y tourgeo fe siculge oluiso
?>>@= hfstgeohis o oecgsgs hf rfpftgjgcghoh.Fstf fesoyi sf ccfv o loji o ueo
sfesgjgcghoh hf :>eO, o ue pitfelgoc hf 26>`Q y o ue acudi hf >,6`c/`ge. Ohf`s,
sf prilur rfocgzor loho lirrgho fe ue roeki hf tf`pfroturo fetrf cis ?2-:
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
1:
Zfodustf hf co lielfetrolge hf I^O poro oecgsgs hf cgefocghoh
\f rfocgz ue fesoyi sg`gcor oc hfslrgti oetfrgir`fetf poro co hftfr`geolge
hf co lielfetrolge hf I^O ptg`o huroetf co hfrgvotgzolge hf o`geilghis
?>>@. Fsto vfz, sf fstojcflg ueo loetghoh hf I^O ohfluoho poro co
hfrgvotgzolge hf co lielfetrolgiefs lirrfpiehgfetfs oc roeki supfrgir hf co lurvo
hf cgefocghoh fs hflgr4 ?6>> @ hf KOJO= 8/:>, :>/6> y ?>/6>eO. Cis trfs ctg`is fesoyis aufrie
rfocgzohis fe air`o `gxto octfreoehi ueo prg`fro getfesghoh lie ueo sfkuehogetfesghoh, hf air`o quf o cis ?:-?< `geutis hf lirrgho sf lo`jgojo o ueo
getfesghoh `oyir, bosto cikror ue `fdir odustf fe co hftfllge hf o`geilghis
troes`gsirfs hf `feir y `oyir rfo (rfspufsto fe `Q*s). Co lielfetrolge hf
o`geilghis utgcgzoho poro fstf oecgsgs lirrfspiehf o co `oyir lielfetrolge hfc
roeki hf cgefocghoh, fxpufsto oetfrgir`fetf.
-
5/20/2018 Implementacion de Un Protocolo Por HPLC Para La Cuantificacion de Acido Gamm...
http:///reader/full/implementacion-de-un-protocolo-por-hplc-para-la-cuantificacion
1>@ (>,>?6k/C hf loho
o`geilghi), fe jociefs oairohis hf pcstgli hf ?>>`C. ^oro fsti, sf prfpor ueo
siculge `ohrf hf tihis cis o`geilghis o ueo lielfetrolge hf >,?k/C. O
lietgeuolge sf ti` ueo ocluito hf ?6`C, quf o su vfz, auf hgsufcto fe ?>>`C hf
okuo hfsgiegzoho.
Cos locgjrolgiefs hf cis potriefs sf bglgfrie pir fc `tihi hf fstehor
fxtfrei, pir li`porolge hf cos rfos hf cis pglis. \f oeocgzorie cis hotis
ijtfeghis hfspus hf qugelf geyfllgiefs hf siculge potre y sf ijtuvi fc
pri`fhgi, fc pirlfetodf hf vorgolge, co hfsvgolge fstehor y co hfsvgolge fstehor
rfcotgvo.
^oro fc oecgsgs hf cis hotis ijtfeghis poro fc fesoyi hf rfpftgjgcghoh, sf
sgkugfrie cis lrgtfrgis fstojcflghis pir co rfvgsto hf Lri`otikroao J (Diureoc ia
Lbri`otikropby J) ( Hf Jgvrf, ft oc = :>>6)= fe hiehf fc `xg`i pirlfetodf hf
hfsvgolge fstehor rfcotgvo olfptoho fs hf ue ?>%. \ge f`jorki, sf boe olfptohi
pirlfetodfs hf bosto ue :>% poro `otfrgocfs hf rfafrfelgo hf `feir locghoh ( Hf
Jgvrf, ft oc = :>>6).
^rufjos hf Cgefocghoh
Fc fesoyi hf cgefocghoh liesgstg fe co geyfllge hf sfgs lielfetrolgiefs
hgafrfetfs hf cis o`geilghis4 KOJO, kcuto`oti, kcuto`geo, tourgeo y orkgegeo
prfporohis fe `otrgz jcoelo (fesoyi hf cis locgjrohirfs fe air`o liedueto).