1MICROBIOLOGA E Inmunologa A CARRERA: LIC. EN BIOL. MOLEC.(AO: 2013)

ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN

IntroduccinLa esterilizacin es un proceso a travs del que se puede lograr la destruccin total de

los microorganismos viables presentes en un determinado material.

Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacutico, ya que existen

muchos procesos que requieren la utilizacin de materiales estriles. Entre stos

podemos destacar:

La esterilizacin de equipos quirrgicos y otros materiales de uso mdico con el

propsito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes.

El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas, etc) que

va a ser utilizado en el laboratorio de Microbiologa.

La preparacin de medios de cultivo que sern empleados con diferentes propsitos

(cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o personal, anlisis

microbiolgico de alimentos, medicamentos, cosmticos, etc)

La descontaminacin del material utilizado.

Es importante definir los siguientes trminos fundamentales relacionados con el control

microbiano:

- Esterilizacin: es un proceso por el que se eliminan todas las formas de vidamicrobiana, incluso las esporas bacterianas, produciendo una condicin de

esterilidad. Se logra por mtodos fsicos y qumicos.

- Estril: es la ausencia absoluta de toda forma viable de vida.- Desinfeccin: uso de agentes qumicos para eliminar la infectividad potencial

de un material (no implica la eliminacin de todas las formas microbianas).

Destruccin de las formas vegetativas de los patgenos.

- Asepsia: conjunto de medidas destinadas a impedir toda contaminacinmicrobiana.

- Germicida (o biocida): sustancia capaz de matar las formas vegetativas delos grmenes.

- Bactericida: tiene igual significacin, pero referido especficamente a lasbacterias.

- Bacteriosttico: sustancia que inhibe el crecimiento bacteriano.- Fungicida: sustancia que mata los hongos.

2- Fungisttico: sustancia que inhibe el crecimiento fngico.- Virucida: sustancia que detiene la replicacin y la actividad vrica.- Virusttico: sustancia que inhibe la replicacin vrica.

Los nombres de los tratamientos que producen la muerte directa de los

microorganismos llevan el sufijo cida, que significa muerte, (ejs. virucida,fungicida), mientras que los procedimientos que llevan el sufijo sttico significadetener o inhibir el crecimiento y la multiplicacin de las bacterias, como

bacteriosttico. Una vez eliminado el agente bacteriosttico podra reanudarse elcrecimiento.

Los trminos esterilizacin y estril son conceptos abstractos de estados negativosy como tales no son factibles de demostrar prcticamente, es decir, la muerte o

remocin de las bacterias sigue una funcin de probabilidad, y siempre hay unaposibilidad finita de que queden algunos microorganismos vivos intactos en elsistema. En la prctica, el concepto esterilizacin significa el proceso de alcanzar unestado con el mnimo riesgo calculado de sobrevivientes, mientras que por estril se

entiende la ausencia de formas de vida demostrables. Para la mayora de los mtodos

de esterilizacin, este riesgo es normalmente de muy bajo orden. De all surge el

concepto de SAL (sterility assurance level) = 10-6 (probabilidad de sobrevida): laprobabilidad de una unidad no estril es igual a 1 en una poblacin de 106

microorganismos. Podemos comprender que la esterilidad de un material, depender,

entre otros factores, de No (nmero inicial de microorganismos viables

contaminantes) y de la velocidad de muerte de dichos microorganismos para ese

proceso de esterilizacin.

Tasa de muerte microbiana

Cuando las poblaciones bacterianas se calientan o se tratan con sustancias qumicas

por lo general mueren a una tasa constante. Por ejemplo, supngase que unapoblacin de 1 milln de microorganismos ha sido tratada durante 1 minuto y que el

90% de los microorganismos de la poblacin, han muerto, es decir que quedan

100000 (105) microorganismos. Si la poblacin se vuelve a tratar durante otro minuto

muere el 90% de esos microorganismos y quedan 10000 (104) sobrevivientes. Es

decir, por cada minuto de tratamiento aplicado muere el 90% de los microorganismos

restantes de la poblacin.

3Cintica de muerte de los microorganismos

Para todos los microorganismos existe una temperatura mxima de crecimiento por

encima de la cual mueren. A temperaturas muy altas, casi todas las molculas pierden

su estructura y su funcin, por el proceso denominado desnaturalizacin.

Cuando una poblacin de microorganismos es sometida a un proceso de esterilizacin

(por ej. calor, radiacin, o compuestos qumicos), no todas las clulas mueren al

mismo tiempo. El nmero de sobrevivientes disminuye exponencialmente con el

tiempo de exposicin hasta que no pueden detectarse ms microorganismos viables.

Mientras esto se mantiene la curva de sobrevivencia, es decir, el grfico de logaritmo

del nmero de sobrevivientes (N/No) en funcin del tiempo (t) independiente del

nmero inicial de microorganismos, es lineal (Figs.1 y 9.1A).

Esta curva del tipo indicado (Figs.1 y 9.1A) puede ser descripta por la expresin

matemtica:

N/No = e- Kt ln N/No = - K t N/No: es la fraccin de microorganismos viables que sobreviven

el tratamiento de esterilizacin durante el tiempo t.

donde: K es la constante de inactivacin o de velocidad de muerte, No es el nmerode microorganismos viables presentes inicialmente, y N es el nmero de

microorganismos al final del

proceso.

Fig.1: Cintica de muerte

La muerte de los microorganismos es una funcin exponencial (de primer orden) y

ocurre ms rpidamente cuanto mayor es la temperatura.

CINCINTICA DE MUERTETICA DE MUERTE

012345678

0 20 40 60 80

Tiempo (min)

log

N

so

bre

viv

ien

tes

Nt = No e -kt

4En el caso, de las esporas altamente resistentes, puede haber una fase iniciallogartmica en la muerte en funcin del tiempo antes que la curva de sobrevivientes

comience a decrecer exponencialmente. Esto produce un hombro o plateau en la

curva que luego puede ser lineal (Fig. 9-1B).

Con microorganismos altamente sensibles, la porcin inicial de la curva puede sermuy aguda y no exponencial antes de convertirse en lineal, dando lugar a una curva

bifsica (Fig. 9-1 C). Estos casos son tpicamente demostrados con procesos de

esterilizacin por calor y radiacin.

En tratamientos qumicos, la curva de supervivientes puede iniciarse concaractersticas de linealidad, pero luego de un tiempo muestra un retardo en la

velocidad de muerte dando lugar a una cola (Fig. 9-1D). A veces toda la curva es

sigmoidea, esto indica la presencia de sobrevivientes resistentes en la suspensin

original, an cuando se trate de bacterias del mismo tipo.

En todos los casos la pendiente de la curva en la porcin lineal vara con muchos

factores, como la severidad del tratamiento y la presencia de agentes protectivos.

5El valor D o tiempo de reduccin decimal: es el tiempo en minutos requerido para reducir un90% el nmero de microorganismos viables, es decir, al 10% del recuento inicial, lo cual

corresponde a una disminucin de un ciclo logartmico en la curva de sobrevivencia a una

temperatura determinada (Fig. cintica de termodestruccin).

Todos los factores: temperatura o dosis de radiacin, composicin, pH del medio deben ser

especificados. Si todos estos factores son bien conocidos, el valor D puede ser determinado

con bastante precisin para muchos microorganismos. Este valor D es til en la industria de laalimentacin. Se usa para calcular la eficiencia de un proceso de esterilizacin para destruir un

microorganismo especfico.

Factores que afectan la eficiencia de los procesos de esterilizacin

- La presencia de humedad y oxgeno: incrementa la eficiencia de todos los procesosde esterilizacin. Entonces, el calor hmedo requiere temperaturas y tiempos de

exposicin bastantes menores para esterilizar, que el calor seco.

- La presencia de sustancias qumicas bactericidas: aumenta el efecto del calor ypermite el uso de temperaturas ms bajas para producir el mismo efecto..

- La mayora de los microorganismos esporulados son ms resistentes cuando seforman en su hbitat natural (ej. suelo) que cuando desarrollan en medios de cultivo

artificiales.

- Los aceites, cidos grasos y grasas, y las protenas (sangre): tienen unefecto protector sobre las bacterias, particularmente contra la accin del calor.

- Las soluciones azucaradas con glucosa en alta concentracin: protegen,probablemente por reduccin de la actividad acuosa (aw ) dentro del sistema y

generalmente aumentan la resistencia de los microorganismos al calor.

6Condiciones previas que debe cumplir el material para una eficaz esterilizacin

- Lavado

- Secado

- Envoltura

Lavado: se realiza con agua y detergentes

- Reduce la tensin superficial del agua, colaborando en la solubilizacin de

albmina, emulsin de grasas y suspensin de partculas.

- El empleo de detergentes enzimticos es de mayor eficiencia.

Para qu realizamos el lavado?

- Para remover toda materia extraa en la superficie de los materiales

- Para eliminar materia orgnica que interfiere en los mtodos de esterilizacin.

Secado: es importante para evitar la recontaminacin y deterioro del material.

Envoltura

Para qu envolvemos?

- Para evitar la recontaminacin microbiana en el momento de la salida de la

cmara de esterilizacin, transporte y almacenamiento hasta su utilizacin.

Cmo debe ser la envoltura?

- La naturaleza del material de envoltura depender del procedimiento de

esterilizacin empleado y del material a esterilizar

- Permeable al agente esterilizante

- Resistente a la penetracin de microorganismos

- Resistente a roturas y humedad

- No debe ser txico. Libre de prdida de fibras u otro tipo de sustancias.

MTODOS DE ESTERILIZACIN

Los mtodos de esterilizacin se pueden clasificar en:

MTODOS FSICOS

- Calor seco: llama directa, incineracin, aire caliente (estufa)

- Calor hmedo: a presin (autoclave), a vapor fluente (tyndalizacin)

7- Filtracin: filtros de profundidad, filtros de membrana, filtros de nucleacin

- Radiaciones: ionizantes, ultravioletas

MTODOS QUMICOS

- xido de etileno

- Formaldehdo

- Glutaraldehdo

- Gas plasma

MTODOS FSICOS

Calor: es el mtodo preferido para esterilizar todos los materiales, excepto aquellosque sufren dao por su termosensibilidad. El proceso es rpido, todos los

microorganismos son sensibles, y el calor llega a lugares que podran estar protegidos

para los agentes qumicos.

Los mecanismos de esterilizacin por calor hmedo se basan en ladesnaturalizacin de protenas, aunque es posible que tambin tenga algunaimportancia la fusin de los lpidos de la membrana como as tambin el dao delos cidos nucleicos. Los lmites de temperatura a que se lleva a cabo este procesocorresponden a los que se desnaturalizan la mayora de las protenas. Estos

procesos requieren una temperatura ms alta cuando el material est totalmente

desecado o la actividad del agua del medio se reduce por una alta concentracin de

una sustancia neutra como por ej. glicerol o glucosa.

Microorganismos como los hongos, la mayora de los virus y las clulas vegetativas de

bacterias, pueden ser destruidos luego de varios minutos a 50 70 C, mientras que

las esporas de diversos microorganismos requieren temperaturas de 121 C durante

15 a 20 min para lograr su destruccin.

Calor seco

Es de aplicacin limitada, porque se requieren temperaturas elevadas y adems

porque pocos materiales resisten la accin oxidante del calor a esa temperatura enpresencia de aire.

El calor seco se puede llevar a cabo mediante accin directa a la llama: el materialse lleva al rojo durante 5 10 segundos (ansas), o pasando el material por la llama

8repetidas veces 2 3 minutos; o bien colocando el material en un recipiente adecuado

cubrindolo de alcohol y encendindolo, de modo que la llama pase por todo el

material durante 2 3 minutos. As se pueden esterilizar tijeras, agujas,portaobjetos. Tambin, la incineracin es el mtodo ms comn de tratamiento delos desechos infecciosos. El material se quema a cenizas, a temperaturas de 870 -

980 C.

Con ms frecuencia, se utiliza el aire caliente o sea calor seco calentando el aireen el interior de una estufa diseada especialmente que asegure una distribucinhomognea de la temperatura. Se debe aprovechar la transmisin del calor por

convencin natural y en equipos de mayor magnitud se debe instalar una convencin

forzada para la circulacin del aire; de esta forma no slo se logra una temperatura

uniforme en todos los puntos, sino tambin se puede acortar el tiempo

correspondiente de esterilizacin.

El calor seco requiere un perodo de exposicin ms prolongado: una hora ymedia a 160 C o una hora a 180 C.

Es importante tomar el tiempo desde que la estufa y el material alcanzan la

temperatura deseada, es conveniente cargar la estufa cuando est a la temperatura

ambiente, porque la naturaleza del material a esterilizar, cantidad y tamao influyen

sobre el perodo de calentamiento.

Aplicaciones. Se utilizan para esterilizar elementos como material de vidrio, demetal, aceites, vaselina, soluciones oleosas, sobre todo si estn envasadas enrecipientes hermticos, tambin en la esterilizacin de polvos cuya malaconductividad hace muy prolongado el tiempo de calentamiento. Por ejemplo, eltalco, se puede distribuir en recipientes de poca profundidad (cajas de Petri).Para que un material se pueda esterilizar por calor seco, debe tolerartemperaturas de 160 180 C sin sufrir alteraciones, y si se trata de un lquido,debe tener punto de ebullicin por encima de esa temperatura, es decir no debeentrar en ebullicin durante la esterilizacin. No toleran estas temperaturas,materiales como guantes, sondas, textiles, etc. No se pueden esterilizar mediosde cultivo porque se deshidrataran.

Las estufas (u hornos) de esterilizacin son de construccin simple: constan de una

caja metlica con una puerta frontal y estanteras regulables, con ingreso de aire

caliente, y con una salida regulable de aire en la parte superior. Actualmente la fuente

de calor es por calefactores elctricos, y es regulable la temperatura por un

9termostato. La pared metlica puede ser doble con una cmara de aire entre ellas. La

pared externa puede estar recubierta con un material aislante.

Pueden estar provistas de un circulador de aire que oriente la convencin forzada, de

esta manera aumenta la homogeneidad y la velocidad de calentamiento.

Se han establecido otros mtodos de calor seco para aumentar la eficiencia, como la

estufa de calentamiento de infrarrojo de gran velocidad que opera con vaco,diseada para esterilizacin de instrumental quirrgico. La misma funciona a 280 C

en alto vaco, y el corte del vaco se realiza con nitrgeno estril para evitar la

oxidacin de los bordes. El tiempo del ciclo total dura aproximadamente 15 minutos.

Calor hmedo

El mtodo estndar para esterilizar por calor hmedo es autoclave a 121 C durante

15 20 minutos. Esa temperatura de 121 C se logra con vapor de agua a 1 atmsfera

de presin sobre la presin atmosfrica. Los objetos fros son rpidamente calentados

por la condensacin sobre su superficie matando los microorganismos por

desnaturalizacin de las protenas y disolucin de los lpidos de las estructuras

esenciales de los mismos.

Existen distintos tipos de autoclaves, hay autoclaves a vapor, con control digital,

elctricas, tambin hay manuales y automticos, de una cmara o de dos cmaras,

verticales u horizontales, pero todos se fundamentan en el mismo principio: alaumentar la presin interna del autoclave aumenta el punto de ebullicin delagua.

Fundamentalmente hay 3 tipos de autoclave de uso comn:

a) Autoclave de laboratorio (Chamberland): consiste en una cmara deesterilizacin que genera su propio vapor a partir de agua contenida en el

fondo de la cmara, por medio de calentamiento interno (elctrico) o externo

(gas). Posee un manmetro que registra la presin interna de la cmara, una

vlvula de seguridad y puede contener un termmetro. El aire es retirado

desde la cmara a travs de la espita durante el perodo de calentamiento y

ebullicin inicial.

Debido a la eyeccin de gotas de agua desde la superficie del agua hirviendo,

ste autoclave es adecuado para recipientes con lquido. Otros artculos,

como, ropa o aparatos, incluyendo sus envolturas, se humedecern con agua

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durante la esterilizacin, lo cual puede producir su recontaminacin al ser

introducidos en una atmsfera no estril.

b) Autoclave de alto vaco: est diseada para la esterilizacin rpida deartculos secos como ropa, artculos de goma, etc. Consiste en una cmara

revestida que puede ser evacuada a baja presin. El ciclo total puede demorar

solamente 25 a 30 minutos.

c) Autoclave de desplazamiento inferior de vapor: es una cmara alimentadacon una fuente externa de vapor. Como el vapor que penetra es menos denso

que el aire a la misma temperatura, este ltimo es desplazado y ventilado a

travs de una apertura en el punto ms bajo de la cmara. Completado el

ciclo este tipo de autoclave permite un secado final de la carga por pasaje de

aire caliente esterilizado por filtracin.

Con respecto a los tiempos de exposicin, hay diversos ciclos de

temperatura/tiempo recomendados para la esterilizacin por autoclave. Por ej. la

Farmacopea de Estados Unidos recomienda el calentamiento a 121 C por 15

minutos como mnimo. Se pueden emplear otras combinaciones de tiempo y

temperatura siempre que resulten efectivas.

El autoclave de laboratorio tipo Chamberland, es un aparato cilndrico de paredesdobles y doble fondo donde se coloca el agua, calefaccionada en la parte inferior, se

cierra hermticamente con una tapa que tiene charnelas (o mariposas), en la parte

superior de la tapa tiene una espita para escape de vapor, un manmetro para medir

la presin y una vlvula de seguridad.

Autoclave tipo Chamberland: instrucciones en el manejo y precauciones

con respecto al material a esterilizar

- Controlar que el fondo del autoclave tenga agua suficiente para todo el proceso

(debe llegar hasta la rejilla).

- Colocar el material que no debe estar hermticamente cerrado, se puede tapar

con tapones de algodn o gasa, tapas de plstico, si se usan tapones de goma

o de vidrio esmerilado se coloca una piola para impedir el cierre hermtico, al

sacarlo del autoclave se retira la piola y se ajusta el tapn. Si se usan tapas a

rosca, se esteriliza con la tapa floja y cuando se saca del autoclave se ajusta.

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- El material debe estar envuelto en papel poroso para preservar su posterior

esterilidad.

- El volumen de los recipientes no debe ser ms de la mitad o de las 2/3 partes

del volumen del recipiente para evitar proyecciones y permitir que el lquido

entre en ebullicin libremente sin mojar los tapones.

- Una vez acondicionado el material se cierra la tapa ajustando las charnelas o

mariposas en forma enfrentada para asegurar el cierre hermtico.

- Encendidos los mecheros se abre la espita hasta que salga todo el aire

contenido en el interior del autoclave, lo que se determina cuando sale flujo

continuo de vapor de agua por la espita. Esta operacin es muy importante

porque si queda una mezcla de aire y vapor en el interior del autoclave, por

ser el aire menor conductor del calor se logran temperaturas insuficientes

para una correcta esterilizacin (la presin resultante ser tanto menor cuando

mayor sea la cantidad de aire que contenga el autoclave).

- Luego se cierra la espita, el manmetro comienza a marcar el aumento de

presin hasta una atmsfera que corresponde a 121 C. La presin absoluta

en el interior del autoclave es de 2 atmsferas considerando que la presin

atmosfrica en ese momento sea de 1 atmsfera, se deja 15 20 min, aunque

el tiempo de esterilizacin depende del volumen y de la masa del material a

esterilizar. Si se trata de material de laboratorio contaminado se deja 30 min

para permitir la penetracin del vapor a travs de los desechos y el

desplazamiento del aire atrapado dentro del autoclave.

- Si el objeto que se esta esterilizando es muy voluminoso, la transferencia de

calor a su interior tarda ms tiempo, y se debe aumentar el tiempo total de

calentamiento para garantizar que el objeto entero est sometido a una

temperatura de 121 C durante 10 15 min. Tambin se requieren mayores

tiempos cuando se autoclavan grandes volmenes de lquidos, dado que los

volmenes grandes tardan ms tiempo en alcanzar la temperatura de

esterilizacin.

- Transcurrido el tiempo necesario se apagan los mecheros.

- Se abre la espita lentamente para evitar que por diferencia de presin salten

los tapones.

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- Abrir el autoclave.

- Si el material es de vidrio o metal se lleva a estufa para el secado total.

- Si son medios de cultivo se realiza el control de esterilidad y se guardan enheladera.

Las autoclaves automticas poseen una vlvula automtica de purga que est

controlada por un mecanismo termosttico y se cierra al entrar en contacto con el

vapor puro cuando sale el aire.

Tyndalizacin

Se puede realizar:

A vapor fluente (olla presin o autoclave con espita abierta)

Bao Mara a ebullicin

La tyndalizacin es un mtodo de esterilizacin por calor hmedo en ms de un

proceso. Consiste en calentar a 100 C durante 20 minutos 3 veces a intervalos de 24

horas: el primer calentamiento destruye todas las formas vegetativas de los grmenes

que pudieran estar presentes, luego se incuba 24 h a 37 C o a temperatura ambiente

y si el medio es adecuado (suficientemente rico para permitir la germinacin de las

esporas) las esporas que pudieran estar presentes germinarn (shock trmico) y

pasarn a la forma vegetativa, al aplicar el segundo calentamiento sern muertas

estas formas vegetativas provenientes de las esporas, se vuelve a incubar 24 h en las

mismas condiciones anteriores, si alguna espora no germin durante la primera

incubacin lo hace ahora y al calentar por tercera vez se destruirn. Este proceso en la

industria suele repetirse 5 veces o ms.

Se pueden tyndalizar: leche, gelatina, hidratos de carbono, es decir sustanciasque no resisten altas temperaturas y a su vez tienen una composicin qumicatal que permiten la germinacin de las esporas.

No se pueden tyndalizar: solucin de electrolitos, agua destilada, solucinfisiolgica, buffers, solucin de bicarbonato.

Ventajas del calor hmedo con respecto al calor seco

Menor tiempo de esterilizacin

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Menor temperatura

El calor hmedo es ms penetrante que el calor seco

Se pueden esterilizar medios de cultivo y otros lquidos como solucin

fisiolgica (SF), agua destilada (AD).

Pasteurizacin

La pasteurizacin es un proceso que reduce la poblacin microbiana en leche y otros

alimentos sensibles al calor. Pasteurizacin no es sinnimo de esterilizacinporque en ella no se destruyen todos los microorganismos. Inicialmente se utiliz la

pasteurizacin para destruir bacterias patgenas, especialmente los organismos

causantes de tuberculosis, brucelosis y fiebre tifoidea. Impide la transmisin de

patgenos que actualmente s son habituales como Listeria monocytogenes, y

algunas especies de Campylobacter, Salmonella y Escherichia coli O157:H7.La

pasteurizacin tambin retrasa el crecimiento de organismos alterantes e incrementa

la vida til de los lquidos perecederos. Muchas bacterias relativamente resistentes al

calor (termodricas) sobreviven a la pasteurizacin pero es poco probable que causen

enfermedad o el deterioro de la leche refrigerada.

Procesos de pasteurizacin:

Pasteurizacin alta (o tambin denominada de corta duracin a altatemperatura: high-temperature short-time; HTST): la leche sebombea a travs de un tubo que est en contacto con una fuente de

calor. Este procedimiento emplea temperaturas de 71 - 72 C durante

15 segundos. Luego la leche se enfra rpidamente.

Pasteurizacin baja: la leche se calienta en grandes depsitos a 63 -66 C durante 30 minutos. Este procedimiento es menos satisfactorio

porque la leche se calienta y se enfra lentamente y debe mantenerse a

temperaturas altas por perodos de tiempo ms largos.

Temperaturas ultra elevadas (ultra-high-temperature, UHT):temperaturas alcanzadas 140 150 C durante escasos segundos

(menos de 3 seg), es un proceso continuo, se requiere envasado

asptico y se logra esterilidad comercial.

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Filtracin

Este procedimiento es aplicable a la esterilizacin de lquidos y gases y losmicroorganismos son removidos y no destruidos. El mtodo es rpido y puedellevarse a cabo a cualquier temperatura. Cuando el lquido a filtrar es termosensible se

aplica la tcnica de filtracin.

El lquido o el gas pasa por un filtro, que es un dispositivo con poros demasiados

pequeos para que pasen los microorganismos, pero lo suficientemente grandes para

permitir el paso de un lquido o un gas. El tipo de filtro de esterilizacin seleccionado

depender del tamao de las sustancias contaminantes que se quieran excluir.

Algunas clulas microbianas pueden medir ms de 10 m de dimetro, mientras que

las bacterias ms pequeas tienen un dimetro inferior a 0,3 m.

La filtracin se utiliza para esterilizar soluciones termolbiles. Se usa paraesterilizar aceites, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas,radioistopos, vacunas, hidratos de carbono, medios para cultivos celulares, ysoluciones de antibiticos y vitaminas.

Existen tres tipos de filtros:a) Filtros de profundidad:Un filtro de profundidad es una lmina fibrosa compuesto de matrices dispuestas al

azar de fibras de papel, asbesto o vidrio que se solapan. En este tipo de filtros las

partculas quedan atrapadas en las tortuosas vas creadas a travs de la profundidad

de la estructura. Dado que el material de filtracin est dispuesto al azar en una

lmina gruesa, los filtros de profundidad se emplean a menudo como prefiltros para

eliminar las partculas ms grandes de las suspensiones lquidas y evitar la

obstruccin del filtro final del proceso de esterilizacin. Los filtros de profundidad

tambin se utilizan para esterilizar por filtracin el aire en los procesos industriales. En

el mbito domstico, el filtro que se utiliza en los sistemas de aire acondicionado es

para atrapar partculas de polvo, esporas y alrgenos.

Los filtros de profundidad son importantes para las aplicaciones de bioseguridad. Por

ej. en las manipulaciones de cultivos celulares, cultivos microbianos, etc. Estas

operaciones se pueden realizar en una cabina de seguridad biolgica con flujo de aire,

dirigido a travs de un filtro de profundidad llamado filtro de aire particulado de altaeficacia (HEPA). Un filtro HEPA tpico consiste en una lmina de fibras de vidrio deborosilicato que se ha tratado con un aglutinante y se ha plegado para aumentar el

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rea total de su superficie. Este filtro est montado sobre un marco rgido que lo

sostiene. El control de partculas areas mediante filtros HEPA permite la construccin

de habitaciones limpias y habitaciones de aislamiento para casos de cuarentena, as

como laboratorios de seguridad biolgica especializados. Los filtros HEPA suelen

eliminar partculas de 0,3 m con una eficacia del 99,97%.

b) Filtros de membrana:Los filtros de membrana son los que se usan ms habitualmente en los laboratorios de

Microbiologa para esterilizar lquidos. Los filtros de membrana se componen de

polmeros con una elevada resistencia como acetato de celulosa, nitrato de

celulosa o polisulfona- diseados para presentar numerosos poros diminutos. En la

actualidad se usan filtros de membrana con poros de un tamao determinado, 0,45 m

y 0,22 m. El tamao de poro ms usado es de 0,22 m. Se dispone de filtros con

poros de 0,01 m, un tamao que puede retener los virus. Alrededor del 80 - 85% de

la superficie de la membrana est constituida por poros abiertos, obtenindose una

tasa de flujo de lquido alta.

Los filtros de membrana previamente esterilizados diseados para esterilizar

volmenes pequeos y medianos de lquidos, tales como los medios de cultivo se

utilizan en forma rutinaria en los laboratorios de investigacin. La filtracin se realiza

utilizando una jeringa, una bomba de vaco para hacer pasar el lquido a travs del

aparato de filtracin y recolectarlo en un recipiente esterilizado.

El mecanismo de accin de los filtros de membrana es por efecto tamiznicamente.

Adems de actuar como esterilizantes tienen otras utilidades en Microbiologa:

recuentos, concentracin, separacin de microorganismos, etc.

Ventajas:

- Filtran ms rpido

- Filtran nicamente por efecto tamiz

- No alteran las caractersticas organolpticas del lquido

- Filtran por presin negativa o positiva

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- No ensucian los lquidos esterilizados

- Se pueden esterilizar en autoclave y se desechan luego de su utilizacin.

c) Filtros de nucleacin (nucleopore):Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento

conjunto con radiacin nuclear y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy

regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices,

evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro. Sin embargo por

la menor cantidad de poros, la velocidad de flujo a travs de estos filtros es ms baja

que a travs de los filtros de membrana y el atascamiento se presenta ms

rpidamente. Los filtros de nucleacin se usan en microscopia electrnica de barrido

para aislar especmenes. Los microorganismos se separan del lquido y se concentran

en un nico plano en la superficie del filtro, donde se pueden observar al microscopio.

Esterilizacin de gases

La filtracin de aire se logra mediante filtros de partculas de aire de gran eficiencia

(high efficiency particulate air, HEPA) diseados para eliminar microorganismos dems de 0,3 m de dimetro de habitaciones de aislamiento, quirfanos, salas de

prematuros, quemados, y cmaras de bioseguridad (CBS). Los filtros HEPA tienen

una eficiencia del 99,97%. El mecanismo de accin es por efecto tamiz.

Filtros ULPA: son filtros con caractersticas similares a los filtros HEPA, pero tienenuna eficiencia de 99,999% para partculas de un tamao entre 0,1 y 0,2 m.

Radiaciones

Las microondas, las radiaciones ultravioletas (UV), los rayos X, las radiaciones gamma

y los electrones son tipos de radiacin que pueden reducir el crecimiento microbiano

de forma eficaz si se aplican en la dosis y durante el perodo de tiempo adecuados.

Radiaciones ultravioletas (UV)

La radiacin UV entre 220 y 300 nm de longitud de onda tiene suficiente energa para

causar modificaciones o incluso roturas en el DNA, que provocan alteracin del DNA y

la muerte del organismo expuesto.

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Mecanismo de accin: las ondas UV tienen suficiente energa para producirlesiones del DNA letales o modificaciones qumicas como uniones cruzadasentre bases que interfieren en la subsiguiente replicacin.

Los dmeros de pirimidina son los fotoproductos ms importantes en las clulas

vegetativas bacterianas. El principal es el dmero de timina (T-T). Como se puede

observar, se trata de uniones entre dos pirimidinas adyacentes en la misma hebra de

ADN, mediante la creacin de un anillo de ciclobutano. Su efecto principal es la

distorsin local de la configuracin de la doble hlice, que interfiere en el normal

apareamiento de bases complementarias; ello, a su vez, provoca una interferencia en

los procesos de replicacin y transcripcin, y secundariamente en el crecimiento de la

clula.

Presenta la desventaja adicional de que la mayora de las bacterias tienen procesos

enzimticos activos que bajo condiciones favorables permiten la reparacin del dao

inducido por la luz UV, y de este modo resulta bastante frecuente la recuperacin de

clulas irradiadas.

Aplicaciones: la luz UV se utiliza para la desinfeccin de superficies, aire y otrosmateriales como el agua que no absorben la radiacin UV. Por ejemplo lascabinas de los laboratorios de biologa vienen equipadas con una lmparamicrobicida de luz UV (lmpara de vapor de mercurio) para descontaminar susuperficie despus de ser utilizadas. No obstante, la radiacin UV no penetra lassuperficies slidas, opacas, los materiales empaquetados, el vidrio, plsticos,lquidos turbios, resulta muy absorbida por estos materiales, y su utilidad selimita a la desinfeccin de las superficies expuestas. La eficiencia de esta lmparase ve seriamente afectada por el polvo atmosfrico, la disminucin de la temperatura

ambiental y el envejecimiento de la lmpara.

Se usan ampliamente las lmparas de vapor de mercurio, que emiten 90% de suradiacin a 254 nm para disminuir la infeccin del aire en salas de hospitales,quirfanos, y habitaciones en que se alojan animales de experimentacin.Tambin son tiles en zonas del laboratorio usadas para transferenciasbacterianas, para disminuir la contaminacin de cultivos y la infeccin de losoperarios.

Es importante proteger los ojos con gafas puesto que una exposicin excesiva de la

crnea a la luz UV produce una grave irritacin.

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Radiaciones ionizantes

Mecanismo de accin: se absorben dentro de la clula produciendo la ionizacinde los contenidos celulares, formacin de radicales libres, y molculas excitadasy esto lleva a la desorganizacin de enzimas y del DNA.

Son radiaciones electromagnticas de alta energa El grado del dao sobre el DNA

depende de la dosis recibida y puede llevar a la muerte celular. A diferencia del calor,

el efecto de la radiacin gama es acumulativo, es decir que dosis divididas son

igualmente efectivas que una nica dosis de la misma magnitud total.

Es altamente penetrante y no induce radioactividad. Todos los microorganismos

incluidos los virus son afectados por la radiacin.

Actualmente se consideran suficientes, dosis de radiaciones de 2,5 Mrads, lo cual

brinda un factor de inactivacin de aproximadamente 107 para esporas de Bacillus

pumilus en condiciones de anoxia y de aproximadamente 109 para Streptococcus

faecium.

Aplicaciones: productos farmacuticos: antibiticos como ampicilina yestreptomicina; vacunas, hormonas. Material mdico-quirrgico: guantes degoma descartables, injertos seos y de tejidos, implantes (vlvula cardiaca),catteres, suturas quirrgicas, jeringas desechables, agujas, bistures, etc.Actualmente las radiaciones gamma se utilizan en la industria de alimentos.

Controles de esterilidad y esterilizacin

Concluido el proceso de esterilizacin se dispone de diversos elementos paracomprobar la eficiencia del mismo. Independientemente del mtodo empleado esnecesario realizar un control para asegurarse que el tratamiento ha sidoadecuado.

Hay dos tipos de controles:

A) Control de esterilizacin: es el que se realiza para comprobar si se cumplieron lascondiciones del procedimiento empleado.

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B) Control de esterilidad: es el que se realiza sobre las muestras o alcuotas del materialesterilizado con el objeto de comprobar la ausencia total de microorganismos en el

mismo.

Controles de esterilizacin

a) control biolgico: se utilizan como indicadores, esporas bacterianas,que constituyen el material de eleccin por su gran resistencia. Para su

realizacin, las esporas son desecadas a partir de una suspensin

acuosa, y colocadas sobre pequeas tiras de un material de prueba

apropiado (pueden usarse diferentes soportes, adems del papel) para

el tipo de proceso y las cargas usados. El inculo usado es del orden de

105 106 esporas por pieza testigo. Para cada proceso de esterilizacin

colocar las tirillas con esporas (Bacillus stearothermophilus: para todos

los procesos por calor hmedo) en lugares estratgicos, donde el calor

o cualquier otro tratamiento empleado sea ms difcil de penetrar. En

este mtodo se somete el indicador al mismo tratamiento esterilizante

que el material a esterilizar.

Los indicadores biolgicos una vez cumplido el proceso de esterilizacin se

colocan en un caldo nutritivo adecuado, y se incuban a 37 C durante 24 h

(cualquier espora sobreviviente tendr oportunidad para desarrollar), si el

procedimiento estuvo bien realizado, el caldo nutritivo no muestra desarrollo

bacteriano. Estos indicadores tambin se presentan en ampollas con caldo de

cultivo incorporado.

:Este mtodo a pesar de que no puede ser ledo inmediatamente (por el tiempo de

incubacin) es el ms confiable.

b) Control fsico: Termocupla

Es un mtodo directo que registra la temperatura a la cual se desarrolla la

esterilizacin. Consiste en colocar sondas en puntos significativos en la carga a ser

esterilizada y registra la temperatura. Consiste en dos metales que estn en contacto y

por diferencia de temperatura generan una fuerza electromagntica que se detecta en

un instrumento que puede hacerse incidir en una aguja inscriptota sobre una cinta

que gira 360 en 12 24 h. Son termgrafos e indican la temperatura alcanzada y

durante cuanto tiempo se mantuvo la misma. De este modo queda un testigo de todas

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las operaciones realizadas ese da. Este mtodo permite que el proceso de

esterilizacin sea controlado directamente y su eficiencia determinada sin demora.

c) Controles qumicos: sustancias qumicas de punto de fusin conocido y bien definido

Tubos testigos que contienen sustancias que funden a las temperaturas de

esterilizacin, pero no resultan muy satisfactorios, porque no dan informacin sobre la

relacin temperatura/tiempo como tampoco miden la penetracin del vapor. Estas

sustancias suelen utilizarse para esterilizadores por vapor. Para tratamientos a 121 C

se recomienda sustancias tales como anhdrido succnico (PF: 120 C) o cido

benzoico (PF: 121 C) y para tratamientos a 115 C es apropiado el azufre (PF: 115

C). Estas sustancias estn mezcladas con un colorante y al fundir indican si se

alcanz la temperatura ptima de esterilizacin.

Otros seran los tubos de Browne (hay varios tipos), que contienen una mezcla de

reaccin en solucin e indicadores ajustados de forma tal que se necesita una

combinacin especfica de tiempo y temperatura para que ocurra la reaccin y se

produzca el viraje del indicador. Adems, existen cintas adhesivas sensibles al calor o

radiacin que modifican su color cuando se alcanza la temperatura o dosis deseada.

Tambin se dispone de tiras de papel impregnadas con derivados de 2,4-

dinitrofenilhidraciana que funde a la temperatura de esterilizacin.

Actualmente existen, los llamados integradores de esterilizacin que son una clase

superior de indicadores, que mediante un cambio cromtico progresivo integran todas

las variables crticas del proceso. Estos integradores para calor seco (cambian de

color del amarillo al marrn: ciclo correcto) y para vapor (cambian de color amarillo al

azul: ciclo correcto).

d) Otros indicadores qumicos: envases conteniendo una solucin de cloruro de

magnesio con indicador azul de bromofenol para el control del proceso de

esterilizacin con xido de etileno, el cual luego de una exposicin adecuada se

alcaliniza y cambia el color del indicador.

e) En la esterilizacin por filtracin es necesario controlar la integridad del filtro, elcierre hermtico entre la membrana y el soporte, la membrana normalmente no deja

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pasar el aire, por lo tanto si no est rota, y el filtro se arm correctamente no debe

pasar el aire.

Controles de esterilidad

Consiste en tomar muestras representativas de los objetos o materiales esterilizados y

realizar controles con el fin de asegurar la no presencia de microorganismos.

Si se trata de un medio de cultivo rico fraccionado en tubos, se toma los de la zona

central de la cesta que los contiene, que es donde se supone que alcanza ms

difcilmente la temperatura y se incuban directamente.

Si se trata de una sustancia termolbil esterilizada por filtracin, se toma una alcuota y

se coloca aspticamente en un medio de cultivo adecuado. Segn la Farmacopea

Argentina se debe usar: medio de tioglicolato para bacterias anaerobias incubando

durante 7 das, agar nutritivo para bacterias aerobias e incubando durante 48 h, y en

medio de casena de soja para hongos incubando 10 das a 22 25 C.

Microorganismos esporulados usados en controles de esterilizacin:

- Bacillus stearothermophilus: para esterilizadores de vapor- Bacillus subtilis vr. niger: para esterilizacin por oxido de etileno

- Bacillus subtilis vr. nger o Clostridium tetani: para esterilizacin por calor seco

- Bacillus pumilus o Streptococcus faccium: para esterilizacin por radiaciones

ionizantes

MTODOS QUMICOS

Oxido de etileno: destruye las bacterias en estado vegetativo, el bacilo de latuberculosis, las esporas y los virus. El mecanismo de accin: es por alquilacin,modifica la estructura molecular de las protenas; los hidrgenos lbiles de lasprotenas, como SH, -COOH u OH, son reemplazados por grupos alquilos, atravs de reacciones irreversibles que alteran los procesos de reproduccin ymetablicos normales de las clulas.

Aplicaciones: se debe usar para esterilizar aquellos materiales que no puedenser esterilizados por vapor o calor seco, como:

- Fibras artificiales

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- Aparatos termolbiles y pticos- Accesorios de mquinas de circulacin extracorprea- Accesorios de respiradores- Hilos de sutura

Ventajas:

Es bactericida, esporicida y virucida

Posee un coeficiente de difusin muy favorable

Necesita humedades relativas superiores al 60%

Puede usarse para material termosensible o muy delicado (cuero,

libros, etc.)

Desventajas:

Es potencialmente explosivo e inflamable

Tiene tendencia a polimerizarse

Accin lenta. Se requieren concentraciones de 500 mg/L por un tiempo

de aproximadamente 2 h con factores de inactivacin de 107 para

esporas de B. subtilis. Pueden emplearse tiempos de 3 4 h para

garantizar un amplio margen de seguridad,

Puede ser incompatible con algunos plsticos

Es txico. Puede producir toxicidad aguda o crnica en el operador.

Aguda: por inhalacin comparable con el amonaco puro, irritacinocular, irritacin respiratoria, vmitos y diarrea, cefalea, quemaduras,

reacciones de hipersensibilidad. Crnica: anemia, hepatotoxicidad,disminucin del sentido del olfato, neurotoxicidad, aumento de

incidencia de cncer como leucemia y cncer de estomago, irritacin

respiratoria e infeccin secundaria.

Formaldehdo: Puede resultar tan efectivo como el xido de etileno siempre que sealcancen y se mantengan las condiciones correctas y que los artculos a esterilizar las

soporten. Posee altos coeficientes de temperatura y de concentracin, es de muy bajo

poder penetrante, tiende a polimerizarse a una forma inactiva a bajas temperaturas, lo

cual reduce rpidamente la concentracin efectiva. Es afectado por materia orgnica

como suero, esputo, pus, lo cual puede requerir tiempos de exposicin prolongados.

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Los artculos esterilizados mediante formaldehdo deben estar perfectamente limpios,

libres de sustancias protectivas, en envases abiertos. La humedad relativa debe ser

mantenida entre el 80 y 90%, la temperatura por encima de 60 C, y la concentracin

al mayor nivel posible. El tiempo de exposicin debera ser lo ms prolongado posible

y no menor de 4 h.

Glutaraldehdo: soluciones alcalinas pueden resultar esporicidas y adecuadas parala esterilizacin de superficies. Se necesitan concentraciones del 2% en solucin

acuosa a pH 7,5 y 8,5, el cual se logra con el agregado de 0,3% de bicarbonato de

sodio que acta como buffer, pero reduce la estabilidad de la solucin a 2 semanas

cuando se mantiene a 20 C, porque puede ocurrir una polimerizacin inactiva.

Aplicaciones y precauciones

Se pueden esterilizar por este mtodo todo tipo de instrumental que no puedaesterilizarse por calor (inoxidables, lentes, sintticos flexibles, etc.) efectuandoinmersiones en cubas apropiadas.

El material que va a ser esterilizado o desinfectado por este mtodo debe lavarse

previamente con abundante agua para reducir la presencia de sustancias orgnicas

comunes (sangre, suero, pus, etc.). Deben utilizarse guantes de goma y antiparras

durante su empleo porque es irritante de mucosas, piel y membranas.

El material tratado debe enjuagarse muy bien con agua destilada estril y secar con

nitrgeno o se puede lograr un secado rpido con una mezcla de alcohol y agua

(50%). Se debe trabajar en lugares que se pueden airear ya que el glutaraldehdo es

muy irritante y voltil.

El mecanismo de accin del glutaraldehdo y formaldehdo es por alquilacin.

Gas plasma: es un sistema de esterilizacin a baja temperatura. Existen dos mtodosde esterilizacin por produccin de gas plasma:

A) Perxido de hidrgeno-gas plasma: se vaporizan 1,8 ml de perxido dehidrgeno al 58% en una cmara de esterilizacin, el vapor es convertido en

plasma cuando es expuesto a energa de frecuencia radial. El plasma consiste

en partculas altamente cargadas y radicales libres que esterilizan instrumentos

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en aproximadamente 1 hora y no produce residuos o emisiones txicas, dado

que los productos finales son vapores de agua y oxgeno.

B) Acido peractico-gas plasma: se provee una emisin continua de gasperactico dentro de la cmara de esterilizacin, cuando este gas es sometido

a energa de frecuencia radial se convierte en estado de plasma.

Estos mtodos son tecnologas emergentes, que por el momento slo pueden ser

utilizadas en hospitales, y an no han sido desarrollados como para poder ser usados

a nivel industrial.

Mecanismo de accin: consiste en partculas altamente cargadas y radicaleslibres esterilizantes.

Aplicaciones: se puede esterilizar material metlico y no metlico e instrumentalmdico sin los efectos degradantes del vapor de agua, que puede deteriorar elinstrumental de microciruga. Los artculos esterilizados pueden ser usadosinmediatamente o ser almacenados en empaques protectores hasta que seanutilizados.

No se pueden esterilizar productos de celulosa, muselina, algodn, papel, agua,materiales orgnicos.

ANTISEPTICOS - DESINFECTANTES

Es importante destacar que, los agentes qumicos que son usados para destruir

microorganismos sobre objetos inanimados se denominan desinfectantes, mientrasque antispticos son aquellos que matan o inhiben el crecimiento de losmicroorganismos y pueden aplicarse sobre tejidos vivos.

Desinfectantes.

Clasificacin de acuerdo a su mecanismo de accin:

A) Agentes que daan la membrana celular

1) Detergentes : a) catinicos b) aninicos c) no inicos

2) Compuestos fenlicos: a) fenol b) cresoles c) bisfenoles (triclosn)

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3) Alcoholes: a) etanol b) isopropanol

B) Agentes desnaturalizantes de protenas

a) cidos y bases fuertes b) cidos orgnicos no disociables

C) Agentes modificadores de grupos funcionales de protenas y cidosnucleicos

1) Metales pesados

a) compuestos mercuriales b) compuestos de plata

2) Agentes oxidantes

a) halgenos b) agua oxigenada c) cido peractico

Agentes que daan la membrana celular

Agentes tensioactivos. Los compuestos tensioactivos incluyen los jabones ydetergentes. El jabn tiene escaso valor como antisptico pero desempea una

importante funcin en la eliminacin mecnica de los microorganismos. Los

agentes tensioactivos ms utilizados son los detergentes catinicos, en especial

los compuestos de amonio cuaternario. Estos compuestos presentan una fuerteactividad bactericida contra las bacterias Gram positivas y menos contra bacterias

Gram negativas. Tambin son fungicidas y viricidas contra los virus envueltos. No

destruyen las endosporas ni las micobacterias.

Mecanismo de accin: afectan la membrana citoplasmtica, alteran lapermeabilidad de la clula y provocan la prdida de constituyentescitoplasmticos esenciales, como el potasio. Uno de los compuestos deamonio cuaternario ms utilizado es el cloruro de benzalconio, el cual presenta una

fuerte accin antimicrobiana.

Fenoles. Los derivados fenlicos ejercen su actividad al lesionar las membranascitoplasmticas que contienen lpidos, lo que determina la prdida del contenido

celular. El fenol no se utiliza en la actualidad debido a los efectos irritantes sobre

piel.

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Alcoholes. Los alcoholes ejercen su accin mediante la desnaturalizacin delas protenas y la disolucin de los lpidos. La accin desinfectante aumentacon la longitud de la cadena aliftica de los alcoholes. Dos de los alcoholes ms

utilizados son:

Etanol: el etanol puro es menos eficaz que las soluciones acuosas porque ladesnaturalizacin requiere agua. La concentracin ptima recomendada de etanol

es del 70%. Disuelve los lpidos que protegen a los microorganismos de la piel.

Isopropanol: es menos voltil y ms potente que el etanol como antisptico ydesinfectante..

B) Agentes desnaturalizantes de protenas

cidos y bases fuertes: son activos bactericidas, debido a los grupos H+ y OH-

disociados, respectivamente.

cidos orgnicos: Los cidos orgnicos simples o sales de cidos orgnicos seutilizan como conservantes de alimentos. El cido srbico o su sal ms soluble sorbato

de potasio y el benzoato de sodio impiden el crecimiento de hongos filamentosos en

alimentos.

C) Agentes modificadores de grupos funcionales de protenas y cidosnucleicos

Estos agentes se caracterizan porque alteran grupos que forman parte de los

centros activos de enzimas y otras protenas; alteran grupos funcionales de cidos

nucleicos, componentes de pared y membrana.

Metales pesados: Varios metales pesados, como la plata, el mercurio y el cobre,pueden ser germicidas o antispticos. Cuando estos iones se combinan con losgrupos sulfhdrilo existentes en las protenas celulares se produce sudesnaturalizacin. La plata se utilizaba como antisptico en una solucin denitrato de plata al 1% para evitar la oftalma gonoccica neonatal, actualmente se

ha reeemplazado por antibiticos.

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Agentes oxidantes.

Halgenos: el yodo es uno de los antispticos ms antiguos y ms eficaces. Actacontra toda clase de bacterias y contra endosporas, diversos hongos y algunos

virus. El yodo puede combinarse con ciertos aminocidos para inactivarenzimas y otras protenas celulares.

Sus principales presentaciones son la tintura de yodo ( solucin acuosa-alcohlica) y iodforos. Tintura de yodo: es una mezcla de I2 + IK en alcohol 70%,es un antisptico de piel. Alcohol iodado: tintura de yodo al 10% en etanol de 96

C. Los iodforos (combinacin de yodo y una molcula orgnica, a partir de la cual

el yodo se libera lentamente) son antispticos. Tambin se emplean en la

desinfeccin de instalaciones en industrias alimentaras.

El cloro como gas o en combinacin con otras sustancias qumicas, se lo utilizacomo desinfectante. Su accin germicida est determinada por el cido

hipocloroso que se forma cuando el cloro se agrega al agua. El hipoclorito de sodio

se usa para desinfectar superficies, es de accin rpida, es menos satisfactorio

para materiales que contienen materia orgnica.

El perxido de hidrgeno es un antisptico que se encuentra en la mayora delos botiquines caseros. No es un buen antisptico para las heridas abiertas,

porque el H2O2 es degrado a agua y oxgeno gaseoso por la catalasa tisular. Sin

embargo, es eficaz en la desinfeccin de objetos inanimados.

Factores que afectan la potencia de un desinfectante

Concentracin del agente y tiempo de accin

pH

Temperatura

Presencia de materiales extraos

Concentracin del agente y tiempo de accin. La concentracin para obtener undeterminado efecto, as como el rango de concentraciones en que se puede demostrar

un determinado efecto, depende del tipo qumico del desinfectante y del tipo de

microorganismos a eliminar. Existe una estrecha relacin entre la concentracin del

agente y el tiempo necesario para matar una determinada fraccin de la poblacin

bacteriana.

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pH. El pH afecta tanto a la carga superficial neta de la bacteria como al grado deionizacin del agente. En general, las formas ionizadas de los agentes disociables

pasan mejor a travs de las membranas biolgicas, y por lo tanto son ms efectivos.

Los agentes catinicos muestran ms eficacia a pH alcalinos, mientras que los

aninicos suelen ser ms efectivos a pH cidos.

Temperatura. Normalmente, al aumentar la temperatura aumenta la potencia de losdesinfectantes. Para muchos agentes el aumento de 10 C supone duplicar la tasa de

muerte.

Presencia de materiales extraos. La presencia de materia orgnicaen el material (ej. sangre, suero, pus) afecta negativamente a la

potencia de los desinfectantes de tipo oxidante (como los hipocloritos) y

de tipo desnaturalizante de protenas, hasta el punto que pueden llegar

a hacerlos inactivos.

Evaluacin de la potencia de un desinfectante

La determinacin de la actividad desinfectante de un determinado agente es necesaria

para conocer su posible eficacia. Durante muchos aos la prueba de referencia fue la

prueba del coeficiente fenlico, comparaba la actividad de un desinfectante dadocon la del fenol. Sin embargo, el estndar actual es el mtodo de difusin con disco.

Mtodo de difusin con disco. Este mtodo se utiliza mucho en los laboratoriospara evaluar la eficacia de un agente qumico. Un disco de papel de filtro se embebe

con la sustancia qumica y se coloca sobre una placa de agar previamente inoculada

con el microorganismo de prueba. Si la sustancia qumica es eficaz despus de la

incubacin se puede observar una zona clara que representa la inhibicin del

crecimiento alrededor del disco.

Bibliografa

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