dra. javiera cornejo, mv., phd favet , universidad de chile...
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• Dra. Javiera Cornejo, MV., PhD
• FAVET , Universidad de Chile
“MODELO DE DEPLECIÓN DE OXITETRACICLINA UTILIZADA EN CENTROS DE CULTIVO DE SALMONES CON BROTES DE PISCIRICKETTSIOSIS”
Investigadora responsable: Dra. Betty San Martin,
Investigadores: Javiera Cornejo, Jose Miguel Burgos, Jorge Ponce, Marcela Fresno.
En la terapia en centros de cultivo marinos con brotes de Piscirickettsiosis, actualmente se utilizan dos antibióticos: florfenicol y oxitetraciclina.
Durante estos últimos 5 años, en el Programa oficial de Control de Residuos de Medicamentos Veterinarios, solo oxitetraciclina ha sido detectado en concentraciones sobre los LMR.
Razones?
Contexto del Proyecto
Florfenicol Molécula de rápida eliminación después de finalizada una terapia.
Todas las presentaciones farmacéuticas autorizadas por el Registro de Medicamentos Veterinarios (RMV) se administran a través del alimento y los períodos de carencia definidos para cada una de ellas no superan los 450°C días.
La biodisponibilidad de florfenicol es cercana al 90%
Curvas de depleción no tienen mayores variaciones en relación a las dosis administradas, duración de la terapia, temperatura del agua, peso del salmón al momento de realizar la terapia
Los LMR permitidos, los cuales no difieren significativamente entre los países.
Contexto del Proyecto
Oxitetraciclina Situación es diametralmente diferente.
Es una molécula de lenta eliminación con gran afinidad por tejido graso.
Biodisponibilidad oral varía entre un 30 y un 50% características del alimento y forma de administrar el alimento medicado.
Curvas de depleción pueden variar significativamente en relación a la dosis administrada, duración de la terapia, peso del salmón al momento de realizar la terapia, temperatura del agua y los LMRs definidos por los países a los cuales exportamos.
Los períodos de carencia finalizan en el momento en que el fármaco alcanza en los tejidos comestibles concentraciones ≤ a los LMRs. Aun cuando existe un acuerdo de armonizar los criterios de inocuidad en el comercio internacional de los alimentos, dentro de los cuales se encuentran los LMRs, actualmente existen grandes diferencias para algunos fármacos.
Contexto del Proyecto
Chile acepta, para oxitetraciclina, un LMR de 200 µg/Kg,
Registro de Medicamentos Veterinarios período de carencia de 600°C día para las formulaciones orales y de hasta 1250°C día en las formulaciones inyectables.
Estos períodos de carencia, no logran cubrir las exigencias de inocuidad de otros países
• Unión Europea y China LMR 100 µg/Kg
• Unión Económica Euroasiática LMR 10 µg/Kg.
Contexto del Proyecto
SERNAPESCA “Programa de control de residuos de medicamentos veterinarios”, verificar que los salmones cumplan con los criterios de inocuidad.
Médicos Veterinarios responsables de las terapias en los centros de cultivo respetar los períodos de carencia concentraciones sean ≤ a los LMR establecidos por los mercados de destino oxitetraciclina son más exigentes que los establecidos a nivel nacional.
Causa por la cual el antibiótico detectado en el “Programa de control mensual de residuos de medicamentos veterinarios” realizado por FARMAVET, laboratorio de referencia para el estado.
Dependiendo de la concentración detectada SERNAPESCA limita la exportación del producto al mercado de destino.
Contexto del Proyecto
La utilización de oxitetraciclina en el tratamiento del Síndrome Rickettsial del Salmón externalidades importantes al modelo de producción:
• largas carencias
• Incertidumbre al minuto de la cosecha por las diferencias encontradas entre análisis de campo realizadas por los productores antes de la cosecha y las muestras oficiales del propio SERNAPESCA.
Escasa información respecto a la depleción de este antibiótico en el pez en relación a: las dosis, tratamientos, condiciones ambientales en que se realizan y los LMRs establecidos por los diferentes países.
Necesidad de evaluar mediante estudios de depleción los períodos de carencia considerando las características fisicoquímicas del antibiótico y los diferentes LMRs definidos por los países a los cuales la industria nacional exporta.
Contexto del Proyecto
SERNAPESCA, cuente con los fundamentos científicos tecnológicos necesarios, para recomendar a los productores de salmón la terapia y el momento más adecuado de realizar una terapia con oxitetraciclina durante la fase de engorda en agua de mar.
Esto, con el fin de minimizar el riesgo de que las concentraciones de oxitetraciclina al momento de la cosecha, sean ≥ a los LMR establecido por el país al cual están dirigidas las exportaciones.
Por otro lado, SERNAPESCA tendrá identificada las principales variables que durante un tratamiento pueden afectar la duración de los períodos de carencia.
Resultado Esperado
• Evaluar los periodos de carencia de oxitetraciclina (mediante un
estudio restrospectivo y prospectivo) durante la fase de engorda
en agua de mar y relacionar con su posología, con el fin de obtener
una aproximación de los periodos de carencia en relación a los
LMR de los diferentes mercados.
Objetivo General
1. Caracterización retrospectiva de las terapias y periodos de carencia de oxitetraciclina realizadas entre los años 2016 y julio 2018 declarados en el SIFA
2. Caracterización de la posología y periodo de carencia en muestras positivas a oxitetraciclina en el Programa de Control de Residuos entre los años 2016 y 2017
3. Obtención de un modelo para obtener una curva de depleción de oxitetraciclina en condiciones de campo, considerando los LMR de los diferentes mercados
Objetivos Específicos
Objetivo N°1: Caracterización retrospectiva de las terapias y periodos de
carencia de oxitetraciclina entre los años 2016 y julio 2018
1. Se analizó la información del SIFA y se seleccionaron aquellas Prescripciones Médico Veterinarias (PMV) emitidas entre los años 2016 y julio 2018, que hayan diagnosticado Piscirickettsiosis y tratado con oxitetraciclina. La información será analizada considerando la vía de administración y la especie objetivo, en relación a las siguientes variables:• Dosis declarada• Duración de la terapia• Temperatura
2. Se relacionaron los esquemas terapéuticos realizados por el centro del cultivo, con los periodos de carencia declarados.
3. Análisis estadístico: Se calculo el coeficiente de correlación entre variables
Resultados (OTC Inyectable)
N°PMV según carencia
Dosis 300 a 600 601 a 900 901 a 1500 1501 a 1800 1801 a 2400 2401 a 2700 2701-3600 Total % Total
20-25 mg/Kg 3 4 41 23 0 6 0 77 10.8
30-35 mg/Kg 28 68 181 90 116 91 64 638 89.2
Total 31 72 222 113 116 97 64 715 100.0
Resultados
N°PMV según carencia
Especie 300 a 600 601 a 900 901 a 1500 1501 a 1800 1801 a 2400 2401 a 2700 2701-3600 Total % Total
S. Atlántico 7 16 127 79 115 97 64 505 70.6
S. Coho 7 6 60 29 1 0 0 103 14.4
Trucha arcoiris 17 50 35 5 0 0 0 107 15.0
Total 31 72 222 113 116 97 64 715 100.0
Resultados
N°PMV según carencia
Epoca* 300 a 600 601 a 900 901 a 1500 1501 a 1800 1801 a 2400 2401 a 2700 2701-3600 Total % Total
Verano 3 23 69 38 36 58 22 249 34.8
Otoño 22 16 42 30 21 22 21 174 24.3
Invierno 3 22 48 19 14 9 4 119 16.6
Primavera 3 11 63 26 45 8 17 173 24.2
Total 31 72 222 113 116 97 64 715 100.0
*Verano: Dic-Feb; Otoño: Mar-My; Invierno: Jun-Ag; Primavera: Sept-Nov
Resultados
• Se realizaron análisis de los coeficientes de correlaciones de Spearmanpara las variables Período Carencia (PC), especie, dosis y época del año.
• Las correlaciones obtenidas fueron las siguientes:
• Período de Carencia (PC) y especie fue de -0,59: coeficiente de correlación medio (de 0,25 a 0,75)
• Período de Carencia (PC) y dosis fue de -0,18: coeficiente de correlación bajo
• Período de Carencia (PC) y época del año 0,08: coeficiente de correlación bajo
Objetivo N°2: Caracterización de la posología y periodo de carencia
en muestras positivas a oxitetraciclina en el Programa de Control
de Residuos entre los años 2016 y 2018
1. Se analizaron los informes emitidos por FARMAVET entre los años 2016 y 2018, correspondientes al Control Mensual del Programa de Control de Residuos, con el fin de seleccionar las muestras positivas a oxitetraciclina.
2. Se agruparon los informes de acuerdo a la concentración detectada, considerando los LMR de los mercados de destino
3. A través del código del centro de cultivo, se realizó la trazabilidad de cada informe con la información declarada en el SIFA, con el fin de:• Relacionar los periodos de carencia declarados en el SIFA con la concentración detectada en
el Control Mensual del Programa de Control de Residuos.• Relacionar la dosis, duración de la terapia y especie salmonídea declarada en el SIFA, con la
concentración detectada Control Mensual del Programa de Control de Residuos.
Resultados
Detecciones a partir de Tratamientos Inyectables OTC
Carencia en UTA
Concentraciones ( ppb) N° PMV PMV (%) Carencia Mínima Carencia Máxima
<10 6 8,3 900 2000
>10<80 51 70,8 350 3600
>80 15 20,8 350 3600
Total 72 100,0
Resultados
Detecciones a partir de Tratamientos Inyectables OTC
PMV (%) según Especie salmoníneaPMV (Nº) según Especie
salmonínea
Concentraciones ( ppb) N° PMV PMV (%) S. Atlántico S. Coho TruchaS. Atlántico S. Coho Trucha
<10 6 8,3 83,3 0,0 16,7 5 0 1
>10<80 51 70,8 80,4 5,9 13,7 41 3 7
>80 15 20,8 100,0 0,0 0,0 15 0 0
Total 72 100,0
Objetivo N°3: Obtención de un modelo para obtener una curva de
depleción de oxitetraciclina en condiciones de campo,
considerando los LMR de los diferentes mercados
1. Centros de cultivo: centros de cultivo de diferentes empresas, con diferentes especies salmonídeas, provenientes de la Región de Los Lagos y Región de Aysén, que reúnen las siguientes características:
• Haber presentado cuadros clínicos de Piscirickettsiosis.
• Haber realizado terapias con oxitetraciclina inyectable, bajo la prescripción de un Médico Veterinario.
• Se encuentren actualmente en los últimos 4 meses del ciclo de engorda en agua de mar.
• De cada centro de cultivo, se obtendrá la siguiente información: Producto comercial utilizado ; Vía de administración; Dosis; Especie tratada; Registros de temperatura; Fecha de inicio de tratamiento; Fecha de término de tratamiento; Ubicación del centro (latitud aproximada).
2. Unidad muestral: jaula tratada
Objetivo N°3: Obtención de un modelo para obtener una curva de
depleción de oxitetraciclina en condiciones de campo,
considerando los LMR de los diferentes mercados
3. Número de muestras por jaula:
Siguiendo las recomendaciones del VICH GL57 2018, se tomaron
10 peces de manera aleatoria por tiempo de muestreo.
Los peces fueron pesados y luego faenados para obtener una
muestra de músculo con piel en proporciones naturales, de a lo
menos 500 gramos.
Las muestras: separadas e identificadas en bolsas individuales y se
mantendrán en cadena de frío hasta el envío al Laboratorio
FARMAVET de la Universidad de Chile, donde se cuantificarán las
concentraciones de oxitetraciclina.
Las muestras serán obtenidas por profesionales calificados.
Objetivo N°3: Obtención de un modelo para obtener una curva de
depleción de oxitetraciclina en condiciones de campo,
considerando los LMR de los diferentes mercados
2. Método analítico: Las muestras de músculo con pielen proporciones naturales, serán analizadas con elmétodo analítico previamente validado para su usoen el laboratorio FARMAVET de la Universidad deChile, de acuerdo a las Normas ISO 17025 yautorizado por el Servicio Nacional de Pesca yAcuicultura. El método validado es el recomendadopor Laboratorio RIKILT, Wageningen UR, Holanda“Determinación y confirmación de tetraciclinas encarne, pescado, miel, leche, orina, camarones ymaterial animal por LC-MS/MS” SOAP-A-0896, versión10.
Objetivo N°3: Obtención de un modelo para obtener una curva de
depleción de oxitetraciclina en condiciones de campo,
considerando los LMR de los diferentes mercados
5. Determinación de los periodos de carencia para losdiferentes LMRs: Siguiendo las recomendaciones del CVMP2016 Draft: Guidelines on approach towards harmonisation ofwithdrawal periods.
Se obtendrán las concentraciones en función del tiempodurante la fase de depleción del fármaco.
Estas se llevarán a una curva semi logarítmica para poder,mediante un análisis de regresión lineal, determinar losperiodos de carencia.
Los periodos de carencia serán definidos en el punto detiempo donde, el límite de tolerancia superior con 95% denivel de confianza, esté por debajo del LMR establecido por losmercados de destino. Si este punto de tiempo no correspondea un día completo, debe ser redondeado al día siguiente.
Determinacion de los periodos de Carencia
Resultados
Nombrecentroyjaula
(NOMOSTRAR)Jaula Especie
Dosis
(mg/Kg)
Díasalúltimo
muestreo(días)
Tºpromedio
(ºC)
Concentraciones
(rangoanalítico)
(ppb)
Carenciaalúltimo
muestreo(UTA)
Carenciacalculada
porregresiónlineal
(UTA)
Carencia
recomendadapor
MV(UTA)
Cholgo-101 1 Truchaarcoiris 30 141 10.6 20.27-11.39 1494.6 3086.5 1300
Marisur-210 2 Truchaarcoiris 30 176 10.8 48.87-12.88 1900.8 5390.1 1200
Apiao-101 3 SalmóndelAtlántico 25 184 10.6 25.33-9.63 1950.4 4912.2 2500
Apiao-104 4 SalmóndelAtlántico 20 184 10.6 32.23-0.0 1950.4 3687.0 2500
Huyar-110 5 SalmóndelAtlántico 30 304 10.5 13.91-5.28 3192 6219.2 2500
273 10.5 3.8-0.54 2866.5 Noaplica 1800
304 10.5 7.72-1.48 3192 Noaplica 1800
334 10.5 2.27-0.0 3507 Noaplica 1800
RadadeAchao-102 7 SalmóndelAtlántico 30 280 10.5 7.5-1.66 2940 Noaplica 2800
Caucacura-102 8 SalmóndelAtlántico 35 282 10.5 4.18-1.19 2961 4267.2 1060
Chauquiar-208 9 SalmónCoho 35 117 10.5 63.71-36.06 1228.5 2989.3 1060
Chauquiar-119 10 SalmónCoho 35 167 10.5 32.18-21.31 1753.5 4037.76 1060
ElenaWeste-15 11 SalmónCoho 25 139 10.5 16.19-7.27 1459.5 2327.2 1800
Codihue-109 12 Salmóncoho 100 129 10.5 4.69-2.7 1354.5 1875.3 1800
PuntaIglesia-109 13 TruchaArcoiris 30 103 10.5 52.32-32.96 1081.5 2140.4 900
PuntaIglesia-110 14 TruchaArcoiris 30 103 10.5 25.41-19.66 1081.5 1966.6 900
100SalmóndelAtlántico6Pichagua-11
puntodemuestreodiaspost-
tratamientoUTAs muestra
ConcentraciondeOTC
(ng/g)
1 51 540.6 1 152.340
1 51 540.6 2 116.330
1 51 540.6 3 91.610
1 51 540.6 4 91.680
1 51 540.6 5 177.630
1 51 540.6 6 111.380
1 51 540.6 7 59.630
1 51 540.6 8 59.290
1 51 540.6 9 114.960
1 51 540.6 10 164.780
2 79 837.4 1 53.040
2 79 837.4 2 86.760
2 79 837.4 3 95.340
2 79 837.4 4 84.890
2 79 837.4 5 91.4302 79 837.4 6 147.8702 79 837.4 7 126.6002 79 837.4 8 153.9302 79 837.4 9 106.570
2 79 837.4 10 45.000
3 141 1494.6 1 20.270
3 141 1494.6 2 18.320
3 141 1494.6 3 16.020
3 141 1494.6 4 18.380
3 141 1494.6 5 16.310
3 141 1494.6 6 17.960
3 141 1494.6 7 11.390
3 141 1494.6 8 13.780
3 141 1494.6 9 14.490
3 141 1494.6 10 17.760
DeplecionOTCSalmonesAntárticaCentroCHOLGOJaula101
-1,00
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
7,00
8,00
0 50 100 150 200 250 300 350
Ln
Post-treatment days
MRL 10 ppb OTC
OTC concentration 95% confidence " LMR 100 ppb
Lineal (MRL 10 ppb) Lineal (OTC)
Lineal (OTC concentration 95% confidence ") Lineal (LMR 100 ppb)
Temperatura 10.6 WDT 291.2 (días)
3086.5 (UTAs)
CarenciaRecomendada 1300 (UTAs)
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
7,00
8,00
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
Ln
Post-treatment days
MRL 10 ppb OTC
OTC concentration 95% confidence " LMR 100 ppb
Lineal (MRL 10 ppb) Lineal (OTC)
Lineal (OTC concentration 95% confidence ") Lineal (LMR 100 ppb)
Temperatura 10.8 WDT 499.1 (días)
5390.1 (UTAs)
Carencia recomendada 1200 (UTAs)
puntode
muestreo
diaspost-
tratamient
o
UTAs muestraConcentracionde
OTC(ng/g)promedio
1 86 928.8 1 110.6
1 86 928.8 2 51.8
1 86 928.8 3 58.7
1 86 928.8 4 110.6
1 86 928.8 5 118.6
1 86 928.8 6 83.8
1 86 928.8 7 120.0
1 86 928.8 8 57.1
1 86 928.8 9 43.8
1 86 928.8 10 129.9
2 114 1231.2 1 67.9
2 114 1231.2 2 49.7
2 114 1231.2 3 20.1
2 114 1231.2 4 18.1
2 114 1231.2 5 27.42 114 1231.2 6 29.52 114 1231.2 7 20.92 114 1231.2 8 20.62 114 1231.2 9 12.2
2 114 1231.2 10 14.2
3 176 1900.8 1 27.5
3 176 1900.8 2 17.2
3 176 1900.8 3 26.4
3 176 1900.8 4 29.4
3 176 1900.8 5 48.9
3 176 1900.8 6 12.9
3 176 1900.8 7 21.5
3 176 1900.8 8 21.2
3 176 1900.8 9 27.8
3 176 1900.8 10 20.8
DeplecionOTCSalmonesAntárticaCentromarisurJaula201
88.49
28.06
25.36
Gracias
252 B Oxitetraciclina clorhidrato20%
TerrivetF200
SUSPENSIÓN INYECTABLE
ANTIMICROBIANOS
VETERQUÍMICA S.A.
VETERQUÍMICA S.A.
FABRICACIÓN PROPIA
1060 grados días
BAJO RECETA MEDICO VETERINARIA
2365
B Oxitetraciclina 5%
Zanil 5% SOLUCIÓN INYECTABLE
ANTIMICROBIANOS
CENTROVET LTDA.
CENTROVET LTDA.
FABRICACIÓN PROPIA
1256 grados días.
BAJO RECETA MEDICO VETERINARIA