directrices para la acreditación laboratorios ambientales

Laboratorios AmbientalesDirectrices para la Acreditacin

MARZO 2009

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Diseo y diagramacin: Marcelo Caiafa

Laboratorios Ambientales

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Carta - PrlogoNo existe gestin ambiental alguna sin mediciones. Y no hay mediciones si no existe confianza en los resultados de las mismas. La exacta simplicidad de estas afirmaciones contrasta, sin embargo, con las dificultades para alcanzar ambos extremos. Y si pensamos en entidades como los laboratorios, cumplir con estos requisitos es absolutamente imprescindible. El Laboratorio Ambiental de la DINAMA trabaja, desde hace aos, en el fortalecimiento de las capacidades tcnicas de las instituciones instaladas en el pas, a travs de la Red de Laboratorios Ambientales del Uruguay (RLAU). Al mismo tiempo, ha invertido considerables esfuerzos en legitimarse a s mismo, mejorando el nivel tcnico profesional de sus funcionarios, incorporando sistemticamente nuevas tcnicas y nuevos equipamientos, y generando credibilidad y confiabilidad en los resultados que produce (el Laboratorio de la DINAMA cuenta, desde hace ya varios aos, con certificacin ISO 9001). Cumpliendo con las obligaciones emanadas del liderazgo que ejerce en el sector, el Laboratorio Ambiental de la DINAMA, en cooperacin con el Organismo Uruguayo de Acreditacin (OUA), da un paso ms en el fortalecimiento y apoyo a las instituciones del sector, al publicar este trabajo que ser, sin dudas, una gua fundamental para que los laboratorios nacionales avancen en los procesos de acreditacin en gestin de la calidad. Esta publicacin es una orientacin conceptual para la acreditacin segn la norma internacional ISO/IEC 17025:2005 Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y calibracin, que establece los requisitos a cumplir para acreditar la competencia de los laboratorios de ensayo y calibracin. Su obtencin supone no slo el manejo de determinada tcnica analtica sino la acreditacin por tercera parte y de carcter internacional de la competencia en su uso. Es sumar al saber el reconocimiento imparcial del conocimiento adquirido y esto, en el escenario actual, no es un elemento menor. Y para la DINAMA en particular, el impulsar el desarrollo de las capacidades nacionales de anlisis y gestin ambiental, facilitando el crecimiento y madurez del sector, es cumplir con su rol y vocacin institucional.

Ing. Agr. Alicia Torres Directora Nacional de Medio Ambiente

Directrices para la Acreditacin

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AgradecimientosLa demostracin de que los resultados de un laboratorio son confiables es cada vez ms difcil de lograr, a la luz del incremento de las exigencias de los usuarios de la informacin. Hoy en da, la acreditacin de ensayos evoluciona muy rpidamente, convirtindose en el elemento relevante para el reconocimiento formal de la competencia de un laboratorio, siendo entonces una herramienta que contribuye a garantizar la confianza de los resultados analticos generados por los laboratorios Esta realidad motiva a que en el marco de la Red de Laboratorios Ambientales del Uruguay (rlau) surja la inquietud de elaborar un documento cuyo objetivo principal sea facilitar la implementacin de sistemas de gestin de calidad en los laboratorios tendientes a la acreditacin, a fin de garantizar la adecuacin a requerimientos nacionales e internacionales, y asegurar la confiabilidad de los resultados, permitiendo as mejorar y mantener la eficacia, eficiencia de los laboratorios de anlisis. Es as como se conforma entonces un grupo de trabajo con aquellos laboratorios integrantes de la rlau con vasta experiencia en la temtica y que se sintieron motivados por este proyecto, contando para ello con la coordinacin del OUA y el Laboratorio Ambiental de DINAMA. El grupo de trabajo realiz varias reuniones a lo largo de casi un ao y fue responsable de la redaccin de los diferentes captulos de la gua. Esta gua, producto entonces de un trabajo interinstitucional e interdisciplinario, y que cont con el apoyo institucional y econmico de la DINAMA, pretende, recoger y compartir las lecciones aprendidas y el conocimiento de laboratorios nacionales con experiencia en la implementacin de normativas de acreditacin y certificacin, de manera de facilitar el camino para aquellos laboratorios que estn iniciando dicho proceso. Por el apoyo y la perseverancia que llev a que esto sea posible es que queremos agradecer la invalorable colaboracin de todas las personas que contribuyeron en la elaboracin de este documento:

Ing Qca. Liliane Somma Directora Ejecutiva OUA

Lic. Sandra Castro Scarone Jefa Laboratorio Ambiental DINAMA -MVOTMA


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Participantes en la elaboracinRedaccin, coordinacin y diseo: Lic. Sandra Castro Q F Patricia Simone Bach. Soledad Andrade Q.F. Natalia Barboza M.Sc. Qco. Gualberto Trelles Ing Alim Agustn DAngelo Ing Qca Liliane Somma Revisin y comentarios: M.Sc. Maria Teresa Derregibus Jos Pedro Daz Laboratorio Ambiental DINAMA Laboratorio Ambiental DINAMA Laboratorio Ambiental DINAMA Laboratorio Ambiental DINAMA Laboratorio ECOTECH Laboratorio Microbiolgico ZENG Organismo Uruguayo de Acreditacin

Comit de Acreditacin del OUA Asesor en Comunicacin de DINAMA


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IndiceCarta - Prlogo ..................................................3 ..................................................3 Agradecimientos ...............................................4 ...............................................4 Participantes en la elaboracin .......................5 .......................5 Indice ..................................................................7 ..................................................................7 I Marco Conceptual ..........................................9 ..........................................91 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 El laboratorio y el proceso de decisiones en el marco de la sustentabilidad ambiental .......... 9 Las cualidades de las mejores decisiones .... 9 Requisitos de las diferentes partes ............... 9 El proceso de medida: un enfoque sistmico y de procesos ..............................................10 Objetivos de calidad .....................................10 La validez del proceso de medida: Mtodo y protocolo ......................................................10 Anatoma y funcionamiento del proceso de medida .........................................................10 Gestionar el proceso de medida ..................11 La demostracin de la competencia tcnica 11 El valor de la acreditacin ............................12 Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo ...................................................12 Requisitos del ensayo ..................................12 Interrelacin de los puntos de la norma UNITISO/IEC 17025 .............................................13 8 9 5 6 7 Planificacin de la validacin ....................... 25 Parmetros de calidad ................................ 25 Otras caractersticas de los mtodos analticos .............................................................. 30 Resumen ......................................................31 Validacin de mtodos microbiolgicos .......31

V Materiales de referencia ............................33 ............................31 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Introduccin ................................................ 33 Aplicaciones en general .............................. 33 Aplicacin de los MRC ................................ 33 Clasificacin de los materiales de referencia 33 Materiales de referencia no certificados ...... 34 Gestin de Materiales de referencia certificados .............................................................. 34 Criterios de seleccin .................................. 34 Problemas relacionados con los MRC ........ 35 Gestin de adquisicin y recepcin de los MRC ............................................................ 35 Registro, almacenamiento y empleo de los MRC ............................................................ 36

VI Ensayos de aptitud ....................................39 ....................................31 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Introduccin ................................................ 39 Usos de los Ensayos de Aptitud (EA) .......... 39 Diferentes tipos de ensayos de aptitud ..... 39 Seleccin y uso de EA .............................. 39 Criterios de seleccin .................................. 40 Listado de proveedores aceptados por el OUA: ........................................................... 40 Problemas relacionados con los EA ............ 40 Gestin de adquisicin y recepcin de los EA ..........................................................40 Registro, almacenamiento y empleo de los EA ..........................................................40 Poltica del OUA ..........................................41 Como participar en los EA ...........................41 Como interpretar los resultados de un ensayo interlaboratorio .............................................41

II Interaccin con el cliente ........................... 15 ...........................11 2 3 Revisin de los pedidos ofertas y contratos .15 Servicios al cliente........................................15 Quejas ..........................................................15

III Muestreo ...................................................... 17 ......................................................11 2 3 4 Introduccin. Conceptos bsicos .................17 El proceso analtico y las diferentes operaciones de muestreo involucradas .....................17 Los errores en el proceso de muestreo .......18 Principios claves del muestreo .....................19

IV Seleccin y validacin de los mtodos analticos ....................................................23 ....................................................21 2 3 4 Introduccin ............................................... 23 Seleccin de los mtodos ........................... 23 Concepto de validacin de un mtodo analtico ...............................................................24 Tipos de validacin .................................... 25

VII Actividades de control interno de la calidad .........................................................43 .........................................................4Actividades de control ....................................... 43 1 2 Anlisis de blancos ..................................... 43 Anlisis de muestras de control ................. 43


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Grficos de control ..................................... 44

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Control de documentos ...............................70 Control de los registros ................................70 Control de no conformidades.......................71 Acciones correctivas ....................................71 Acciones preventivas....................................71 Auditorias internas ........................................71 Revisiones por la Direccin ..........................71 Mejora ..........................................................72

VIII Gestin de equipos y Calibracin........... 47 ...........41 2 3 4 Medidas de masa, pesas y balanzas analticas ...............................................................47 Material Volumtrico .....................................47 Mtodos Analticos ..................................... 48 Gestin de los equipos ............................... 49

IX Metrologa y Trazabilidad ..........................53 ..........................51 2 3 Estructura metrolgica ................................ 53 Metrologa en qumica. ................................ 53 Trazabilidad ................................................ 53

XII La Acreditacin ..........................................73 ..........................................71 2 La Acreditacin en el Uruguay ...................73 Requisitos para la organizacin de un organismo de Acreditacin y su reconocimiento internacional ................................................73 Qu es un Acuerdo de Reconocimiento Mutuo (ARM) o Multilateral Recognition Agreement (MLA) entre organismos de acreditacin? ............................................................73 Cuales son esas organizaciones regionales e internacionales que agrupan a los organismos de acreditacin?...........................................74 Proceso de acreditacin del OUA ................74

X Errores e incertidumbre ..............................57 ..............................51 2 3 4 5 Introduccin. ............................................... 57 Teora de los errores en qumica analtica ... 57 Significado y utilidad de la incertidumbre .... 59 Estimacin de la incertidumbre sin considerar la etapa de muestreo .................................. 60 Estimacin de la incertidumbre considerando la etapa de muestreo. Enfoque emprico ..... 63 5 4 3

XI Recursos para la Gestin ..........................65 ..........................61 2 3 4 5 6 7 8 Personal (factores humanos) ....................... 65 Instalaciones y condiciones ambientales..... 66 Manipulacin de objetos de ensayo y calibracin ............................................................ 68 Informe de los resultados ............................ 69 Subcontratacin de ensayos ....................... 69 Compras de servicios y suministros............ 69 Organizacin ............................................... 69 Sistema de gestin.......................................70

Anexo 1.............................................................75 1............................................................. 7 Anexo 2.............................................................76 2.............................................................7 Anexo 3.............................................................77 3.............................................................7 Anexo 4.............................................................79 4.............................................................7 Anexo 5.............................................................80 5.............................................................8 XIII Terminologa y Definiciones.....................81 .....................8 XIV Bibliografa ...............................................83 ...............................................8


I. Marco Conceptual

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I Marco Conceptual1 El laboratorio y el proceso de decisiones en el marco de la sustentabilidad ambientalLa razn de ser de la generacin de resultados es la posterior toma de decisiones a realizar con los mismos, por lo que la actividad de un laboratorio de anlisis qumicos ambientales est siempre, ms o menos directamente relacionada a un proceso de toma de decisiones. En este proceso, el laboratorio puede ser tercera parte o formar parte del equipo que participa en las decisiones. Para cualquiera de los dos casos, siempre existe un usuario a quien los resultados son proporcionados, siendo esta informacin una parte crtica del proceso de decisin. Las conclusiones tomadas con los resultados, siempre supondrn un balance de riesgos que debe contemplar la asignacin de recursos y los posibles efectos sobre el ambiente y la salud humana de decisiones adoptadas con informacin incompleta o errnea. La razn de ser del laboratorio es por tanto, proproporcionar resultados confiables tanto para este usuario, como para la sociedad, la cual parcial o totalmente, ser en ltima instancia la que estar involucrada en los beneficios o perjuicios ocasioocasionados por las decisiones. Estos resultados afectarn entonces de una manera u otra la sustentabilidad ambiental, entendida sta como una construccin social definida por la interaccin de dimensiones fsico-qumicas-biolgicas, sociales, econmicas y polticas. En otras oportunidades, cuando los resultados provistos por el laboratorio forman parte de la gestin de un proyecto, proceso o sistema complejo, los mecanismos de decisin pueden estar asociados a la evaluacin de modelos o comportamientos espaciales-temporales a corto, mediano o largo plazo. La eficacia de este proceso implica que: a. el intercambio de informacin en cada etapa del proceso (desde la definicin de la decisin hasta la recepcin de resultados por el usuario) sea efectivo. b. los resultados provengan de un sistema analtico confiable. c. las caractersticas de los mtodos de muestreo y ensayo empleados los hagan aptos para satisfacer las necesidades del usuario, lo que equivale a afirmar que sean un buen soporte para su decisin. La cualidad de los resultados analticos que los hacen aptos para la toma de decisiones eficaces es lo que se llama calidad de los resultados y es lo que los hace confiables.

3 Requisitos de las diferentes partes3.1 Por parte del usuario, la capacidad de demandar resultados confiables implica:1 Conocer y entender la decisin, el objetivo del plan o proyecto y los lmites espacio-temporales del sistema involucrado El desarrollo de un modelo conceptual es una herramienta til para este propsito 2 Conocer y entender la situacin real, los efectos ms probables sobre el medio ambiente a evaluar y la legislacin vigente en tal sentido. 3 Entender el proceso de medida qumico, su significado e interpretacin y las herramientas matemticas a seleccionar, en especial las vinculadas a la quimiometra. 4. Abarcar una visin multi y transdisciplinaria que integre diversas reas del conocimiento, no olvidando los principios disciplinarios involucrados en la decisin 5. Aprovechar la intuicin y la experiencia, como as tambin , el sentido comn y la capacidad de pensamiento holstico integrador.

2 Las cualidades de las mejores decisionesEntre el laboratorio que genera la informacin y el usuario de la misma que la demanda existe una interfase. En ella se desarrolla un proceso de intercambio de informacin entre usuario y proveedor del servicio que resulta crtico para la eficacia de las decisiodecisiones adoptadas y para la propia seleccin de la dedecisin a tomar. Las decisiones pueden o no corresponderse al esquema de aceptacin-rechazo de una hiptesis previa. Esta opcin surge cuando se trata de comparar el valor de un mensurando ambiental con un valor normalizado o con un valor que surge de otro proceso de medida.


10 3.2 Por parte del laboratorio, la provisin de resultados confiables implica:1 Comprender y/o ayudar a definir los requisitos analticos implcitos en las necesidades del cliente. 2. Ser capaz de realizar un proceso de medida qumico vlido de acuerdo a estas necesidades. 3 Poseer un sistema analtico que haga posible lo anterior. 4. Ser capaz de producir resultados con una precisin y sesgo de acuerdo a los requisitos del usuario de los datos. Esto equivale a la fijacin de una incertidumbre objetivo para los datos. 5. Poseer determinadas caractersticas denominadas de desempeo como: selectividad, especificidad, rango de medida, robustez, lmite de deteccin y lmite de cuantificacin entre otras.

4 El proceso de medida: un enfoque sistmico y de procesosEl sistema analtico puede entenderse como el conjunto de circunstancias y elementos que concontribuyen a la calidad de los resultados analticos, tales como equipos analticos y de muestreo, proprocedimientos de muestreo y anlisis, reactivos, mamateriales de ensayos, la calificacin y entrenamiento del personal, el ambiente y las medidas de aseguaseguramiento de la calidad de los resultados. Dentro de este sistema, existen una serie de procesos interconectados que deben contribuir a la obtencin de resultados confiables. El proceso qumico de medida es el proceso principal sobre los que descansa esta confiabilidad. Este proceso, que no transcurre exclusivamente dentro del laboratorio, abarca bsicamente tres etapas interdependientes: Muestreo Preparacin de la muestra Anlisis El objetivo central del proceso es obtener resultados representativos de la porcin del universo a estudio, es decir resultados que describan numricamente con una aproximacin buscada los valores de ciertos mensurandos predefinidos para esta porcin tambin llamada poblacin.

6 La validez del proceso de medida: Mtodo y protocoloEl cumplimiento de los cinco objetivos de calidad del proceso de medida enunciados requiere que el mismo pueda ser reproducido y por lo tanto comcomprendido en sus detalles por cualquier operador calificado del mismo. Este requisito slo puede alalcanzarse mediante un conjunto completo de direcdirectivas definitivas que deben seguirse sin excepcin. A este conjunto de directivas le llamamos ProtocoProtocolo de Anlisis o Procedimiento Estandarizado de Operacin. El protocolo es el nivel ms especfico de definicin del proceso analtico Un nivel ms genrico se corresponde a los denominados Mtodos de ensayo. La demostracin planificada, documentada y sistemtica de las caractersticas de los resultados analticos que los hacen aptos para la toma de decisiones eficaces para un usuario especfico es lo que denominamos validacin. La validacin de un mtodo requerir un mayor nivel de reproducibilidad y por lo tanto de la participacin de varios laboratorios, operadores, equipos y otras condiciones significativas que afecten la calidad de los resultados. La validacin de un protocolo de ensayo puede realizarse en un solo laboratorio aunque requerir necesariamente la incorporacin de la trazabilidad de la medida y su dispersin (incertidumbre) a travs del uso de materiales de referencia certificados u otras estrategias para la estimacin del sesgo de la medida.

5 Objetivos de calidadPara satisfacer lo anterior, este proceso de medida debe reunir necesariamente las siguientes cinco caractersticas u objetivos de calidad: 1. Poder representarse estadsticamente mediante el uso de variables aleatorias. 2. Estar bajo control estadstico es decir los parmetros poblacionales deben estar definidos y no cambiar significativamente durante el mismo. 3. Ser capaz de realizar medidas trazables a patrones de referencia.Laboratorios Ambientales

7 Anatoma y funcionamiento del proceso de medidaComo se ha mencionado anteriormente, la anatoma bsica del proceso de medida comprende la consideracin integral del protocolo o el mtodo y no su definicin aislada. Es decir, la obtencin de datos representativos requiere que los resultados obtenidos en el proceso de medida involucren muestreo, tratamiento de la muestra en el laboratorio y anlisis qumico.

I. Marco Conceptual

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Ms detalladamente, el proceso de medida puede representarse de acuerdo al diagrama de flujo de la figura 1. Cada una de las etapas del proceso involucra la incorporacin de errores que se van acumulando hasta llegar al resultado final. Por lo tanto, el proceso analtico al reproducirse para medir un valor considerado verdadero de un mensurando, no generar un nico valor del mismo sino una serie de valores dispersos ya que los errores no tendrn siempre la misma magnitud y signo. Al nmero que caracteriza la dispersin de estos valores se le denomina incertidumbre de la medida. La incertidumbre es pues un valor compuesto por diferentes contribuciones que no deben separarse al momento de evaluar la calidad de un resultado. El concepto de incertidumbre incorpora el concepto de probabilidad a la medida. Con este enfoque, el vavalor fijo del mensurando se substituye por un intervalo de valores, dentro del cual con determinada probabiprobabilidad, o nivel de confianza, se encuentra el valor ververdadero del mensurando.Figura 1: Esquema del proceso de medida

8 Gestionar el proceso de medidaGestionar el proceso de medida es realizar eficazmente las actividades planificadas en el mismo para cumplir con los objetivos de calidad definidos comprobando luego el nivel de eficacia alcanzado. La eficacia de la realizacin est relacionada a una adecuada gestin de la frecuencia con que los objetivos de calidad no son alcanzados.(frecuencia de fallas) Esta gestin, tambin denominada aseguramiento de la calidad involucra todos los aspectos crticos que inciden en la obtencin de resultados confiables y sus principios han sido desarrollados a partir de diferentes enfoques y formalizados a travs de diferentes Protocolos o Normas. Una de ellas y tal vez la que haya alcanzado mayor amplitud en su aceptacin es la Norma UNIT- ISO/IEC 17025.

9 La demostracin de la competencia tcnicaDentro de los enfoques ms ampliamente reconocidos y usados en ensayos qumicos se hallan: 1 UNIT- ISO/IEC 17025 Esta norma evala la competencia tcnica de los laboratorios para llevar a cabo un ensayo o calibracin especfica y es usada por los organismos de acreditacin en todo el mundo como requisito para la acreditacin de laboratorios. 2 UNIT- ISO 9001 Esta norma est relacionada bsicamente con la gestin de la calidad, para instalaciones que producen o proveen servicios que pueden incluir ensayos qumicos. 3 Los principios de las buenas prcticas de laboratorio (GLP). Estas guas se preocupan del proceso organizacional y de las condiciones bajo las cuales los estudios de los laboratorios relacionados con determinados trabajos regulatorios son llevados a cabo. 4 Gestin de la calidad total (por sus siglas en ingls TQM, total quality managment). Este enfoque es el ms reciente en su incorporacin y pone nfasis en la mejora continua y en el concepto de calidad enfocado hacia el cliente. Un laboratorio, puede decidir disear sus propios procedimientos para el aseguramiento de la calicalidad o puede seguir uno de los protocolos anterioanteriores. En el ltimo caso, puede declarar informalmeninformalmente su cumplimiento del protocolo o norma o puede


12pedir una evaluacin independiente por parte de un organismo experto oficial, con la consiguiente ganancia de declaracin independiente de su sissistema de calidad y competencia tcnica. Esa evaluacin independiente, se conoce como acreditacin. El mecanismo de acreditacin impliimplica que tcnicos especializados evalan regular y planificadamente todos aquellos factores que ininfluyen en la obtencin de los resultados confiables, de acuerdo a estndares y procedimientos normanormalizados adoptados por el laboratorio en conformiconformidad con la norma UNIT- ISO /IEC 17025.

11 Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayoEl cumplimiento de los requisitos de la Norma UNITISO/IEC 17025 necesarios para lograr la acreditacin estn todos orientados a lograr el aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo que llevarn a poder dar confianza en los datos que se usarn en la toma de decisiones. El aseguramiento de la calidad es una estrategia de carcter preventivo lo cual implica un seguimiento planificado y revisado, con uso de materiales de referencia certificados o secundarios, con comcomparaciones nterlaboratorio o ensayos de aptitud, con ensayos o calibraciones replicadas usando el mismo mtodo u otro, con recalibraciones o reenreensayos y con correlacin de resultados. Junto a lo anterior se deben tener procedimientos de control de la calidad para hacer el seguimiento de la validez de ensayos/ calibraciones, registrar los datos de manera de poder detectar tendencias y usar tcnicas estadsticas para la revisin de los resultados. Posteriormente los resultados del control de calidad deben ser revisados y si no satisfacen criterios predefinidos, entonces tomar acciones planificadas para corregir el problema y lograr as no dar resultados no conformes.

10 El valor de la acreditacinNi el aseguramiento de la calidad ni ningn mecamecanismo de evaluacin independiente puede garantizar que un 100% de los resultados individuales sern confiables o correctos. Hay dos razones para esto: 1 Los errores pueden ocurrir, cuando por ejemplo, los resultados para dos muestras se mezclan. En un laboratorio bien dirigido, la frecuencia de los errores puede ser chica, pero no cero. 2 Ocurren errores aleatorios y sistemticos, lo que lleva a cierta incertidumbre en un reresultado de medida. La probabilidad de que un resultado caiga dentro del rango de incertidumbre planificado depende del nivel de confianza empleado, pero nuevamente, an en un laboratorio bien gestionado pueden ocasionalmente ocurrir resultados desviados y muy ocasionalmente la desviacin puede ser mayor. Sin embargo, tambin es cierto que si un laboratorio est acreditado el mismo ha alcanzado un nivel preestablecido de competencia tcnica para efectuar tipos especficos de actividades de ensayo o calibracin. El resultado es el aseguramiento de que el laboratorio es capaz de producir resultados que son correctos, trazables y reproducibles, componentes crticos en la toma de decisiones. Es por esto que en reas particulares de ensayo, la acreditacin es a veces obligatoria aunque generalmente, el laboratorio est libre para elegir que medidas de aseguramiento de la calidad (AC) desea adoptar. La ruta de la evaluacin independiente, tiene reconocidas ventajas, particularmente cuando los clientes del laboratorio requieren evidencia objetiva de la competencia tcnica del laboratorio.

12 Requisitos del ensayoLos factores a tener en cuenta que determinan que el valor de los ensayos sea el correcto y confiable, son los siguientes: Requisitos del cliente y capacidad para realizar el ensayo Muestreo Mtodos y su validacin Equipos Trazabilidad de las mediciones Manipulacin de tems de ensayo Insumos Factores humanos Local y condiciones ambientales Estos factores contribuyen en diferente magnitud a la incertidumbre total de la medicin por lo que deben ser tenidos en cuenta al realizar el clculo de la misma.


13 Interrelacin de los puntos de la norma UNIT-ISO/IEC 17025

I. Marco Conceptual


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II. Interaccin con el cliente

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II Interaccin con el cliente1 Revisin de los pedidos ofertas y contratosLa provisin de resultados confiables por parte del laboratorio implica la definicin de los requisitos analticos implcitos en las necesidades del cliente y la capacidad de desarrollar un proceso analtico vlido para satisfacer estas necesidades. El objetivo de realizar la revisin de los pedidos, ofertas o contratos, es asegurar que los requisitos, incluidos los mtodos, estn adecuadamente definidos y ver si el laboratorio tiene la capacidad y los recursos para cumplir con ellos y puede seleccionar el mtodo de ensayo o calibracin apropiado (esto se trata con mayor profundidad en el apartado Seleccin de mtodos, captulo Validacin). El contrato debe estar claro con el cliente y se debe resolver cualquier diferencia entre pedido y contrato antes de iniciar el trabajo. Los requisitos definidos deben estar documentados y entendidos, para as elegir el mtodo adecuado y establecer y mantener procedimientos. En caso de trabajo subcontratado hay que informar al cliente, as como de cualquier desviacin en relacin al contrato acordado. Se deben mantener registros de las revisiones realizadas y de las comunicaciones mantenidas con el cliente. Si los requisitos del cliente estn mal o pobremenpobremente definidos, la calidad de los resultados puede ser insuficiente o nula aunque los requisitos tcnicos estn conforme a lo planificado. La calidad es un proceso integral de satisfaccin del cliente del cual el aspecto tcnico es solo una parte.

2 Servicios al clienteEl objetivo es la satisfaccin del cliente por lo que hay que cooperar con ellos adems de aclarando los pedidos, como se vio, haciendo el seguimiento del desempeo de los procesos, asegurando la confidencialidad, manteniendo la comunicacin y realizando encuestas de satisfaccin a los mismos. Se debe por lo tanto procurar informacin de retorno tanto positiva como negativa que debe usarse y analizarse para mejorar el SGC y las actividades de ensayo.

3 QuejasEl objetivo de tener polticas, procedimientos y gestionar las quejas, es asegurar la toma de acciones para la resolucin de las mismas. Las quejas pueden ser de los clientes o de otras partes. Se deben mantener registros de las mismas y de las acciones correctivas derivadas. Si el cliente plantea desviaciones esto debe ser registrado y comunicado al personal que corresponda para su solucin.


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III. Muestreo

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III Muestreo1 Introduccin. Conceptos bsicosEn el marco conceptual sobre el que se basa la Norma UNIT- ISO/IEC 17025, la idea de muestreo est ntimamente ligado a la rama de la estadstica denominada Inferencia Estadstica (Ver capitulo incertidumbre). Apoyndose en el clculo de probabilidades (desde el punto de vista frecuencial) y a partir de datos muestrales estima una caracterstica de una poblacin o toma una decisin referente a ella, fundamentndose slo en los resultados de la muestra. Como se recordar en lo expresado en el capitucapitulo introductorio, el proceso analtico se considera integrado por tres etapas principales: Muestreo, preparacin de la muestra y Anlisis. Cuando se trata de la etapa de Anlisis, los datos muestrales a partir de los cuales se toma la decisin, son el resultado numrico de una cantidad finita de rplicas de un ensayo qumico determinado y se los considera variables aleatorias, es decir producto de un experimento aleatorio: el ensayo qumico. Cuando se trata de la etapa que denominamos Muestreo, los datos muestrales son un conjunto finito de porciones del universo fsico a estudio (poblacin) a partir del cual se estima una caracterstica determinada de la poblacin. La aleatoriedad de los valores asignados a estas porciones fsicas que constituyen la muestra est relacionada, al igual que en el caso analtico a que sean producto de un experimento aleatorio: el muestreo. O sea, las porciones (o muestras primarias) que integran la muestra deben reunir dos caractersticas: 1. Todo conjunto de porciones tiene que tener la misma probabilidad de ser seleccionado 2. La probabilidad de extraer una o varias porciones no debe depender de las porciones extradas anteriormente. Este diseo, llamado tambin estadstico o probabilstico, es el nico que tiene sentido cuando se trata de estimar parmetros poblacionales y dotar a estas estimaciones de indicadores de calidad de la estimacin como es el intervalo de confianza expresado como incertidumbre de los resultados. Existen otros tipos de diseo de muestreo, por ejemplo, cuando se trata de establecer una correlacin espacial o temporal de los datos (el muestreo aplicado en la geoestadstica por ejemplo) que no sern examinados aqu. En estos casos, el muestreo no tiene un diseo aleatorio y no son aplicables los conceptos de incertidumbre tal cual se especifican en los requerimientos de la Norma UNIT- ISO/IEC 17025. Ms all de lo expuesto, no hay que perder de vista que la actividad de muestreo forma parte de un proceso analtico relacionado a la toma de decisiones en el cual siempre existe un usuario a quien los resultados son proporcionados, siendo esta informacin una parte crtica del proceso decisorio. En el caso de los laboratorios ambientales el muestreo es generalmente la etapa con mayor incidencia en el nivel de representatividad de los resultados obtenidos.

2 El proceso analtico y las diferentes operaciones de muestreo involucradasHasta la obtencin de la muestra de ensayo, la cual ser tratada para la obtencin de una porcin apta para ensayo, existen una serie de etapas a partir de la cual la muestra original (o porcin) es reducida de tamao por diversos procedimientos. En la figura 2 se presenta este proceso con las correspondientes definiciones de cada etapa. Cuando el muestreo no forma parte del proceso analtico se considera que dicho proceso comienza en la denominada muestra de laboratorio Los principios a desarrollar en este capitulo son aplicables a cualquiera de las etapas definidas, independiente del nivel de homogeneidad de cada poblacin. No obstante, el proceso de extraccin de la muestra en campo involucra una serie de aspectos que le son exclusivos por lo cual nos referiremos a esta etapa en lo que sigue. Independientemente de lo anterior, lo que no hay que perder de vista es que el proceso de medida es una secuencia nica cuyo objetivo es obtener resultados que estimen de acuerdo a un nivel de calidad planificado, los parmetros poblacionales en estudio.


18Figura 2. Etapas del muestreo en las distintas fases del proceso analtico

3 Los errores en el proceso de muestreo3.1Fuentes de error segn el nivel metrolgicoEl error de medicin, siendo la acumulacin de errores a lo largo de todo el proceso, se manifiesta en el resultado final, producto de todo el proceso analtico. Sin embargo es posible aislar tericamente y mediante el diseo experimental la contribucin de las diferentes etapas. Es decir:

Como se observa en la Tabla 1, al igual que en el proceso analtico, pueden asignarse niveles metrolgicos a partir de los cuales evaluar los diferentes errores. Para el muestreo, diremos que estamos en condiciones de repetibilidad cuando los resultados se obtienen con el mismo mtodo, el mismo equipo de muestreo, la misma herramienta, y en un lapso corto de tiempo. Es la condicin de menor aleatoriedad. Diremos que estamos en condiciones de reproducireproduci-

X parmetro o medida correspondiente a la poblacin en estudio valor de referencia aceptado para la poblacin errores Los errores de muestreo son bsicamente de cuatro tipos: 1. 2. 3. 4. Atribuibles al mtodo Atribuibles a la heterogeneidad de la poblacin Atribuibles a factores no controlables Errores ilegtimos

bilidad cuando se utiliza el mismo mtodo pero diferentes equipos de muestreo, diferentes herramientas de muestreo y en diferentes das. Es la condicin de mxima aleatoriedad. Diremos que estamos en condiciones de precisin intermedia cuando varan algunos de los factores descritos anteriormente (equipos , analistas, equipos de muestreo, etc).


III. Muestreo Tabla 1: Niveles metrolgicos en el proceso de muestreo.NIVEL METROLOGICO Mtodo Poblacin Inter-Equipo de muestreo CARACTERISTICA ESTIMADA FUENTE

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Reproducibilidad

Equipo de muestreo

Entre corridas (Precisin intermedia)

Entre repeticiones (repetibilidad)

Inherente al mtodo Heterogeneidad Herramienta de muestreo Interpretacin del protocolo Personal Tcnico Condiciones ambientales Masa muestreada Manipulacin de la muestra Localizacin puntos Transporte de la muestra Personal Tcnico Condiciones ambientales Masa muestreada Manipulacin de la muestra Localizacin puntos Transporte de la muestra Masa muestreada Manipulacin de la muestra Localizacin puntos Transporte de la muestra Combinando las expresiones anteriores:

3.2 Diferentes tipos de errores en el muestreoEl error de muestreo se define como la diferencia entre la estimacin de un parmetro correspondiente a la poblacin en estudio X, sin considerar el error analtico y de preparacin y el valor de referencia aceptado para la poblacin (considerado verdadero) lo que es equivalente a.

4 Principios claves del muestreo4.1Principio de la representatividadUna muestra representativa es aquella obtenida a partir de un proceso de muestreo representativo. Este proceso es aquel que permite obtener una muestra que refleje adecuadamente las propiedades de inters de la poblacin de la cual proviene. Por lo tanto, el primer aspecto a considerar en el diseo de muestreo es la definicin clara de la poblacin en estudio, es decir: 1-Porcin fsica delimitada del universo 2-Analitos a estudiar, mtodo de estimacin, su nivel esperado de concentracin y su distribucin en la matriz en estudio. En las decisiones que involucran lo ambiental, la delimitacin fsico temporal debe involucrar aspectos tcnicos especficos del problema en cuestin. De esta manera, el universo as definido tendr sentido en el marco conceptual del problema a resolver y las decisiones involucradas no siendo principalmente un problema estadstico en esta etapa Por lo tanto, es trascendente disponer de un modelo conceptual del problema antes de seleccionar las po-

El error puede ser positivo, negativo o cero y vara de medida en medida, an en condiciones de repetibilidad. Este error tiene dos componentes: aleatorio y sistemtico. El error aleatorio de muestreo( ) es la estimacin de un parmetro correspondiente a la poblacin en estudio (X ) sin el error analtico y de preparacin, X menos la media que resultara de un nmero infinito de mediciones sobre la misma poblacin en las mismas condiciones anteriores, del mismo mensurando realizadas bajo condiciones de repetibilidad ( )

El error sistemtico de muestreo ( ) o sesgo de muestreo es la media que resultara de un nmero infinito de mediciones sobre la misma poblacin exentas de errores analticos y de preparacin, del mismo mensurando realizadas bajo condiciones de repetibilidad ( ) menos un valor considerado verdadero del mensurando ( )


20blaciones a ser muestreadas junto a la mayor cantidad y calidad de informacin histrica y presente de la porcin del universo a estudio El nivel de representatividad en el proceso de muestreo, esta asociado a la acumulacin de diferentes errores atribuibles al muestreo a lo largo de su ejecucin. (Ver Tabla 2). Efectivamente, de acuerdo a la expresin resulta claro que X representa exactamente a la poblacin cuando . Mejorar la representatividad implica actuar sobre las fuentes de error para reducir su incidencia en el resultado final. Sin embargo, la heterogeneidad es en la mayora de los casos La principal fuente de error en el muesmuestreo y no es eliminable. Segn la definicin de ISO una propiedad est distribuida homogneamente cuando esta distribucin es completamente aleatoria. La prdida de aleatoriedad lleva a un incremento de la heterogeneidad. Es importante considerar que esta definicin se refiere a la distribucin de un analito en particular y por lo tanto, no es un concepto absoluto. El error asociado a la heterogeneidad tiene dos componentes: aleatorio y sistemtico sistemtico. El componente aleatorio est asociado a la variacin aleatoria de concentracin entre cada porcin o muestra primaria producto de la heterogeneidad de la poblacin. Este error se reduce aumentando el nmero de muestras primarias. El componente sistemtico esta originado en una seleccin no aleatoria de los puntos de muestreo (diseo probablistico). En lneas generales, la estrategia para controlar los errores estara definida por: 1. Definir un protocolo de muestreo basado en buenas prcticas de muestreo que minimicen los errores legtimos y anulen los ilegtimos en todo el proceso analtico (aleatorizacin, herramienta de muestreo, muestreo correcto, masa de muestra, cadena de custodia, preservacin de la muestra) 2. Contar con personal calificado y entrenado 3. de en de Reducir los errores aleatorios a travs del nmero porciones de la poblacin o el nmero de rplicas el laboratorio o seleccionando un mtodo analtico mayor precisin

4.2Interrelacin Muestreo - AnlisisLas etapas del proceso descrito en la Figura 1 son codependientes y por lo tanto se influyen mutuamutuamente. El mtodo analtico y sus lmites de deteccin/ cuantificacin determinan y estn determinados por la masa de muestra, la herramienta de extracextraccin, el nmero de muestras y su forma de prepreservacin. servacin La etapa de muestreo es por lo general el eslabn ms dbil de la cadena y el que menos atencin recibe. Sin embargo, este enfoque lleva a que los resultados obtenidos a partir de un mal diseo/ejecucin de la etapa de muestreo carezcan absolutamente de utilidad para el fin propuesto. Ya que los componentes del proceso analtico deben determinarse siempre considerando el objetivo de la medicin a realizar queda claro que: 1-El proceso analtico es un nico proceso de medida que debe definirse integralmente como tal otorgndole idntica importancia a todas las etapas en el diseo y calificacin tcnica de los ejecutores 2-Este proceso debe definirse en base a su adecuacin al uso propuesto considerando criterios definidos. Esto equivale a decir que el proceso analtico debe ser validado en su totalidad Los problemas ms frecuentes en la interpretacin de los resultados surge del hecho que la etapa de muestreo y la analtica son planificadas separadamente, a veces por equipos que jams interaccionan Los esfuerzos puestos en el aseguramiento de la calidad en el laboratorio y la seleccin de mtodos precisos es un esfuerzo en vano si el proceso analtico no se enfoca globalmente

4.3 Necesidad de un protocolo integralEl objetivo central del proceso analtico es obtener resultados representativos del universo a estudio, es decir resultados que describan numricamente con una aproximacin buscada los valores de ciertos mensurandos (valores poblacionales) predefinidos. Recordemos que para satisfacer lo anterior, este proceso de medida debe reunir necesariamente las siguientes cinco caractersticas u objetivos de calidad (Ver introduccin): 1-Representacin estadstica(Variables aleatorias) 2-Control estadstico 3-Trazabilidad 4-Precisin y sesgo de acuerdo a los requisitos del usuario de los datos 5-Caractersicas denominadas de desempeo


III. Muestreo

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El cumplimiento de los cinco objetivos de calidad del proceso de medida enunciados requiere que el mismo pueda ser reproducido y por lo tanto comprendido en sus detalles por cualquier operador calificado. Este requisito solo puede alcanzarse mediante un conjunto completo de directivas definitivas y dedetalladas que deben seguirse sin excepcin. A este conjunto de directivas se le puede denominar ProProtocolo de Medida o Procedimiento Estandarizado de Operacin y corresponde al nivel ms especfiespecfico de definicin del proceso analtico. La ausencia de un protocolo definido es origen de errores significativos atribuibles a la diferente interpretacin operativa por parte de los equipos de muestreo. Si bien las guas o mtodos generales son una fuente valiosa de informacin, solo sobre la base del protocolo definido tiene sentido hablar de validacin, aseguramiento de calidad o estimacin de la incertidumbre en el proceso analtico considerado integralmente. En la Tabla 2 se detallan aspectos fundamentales a ser incluidos en la etapa de muestreo del protocolo integral. El patrn de muestreo y el nmero de muestras son aspectos centrales en la definicin del protocolo de muestreo. El patrn de muestreo (localizacin de los puntos de muestreo) est relacionado al diseo estadstico (aleatorio) mencionado en la introduccin. En la figura 3 se observan algunos de los patrones bsicos en el caso de un fenmeno distribuido espacialmente en dos dimensiones. Se marca en gris las zonas donde existe el analito buscado. Obsrvese que estos diseos ignoran cualquier informacin previa acerca de la poblacin presentando el diseo estratificado una mayor cobertura que el simple para el mismo nmero de muestras. La determinacin del nmero de muestras est relacionada con la incertidumbre asignada a la variabilidad espacial/ temporal del mensurando y con la definicin del criterioFigura 3. ejemplos de patrones de muestreo

Los puntos simbolizan la localizacin de cada muestra mientras que las zonas grises representan la presencia del analito buscadoTabla 2 Componentes principales del protocolo de muestreo

ETAPA PREVIA MUESTREO

COMPONENTE Definicin de objetivo del estudio. Definicin general y especfica del marco geogrfico/temporal del muestreo. Definicin localizacin de unidades de muestreo. Relevamiento previo. Precauciones de seguridad y proteccin ambiental. Patrn de muestreo. Nmero de muestras. Frecuencia Mtodo para la localizacin de los puntos y criterios para la decisin en campo frente a obstculos. Variables ( atmosfricas, etc) Criterios de Muestreo: Profundidad, Modelo, Normas, Ecosistema, Riesgos. Masa, Volumen de muestra. Herramienta y operacin. Inclusin o no de diferentes fracciones. Almacenamiento, rotulacin y cadena de custodia. Tratamiento en campo.

4.4 Aseguramiento de la calidadComo fue mencionado anteriormente, el aseguramiento de calidad consiste en gestionar eficazmente la frecuencia con que los objetivos de calidad de los resultados no son alcanzados. Esta gestin involucra diferentes aspectos tcnicos, de gestin y documentales. Aspectos de gestin como auditoras, gestin de reclamos, no conformidades y acciones correctivas no sern considerados aqu. Los aspectos tcnicos crticos en la etapa de muestreo estn relacionados al manejo de los difediferentes errores y son: 1-Entrenamiento y calificacin del personal tctcnico responsable del muestreo 2-Trazabilidad e incertidumbre de la medida involucrando todos los niveles metrolgicos 3-Control de calidad involucrando todos los niniveles metrolgicos 4-Herramientas adecuadas de muestreo 5-Preservacin de la muestra hasta el ensayo


22Los puntos 1, 4 y 5 requieren una descripcin particular en funcin del rea especfica El punto 2 ser abordados en los captulos correspondientes de esta gua. En relacin al punto 3, el control de calidad requiere una poblacin de referencia que desempee el mismo rol que los materiales de referencia en la etapa analtica (Control de la precisin intermedia). La necesidad de un protocolo validado es el aspecto documental central.


IV. Seleccin y validacin de los mtodos analticos

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IV Seleccin y validacin de los mtodos analticos1 IntroduccinLa generacin de resultados fiables aptos para satisfacer las necesidades del cliente implica que, adems de reunir los criterios tcnicos que aseguren su validez, deben poder ser reproducibles y realizados con una serie de garantas que permitan obtener resultados comparables con independencia del laboratorio que los ejecute. Estas garantas conllevan a la aplicacin de mtodos y procedimientos apropiados para todos los ensayos y comprende todos los pasos desde el muestreo hasta la estimacin de la incertidumbre o las tcnicas estadsticas cuando corresponda. La validacin de un mtodo analtico hace referencia no solamente al propio mtodo sino a la aptitud de la totalidad del sistema analtico del laboratorio como tal de reproducir un proceso de medida con determinadas caractersticas y definido detalladamente en un protocolo de ensayo. Es por esto que los mtodos deben siempre ser confirmados con un alcance a definir dentro de cada laboratorio, no interesa si ha sido desarrollado por el propio laboratorio o si es una norma que ser aplicada fuera de su rea de aplicacin o una que ha sido mejorada. Esta validacin sirve para confirmar que el mtodo es adecuado para el uso deseado en el propio laboratorio en base a lo acordado con el usuario de los datos. En otras palabras, es establecer la aptitud del mtomtodo antes de autorizar su uso en el laboratorio. Debe ser realizada por analistas competentes y experimentados. El proceso de validacin incluye: Especificacin de los requisitos Determinacin de las caractersticas del mtodo Comparacin de los requisitos con los valores de las caractersticas del mtodo Una declaracin sobre la validez indicando si el mtodo es apto para el uso previsto Se debe mantener registro de: 1. Resultados obtenidos 2. El procedimiento usado para la validacin

2 Seleccin de los mtodosSe realiza a partir de la informacin suministrada por el cliente relativa al problema que debe resolver y tambin a partir de los conocimientos y la experiencia del personal del laboratorio, que ayudar al cliente a especificar de la manera ms clara posible el tipo de informacin que necesita, se debe definir la informacin analtica requerida y con ella buscar los mtodos que la puedan proporcionar. No se debe perder de vista los requisitos bsicos requeridos por el laboratorio para dar resultados confiables, es decir aptos para el uso previsto (Ver Marco Conceptual, punto 3) Los criterios a tener en cuenta en la seleccin de los mtodos analticos son diversos y en cada caso habr que sopesar la importancia relativa de los mismos. A continuacin se enumeran los ms importantes: a) tipo de informacin requerida (cualitativa, cuantitativa, elemental, funcional, de especies qumicas, o estructural). b) los niveles de concentracin de los analitos (si son mayoritarios, o trazas) c) la exactitud y precisin requeridas d) el grado de validacin de los mtodos disponibles e) la exigencia de requisitos legales sobre uso de determinado mtodo f) la disponibilidad de los equipos g) la complejidad del mtodo y el nivel de competencia tcnica del personal h) el tiempo disponible para la obtencin de los resultados i) j) el costo la seguridad de las personas y ambiental

k) disposicin final de los residuos generados Luego de esta bsqueda y comparacin de informacin disponibles pueden darse distintas situaciones: a) Encontrar un mtodo validado que cumpla con las necesidades, aqu solo ser necesario demostrar que el laboratorio es capaz de reproducir los parmetros de calidad del mtodo reseado para poder incorporarlo tras el oportuno perodo de entrenamiento del personal, al trabajo rutinario.


24b) En muchas ocasiones la situacin no es tan favorable y el mtodo encontrado slo satisface de forma parcial las necesidades y debe ser adaptado, u optimizado, luego de lo cual debe ser validado antes de incorporarlo a la rutina. c) En otros casos, es todava ms difcil al no encontrarse ningn mtodo apropiado lo que hace necesario desarrollarlo enteramente, luego entonces viene la etapa de optimizacin del mismo para luego entrar en la validacin y posterior preparacin para uso rutinario. El proceso de validacin debe abarcar la totalidad del proceso analtico. Cuando el mismo contempla muestreo y operaciones de fraccionamiento las mismas deben ser incorporadas al momento de estimar las caractersticas de calidad del sistema analtico. De lo contrario la validacin ser parcial y perder validez como demostracin objetiva y documentada de la calidad del proceso analtico. Existen diferentes definiciones formalizadas de validacin: En la introduccin se ha definido la validacin como la demostracin planificada, documentada y sistemtica de las caractersticas de los resultados analticos que los hacen aptos para la toma de decisiones eficaces para un usuario especfico. La validacin puede definirse segn UNIT- ISO9000, como la confirmacin mediante el examen y la aportacin de evidencias objetivas de que se han cumplido los requisitos particulares para una utilizacin especfica prevista. La gua de Eurachem define la validacin como un proceso basado en estudios sistemticos de laboratorio mediante el cual se pone de manifiesto que un mtodo analtico determinado posee caractersticas de funcionamiento adecuadas a la aplicacin que se le quiere dar. Estas caractersticas se concretan en parmetros de calidad como son: exactitud, preciprecisin, lmites de deteccin y cuantificacin, intervaintervalo dinmico, sensibilidad, selectividad, y robustez. Por la incidencia que tienen sobre la calidad de un mtodo analtico, la exactitud, la precisin y el lmilmite de deteccin se consideran los parmetros priprimarios. En cambio la incidencia de los parmetros restantes suele ser menos crtica y acaba manifesmanifestndose a travs de su influencia en los parmeparmetros primarios. Si bien el concepto de incertidumbre es desarrollado en otro captulo de la presente gua, la misma puede considerarse una caracterstica clave que resume la aptitud para el uso y la confiabilidad de los resultados simultneamente. La incertidumbre integra los componentes tanto sistemticos como aleatorios de la medida y es una herramienta directa para estimar la aptitud para el uso de un determinado mtodo. La consideracin de la exactitud y la precisin aisladas puede llevar a una incertidumbre que los haga no aptos para el uso propuesto. Los estudios de validacin, fundamentalmente la validacin retrospectiva de las caractersticas de reproducibilidad intermedia, pueden ser utilizados como insumos para la estimacin de la incertidumbre.

2.1 Mtodos normalizados, alternativos, basados en normaLos mtodos normalizados no requieren de una validacin completa. No obstante, el laboratorio debe determinar las caractersticas de funcionamiento del mtodo en su propia situacin. En el caso de mtodos alternativos (ej. desarrollados por un fabricante o proveedor de equipos, etc) para la realizacin de la validacin, el laboratorio debe disponer de la informacin tcnica necesaria aportada por el fabricante. En el caso de un mtodo basado en norma el Labonorma, ratorio deber comprobar que entre otras las caractersticas de funcionamiento que puedan verse afectadas por las modificaciones realizadas.

2.2 Mtodos desarrollados por el laboratorioLa validacin debe ser tan amplia como sea necesario para satisfacer las necesidades del tipo de aplicacin o del campo de aplicacin dados. Por tanto, para este tipo de mtodos, el laboratorio deber evaluar su idoneidad para su mbito de aplicacin as como las actividades necesarias a realizar para garantizar su validez tcnica ya que no siempre dispondr de informacin previa adecuada y reconocida sobre el funcionamiento.

3 Concepto de validacin de un mtodo analticoLa validacin se aplica siempre a un protocolo de ensayo definido, para la determinacin de un analito concreto en un determinado rango de medida, para una determinada matriz y para un uso definido de los resultados. La existencia de un protocolo detallado para la validacin dentro de un laboratorio es clave. Este protocolo contiene las instrucciones a un nivel mximo de detalle que deben seguirse sin apartamiento para la obtencin del resultado.Laboratorios Ambientales


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4 Tipos de validacinEn funcin de los laboratorios que intervienen en el proceso de validacin se habla de validacin interna o externa 1. Es interna cuando el proceso se circunscribe al mbito de un nico laboratorio (desarrollo de mtodo propio, adaptacin con modificaciones importantes de un mtodo ajeno, implementacin de un mtodo normalizado). 2. Es externa cuando se trata de un mtodo que interesa a varios laboratorios y entonces la manera ms adecuada de hacer la validacin es la realizacin de un ejercicio de intercomparacin de tipo colaborativo. Esta sera tambin la forma de validacin de un mtodo candidato a mtodo de referencia. Los parmetros que deben evaluarse durante la validacin de un mtodo dependen de las caractersticas del mismo. Por ejemplo un mtodo cualitativo no incluir exactitud, precisin, intervalo dinmico ni, por supuesto, lmite de cuantificacin. En el caso de un mtodo cuantitativo destinado a la determinacin de componentes mayoritarios, no ser necesario evaluar los lmites de deteccin y de cuantificacin, en cambio estos parmetros sern imprescindibles en los mtodos destinados a anlisis de trazas. 3. Un tercer tipo de validacin, es la validacin reretrospectiva. Esta puede tener dos cometidos: a Formalizar y justificar el uso de un mtodo utilizado sin haber sido validado previapreviamente. b Monitorear en el tiempo determinadas cacaractersticas del mtodo (generalmente reproducibilidad y lmites de deteccin y cuantificacin). Para esto es necesario hacer una revisin histrica de los registros que sern utilizados como evidencia documental de la validacin. La informacin que deber evaluarse incluye los grficos de control de exactitud (recuperacin de materiales de referencia, y/o muestras fortificadas) y de precisin, resultados obtenidos en participacin en ensayos interlaboratorios, anlisis de blancos, experiencia del laboratorio en la utilizacin del mtodo analizado, etc. Se estudian todos los resultados obtenidos y se evala si el mtodo se considera validado. Cabe destacar que esto es posible siempre y cuando no hayan surgido cambios recientes en el proceso de anlisis ni en el equipamiento.

Los parmetros a evaluar dependen de la metodologa que se quiera aplicar y el tipo de validacin que se decida hacer.

5 Planificacin de la validacinEn la planificacin se debe tener en cuenta: Tipo de matriz a analizar Analitos a determinar y orden de concentracin esperada Interferencias Requisitos legales o semejantes Limites establecidos Equipos necesarios para la aplicacin del mtodo Con que equipamiento se cuenta Especificidad del procedimiento Nivel de deteccin requerido Robustez a exigir al mtodo Cuanto est el cliente dispuesto a pagar

6 Parmetros de calidadLos parmetros de calidad presentados, no necesariamente tienen que ser evaluados independientemente, como se explica en captulos posteriores. Exactitud Precisin Especificidad Exactitud relativa Repetibilidad Selectividad del mtodo Recuperacin Reproducibilidad Rango de aplicabilidad Sensibilidad Incertidumbre de los resultados Limite de deteccin Linealidad Influencia de la matriz Limite de cuantificacin Robustez Interferencia Grficos de control de calidad analtico Blancos


26Cabe destacar adems, por ejemplo los grficos de control son parmetros de calidad utilizados una vez que se cuente con el mtodo validado La extensin de los parmetros estudiados depende de cada caso en particular pero hay que indicar el motivo de su aplicacin. no todas ellas poseen la misma categora metrolgica ni la misma facilidad de aplicacin. A continuacin se describen algunas de ellas: a) Uso de materiales de referencia certificados Cuando se dispone de material apropiado, sta es sin duda la aproximacin ptima y consiste en la aplicacin del mtodo, cuya exactitud se requiere evaluar a un material de referencia certificado y la subsiguiente comparacin del resultado obtenido con el valor de referencia. Obviamente se realizar un cierto nmero de replicados (al menos 10) a partir de los cuales se obtienen sendas estimaciones del valor central y de la dispersin. Si el valor de referencia se considera un valor verdadero, mediante la aplicacin del test de Student, y teniendo en cuenta los grados de libertad, se podr determinar con un cierto nivel de confianza si existe diferencia significativa entre la estimacin obtenida y el valor de referencia Si no existe diferencia se considerar demostrada la exactitud del mtodo para este tipo de muestras y a este nivel de concentracin. El valor obtenido por el laboratorio se considera aceptable siempre que su error absoluto sea inferior a los lmites establecidos.

6.1ExactitudEs uno de los parmetros de calidad bsicos, que desde el punto de vista metrolgico depende de la trazabilidad de las medidas. IUPAC define la exactitud como el grado de concordancia entre el resultado de una medida y el valor real del mensurando. Se trata de un concepto cualitativo, usado para describir el error asociado a un resultado. Prcticamente lo mismo que Eurachem, quien la define como la cercana de un resultado al valor real. El resultado de una medida puede ser un valor individual o una estimacin estadstica procedente de un cierto nmero de observaciones, como el valor medio de un nmero pequeo de medidas o el valor medio de un grupo grande de medidas. Generalmente el lmite entre grupos pequeos y grandes se establece en 30 observaciones. Desde un punto de vista estadstico los grupos pequeos deben considerarse muestras estadsticas, mientras que los grandes pueden considerarse como aproximaciones a una poblacin. El valor real del mensurando es precisamente lo que se pretende averiguar, por lo tanto se trata casi siempre de un valor desconocido, sin embargo es posible usar a menudo un valor real convencional respecto al cual siempre es posible evaluar la exactitud de las medidas. Algunas veces se asocia el concepto de exactitud nicamente a los errores sistemticos y el de precisin a los errores aleatorios. Sin embargo, es necesario tener en cuenta que en la evaluacin de la exactitud de una medida individual o del valor medio de una muestra estadstica, influyen tanto las contribuciocontribuciones de los errores aleatorios como las de los sissistemticos. Adems hay que tener en cuenta que la exactitud tambin depende de otros dos componentes, uno debido al mtodo utilizado y otro debido al uso del mtodo en el laboratorio. Si se quisiera evaluar el aporte de cada uno individualmente, con un ensayo de intercomparacin mediante el uso de un mismo mtodo analtico, se puede obtener el aporte debido al uso del mtodo seleccionado en el laboratorioExisten diversas formas de evaluar la exactitud de un mtodo analtico si bien

b) Comparacin con un mtodo de referencia Cuando no se dispone de materiales de referencia apropiados, una posible alternativa consiste en la comparacin de los resultados del mtodo que estamos evaluando con los obtenidos mediante un mtodo validado que pueda considerarse como un mtodo de referencia. Esta estrategia se basa en la aplicacin de ambos mtodos a los materiales que habitualmente analiza el laboratorio y la comparacin de los resultados obtenidos mediante la aplicacin del test de Student o mediante el anlisis de regresin. Para evitar que algn efecto sistemtico pueda afectar de forma parecida a los resultados obtenidos por ambos mtodos, de ser posible, los mtodos aplicados sern independientes y para ello se basarn en tcnicas distintas tanto en el tratamiento de la muestra como en la determinacin. En caso que el mtodo alternativo no se aplique habitualmente en el laboratorio, se puede disponer de dos alternativas, primero, prever la disponibilidad de los equipos y los reactivos necesarios, as como el entrenamiento pertinente de las personas que lo apliquen y segundo subcontratar un laboratorio con competencia demostrada (por ejemplo acreditado) que realice el mtodo de referencia, con el cual sea posible coordinar las condiciones de la experiencia.



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c) Anlisis de muestras adicionadas (spike o adiadicin) Cuando las estrategias anteriores no son aplicables, una posibilidad es recurrir al anlisis de muestras a las que se han adicionado cantidades conocidas de analito. Si se dispone de muestras exentas de analito (alcanza con que la concentracin del mismo sea menor al limite de deteccin) se deber simplemente evaluar el grado de recuperacin del analito agregado. De no ser as, se deber determinar el contenido del analito en la muestra con y sin adicin. Esto supone realizar dos determinaciones sobre cada muestra con el consiguiente aumento de la incertidumbre. Para poder evaluar la exactitud en todo el intervalo de trabajo es recomendable hacer la adicin de distintas cantidades de analito y evaluar el porcentaje de recuperacin de las mismas. d) Anlisis de muestras sintticas Cuando se trata de analizar productos manufacturados es relativamente sencillo disponer de muestras con contenido conocido de analito, pero es completamente distinto cuando se trata de analizar muestras naturales, ya que no se conoce la composicin de manera exhaustiva y por ello es imposible de reproducir. En este caso, pueden prepararse muestras sintticas mezclando cantidades conocidas de analitos con otras sustancias que son los componentes mayoritarios de las muestras naturales que se quieren emular. En la preparacin de muestras sintticas slidas hay que tener mucho cuidado para asegurar la homogeneidad de la mezcla. La representatividad de los resultados obtenidos con este tipo de muestras es siempre limitada ya que es muy difcil reproducir en el laboratorio la matriz de las muestras naturales. Sin embargo pueden ser de utilidad para determinar tipos de muestras en las fases preliminares de desarrollo de un mtodo. Las dos metodologas ms utilizadas son la a y la c, siendo preferible la utilizacin de materiales de referencia

La precisin depende exclusivamente de los errores aleatorios del proceso desde la preparacin de la muestra hasta la medida de la misma y es independiente de los errores sistemticos. El parmetro estadstico que se usa normalmente para expresar la precisin es la desviacin estndar (s), o la desviacin estndar relativa (RSD). Sin embargo, si el nmero de datos es 6 menos es conveniente usar como estimador de la varianza poblacional al rango: R = mx(xi) min(xi) y posteriormente calcular el rango normalizado. Dado que el nmero de factores que pueden afecafectar la precisin de los resultados es alto, al evaluar la precisin de un mtodo es conveniente distindistinguir entre condiciones de mnima variacin de los factores de influencia y condiciones de mxima variacin de los mismos. Es lo que normalmente de conoce como condiciones de repetibilidad y rereproducibilidad respectivamente. Se entiende por condiciones de repetibilidad aquellas en que las medidas se llevan a cabo aplicando en mismo mtodo, a un mismo material, en el mismo equipo con los mismos reactivos, por el mismo operador y en un intervalo corto de tiempo (una sesin de trabajo). En cambio se habla de condiciones de reproducibilidad si las medidas se obtienen con el mismo mtodo, sobre las mismas muestras, pero en laboratorios distintos, lo que supone reactivos, equipo, operador y condiciones ambientales distintos. Por lo que la evaluacin de la precisin de un mtodo en condiciones de reproducibilidad supone la organizacin de un ejercicio de intercomparacin de tipo colaborativo, que son costosos. Por esta razn se han aceptado internacionalmente medidas intermedias que suponen la realizacin de mediciones en el mismo laboratorio variando algunos parmetros. Desde el punto de vista de la validavalidacin lo importante es la necesidad de evaluar la precisin a distintos niveles dentro del intervalo de concentracin al que el mtodo se aplicar (es dedecir, dentro del rango lineal).

6.3 Lmite de deteccin 6.2 PrecisinLa precisin se define como el grado de concordancia entre los resultados de ensayos independientes obtenidos en condiciones bien definidas, por lo que la precisin evala la dispersin de los resultados de medidas replicadas sobre una misma muestra. El referente metrolgico de la precisin es la incertidumbre. En situaciones muy comunes hay que analizar componentes de las muestras a niveles bajos de concentracin. En estas situaciones es frecuente tener que discriminar entre muestras en las que se detecta la presencia del analito y muestras en las que no se detecta. Adems, una vez detectado ser preciso fijar un lmite a partir del cual se puede llevar a cabo una estimacin cuantitativa fiable de su concentracin.


28 6.4 Capacidades de deteccinLo que determina la capacidad de un mtodo para discriminar entre muestras que contienen analito y muestras que no lo contienen, es por una parte la magnitud del ruido superpuesto a la respuesta y por la otra la sensibilidad del mtodo. Cuanto menor sea el ruido y mayor la sensibilidad del mtodo, mayor ser su capacidad para discriminar entre el blanco y las muestras o los patrones de baja concentracin el establecimiento de las capacidades de deteccin de los mtodos analticos se basa en medidas del blanco y en muestras con bajos niveles de concentracin. Por ello es imprescindible definir bien que se entiende por blanco. 1. Una posibilidad es el blanco de los reactivos, que contiene todos los reactivos y disolventes usados en la preparacin de los patrones para la obtencin de la curva de calibracin. Las medidas realizadas con este tipo de disoluciones estarn libres de las variaciones debidas a reactivos usados en la preparacin de la muestra y a dichas operaciones de preparacin. Por consiguiente su varianza ser inferior y conducir a una estimacin optimista del lmite de deteccin de la etapa de medida. 2. Siempre es posible preparar un blanco siguiendo todas las etapas del proceso analtico con la consiguiente utilizacin de todos los reactivos y disolventes que intervienen en el mismo. Este blanco llevara a una estimacin ms realista del lmite de deteccin. 3. Sin embargo, siempre que sea posible el blanco debe reflejar tambin la contribucin de la matriz de las muestras a la fluctuacin de la seal de fondo. Cuando no sea posible disponer de muestras blanco se medir la desviacin estndar de muestras con una concentracin muy prxima al lmite de deteccin. Lo cual, teniendo en cuenta la definicin de lmite de deteccin, sera incluso ms riguroso. La influencia de la matriz, junto con la de los reactireactivos y la totalidad del proceso analtico, conducir a una estimacin ms realista del lmite de deteccin.

6.4.1 Clasificacin de errores, tipo

y tipo

.

Cuando un laboratorio dictamina la presencia o la ausencia de analito en una muestra debe evitar dos tipos de errores: Los falsos positivos, llamados tambin de tipo de tipo I y Los falsos negativos, llamados de tipo y o

o de tipo II

6.4.2 Nivel CrticoSe debe distinguir entre un nivel o valor crtico y el lmite de deteccin propiamente dicho. Esta distincin surge de la necesidad de diferenciar entre la mnima concentracin estimada significativa y la mnima concentracin verdadera detectable. El nivel crtico se aplica a la toma de decisiones a partir de unos resultados experimentales concretos, mientras que el lmite de deteccin es el parmetro de calidad que indica la capacidad de deteccin del mtodo de medida. Teniendo en cuenta las dificultades inherentes a la estimacin del lmite de deteccin, y a la cantidad de opciones para calcularlo, a continuacin se presentan algunas de las opciones disponibles para el clculo del LD El mtodo de clculo va a depender de la metodologa a la cual se le quiera calcular el LD. Ejemplo: para cromatografa, el mtodo aconsejado por Miller y Miller ver referencia de LD = yb+3sb es una buena opcin, mientras que para colorimetras se puede calcular, realizando 7 repeticiones, calculando la desviacin estndar y multiplicando esta por 3.29 tal cual lo considera la bibliografa de referencia ( Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, APHA) Siendo yb la seal del blanco y sb, la desviacin estndar de las lecturas del blanco

Para finalizar este tema es preciso remarcar dos aspectos importantes: a) cualquiera que sea el criterio estadstico adoptado para la estimacin del lmite de deteccin, dado que dicha estimacin es compleja y puede verse afectada por diversas fuentes de error, es necesario verificar experimentalmente que el valor obtenido es significativo mediante el anlisis de muestras de concentracin de valor igual o ligeramente superior al lmite propuesto. b) Con el objeto de poder comparar los lmites de deteccin de distintas tcnicas o mtodos, es imprescindible que cualquier valor propuesto de este parmetro vaya acompaado de la informacin pertinente respecto a su base conceptual y al procedimiento seguido en su estimacin.

6.4.3 El blancoLos valores de blancos, son imprescindibles a la hora de establecer los limites de deteccin. Una opcin para



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6.4.4

Limite de cuantificacin

6.6 Intervalo de trabajoExisten el intervalo dinmico y el intervalo de linealidad. Por intervalo dinmico de un mtodo se entiende el intervalo de concentraciones en el cual el mtodo presenta una sensibilidad apropiada a la utilizacin que del mismo se quiere hacer. Por otra parte, se entiende por intervalo de linealidad el intervalo de concentraciones en el que el mtodo presenta una sensibilidad constante. Son numerosas las tcnicas que en un intervalo de concentraciones suficientemente amplio proporcionan una seal que se relaciona con la concentracin a travs de una funcin lineal de primer orden. Sin embargo, la utilizacin de funciones de calibracin polinmicas de orden superior a uno o de otro tipo, no suelen presentar complicaciones adicionales importantes. Generalmente, se considera que tanto el intervalo dinmico como el de linealidad se inician en la zona de concentraciones bajas, en el lmite de deteccin o en el de cuantificacin. Teniendo en cuenta que la funcin de calibracin tiene por objeto hacer estimaciones cuantitativas de la concentracin de analito, la opcin del lmite de cuantificacin parece ms apropiada. El extremo superior del intervalo dinmico depende de lo que en cada caso se considere una sensibilidad til. Existen distintos mtodos para evaluar la linealidad de una funcin de calibracin. El valor del coeficiente de correlacin que se usa como criterio de linealidad algunas veces no es apropiado para ello, ya que funciones cuyo mejor ajuste no es al modelo lineal, pueden conducir a valores de R2 cercanos a 1. Es necesario recurrir a una visualizacin de la grfica y en los casos que amerite utilizar procedimientos estadsticos Cuando se dispone de medidas replicadas de los patrones, el anlisis de la varianza, en el que se compara la varianza debida a los errores aleatorios, con la debida a la imperfeccin del ajuste de los datos experimentales al modelo propuesto, es una herramienta muy til. Deben aplicarse procedimientos estadsticos para verificar la linealidad de la curva de ajuste (ejemplo: anlisis de residuales). Muchos equipos instrumentales, en sus manuales brindan la linealidad expresada en rdenes de concentracin, restando nicamente el chequeo de los mismos, en este caso se debe verificar.

El lmite de cuantificacin es otro parmetro importante a la hora de caracterizar y seleccionar los mtodos analticos. Conceptualmente es ms simple que las capacidades de deteccin. IUPAC lo define como el valor verdadero de la seal o de la concentracin de analito que conducir a estimaciones (o medidas) con una desviacin estndar relativa especificada. El mtodo de clculo, por lo general depende del mtodo elegido para calcular el LD. Ejemplo: en cromatografa, siguiendo lo aconsejado por Miller y Miller ver referencia, se puede obtener el Limite de cuantificacin como la seal del ruido (yb) mas 10 veces la desviacin estndar Sb del blanco (LC=yb+10sb). Por otro lado, una estimacin vlida es considerarlo de 3 a 5 veces el LD dependiendo de la metodologa aplicada. El tcnico deber poder evaluar que factor utilizar de acuerdo a los criterios preestablecidos.

6.5 SensibilidadSe define la sensibilidad de un mtodo como su capacidad de diferenciar dos concentraciones de analito muy parecidas. Dicho en otras palabras, es el cambio de respuesta de un instrumento de medicin dividido el correspondiente cambio de estimulo. Algunas veces se asocia la sensibilidad de un mtodo a su capacidad de medir concentraciones muy bajas y se recurre al lmite de deteccin como una estimacin de la misma. Sin embargo el concepto de sensibilidad no queda restringido a la regin de las bajas concentraciones. El concepto de sensibilidad, tal como se acaba de definir, es aplicable a cualquier tcnica analtica, ya sea clsica o instrumental y a cualquier nivel de concentracin. El concepto de sensibilidad se aplica sobre todo a las tcnicas instrumentales, que en su mayora requieren una funcin de calibracin para transformar la seal en concentracin. En estos casos, la sensibilidad a cada concentracin se mide a travs de la pendiente de la funcin de calibracin en aquel punto. Es conveniente acompaar cualquier estimacin de la sensibilidad con una indicacin de la incertidumbre que lleva asociada por ejemplo, el intervalo de confianza para un determinado nivel de confianza. Por otra parte, es preciso tener en cuenta que la sensibilidad de muchas tcnicas analticas depende en gran medida de algunos parmetros operativos de los instrumentos a usar.

6.7 Selectividad y especificidadLa selectividad se define como el medio de exexpresar cualitativamente la extensin en que otras sustancias interfieren en la determinacin de un analito con un mtodo determinado. La selectividad extrema o perfecta, en el sentido de que nicamente el


30analito es el responsable de la seal medida, se denomina especificidad. El concepto de selectividad va ligado al concepto de interferencia, entendiendo por interferencia aquella sustancia que causa un error sistemtico en la determinacin del analito Las interferencias pueden claclasificarse de acuerdo con criterios diversos. Desde un punto de vista prctico, el criterio ms til es el que distingue entre las interferencias que caucausan un error absoluto constante y las que causan un error absoluto proporcional a la concentracin de analito. Las del primer tipo pueden asociarse a la accin de determinadas sustancias presentes en la matriz de las muestras o agregadas de forma no intencional durante el proceso analtico, mientras que las segundas estn casi siempre relacionadas con efectos inespecficos que a menudo se designan como efecto de matriz. Ante la presencia de especies interferentes es posible adoptar distintas estrategias. La aproximacin ms general consiste en la aplicacin de una tcnica de separacin que permita la segregacin de la interferencia o del analito. En algunos casos, mediante la aplicacin de una tcnica de enmascaramiento es posible obviar la segregacin fsica de las especies interferentes. El enmascaramiento consiste en el bloqueo qumico de la interferencia en el propio medio donde se realizan las medidas, evitando as su efecto sin necesidad de separacin alguna. En muchas tcnicas y mtodos analticos tambin es posible optimizar las condiciones operativas con objeto de evitar interferencias. Finalmente la calibracin analtica tambin proporciona medios para evitar los errores sistemticos debido a las interferencias. As cuando se est ante un efecto de matriz, el recurso clsico es la calibracin por adicin estndar para los casos en que las interferencias son del tipo multiplicativas. como pequeos cambios en las condiciones operativas aquellos que pueden derivarse de las transferencias de los mtodos entre laboratorios, operadores, equipos, etc. Para evaluar la robustez de un mtodo, se trata de identificar las variables que tienen un efecto ms crtico sobre su exactitud, precisin, selectividad, etc. Al planificar el estudio de la robustez de un mtodo hay que tener en cuenta los aspectos siguientes: a) elegir los factores cuya influencia se desea evaluar (ejemplos: pH, temperatura, concentracin de algunos reactivos, orden de adicin de reactivos, etc) b) elegir los valores de dichos factores. Generalmente se estudian dos valores situados alrededor del valor indicado (valor nominal) c) elegir la respuesta cuya variacin se quiere controlar (ejemplo: la exactitud del resultado, la precisin, etc.) d) planificar y llevar a cabo los anlisis e) evaluar los efectos de los distintos factores

7 Otras caractersticas de los mtodos analticosA continuacin se considera brevemente otras caractersticas de los mtodos como la rapidez, el costo y los aspectos ambientales y de seguridad, que en algunos casos pueden ser decisivos para la seleccin. En algunos casos, la rapidez puede ser un factor predominante sobre criterios tan bsicos como la exactitud o la precisin, pudiendo elegir para estos casos mtodos cualitativos o semicuantitativos. En otros casos, donde el tiempo de respuesta no es decisivo, pero si lo es el nmero de muestras a analizar, el uso de tcnicas automatizadas, que trabajen sin la presencia del operador podr ser un criterio importante. El tema de los residuos generados es importante manejarlo desde la seleccin del mtodo. Al aumentar la cantidad de anlisis que se realicen se incrementar la generacin de residuos. En caso de no contar con mtodos de eliminacin apropiados, los mismos sern almacenados en el laboratorio con el riesgo que eso implica. El uso de solventes y otros reactivos nocivos, en algunos casos pueden ser sustituidos por otros menos perjudiciales para el trabajador y el ambiente de trabajo.

6.8 RobustezLa robustez es la cualidad de un mtodo analtico que mide su capacidad de resistir pequeos camcambios en las condiciones operativas sin que su funfuncionamiento se vea alterado. Deben considerarse



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8 ResumenEs recomendable documentar la planificacin de la validacin, donde quede resumida toda la informacin previa y obtenida a partir del desarrollo. La documentacin de la validacin debe incluir: Alcance Elementos de entrada: Rango de aplicabilidad del mtodo Tipo de matriz a ser analizada Un resumen de los datos de la validacin Criterios para la aceptacin de los resultados Acciones a ser tomadas en caso de resultados no conformes

medios, materiales auxiliares utilizados y sobre la buena prctica en la realizacin de los ensayos en general. Ejemplos de estos controles son: siembra por duplicado de placas, verificacin del factor de dilucin, intralaboratorios, muestras blanco, control de medios de cultivo, controles ambientales, calificacin del personal, etc. Deben existir criterios para la desviacin permitida. Dentro del control externo se destaca: La participacin en intercomparaciones que permite una evaluacin del sesgo de forma que el laboratorio pueda demostrar que se mantiene dentro de los criterios de aceptacin definidos por normas, reglamentos, por el cliente o por el laboratorio. La periodicidad de las actividades de control de calidad debe establecerse considerando diversos factores como pueden ser: La robustez del mtodo. Modificaciones en materiales, equipos y calificacin del personal. Los resultados histricos de control de calidad. El tipo de validacin a implementar depende de las caractersticas de funcionamiento de las metodologas implicadas, la Gua G-ENAC-04, establece la siguiente clasificacin con respecto a los mtodos de ensayo: En el caso de que se utilicen mtodos oficiales, mtodos normalizados o mtodos de orgamtodos organismos nacionales o internacionales recoreconocidos, o basados en ellos, es posible que no se requiera validacin. Cuando se utilicen estos mtodos los laboratorios debern antes de analizar ninguna muestra verificar su capacidad para cumplir de forma satisfactoria todos los requisitos establecidos en dichos mtodos. En estos casos, es necesario la utilizacin de forma rutinaria, de un sistema de control de calidad analtica. Esto nos garantiza que las metodologas son utilizadas de forma adecuada. Los sistemas de ensayo que se venden en el mercado (kits) pueden no requerir una nueva validacin si se dispone de datos sobre validacin procedentes de fuentes alternativas. El laboratorio debe solicitar a los fabricantes datos sobre validacin y evidencias de que cumplen un sistema reconocido de aseguramiento de la calidad. Cuando no se disponga de datos completos sobre la validacin, el laboratorio debera completar la validacin del mtodo antes de utilizarlo con carcter rutinario. La norma ISODirectrices para la Acreditacin

Elementos de salida: Aprobacin formal de la validacin de la metodologa Redaccin de procedimiento normalizado de operacin, rutas de anlisis, etc.

Comunicacin de la validacin a los clientes que lo solicitaron

9 Validacin de mtodos microbiolgicosRespecto a los mtodos microbiolgicos, la Gua GENAC-04 proporciona directrices especficas para la acreditacin de laboratorios que realizan ensayos microbiolgicos. Este documento desarrolla aspectos relacionados con la validacin de los mtodos a fin de facilitar a los laboratorios la implantacin de este aspecto y su evaluacin. Otra norma de aplicacin para validacin de estas metodologas es la ISO/TR 13843. Al igual que en otros tipos de metodologas, la validacin est ntimamente relacionada con los aspectos de aseguramiento de la calidad de resultados de ensayo y el clculo o estimacin de la incertidumbre. Este ltimo no es aplicable en metodologas cualitativas (en los que la respuesta se expresa en trminos de presencia/ausencia) ni para NMP (nmero ms probable), s es de aplicacin para metodologas cuantitativas (conteo de unidades formadoras de colonias) para las cuales se puede utilizar la gua G-ENAC-09 o ISO/TS 19036:2006 para expresin de la incertidumbre. El aseguramiento de calidad de resultados de ensayo debe contar con un adecuado control interno y externo. Todas las actividades de aseguramiento de la calidad deben planificarse de forma que en el tiempo y en funcin del alcance del mtodo se incluya una adecuada representacin de la variedad de matrices con las que trabaja el laboratorio. Dentro del control interno se destaca: Control de las condiciones de trabajo: proporciona informacin sobre la esterilidad de los

3216140 establece protocolos para la validacin de este tipo de metodologas. Los mtodos internos desarrollados por el propio laboratorio deben validarse para garantizar la fiabilidad de los resultados obtenidos y, en caso posible, conocer la dispersin de los mismos. Cada laboratorio establecer los requisitos que deben cumplir estos mtodos, con objeto de demostrar que son adecuados para la finalidad pretendida. Los mtodos de ensayos microbiolgicos cualitativos, deben validarse estimando, cuando sea apropiado los siguientes tems: Especificidad: grado en que un mtodo se ve afectado por los otros componentes en una muestra con mltiples componentes. Desviacin positiva: ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado positivo sin confirmacin y el mtodo de referencia da un resultado negativo. Esta desviacin se convierte en un resultado positivo falso cuando puede demostrarse que el resultado verdadero es negativo. Desviacin negativa: ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado negativo sin confirmacin y el mtodo de referencia da un resultado positivo. Esta desviacin se convierte en un resultado negativo falso cuando puede demostrarse que el resultado verdadero es positivo. Lmite de deteccin: nmero mnimo de organismos que pueden ser detectados, pero en cantidades que no pueden ser estimadas con precisin. En e

directrices para la acreditación laboratorios ambientales

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